JPS6344598A

JPS6344598A - 新規なグリコペプチド系抗生物質

Info

Publication number: JPS6344598A
Application number: JP61188865A
Authority: JP
Inventors: Naoki Tsuji; 直樹辻; Toshiyuki Kamigaichi; 上垣内　俊行; Tadashi Yoshida; 正吉田; Shinzo Matsuura; 松浦　真三
Original assignee: Shionogi and Co Ltd
Current assignee: Shionogi and Co Ltd
Priority date: 1986-08-11
Filing date: 1986-08-11
Publication date: 1988-02-25
Anticipated expiration: 2009-06-01
Also published as: JPH0641480B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は抗菌剤として有用な新規なグリコペプチド系抗
生物質、さらに詳しくは、式（Ｉ）：す）で示されるグリコペプチド系抗生物質に関する乙のであ
る。

従来技術および問題点細菌性疾患の予防および治療を目的とし、数多くの抗生
物質が用いられているが、この様な抗生物質の汎用に伴
なって耐生菌の出現が大きい問題となっている。近年、
特に、広範囲に及ぶ抗生物質に耐性を示す耐性菌、中で
もメチシリン耐性菌が注「１されている。メチシリン耐
性菌は、周知の如く、単にメチシリンのみならず、アミ
ノグリコシド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質
、セフェム系抗生物質、ペニシリン系抗生物質、カルバ
ペナム系抗生物質およびマク［ｌライド系抗生物質等、
多くの抗生物質に耐性を示す多剤耐性菌である。

本発明者等は、先に、メチシリン耐性菌に対して有効な
、新規抗生物質ＰＡ−４２８０７ＡおよびＰＡ−／１２
８Ｇ７Ｌ３を発明した（特願昭第６１−１４３８９号）
。これらの化合物は、グリコペプチド抗生物質に属する
バンコマイシン誘導体であり、ノカルデイア属の菌株で
あるノカルデイア・オリエンタリス（Ｎ　ｏｃａｒｄｉ
ａ　ｏｒｉｃｎｔａｒｉｓ）　Ｐ　Ａ　−４２８６７（
微工研菌寄第８６０１号）によって産生される。この菌
を、−１ユ記特許出願の明細書に詳しく記載されている
方法で培養した後、培養液からＰＡ−４２８６７Ａおよ
びＰＡ−４２８６７８を分離精製し、その物理的性状を
詳細に検討した結果、これらは、新規なグリコペプチド
系抗生物質であると同定された。また、いずれも、イン
ビトロにおいて優れた抗菌活性を示し、その医薬として
の有用性が証明された。しかしながら、個々の症例に有
効な処置を施すには、より多くの、抗菌活性の高い抗生
物質が必要とされる。その様な目的を達成するだめの１
手段として、既知の抗生物質から、様々な方法で誘導体
を得る試みがなされている。しかしながら、この様にし
て、抗菌活性のある誘導体を効率良く得ることは必ずし
も容易でない。従って、容易に、効率良く、細菌特に多
剤耐性菌に有効な抗生物質を得ることができれば、医薬
の充実に貢献すると思イつれる。

問題点を解決するための千２え本発明者らは、新規な抗生物質の開発を目的として鋭、
０研究を重ねた結果、萌記のＰＡ−４２８６７Ａおよび
／またはＰＡ−４２８６７ｒ３を酸により加水分解する
ことによって、優れた抗菌活性を有する新規なグリコペ
プチド系抗生物質が選択的に高収率で得られることを見
出し、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明は、式（１）で示される新規なグリコペプ
チド系抗生物質、またはその薬学的に許容し得ろ塩を提
供するものである。さらに詳しくは、であるデス−（４
−エビバンコサミニル）ＰＡ−４２８６７ＡおよびＲが
水素であるデス−（４−エビパンコサミニルー〇−グル
コシル）ｐＡ−４２８６７Ａ、並びにその塩を提供する
ものである。

これらの化合物は以下の反応式に従って、式（■）で示
される出発物質１’Ａ−４２８Ｇ７ΔまたはＰＡ−４２
８６７Ｉ３あるいはこれらの混合物から製造される。

ｎｑ記の反応における出発物質は、ＰＡ−４２８６７Ａ
またはｒ’Ａ−４２８６７Ｂのいずれでもよいが、これ
らの製造工程で得られる、両者を含んだ粗生成物をその
まま用いるのが好都合である。

式（ｌりで示される出発物質ＦＡ−４２８６７（Ａ％ｒ
３のいずれか、または混合物を含む）を酸により加水分
解すると式（［）で示される本発明の２種の化合物が生
成ずろ。反応式から明らかな様に、デス−（４−エビバ
ンコサミニル）ＰＡ−４２８６７八は、式（１１）の化
合物の側鎖のパンコサミニル基のみが加水分解されて生
成する。他方、デス−（４−エビバンコザミニルー〇−
グルコシル）ｌ）Ａ−４２８６７Ａは、このパンコザミ
ニル基のみが切断された生成物をさらに加水分解して糖
残基を除去ずろか、あるいは、式（ＩＩ）の化合物から
、これらのバンコサミニル基と糖残基を同時に除去する
ことにより得られる。反応条件（酸の濃度、温度または
時間等）を適宜選択することにＪ−り所望の化合物を選
択的に生成させることも可能である。

一般に、適当な条件下で反応さＵｏ、得られた反応混合
物を、当業者に周知のａ常の抗生物質の分離精製法に従
って処理するごとにより、それぞれの化合物を単離すれ
ば良い。

本発明の酸により加水分解する方法によれば、式（Ｉ）
で示される新規なグリコペプチド系抗生物質を高収率で
簡便に得ることができる。

本発明に用いられる酸としては、塩酸、硫酸などの無機
酸、トリフルオ【１酢酸などの有機酸を挙げることがで
きる。酸の濃度、溶媒、反応温度、反応時間などの反応
条件は、一般にこれらグリコペプチド系抗生物質の糖鎖
を加水分解する時に通常行なわれる条件を用いろ。」−
記の酸をＩｌｌいる場合には、０〜５０℃で１０９〜２
４時間反応さ仕ればよい。酸濃度は、６酸によって異な
るが、塩酸５〜３６％、硫酸２Ｎ−１２Ｎ、Ｉ−リフル
オロ酢酸３０〜１００％とすることができろ。該反応は
、窒素雰囲気下で行うのが好ましい。

上記の反応によると式（１）で表わされるデス−（４−
エビバンコサミニル）ＰＡ−４２８６７Ａとデス−（４
−エビパンコサミニルー〇−グルコシル）ＰＡ−４２８
６７Ａの混合物が得られろが、反応条件によってはこれ
ら化合物の一方を選択的に生成させることができる。デ
ス−（４−エビバンコザミニル）ＰＡ−４２８６７八を
選択的に生成させる場合には、約２０％の塩酸で約０〜
１℃約１５〜２０時間、５〜ＩＯＮ硫酸で室温約１〜５
時間、約７０〜１００％のトリフルオロ酢酸で約２５〜
３５℃約ｌＯ分〜２時間、などの反応条件で行なえば良
い。デス−（４−エビパンコサミニルーＯ−グルコシル
）Ｉ）Δ−４２８６７八を選択的に生成させる場合には
、約８０％のトリフルオロ酢酸で約４０〜５０°Ｃ約２
〜４時間反応させれば良い。上記の反応条件では、はぼ
７０％以上の収率で一方の化合物が生成する。

次いで、得られた反応混合物を水酸化ナトリウム等の塩
基で中和した後、Ｍ　Ｉ　ＯＧ　Ｅ　Ｌ　ＣＨＰ−２０
Ｐ（三菱化成社製）等の吸着剤を用いたカラムク〔Ｉマ
ドグラフィーにかけ、種々の溶離剤で分画し、高速液体
クロマトグラフィー（Ｉ（ＰＬＯ）によって生成物の含
有率の高い分画を集める。必要に応じて分画処理を繰返
すことにより、各生成物を高純度に含有する溶液を得、
それらを個別に濃縮してメタノール沈殿等により、所望
の生成物を析出させ、この沈殿をメタノール−水から再
結晶する。他方、濾過母液を凍結乾燥して生成物の凍結
乾燥体を得る。

以上に述べた方法によれば、ＩＩ　Ｐ　Ｌ　Ｃ純度約９
１％以上の式（１）の化合物をそれぞれ約５０〜７４％
の高収率で得ることができる。

得られた式（１）の化合物は、そのままでらヒトおよび
動物の治療に用い得るが、生体内での吸収性等の面から
、塩の形にするのが望ましいことがある。本発明化合物
と塩を形成しうる塩基としてはカリウム、ナトリウｌＮ
などのアルカリ金属、アルミニウム、マグネシウムなど
のアルカリ土類金属、また酸としては塩酸、硫酸、硝酸
などの無機酸および酢酸、フマル酸などの有機酸が挙げ
られる。

本発明の化合物またはその塩は、抗菌剤の活性成分とし
て経口的にまたは非経口的にヒトまたは動物に投与でき
る。汎用される賦形剤、安定化剤、保存剤、湿潤剤、界
面活性剤などを用いて、錠剤、カプセル剤、粉剤として
経口投与することができ、注射剤、塗布剤、平削として
非経口的に投与することもできろ。その投ｌテｍは治療
目的、小者の年齢、症状などによって５“４なるが、静
脈注射する場合には成人に対して１０約０．１〜ｌｏｇ
である。

発明の作用本発明方法によれば、高純度のグリコペプチド抗生物質
誘導体、デス−（４−エビバンコサミニル）ＰＡ−４２
８６７Δおよびデス−（４−エビパンコサミニルー〇−
グルコシル）ＰＡ−／１２８６７Ａを効率良く製造する
ことができる。

得られたこれらの化合物は、いずれもダラム陽性閑特に
メヂシリン耐性菌に対して強い抗菌活性を示し、ヒトま
たは動物のための医薬として有用である。また、高純度
で単離され得るので、経口剤としてはもちろんのこと、
注射剤として用いるのに適している。

以下に実施例および製造例を挙げ、本発明をさらに詳し
く説明する。ただし、これらの実施例および製造例は、
本発明をなんら限定する乙のではない。

Ａ４鯉　ＰＡ−４２８６７Ａおよび！’Ａ−４２８６７
Ｂの調製（ａ）発酵工程可溶性澱粉０．５％、グルコース０．５％、ポリペプト
ン０．５％、牛肉エキス０．５％、酵母エキス０．２５
％、食塩０．２５％、脱イオン水（ｐＨ７，０、殺菌館
）よりなる培地８００ｍ１を含む２Ｑ容三ｆＱフラスコ
にノカルデイア・エスピーＰＡ−４２８６７（微工研菌
寄第８６０１号）の種培養スラントを接種し、毎分１８
０回転で、２８℃、４８時間振盪培養を行なう。この培
養液８００ｍ１を、上記と等しい成分からなる培地２０
Ｑを含む３０σ容ジャーファーメンタ−に植菌し、通気
；１ｉ２０１２／分、内圧０　、５　ｋｇ／ｃｍ’Ｇ　
、　Ｋ’に拌回転数２０Ｏｒｐｍで、２８℃、２４時間
培養する。次いでこの培養液ｌＯりを、トマトペースト
２．４％、デキストリン２．４％、乾燥酵母（ビースト
、岩城製薬袈）１．２％、塩化コバルト・６水和物０．
０００６％、消泡剤Ｐ−２０００（犬「１本インキ製）
０．０８％、水道水（ｐｉｔ７．０、殺菌前）よりなる
培１１．！！１１０Ｉ２を含む２５０Ｑ発酊クンクに植
ｉ’＋’４し、通気ｒｉｔ１５０４７分、内圧５ｐｓｉ
、Ｋｌ拌回転し２３２５　ｒｐ＋ｎで、２８°Ｃ１６４
時間培養する。

（ｉ＋）分離工程」二足工程で得られた培養液を１０％水酸化＋トリウ１
２でｐＬｌｌｏ、５にシ２．１整し、遠心分離によって
上１１１７液＋４５ρを得る。この上清液をｐＨ４、０
に調整後、１３Ｑのダウエックス５０Ｘ２（Ｎａ”型）
（ダウケミカル社製）のカラムに流し、水７０（て洗浄
後、１％トリエチルアミン・ｋ含む３０％アセトン水４
０ｃ！で溶出する。枯草菌を用いたパルプディスク拡散
法で活性を示すフラクション２２ρを集め、り１４５に
調整する。これを減圧濃縮しアセトンを留去する。次い
で、■１１）　−２０（三菱化成ｉＬ製）２Ｑ、のカラ
ムに流す。水２０１２で洗浄後、５０％アセトン水で溶
出する。活性フラクション６Ｑを集める。これを５λ圧
５縮し、凍結乾燥するとＰＡ−／Ｉ　２８６７の担扮宋
３５．６ｇを得る。

（ｃ）精製工程上記粗粉末１２ｇを用いて０．０１Ｎ塩酸１５０ｍｆｔ
溶液とし、ＭＩＣＧＥＬ　、ＣＩＩＰ−２０Ｐ（三菱化
成社製）１００ｍｌでクロマトする。ＨＩ）　ＬＣで含
有程度をチエツクしながら０．０１Ｎ塩酸で溶出し、Ｉ
）Ａ−４２８６７ＡおよびＰＡ−４２８６７Ｂを含む分
画を集め、この溶液をｐＩ−［７゜０とし、再度ＣＩＩ
Ｐ−２０Ｐでクロマトする。ＰＡ−４２８６７Ａおよび
Ｂ含有液を適用した後、１５％メタノール水で充分洗浄
し、１５％メタノール０．００５Ｎ塩酸で溶出し、ＰＡ
−４２８６７Ａ含（ｆ分画および■〕Δ−４２８６７１
３含存分画を得る。Ｐｌへ一４２８６７ｒ３含汀分画を
ｐＨ７。

０に調整後、５縮凍結乾燥し、残ｌな６８３ｘ９を得る
。ＰＡ−／１２８Ｇ７Ａ含打分画をｐｉｔ７．０に、調
整後、濃わ１１シ、脱色するためにＣｌ１ｒ’−２０Ｐ
１０ｍｌでり（７７トし、希塩酸（ｐｉｔ５．０）水溶
液で溶出する。ＰＡ−４２８６７八を含む分画を集め、
濃縮後、凍結乾燥して残渣５７１１ｇ（純度７０％）を
得る。この残Ｍ５７１ｊＩ９を水に溶解した後、希塩酸
を加えてｐＨ５，０に調整し、ＣＩＩＰ−２０１’ｌＯ
ｍＣのカラムに付し、水で溶出する。

ＰＡ　　４２８６７Ａ含ａ分画を集め７ｐｔｒ７．０に
調整し、濃縮後、脱塩のｆこめにＣＩ−Ｉ　Ｐ　−２０
Ｐｌ　Ｏｍｌ［０，０５Ｍリン酸塩緩衝液（＋）Ｉ−１
７，Ｏ）で安定化コのカラムに再度適用し、０．０５Ｍ
リン酸塩緩衝液（ｐｉｔ７．０）、次いで水で洗浄した
後、５０％メタノール水で溶出し、ＰＡ−４２８６７Ａ
含（−Ｔ分画を集める。溶出液を濃縮した後、凍結乾燥
し、ＦＡ−４２８（ｉ７Δ２５ＧｎＣ純度９５％）を得
ろ。ＰＡ−４２８Ｇ７１’３含有残渣６８３１９を水に
溶解した後、希塩酸を加えてＩ）１１４　、　Ｏに」１
整し、脱色のためにＣ１１ｌ’−２０Ｐ　　５ｍｌのカ
ラムに付し、希塩酸水溶に＆（ｐＨ４，０）で溶出する
。ｒ’Ａ−４２８６７Ｉ３含有分画を集め、溶出液をｐ
ｉｔ　７　、０に調整して濃縮した後、バツクドカラム
ＩｔＱ−２（富士ゲル販売株式会社）に付す。ＩＩＰ　
Ｌ　Ｃで純度をチエツクしながら７％アセトニトリル−
０，０５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ４，９）、次いで８％
アセトニトリル−０，０５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ４４
，９）で溶出し、９５％純度以上の分画を集めてｐＩ（
７，０にコη整し、ａ縮後脱塩のためにＣＩＩＰ−２０
Ｐ　　Ｉ　Ｏｍｌ［０，０５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７
，０）で安定化コのカラムに付す。水洗後、５０％メタ
ノール−水で溶出し、ＰＡ４２８Ｇ７１３含有分画を集
め、５１１ｉｉｓ凍結乾燥し、Ｐ　Ａ　−４２８６７Ｂ
　　Ｉ０２＋９（純度９８％）を得る。

実施例１製造例、工程（ｂ）で得た担生成物（ＰＡ−４２８６７
Ａ５３％とＰＡ−４２８０７１１９％を含ｆｆ）２．０
０ｇを、２０％塩酸（和光純薬工業、精密分叶用）２０
０靜に溶解し、窒素雰囲気下水冷（０〜１℃）して１６
時間把拌する。反応液に６Ｎ水酸化ナトリウム（約２０
４　ｍｏ）を加えてｐＨ９、２にご７．１整する。ＭＣ
Ｉ　　ＧＥＬ　　ＣＩＩＰ−２０１’（２００〜４００
メツシユ、＋００−）に付し、水（６００ｍ（）、０．
０１Ｎ塩酸（４５０ｍＱ）、水（４５０ｍ＆）、２５％
メタノール水（４５０ｍＣ）、５０％メタノール水（４
００Ｆ）、メタノール（４００酎）、５０％メタノール
−０，００５Ｎ塩酸（４００ｍ！２）で順次溶出する。

ＩＩ　Ｐ　Ｌ　Ｃ［ヌクレオシル（Ｎｕｃｌｃｏｓｉｌ
）３００７７Ｃ１８，４６φＸ２５０ｍｍ、１０％アセ
トニトリル−Ｑ、０５Ｍ　　Ｐ［３Ｓ（ｐＨ１３，５）
流速ＩｍＱ／分、２２０ｍｍｔＪＶ検出］による分画の
チエツクにより、分画Ａ（（１，０ＩＮ塩酸、水溶出：
狗と分画Ｂ（５０％メタノール、メタノール、５０％メ
タ）−ルー０’、　ＯＯ５Ｎ塩酸溶出Ｍ）をｉｎ。

分画■〕をａ′３Ｄ’ｔ＋後、ｐｌｒ　３　、５　＋：
Ｄ、９整Ｌ、Ｍ　ＣＩＧＥＬ　Ｃ１−ＩＰ−２０１’（
２００〜４００メツシユ、ｔｏｍＱ）に付し、水（ｐＨ
１４，０に塩酸水で調整、約１０”−’Ｎ塩酸）３ＱＯ
ｍ（２，１５％メタノール−水（ｐｌｒ４．０）！　０
０吃３（）％メタノールー水（ｐｌｒ４．０）Ｉ　ＯＯ
ｍｆ２．５０％メクノールー水（ｐＨ−■。

０）＋００ｍＣ，メタノール５．０ｍｆｆ、　５０％メ
タノール−０，００５Ｎ塩酸５０ｍ１２で順次溶出し、
分画Ｃ［水（ｐｉ口、０）溶出部］と分画Ｄ［５０％メ
タノール−水（ｐｌｒ４．ｏ）溶出部］を得る。

分画Ａ、Ｃを合わせて濃縮し、ｐＨ７，０に調整した後
、ＭＣＩ　　ＧＥＬ　　ＣＨＩ）−２０Ｐ（２００〜４
００メツシユ、１０ｍｆｆ）を用いて脱塩する。水（Ｌ
ＯＯｍＱ）、２５％メタノール水（１０，０ｍｇ）、５
０％メタノール水（１００ａ１２）、メ’ＩＪ　−）Ｌ
ｉ（１００ｍＣ）、５０％メタノール−０，００５Ｎ塩
酸（５０ｎｏ２）で溶出し、分画ＩＥ（未脱塩部）と分
画Ｆ（脱塩部）を得る。分画Ｅ（未脱塩部）を同一条件
で再脱塩し、分画Ｇ（脱塩部）を得る。

得られた分画Ｆ、Ｇの沈殿部（各分画を濃縮後、メタノ
ールを加え沈殿を生成ざＵ・ろ）８００ズ９を水（３９
ｍ１２）に加熱溶解後、メタノール（３９ｍＱ）を加え
再結晶し、結晶５５７１１ｇ（五酸比隣の存在下、３０
℃で１．５時間威圧乾燥）を得ろ。［デス−（４−エビ
バンコサミニル）ＰＡ−４２８（３７Δ、ＨＰ　Ｌ　Ｃ
９３％、収率４Ｇ、０％］別に、結晶母液、沈殿生成母液から凍結乾燥体３５０ｉ
９［デス−（４−エビバンコザミニル）ＰＡ−４２８６
７Δ、ｌＩｒ’Ｌｃ９１％、収率２８．３％］を得る。

分画りを同様に脱塩することにより、凍結乾燥体３０＊
ｙ［デス−（・１−エビバンコザミニルー〇−グルコシ
ル％、収率２．８％］を得る。

実施ｆ１１製迅例、工程（Ｃ）と同様にして得た純度９０％１／）
ＰＡ−４２８０７Δ　Ｉｏｏｘｇを２０％ＩＩＣ’！１
０ｍｆ２に溶解し、窒素雰囲気下部浴温度４０〜４５°
Ｃで加温しながら１０分間攪ｒ１″．する。反応液をＧ
Ｎ　　ＮａＯＩＩでｐＨ９．２に調整し、ＭＣＩＣＰ２
１，ＣＩＩＰ−２Ｏｒ’（２００〜４００メソシユ、１
０ｍ！２）に付し、水（１００ｍの、０．０ＩＮ塩酸（
５０ｍＱ）、水（５０＋ｎｆ２）、２５％メタ、ノール
（５０ｍ１２）、５０％メタノール（５０ｍσ）、メタ
ノール（５０ｍＣ）、５０％メタノール−０．００５Ｎ
塩酸（５０ｍ９）で、！１次溶出する。

ＩＩ　Ｐ　Ｌ　Ｃ　（ヌクレオシル３００−７ＣＩ８、
１０％アセトニトリル−０．０　５Ｍ　ＰＱＳ（ｐＨ３
。

５）、２２０ｍｍＵＶ検出）による分画のチーＩツクに
より分画１（Ｑ．ＱＩＪ塩酸、水溶出部）と分画ｎ（５
０％メタノール、メタノール、５０％メタノール−０．
００５Ｎ塩酸溶出部）を得る。

分画■を濃縮後、ｐＨ　３　、　５に′：ＪｙＪ整し、
ＭＣＩＧＥＬ　Ｃｌ−ＩＰ−２０Ｐ（２００〜４００メ
ツシユ、ＩＯ−）に付し水（ｐＨ４　、０）５　０ｍ１
２１１　５％メタノール−水（ｐｉ（　４　、　０　）
、３０％メタノール−水（ｐｌｒ４、０）、５０％メタ
ノール−水（ｐｌｒ４．０）、メタノール５０ｍＱ，５
０％メタノール−０．００５Ｎ塩酸５０ｍ１２で溶出し
、分画■ｒｃ水（ｐＴ目、０）、溶出部コと分画■［５
０％メタノール−水（ｐＨ　４　。

０）、５０％メタノール−０．００５Ｎ塩酸溶出部］を
得る。

分画１、■を合わせ一耐／ｌＬ、ｐＨ７、０にＪ．；１
整した後、ＭＣｒ　　ＧＩＥＬ　　ＣＩＩＰ−２０１）
（２００〜４００メツシユ、５ｍのを用いて脱塩し、デ
ス−（４−エビパン＝１サミニル）ＰＡ−４　２　８　
６７Δ　３１．５扉９（収率３８，６％）を得ろ。

分画■も同様に脱塩し、デス−（＝１−：−ピバンコザ
ミニルー〇ーグルコシル）Ｉ）Ａ−・１２８Ｇ７Ａ　　
３Ｂ．３ｘ９（５０．１％）を得る。

以上の実施例で得た本発明化合物の物理学的注状を以下
に示す。

デス−（４−エビバンコザミニル）（ｙΔ−４２８７Ａ比旋光度［αコら”ニー９１．５　±３　、　１　（Ｃ＝０．４
２２、水）赤外吸収スペクトルＫＩ３ｒ、　ｃｍ−’：　３３８０．２９２８．１６５
８．１５８７、Ｉ５０５．１４２２．１３９５、Ｉ２２
８、＋１３１．＋０６４．１０２９．１０１２、質量分
析（ＳＩＭＳ）ＭＳｍ／ｚ：　　Ｉ　４１４　（Ｍ＋ｌＩ）’″円二色
性スペクトル（ＣＤスペクトル）λ０，０５Ｍ　Ｉ’Ｂ
Ｓ（Ｐ１１３．５）　ｎｍ［０］：　３１０（ｇ　）、
２８５ａｘ（１５４００）、２７７　（ｓｈＸ　−７３００）、２
６０（−９５０）、２５１（−１１４０）、２４９（０
）、２２８（＋１２７＝１００）、２＋４（０）（多１
共鳴スペクトル（’ＩＩ　ＮＭＲＸ第１図参照）４００
ＭＨｚ、　（１（ｌ　　ＤＭＳ　Ｏ＋　Ｄ２０（１滴）
、１００℃、内部標早Ｔ〜ＩＳ δｒｌ）ｍ：　　０．　８８９（３Ｈ，ｄ、、Ｊ　＝Ｇ
、ＧＩ−１２）、０゜９１　（ｉ（３Ｈ，ｄ、６．５）
、１，１７９（３１１，Ｓ）、１゜１７９（３１−１，
ｄ、６．２）、　Ｉ　、　−１２７Ｃｌ　［１、ｄ、ｄ
、ｄ。

＋　４．２，７．８，６．３）、１．５２９（ｌ　ＩＬ
ｄ、ｄ、ｄ。

１４．２，７．６，５．８）、１．６７０（ＩＩＩ、ｄ
、ｄ、１３．９および４．４）、１．７８３（ｌ　ＩＩ
、ｍ）、１．９４２（Ｉｔｌ、ｄ一様、１３．９）、２
．１７８（Ｉ　Ｉｒ、ｄ。

ｄ、１６．０および７．３）、２．３１４　（３［４，
ｓ）、２゜５４９（ＩＨ，ｄ、ｄ、Ｉ６．０，５．２）
、約３．３（２１１，・ｍ）、３．３３９（Ｉ　１１．
ｔ、８．７）、３．ｌＩ　３９（Ｉ　Ｎ。

ｄ、ｄ、７．３，８．７）、３．５４２（ｌ　Ｉｌ、ｄ
、ｄ、　１　１．５および４．５）、３１３３４　（Ｉ
　ＩＩ、Ｑ、ｄ、　６．２および９．７）、３．７１１
（１ｔＬｄ、ｄ、Ｉ　１．５および２゜０）、４．２３
８（ｌ　Ｈ，ｂｒ、　ｓ一様）、４．３５　［３（ＩＩ
Ｉ　、ｄ、ｄ、　７　、３および５．２）、４．４８９
　（Ｉ　Ｈ，ｂｒ。

Ｓ）、＝１．５１９（１［１，ｓ）、４．６９４　（Ｉ
　ＩＩ、ｄ一様、４．４）、４，７０４（＋１１ｄ、４
．０）、５．１６９（ＩＨ，ｄ、一様、４．０）、５．
２０４（２Ｈ，ｂｒ、ｓ一様）、５．３４６（Ｉ　Ｈ，
ｄ、７．３）、５．６５９（１１（、ｂｒ。

Ｓ）、５．７７８（Ｉ　ＩＩ、ｂｒ、　ｓ）、６，３８
０（Ｉ　Ｈ，ｄ。

２．３）、Ｇ、３９４（ＩＩＩ、ｄ、２．３）、６．７
２３（ＩＩＩ　、ｄ、　８　、５　）、６．８０６（Ｉ
ｌ’ｌ、ｄ、ｄ、８．５および２．３）、７．１０４（
ｌ　Ｉｔ、ｄ、ｄ、８．４および２．３）、７．１３５
（Ｉ　Ｉｔ、ｄ、ｄ、８．４および２．４）、７．１５
１　（ｌ　Ｉｌ、ｄ、２．３）、７．２２８（１１ｊｂ
ｒ、　ｄ、８・１）、７．２９．１　（Ｉ　ＩＬｄ、ｄ
、８．４および２．３）、７．３３８（ｌ　Ｈ，ｄ、ｄ
、８．４および２．０）、７．６０２（ｌ　Ｉｆ、ｄ、
ｄ、８．４および２．３）、７．８６４（１１１、＋１
一様、２．０）デス−（４−エビパンコサミニルー〇−グルコンル）Ｉ
）Ａ−４２８６７Ａ度兄瓜吸［α］１ダニー６２．０±４．９°（Ｃ＝０．２０９、
水）。

赤外吸収スペクトルＫｌ”３ｒ、　　ｃｍ−’：　　　３　３　９　２　、
　２９６４　、　１６５７．１５９８、＋５１０．１４
２９．１３９４．１２３１１１２０７．１０６１、！Ｏ
１２，１００５質：ｎ分析（ＳＩＭＳ）ＭＳｍ／ｚ：　　１２５２　（Ｍ＋　１１戸円二色性ス
ペクトル（ＣＤスペクトル）λ０．０５Ｍ　ＰＢＳ（ｐ
ｌ＋３．５）　ｎｍ［０］：　３１０　（０）、２８４
ａＸ、５（−１７２００）、２６４（−２４３０）、２５０
（−１１６００）、２４Ｇ（０）、２２５（＋Ｉ３９０
００）、２１３（０）核磁気共鳴スペクトル（’　ＩＩ　Ｎ　Ｍ　Ｒ）（第２
図参照）４００ＭＩｒｚＳｄｏ−ＤＭＳＯ＋ＤｔＯ（１
滴）、１００°Ｃ内部漂準’Ｉ”　Ｍ　Ｓ δｐｌｕｍ：　０．８８８（３Ｉｆ、ｄ、Ｊ　＝６．Ｇ
　ｌ１ｚ）、０゜９１５　（３ｔｒ、ｄ、　６．７）、
Ｉ　、　Ｉ　４２（３１１，ｓ）、１゜１７４（３１−
１，ｄ、Ｇ、Ｉ）、Ｉ　、　４２５　（１１１、ｄ、ｄ
、ｄ。

１４．０．８．０，６．５）、ｌ　、　５２８　（１１
＋　、ｄ、ｄ、ｄ。

１．４．０．７．６，５．７）、Ｉ　、６２　Ｇ（Ｉ　
ＩＬｄ、ｄ、　１３．７および４．４）、１．７　Ｇ　
３（４ｔｌ、ｍ）、１．９１０（ＩＩＩ、ｄ一様、１３
．７）、２．１７３（Ｉ　ＩＩ、ｄ。

ｄ、１６．０および７５）、２．３０４　（３１１，ｓ
）、２゜５・１５（Ｉｌ−１ｄ、ｄ、！（３，０，５，
４）、２．８７４（ＩＨ，ｄ、９．７）、３．（３５３
（ｌ　ＩＬｑｄ、＋３．ｌおよび９７）、４　、　２２
０（ｌ　ＩＩ、ｂｒ、　ｓ−ｆ、Ｒ）、４．３５９／：
１ＩＩ　、ｄ、ｄ、　７　、５．１；よび５．０）、４
．４７５（ｌ　１１．ｌ１ｌｒ。

Ｓ）、４　、　５　ｊ　３　（ｌ　Ｉｔ、ｓ）、４．６
８６（ｌ　Ｉｌ、’＋ｒ、　ｄ一様、＝１　、４　）１
．ｓ、ａ　８９（＋　＋＋、ｄ、３．９）、５．１７５
（ＩＩＩ、ｄ一様、３．９）、５　、１８４　（Ｉ　Ｉ
Ｉ、ｄ、ｄ。

２．３および１　１）、５．２０６（ｌ　ＩＩ、ｂｒ、
　ｓ）、５．５９８（Ｉ　ＩＩ、ｂｒ、　Ｓ）、５．７
２３（ｌ　Ｉｌ、ｂｒ、　　ｓ）、０．３７８（Ｉ　Ｉ
Ｉ、ｄ、２．３）、６．４０１　（ｌ　ＩＩ、ｄ、２゜
３）、６，７０９（１＋１．ｄ、８．５）、６，７９４
（Ｉ　ＩＩ。

ｄ、ｄ、８．５および２，３）、７．０７　／Ｉ（Ｉ　
ＩＩ、ｄ、ｄ、８４および２．４）、７．　Ｉ　１９（
ｌ　Ｈ，ｄ、ｄ、８．４および２，４）、７．１３０（
ｌ　Ｈ，ｄ、２．３）、７．２１５（ｉｌｌ、ｄ、８．
４）、７．２８８（Ｉｌｌ、ｄ、ｄ、８．４および２．
２）、７．３４２（Ｉｌｌ、ｄ、ｄ、８．４および２゜
０）、７．６０１　（Ｉ　Ｉ−１，ｄ、ｄ一様、８．・
１および２゜０）、７．８　＝１３（ｌ　ＩＩ、＋ｉ、
２．０）以上の物理化学的性状から、デス−（４−エビ
バンコザミニル）ＰＡ−４２８Ｇ　７Δおよびデス−（
４−エビバンコザミニルー〇−グルコシル）ＰＡ　　４
２８６７　Ａは以下の立体構造を有しているど考えられ
る。

デス−（４−エビバンコサミニル）ｐＡ−４２８６７Δ （Ｃｌ１ｏＨ７ｅＯｔ４ＮｅＣ（！とじて、Ｍ、〜■、
１４１４．８）デス−（４−エビバンコザミニルー〇−グルコシル）Ｆ
Ａ−４２８６７Ａ（Ｃ５ｏＨｓａＯ，５Ｎｅｃｆｆとして、Ｍ、Ｗ、１２
５２．７）ＩＩ　　：　　ＩＩＸ滴団精製されたＰ／＼−４２８６７Ａを、塩酸、随酸および
トリフルオロ酢酸を用いて、表１に示・（−反応条件で
加水分解し、デス−（，１−ニピバンコザミニル）ＰＡ
−４２８Ｇ　７Δまたはデス−（，１−エビバンコ→Ｊ
゛ミニルー０−グルコシル）Ｆ　Ａ−４２８６７八を選
択的に生成する反応条件を検討した。

その結果を表１に示す。

表１から明らかな碌に、適当な反応条件を選択すれば、
一方の化合物を７０％以上の収率て選択的に生成できる
。

表１−１塩酸表！−２硫酸表１−３トリフルオロ酢酸化合物Ｉ：デスー（４−エビパンツサミニル）ＰＡ−４
２８６７ハ化合物２：デス−（・１−エビパンコサミニルーＯ−グ
ル＝１ノル）ＰＡ−４２８８７Δ 幻ＩＡ塾果本発明化合物のインビトロおよびインビボにおける抗菌
活性を以下の実験例に示す如くにして評価した。

犬！’２ｄ３１１１　　グラム１易性閑に対するインビ
トロにおける抗菌活性 ■　抗菌懸罰液の調製斜面培地上の被検菌株１白金耳を成育培地［トリプトソ
イブロス、栄研化学（（宋）］１１ｍに接種し、３７°
Ｃで１３〜２０時１１１）培１？：する。培養物の１０
０倍希釈物を接種、用菌体Ｑ、　Ｅ液として使用セる。

■　サンプル溶液サンプルを９−ＩＬ＋ｙ正確に秤ム１し、蒸留水に２１
１ｇ／ｍｌとなるように溶解する。

■　寒天平板サンプル溶液を滅菌水て段階倍数６釈する（２０００〜
０．２５μｇ／ｍｌ　）。希釈サンプル溶液それぞれの
０　、５　ｍｌを滅菌プラスチックベト１月ｌ１ｌ（直
径９ｃｍ）に移し、そこへ９．５ｍｌの寒天培地（感受
性試験培地、ニッスイ）を注ぎ、緩やかに攪拌した後、
凝固さＵ“る。

■　ＭＩ　Ｃ値の１ｊｌｌ＋定接種用懸局液を１白金耳
（０゜５−１μＱ）を上記方法で調製した様々な濃度の
サンプルを含む寒天平板の表面に移す。３７°Ｃで１８
−２０時間培養した後、寒天表面での菌の成育を観察す
る。菌の成育か完全に＋＋ｎ止されたと観察される最低
濃度をＭＩＣとしμｇ／ｍＩで表わす。

■　特殊培地におけろ馬血清の添加ストレプトコッカスに対するＭＩＣを測定するための寒
天培地には、注入前に０．５％（Ｖ／Ｖ）馬血清を添加
する。

結果を、表２に示す。

宋験例２　インビボにおけろデス−４−エピバンクサミ
ニルＰＡ−４２８６７への０℃菌活性試験方法：５ｌｃ
−ＩＣＲ雌マウマウスｍ８匹）に被検菌を腹腔内接種し
、１１１４．、間接と５時間後の計２回、デス−４−エ
ビバンコ →Ｊ°ミニルＩ）Ａｉ２８６７Δ（Ｉｆｆ数希釈）を皮
下投与する。

結果ニア０後のマウスの生（７，率から５０％汀効！ｊ
１（Ｅｌ）、。）を算出する。

結果を表３に示す。

＊はメチシリン耐性菌。

【図面の簡単な説明】

第１図はデス−（４−エピバンクサミニル）ＰＡ−４２
８６７Ａの核磁気共鳴スペクトラム、第２図はデス−（
４−エビバンコザミニルー〇−グルコンル）ＰＡ−４２
８６７への核磁気共鳴スペクトラムを示した図である。特許出願人　塩！ＩＦ　ａ製薬株式会社代　理　人　弁
理士　前出　葆（外１名）手続補正書昭和６１年　９月１７日昭和６１年特許願第　　　１３８８６５　　万２、発明
の名称新規なグリフペプチド系抗生物質３補正をする者事件との関係　特許出願人住所　大阪府大阪市東区道修１ＩｉＴ３丁目１２＠地名
称（１９２）塩野義製薬株式会社代表者　吉゛利−雄４、代理人住所　大阪府大阪市東区本町２−１０　本町ビル内６補
正の対象：明細書の「発明の詳細な説明」の欄７、補正
の内′ｌγ 明細書第３４頁、表２（つづき）中、被検菌の側の記載
を次の通りにｈｌｉ正します。１、第１行記載の［エンテロバクタ−・フェカリスＪを
「エンテロコツカス・フェカリス」と補正。２、第４行記載の「ストレプトコッカス・アウレウス」
を［スフフィロコツカス・アウレウス」と補正。以上手続補正書彷式）％式％１、事件の表示昭和　６１年特許順第　　１８８８６５　　号　　　　
　−区ノ２、発明の名称新規なグリコペプチド系抗生物質３、　補正をする者事件との関係　特許出願人住所　大阪府大阪市東区Ｊｒｆ修町３丁目Ｌ２番地名称
（１９２）塩野義製薬株式会社代表者吉１１１　−雄４、代理人住所　〒５４０　大阪府大阪市東区域見２丁目１番６１
号昭和６１年１．０月２８０（発送口）６、補正の対象

Claims

【特許請求の範囲】１、式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ）（式中、Ｒは水素または▲数式、化学式、表等がありま
す▼を表わす）で示される化合物またはその塩。２、式（ I ）において、Ｒが基： ▲数式、化学式、表等があります▼ である特許請求の範囲第１項記載のデス−（４−エピバ
ンコサミニル）ＰＡ−４２８６７Ａ。３、式（ I ）において、ＲがＨである特許請求の範囲
第１項記載のデス−（４−エピバンコサミニル−Ｏ−グ
ルコシル）ＰＡ−４２８６７Ａ。