JPS63148979A - 電気透析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、発酵液に通電しながら発酵を行ない、得られ
た生成物をイオン交換膜を用いた電気透析によって発酵
液から分離する通電透析発酵法に関する。

〔従来技術及び発明が解決しようとする問題点〕微生物
工業に於いて、発酵による目的物質の生産性を向上させ
る方法として、発酵液に過電する通電発酵方法が知られ
ている（特公昭４７−１５７４５号公報）。この方法は
、発＃液中に標準電極、陰極及び陽極のいずれか２つを
浸漬して、両電極間に電圧なかける方法であり、目的物
質の生成量が増加するという利点を有している。その後
、この通電発酵方法の利点をそのまま生かし、しかも、
発酵によって生成する目的物質の発酵液からの分離を行
なうために、陽極と陰極との間に陽イオン交換膜及び陰
イオン交換膜を配置し、陰極室に発酵液を供給して発酵
により生成した目的物質を電気透析により分離する方法
が試みられている。〔アプライド・アンド・エンバイロ
ンメンタル・ミク四バイオロジー（Ａｐｐｌｉｅｄ　ａ
ｎｄ　Ｅｎｒｉｒｏｎａ＋＠ｎｔａ１ｍｉａｒｏｌｉｏ
ｌｏｇ７　５２巻２号３１４〜３１９頁　１９８６年　
）〕。この方法は、ただ単に発酵液に通電する方法に比
べると、発酵液からの目的物質の分離が極めて迅速に、
且つ容３に行なえるという利点を有している。しかしな
がら、実際に上記の方法な実施してみろと、起動直後は
前記した通電発酵方法による優れた効果が得られるので
あるが、時間の経過に伴って目的物質の生成量の増加に
頭打ちが見られるようになり、目的物質の生成量が前記
した通電発酵方法はど増加しないという問題点が現われ
た。

〔問題点を解決するための手段〕

そこで、本発明者らは、発酵液に通電しながら上述のイ
オン交換膜を用いて発酵による生成物を分離する方法（
以下、単に通電透析発酵法と呼ぶ）に於ける問題点を解
決し、目的物質の生成量の増加を計るために鋭意研究を
１ねてきた。その結果、上記の通電透析発酵法の問題点
が、発酵液中に存在する微生物の増殖の低下に基因する
ものであることを見い出した。そして、さらに微生物の
増殖の低下を防止する方法について研究を続けた結果、
微生物の培養のために発酵液中に加えられるリン酸イオ
ン源としてポリリン酸又はその壌を用いることによって
優れた効果が得られることを見い出し、本発明を完成す
るに至った。

即ち、本発明は、陽極と陰極との間に陽イオン交換膜及
び陰イオン交換膜な配置してなる電気透析槽中で、発酵
により得られた生成物を電気透析によって発酵液から分
離する通電透析発酵法に於いて、該発酵液にポリリン酸
又はその塩を存在させることを特徴とする通電透析発酵
法である。

本発明で用いられるポリリン酸としては、公知のものが
何ら制限されず用い得る。本発明で用いられるポリリン
酸を具体的に例示すれば、ビロリン酸、３リン酸、４リ
ン酸、５リン酸、６リン酸等の鎖状ポリリン酸；３メタ
リン酸、４メタリン酸、５メタリン酸、６メタリン酸等
の環状ポリリン酸を挙げることができる。また、ポリリ
ン酸の塩としては、上記のポリＩリン酸の金属塩が何ら
制限されずに用い得るが、特にナトリウム壌、カリウム
壌等のアルカリ金属塩；或いはマグネシウム塩、カルシ
ウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属環が好適であ
る。本発明で用いられろポリリン酸又はその塩としては
、３リン酸若しくは３メタリン酸以上の鎖状若しくは環
状のボＩＪ　ＩＪリン酸はその塩が好適であり、特に４
リン改若しくは４メタリン酸以上の鎖状若しくは環状の
ポリＩリン酸又はその塩が、微生物の増殖及び目的物質
の生産が良好であるために好ましい。

上記したポＩＪ　ＩＪリン酸はその塩の使用量は、特に
制限されるものではないが、発酵による生産を増大させ
る観点から、発酵液中に０．００７．９／ｄノ〜１．０
＃／ｄｊさらにαｏ　２１／　／　ａｌｌ〜０．２１７
６４　　の範囲で存在させることが好ましい。

本発明の通電透析発酵法は、生成物が亀屏質であるもの
であれば、公知のどのような発酵にも適用することがで
きる。例えは、グルタミン酸発酵、リジン発酵、バリン
発酵、オルニチン発酵、ホモセリン発酵、スレオニン発
酵、インロイシン発酵等のアミノ酸発酵；イノシン酸発
酵、グアニル散発酵等の核酸発酵；クエン酸発酵、７マ
ール酸発酵、乳酸発酵、：ｌハク敏発醇、酢酸発酵、グ
ルコン酸発酵、ピルビン酸発酵、α−テトグルタール散
発陣、イタコン酸発酵、りんご酸発酵等の有機酸発酵；
脂肪酸発酵；抗生物発酵等を挙げることができる。

また、本発明に於ける発酵で用いる微生物の種類、培地
の組成、培養温度１発健液のＰＨ，通気攪拌の程度等の
培養上の諸条件は、上記した種々の発酵に於いて公知の
条件が何ら制限なく採用される。

この際、使用する培地としては、主炭素源の他、窒素源
、無機物その他の生育促進物質を程よく含有する培地な
らば合成培地または天然培地の何れも使用可能であるが
、電気透析を行なう時、イオン交換膜の目詰まり、劣化
等が生じて電圧が異常に上昇して電流効果が低下するの
を防止するため、できつる限り合成培地を用いることが
望ましい。

例えば、よく用いる炭素源としては、シュクロース、ガ
ラクトース、７ラクトース、グルコース、デンプン、マ
ルトース、ラムノース、キシロース、ラクトース等の糖
類；メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール
、グリセリン等のアルコール類；ｎ−パラフィンなどの
鎖状炭化水素類等があり、これらを混合して使用する場
合もある。窒素源としては、アンモニア、硫安、墳安、
硝安、燐安、尿素、酢酸アンモニウム、クエン陵アンモ
ニ９ムなどの無機若しくは有機窒素化合物が使用される
。通常はこれらに、リン酸源。

カリウム源、マグネシウム源、硫黄源、鉄源。

マンガン源としてこれらの金属塩をさらにビオチン、チ
アミン等の生育促進物質やＰＨ低下防止剤として炭酸カ
ルシウムを加えることもある。

本発明において、発酵で使用する微生物としては、菌体
の培養液を直接そのまま用い得ろが、公知の方法によっ
て固定化したものがより好ましい。例えば、固定化の方
法としては培養液より遠心分離や濾過によって集菌した
菌を食塩水にＭ濁し、この菌体Ｉｌｉ！濁液に、ポリビ
ニルアルコール、ポリアクリルアミド。

カッパー・カラギーナン、アルギン酸カルシウム、光架
橋性樹脂プレポリマー、コラーゲン、セルロースサクシ
ネート、カゼインサクシネー）、メチルアクリレート、
メタアクリル酸共合重体などの担体、架橋剤、又は包括
用材料を加えて固定化した微生物菌体を得るという方法
を挙げることができる。

本発明に於いて、発酵液中に可逆的に酸化還元を受ける
物質を存在させておくことは好ましい態様である。この
ような物質としては、鉄、マンガン、銅、亜鉛、コバル
ト、鉛等の金属イオン；赤血塩、黄血壌等の含鉄錯化合
物；メチルビオロゲン、ベンジルビオロゲン。

二二−トラルレッド、ニュートラルバイオレット等の酸
化還元色素等が挙げられる。これらの物質の使用量とし
ては、特に制限されるものではないが、発酵生装置を勘
案すると、一般に発酵液中に０．１１＋９／ｄｊ〜１０
■／ｄ４の範囲で使用することが好ましい。

本発明の通電透析発酵法で用いられる電気透析槽は、通
常の電気透析で用いられている電気透析槽が伺ら制限な
く使用し得る。本発明で用いられる電気透析槽の一例を
図示すると第１図のようである。図中、ｌは陽極２と陰
極３との間に陽イオン交換膜４及び陰イオン交換Ｍ５を
交互に配置した電気透析槽である。この電気透析槽１は
、二対の陽イオン交換１１１［４及び陰イオン交換＃５
によって５室に区切られている。これら５室は、陽［ｉ
２の存在する室から順に、陽極室６．濃縮室７．希釈室
８．ｌｌｌ１ｌｉ７及び陰極室９である。第１図には陽
イオン交換膜及び陰イオン交換膜な二対用いた例を示し
たが、これらイオン交換膜は一対であっても良く、また
、三対以上であっても良い。

陽イオン交換膜及び陰イオン交換膜は、公知のものが何
ら制限されず用い得る。この場合、発酵液中に存在する
菌の増殖に必要な培地成分９例えばマグネシウム、マン
ガン、鉄。

カリウム、ナトリウムなどの各種塩類に対する発酵生産
勅の選択透過性の優れたものが好ましい。また、紫外線
、γ−線、アルコール。

界面活性剤、塩素系殺菌剤や加熱等によって滅菌処理が
可能で且つ洗滌操作が行なえるものが望ましい。本発明
に於いて好ましい陽イオン交換膜は、スルホン酸基を有
するものであり、また、陰イオン交換膜は、第４級アン
モニウム環基１に：Ｔｉするものである。さらに、陰イ
オン交換膜としては、平均細孔径が１００λ以下である
ものが本発明に放いて好ましく採用される。

次に、陽極２としては、白金、黒船、銅等が、また、陰
極３としては、白金、鉄、ステンレス等が好適に用いら
れる。陽極液及び陰極液は、公知のものが用い・得るが
、一般には陽極液として硫酸水溶液が、陰極液として水
ｉ’ｒ酸化ナトリウム水溶液が用いられる。また、後述
するように陰極液を用いないで、発酵液を陰極室に通ず
ることもできる。陽極２と陰極３との間には、直流ｍ［
１０が接続されている。

発酵槽］１で培養された発酵液は、希釈室８及び陰＆室
９に導かれ、発酵によって生成した生成物は陰イオン又
換膜５を通過して濃縮室７へと移動する。一方、発酵液
は、発酵槽１１に回収される。濃縮室７へ移動した発酵
による生成物は、濃縮室７へ循環されている濃縮液と共
に回収槽１２に回収される。第１図では、発酵槽１１と
電気透析槽１とが独立して設けられており、発酵と電気
透析が別個の槽で行なわれているが、これら２つの槽を
兼用して、希釈室８及び／又は陰極室９の中で発酵を行
なうこともできる。

第１図には、希釈室と陰極室の両方に発酵液を導入する
電気う析槽を示したが、発酵液の導入はいずれか一方で
もかまわない。

次に、第２図に長期間連続して通電透析発酵を行なうの
に好適に用いられる電気透析槽の一例を示した。この電
気透析槽では発酵槽１１中の発酵液のＰＨ′ｉｋ測定し
て、その値に応じて陽極及び陰極間の直流１１０なオン
・オフ制御或いは電流制御するＰＨコントローラー１３
が組み込まれている。これによって、発酵による目的物
質の濃度が菌の増殖や代射阻害を引き起こす濃度以上と
なつ、て発酵の至適ＰＨの範囲をはずれた場合に電気透
析を開始し、或いは電流密度を高くして目的物質を発酵
液から分離するといったコントロールが可能である。

以上に述べたような電気透析槽の運転は、一般には、電
圧が０．１〜３５ポルト、電流密度が１．６〜ｌＯアン
ペア／　ａｊの範囲から選択されて行なわれる。このよ
うな条件を採用することによって、通常３〜３０日間の
安定した運転が可能である。また、前述した固定化微生
物菌体と第２図に示したＰＨコントロールの可能な電気
透析槽を用いた場合には、３〜８力月の連続運転も可能
である。

〔効　果〕 本発明の通電透析発酵法を採用することによって、長期
間にわたって安定した発酵を行なうことが可能となり、
目的とする発酵生産物の生産量を増大させることができ
ろ。即ち、後述する実施例１及び比較例１からも明らか
なように、イオン父換膜な用いた通電発酵において、菌
体の増殖に必要なリン酸イオンとしてポリリン酸（和光
紙ｔａ＞　ｔｔ＊地に加えた実施例］では、培養７２時
間後の菌体量は６６０　ｎｍの吸光度で０．４であり、
発酵によるＬ−乳酸の全生産量は使用した培地１８当り
に換算して＆０９に達している。一方、通常、リン酸イ
オン源として従来から培地に用いられてきたリン酸二水
素カリウムを用い、他は実施例１と同一条件で通電発酵
を行なった比較例１では、培養後の菌体量が０．２に抑
制されており１、Ｌ−８駿の生産量も２０Ｉ／ａでしか
ない。

実施例１の値は、リン酸二水素カリウムとＰＨ調整剤に
１０％の炭酸カルシウムを用い、イオン交換震を用いた
通電透析発酵ではな〈従来の通電発酵方法である。比較
例２で得られた値とはは同じである。

このように、本発明の通電透析発酵法によれば、リン酸
イオン源として通常培地に加えられて来たリン酸二水素
カリウム又はナトリウム、リン酸−水素二カリウム又は
ナトリウムあるいはそれらな組合せて用いた従来からの
方法に比べて、一定時間培養後の菌体量ならびに発酵に
より生成する目的物質の量が多く、通電発酵の優れた効
果が得られる。しかも、本発明は、発＃を行ないながら
、目的物質を迅速且つ容易に発酵液から分離することが
できるため、目的物質による発酵のフィードバック　イ
ンヒビジョンを解除し、且つ発酵液のＰＨ変化や粘度上
昇を防き゛、菌体の持つ発酵生産能力の低下を防止でき
る。

さらに、ＰＨ調整剤として通常よく使用されるカルシウ
ム壌は、菌体の増殖を阻害する７アージの一体への浸入
を助長するものであるが、本発明によれば、発酵により
生成した目的物質を直ちに発酵液から分離することがで
きるため、このようなＰＨＩＩ４整剤を使用する必要は
ない。従って、本発明によれば、７アージによる菌体の
汚染を防止することが可能となる。さらにまた、ポリリ
ン酸がファージの一体への浸入を抑制する作用を持って
いるため、この点からも７アージ汚染の防止が可能とな
る。

これらの結果として、本発明は、発＃を長時間連続して
安定に行なうことを可能にする優れた効果を有する。

〔実施例〕

実施例１及び比較例１．２ 種菌として、Ｌ−乳酸生産菌であるラクトバチラス・デ
ルプルツ千イーＩＦ０３５３４を用いた。グルコース１
−ｏ　１　／ｄ１．　ｙＮ　ＩＪペプトン５．０１／ｄ
ｌ、酵母ｘ　＋　Ｘ　Ｏ，５１／（ＬＮｐ　Ｇ）なる液
体培地（ＰＨ７，０）１０−を中盤試験管に分注し、１
２１℃、１５分間高圧蒸気滅ｍを行なった。これに檀ｉ
１”ｔｌ白金耳接種し、４５℃で２４時間静置培養を行
なった。この培養液１０−を１００−の同様に滅菌した
グルコース１．ＯＪ！／ｄｊ、ポリペプトン１．０．９
／＃、　ｌｌ母工牛スα５１／ｄ１．酢酸ナトリウムＪ
、ＯＪＩ／ｄｔからなる液体培地（ＰＨ６，８）に接種
し、４５℃で１５時間静置培養することで種母を調製し
た。

本培養の培地としては、グルコース１０．Ｏｊ’　／　
ｄｌ、酵母ｘ’ｔ　Ｘ　′Ｌ０１　／　”　＃　ＦＮ　
リヘフトンα８　ｉ　／ｄＪ、　　４リンＩＩα０２　
１１７ｄ１．　硫酸マグネシウム７水壌α０５１７ｄｌ
、食塩０．０１１７ｄｌを用い、ＰＨを７．２とした。

第２図に示した電気透析槽を用いて通電透析発酵を行な
うに当たり、７５〇−容ガラス製発酵槽に上記の培地５
ＱＱＬｔを分注し、滅菌後、室？ｉｌｔで冷却したとこ
ろで前記種母５０−を接種し、４５℃で静かに攪拌しな
がら培養を行なった。

通電透析発酵を行なうために、予め発酵槽に取り付けて
おいた発酵用ＰＨ電極（アトバンチツク　ＦＸ−１８０
Ｔ）を直流電源（高砂製作所■製ＭＰＯ３５−２）と連
結したＰＨコントローラー（オリエンタル電気■製ＰＨ
ＤＩＩ）に接続した。さらに、直流電源は電気透析槽の
各電極に接続されており、これによって発酵液のＰＨが
指定された値以下になると自動的に電気透析槽に電流が
流れ、電気透析が行なえるようにした。陰イオン交換膜
（徳山曹達■製　ネオセプタ　Ａ　ＣＨ−４５Ｔ）およ
び陽イオン交換膜（？Ｒ山曹達■製ネオセプタ　ＣＨ−
４５Ｔ）を組み合わせた電気透析槽の陽極には銅、陰極
には白金を用い、極液として陽極室に０．１ＮＨ２Ｓｏ
、、陰極室に０．１ＮＮａＯＨを使用し、又濃Ｊｌ室及
び回収槽には脱イオン水ｔマイクロチューブポンプ（東
京理化■製　ＭＰ−３）で循環した。

通電透析発酵は、本培養開始約７時間後、発酵液のＰＨ
が４．７に低下した時に発酵液をマイクロチューブポン
プで希釈室に循環して開始した。発酵液中と回収槽中の
Ｌ−８散の全生産量を使用した培地１ａ当りに換算した
値と発酵液中の菌体量をｊ１３ＦｉＪに示した。

なお、発酵液中及び回収槽中のＬ−乳酸量は、バーカー
・サマーラン法によって定量した。菌体量は培養液をＩ
Ｎ壌酸によってｌ】倍希釈後、その６６０　ｎ！１１　
の吸光度を分光光度計（噛島津製作所　ＵＶ−２４０）
を用いて測定した。

比較例１として、本培養の培地中の４リン酸に替えて、
リン酸二水素カリウム０．２１／ａを用いた以外は、上
記の実施例１と同様にして通電透析発酵を行なった。

さらに比較例２として本培養の培地中の４リン駿に替え
て、リン讃二水素カリウム０２１７ｄｌを用い、さらに
ＰＨ調整剤として１６０℃で９０分間乾熱滅菌を行なっ
た炭酸カルシウム１０．０．Ｐ／（＃を添加した他は、
実施例１及び比較例１と同様にして培養を行なったが、
実施例１及び比較例１と真なり、イオン交換膜を用いた
通電透析発酵は行なわず、従来の通電発酵を行なった。

これらの比較＠１．比較例２におけるＬ　−乳駿生産量
、一体量を第３図に併記した。

リン酸イオンとして４リン飲を用いた実施例１では、培
養７２時間後の薗体鎗が０．４（ＯＤ６６０ｎｍ）　　
であり、Ｌ−乳酸の全生産量は、使用した培地１ａ当た
りに換算してａＯ＆であった。これに対し、リン酸二水
素カリウムな培地に用いた比較例１では菌体の増殖が０
．２に抑制されているとともに、Ｌ　−乳＃ｌ鰍も２．
０１／ｄｌと低かった。

同様に、リン酸二水素カリウムをリン酸イオンとして用
いた比較例２では、実施例１と同程度のＬ−乳酸を生産
し、菌体の増殖も見られた。しかしながら、この場合、
Ｌ−乳酸の中和のために加えられた炭酸カルシウムとＬ
−乳酸との間で乳酸カルシウムが生成するため、その濃
度の上昇に伴なって発酵液の粘度が高くなり、７２時間
で発酵を停止しなければならなかった。この点、実施例
１では、電気透析によって発酵液中のＬ−乳酸濃度を０
．５Ｆ／ｄｊ以下（ＰＨａ、５以上）にコントロールし
、しかも中和剤を必要としないので、７２時間経過後も
発＃を安定して行なうことができた。

実施例２ 実施例１で用いた種母培養液より菌体な遠心分離し、水
にて洗滌した。該洗滌自体を生理食塩水に懸濁し、この
１体懸濁液に２ｓになるようにアルギン酸ナトリウムを
加え、３０℃に加温、スラリー化したものを注射器によ
り、０．１モル塩化カルシウム溶液中に滴下凝固させ球
状の固定化菌体を得た。この固定化菌体を用い、時々、
一部の培地を交換する以外は、実施例１と同様にして通
電透析発酵を行なったところ、約８す月間連続して運転
することができた。Ｌ−乳酸は、従来の通電発酵で＆Ｏ
Ｉ／ｄｌであるのに対し、本発明によるとその６０倍の
生産量が得られた。

実施例　３ 麹汁な高圧滅菌して冷却したのち、これにエタノール４
．０９７ｄｉを加え、酢酸−（アセトバクター　アセテ
ィ　ＩＦ０３２８１）を１白金耳接種し、３０℃で３〜
５日間静置培養を行なった。次にグルコースＯ，ｌＦ／
ｄｊ。

グリセリン０．１．９／ｌ／！ｊ、硫酸アンモニウム０
．１１７ｄ１．　４１　ｆｉ　リ：／１１０．０６　ｙ
／ｄｊ、　ＲＷ　ｖ　ｆ　＊　シ’ｙ　ム７水４０．ｏ
１＃／ｄｊ１食ｊＪＩ　Ｏ，０１１７ｄ１．　＃ｆＪｉ
ｋｘ’Ｆ７．０．０５１／ｄｌ　カラなる滅閑培Ｍ　（
Ｐ　Ｈ７，０）　Ｉｐ＝ｔｎｅ１１．５１　／ｄｉ、　
　ｘ　ｐノール＆ＯＦ／ｄｊな加え、これに前記の培養
液をｌＯ％接種し、３０℃で４日間、静置培養を行なう
ことによって馴養した。こうして得た培養液に１０％ポ
リビニルアルコール水溶液を】Ｏ容量％加えて懸濁させ
、これを凍結乾燥することによって固定化菌体を調製し
た。本培養も同じ培地を用い、固定化菌体を１０％（Ｖ
／Ｖ）加え、実施例１と同様にしてＰＨを４．５にコン
トロールしながら通電透析発酵を行なった。また、４メ
タリン酸の替わりにリン駿二水素カリウム０．２．！ｉ
’／ｄｌを用いて行なった。生成した全酢酸濃度（１！
／Ω）の経時変化は第１表のとおりであった。

第　　　１　　　表 また、通電透析発酵は約３ケ月間連続して運転すること
ができた。

実施例　４ ｍ菌としてクエン酸生産能を有する千ヤンデイダ・ギヤ
マンディ　ＩＦＯ０５６６を用いた。シヨ糖５．０．９
／ｄＪ？、アスパラギン０．２５．９／ｄ１．５リン＠
０．０２ｆｌ／ｄｌ、硫酸マグネシウム７水壌０．０５
＃／ｃｕ、炭酸カルシウム！（１／ｄｊからなる液体培
地（ＰＨ６，０）に斜面、培地から１白金耳接穂し、３
０℃で２日間振盪培養後遠心分離によって集菌した。こ
の菌体８１を０．９％食塩水５０１１４に懸濁し、この
Ｒ濁液にＮ、Ｎ−ジメチルビニルベンジルアミンポリ！
−４１と４，４′−ビス（ジメチルアミノ）ベンゾフェ
ノン５ｍｇを分数させたアセトン５０−を加えて乳化さ
せ、これな２５℃、２時間超高圧水銀ランプで光を照射
した。生成した固定化ゲルを真空乾燥し、２〜３　＊ｄ
の粒子にして固定化歯体を調製した。本培養の培地とし
てはグルコース１０．０１７ｄ１．　ｍ化７　ンモニ７
０．４１　／　ｄｊ　。

５リン酸α０２１／ｄｔ、硫酸マグネシウム７１ｍ　ｏ
、ｏｓｉ、／ｄ１．　ｊｌｌｚ牛スｏ、３９／ｄｌｔｐ
らなる液体培地（ＰＨ６，０）′ｌｋ用い、これに固定
化菌体’ｋ　１０．０　％　（Ｖ／Ｖ）接種し、３０’
Ｃ９２００ｒｐｍの通気攪拌を行ない、ＰＨを４．８に
コントロールしながら５日間通電透析発酵を行なった所
使用した培地に換算して１３１７ｄｌのクエン酸を生成
した。また、引き続き、３力月以上通電透析発醇な連続
して行なうことができた。

実施例　５ 種菌としてＬ−グルタミン酸生産−、ブレビバクテリウ
ム−７ラバム　Ａ　Ｔ　ＣＣ１３８２６を用いた。種母
培地として、グルコース５．０ｇ７ｄ１．尿素１０　ｇ
　／ｄｊ、　　５１　ｆｉ　’）　＞ＦＲ力！ＪつＡｏ
、０２１１／’＃＋硫酸マグネシウム７水墳０．０４．
９　／ｃｌｊ、　１ｌｌｌｊｉ−ａ　７　水１１２１１
９／ｄ−ｇ。

ビオナシα４μｍ１フｄ１．チアミン壌酸＃Ａ２ｏｐ＆
／　ｄｌ　、　コ−ンＸ　ｔ　イーブリ力ｏ、５ｐ７ｃ
ｕからなる液体培地（ＰＨ７，０）を用いた。この培地
に斜面培地から１白金耳接種し、３０℃。

３６時間振ｍ培養を行ない遠心分離によって集−した。

この自体１０．９を０．９％食塩水５０ｄ＆：Ｍ濁し、
４第のカッパー・カラギーナンと共に加温してスラリー
としたものを注射器より２≦塩化カリウム液に滴下し、
球状に放置ゲル化して固定化菌体を得た。

本培養の培地として、グルコース１ｏ−ｏＦ／ｄ！、尿
素Ｌ　８　Ｊｉ’　／　”Ｊ　ｐ　　５１　タリン酸カ
リウム０．０４．ｆ／ｄｊ、硫酸マグネシウム７水壌０
．０４１　／ｄｊ、　ａｍ第一鉄７水壌２　Ｑ／ｄｌ。

硫酸マンガン４水壌２哩７ｄｌ、　　ビオチン０．４μ
ｍ１７ｄｉ　、チアミン塩酸塩１０μｍ７／ｄ１．カザ
ミノ酸ｏ、１１／ｄ１．ニュートラルレッド０．３ｍ９
／ｄｊからなる液体培地を用いた。この培地に固定化微
生物菌体を１０００％（Ｖ／Ｖ）接種し、３０℃でＰＨ
を７．５にコントロールしながら３日間通電透析発酵を
行なった所、使用した培地に換算して、４．１１／ｄｌ
のＬ−グルタミン酸を生産した。

１だ、通電透析発酵は、引き続き連続して３力月以上運
転が可能であった。

【図面の簡単な説明】

Ｎ１図及び第２ｇ：Ｊは１本発明の通電透析発酵法で用
いられる電気透析槽の好適な例を示す概略図である。図
中、ｌは電気占析槽、２は陽極、３は陰極、４は陽イオ
ン交換膜、５は陰イオン交換膜、６は陽極室、７は濃縮
室。 ８は希釈室、９は陰極室、１０は直流電源。 １１は発酵槽、１２は回収槽、１３はＰＨコントローラ
ー、１４は循環ポンプを夫々示す。 また、第３図は、本発明の通電透析発酵法と従来の方法
に於ける培養時間と醜体社との関係、及び培養時間と生
成した全乳散型との関係ｌ示すグラフである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）陽極と陰極との間に陽イオン交換膜及び陰イオン
   交換膜を配置してなる電気透析槽中で、発酵により得ら
   れた生成物を電気透析によつて発酵液から分離する通電
   透析発酵法に於いて、該発酵液にポリリン酸又はその塩
   を存在させることを特徴とする通電透析発酵法。