JPS63122698A

JPS63122698A - ７−ヒドロキシグアニン誘導体及びその製造方法

Info

Publication number: JPS63122698A
Application number: JP27062486A
Authority: JP
Inventors: Mikiro Kitahara; 幹郎北原; Kiyoto Ishii; 石井　清人; Takayoshi Hidaka; 隆義日高; Kiyoshi Watanabe; 清渡辺
Original assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1986-11-13
Filing date: 1986-11-13
Publication date: 1988-05-26
Also published as: JPH0588720B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、構造式（Ｉ）で表される新規な７−ヒドロキ
ングアニン誘導体およびその造塩可能なものの塩、及び
その製造方法、並びにこれを有効成分とする抗腫瘍剤に
関するものである。

（発明が解決しようとする間圧点）本発明者等は、下記構造式（ＩＩ）で示される７−ヒドロキシグアニンを化学的あるいは酵
素的に修飾することによって、いくつかの誘導体を得る
ことができ、その薬理作用を広く試験した結果、構造式
（１）で示される化合物及びその塩が優れた抗腫瘍作用
を有することを見出し、本発明に到達した。

以下に本発明を詳細説明する。

（問題点を解決するための手段及び作用効果）本発明に
よる新規化合物は、下記の構造式（１）で表わされる。

本発明による化合物は酸性物質であり、塩基と塩を作る
ことが可能であるが、本発明による化合物の塩としては
造塩可能な任意のものが対象になる。例えば、■アルカ
リ金属、アルカリ土類金属との塩、■アンモニウム塩、
■アミン塩、特にエチルアミン、ジメチルアミン、ピペ
リジン、モルフィリンなどとの塩があげられる。これら
の塩を抗ｊ」瘍剤として使用する場合には、生理的に許
容されるものを選ぶべきである。

本発明化合物の２ナトリウム塩の性状は次の通りである
。

融点（分解点）　　１３５〜１４０°Ｃ分子量　　４２
３元素分析値実験値　０２３．５１　　ＩＩ４．４０　　ＮＬ８．４
８０４３．７５ＣＩＱＩ■１２Ｎ５０９ＰＮａ２　・５Ｈ２Ｑ　として
の理論値（％）Ｃ２３，４０ＩＩ４．８２　　Ｎ１８．６５０４３．６
４比旋光度　〔α）、−−４４，６°（ｃ　＝０．５、）
ｆ２０）本発明化合物の袋外吸収スペクトル、赤外部吸
収スペクトル（臭化カリウム錠剤）を夫々図１、図２に
示す。また本発明化合物はＦＡＢマススペクトルにおい
て、水素化分子イオン（（Ｍ＋Ｈ）＋）がｍ／Ｚ＝４２
４に観察された。また試料のナトリウムが水素と置換し
たイオンがｍ／Ｚ＝４０２゜３８０に観測されたｏ　ｍ
／Ｚ＝４０２．　　：ｄ　８．０のイオンについて高分
解能マススペクトルを行った結果、それぞれのイオンに
対して、組成式０１０Ｈ１４Ｎ５０ｇＰＮａ、Ｃ１□Ｉ
１１５Ｎ５０ｇＦ　　が、それぞれ１０．９　ｍｍμ、
１２．３ｍｍμの誤差で得られた。

次に本発明の構造式（ｌｌに示される７−ヒドロキシグ
アニン誘導体の製法を説明する。

本発明の化合物を製造するにあたっては、基質として構
造式（ＩＩ）で示される７−ヒドロキシグアニンと、構
造式且で示される５−ホスホリボース−１−ピロリン酸
に、ホスホリボシルトランスフェラーゼを作用させるこ
とにより、構造式（１）に示される７−ヒドロキシグア
ニン誘導体を得ることができる。

本方法に基質として用いられる７−ヒドロキシグアニン
は、ストレプトミセス・スピーシズ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　　ｓｐ、）Ａ＝８４７微工研寄第５４１号（
ＦＥＲΔｔ、ＢＰ−５４１）の培養液から、特開昭６１
−１７８９８４号に記載された方法に従って調製できる
。また５−ホスホリボシル−１−ピロリン酸又はそれら
の塩としては市販品を用いることができる。

本発明に用いるヒポキサンチン・グアニン・ホスホリボ
シルトランスフェラーゼは、動物、微生物など広く生物
界から得られる精製ヒポキサンチン・グアニン・ホスホ
リボシルトランスフェラーゼ、粗ヒポキサンチン・グア
ニン・ホスホリボシルトランスフェラーゼ、ヒポキサン
チン・グアニン・ホスホリボシルトランスフェラーゼ含
有物などのヒポキサンチン・グアニン・ホスホリボシル
トランスフェラーゼ活性を有するものであり、例えばヒ
ポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラ
ーゼ（米国シグマ社製、酵母由来）などが挙げられる。

酵素反応は、基質の化合物Ｉ（７−ヒドロキシグアニン
）を０．０５〜０．２％（Ｗ／Ｖ　）、および化合物１
［（５−ホスホリボース−１−ピロリン酸）を０．０５
〜０．４％（Ｗ／Ｖ）の範囲で反応液に懸濁し、酵素を
適量、例えば酵素と基質との重量比１：２０乃至１：１
０００の割合で加え、温度１０〜６０’Ｃ，好ましくは
２５〜３５°Ｃの範囲で反応を行ない、高速液体クロマ
トグラフィー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）によって残基質（化合物
■）と生成物（化合物Ｉ）の量を測定し、生成物の増加
が止った時点で反応を止めれば良い。また、酵素反応を
行なう際の溶媒のｐＨ範囲は６〜９、好ましくは７゜５
〜８．５であり、これらの範囲でｐ　Ｉ−ｆの調整を行
えばよい。

反応溶媒としては緩衝液の使用が望ましく、トリス−塩
酸の如き無機酸塩の緩衝液、酢酸ナトリウム、クエン酸
ナトリウムの如き有機酸塩の緩衝液を適宜使用すること
ができる。濃度は緩衝液の種類にもよるが１０ｍＭ〜２
００ｍＭ、　　好ましくは２０ｍＭ〜１００　ｍＭを使
用すると良い。

反応液中から生成物を分離する方法としては、その水溶
性、酸性の性質を利用して行えば良い。

反応液中の生成した化合物Ｉは、種々の吸着剤を用いて
採取することができる。吸着剤として、活性炭、弱塩基
性カチオン交換樹脂などを利用できる。そのほか、セフ
ァデックスＧ−１ｏ、　セファテックスＬＨ−２０（フ
ァルマシア製）などのゲル−適用担体によるカラムクロ
マトグラフィーも有用な精製手段である。

７−ヒドロキシグアニン誘導体（化合物ｌ）は上記の分
離法または精製法を適宜組合わせ、あるいは繰り返すこ
とによって純粋に採取できる。純粋な化合物１を得る方
法として、例えば水−アルコールなどの混合溶媒系から
結晶を析出させる方法が適している。

次に本発明の抗腫瘍剤について説明する。

本発明による抗腫瘍剤は曲記の構造式（Ｉ）で示される
７−ヒドロキシグアニン誘導体またはその造塩可能なも
のの塩を有効成分とするものである。

本化合物の抗腫瘍作用は以下の試験例に示される通りで
ある。抗腫瘍作用は以下の如く試験した。

ＢＤＦＩ系雌性マウス（体重１８〜２３ｆ）を用い１群
３匹とした。このマウスに、マウス白血病Ｌ−１２１０
１ＸＩ０５個を腹腔内に移植し、被験化合物を５０ｍＭ
燐酸緩衝液（１）Ｈ７，４）　に溶解したものを、翌日
より連続５日間腹腔内投与して延命率を測定した。なお
、５０ｍＭのリン酸緩衝液を腹腔内投与したマウスを対
照とした。

表１に示された結果から、本発明による化合物は優れた
抗腫瘍作用を有することが明らかである。

なお、ＩＣＣ茶系雄性マウス体重１８〜２３ダ）を用い
た急性毒性試験（腹腔内投与）でのＬＤ５０（’９７ｋ
ｑ）値は１５０〜３００ｍダ／に９であった。

表　　　　１調剤および投与量この発明の化合物及びその造塩可能なものの塩は、所望
の投与方法に応じて、例えば錠剤、火剤、カプセル剤、
液剤、けんだく剤などの固体または液体の投与形態にす
ることができる。投与にあたっては、この発明の化合物
及びそれらの造塩可能なものの塩に加えて、慣用される
医薬用担体または賦形剤を含み、さらに他の医薬を含む
こともできるが、その製剤中の主要部分でなくてもよい
ことはいうまでもない。

本発明の化合物は、一般に所望の作用が副作用を伴なう
ことなく達成される投与量で決定される。

その具体的な値は医師の判断で決定されるべきであるが
、一般に成人１日当り１０〜５００〜投与されるのが普
通であろう。

（実施例）次に本発明の化合物の製造例をあげて本発明を具体的に
説明するが、これら実施例は本発明を制限するものでは
ない。

基質（７−ヒドロキシグアニン）の製造倒木発明法に基
質として用いられる７−ヒドロキシグアニンは、ストレ
プトミセス・スピーシズ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　
　ｓｐ、）Ａ−３４７微工研寄第５４１号（ＦＥＲ八ｉ
へＢＰ−５４１）の培養液から特開昭６１−１７８９８
４号に記載された方法に従って調製した。

実施例１化合物１１（７−ヒドロキシグアニン）ｉｓｏ＊。

５−ホスホ−α−Ｄ−リボースー１−ピロリン酸（米国
、シグマ社製）１．８ｆを２．５　ｍＭＭ化マグネシウ
ム及び１２．５ｍＭジチオスライトールを含む５０ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ７，８）　　８５０ｍｌに溶解
し、基質溶液とした。５０，０００ユニツトのヒポキサ
ンチン・グアニン・ホスホリボシルトランスフェラーゼ
（シグマ社製）を５０ｔｔｔｔの上記の緩衝液に溶解後
、これを基質溶液に加え、３０°Ｃで１４時間反応させ
た。

目的生成物を、ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−２５（フ
ァルマシア製）炭酸型に吸着させた後、０．２Δ１の重
炭酸アンモニウムで溶出した。活性画分を５０°Ｃで減
圧濃縮し、８ｔｔｌの蒸留水に溶解してセファデックス
ＬＨ２０（スウェーデン、ファルマシア社製）カラムク
ロマトグラフィーに供し、２０ｍＭのアンモニア水で溶
出した。活性画分を４０’Ｃで減圧ａ縮し、２８０ｑの
７−ヒドロキシグアニン誘導体（１）粉末を得た。この
うちｌ　６０１’ｌ’；／を１．２　ｙｔｔの蒸留水に
溶解した後、ＩＭ水水酸死花ナトリウム溶液ｐ　Ｉ−Ｉ
　７．２とし、エタノール８．２６　＊１を加えて生じ
た沈澱をＰ取、乾燥し、１２７ｑの７−ヒドロキシグア
ニン誘導体（化合物Ｉ）を？υた。生成物の確認は、以
下に示す条件の高速液体クロマトグラフィーで行なった
。

システム：日本分光製トライローター４型カラム：　Ｙ
ＭＣ−ｐａｃｋＡ−６１２６Ｘ１５０ｍ＋ｉ（山村化学
製）溶　媒　：　ｏ、　ｉ　ｈｔリン酸アンモニウムｐ　Ｈ
４，０：メタノール（１９：１）流速＝１．０肩ｌ／分検出：ＵＶ２５４ｎｍ上記条件で７−ヒドロキシグアニン誘導体（化合物Ｉ）
は保持時間８．９分、７−ヒドロキシグアニンは４．４
分にピークを示した。

【図面の簡単な説明】

図１は本発明化合物の紫外吸収スペクトルを示す図、図
２は同化合物の赤外吸収スペクトルを示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記の構造式（ I ）で表わされる７−ヒドロキ
シグアニン誘導体およびその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）
（２）構造式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II）で示される７−ヒドロキシ・グアニン又はその塩と、構
造式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼（III）で示される５−ホスホリボース−１−ピロリン酸を基質
とし、ヒポキサンチン・グアニン・ホスホリボシルトラ
ンスフェラーゼを作用させることを特徴とする、構造式
（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）で表わされる７−ヒドロキシグアニン誘導体の製造方法
。
（３）ヒポキサンチン・グアニン・ホスホリボシルトラ
ンスフェラーゼが酵母由来である特許請求の範囲第２項
記載の製造方法。
（４）下記の構造式（ I ）で表される７−ヒドロキシ
グアニン誘導体またはその生理的に許容される塩を有効
成分とする抗腫瘍剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）