JPS61233696A - ７−ヒドロキシグアニン誘導体及びその製造方法並びにそれを有効成分とする抗腫瘍剤 - Google Patents
７−ヒドロキシグアニン誘導体及びその製造方法並びにそれを有効成分とする抗腫瘍剤Info
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- JPS61233696A JPS61233696A JP60074979A JP7497985A JPS61233696A JP S61233696 A JPS61233696 A JP S61233696A JP 60074979 A JP60074979 A JP 60074979A JP 7497985 A JP7497985 A JP 7497985A JP S61233696 A JPS61233696 A JP S61233696A
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- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、新規な７−ヒドロキシグアニン誘導体および
その造塩可能なものの塩並びにこれを有効成分とする抗
腫瘍剤に関するものである。更に詳しくは、本発明は、
一般式Ｉ （式中、Ｒ１は水素又は水酸基、Ｒ２は水素又は水酸基
又はアミン基を示す）で表される新規な７−ヒドロキシ
グアニン誘導体またはその造塩可能なものの塩、及びこ
れを有効成分とする抗腫瘍剤に関するものである。
その造塩可能なものの塩並びにこれを有効成分とする抗
腫瘍剤に関するものである。更に詳しくは、本発明は、
一般式Ｉ （式中、Ｒ１は水素又は水酸基、Ｒ２は水素又は水酸基
又はアミン基を示す）で表される新規な７−ヒドロキシ
グアニン誘導体またはその造塩可能なものの塩、及びこ
れを有効成分とする抗腫瘍剤に関するものである。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明者等は、下記構造式■で示されるＨ
７−ヒドロキシグアニンを化学的あるいは酵素的に修飾
することによって、いくつかの誘導体を得ることができ
、その薬理作用を広く試験した結果、一般式Ｉで示され
る化合物及びその塩が優れた抗腫瘍作用を有することを
見出し、本発明に到達した。
することによって、いくつかの誘導体を得ることができ
、その薬理作用を広く試験した結果、一般式Ｉで示され
る化合物及びその塩が優れた抗腫瘍作用を有することを
見出し、本発明に到達した。
（問題点を解決するだめの手段及び作用効果）以下詳細
に本発明を説明する。
に本発明を説明する。
（１）化合物
本発明による新規化合物は、下記の一般式ＩでりＩ：１
１ｔ２ （式中、Ｒ１は水素又は水酸基、 Ｒ２１ｔｂｋ素又は
水酸基またはアミン基を示す） 本発明による化合物は、いずれも両性物質であり、塩基
捷たは酸と塩を作ることが可能であるが、本発明による
化合物の塩としては造塩可能な任意のものが対象となる
。例えば塩基の塩としては、■アルカリ金属、アルカリ
土類金属との塩、■アンモニウム塩、■アミン塩、特に
エチルアミン。
１ｔ２ （式中、Ｒ１は水素又は水酸基、 Ｒ２１ｔｂｋ素又は
水酸基またはアミン基を示す） 本発明による化合物は、いずれも両性物質であり、塩基
捷たは酸と塩を作ることが可能であるが、本発明による
化合物の塩としては造塩可能な任意のものが対象となる
。例えば塩基の塩としては、■アルカリ金属、アルカリ
土類金属との塩、■アンモニウム塩、■アミン塩、特に
エチルアミン。
ジメチルアミン、ピペリジン、モルフィリンなどとの塩
、酸との塩としては、■鉱酸との塩、特に塩酸、ヨウ化
水素酸、硫酸との塩、■有機酸塩、特ニベンゼンスルホ
ン酸、ｐ−）ルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸
、酢酸、プロピオン酸。
、酸との塩としては、■鉱酸との塩、特に塩酸、ヨウ化
水素酸、硫酸との塩、■有機酸塩、特ニベンゼンスルホ
ン酸、ｐ−）ルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸
、酢酸、プロピオン酸。
クエン酸、マロン酸などとの塩があげられる。これらの
塩を抗腫瘍剤として使用する場合には、生理的に許容さ
れるものを選ぶべきである。
塩を抗腫瘍剤として使用する場合には、生理的に許容さ
れるものを選ぶべきである。
本発明による化合物の代表例を挙げれば表１のようにな
る。
る。
表 １
（２）化合物の製造
次に、本発明の一般式Ｉに示される構造の化合物の製法
を説明する。
を説明する。
本発明の化合物を製造するにあたっては、基質として、
構造式■で示される７−ヒドロキシグアニンと一般式■ （Ｒ，、Ｒ２はＯ１■記と同じ）で示される糖−１−リ
ン酸にヌクレオシドホスホリーゼ又はその活性を有する
微生物を作用させることにより、一般式Ｉの化合物を得
ることができる。
構造式■で示される７−ヒドロキシグアニンと一般式■ （Ｒ，、Ｒ２はＯ１■記と同じ）で示される糖−１−リ
ン酸にヌクレオシドホスホリーゼ又はその活性を有する
微生物を作用させることにより、一般式Ｉの化合物を得
ることができる。
本方法に基質として用いられる７−ヒドロキシグアニン
は、ストレプトミセス・スピーシズ（１９ｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ Ｓｐ、 ） Ａ −８４７徽工研条寄第５
４１号（ＦＥＲＭ、 ＢＰ−５４１）の培養液から昭和
５９年特許願第１８８２８７号に記載された方法（後記
実施例の欄参照）に従って調製できる。
は、ストレプトミセス・スピーシズ（１９ｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ Ｓｐ、 ） Ａ −８４７徽工研条寄第５
４１号（ＦＥＲＭ、 ＢＰ−５４１）の培養液から昭和
５９年特許願第１８８２８７号に記載された方法（後記
実施例の欄参照）に従って調製できる。
また、糖−１−リン酸又はその塩としては２−デオキシ
リボース−１−リン酸、α−］’）−リボース−１−リ
ン酸、α−２−アミノ−Ｄ−リボース−１−リン酸、α
−２−デオキシ−Ｄ−アラビノース−１−リン酸又はそ
れらの塩等があり、これらは市販品を用いるか、又は該
当する糖を含むヌクレオシドにヌクレオシドホスホリラ
ーゼ活性用させて得ることができる〔参考文献：メソツ
ヅ・イ’／・：ｒ−７ザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）。
リボース−１−リン酸、α−］’）−リボース−１−リ
ン酸、α−２−アミノ−Ｄ−リボース−１−リン酸、α
−２−デオキシ−Ｄ−アラビノース−１−リン酸又はそ
れらの塩等があり、これらは市販品を用いるか、又は該
当する糖を含むヌクレオシドにヌクレオシドホスホリラ
ーゼ活性用させて得ることができる〔参考文献：メソツ
ヅ・イ’／・：ｒ−７ザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）。
ｖｏｌ、８．ｐ１８１〜１８６．（１９５７））。
本発明に用いるヌクレオシドホスホリラーゼは、動物・
微生物など広く生物界から得られる精製ヌクレオシドホ
スホリラーゼ、粗ヌクレオシドホスホリラーゼ、ヌクレ
オシドホスホリラーゼ含有物などの、ヌクレオシドホス
ホリラーゼ活性を有するものであり、例えばヌクレオシ
ドホスホリラーゼ（米国シグマ社、牛肺臓由来）などが
挙げられる。又、本発明に用いることのできる微生物と
してはヌクレオシドホスホリラーゼ活性を有する微生物
々らいずれも用いることができるが、例えばアクロモバ
クタ−（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ）属、エアＤ％ナ
ス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ）属、バシラス（Ｂａｃｉ
１１ｕｓ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｌ）ａ
ｃｔｅｒｉｕｍ）属、ントロバクター（Ｃｉ ｔｒｏｌ
）ａｃｔｅｒ ）属、エンテロバクタ−（Ｂｎｔｅｒｏ
ｂａｃｔｅｒ ）属、エルウィニア（Ｅｒｗｉ ｎ ｉ
ａ ）属、エッシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒ ｉｃｈ
ｉａ ）属、ハフニア（Ｈａｆｎｉａ）属、クレブシェ
ラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌ ｌａ ）属、プロテラｙ、 （
−ｐｒｏｔｅｕｓ）属、シュードモナス（、ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ）属、セラシフ （Ｓｅｒｒａｔ ｉａ
）属に属する微生物等をあげることができる。
微生物など広く生物界から得られる精製ヌクレオシドホ
スホリラーゼ、粗ヌクレオシドホスホリラーゼ、ヌクレ
オシドホスホリラーゼ含有物などの、ヌクレオシドホス
ホリラーゼ活性を有するものであり、例えばヌクレオシ
ドホスホリラーゼ（米国シグマ社、牛肺臓由来）などが
挙げられる。又、本発明に用いることのできる微生物と
してはヌクレオシドホスホリラーゼ活性を有する微生物
々らいずれも用いることができるが、例えばアクロモバ
クタ−（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ）属、エアＤ％ナ
ス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ）属、バシラス（Ｂａｃｉ
１１ｕｓ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｌ）ａ
ｃｔｅｒｉｕｍ）属、ントロバクター（Ｃｉ ｔｒｏｌ
）ａｃｔｅｒ ）属、エンテロバクタ−（Ｂｎｔｅｒｏ
ｂａｃｔｅｒ ）属、エルウィニア（Ｅｒｗｉ ｎ ｉ
ａ ）属、エッシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒ ｉｃｈ
ｉａ ）属、ハフニア（Ｈａｆｎｉａ）属、クレブシェ
ラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌ ｌａ ）属、プロテラｙ、 （
−ｐｒｏｔｅｕｓ）属、シュードモナス（、ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ）属、セラシフ （Ｓｅｒｒａｔ ｉａ
）属に属する微生物等をあげることができる。
これら微生物の培養は、微生物が生育できる栄養培地が
、例えばグルコース、ペプトン、酵母エキス、肉エキス
等からなる培地を用い、培養温度は１０〜４０°Ｃ１好
ましくは２５〜３５°Ｃ１またｐＨは３〜８、好ましく
は６〜７で好気的に培養し、通常２４〜４８時間行えば
よい。このようにして得られた微生物は、培養物・培養
液・菌体・培養Ｆ液及びそれらを処理した物など種々の
形態で必要に応じて用いることができるが、精製操作等
を考慮にいれると酵素あるいは粗酵素を用いる場合はも
ちろん、微生物を用いる場合には緩衝液の使用が望まし
く、トリス−塩酸の如き無機酸塩の緩衝液、酢酸ナトリ
ウム、クエン酸ナトリウムの如き有機酸塩の緩衝液を適
宜使用することができる。濃度は緩衝液の種類にもよる
が、１０ｍＭ〜５００ｍＭ、好ましくは５０ｍＭ 〜１
００ｍＭを使用すると良い。
、例えばグルコース、ペプトン、酵母エキス、肉エキス
等からなる培地を用い、培養温度は１０〜４０°Ｃ１好
ましくは２５〜３５°Ｃ１またｐＨは３〜８、好ましく
は６〜７で好気的に培養し、通常２４〜４８時間行えば
よい。このようにして得られた微生物は、培養物・培養
液・菌体・培養Ｆ液及びそれらを処理した物など種々の
形態で必要に応じて用いることができるが、精製操作等
を考慮にいれると酵素あるいは粗酵素を用いる場合はも
ちろん、微生物を用いる場合には緩衝液の使用が望まし
く、トリス−塩酸の如き無機酸塩の緩衝液、酢酸ナトリ
ウム、クエン酸ナトリウムの如き有機酸塩の緩衝液を適
宜使用することができる。濃度は緩衝液の種類にもよる
が、１０ｍＭ〜５００ｍＭ、好ましくは５０ｍＭ 〜１
００ｍＭを使用すると良い。
酵素反応は、基質の化合物ｎ （７−ヒドロキシグアニ
ン）を０．０５〜０．２％（Ｗ／Ｖ） 、および化合物
ｍ（糖−１−リン酸）を０．０５〜０．４％（Ｗ／Ｖ）
の範囲で反応液に懸濁し、酵素を適量、例えば酵素と基
質（化合物■）の重量比１：２０〜１：１０００の割合
で加え、温度１０〜６５°Ｃ１好ましくは４０〜６０°
Ｃの範囲で反応を行ない、高速液体クロマトグラフィー
（ユ］ Ｐ Ｔ、 Ｃ）によって残基質（化合物■）と
生成物（化合物Ｉ）の量を測定し、生成物の増加が止っ
た時点で反応を止めれば良い。また、酵素反応を行う際
のＴ）Ｈ範囲は６〜８、好ましくは６５〜７．５である
。また微生物の酵素を用いる場合には、微生物を培養後
、集菌して生理食塩水で洗い、超音波破砕等の菌体破砕
処理を行い、遠心分離により上清を得、これを粗酵素液
として」−紀と同様の操作を行えはよい。
ン）を０．０５〜０．２％（Ｗ／Ｖ） 、および化合物
ｍ（糖−１−リン酸）を０．０５〜０．４％（Ｗ／Ｖ）
の範囲で反応液に懸濁し、酵素を適量、例えば酵素と基
質（化合物■）の重量比１：２０〜１：１０００の割合
で加え、温度１０〜６５°Ｃ１好ましくは４０〜６０°
Ｃの範囲で反応を行ない、高速液体クロマトグラフィー
（ユ］ Ｐ Ｔ、 Ｃ）によって残基質（化合物■）と
生成物（化合物Ｉ）の量を測定し、生成物の増加が止っ
た時点で反応を止めれば良い。また、酵素反応を行う際
のＴ）Ｈ範囲は６〜８、好ましくは６５〜７．５である
。また微生物の酵素を用いる場合には、微生物を培養後
、集菌して生理食塩水で洗い、超音波破砕等の菌体破砕
処理を行い、遠心分離により上清を得、これを粗酵素液
として」−紀と同様の操作を行えはよい。
また微生物菌体そのものを用いて上記操作を行うことに
より目的とする生成物を得ることができる。
より目的とする生成物を得ることができる。
さらに、」−紀の酵素反応を例えは酵素または微生物菌
体を固定化することにより繰り返し１行うこともできる
。
体を固定化することにより繰り返し１行うこともできる
。
反応液中から生成物を分離する方法としては、その水溶
性両性の性質を利用して行えば良い。
性両性の性質を利用して行えば良い。
反応液中の生成した化合物Ｉは、種々の吸着剤を用いて
採取することができる。吸着剤として活性炭２強酸性カ
チオン交換樹脂２弱塩基性アニオン交換樹脂などを利用
できるが、キレート樹脂たとえばキレマウス１００（米
国バイオランド社製）のニッケル型カラムに通過吸着さ
せ、希アルカリ性で溶出することにより効率良く精製で
きる。そのほか、セファテックスＧ−ＩＣ，セファデッ
クスＩ、ＴＴ−２０（ファルマシア社製）などのゲル濾
過用担体による塔クロマトグラフィーも有用な精製手段
である。
採取することができる。吸着剤として活性炭２強酸性カ
チオン交換樹脂２弱塩基性アニオン交換樹脂などを利用
できるが、キレート樹脂たとえばキレマウス１００（米
国バイオランド社製）のニッケル型カラムに通過吸着さ
せ、希アルカリ性で溶出することにより効率良く精製で
きる。そのほか、セファテックスＧ−ＩＣ，セファデッ
クスＩ、ＴＴ−２０（ファルマシア社製）などのゲル濾
過用担体による塔クロマトグラフィーも有用な精製手段
である。
一般式■の化合物は上記の分離法または精製法を適宜組
合わせ、あるいは繰り返すことによって純粋に採取でき
る。純粋々化合物Ｉを得る方法として、例えば水−メタ
ノールなどの混合浴に＆から結晶を析出させる方法が適
している。
合わせ、あるいは繰り返すことによって純粋に採取でき
る。純粋々化合物Ｉを得る方法として、例えば水−メタ
ノールなどの混合浴に＆から結晶を析出させる方法が適
している。
次に本発明の抗腫瘍剤について説明する。
本発明による抗腫瘍剤は、前記の一般式Ｉで示される新
規な化合物またはその造塩可能なものの塩を有効成分と
するものである。これら化合物の抗腫瘍作用は、以下の
試験例に示される通りである。抗腫瘍作用は、以下の如
く試験した。
規な化合物またはその造塩可能なものの塩を有効成分と
するものである。これら化合物の抗腫瘍作用は、以下の
試験例に示される通りである。抗腫瘍作用は、以下の如
く試験した。
ＢＤＦｌ系雌性マウス（体重１８〜２３ｇ）を用い１群
３匹とした。このマウスにマウス白血病Ｌ−１２１０１
Ｘ １０５個を腹腔内に移植し、被検化合物を５０ｍＭ
燐酸緩衝液（ｐＨ７，４）に溶解または懸濁したものを
、翌日より連続５日間腹腔内投与して延命率を測定した
。なお５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＩ−Ｉ ７．４ ）
を腹腔内投与したマウスを対照とした。
３匹とした。このマウスにマウス白血病Ｌ−１２１０１
Ｘ １０５個を腹腔内に移植し、被検化合物を５０ｍＭ
燐酸緩衝液（ｐＨ７，４）に溶解または懸濁したものを
、翌日より連続５日間腹腔内投与して延命率を測定した
。なお５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＩ−Ｉ ７．４ ）
を腹腔内投与したマウスを対照とした。
表２に示された結果から、本発明による化合物は優れた
抗腫瘍作用を有することが明らかである。
抗腫瘍作用を有することが明らかである。
表２中の本発明化合物番号は表１に示した化合物番号に
対応するものである。なお、ＩＣＲ系雄性マウス（体重
１８〜２３ｇ）を用いた急性毒性試験（腹腔内投与）で
のＬ Ｄ ５０ ＜ｍｙ、７ｔｃｑ＞ ｍハ、化合物Ａ
が８０〜１６０ ｍｙ／ｋｔｉ、化合物Ｂは８０〜１６
０ ｍｙ／ ｋｑ テｈツｆｃ。
対応するものである。なお、ＩＣＲ系雄性マウス（体重
１８〜２３ｇ）を用いた急性毒性試験（腹腔内投与）で
のＬ Ｄ ５０ ＜ｍｙ、７ｔｃｑ＞ ｍハ、化合物Ａ
が８０〜１６０ ｍｙ／ｋｔｉ、化合物Ｂは８０〜１６
０ ｍｙ／ ｋｑ テｈツｆｃ。
表２
調剤および投与量
この発明の化合物及びその造塩可能なものの塩は、所望
の投与方法に応じて例えば錠剤、火剤。
の投与方法に応じて例えば錠剤、火剤。
カプセル剤、粉剤、液剤、けんだく剤々との固体まだは
液体の投与形態にすることができる。投与にあたっては
、この発明の化合物及びそれらの造塩可能なものの塩に
加えて、慣用される医業用担体または賦形剤を含み、さ
らに他の医薬を含むことができるが、その製剤中の主要
部分でなくてもよいことはいうまでもない。
液体の投与形態にすることができる。投与にあたっては
、この発明の化合物及びそれらの造塩可能なものの塩に
加えて、慣用される医業用担体または賦形剤を含み、さ
らに他の医薬を含むことができるが、その製剤中の主要
部分でなくてもよいことはいうまでもない。
本発明の化合物は、一般に所望の作用が副作用を伴なう
ことなく達成される投与量で投与される。
ことなく達成される投与量で投与される。
その具体的な値は医師の判断で決定されるべきであるが
、一般に成人１日当りＩＯ〜５００ ｍｙ投与されるの
が普通であろう。
、一般に成人１日当りＩＯ〜５００ ｍｙ投与されるの
が普通であろう。
（実施例）
次に本発明化合物の製造例をあげて本発明を具体的に説
明するが、これら実施例は本発明を制限するものではな
い。
明するが、これら実施例は本発明を制限するものではな
い。
基質（７−ヒドロキシグアニン）の製造側寒天斜面培地
に培養した放線菌ストレプトミセス・スピシーズＡ、−
３４７株（徽工研条寄第５４１号）をグルコース２，０
％、蔗糖１．０％、大豆粉２０％、炭酸カルシウム０．
３％からなる液体培地（Ｔ）ＩＩ ７．４．） １．
００ｙｄを含む５００ｒｎｌ容の三角フラスコに接種し
、２８°Ｃで４８時間、回転振盪機」二で培養して種培
養液を得た。
に培養した放線菌ストレプトミセス・スピシーズＡ、−
３４７株（徽工研条寄第５４１号）をグルコース２，０
％、蔗糖１．０％、大豆粉２０％、炭酸カルシウム０．
３％からなる液体培地（Ｔ）ＩＩ ７．４．） １．
００ｙｄを含む５００ｒｎｌ容の三角フラスコに接種し
、２８°Ｃで４８時間、回転振盪機」二で培養して種培
養液を得た。
次に上記と同じ組成の液体培地１８１を含む３０β容の
ジャー培養器に種培養液を１％（容量）接種し、２８°
Ｃで９０時間培養した（撹柊：毎分３５０回転、通気量
：毎分９１）。ジャー培養器２基分の培養液を合せて、
５Ｎの塩酸でＴ）Ｈ３，２に調整し、遠心処理によって
培養Ｐ液を得、５Ｎ苛性ソーダでｐＨ７，２とした（２
７．ＦＭ！、１００１１ｇ／づ）。この培養ｐ液２７．
５／！をアンバーリスト１５（■付則）４．Ｏｌを含む
塔（８，４Ｘ ６０ｃｍ）に通過吸着させ、８１の水で
洗浄後０．５Ｎのアンモニア水で溶出し、８βの活性溶
出画分を得た。
ジャー培養器に種培養液を１％（容量）接種し、２８°
Ｃで９０時間培養した（撹柊：毎分３５０回転、通気量
：毎分９１）。ジャー培養器２基分の培養液を合せて、
５Ｎの塩酸でＴ）Ｈ３，２に調整し、遠心処理によって
培養Ｐ液を得、５Ｎ苛性ソーダでｐＨ７，２とした（２
７．ＦＭ！、１００１１ｇ／づ）。この培養ｐ液２７．
５／！をアンバーリスト１５（■付則）４．Ｏｌを含む
塔（８，４Ｘ ６０ｃｍ）に通過吸着させ、８１の水で
洗浄後０．５Ｎのアンモニア水で溶出し、８βの活性溶
出画分を得た。
この両分を減圧浸縮してアンモニアを除いた後、脱イオ
ン水を加えて１５１（１５８μｇ／−）とした。
ン水を加えて１５１（１５８μｇ／−）とした。
この溶液１５ＡをアンバーライトＩＲＡ−４５（ＯＩ（
−型）ＩＡを用いた塔（６ｃｙｎｘ３５ｃｍ）に通過吸
着させ、０．８Ｎのアンモニア水で溶出して１１の活性
画分を得た。この両分を減圧浸縮してアンモニアを除い
た後、脱イオン水を加えて３β（７００μｆｌ／ｍｌ）
とした。
−型）ＩＡを用いた塔（６ｃｙｎｘ３５ｃｍ）に通過吸
着させ、０．８Ｎのアンモニア水で溶出して１１の活性
画分を得た。この両分を減圧浸縮してアンモニアを除い
た後、脱イオン水を加えて３β（７００μｆｌ／ｍｌ）
とした。
この溶ｉ３／をＤ Ｅ Ａ、 Ｅ−セファデックスＡ
−２５（ＨＣＯ−ａ型）を用いたイオン交換クロマトグ
ラフィー（カラム内径：３Ｃ１ｎ、容量３００ｍｇ）に
通過吸着させ、０．０５Ｍの重度酸アンモニウム水３０
０ｔｎ１．で洗浄した後、０．２Ｍの重炭酸アンモニウ
ム水で溶出し、１０ゴずつ分画した。分画５０〜９５を
合し、６０°Ｃで減圧濃縮して、析出した７−ヒドロキ
シグアニンの粗粉末１４１２ ｍＷ（９９１ｌｌＩ／ｍ
ｆｔ）を得た。この７−ヒドロキシグアニンの粗粉末１
０３５ｍｇを４５７の５Ｎアンモニア水に６０°Ｃで溶
解後、冷所（５°Ｃ）に−夜装置して、析出した結晶を
渥別し、純粋な７−ヒドロキシグアニンの板状結晶６３
６．８ ｍｇ（１０００μＦＩ／■）を得た。
−２５（ＨＣＯ−ａ型）を用いたイオン交換クロマトグ
ラフィー（カラム内径：３Ｃ１ｎ、容量３００ｍｇ）に
通過吸着させ、０．０５Ｍの重度酸アンモニウム水３０
０ｔｎ１．で洗浄した後、０．２Ｍの重炭酸アンモニウ
ム水で溶出し、１０ゴずつ分画した。分画５０〜９５を
合し、６０°Ｃで減圧濃縮して、析出した７−ヒドロキ
シグアニンの粗粉末１４１２ ｍＷ（９９１ｌｌＩ／ｍ
ｆｔ）を得た。この７−ヒドロキシグアニンの粗粉末１
０３５ｍｇを４５７の５Ｎアンモニア水に６０°Ｃで溶
解後、冷所（５°Ｃ）に−夜装置して、析出した結晶を
渥別し、純粋な７−ヒドロキシグアニンの板状結晶６３
６．８ ｍｇ（１０００μＦＩ／■）を得た。
実施例１
化合物１ｒ（’ｙ−ヒドロキシグアニン）８００〜、リ
ボース−１−リン酸バリウム塩２．２ｇを１．０βの４
０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝ｉ （１）Ｔ（６，５）
に溶解し、４４０ユニツトのプリンヌクレオシドホスホ
リラーゼ（牛肺臓由来、シグマ社製）を加えて４０°Ｃ
で９時間反応させた。反応液を２８％アンモニア水でｐ
Ｉ＋９．５とし、４０７！となるまで減圧濃縮した後、
セファデックスＧ−１０を担体とするカラムクロマトグ
ラフィーに供した。水で溶出し、溶出画分を濃縮後、更
にセファデックスＬ ＴＴ ２０カラムクロマトグラフ
イーに供した。
ボース−１−リン酸バリウム塩２．２ｇを１．０βの４
０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝ｉ （１）Ｔ（６，５）
に溶解し、４４０ユニツトのプリンヌクレオシドホスホ
リラーゼ（牛肺臓由来、シグマ社製）を加えて４０°Ｃ
で９時間反応させた。反応液を２８％アンモニア水でｐ
Ｉ＋９．５とし、４０７！となるまで減圧濃縮した後、
セファデックスＧ−１０を担体とするカラムクロマトグ
ラフィーに供した。水で溶出し、溶出画分を濃縮後、更
にセファデックスＬ ＴＴ ２０カラムクロマトグラフ
イーに供した。
０．０５Ｎのアンモニア水１０１で溶出し、溶出画分を
濃縮乾固して白色粉末７００ ｍｙを得た。この粉末７
００■を５ ｍｌの水−メタノール（１：１）から結晶
化し、３２６■の化合物Ａの無色針状結晶を得だ。
濃縮乾固して白色粉末７００ ｍｙを得た。この粉末７
００■を５ ｍｌの水−メタノール（１：１）から結晶
化し、３２６■の化合物Ａの無色針状結晶を得だ。
実施例２
７−ヒドロキシグアニン（化合物Ｉ）１７０■、デオキ
シリボース−１−リン酸バリウム塩１．０ｇを６００ｙ
ｄの５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液（Ｉ）Ｈ６，５
）に溶解し、２００ユニツトのプリンヌクレオシドホス
ホリラーゼ（シグマ社製）を加えて４０°Ｃで５０分間
反応させた。反応液を水冷して生じた沈澱を８０００ｒ
ｐｍｌＯ分間遠心して除去後、キレツクス１００（米国
バイオランド社製）のニッケル型カラム（４００ｔｎｅ
）に通過吸着させ、水洗後０．５Ｎアンモニア水６００
ｍｌで溶出した。溶出画分をアンバーライ）ＩＩ（、
Ｃ−５０（米国、ローム・アンド・ハース社製、Ｎ■■
４型）のカラムクロマトグラフィーに供した。水で溶出
し、溶出画分を濃縮乾固して１７０ ｍｇの白色粉末を
得た。この白色粉末ｔ ７０ ｍ！ｉ＋を０．０５Ｎア
ンモニア水３−から結晶化し、１８０ ｍｙの化合物Ｂ
の無色針状結晶を得た。
シリボース−１−リン酸バリウム塩１．０ｇを６００ｙ
ｄの５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液（Ｉ）Ｈ６，５
）に溶解し、２００ユニツトのプリンヌクレオシドホス
ホリラーゼ（シグマ社製）を加えて４０°Ｃで５０分間
反応させた。反応液を水冷して生じた沈澱を８０００ｒ
ｐｍｌＯ分間遠心して除去後、キレツクス１００（米国
バイオランド社製）のニッケル型カラム（４００ｔｎｅ
）に通過吸着させ、水洗後０．５Ｎアンモニア水６００
ｍｌで溶出した。溶出画分をアンバーライ）ＩＩ（、
Ｃ−５０（米国、ローム・アンド・ハース社製、Ｎ■■
４型）のカラムクロマトグラフィーに供した。水で溶出
し、溶出画分を濃縮乾固して１７０ ｍｇの白色粉末を
得た。この白色粉末ｔ ７０ ｍ！ｉ＋を０．０５Ｎア
ンモニア水３−から結晶化し、１８０ ｍｙの化合物Ｂ
の無色針状結晶を得た。
実施例３
ペプトン１％、肉エキス１．０％、酵母エキス０．５％
、食塩０．５％を含みＩ）Ｈ７，２に調節した液体培地
の１００ ｍｌを５００ ｍｌ容の坂ロフラスコに入れ
、１２０°Ｃｌ２Ｏ分間殺菌した。この培地に第３表に
示す微生物を１白金耳ずつ接種し、３０°Ｃにて２４時
間振盪培養した。得られた培養液から置体を遠心分離に
よって集め、生理食塩水にて洗った後、５０％Ｗ ／
Ｖとなるように蒸留水に懸濁した。この懸濁液を２．５
分間超音波処理した後、１万ｇ、２０分間遠心して得ら
れた上清を粗酵素液としだ。
、食塩０．５％を含みＩ）Ｈ７，２に調節した液体培地
の１００ ｍｌを５００ ｍｌ容の坂ロフラスコに入れ
、１２０°Ｃｌ２Ｏ分間殺菌した。この培地に第３表に
示す微生物を１白金耳ずつ接種し、３０°Ｃにて２４時
間振盪培養した。得られた培養液から置体を遠心分離に
よって集め、生理食塩水にて洗った後、５０％Ｗ ／
Ｖとなるように蒸留水に懸濁した。この懸濁液を２．５
分間超音波処理した後、１万ｇ、２０分間遠心して得ら
れた上清を粗酵素液としだ。
上記の粗酵素液０，１−を、０．４．Ｍ）ＩＪ、ス塩酸
緩衝液（ｒ）Ｔ（７，５） ０．１１ｎｌ、 １０ｍ
Ｍ、 ７−、、ヒドロキシグアニン０．１７，２０ｍ
Ｍリボース−１−リン酸またはデオキシリボース−１−
リン酸０．１１ｎｌを含む反応液に加えた。これを４０
°Ｃに４時間保ち、各反応液中に生成しだ７−ヒトロキ
シグアニンリボシドまたは７−ヒトロキシグアニンデオ
キシリボシドを高速液汁クロマトグラフィー（日本分光
■５型およびケムコ社■ｐａｒｔｉｓｉｌ １０８ＣＸ
カラムを使用）によって固定、定量した。結果を表３に
示しだ。
緩衝液（ｒ）Ｔ（７，５） ０．１１ｎｌ、 １０ｍ
Ｍ、 ７−、、ヒドロキシグアニン０．１７，２０ｍ
Ｍリボース−１−リン酸またはデオキシリボース−１−
リン酸０．１１ｎｌを含む反応液に加えた。これを４０
°Ｃに４時間保ち、各反応液中に生成しだ７−ヒトロキ
シグアニンリボシドまたは７−ヒトロキシグアニンデオ
キシリボシドを高速液汁クロマトグラフィー（日本分光
■５型およびケムコ社■ｐａｒｔｉｓｉｌ １０８ＣＸ
カラムを使用）によって固定、定量した。結果を表３に
示しだ。
ＨＰ ｉ、 Ｃ測定条件は以下のとおりである。
カラム： Ｐａｒｔｉｓｉｌ １０ Ｓ ＣＸ１４．
６Ｘ２５０Ｍ（ケムコ社製） 移動相： １０ｍＭ ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４緩衝液（１）
Ｈ２，９） 流速： １． Ｏｍｌ／ｗｉｎ 検出：ＵＶ２５４ 装 置二日本分光■５型 この条件で、７−ヒドロキシグアニンは保持時間１０分
、化合物Ａ（７−ヒトロキシグアニンリボシド）が保持
時間５．０分、化合物Ｂ （７−ヒトロキシグアニンデ
オキシリボシド）が保持時間６．８分にピークを与える
。
６Ｘ２５０Ｍ（ケムコ社製） 移動相： １０ｍＭ ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４緩衝液（１）
Ｈ２，９） 流速： １． Ｏｍｌ／ｗｉｎ 検出：ＵＶ２５４ 装 置二日本分光■５型 この条件で、７−ヒドロキシグアニンは保持時間１０分
、化合物Ａ（７−ヒトロキシグアニンリボシド）が保持
時間５．０分、化合物Ｂ （７−ヒトロキシグアニンデ
オキシリボシド）が保持時間６．８分にピークを与える
。
表３
表３つづき
図−１は本発明化合物Ａの紫外部吸収スペクトル、図−
２は同人の赤外吸収スペクトル、図−３は本発明化合物
Ｂの紫外部吸収スペクトル、図−４は四Ｂの赤外吸収ス
ペクトルである。
２は同人の赤外吸収スペクトル、図−３は本発明化合物
Ｂの紫外部吸収スペクトル、図−４は四Ｂの赤外吸収ス
ペクトルである。
Claims (9)
- （１）下記の一般式 I で表わされる７−ヒドロキシグ
アニン誘導体およびその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼ I （式中、Ｒ＿１は水素又は水酸基、Ｒ＿２は水素又は水
酸基又はアミノ基である） - （２）構造式II ▲数式、化学式、表等があります▼II で示される７−ヒドロキシグアニン又はその塩と、一般
式III ▲数式、化学式、表等があります▼III （式中、Ｒ＿１は水素又は水酸基、Ｒ＿２は水素又は水
酸基又はアミノ基である） で示される糖−１−リン酸を基質とし、ヌクレオシドホ
スホリラーゼ、またはその活性を有する微生物を作用さ
せることを特徴とする一般式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ I （Ｒ＿１、Ｒ＿２は前記と同じ） で表される７−ヒドロキシグアニン誘導体の製造方法。 - （３）Ｒ＿１、Ｒ＿２が共に水素である特許請求の範囲
第２項記載の製造方法。 - （４）Ｒ＿１が水素、Ｒ＿２が水酸基である特許請求の
範囲第２項記載の製造方法。 - （５）Ｒ＿１が水素、Ｒ＿２がアミノ基である特許請求
の範囲第２項記載の製造方法。 - （６）Ｒ＿１が水酸基、Ｒ＿２が水素である特許請求の
範囲第２項記載の製造方法。 - （７）ヌクレオシドホスホリラーゼが動物臓器由来であ
る特許請求の範囲第２項乃至第６項いづれかの項記載の
製造方法。 - （８）ヌクレオシドホスホリラーゼ活性を有する微生物
あるいはヌクレオシドホスホリラーゼが、アクロモバク
ター（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ）属、エアロモナス
（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ）属、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ
）属、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）
属、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属、エッシェリヒ
ア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、ハフニア（Ｈａｆｎ
ｉａ）属、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属、
プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属、シュードモナス（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、セラシア（Ｓｅｒｒａｔｉ
ａ）属に属する微生物又は、該微生物由来である特許請
求の範囲第１項乃至第６項いづれかの項記載の製造方法
。 - （９）下記の一般式 I で表される７−ヒドロキシグア
ニン誘導体またはその生理的に許容される塩を有効成分
とする抗腫瘍剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼ I （式中、Ｒ＿１は水素又は水酸基、Ｒ＿２は水素又は水
酸基又はアミノ基である）
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60074979A JPS61233696A (ja) | 1985-04-08 | 1985-04-08 | ７−ヒドロキシグアニン誘導体及びその製造方法並びにそれを有効成分とする抗腫瘍剤 |
| US06/844,687 US4786723A (en) | 1985-04-08 | 1986-03-27 | 7-hydroxyguanine compounds, process for preparing said compounds, and anti-tumor agent containing the same |
| CA000505798A CA1263946A (en) | 1985-04-08 | 1986-04-03 | 7-hydroxyguanine compounds, process for preparing said compounds, and anti-tumor agent containing the same |
| DE8686104744T DE3664635D1 (en) | 1985-04-08 | 1986-04-08 | 7-hydroxyguanine compounds, process for preparing said compounds, pharmaceutical composition, and use thereof |
| EP86104744A EP0198387B1 (en) | 1985-04-08 | 1986-04-08 | 7-hydroxyguanine compounds, process for preparing said compounds, pharmaceutical composition, and use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60074979A JPS61233696A (ja) | 1985-04-08 | 1985-04-08 | ７−ヒドロキシグアニン誘導体及びその製造方法並びにそれを有効成分とする抗腫瘍剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61233696A true JPS61233696A (ja) | 1986-10-17 |
| JPH0563480B2 JPH0563480B2 (ja) | 1993-09-10 |
Family
ID=13562915
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60074979A Granted JPS61233696A (ja) | 1985-04-08 | 1985-04-08 | ７−ヒドロキシグアニン誘導体及びその製造方法並びにそれを有効成分とする抗腫瘍剤 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4786723A (ja) |
| EP (1) | EP0198387B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61233696A (ja) |
| CA (1) | CA1263946A (ja) |
| DE (1) | DE3664635D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008029358A (ja) * | 2000-11-06 | 2008-02-14 | Mitsui Chemicals Inc | ヌクレオシド化合物の製造方法 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU629988B2 (en) * | 1989-10-11 | 1992-10-15 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Inosine/guanosine derivatives as antineoplastic agents |
| GB9015914D0 (en) * | 1990-07-19 | 1990-09-05 | Wellcome Found | Heterocyclic compounds |
| US5773424A (en) * | 1994-12-16 | 1998-06-30 | Research Corporation Technologies, Inc. | Treatment of toxoplasmosis |
| WO2000070074A1 (fr) * | 1999-05-13 | 2000-11-23 | Mitsui Chemicals, Incorporated | Procede de production de compose nucleosidique |
| WO2002036800A1 (fr) * | 2000-11-06 | 2002-05-10 | Mitsui Chemicals, Inc. | Procede de production de compose nucleoside |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5262295A (en) * | 1975-11-18 | 1977-05-23 | Kohjin Co Ltd | Preparation of n1-oxy-2-thioadenosines |
| JPS5265299A (en) * | 1975-11-27 | 1977-05-30 | Kohjin Co Ltd | Synthesis of 2-substituted-thioadenosine-n-oxides |
| JPS5265298A (en) * | 1975-11-27 | 1977-05-30 | Kohjin Co Ltd | Synthesis of novel 2-substituted-thioadenosine-n-oxides |
| JPS5265300A (en) * | 1975-11-27 | 1977-05-30 | Kohjin Co Ltd | Synthesis of 2-thioadenosines |
-
1985
- 1985-04-08 JP JP60074979A patent/JPS61233696A/ja active Granted
-
1986
- 1986-03-27 US US06/844,687 patent/US4786723A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-04-03 CA CA000505798A patent/CA1263946A/en not_active Expired
- 1986-04-08 EP EP86104744A patent/EP0198387B1/en not_active Expired
- 1986-04-08 DE DE8686104744T patent/DE3664635D1/de not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008029358A (ja) * | 2000-11-06 | 2008-02-14 | Mitsui Chemicals Inc | ヌクレオシド化合物の製造方法 |
| JP4593608B2 (ja) * | 2000-11-06 | 2010-12-08 | 三井化学株式会社 | ヌクレオシド化合物の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1263946A (en) | 1989-12-19 |
| EP0198387A2 (en) | 1986-10-22 |
| EP0198387B1 (en) | 1989-07-26 |
| US4786723A (en) | 1988-11-22 |
| DE3664635D1 (en) | 1989-08-31 |
| EP0198387A3 (en) | 1988-01-13 |
| JPH0563480B2 (ja) | 1993-09-10 |
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