JPS63102695A - 大腸菌の菌体外分泌ベクタ−を用いる発光蛋白エクオリンの製造法 - Google Patents
大腸菌の菌体外分泌ベクタ−を用いる発光蛋白エクオリンの製造法Info
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- JPS63102695A JPS63102695A JP24909886A JP24909886A JPS63102695A JP S63102695 A JPS63102695 A JP S63102695A JP 24909886 A JP24909886 A JP 24909886A JP 24909886 A JP24909886 A JP 24909886A JP S63102695 A JPS63102695 A JP S63102695A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔技術の分野〕
本発明は発光蛋白エクオリンの遺伝子を用いてのエクオ
リン活性を有する蛋白質の製造法に関する。更に詳しく
は、大腸菌の菌体外分泌ベクターを用いて、大腸菌菌体
外へエクオリン活性を有する蛋白を分泌製造する方法に
関する。
リン活性を有する蛋白質の製造法に関する。更に詳しく
は、大腸菌の菌体外分泌ベクターを用いて、大腸菌菌体
外へエクオリン活性を有する蛋白を分泌製造する方法に
関する。
エクオリンは、米国ワシントン州フライデーハーバ−島
近郊に生息する発光クラゲより分はされたカルシウム受
容発光蛋白質である。
近郊に生息する発光クラゲより分はされたカルシウム受
容発光蛋白質である。
エクオリン１分子に２分子（あるいは３分子）のＣａ２
”イオンが結合することによりエクオリン分子中に含
まれる活性化状態にあるセレンテラジンが酸化され、光
と ＣＯ２を放出する。この発光には、Ｃａ２°イオン
が不可欠なことより、エクオリンを用いてＣａ２・を特
異的に定量検出すること（が可能である。 Ｃａ２°イ
オンの検出限界は１０−９Ｍ程度である。
”イオンが結合することによりエクオリン分子中に含
まれる活性化状態にあるセレンテラジンが酸化され、光
と ＣＯ２を放出する。この発光には、Ｃａ２°イオン
が不可欠なことより、エクオリンを用いてＣａ２・を特
異的に定量検出すること（が可能である。 Ｃａ２°イ
オンの検出限界は１０−９Ｍ程度である。
現在までに、細胞膜の興奮、筋収縮、細胞の分泌活動、
伝達物質の遊離、ホルモンの作用若しくは細胞間の連結
、融合などの多くの細胞機能の発現に細胞内Ｃａ２・イ
オンが重要な役割を果していることが、広く認められて
いる。これらの細胞機能と細胞内Ｃａ２ ’イオンとの
関係を明らかにするためには、細胞内Ｃａ２・濃度の経
時的定量が必要となってくる。細胞内Ｃａ２ ”イオン
の相対的、経時的変化の測定には、実験系が比較的単純
でＳＮ比のよいＣａ２ ’イオンのシグナルが記録でき
るためエクオリンが用いられる。
伝達物質の遊離、ホルモンの作用若しくは細胞間の連結
、融合などの多くの細胞機能の発現に細胞内Ｃａ２・イ
オンが重要な役割を果していることが、広く認められて
いる。これらの細胞機能と細胞内Ｃａ２ ’イオンとの
関係を明らかにするためには、細胞内Ｃａ２・濃度の経
時的定量が必要となってくる。細胞内Ｃａ２ ”イオン
の相対的、経時的変化の測定には、実験系が比較的単純
でＳＮ比のよいＣａ２ ’イオンのシグナルが記録でき
るためエクオリンが用いられる。
しかしながら、エクオリンの天然からの分離は発光クラ
ゲ１０トンから２００ｍｇ程度にすぎず、生産量は十分
でなく、一定の供給が保証されていない。
ゲ１０トンから２００ｍｇ程度にすぎず、生産量は十分
でなく、一定の供給が保証されていない。
本発明者らは、前述の問題を解決すべく、研究を行い、
遺伝子工学の手法を用い、クラゲ発光蛋白エクオリンの
ｃＤＮＡクローンを取得し、このｃＤＮＡクローンプラ
スミドをｐＡＱ４４０と名付けた（特願昭５９−１７８
１２５号）０次いで、この遺伝子（ｐＡＱ４４０）を大
腸菌の発現プロモーターを有するプラスミドに挿入し、
トランスフォーメーションした菌体を用い、天然型及び
融合型の発光蛋白エクオリンを大腸菌体内で、俺率的に
生産することが出きた（＃願昭８０−２８０２５９号）
。
遺伝子工学の手法を用い、クラゲ発光蛋白エクオリンの
ｃＤＮＡクローンを取得し、このｃＤＮＡクローンプラ
スミドをｐＡＱ４４０と名付けた（特願昭５９−１７８
１２５号）０次いで、この遺伝子（ｐＡＱ４４０）を大
腸菌の発現プロモーターを有するプラスミドに挿入し、
トランスフォーメーションした菌体を用い、天然型及び
融合型の発光蛋白エクオリンを大腸菌体内で、俺率的に
生産することが出きた（＃願昭８０−２８０２５９号）
。
しかしながら、該エクオリン蛋白の安定生産の為には、
大腸菌の菌体外に該蛋白を分泌せしめるような発現ベク
ターが要望される。
大腸菌の菌体外に該蛋白を分泌せしめるような発現ベク
ターが要望される。
木発明者らは、上述の要望を満足すべく研究の結果、上
述のｐＡＱ４４０を用い、大腸菌の外膜蛋白Ａ分泌用遺
伝子及びリボ蛋白（ｌｐｐ）のプロモーターと接続する
ことにより、エクオリン活性を有するエクオリン蛋白を
大腸菌の菌体外に放出する分泌型発現ベクターを構築し
、該ベクターを利用することにより、大腸菌の菌体内で
生産されたエクオリン蛋白を大腸菌４体外に爺率的に放
出し生産させることに成功した。
述のｐＡＱ４４０を用い、大腸菌の外膜蛋白Ａ分泌用遺
伝子及びリボ蛋白（ｌｐｐ）のプロモーターと接続する
ことにより、エクオリン活性を有するエクオリン蛋白を
大腸菌の菌体外に放出する分泌型発現ベクターを構築し
、該ベクターを利用することにより、大腸菌の菌体内で
生産されたエクオリン蛋白を大腸菌４体外に爺率的に放
出し生産させることに成功した。
以上の記述から明らかなように本発明の目的は、該分泌
型発現ベクターならびに該ベクターにクローニングして
得られたプラスミドを大腸菌にトランスホーメートする
ことにより、エクオリン蛋白の菌体外分泌による製造法
を提供することである。
型発現ベクターならびに該ベクターにクローニングして
得られたプラスミドを大腸菌にトランスホーメートする
ことにより、エクオリン蛋白の菌体外分泌による製造法
を提供することである。
本発明は、下記（１）の主要構成と（２）および（３）
の実施態様的構成を有する。
の実施態様的構成を有する。
（１）クラゲ発光蛋白エクオリンの生合成を特定する遺
伝子（ｐＡＱ４４０）を用いて菌体外分泌ベクターにク
ローニングして得られたプラスミドを大腸菌にトランス
ホーメートすることによりエクオリン活性な有する蛋白
質を該大腸菌の菌体外に分泌させることを特徴とする大
腸菌の菌体外分泌ベクターを用いる発光蛋白エクオリン
の製造法。
伝子（ｐＡＱ４４０）を用いて菌体外分泌ベクターにク
ローニングして得られたプラスミドを大腸菌にトランス
ホーメートすることによりエクオリン活性な有する蛋白
質を該大腸菌の菌体外に分泌させることを特徴とする大
腸菌の菌体外分泌ベクターを用いる発光蛋白エクオリン
の製造法。
（２）大腸菌のリボ蛋白（１ｐｐ）のプロモーターの下
流に大腸菌の外膜蛋白Ａ（ｏｍｐＡ）の分泌の為のシグ
ナルペプチドをコードする遺伝子及びエクオリン遺伝子
（ｐＡＱ４４０）を接続したプラスミドを用いる前記第
（１）項に記載の製造法。
流に大腸菌の外膜蛋白Ａ（ｏｍｐＡ）の分泌の為のシグ
ナルペプチドをコードする遺伝子及びエクオリン遺伝子
（ｐＡＱ４４０）を接続したプラスミドを用いる前記第
（１）項に記載の製造法。
（３）シグナルペプチドをコードする遺伝子として大腸
菌のβ−ラクターゼのシグナルペプチドを有する発現ベ
クターを用いる前記第（１）項に記載の方法。
菌のβ−ラクターゼのシグナルペプチドを有する発現ベ
クターを用いる前記第（１）項に記載の方法。
本発明の構成と効果につき以下に詳述する。
先づ、クラゲ発光蛋白エクオリンの生合成を特定する遺
伝子（ｐＡＱ４４０）の取得については、上述のように
本発明者らによる特願昭５９−１７８１２５号（特開昭
８ｌ−１３５５Ｈ号）に詳述されている。
伝子（ｐＡＱ４４０）の取得については、上述のように
本発明者らによる特願昭５９−１７８１２５号（特開昭
８ｌ−１３５５Ｈ号）に詳述されている。
このｐＡＱ４４０を用いる菌体外分泌ベクターの構築法
については後述の実施例１（イ）に例示されているよう
に、例えば、高コピーのクローニングベクターｐＵｃ
８の…Ｒ−ＨｉｎｄＩ［［部分をそれぞれの制限酵素で
消化後、その部分にｃＤＮＡクローンｐＡＱ４４０Ｊ：
り得られたエクオリンｃＤＮＡ…Ｒ−Ｈｉｎｄ ｍフラ
グメントをサブクローニングすることによりｐｉＱＨＥ
を取得する。
については後述の実施例１（イ）に例示されているよう
に、例えば、高コピーのクローニングベクターｐＵｃ
８の…Ｒ−ＨｉｎｄＩ［［部分をそれぞれの制限酵素で
消化後、その部分にｃＤＮＡクローンｐＡＱ４４０Ｊ：
り得られたエクオリンｃＤＮＡ…Ｒ−Ｈｉｎｄ ｍフラ
グメントをサブクローニングすることによりｐｉＱＨＥ
を取得する。
次に、該ベクターへのクローニングによるプラスミドの
取得については後述の実施例１（ｏ）に例示さレテイル
ヨうに、ｐｉＱ ８ ＨＥ（７） Ｓｃａ Ｉ −Ｈｉ
ｎｄｍ消化後、その部分にｐＩＮ−ｍｏ閣ｐＡＩよりＩ
ＰＰプロモーター及びｏｍｐＡ遺伝子を含む５ｃａｌ
−Ｈｉｎｄｍフラグメントを挿入することにより、ｐｉ
ＰＨＥを取得する。
取得については後述の実施例１（ｏ）に例示さレテイル
ヨうに、ｐｉＱ ８ ＨＥ（７） Ｓｃａ Ｉ −Ｈｉ
ｎｄｍ消化後、その部分にｐＩＮ−ｍｏ閣ｐＡＩよりＩ
ＰＰプロモーター及びｏｍｐＡ遺伝子を含む５ｃａｌ
−Ｈｉｎｄｍフラグメントを挿入することにより、ｐｉ
ＰＨＥを取得する。
該プラスミドの大腸菌へのトランスホーメーション方法
は、公知方法に従う、該大腸菌を用いてのエクオリン蛋
白の生産方法は、後述の実施例２に例示されているよう
に、該大腸菌を所定の培養液中で培養し、該培養液に発
現誘導試薬を加えて所定の該試薬濃度とし更に所定条件
（温度、時間）で培養した培養物を遠心集菌し洗浄する
。
は、公知方法に従う、該大腸菌を用いてのエクオリン蛋
白の生産方法は、後述の実施例２に例示されているよう
に、該大腸菌を所定の培養液中で培養し、該培養液に発
現誘導試薬を加えて所定の該試薬濃度とし更に所定条件
（温度、時間）で培養した培養物を遠心集菌し洗浄する
。
かくして得られた菌体から、公知方法（Ｎｅｉｅｔ ａ
ｌ、Ｊ、Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｌｌ、 ２４０巻３８８５−
３ｉ３９２（１９８５） ）に従ってスフェロプラスト
を作成する。
ｌ、Ｊ、Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｌｌ、 ２４０巻３８８５−
３ｉ３９２（１９８５） ）に従ってスフェロプラスト
を作成する。
このスフェロプラストを公知方法で破壊し、菌体、スフ
ェロプラストならびに処理剤菌体の夫々についてアクア
リンの酵素活性を測定する。
ェロプラストならびに処理剤菌体の夫々についてアクア
リンの酵素活性を測定する。
後述実施例２の表１にも示されているように菌体のスフ
ェロプラスト以外に処理菌体上清に該活性の大部分（例
えば９５％以上）が見出されることにより、エクオリン
が菌体外に分泌されていることが明らかである。
ェロプラスト以外に処理菌体上清に該活性の大部分（例
えば９５％以上）が見出されることにより、エクオリン
が菌体外に分泌されていることが明らかである。
以下実施例によって本発明を説明する。
実施例１：ｌｐｐプロモーター及びｏｍｐＡのシグナル
ペプチドをコードする遺伝子へのエクオリンｃＤＮＡ遺
伝子の挿入（図１−ａ）（イ）ｐｉＱ８ＨＨの作成 高コピーのクローニングベクターｐＵｃ ８のＥｃｏＲ
Ｉ −Ｈｉｎｄｍ部分を、それぞれの制限酵素で消化後
その部分にｃＤＮＡクローンｐＡＱ４４０より得られた
エクオリンｃＤＮＡのＥｃｏＲＩ −）１ｉｎｄｍフラ
グメントを、サブクローニングを行うことにより、ｐｉ
ＱＨＥを作成した。
ペプチドをコードする遺伝子へのエクオリンｃＤＮＡ遺
伝子の挿入（図１−ａ）（イ）ｐｉＱ８ＨＨの作成 高コピーのクローニングベクターｐＵｃ ８のＥｃｏＲ
Ｉ −Ｈｉｎｄｍ部分を、それぞれの制限酵素で消化後
その部分にｃＤＮＡクローンｐＡＱ４４０より得られた
エクオリンｃＤＮＡのＥｃｏＲＩ −）１ｉｎｄｍフラ
グメントを、サブクローニングを行うことにより、ｐｉ
ＱＨＥを作成した。
（ａ）ｐｉＰＨＨの作成
ｐｉＱ ８ＨＥの謹Ｉ−…ｄｍ消化後、その部分にｐｌ
Ｎ −ｍｏｍｐＡＩよりＩｐＰプロモーター及びｏ＋＊
ｐＡ遺伝子な含む５ｅａｌ −Ｈｉｎｄｍフラグメント
を挿入しｐｉＰＨＥを作成した。
Ｎ −ｍｏｍｐＡＩよりＩｐＰプロモーター及びｏ＋＊
ｐＡ遺伝子な含む５ｅａｌ −Ｈｉｎｄｍフラグメント
を挿入しｐｉＰＨＥを作成した。
上記の方法で作成したｐｉＰＨＥは、シグナルペプチド
を有するエクオリン蛋白を生産することができる０図１
−ｂに、シグナルペプチドとエクオリン遺伝子の構造示
す。
を有するエクオリン蛋白を生産することができる０図１
−ｂに、シグナルペプチドとエクオリン遺伝子の構造示
す。
実施例２：大腸菌を用いてのエクオリンの生産方法
前述の発現分泌ベクターにクローニングして作成したプ
ラスミドｐ １Ｐ）ＩＥを３．■１（ＪＡ２２１）株に
トランスフォーメイションを行いエクオリン活性を有す
る蛋白を生産させた。
ラスミドｐ １Ｐ）ＩＥを３．■１（ＪＡ２２１）株に
トランスフォーメイションを行いエクオリン活性を有す
る蛋白を生産させた。
すなわち、１００層８／諺文度のアンビミリンを含むＬ
Ｂｂｒｏｔｈ １０ｍ文に１／１００ ｉ１２時間培
養の上記菌体（プラスミドｐｉＰＨＥを含む）を添加後
３７℃２時間培養し、該培養液に発現誘導試薬ＩＰＴＧ
（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−β−ｔｈｉｏｇａｌｏｉｔｏｐ
ｙｒａｎｏｓｉｏｌｅ）を最絆濃度１ｍＭになるよう添
加し、さらに３７℃で４時間培養した。
Ｂｂｒｏｔｈ １０ｍ文に１／１００ ｉ１２時間培
養の上記菌体（プラスミドｐｉＰＨＥを含む）を添加後
３７℃２時間培養し、該培養液に発現誘導試薬ＩＰＴＧ
（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−β−ｔｈｉｏｇａｌｏｉｔｏｐ
ｙｒａｎｏｓｉｏｌｅ）を最絆濃度１ｍＭになるよう添
加し、さらに３７℃で４時間培養した。
以上のようにして得られた培養物を５００Ｏｒｐｍで１
０分間（Ｈ４ｔａｃｈｉ ＲＰ２００−ター）遠心集菌
後、Ｍ８培地で洗浄する。
０分間（Ｈ４ｔａｃｈｉ ＲＰ２００−ター）遠心集菌
後、Ｍ８培地で洗浄する。
そしてＮｅｉ らの方法（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｌ
ｌ、 ２４０巻３６８５−３Ｈ２（１ｆｌｌＥｉ５）
）に従って、菌体からスフェロプラストを作成した。す
なわち、冷０．０３Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ８，１
）で２度洗浄後、２０％５ｕｃｒａｓｅ−０，０３ＭＴ
ｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ８，１）、１ｍＭＥＤＴＡを含む
溶液１０ｍ１を加え、１０分間ゆっくりと振とう後１３
，００Ｏｒｐｍで１０分間遠心後、沈殿に冷水１０膳文
を加え１０分間ゆっくり振とう後、同様に遠心後沈殿に
スフェロプラストが得られる。このものに、１．５＋ｓ
文のＴｒｉｓ−ＨＣＩｐ）ｌ ７．８．１０ｍＭＥＤＴ
Ａにとかしスフェロプラストは超音波処理で破壊し、ア
クアリンの酵素活性を測定した。
ｌ、 ２４０巻３６８５−３Ｈ２（１ｆｌｌＥｉ５）
）に従って、菌体からスフェロプラストを作成した。す
なわち、冷０．０３Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ８，１
）で２度洗浄後、２０％５ｕｃｒａｓｅ−０，０３ＭＴ
ｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐＨ８，１）、１ｍＭＥＤＴＡを含む
溶液１０ｍ１を加え、１０分間ゆっくりと振とう後１３
，００Ｏｒｐｍで１０分間遠心後、沈殿に冷水１０膳文
を加え１０分間ゆっくり振とう後、同様に遠心後沈殿に
スフェロプラストが得られる。このものに、１．５＋ｓ
文のＴｒｉｓ−ＨＣＩｐ）ｌ ７．８．１０ｍＭＥＤＴ
Ａにとかしスフェロプラストは超音波処理で破壊し、ア
クアリンの酵素活性を測定した。
その結果を表１に示す、明らかに、菌体のスフェロプラ
スト以外（処理菌体上清）にその活性の９５％以上が検
出され、エクオリンを菌体外にて産生することが可能と
なった。
スト以外（処理菌体上清）にその活性の９５％以上が検
出され、エクオリンを菌体外にて産生することが可能と
なった。
（表１） 酵、素話性の測定
註０表で、ｒ、１．ｕ、は相対発光値であり、１ ｒ、
ｌｕ、＝ １．９Ｘ １０３ベクトルに相当する。
ｌｕ、＝ １．９Ｘ １０３ベクトルに相当する。
測定はラボサイエンス社のルミノフォトメーター（ＴＯ
４０００）を用い、基質セレンテラジン０．２ｎｇ。
４０００）を用い、基質セレンテラジン０．２ｎｇ。
５鉢文の２−メルカプトエタノールを酵素粗抽出液（１
００ｇＪｌ）に添加し、３０ｍＭ ＣａＣｌ２を １０
０ｐｕ注入し、測定した。
００ｇＪｌ）に添加し、３０ｍＭ ＣａＣｌ２を １０
０ｐｕ注入し、測定した。
図１ （ａ）は、本発明の菌体外分泌ベクターへのエク
オリン遺伝子の挿入方法を説ＩＩ したちのである。 同図において、 ＩｐＰＰ：リボプロティンのプロモータ一部分１ａｃＰ
ｏ：β−ガラクトミダーゼのプロモータ一部分とオペレ
ータ一部分 ７ ：ｏｍｐＡのシグナルペプチドの遺伝子部分を示
す。 図１（ｂ）は、本発明に係るシグナルペプチドとエクオ
リン遺伝子の構造を説明したものである。 同図において、 はシグナルペプチド（２１アミノ酸）を、以上 図１
オリン遺伝子の挿入方法を説ＩＩ したちのである。 同図において、 ＩｐＰＰ：リボプロティンのプロモータ一部分１ａｃＰ
ｏ：β−ガラクトミダーゼのプロモータ一部分とオペレ
ータ一部分 ７ ：ｏｍｐＡのシグナルペプチドの遺伝子部分を示
す。 図１（ｂ）は、本発明に係るシグナルペプチドとエクオ
リン遺伝子の構造を説明したものである。 同図において、 はシグナルペプチド（２１アミノ酸）を、以上 図１
Claims (3)
- （１）クラゲ発光蛋白エクオリンの生合成を特定する遺
伝子（ｐＡＱ４４０）を用いて菌体外分泌ベクターにク
ローニングして得られたプラスミドを大腸菌にトランス
ホーメートすることによりエクオリン活性を有する蛋白
質を該大腸菌の菌体外に分泌させることを特徴とする大
腸菌の菌体外分泌ベクターを用いる発光蛋白エクオリン
の製造法。 - （２）大腸菌のリボ蛋白（ｌｐｐ）のプロモーターの下
流に大腸菌の外膜蛋白Ａ（ｏｍｐＡ）の分泌の為のシグ
ナルペプチドをコードする遺伝子及びエクオリン遺伝子
（ｐＡＱ４４０）を接続したプラスミドを用いる特許請
求の範囲第（１）項に記載の製造法。 - （３）シグナルペプチドをコードする遺伝子として大腸
菌のβ−ラクターゼのシグナルペプチドを有する発現ベ
クターを用いる特許請求の範囲 第（２）項に記載の方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24909886A JPS63102695A (ja) | 1986-10-20 | 1986-10-20 | 大腸菌の菌体外分泌ベクタ−を用いる発光蛋白エクオリンの製造法 |
| GB8724178A GB2197652B (en) | 1986-10-20 | 1987-10-15 | Extracellular secretion of aequorin in escherichia coli |
| DE19873735380 DE3735380C2 (de) | 1986-10-20 | 1987-10-19 | Verfahren zur Herstellung von Photoprotein Äquorin unter Verwendung eines Expressionsvektors, der an der Außenseite des Bakterienkörpers von Escherichia coli abgeschieden werden soll |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24909886A JPS63102695A (ja) | 1986-10-20 | 1986-10-20 | 大腸菌の菌体外分泌ベクタ−を用いる発光蛋白エクオリンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63102695A true JPS63102695A (ja) | 1988-05-07 |
Family
ID=17187938
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24909886A Pending JPS63102695A (ja) | 1986-10-20 | 1986-10-20 | 大腸菌の菌体外分泌ベクタ−を用いる発光蛋白エクオリンの製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63102695A (ja) |
| DE (1) | DE3735380C2 (ja) |
| GB (1) | GB2197652B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01132397A (ja) * | 1987-11-18 | 1989-05-24 | Chisso Corp | アポエクオリンの製造法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0376580A (ja) * | 1989-08-17 | 1991-04-02 | Japan Tobacco Inc | 大腸菌発現ベクターとそれを利用した抗ウイルス性タンパク質の製造方法 |
| CN107904254B (zh) * | 2017-11-28 | 2021-11-23 | 大连大学 | 一种应用大肠杆菌胞外生产n-糖基化重组蛋白的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61135586A (ja) * | 1984-08-24 | 1986-06-23 | Chisso Corp | 発光蛋白アクアリン遺伝子を有するプラスミドおよび該発光蛋白の生合成法 |
| JPS61224989A (ja) * | 1984-12-31 | 1986-10-06 | ユニヴア−シテイ・オブ・ジヨ−ジア・リサ−チ・フアウンデイシヨン・インコ−ポレイテツド | アポエクオリンを発現しうる組換えｄｎａベクタ− |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59176125A (ja) * | 1983-03-26 | 1984-10-05 | Matsushita Electric Works Ltd | 絶縁トロリ−の製法 |
| JP2551746B2 (ja) * | 1983-07-19 | 1996-11-06 | サントリー株式会社 | 改良プラスミドベクタ−およびその利用 |
| DE3484950D1 (de) * | 1983-08-23 | 1991-09-26 | Mitsubishi Chem Ind | Plasmidvektoren. |
| JPS6439990A (en) * | 1987-08-05 | 1989-02-10 | Chisso Corp | Fused gene by bonding aequorin gene to functional gene |
-
1986
- 1986-10-20 JP JP24909886A patent/JPS63102695A/ja active Pending
-
1987
- 1987-10-15 GB GB8724178A patent/GB2197652B/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-10-19 DE DE19873735380 patent/DE3735380C2/de not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61135586A (ja) * | 1984-08-24 | 1986-06-23 | Chisso Corp | 発光蛋白アクアリン遺伝子を有するプラスミドおよび該発光蛋白の生合成法 |
| JPS61224989A (ja) * | 1984-12-31 | 1986-10-06 | ユニヴア−シテイ・オブ・ジヨ−ジア・リサ−チ・フアウンデイシヨン・インコ−ポレイテツド | アポエクオリンを発現しうる組換えｄｎａベクタ− |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01132397A (ja) * | 1987-11-18 | 1989-05-24 | Chisso Corp | アポエクオリンの製造法 |
| JP2592623B2 (ja) * | 1987-11-18 | 1997-03-19 | チッソ株式会社 | アポエクオリンの製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2197652B (en) | 1990-08-29 |
| DE3735380C2 (de) | 1994-03-10 |
| GB8724178D0 (en) | 1987-11-18 |
| GB2197652A (en) | 1988-05-25 |
| DE3735380A1 (de) | 1988-04-21 |
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