JPS62292796A - 生物学的に不活性な形態のものから活性タンパク質を取得する方法 - Google Patents
生物学的に不活性な形態のものから活性タンパク質を取得する方法Info
- Publication number
- JPS62292796A JPS62292796A JP62138325A JP13832587A JPS62292796A JP S62292796 A JPS62292796 A JP S62292796A JP 62138325 A JP62138325 A JP 62138325A JP 13832587 A JP13832587 A JP 13832587A JP S62292796 A JPS62292796 A JP S62292796A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- biologically active
- solution
- molecular sieve
- pbs
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 44
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 10
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 3
- 238000007664 blowing Methods 0.000 claims description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims 3
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims 1
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 claims 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 abstract description 12
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 12
- 230000003297 denaturating effect Effects 0.000 abstract 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 abstract 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical class NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 9
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 6
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 6
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 5
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 5
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 238000000184 acid digestion Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 102200012578 rs111033654 Human genes 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SZIFAVKTNFCBPC-UHFFFAOYSA-N 2-chloroethanol Chemical compound OCCCl SZIFAVKTNFCBPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-IMJSIDKUSA-N L-1,4-dithiothreitol Chemical compound SC[C@H](O)[C@@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 1
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 150000002357 guanidines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000010405 reoxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
- C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
- C07K1/113—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides without change of the primary structure
- C07K1/1136—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides without change of the primary structure by reversible modification of the secondary, tertiary or quarternary structure, e.g. using denaturating or stabilising agents
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、タン、６り質を生物学的に不活性な立体配座
（コンホメーション）から生物学的に活性な形に転化す
る方法に関する。変性された天然タンパク質の場合には
、この方法を再天然化（リナチュレーション）と呼ぶこ
ともできょう。
（コンホメーション）から生物学的に活性な形に転化す
る方法に関する。変性された天然タンパク質の場合には
、この方法を再天然化（リナチュレーション）と呼ぶこ
ともできょう。
ｐンＡｙ實調製物に適用される精製および安定化方法は
使用タンパク質の部分変性を招（ことがある。従来は特
に１済的配慮から、変性タンパク質は分醜し喝采した方
が好ましいとされていた。原核生物での遺伝子操作によ
り調製されるタンパク質は大体生物学的に不活性な形に
ある。
使用タンパク質の部分変性を招（ことがある。従来は特
に１済的配慮から、変性タンパク質は分醜し喝采した方
が好ましいとされていた。原核生物での遺伝子操作によ
り調製されるタンパク質は大体生物学的に不活性な形に
ある。
「天然」タンパク質、換言すれば、正しい空間構造と天
然タンパク質の生物学的活性を有するものの収率を高め
るには、まずポリペプチド鎖の折りたたまれた状態ヲは
ぐして（ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ）ランダム・コイルとし、
そして存在する不正確なジスルフィド僑をすべて還元す
る必要がある。
然タンパク質の生物学的活性を有するものの収率を高め
るには、まずポリペプチド鎖の折りたたまれた状態ヲは
ぐして（ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ）ランダム・コイルとし、
そして存在する不正確なジスルフィド僑をすべて還元す
る必要がある。
これは通常、適切な場合にはジチオスレイトール（ＤＴ
Ｔ）などの還元剤を添加した少くとも４モル／ｌの塩酸
グアニジン溶液または少くとも６モル／ｌの尿素溶液中
でインキュベーションすることによって行われる。次い
で、正しいタンパク質構造の形成は、今日まで「生理学
的」緩衝溶液に対する透析または希釈（少くとも１：４
０）によってなされてきている。
Ｔ）などの還元剤を添加した少くとも４モル／ｌの塩酸
グアニジン溶液または少くとも６モル／ｌの尿素溶液中
でインキュベーションすることによって行われる。次い
で、正しいタンパク質構造の形成は、今日まで「生理学
的」緩衝溶液に対する透析または希釈（少くとも１：４
０）によってなされてきている。
いずれの方法も工業的に請求はとんど使用に耐兄ないも
のである。初期に大容量の希釈を行った後に再濃縮する
ことは時間がかかり、煩雑でありまたコスト高となる。
のである。初期に大容量の希釈を行った後に再濃縮する
ことは時間がかかり、煩雑でありまたコスト高となる。
同様にこのことは大容量の透析にしても然りである。更
に、変性剤をゆっくりと除去すると再活性化の歩留りが
相当低下してし１う。何故なら変性剤の中間濃度範囲に
おいては到反応例えば凝集の方が優先的に生じるからで
ある。
に、変性剤をゆっくりと除去すると再活性化の歩留りが
相当低下してし１う。何故なら変性剤の中間濃度範囲に
おいては到反応例えば凝集の方が優先的に生じるからで
ある。
篤くべきことに変性剤とタンパク質を含有する１ｇ液か
ら変性剤を、該溶液を、分子ふるい特注を有しそしてタ
ンパク質がその中で生物学的に活性な形をとる媒質を含
む材料であって、変性剤は貫入できるがメン／ξり買は
できないように選択された孔径な有するものに通して除
去することによって、従来技術による方法の欠点を回避
できることを見出した。
ら変性剤を、該溶液を、分子ふるい特注を有しそしてタ
ンパク質がその中で生物学的に活性な形をとる媒質を含
む材料であって、変性剤は貫入できるがメン／ξり買は
できないように選択された孔径な有するものに通して除
去することによって、従来技術による方法の欠点を回避
できることを見出した。
すなわち、本発明はタンパク質を変性剤の添加とともに
溶解することによってランダム・コイル形態に変えそし
てその溶液を、分子ふるい特注を有しまたそのタンパク
質がその中で生物学的活性を有する空間形態をとること
ができる液体媒質を含有する材料であって変性剤の分子
は貫入できるがタンパク賀分子はできないように選択さ
れたものに通すことを特徴とする、生物学的活性を有す
る空間形態のタンパク質を生物学的に不活性な空間形態
のものから調製する方法に関する。
溶解することによってランダム・コイル形態に変えそし
てその溶液を、分子ふるい特注を有しまたそのタンパク
質がその中で生物学的活性を有する空間形態をとること
ができる液体媒質を含有する材料であって変性剤の分子
は貫入できるがタンパク賀分子はできないように選択さ
れたものに通すことを特徴とする、生物学的活性を有す
る空間形態のタンパク質を生物学的に不活性な空間形態
のものから調製する方法に関する。
分子ふ°るいの可能な設置場所としては例えばカラムま
たは遠心分離用バスケットが挙げられる。
たは遠心分離用バスケットが挙げられる。
一旦分子ふるいをタンパク質がその中で生物学的に活性
なル態をとることができる媒質で平衡させた後は、分子
ふるいの孔内に位置しない部分の媒質［外容積（ｅｘｔ
ｅｒｎａｌ ｖｏｌｕｍｅ） Ｊを除去する方が好まし
い。これは遠心分離により迅速に行うことができるが、
例えば気体を吹き込んで除去するかまたは真空を印加す
ることにより吸引することもできる。
なル態をとることができる媒質で平衡させた後は、分子
ふるいの孔内に位置しない部分の媒質［外容積（ｅｘｔ
ｅｒｎａｌ ｖｏｌｕｍｅ） Ｊを除去する方が好まし
い。これは遠心分離により迅速に行うことができるが、
例えば気体を吹き込んで除去するかまたは真空を印加す
ることにより吸引することもできる。
「折りたたみ状態からほぐされた（ｕｎｆｏｌｄｅｄ）
ｊタンパク質および変性剤を含有する溶液を次に分子
ふるいに適用する。溶液の分子ふるい材料通過は重力を
超える力によって行われるべきである。このためには遠
心分離が好ましいが、気体圧または真空によっても行う
ことができる。
ｊタンパク質および変性剤を含有する溶液を次に分子
ふるいに適用する。溶液の分子ふるい材料通過は重力を
超える力によって行われるべきである。このためには遠
心分離が好ましいが、気体圧または真空によっても行う
ことができる。
遠心分離を採用した場合の操作手順は公知のバスケット
またはスクリーン遠心分離法に実質的に相当するもので
ある。
またはスクリーン遠心分離法に実質的に相当するもので
ある。
このタイプの分子ふるいは、ゲル濾過について知られて
いるものであって変性剤に対し化学的抵抗性がある材料
、例えばＲ３ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５、ＤＧ ６Ｐ
（ＲＢｉｏ Ｒａｄ、米国）または調節された多孔質ガ
ラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ）
などであってよい。孔径は、変性剤はマトリクス内に貫
入できるがタンパク質はできないように選択される。排
除限界は通常６，０００〜１０．０００のＭ工（Ｍｍ＝
分子量）であろう。
いるものであって変性剤に対し化学的抵抗性がある材料
、例えばＲ３ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５、ＤＧ ６Ｐ
（ＲＢｉｏ Ｒａｄ、米国）または調節された多孔質ガ
ラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ）
などであってよい。孔径は、変性剤はマトリクス内に貫
入できるがタンパク質はできないように選択される。排
除限界は通常６，０００〜１０．０００のＭ工（Ｍｍ＝
分子量）であろう。
それを、タンパク質がその中で活性な形をとる溶液、好
ましくは緩衝液で平衡させ、そして例えば（好ましくは
遠心分離可能な）カラムに、あるいは遠心分離用バスケ
ットに移す。好ましくは、マトリクスの孔内に位置しな
い（「内容積（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｖｏｌｕｍｅ）中」
ではない）溶液を約３００ ＮＬＯＯＯＸｒで遠心分離
することにより除去する。次に、変性剤を含有するタン
パク實溶液を適用する（ゲル容量の６０％よりも小さい
容量）。変性溶液の分子は内容積中の緩衝剤を置換でき
るが、（分子量（Ｓ、０００以上の）タンパク質は外容
積中に残留する。改めて遠心分離する（２分間、６００
〜１．０００１’）ことによって、タンパク質な収集容
器に定量的に回転収納させることができる。これは公知
の脱塩方法に従ってバスケット遠心分離器で遠心分離す
ることによって行うことができる。以後、変性剤は全く
検出できない。得られる溶液の容量は適用された溶液の
容量に相当する。
ましくは緩衝液で平衡させ、そして例えば（好ましくは
遠心分離可能な）カラムに、あるいは遠心分離用バスケ
ットに移す。好ましくは、マトリクスの孔内に位置しな
い（「内容積（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｖｏｌｕｍｅ）中」
ではない）溶液を約３００ ＮＬＯＯＯＸｒで遠心分離
することにより除去する。次に、変性剤を含有するタン
パク實溶液を適用する（ゲル容量の６０％よりも小さい
容量）。変性溶液の分子は内容積中の緩衝剤を置換でき
るが、（分子量（Ｓ、０００以上の）タンパク質は外容
積中に残留する。改めて遠心分離する（２分間、６００
〜１．０００１’）ことによって、タンパク質な収集容
器に定量的に回転収納させることができる。これは公知
の脱塩方法に従ってバスケット遠心分離器で遠心分離す
ることによって行うことができる。以後、変性剤は全く
検出できない。得られる溶液の容量は適用された溶液の
容量に相当する。
外容槓中の平衡媒質の除去およびタン／ξり質溶液に含
まれる変性剤による内容積中の平衡媒質の置換のスピー
ドアップ化は気体圧または真空によって行うこともでき
る。
まれる変性剤による内容積中の平衡媒質の置換のスピー
ドアップ化は気体圧または真空によって行うこともでき
る。
本発明の方法により、大故の変性媒質からであってもタ
ンパク質がその中で活性形態をとる媒質中にそのタンパ
ク質を迅速に、定量的に、しかも希釈を伴わずに移し、
セして高収率で活性タンノξり質を得ることができる。
ンパク質がその中で活性形態をとる媒質中にそのタンパ
ク質を迅速に、定量的に、しかも希釈を伴わずに移し、
セして高収率で活性タンノξり質を得ることができる。
前述の方法により、それ以外の方法では利用できないタ
ンパク質材料を商業的に利用可能とすることができる。
ンパク質材料を商業的に利用可能とすることができる。
この方法は簡潔さ、迅速さおよび再境註の良さの点で優
れている。入手可能な慣用の装置および材料を用いてそ
れを行うことができる。使用後は、ゲル材料を再生する
ことができ、また例えば塩酸グアニジンを回収すること
ができる。
れている。入手可能な慣用の装置および材料を用いてそ
れを行うことができる。使用後は、ゲル材料を再生する
ことができ、また例えば塩酸グアニジンを回収すること
ができる。
タンパク質濃度は変化せずに保たれる。
変性されたタンパク質とは、特定的には、（例えば感染
性のものを失活させるための）熱処理の後の、酸処理例
えば遺伝子操作によって得られた融合タンパク質の酸分
解の後の、（例えば精製、抽出または可溶化の際の、お
よび感染性のものを失活させる際の）構造破壊剤による
処理の後の、あるいは不正確な立体配座および／または
不正確なジスルフィド橘の形成を招く遺伝子操作による
調製の後の非天然状態のタンパク質である。
性のものを失活させるための）熱処理の後の、酸処理例
えば遺伝子操作によって得られた融合タンパク質の酸分
解の後の、（例えば精製、抽出または可溶化の際の、お
よび感染性のものを失活させる際の）構造破壊剤による
処理の後の、あるいは不正確な立体配座および／または
不正確なジスルフィド橘の形成を招く遺伝子操作による
調製の後の非天然状態のタンパク質である。
タンパク質の折りたたみ状態を完全にほぐすのに適した
変性剤の例は、グアニジウム塩、尿素またはその他のカ
オトロピック（ｃｈａｏｔｒｏｐｉｃ ）分子の高モル
濃度溶液であり、適切な場合には還元剤例えば５０〜１
５０ミリモル／ｌのジチオスレイトール（ＤＴＴ ）を
共存させる。通常濃度の例はグアニジン塩については４
〜７、尿素については６〜８、イソチオシアネートにつ
いては６〜８モル／ｌ、そして２−クロロエタノールに
ついては約４００ｔｐｔ／ｌである。
変性剤の例は、グアニジウム塩、尿素またはその他のカ
オトロピック（ｃｈａｏｔｒｏｐｉｃ ）分子の高モル
濃度溶液であり、適切な場合には還元剤例えば５０〜１
５０ミリモル／ｌのジチオスレイトール（ＤＴＴ ）を
共存させる。通常濃度の例はグアニジン塩については４
〜７、尿素については６〜８、イソチオシアネートにつ
いては６〜８モル／ｌ、そして２−クロロエタノールに
ついては約４００ｔｐｔ／ｌである。
生物学的に活性な（天然）荷造の顕現は、天然構造の方
を好む緩衝液への迅速な移動によってもたらされる。
を好む緩衝液への迅速な移動によってもたらされる。
移動の迅速性は高収率にとって重要である。
前述の方法においてその時間は秒ないし分のオーダーの
範囲である。
範囲である。
適当な活性化緩衝剤例は、ホスフェートまたはトリス緩
衝剤、またはタンパク質の最大活性または溶解度の田に
調節されるｒｃ）ｏｏｄ ｂｕｆｆｅｒｓｊ（Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、（１９６６）１５，４６７〜４７７）として卸
られる緩衝剤である。
衝剤、またはタンパク質の最大活性または溶解度の田に
調節されるｒｃ）ｏｏｄ ｂｕｆｆｅｒｓｊ（Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、（１９６６）１５，４６７〜４７７）として卸
られる緩衝剤である。
変性作用分子は、好ましくは遠心分離によって、迅速か
つ定量的に除去される。
つ定量的に除去される。
メン、＜り質がその中で生物学的に活性な立体配座なと
る媒質は通常緩衝剤であり、そしてそのタンパク質の安
定性にとって有利な組成を有す６（例、ｔばホスフェー
ト、サルフェート、クエン酸塩を含む）。それの含むこ
とのできる他の添加剤例は、天然構造を安定させるため
の糖、ペプチドまたはタンパク質、あるいは付層や凝集
を防止するためのおよび／−または溶媒化するための洗
剤例えば”Ｔｗｅｅｎ ２０またはＮＰ４０、および／
または正しいジスルフィド橋の形成に最適なレドックス
電位を設定するためのＳＨ試薬またはレドックス系、例
えばＤＴＴまたはグルタチオン／グルメチオンジスルフ
ィｌ’ （ＧＳＨ／Ｇ５５Ｃ） ） ７にどである。
る媒質は通常緩衝剤であり、そしてそのタンパク質の安
定性にとって有利な組成を有す６（例、ｔばホスフェー
ト、サルフェート、クエン酸塩を含む）。それの含むこ
とのできる他の添加剤例は、天然構造を安定させるため
の糖、ペプチドまたはタンパク質、あるいは付層や凝集
を防止するためのおよび／−または溶媒化するための洗
剤例えば”Ｔｗｅｅｎ ２０またはＮＰ４０、および／
または正しいジスルフィド橋の形成に最適なレドックス
電位を設定するためのＳＨ試薬またはレドックス系、例
えばＤＴＴまたはグルタチオン／グルメチオンジスルフ
ィｌ’ （ＧＳＨ／Ｇ５５Ｃ） ） ７にどである。
杏現性の良いレドックス条件は、緩衝剤を脱気しそして
窒素で飽和させることによって保証される。
窒素で飽和させることによって保証される。
本発明においてバスケット遠心分離法とは、（緩衝剤Ａ
甲の）任意の所望の巨大分子を、緩衝剤Ｂで平衡させそ
して所望により予備遠心分離を施しであるゲル濾過媒質
を通して遠心分−により緩衝剤Ｂ中に移す任意の装置を
用いた、あらゆる客語範囲のあらゆる遠心分離法を意味
する。
甲の）任意の所望の巨大分子を、緩衝剤Ｂで平衡させそ
して所望により予備遠心分離を施しであるゲル濾過媒質
を通して遠心分−により緩衝剤Ｂ中に移す任意の装置を
用いた、あらゆる客語範囲のあらゆる遠心分離法を意味
する。
次の実施例は本発明の例示である。
実施例 １
グアニジン中での活性マウス０Ｍコロニー刺激因子（Ｍ
ｕ ＧＭ−Ｃ８Ｆ、酵母からの組換体）の変性と再活性
化 ５ａ鵠の相異なるグリコジル化ＬＩＲＡ−Ｅ）のＧＭ−
Ｃ３Ｆの５種類の溶液の各々についての各１μ？より成
る６検体をホスフェート緩衝食塩水（ｐＢｓ）（ｐＨ１
２）中の６モル／ｌグアニジン・ＨＣｔ４０μｔにとり
、その浴液ｔ６０分間呈温に保った。
ｕ ＧＭ−Ｃ８Ｆ、酵母からの組換体）の変性と再活性
化 ５ａ鵠の相異なるグリコジル化ＬＩＲＡ−Ｅ）のＧＭ−
Ｃ３Ｆの５種類の溶液の各々についての各１μ？より成
る６検体をホスフェート緩衝食塩水（ｐＢｓ）（ｐＨ１
２）中の６モル／ｌグアニジン・ＨＣｔ４０μｔにとり
、その浴液ｔ６０分間呈温に保った。
Ｒ８ｅｐｈａｄｅｘ Ｃ）−２５を０．５−容量の１５
本のチューブに元項し、そして各５本より成る群を、添
加剤を言まないかまたは１ミリモル／ ｔ ＤＴＴもし
くは０． Ｄ ２ ｒｄ／ １００ ｍｅ ＲＴｗｅｅ
ｎ ２０を含有する脱気され諸素で飽和されたＰＢＳで
平衡させた。外容積中の液を７００Ｘｒ （５分間）で
回転除去した。各々について、５種類のＣ）Ｍ−Ｃ８Ｆ
溶液（Ａ〜Ｅ）のうちの一つｆｆ：ＰＢＳ ’ＥたはＰ
ＢＳ ＋ ＤＴＴ−またはＴｗｅｅｎで平衡させたこれ
ら５本のチューブのうちの１本を適用した。
本のチューブに元項し、そして各５本より成る群を、添
加剤を言まないかまたは１ミリモル／ ｔ ＤＴＴもし
くは０． Ｄ ２ ｒｄ／ １００ ｍｅ ＲＴｗｅｅ
ｎ ２０を含有する脱気され諸素で飽和されたＰＢＳで
平衡させた。外容積中の液を７００Ｘｒ （５分間）で
回転除去した。各々について、５種類のＣ）Ｍ−Ｃ８Ｆ
溶液（Ａ〜Ｅ）のうちの一つｆｆ：ＰＢＳ ’ＥたはＰ
ＢＳ ＋ ＤＴＴ−またはＴｗｅｅｎで平衡させたこれ
ら５本のチューブのうちの１本を適用した。
１５１重類の異なる溶液を１５本のチューブに適用した
後、直ちにそれらを７００１’で２分間遠心分離し、そ
して各４０Ａ？のグアニジン不含ＧＭ−Ｃ３Ｆ調裂物よ
り成る１５検体を得た。
後、直ちにそれらを７００１’で２分間遠心分離し、そ
して各４０Ａ？のグアニジン不含ＧＭ−Ｃ３Ｆ調裂物よ
り成る１５検体を得た。
１５検体をすべて室温で窒素下に一夜保存し、次いでそ
の活性を骨髄テストまたはＧＭ−Ｃ３Ｆ依存セルライン
で測定した。
の活性を骨髄テストまたはＧＭ−Ｃ３Ｆ依存セルライン
で測定した。
グアニジン処理検体の活性は活性化緩衝剤に依存し、初
期活性（約２Ｘ１０７単位（Ｕ）／肩９）の１００％に
まで達した。ＳＤＳ ’に気泳動およびウェスターン・
プロット法により測定されたタンパク買収率は実實的に
定量的であった。
期活性（約２Ｘ１０７単位（Ｕ）／肩９）の１００％に
まで達した。ＳＤＳ ’に気泳動およびウェスターン・
プロット法により測定されたタンパク買収率は実實的に
定量的であった。
結果は第１図に示すとおりである。この図にオイて、各
々について、１は変性剤で処理されたり再活性化された
りしていないＧＭ−Ｃ８Ｆの溶液の、２はＰＢＳ中、６
はＰＢＳおよびＲＴＷｅｅｎ中、そして４はＰＢＳおよ
びＤＴＴ中で再活性化されたＧＭ−Ｃ３Ｆの活性につい
てのカラムを示している。
々について、１は変性剤で処理されたり再活性化された
りしていないＧＭ−Ｃ８Ｆの溶液の、２はＰＢＳ中、６
はＰＢＳおよびＲＴＷｅｅｎ中、そして４はＰＢＳおよ
びＤＴＴ中で再活性化されたＧＭ−Ｃ３Ｆの活性につい
てのカラムを示している。
Ａ−Ｅは各々、異なるグリコジル度を有する５糧類のＧ
Ｍ−Ｃ８Ｆ調製物のうちの一つについての一群の活性を
示している６ 実施例 ２ 凝集した組換え体ヒ） （）Ｍ−Ｃ’；Ｆの６モル／ｌ
グアニジン中での折りたたみ状態のほぐしおよび活性化 大腸菌（Ｅ、 ｃｏｌｉ）からの融合タンパク實の酸分
解により得られた凝集した凍結乾燥ヒトＧＭ−Ｃ８Ｆ（
Ａオ！びＢ ） ０） ２ ａ類ＣＤ ＦＡ Ｉ！ ’
Ｊを各々ＰＢＳ中の６モル／１グアニジン・ＨＣｌ Ｖ
Ｃ溶％し、そして室温で６０分間インキュベートした。
Ｍ−Ｃ８Ｆ調製物のうちの一つについての一群の活性を
示している６ 実施例 ２ 凝集した組換え体ヒ） （）Ｍ−Ｃ’；Ｆの６モル／ｌ
グアニジン中での折りたたみ状態のほぐしおよび活性化 大腸菌（Ｅ、 ｃｏｌｉ）からの融合タンパク實の酸分
解により得られた凝集した凍結乾燥ヒトＧＭ−Ｃ８Ｆ（
Ａオ！びＢ ） ０） ２ ａ類ＣＤ ＦＡ Ｉ！ ’
Ｊを各々ＰＢＳ中の６モル／１グアニジン・ＨＣｌ Ｖ
Ｃ溶％し、そして室温で６０分間インキュベートした。
全タンパク質に対するＣ８Ｆ寄与分は、約２０マイクロ
グラム／１００マイクログラムであつに。
グラム／１００マイクログラムであつに。
以後の処理は実施例１と同様に行った。
結果は第２図に示すとおりである。
グアニジン処理検体の活性は、初期活性の１６０倍まで
にも及ぶ活性に達した。最大比活性は２Ｘ１０７単位／
ｍｇであると測定された。使用再活性化緩衝剤は、ＰＢ
Ｓ （カラム轟１）、ＰＢＳ＋００２％ＲＴｗｅｅｎ
２０ （カラムＡ２）およびＰＢＳ ＋０．１ミリモル
／１ジチオスレイトール（カラムノにろ）でおった。
にも及ぶ活性に達した。最大比活性は２Ｘ１０７単位／
ｍｇであると測定された。使用再活性化緩衝剤は、ＰＢ
Ｓ （カラム轟１）、ＰＢＳ＋００２％ＲＴｗｅｅｎ
２０ （カラムＡ２）およびＰＢＳ ＋０．１ミリモル
／１ジチオスレイトール（カラムノにろ）でおった。
実施例 ３
凝集した不活性組換え体ヒトＧＭ−Ｃ８Ｆの、８モル／
Ｌ尿素中での折りたたみ状態のほぐしおよび活性化 大腸菌からの凝集した凍結乾燥ヒトＧＭ−Ｃ８Ｆ（酸分
解後の６検体なＡ、ＢおよびＣと呼び、そして分解して
いない１検体なりと呼ぶ。Ｃ３Ｆ含量：約２０μ？／１
００μ７全タンパク質）をトリス・ＨＣｌ （ｍ ８．
０ ）中の８モル／を尿素に溶解しくタンパク員濃度１
１ｇ／ＩＩ／、各検体の６童０．５ｍ／）、そして室温
で６０分間インキユヘートシた。以後の処理は実施例１
と同様にして行った。使用再活性化緩衝剤はＰＢＳ （
カラムＡＩ ）−！たはＰＢＳ＋０．０２％Ｔｗｅｅｎ
（カラム４６２）、ＰＢＳ ＋ ｒ低」“ＧＳＨ（カ
ラム屋４）、または酸分解後のＰＢＳ ＋「高Ｊ” Ｇ
ＳＨ（カラム＆３）であった。すべての例において、最
大比活性に近いあるいはそれと同じ比活性が完全に不活
性な材料から得られた（第３図）。
Ｌ尿素中での折りたたみ状態のほぐしおよび活性化 大腸菌からの凝集した凍結乾燥ヒトＧＭ−Ｃ８Ｆ（酸分
解後の６検体なＡ、ＢおよびＣと呼び、そして分解して
いない１検体なりと呼ぶ。Ｃ３Ｆ含量：約２０μ？／１
００μ７全タンパク質）をトリス・ＨＣｌ （ｍ ８．
０ ）中の８モル／を尿素に溶解しくタンパク員濃度１
１ｇ／ＩＩ／、各検体の６童０．５ｍ／）、そして室温
で６０分間インキユヘートシた。以後の処理は実施例１
と同様にして行った。使用再活性化緩衝剤はＰＢＳ （
カラムＡＩ ）−！たはＰＢＳ＋０．０２％Ｔｗｅｅｎ
（カラム４６２）、ＰＢＳ ＋ ｒ低」“ＧＳＨ（カ
ラム屋４）、または酸分解後のＰＢＳ ＋「高Ｊ” Ｇ
ＳＨ（カラム＆３）であった。すべての例において、最
大比活性に近いあるいはそれと同じ比活性が完全に不活
性な材料から得られた（第３図）。
分解前の融合タンパク質も相当な生物学的活性を示して
いるＣＤ）。再活性化後の比活性は１〜２Ｘ１０７単位
／ ｒａｇであると５１１Ｊ定された。
いるＣＤ）。再活性化後の比活性は１〜２Ｘ１０７単位
／ ｒａｇであると５１１Ｊ定された。
卑 ［低ＪＧＳＨ：２５μＭ（）ＳＨ１５０μＭ Ｃ）
ＳＳＣ） （細胞外レドックス電位に相当する） ［高Ｊ ＧＳＨ： ５ｍＭ Ｃ）ＳＨ／ ０．１ ｒｒ
ｒ４ Ｇ５５Ｃ） （ｉ＃ｌＵ内しドックス電位に相当
する） 実施例 ４ 凝集した不活注組換え体ヒ）ＧＭ−Ｃ８Ｆの折りたたみ
状態のほぐしとすべてのジスルフィド橋の完全還元、お
よび実施例６と同様の生物学的活性物質とするための再
折りたたみ状態化（ｒｅｆｏｌｄ−ｉｎｇ）と再酸化 トリス・Ｈｃｚ （ｍ ８． ｏ ）中の８モル／を尿
素＋０．１５モル／１．ジチオスレイトール中で変性お
よび還元を行い、そして生物学的に活性な生成物とする
だめの折りたたみ状態化は、ＰＢＳ （カラムノｌ６１
）またはＰＢＳ＋０．１％ヒト血清アルブミン（カラム
Ａ ２ ）、ＰＢＳ＋高ＧＳＨ（カラム、（３）または
ＰＢＳ＋低ＧＳＨ（カラムＡ４）中で行った（第４図）
。
ＳＳＣ） （細胞外レドックス電位に相当する） ［高Ｊ ＧＳＨ： ５ｍＭ Ｃ）ＳＨ／ ０．１ ｒｒ
ｒ４ Ｇ５５Ｃ） （ｉ＃ｌＵ内しドックス電位に相当
する） 実施例 ４ 凝集した不活注組換え体ヒ）ＧＭ−Ｃ８Ｆの折りたたみ
状態のほぐしとすべてのジスルフィド橋の完全還元、お
よび実施例６と同様の生物学的活性物質とするための再
折りたたみ状態化（ｒｅｆｏｌｄ−ｉｎｇ）と再酸化 トリス・Ｈｃｚ （ｍ ８． ｏ ）中の８モル／を尿
素＋０．１５モル／１．ジチオスレイトール中で変性お
よび還元を行い、そして生物学的に活性な生成物とする
だめの折りたたみ状態化は、ＰＢＳ （カラムノｌ６１
）またはＰＢＳ＋０．１％ヒト血清アルブミン（カラム
Ａ ２ ）、ＰＢＳ＋高ＧＳＨ（カラム、（３）または
ＰＢＳ＋低ＧＳＨ（カラムＡ４）中で行った（第４図）
。
第１〜４図は、本発明の実施例の結果を説明する図であ
る。 特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチニンゲ外２
名 ０１０柑封活、＋’ｉ（％）
る。 特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチニンゲ外２
名 ０１０柑封活、＋’ｉ（％）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）タンパク質を変性剤の添加とともに溶解することに
よつてランダム・コイル形態に変え、そしてその溶液を
、分子ふるい特性を有しまたそのタンパク質がその中で
生物学的活性を有する空間形態をとることができる液体
媒質を含有する材料であつて変性剤の分子は貫入できる
がタンパク質はできないように選択されたものに通すこ
とを特徴とする、生物学的活性を有する空間形態のタン
パク質を生物学的に不活性な空間形態のものから調製す
る方法。 ２）分子ふるい特性を有する材料の内容積中には場所を
占めておらず、そしてタンパク質がその中で生物学的に
活性な空間形態をとることができる液体媒質部分を遠心
分離、吹込みまたは吸引により除去してからタンパク質
溶液をこの材料と接触させる特許請求の範囲第１項記載
の方法。 ３）液体通過速度を遠心分離により高める特許請求の範
囲第１項記載の方法。 ４）分子ふるい特性を有する物質がゲルろ過について知
られ、そして変性剤に対して化学的に抵抗性のある材料
である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５）分子ふるい特性を有する材料が＾ＲＳｅｐｈａｄｅ
ｘＧ−２５、＾ＲＢｉｏＲａｄ ＤＧ ６Ｐまたは調節
された多孔質ガラスである特許請求の範囲第１項記載の
方法。 ６）タンパク質がその中で生物学的に活性な形態をとる
液体媒質がそのタンパク質の活性および安定性にとつて
好ましい剤を含有する水性緩衝剤である特許請求の範囲
第１項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3618817.4 | 1986-06-04 | ||
| DE19863618817 DE3618817A1 (de) | 1986-06-04 | 1986-06-04 | Verfahren zur gewinnung aktiver proteine aus einer biologisch inaktiven form |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62292796A true JPS62292796A (ja) | 1987-12-19 |
| JP2594275B2 JP2594275B2 (ja) | 1997-03-26 |
Family
ID=6302280
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62138325A Expired - Lifetime JP2594275B2 (ja) | 1986-06-04 | 1987-06-03 | 生物学的に不活性な形態のものから活性タンパク質を取得する方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4965344A (ja) |
| EP (1) | EP0248362B1 (ja) |
| JP (1) | JP2594275B2 (ja) |
| AT (1) | ATE92075T1 (ja) |
| AU (1) | AU601190B2 (ja) |
| CA (1) | CA1338874C (ja) |
| DE (2) | DE3618817A1 (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3611817A1 (de) * | 1986-04-08 | 1987-10-15 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur renaturierung von proteinen |
| DK580789D0 (da) * | 1989-11-20 | 1989-11-20 | Novo Nordisk As | Fremgangsmaade til oprensning af polypeptider |
| EP0545999B1 (en) * | 1990-08-20 | 1997-06-04 | Novo Nordisk A/S | Process for the preparation of biologically active IGF-1 using IGF-1 having an amino-terminal extension |
| AT408191B (de) * | 1991-08-19 | 2001-09-25 | Haemosan Erzeugung Pharmazeuti | Verfahren zur inaktivierung von prionen |
| WO1997004003A2 (en) * | 1995-07-21 | 1997-02-06 | Amgen Inc. | Process for protein refolding by means of buffer exchange using a continuous stationary phase capable of separating proteins from salts |
| EP1627920A1 (en) * | 2000-01-24 | 2006-02-22 | Polymun Scientific Immunbiologische Forschung GmbH | Method for the manufacture of recombinant trypsin |
| US7625584B2 (en) * | 2000-11-30 | 2009-12-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | Method of complexing a protein by the use of a dispersed system and proteins thereof |
| US20020127635A1 (en) * | 2000-11-30 | 2002-09-12 | Balasubramanian Sathyamangalam V. | Method of complexing a protein by the use of a dispersed system and proteins thereof |
| WO2002043665A2 (en) * | 2000-11-30 | 2002-06-06 | The Research Foundation Of State University Of New York | Ahf associated dispersion system and method for preparation |
| US8110218B2 (en) * | 2000-11-30 | 2012-02-07 | The Research Foundation Of State University Of New York | Compositions and methods for less immunogenic protein-lipid complexes |
| TW201816069A (zh) | 2016-07-12 | 2018-05-01 | 美商普勒斯頓產物公司 | 熱傳送流體及防止熱傳送系統腐蝕之方法 |
| JP6691077B2 (ja) | 2017-08-18 | 2020-04-28 | ファナック株式会社 | 制御装置及び機械学習装置 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60155137A (ja) * | 1984-01-23 | 1985-08-15 | Takeda Chem Ind Ltd | 高濃度ヒトγ型インタ−フエロン水溶液の製造法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3573271A (en) * | 1970-04-09 | 1971-03-30 | Emery C Swanson | Process for recovering portein from aqueous yeast liquors |
| GR79124B (ja) * | 1982-12-22 | 1984-10-02 | Genentech Inc | |
| IL74094A0 (en) * | 1984-01-23 | 1985-04-30 | Takeda Chemical Industries Ltd | Highly solubilised protein and production thereof |
| US4766205A (en) * | 1985-11-13 | 1988-08-23 | Beatrice Companies, Inc. | Method for isolation of recombinant polypeptides in biologically active forms |
| US4678553A (en) * | 1986-07-11 | 1987-07-07 | Ionics, Incorporated | Renaturing reversibly denatured polypeptides and proteins by electrodialysis of solutions thereof in denaturants |
-
1986
- 1986-06-04 DE DE19863618817 patent/DE3618817A1/de not_active Withdrawn
-
1987
- 1987-05-29 AT AT87107804T patent/ATE92075T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-05-29 DE DE8787107804T patent/DE3786708D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-05-29 EP EP87107804A patent/EP0248362B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-02 US US07/056,721 patent/US4965344A/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-03 AU AU73796/87A patent/AU601190B2/en not_active Expired
- 1987-06-03 CA CA000538713A patent/CA1338874C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-03 JP JP62138325A patent/JP2594275B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60155137A (ja) * | 1984-01-23 | 1985-08-15 | Takeda Chem Ind Ltd | 高濃度ヒトγ型インタ−フエロン水溶液の製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4965344A (en) | 1990-10-23 |
| JP2594275B2 (ja) | 1997-03-26 |
| AU7379687A (en) | 1987-12-10 |
| CA1338874C (en) | 1997-01-21 |
| DE3618817A1 (de) | 1987-12-10 |
| EP0248362A3 (en) | 1989-02-01 |
| EP0248362B1 (de) | 1993-07-28 |
| AU601190B2 (en) | 1990-09-06 |
| ATE92075T1 (de) | 1993-08-15 |
| EP0248362A2 (de) | 1987-12-09 |
| DE3786708D1 (de) | 1993-09-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1219234A (en) | Methods of purification and reactivation of precipitated heterologous proteins | |
| JP2970911B2 (ja) | ヒトのアルブミン溶液の安定化方法と、それによって得られた溶液 | |
| CA2192683C (en) | Filtration | |
| JPS62292796A (ja) | 生物学的に不活性な形態のものから活性タンパク質を取得する方法 | |
| US4599197A (en) | Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins | |
| KR890000165B1 (ko) | 혈장분획을 열처리하는 방법 | |
| JP2000513377A (ja) | プリオンのクロマトグラフィー除去方法 | |
| EP1928915B1 (en) | An ultra-high yield intravenous immune globulin preparation | |
| US5132406A (en) | Method of producing immunoglobulin preparations for intravenous injection | |
| HU205171B (en) | Process for producing biologically active plasminogen activator | |
| JP2002508388A (ja) | 新規なＴＧＦ−βタンパク質精製方法 | |
| EP0994722B1 (en) | Method of removing endotoxin from vaccines | |
| PT81012B (pt) | Processo para a recuperacao de hormonas de crescimento purificadas a partir de microrganismos tratados por engenharia genetica | |
| Yu et al. | Isolation and characterization of the major protein component of sarcotubular membranes | |
| EP0954326B2 (en) | A process for viral inactivation of lyophilized blood proteins | |
| KR100486472B1 (ko) | 폰빌레브란트인자의치료성단편 | |
| JPH0822879B2 (ja) | 冷沈澱により抗血友病因子を製造し且つ得られる抗血友病因子製品の溶解度を改善するための方法 | |
| JPS6078999A (ja) | ＨＢｓ抗原の精製方法 | |
| JP2001500867A (ja) | 血漿タンパク質含有薬剤の製造方法 | |
| JPH03502200A (ja) | クロマトグラフィーによる高純度の非感染性抗血友病因子の生産方法 | |
| KR20220140487A (ko) | 단백질 생물 공정 | |
| Murray | [4] Hybridization and reconstitution of the thin filament | |
| US4935150A (en) | Method for removing a pyrogen | |
| Heine et al. | Stabilization of human fibroblast interferon purified on concanavalin A-agarose | |
| KR0168415B1 (ko) | 전체혈장으로 혈액응고 viii 인자-반 빌레브란트 인자 복합 농축물을 제조하는 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20071219 Year of fee payment: 11 |