JPS62275677A - バチルス属微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規微生物に関し、更に詳細には、バチルス・
ポリミキサ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｏｌｙｍｙｘａ）に
属し、各種カビ・酵母・ダラム陽性細閑に対する発育抑
制作用を有し、またマウス白血病細胞に増殖阻害作用を
有し、従って、抗真菌剤、防黴剤、各種植物病害防除剤
等の抗菌剤、制癌剤としての用途が期待される、新規な
抗生物質を産生ずる新規なバチルス・ポリミキサに関す
る。

〔発明の背景〕

本発明者らは、抗真菌性物質を産生ずる菌を広く自然界
より検索した結果、バチルス・ポリミキサに属する菌株
が、新規な抗生物質を培地中に産生ずることを見出し、
本発明を完成した。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、抗生物質産生能を有する、バチルス・
ポリミキサに属する新規な微生物を提供することである
。

本発明の他の目的は、新規な抗生物質およびその製造法
を提供することである。

〔発明の構成〕

本発明の新規微生物は、抗生物質ＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−
Ｆ０４、ＬＩ−ＦＯ５、ＬＩ−Ｆ０７ふよびＬＩ−Ｆ０
８から選ばれる少なくとも１種の産生能を有するバチル
ス・ポリミキサである。

本発明の新規微生物バチルス・ポリミキサの代表的な例
としては、小田原市田島で採取された土壌から分離採取
されたバチルス・ボリミキｔＬ−１１２９株（以下ｒＬ
−１１２９株」という）およびその天然もしくは人工的
変異株を挙げることができる。Ｌ−１１２９株は昭和６
０年１２月１２日付で工業技術院微生物工業技術研究所
に寄託され、その受託番号は微工研菌寄第８５６０号で
ある。Ｌ−１１２９株は下記の菌学的性質を有する。

な＄、菌学的性質および分類は、「原核生物」（Ｔｈｅ
　Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｅｓ、　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｖｅ
ｒｌａｇ社）、「微生物の分類と同定」　（東京大学出
版会）に準じて行った。

＜Ｌ−１１２９株の菌学的性質〉 Δ、形態的性質 肉汁培地で３５℃にて１日培養するとき、以下の形態的
特徴が観察される。

１）　細胞の形および大きさ：寒天培地上に培養すると
きは、０．８〜１．　ＯＸ　２．０〜６．０ミクロンの
直状の桿菌である。また液体培地中に培養するときは、
寒天培地上の形態とほぼ同様であるが、長さが１０ミク
ロン位になるものもある。

２）　多形性：なし ３）　運動性：周鞭毛を有し、運動性あり。

４）　胞子：形成する。胞子璽は膨出し、胞子は楕円形
で細胞の面端に形成される。

５）　ダラム染色性：３５℃１日培養した寒天培地上の
細胞の多くは、染色性が認められないが、一部認められ
るものがある。

６）　抗酸性：胞子を形成しない細胞には認められない
。

Ｂ、培養的性質 １）　肉汁寒天平板培養：無色の円形、非拡散性集落を
形成する。該コロニーは平滑で、周縁はなめらか。色素
の産生は認められない。

２）　肉汁寒天平板培！！無色の円形、非拡散性集落を
形成する。該コロニーは平滑で周縁はなめらか。色素の
産生は認められない。

３）　肉汁液体培養：培地全体に生育が認められ、沈殿
も認められる。

４）　肉汁ゼラチン穿刺培養：穿刺に沿って生育し、上
部は液化する。

５）リドマスミルク：ｌ！固し、上部に液化が認められ
、培養時間と共に液化が進行する。

Ｃ０生理的性質 １）　硝酸塩の還元：陽性 ２）　脱窒反応：陰性 ３）ＭＲテスト：陰性 ４）　　Ｖ−Ｐ反応：陽性 ５）　インドール生成：陰性 ６）　硫化水素の生成：陰性 ７）　デンプンの加水分解：陽性 ８）　クエン酸の利用：コーサー（Ｋｏｓｅｒ）の培地
では利用する。

クリステンセン（（：ｈｒｉｓ− ｔｅｎｓｅｎ）　　の培地では利用 する。

９）　無機窒素源の利用；硝酸塩は利用する。

アンモニウム塩は利用 する。

１０）色素の生成：陰性 １１）　　ウレアーゼニ陰性 １２）　　オキシダーゼ：陰性 １３）カタラーゼ：陽性 １４）生育の温度範囲：３０〜３５℃付近（１５〜４８
℃）が良好 １５）生育の９８範囲ニア付近く５〜８）が良好１６）
酸素に対する態度二通性す気性 １７）ＯＦテスト（Ｈｕｇｈ　Ｌｅｉｆｓｏｎ法）：発
酵性１８）糖類から酸およびガスの生成：（＋；生成す
る　−；生成しない） Ｄ、その他の性質 １）５％ＮａＣβ存在下での発育：発育しない。

２）　アセトイン生成：陽性 ３）　カゼイン分解性；陽性 Ｌ−１１２９株は、上記の菌学的性質より、バチルス・
ポリミキサに属するが、既に報告されているペプチド系
抗生物質産生バチルス・ポリミキサおよびガタバリン（
Ｇａｔａｖａｌｉｎｅ）　生産菌であるバチルス・コリ
スチヌスと菌学的性質を比較すると、Ｌ−１１２９株は
、クエン酸塩利用能を有するのに対し、他の株は、それ
を有しないことより、通常のバチルス・ポリミキサとは
異なり、新菌株であると結論された。その結果を第１表
に示す。

Ｌ−１１２９株は、下記第２表に示した理化学的性質を
有する新規抗生物質ＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−Ｆ０４、ｌｌ
−ＦＯ５、ＬＩ−Ｆ０７およびＬＩ−Ｆ０８を産生する
。

ＬＩ−Ｆ１ａ、ＬＩ−ＦＯ４、ＬＩ−ＦＯ５、ＬＩ−Ｆ
０７、ＬＩ−Ｆ０８はいずれもペプチド抗生物質である
。バチルス属・およびバチルス・ボＩＪ　ミキサが産生
するペプチド抗生物質は、多数知られているが、と（に
ｆ’１ｆｆｌアミノ酸の種類からいずれも本物質とは異
なる。従って、バチルスポリミキサＬ−１１２９株の産
生ずる抗生物質ＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−Ｆ０４、ＬＩ−Ｆ
Ｏ５、Ｌ［−Ｆ０７、ＬＩ−Ｆ０８は、新規抗生物質で
あると判定した。

また、各種微生物に対する最小発育阻止濃度は第３表、
第４表および第５表に示したとおりである。

第３．４．５表に示しタヨうに、ＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−
Ｆ０４、ＬＩ−ＦＯ５、ＬＩ−Ｆ０７、ＬＩ−Ｆ０８は
、カビ、酵母、グラム陽性細菌に対して発育阻止作用を
有している。

なお、カビ、酵母に対してさらに抗菌力を高めるために
は、既存の抗真菌剤との併用が有効である。特にケトコ
ナゾール、ミコナゾール、クロトリマゾールなどのイミ
ダゾール系抗真菌剤との間に相乗作用を有し、併用効果
を有する。

さらにマウス白血病細胞（＞１２１０）をイーグルのＭ
Ｅ　Ｍ　（ｍｉｎｉｍｕ＋ｙ＋　Ｅｓ５ｅｎｔｉａｌ　
Ｍｅｄｉｕｍ）　　にて３７℃で４日間培養後（細胞数
１０’１０．９ｍ１）、数段階に希釈した試料（０，１
ｍｊりをそれぞれ加え、ひきつづき３日培養後、細胞数
をカウントする。その後、各濃度の試料について、細胞
の増殖阻止率を求め、プロビット図解法により、阻止率
５０％に対する試料濃度を求める。結果を第６表に示す
。

つぎにマウス白血病細胞（Ｌ−１２１０）を用いた細胞
毒性の結果を第６表に示す。

これは、牛脂児血１１０％を加えたイーグルのＭ　Ｅ　
Ｍ　（Ｍｉｎｉｍｕｍ　Ｅｓ５ｅｎｔｉａｌ　Ｍｅｄｉ
ｕｍ）　　に、マウス白血病細胞を接種し、（細胞数１
０’／ｍり、２４時間培養を行ない、つぎに１０倍系列
希釈した試料をそれぞれ一定量加え、ひきつづき３日培
養後、細胞数をカウントする。その後、各濃度の試料に
ついて細胞の増殖阻止率を求め、プロビット図解法によ
り、阻止率５０％に対する試料濃度を求めたものである
。

またマウス腹腔内投与による急性毒性は、第７表に示し
た通りである。

く抗生物質の製造法〉 次にＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−ＦＯ４、Ｌ　Ｉ　−ＦＯ５、
ＬＩ−Ｆ０７、ＬＩ−Ｆ０８の製造法について説明する
。ＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−ＦＯ４、ＬＩ−Ｆ０５、ＬＩ−
Ｆ０７、ＬＩ−Ｆ０８は、バチルス・ポリミキサＬ−１
１２９株（微工研菌寄第８５６０号）またはその天然も
しくは人工的変異株を、培地に培養し、培養物中に蓄積
させ培養物から分離採取することによって得ることがで
きる。

培地としては通常用いられる炭素源、例えばブドウ糖、
グリセリン、麦芽糖、デンプン、ンヨ糖、糖蜜、デキス
トリン、馬鈴薯などまたはこれらの混合物が使用され、
窒素源としては、コーンミール、大豆粉、肉エキス、ペ
プトン、酵母エキス、コーンステイープリカー、カゼイ
ン加水分解物、マルトエキストラクト、無機アンモニウ
ム塩など、またはこれらの混合物が使用できる。また培
地に添加できる添加物も通常の無機塩例えば塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウ
ム、燐酸塩等でよく、更に鉄、マンガン、亜鉛などの重
金属塩を微量添加することもできる。

培養方法としては、振盪培養法、深部通気攪拌培養等の
液体培地を使用する方法が適当である。

培地ｐ１は５．５〜８．５が好ましく、培養温度は１５
〜７１５℃の範囲で選択され、培養時間は２０〜７２時
間が適当である。ＬＩ−Ｆ０３，１ｌ−ＦＯ４、ＬＩ−
Ｆ０５、ＬＩ−Ｆ０７、ＬＩ−Ｆ０８は主として培養液
内に蓄積される。

ＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−ＦＯ４、ＬＩ−ＦＯ５、ＬＩ−Ｆ
０７、ＬＩ−Ｆ０８は前記の理化学的性状を有するので
、その性状に従って、常法により各種有機溶媒による抽
出、各種吸着剤によるクロマトグラフィーなどを組合わ
せて精製することが可能であり、たとえば以下に示す方
法が効率的である。有効成分を含む培養、液を菌体除去
後、たとえばアンバーライトＸＡＤ−２（ロームアンド
ハース社）、グンヤイオンＨＰ−５０（三菱化成社）な
どの合成吸着剤を充てんしたカラムに通過させると有効
成分は吸着される。

カラムを脱イオン水で洗浄後有効成分をメタノールで溶
出させる。溶出液を濃縮し、さらに０．０１％塩酸に溶
解し、ｎ−ブタノールで抽出すると、有効成分は、ブタ
ノール層に移る。ブタノール層を、濃縮乾固後シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーを行い、クロロホルム−メ
タノールで溶出し、有効成分を得る。これを濃縮後メタ
ノールに溶解し、ジエチルエーテルを添加すると、有効
成分は沈殿する。沈殿を乾燥して、粗抽出物を得る。さ
らに精製するために液体クロマトグラフィにより分離し
、ＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−０４、Ｌ　Ｉ　−ＦＯ５、ＬＩ
−Ｆ０７、ＬＩ−Ｆ０８（７）Ｉ製品を得ル。

く抗菌剤〉 本発明の抗生物質は、これを抗菌剤として用いる場合、
そのままで、またはこれらを有効成分として慣用の製剤
担体と共に、人及び動物に投与することができる。本発
明の抗菌剤は経口的にまたは非経口的に投与できる。

経口剤としては、錠剤、顆粒剤、経口用溶液剤等、また
は非経口剤としては、液剤、軟膏剤、バフブ剤、テープ
剤、串刺等の局所投与剤、あるいは注射剤があげられる
。

投与量は、非経口局所投与剤の場合、患部に有効成分と
して１日体重１　ｋｇあたり０．１〜３００ｍｇ。

１回ないし数回に分けて投与できる。

その他の場合は、１日あたり体重１　ｋｇあたりの有効
成分投与■は１〜５００ｍｇで、これは１日１回ないし
数回に分けて投与できる。

本発明の抗菌剤に用いる基剤および賦形剤としては、通
常の製剤に使用されているものを使用することができる
。

例えば錠剤は有効成分をゼラチン、デンプン、乳糖、ス
テアリン酸マグネシウム、滑石、アラビアゴム等の賦形
剤と混合して賦形される。

液剤は、溶剤として水、エタノール、プロピレングリコ
ール、１．３−ブチレンクリコール、クリセリン、ソル
ビット、ポリエチレングリコールなどが利用できる。

軟膏には、親木軟膏や吸水軟膏等の乳剤性基剤や、白色
ワセリン軟膏やプラスチックベース軟膏等の油脂性基剤
、またマクロゴール軟膏等の水溶性基剤、さらに水性ま
たは非水性のゲル基剤などが使用できる。

注射剤は水又は塩水に溶解又は懸濁して製造される。

く制癌剤〉 本発明の抗生物質は、これを制癌剤として用いる場合、
そのままで、またはこれらを有効成分として慣用の製剤
担体と共に、人及び動物に投与することができる。本発
明の制癌剤は経口的にまたは非経口的に投与できる。

経口剤としては錠剤、頚粒剤、溶液剤等が適当であり、
通常１日、体重Ｌ　ｋｇあたり、１〜３００ｍｇを１回
ないし数回に分けて投与する。また注射剤としての投与
量は１日、体重１　ｋｇあたり０．１〜１００ｍｇが適
当である。

く農薬〉 本発明の抗生物質を各種植物病害に対する農薬として使
用する場合、そのままで、好ましくは通常の製剤担体と
共に敗布される。剤型としては、溶液、乳剤、水和剤等
の液剤、粉剤、粒剤いずれでもよい。製剤にあたっては
、水、エタノール等の有機溶剤、非イオン系界面活性剤
、アニオン系界面活性剤等の乳化剤、タルク、パイロフ
ィライト、ベントナイト等の粘土鉱物、炭酸カルシウム
、消石灰、ニカワ、アラビアゴム、デンプン等の担体を
適宜選択し、使用する。投与量は一般に、有効成分とし
て１０アールあたり１〜１００ｇが適当である。

〔発明の効果〕

本発明の新規微生物バチルス・ポリミキサは新規抗生物
質Ｌ（−Ｆ０３、ＬＩ−ＦＯ４、ＬＩ−０５、ｌｌ−Ｆ
０７、ＬＩ−Ｆ０８を産生する。

これらの新規抗生物質は、各種のカビ、酵母、グラム陽
性細菌に対して発育阻止作用を有し、またマウス白血病
細胞に対する細胞毒性を示すので、抗真菌剤、防黴剤、
各種植物病害防除剤、細菌感染症治療剤等の抗菌剤ある
いは制癌剤としての用途が期待される。

次に各抗生物質の抗菌活性ならびに細胞毒性および急性
毒性のデータから、それぞれ期待される用途につき、さ
らに詳述する。

ＬＩ−Ｆ０３ 第３表、第４表、第５表に示した最小発育阻止濃度およ
び第６表に示した細胞毒性、第７表に示した急性毒性よ
り本物質は抗真菌剤、防黴剤、各種植物病害防除剤、細
菌感染症治療剤等の抗菌剤としての用途が期待される。

特に第３表に示したカビ、第４表に示した酵母のうち代
表的真菌症の原因菌である、スボロトリックス属（スポ
ロトリクム症原因菌）、フオンセカエア属（黒色真菌症
）、カンジダ症（カンジダ症）、クリプトコツカス属（
クリプトコツカス症）に発育阻止作用を有することから
抗真菌剤としての用途が考えられる。

また、第３表に示したタラトスポリウムＲ（柑橘の黒斑
病原因菌）、ヘルミントスボリウム属（葉枯病）に発育
阻止力を示すことから園芸用農薬としての用途が考えら
れる。

また、第５表に示したようにダラム陽性菌に対して発育
阻止作用を有しており、ダラム陽性閑によりおこされる
感染疾患の治療剤としての用途が考えられる。

１−ＦＯ４ 第３表、第４表１．第５表に示した最小発育阻止濃度お
よび第６表に示した細胞毒性、第７表に示した急性毒性
より本物質は抗真菌剤、防黴剤、各種植物病害防除剤、
細菌感染症治療剤等の抗菌剤としての用途が期待される
。

特に第３表に示したカビ、第４表に示した酵母のうち、
代表的真菌症の原因菌であるトリコフィトン属（白癖原
因菌）、スポロトリックス属（スポロトリクム症）、フ
オンセカエアＲ（黒色真菌症）、カンジダ症（カンジダ
症）、クリプトコツカス属（クリプトコツカス症）、ゲ
オトリカム属（ゲオ）　ＩＪクム症）に発育阻止作用を
有することから抗真菌剤としての用途が考えられる。

また、第３表に示したペニシリウム属（果実の青カビ病
原因菌）、クラドスポリウム属（トマト葉カビ病、柑橘
の黒斑病）、フザリウム属（ダイズ立枯病）、ヘルミン
トスボリウム属（葉枯病）に発育阻止力を示すことから
、穀類および園芸用農薬としての用途が考えられる。

また、第５表に示したようにダラム陽性閑に対して発育
阻止作用を有しており、ダラム陽性閑によりおこされる
感染疾患の治療剤としての用途が考えられる。

Ｉ−ＦＯ５ 第３表、竿４表、第５表に示した最小発育阻止濃度より
、本物質は、カビ、酵母、グラム陽性細菌に発育阻止作
用を有すること、および第６表に示した細胞毒性、第７
表に示した急性毒性より、抗真菌剤、防黴剤、各種植物
病害防除剤、細菌感染症治療剤等の抗菌剤あるいは制癌
剤としての用途が期待される。特に第３表に示したカビ
、第４表に示した酵母のうち、代表的真菌症原因菌であ
るミクロスポラム属、トリコフィトン属（自重原因菌）
およびスボロトリックス属（スボロトリックム症）、フ
オンセカエア属（黒色真菌症）、カンジダ症（カンジダ
症）、クリプトコツカス属（クリプトコブカス症）、ゲ
オトリクム属（ゲオトリクム症〉、フザリウム属（角膜
真菌症）に発育阻止作用を有することがら抗真菌剤とし
ての用途が考えられる。

また、第３表に示したペニシリウム属（果実の青カビ病
原因菌）、タラトスポリウム属（トマト葉カビ病、柑橘
の黒斑病）、フザリウム属（ダイズ・イネ・アマの立枯
病）、ジベレラ属（イネ馬鹿苗病）、フルミントスボリ
ウム属（葉枯病）に発育阻止力を示すことから、穀類お
よび園芸用農薬としての用途が考えられる。

また、第５表に示したように、ダラム陽性菌に対して発
育阻止作用を有しており、ダラム陽性菌によりおこされ
る感染疾患の治療剤としての用途が考えられる。

さらに第６表に示したようにマウス白血病細胞に対して
増殖阻害作用を有することがら制癌剤としての用途が考
えられる。

Ｉ−Ｆ０７ 第３表、竿４表、第５表に示した最小発育阻止濃度およ
び第６表に示した細胞毒性、第７表に示した急性毒性よ
り本物質は抗真菌剤、防黴剤、各種植物病害防除剤、細
菌感染症治療剤等の抗菌剤あるいは制癌剤としての用途
が期待される。

特に第３表に示したカビ、軍４表に示した酵母のうち代
表的真菌症原因菌であるトリコフィトン属（自重原因菌
）、スボロトリックス属（スボロトリックム症）、フオ
ンセカエア属（黒色真菌症）、カンジダ症（カンジダ症
）、クリプトコツカス属（クリプトコツカス症）、フザ
リウム属（角膜真菌症）に発育阻止作用を有することか
ら抗真菌剤としての用途が考えられる。

また、第３表に示したタラトスボリウム属（トマト葉カ
ビ病、柑橘の黒斑病原因菌）、フヂリウムＲ（ダイズ・
イネ・アマの立枯病）、ジベレラ属（イネ馬鹿苗病）、
ヘルミントスボリウム属（葉枯病）に発育阻止作用を有
することから、穀類および園芸用農薬としての用途が考
えられる。

また、第５表に示したようにダラム陽性閑に対して発育
阻止作用を有しており、ダラム陽性閑によりおこされる
感染疾患の治療剤としての用途が考えられる。

さらに、第６表に示したようにマウス白血病細胞に対し
て増殖阻止作用を有することがら制癌剤としての用途が
考えられる。

１−Ｆ０８ 第３表、第４表、第５表に示した最小発育阻止濃度およ
び第６表に示した細胞毒性、第７表に示した急性毒性よ
り本物質は抗真菌剤、防黴剤、各種植物病害防除剤、細
菌感染症治療剤等の抗菌剤あるいは制癌剤としての用途
が期待される。

特に第３表に示したカビ、第４表に示した酵母のうち、
代表的真菌症の原因菌であるミクロスポラム属・トリコ
フィトン属（自重原因菌）、スポロトリックス属（スポ
ロトリクム症）、フオンセカエア属（黒色真菌症）フザ
リウム属（角膜真菌症）、カンジダ症（カンジダ症）、
クリプトコツカス属（クリプトコツカス症）に発育阻止
作用を有することから抗真菌剤としての用途が考えられ
る。

また、第３表に示したペニシリウム属（果実の青カビ病
原因菌）、クラドスポリウム属（トマト葉カビ病、柑橘
の黒斑病）、フザリウム属（ダイズ・イネ・アマの立枯
病）、ジベレラ属（イネ馬鹿苗病）、ヘルミントスボリ
ウム属（葉枯病）に発育阻止力を示すところから穀類お
よび園芸用農薬としての用途が考えられる。

また、第５表に示したようにダラム陽性菌に対して発育
阻止作用を有しており、ダラム陽性菌によりおこされる
感染疾患の治療剤としての用途が考えられる。

さらに、第６表に示したように、マウス白血病細胞に対
して増殖阻止作用を有することがら制癌剤としての用途
が考えられる。

〔実施例〕

次に、本発明を実施例により説明する。

実施例１ ２０βジヤーにコーンミール５％、ソリュブルスターチ
１％、酵母エキス０．１％、硫酸アンモニウム０．５％
、炭酸カルシウム１％を含む液体培地を１０ｊ２投入し
、１２０℃２０分加圧滅菌し、トリブチケースソイ液体
培地で培養したバチルス・ポリミキサＬ−１１２９株（
微工研菌寄８５６０号）を２００ｍ１植閑した。３０℃
で２０時間培養して遠心分離で菌体除去後、本抗生物質
を含む培養液７１を得た。この培養液をアンバーライト
ＸΔＤ−２（ローム・アンド・ハース社）３βを充てん
したカラムに通過させると有効成分は樹脂に吸着される
。このカラムを水で洗浄後、メタノールで有効成分を溶
出させ、減圧濃縮する。この濃縮した有効成分を２１の
０．０１％塩酸水溶液に溶解し、２！のｎ−ブタノール
で２回抽出すると有効成分は、ｎ−ブタノール層に移る
。ｎ−ブタノール層は減圧濃縮後シリカゲルカラムクロ
マトグラフィーにかけクロロホルム−メタノールでを効
成分を溶出させる。有効成分は、クロロホルム；メタノ
ール＝４：ｌからクロロホルム−メタノール＝１＝１の
範囲で特に溶出される。有効成分を集め、減圧濃縮乾固
後メタノール４０１１１βに溶解し、次に５００ｍｆの
ジエチルエーテルヲ加工て沈殿させる。沈殿は減圧した
デシケータ−中で乾固し、粗抽出物４０　Ｑｍｇを１昇
る。続いて、高速液体クロマトグラフィーにより、精製
を行なう。

すなわち、カラムは、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ　５　Ｃ１８、
ｌ０Ｘ２５０　＋ｎｍ　（半井化学社製）を使用し、移
動溶媒に水ニアセトニトリル＝７：４（０，０５％トリ
フロロ酢酸）、流量３．０　ｍｊ！　／ｍｉｎ　、検出
は２１０ｎｍの吸収で行う。保持時間８分から９．５分
までのフラクションを分取し、減圧濃縮後凍結乾燥し、
ＬＩ−Ｆ０３の白色粉末７２ｍｇを得る。同様に保持時
間１０分から１１．５分までのフラクションからＬＩ−
ＦＯ４（１３８ｍｇ）、１３分から１６分までのフラク
ションからＬＩ−ＦＯ５（５２ｍｇ）、１６．５分から
１８分までのフラクションからＬＩ−Ｆ０７（２１ｍｇ
）、１９分から２１分までのフラクションからＬＩ−Ｆ
０８（１９ｍｇ）の白色粉末を得る。

実施例２ ２０βジヤーにポテト浸出液２０％、グルコース２％、
リン酸ｌ水素カリウム０．０５％を含む液体培地１２！
を投入し、１２０°　２０分加圧滅菌し、トリブチケー
スソイ液体培地で培養したバチルス・ポリミキサＬ−１
１２９（微工研菌寄８５６０号）を種母として２００＋
ｎｆ加え培養した。３０゜で３０時間培養して培養液に
エタノール１０１を加え、培養中に生じる粘性物質を沈
殿させ除去する。１尋られた有効成分を含む上清１５β
を減圧濃縮して５１にし、０．５ｍＪの濃塩酸を加え、
つぎに同量のｎ−ブタノールを加え抽出する。ｎ−ブタ
ノール層は、つぎに水、５％炭酸水素ナトリウム抽出を
行い、不純物を除去する。有効成分を含むブタノール層
は減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを
行なう。クロロホルム−メタノールで溶出すると、有効
成分はクロロホルム：メタノール＝４：１からクロロホ
ルム：メタノール＝１：１の範囲で特に溶出される。有
効成分を含む区分を集め、減圧濃縮後、メタノール４０
ｍ１に溶解し、つぎに５００１Ｔｌｉのジエチルエーテ
ルを加えて沈殿させる。沈殿は減圧にしたデシケータ中
で乾固し、粗抽出物３２０ｍｇを得る。つづいて高速液
体クロマトグラフィーにより精製を行う。すなわち、カ
ラムはＣｏｓｍｏｓｉｌ　５　Ｃｌ　８．１０Ｘ　２５
　Ｏｎ＋ｍ　（牛丼化学社製）を使用し、移動溶媒に水
ニアセトニトリル＝７：４（０，０５％トリフロロ酢酸
）、流量３．　Ｏｍ　ｌ　／ｍｉｎ検出は２１０ｎｍの
吸収で行なう。保持時間８分から９．５分までのフラク
ションを分取し、減圧濃縮後凍結乾燥し、ＬＩ−Ｆ０３
の白色粉末５８ｍｇを得る。同様に、保持時間１０分か
ら１１，５分までのフラクションからＬＩ−ＦＯ４（ｌ
ｌ１ｍｇ）、１３分から１６分までのフラクションから
Ｌ　Ｉ−ＦＯ５（４２ｍｇ）、１６．５分から１８分ま
でのフラクションからＬＩ−Ｆ０７（１７ｍｇ）　、１
９分から２１分までのフラクションからＬＩ−Ｆ０８（
１５ｍｇ）の白色粉末を得る。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図、第３図、第４固自よび第５図は、それ
ぞれＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−Ｆ０４、ＬＩ−ＦＯ５、ＬＩ
−Ｆ０７、ＬＩ−Ｆ０８の紫外線吸収スペクトルで各々
０．０１２５％の濃度にメタノールに溶解して測定した
ものである。 第６図、第７図、第８図、第９父方よび第１０図は、そ
れぞれＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−ＦＯ４、ＬＩ−ＦＯ５、Ｌ
Ｉ−Ｆ（１７、ＬＩ−Ｆ０８の赤外線吸収スペクトルで
臭化カリウム錠として測定したものである。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）抗生物質ＬＩ−Ｆ０３、ＬＩ−Ｆ０４、ＬＩ−Ｆ
   ０５、ＬＩ−Ｆ０７およびＬＩ−Ｆ０８から選ばれる少
   なくとも１種の産生能を有するバチルス・ポリミキサ。
2. （２）バチルス・ポリミキサＬ−１１２９株（微工研菌
   寄第８５６０号）である特許請求の範囲第（１）項記載
   のバチルス・ポリミキサ。