JPS62247242A - Medium material for electrophoresis - Google Patents
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
［発明の分野］
本発明は、電気泳動用媒体材料に関するものであり、さ
らに詳しくは、特にＤＮＡの塩基配列決定操作に用いる
のに適した電気泳動用媒体材料に関するものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Field of the Invention] The present invention relates to an electrophoresis medium material, and more particularly to an electrophoresis medium material suitable for use in DNA base sequencing operations. It is.
［発明の背景］
化学分解法（Ｍａｘａｍ−Ｇｉｌｂｅｒｔ法等）、ジデ
オキシ法等による核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）の塩ノ、（配
列決定法においては、電気泳動用媒体層としてポリアク
リルアミドゲル膜を用いたスラブ電気泳動操作か必須の
操作となっている。特に近年において遺伝子関連の研究
か進むにつれて、ＤＮＡ塩基配列決定の操作の迅速化か
急務となっている。[Background of the Invention] Hydrolysis of nucleic acids (DNA, RNA) by chemical decomposition methods (Maxam-Gilbert method, etc.), dideoxy method, etc. (In the sequencing method, a polyacrylamide gel membrane is used as the electrophoresis medium layer. Slab electrophoresis has become an essential operation.Especially in recent years, as gene-related research has progressed, there has been an urgent need to speed up DNA base sequencing operations.
ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミドのような
巾Ｈ，Ｈ０体を触媒の存在下にてＮ、Ｎ’ −メチレン
ビスアクリルアミドのような二官１七性の架橋剤を用い
架橋重合させることにより得られる。A polyacrylamide gel membrane is obtained by crosslinking and polymerizing a width H, H0 body such as acrylamide using a difunctional 17-functional crosslinking agent such as N,N'-methylenebisacrylamide in the presence of a catalyst. .
なお、ＤＮＡ塩基配列決定用のポリアクリルアミドゲル
膜の形成に際して通常は、尿素あるいはホルムアミドの
ような少なくとも１個のカルバモイル基をもつ化合物変
性剤を含有させる。Note that when forming a polyacrylamide gel membrane for DNA base sequencing, a compound denaturing agent having at least one carbamoyl group, such as urea or formamide, is usually included.
■−記の重合反応はラジカル架橋重合てあり、酸素の影
響により反応か阻害されるため、ポリアクリルアミドゲ
ル膜は酸素を遮断した状態で調製する必要がある。この
理由から、現在では一般に、ポリアクリルアミドゲル膜
は２枚のガラス板て形成されたセル（一定の空間、たと
えば約０．３〜１ｍｍ厚の空間を有するもの）の中にゲ
ル形成液を注入し、１％ｊ素を遮断した状ｙＥで架橋重
合させてゲル膜を形成させている。しかし、この方法は
二枚のガラス板の間でゲル膜を形成するために、取り扱
い性が悪く、かつゲル膜の量産化か困難であるといった
大きな欠点を有している。The polymerization reaction described in (1)-- is a radical crosslinking polymerization, and since the reaction is inhibited by the influence of oxygen, the polyacrylamide gel membrane must be prepared in a state where oxygen is blocked. For this reason, polyacrylamide gel membranes are now generally produced by injecting a gel-forming solution into a cell (with a certain space, e.g., about 0.3 to 1 mm thick) formed by two glass plates. Then, a gel film is formed by cross-linking polymerization with yE with 1% j element blocked. However, since the gel film is formed between two glass plates, this method has major drawbacks such as poor handling and difficulty in mass-producing the gel film.
以上のようにして形成したポリアクリルアミドゲル膜を
電気泳動媒体として用いる電気泳動操作は、たとえば、
次のようにして実施される。Electrophoresis operations using the polyacrylamide gel membrane formed as described above as an electrophoresis medium include, for example,
It is implemented as follows.
サンプルスロットか上端部に設けられたポリアクリルア
ミドゲル膜をガラス板に挟んだままの状態で垂直に配こ
し、まず前電気泳動操作を行なったのち、サンプルスロ
ット中に試料（マキサム・ギルバート分解した３２ ｐ
ラベル化ＤＮＡなど）を一定量注入し、次いで電気泳動
操作を行なう、そして一定時間（例、約６時間〜１２時
間）の電気泳動を行なった後１片面のガラス板を注意深
く除去し、その露出面をポリ塩化ビニリデンフィルムな
どの合成樹脂製フィルムでゲル膜を覆い、この状ｆＥｉ
にてオートラジオグラフィー処理を行なう。The polyacrylamide gel membrane provided at the upper end of the sample slot is placed vertically with it sandwiched between glass plates, and after a pre-electrophoresis operation is performed, the sample (Maxam-Gilbert decomposed 32 p
A certain amount of labeled DNA, etc.) is injected, and then electrophoresis is performed. After electrophoresis has been performed for a certain period of time (e.g., about 6 to 12 hours), one side of the glass plate is carefully removed and exposed. The surface of the gel film is covered with a synthetic resin film such as polyvinylidene chloride film, and in this state fEi
Perform autoradiography processing.
このオートラジオグラフィー処理は、ポリアクリルアミ
ドゲル
線フィルム、増感スクリーンを順次のせて，低温（たと
えば、−８０℃）で一定時間（たとえば、約１０〜２０
時間）露光を行ない，そして露光終了後．ｘｍフィルム
を現像し、ＤＮＡの分離泳動パターンを画像化する処理
である。このようにして得られたＤＮＡの分離泳動パタ
ーンに基づいてＤＮＡの塩基配列を決定することができ
る。This autoradiography process is performed by sequentially placing a polyacrylamide gel line film and an intensifying screen at a low temperature (for example, -80°C) for a certain period of time (for example, about 10 to 20°C).
time) exposure, and after the exposure is complete. This is a process in which xm film is developed and the separation migration pattern of DNA is imaged. Based on the DNA separation pattern thus obtained, the base sequence of the DNA can be determined.
オートラジオグラフィー処理は以上のように長時間を必
要とするため、その迅速化か望まれ、更に読みとりの高
分解能化も望まれている。Since autoradiography processing requires a long time as described above, it is desired to speed it up, and furthermore, it is desired to improve the resolution of reading.
従来のアクリルアミドゲル膜を用いた電気泳動媒体材料
は上記のようにガラス板を用いるために取り扱い性に問
題があり、しばしばガラスを割ったりして実験を失敗す
ることがある。更に、オートラジオグラフィーに際し，
上記のように片面のガラスを除く・必要かあり、この時
にゲル膜を破損したりする事もあり、この操作は非常に
熟練を必要とする。したがって、この様な欠点を改良し
た取り扱い性の良好なポリアクリルアミドゲル膜の開発
が既にすすめられ、支持体としてポリエチレンテレフタ
レートなどのプラスチック材料からなる支持体を用い、
その上にポリアクリルアミドゲル膜を形成した電気泳動
媒体材料が既に提案されている。Conventional electrophoresis media materials using acrylamide gel membranes use glass plates as described above, which poses problems in handling, and experiments often fail due to the glass breaking. Furthermore, during autoradiography,
As mentioned above, it may be necessary to remove the glass on one side, but the gel film may be damaged at this time, and this operation requires great skill. Therefore, efforts have already been made to develop polyacrylamide gel membranes that are easy to handle and have improved these drawbacks.
An electrophoretic medium material on which a polyacrylamide gel film is formed has already been proposed.
上記のプラスチック材料製の支持体を用いた電気泳動媒
体材料は、その製造か容易て、珈り扱い性も良いとの利
点を有する。そして、ＤＮＡ分解物などの電気泳動も、
その電気泳動媒体材料を用いて行なうことがてきるが、
本発明者か詳細に検討したところによると、支持体とし
てガラス板を用いて製造した電気泳動媒体材料に比較す
ると、その解像力か若−「低下する傾向があることがわ
かった。The electrophoretic medium material using the support made of the plastic material described above has the advantage of being easy to manufacture and having good handling properties. Also, electrophoresis of DNA degradation products, etc.
It can be carried out using the electrophoretic medium material,
According to detailed studies by the present inventors, it has been found that the resolving power tends to be lower when compared to electrophoretic media materials manufactured using glass plates as supports.
［発明の要旨］
本発明の目的は、新規なプラスチック製フィルム（ある
いはシート）を支持体として用いたポリアクリルアミド
ゲル膜系電気泳動媒体材料を提供することにある。[Summary of the Invention] An object of the present invention is to provide a polyacrylamide gel membrane-based electrophoretic medium material using a novel plastic film (or sheet) as a support.
本発明の目的は、特にプラスチック製フィルム（あるい
はシート）を支持体として用いたポリアクリルアミドゲ
ル膜系電気泳動媒体材料であって、支持体としてガラス
板を用いて製造した電気泳動媒体材料と同等の解像力を
示す電気泳動媒体材料を提供することにある。The object of the present invention is to provide a polyacrylamide gel electrophoretic medium material using a plastic film (or sheet) as a support, which is equivalent to an electrophoretic medium material manufactured using a glass plate as a support. The object of the present invention is to provide an electrophoretic medium material that exhibits resolving power.
未発ＩＪＩは、アクリルアミド系化合物と架橋剤とが木
の存在ドて架橋組合してなるポリアクリルアミド系水性
ゲルからなり、変性剤として少なくとも１個のカルバモ
イル基をもつ化合物を含む電気泳動用媒体層およびプラ
スチック材料製支持体を含む電気泳動用媒体材料であっ
て、該電気泳動用媒体層と支持体層との間に、該支持体
材料よりも酸素透過係数か低い樹脂材料からなる樹脂中
間層か備えられていることを特徴とする電気泳動用媒体
材料からなるものである。Undeveloped IJI consists of an aqueous polyacrylamide gel formed by crosslinking an acrylamide compound and a crosslinking agent in the presence of wood, and an electrophoresis medium layer containing a compound having at least one carbamoyl group as a denaturing agent. and an electrophoretic medium material comprising a support made of a plastic material, wherein a resin intermediate layer made of a resin material having a lower oxygen permeability coefficient than the support material is provided between the electrophoresis medium layer and the support layer. The electrophoresis medium material is characterized in that it is provided with:
［発明の効果］
本発明の電気泳動用媒体材料は、上記のようにプラスチ
ック製支持体からの電気泳動媒体層への酸素の透過、拡
散を低下させることのできる樹脂中間層か設けられてい
るため、電気泳動用媒体層（ポリアクリルアミドゲル膜
）の形成のための架橋重合反応が非常に円滑に進行し、
高度に均質な電気泳動用媒体層が形成される。従って、
そのような樹脂中間層を備えていないプラスチック支持
体上に形成された電気泳動用媒体層に比較して、本発明
の電気泳動用媒体材料の電気泳動用媒体層は、更に高い
解像性を示す。[Effects of the Invention] As described above, the electrophoresis medium material of the present invention is provided with a resin intermediate layer that can reduce the permeation and diffusion of oxygen from the plastic support to the electrophoresis medium layer. Therefore, the crosslinking polymerization reaction for forming the electrophoresis medium layer (polyacrylamide gel membrane) proceeds very smoothly.
A highly homogeneous electrophoretic medium layer is formed. Therefore,
Compared to an electrophoretic medium layer formed on a plastic support without such a resin intermediate layer, the electrophoretic medium layer of the electrophoretic medium material of the present invention has even higher resolution. show.
［発明の詳細な記述］
本発明の電気泳動用媒体材料の支持体は、プラスチック
材料から形成されるシート状物（フィルム状物も含む）
である。このプラスチック製シートとしては、任意のプ
ラスチック材料から形成したものを用いることができる
。好ましいプラスチック材料の例としては、ポリエチレ
ンテレフタレート、ビスフェノールＡのポリカルボネー
ト、ポリ塩化ビニル、ポリメチルメタクリレート、ポリ
エチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、セルロース
アセテート、およびセルロースアセテートプロピオネー
トをあげることができる。[Detailed Description of the Invention] The support for the electrophoresis medium material of the present invention is a sheet-like material (including a film-like material) formed from a plastic material.
It is. This plastic sheet may be made of any plastic material. Examples of preferred plastic materials include polyethylene terephthalate, polycarbonate of bisphenol A, polyvinyl chloride, polymethyl methacrylate, polyethylene, polypropylene, polystyrene, cellulose acetate, and cellulose acetate propionate.
プラスチック材料製支持体は公知の表面活性化処理によ
り表面を親水化したものであることが好ましい０表面親
木化処理のためには紫外線照射、グロー放電処理、コロ
ナ放電処理、火焔処理、電子線照射、ケミカルエツチン
グ、電解エツチング等の公知の方法を適用することがて
きる。It is preferable that the support made of plastic material has its surface made hydrophilic by a known surface activation treatment.For the surface wood-philic treatment, ultraviolet irradiation, glow discharge treatment, corona discharge treatment, flame treatment, electron beam treatment, etc. Known methods such as irradiation, chemical etching, electrolytic etching, etc. can be applied.
支持体は、一般に厚さか約５０〜５００ｇｍ、好ましく
は約７０〜３００７ｚｍのものか用いられる。The support used generally has a thickness of about 50 to 500 gm, preferably about 70 to 3007 gm.
これまでに提案されているプラスチック製支持体を用い
た電気泳動用媒体においては、プラスチック製支持体上
に、直接あるいは接着剤層を介してポリアクリルアミド
ゲル形成用塗布液が塗布され、次いで窒素雰囲気下にて
架橋重合反応が行なわれている。In electrophoresis media using plastic supports that have been proposed so far, a coating solution for forming a polyacrylamide gel is applied onto the plastic support directly or via an adhesive layer, and then a nitrogen atmosphere is applied. A cross-linking polymerization reaction is taking place below.
本発明の電気泳動用媒体においては、プラスチック製支
持体上に、該支持体の材料よりも酸素透過係数が低い樹
脂材料からなる樹脂中間層が設けられる。In the electrophoresis medium of the present invention, a resin intermediate layer made of a resin material having a lower oxygen permeability coefficient than the material of the support is provided on a plastic support.
上記の樹脂中間層は、層厚２０１Ｌｍに形成したフィル
ムの状態における酸素透過量が１５ｃｃ／ｍ２・ａｔ−
・ｄａｙ以下の樹脂材料よりなることが好ましく、特に
層厚２０ｐｍに形成したフィルムの状ｙ６における酸素
透過量が１０ｃｃ／ｒｎ’・ａＬ−・ｄａｙ以下の樹脂
材料よりなることが好ましい、好ましい樹脂材料の例と
しては、塩化ビニリデン・塩化ビニル共重合体、ポリビ
ニルアルコール、ポリアクリロニトリル、ポリ塩化ビニ
リデン、ビニルアルコール・エチレン共重合体、塩化ビ
ニリデン・アクリロニトリル共重合体、アクリロニトリ
ル・メチルアクリレート・フタジエン共重合体などを挙
げることができる。なお、Ｌ記の酸素透過量は、酸素透
過量の測定方法として一般的に利用されているｍ ｏ
ｃ ｏ ｎ法による測定値である。The above resin intermediate layer has an oxygen permeation rate of 15 cc/m2·at− in a film formed to a layer thickness of 201 Lm.
・A preferred resin material is preferably made of a resin material having an oxygen permeation rate of 10 cc/rn'・aL-・day or less in the form y6 of a film formed to a layer thickness of 20 pm. Examples include vinylidene chloride/vinyl chloride copolymer, polyvinyl alcohol, polyacrylonitrile, polyvinylidene chloride, vinyl alcohol/ethylene copolymer, vinylidene chloride/acrylonitrile copolymer, acrylonitrile/methyl acrylate/phtadiene copolymer, etc. can be mentioned. Note that the oxygen permeation amount in L is m o which is generally used as a method for measuring the oxygen permeation amount.
This is a value measured by the con method.
上記ｖＡ脂中間層は約０．５〜２０ｐＬｍの層厚を右す
ることが好ましく、さらに約ｌ〜８ｐｍの層厚を右する
ことが特に好ましい。Preferably, the VA intermediate layer has a layer thickness of about 0.5 to 20 pLm, more preferably about 1 to 8 pm.
樹脂中間層と上記支持体とがらなる積層体の酸素透過量
は１０ｃｃ／ｒｎ’・ａｔｍ −ｄａｙ以丁であること
が好ましく、さらに７ ｃ ｃ ／ｒｒｆ −ａＬｍ
・ｄａｙ以下であることが特に好ましい。The oxygen permeation rate of the laminate consisting of the resin intermediate layer and the support is preferably 10 cc/rn' atm -day, and more preferably 7 cc/rrf -aLm.
It is particularly preferable that it is less than ・day.
］二記の樹脂中間層のＬに直接、あるいは接着剤層など
の他の中間層を介して電気泳動用媒体層カ一般けられる
。] The electrophoretic medium layer is generally applied directly to the resin intermediate layer L described in 2 above, or via another intermediate layer such as an adhesive layer.
次に′ｉ［気泳動用媒体層（以下において、ゲル媒体層
、ポリアクリルアミドゲル膜あるいは単にゲル膜ともい
う）について説明する。Next, the aerophoresis medium layer (hereinafter also referred to as gel medium layer, polyacrylamide gel membrane, or simply gel membrane) will be explained.
ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミド系化合物
と架橋剤とを、水溶液または水分散液として水中に溶解
または分散させてゲル形成液を調製したのち、液中て両
者を架橋重合させて架橋刊合した水性ゲル膜として形成
することにより得ることができる。本明細書においては
、特にことわらない限り、（水中に）溶解と（水中に）
分散の両者を含めて単に（水中に）溶解といい、水溶液
と水分散液の両者を含めて巾に水溶液という。また、溶
媒または分散媒として、所望により加えられる有機溶媒
と水の混合物をも包含する。Polyacrylamide gel membranes are made by dissolving or dispersing an acrylamide compound and a crosslinking agent in water as an aqueous solution or aqueous dispersion to prepare a gel forming liquid, and then crosslinking and polymerizing both in the liquid. It can be obtained by forming it as a gel film. In this specification, unless otherwise specified, dissolution (in water) and dissolution (in water) are used.
Both dispersion and dispersion are simply referred to as dissolution (in water), and both aqueous solutions and aqueous dispersions are collectively referred to as aqueous solutions. It also includes a mixture of an organic solvent and water, which may be added as desired as a solvent or dispersion medium.
ポリアクリルアミドゲル膜の形成に用いることができる
アクリルアミド系化合物の例としては、アクリルアミド
、Ｎ−メチルアクリルアミド。Examples of acrylamide compounds that can be used to form polyacrylamide gel membranes include acrylamide and N-methylacrylamide.
Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ−（ヒドロキシメ
チル）アクリルアミド、ジアセトンアクリルアミド等の
アクリルアミド系化合物やメタクリルアミド等のメタク
リルアミド系化合物が挙げられ、これらの化合物は単独
で、あるいは二種以上を併用して用いることがてきる。Examples include acrylamide compounds such as N,N-dimethylacrylamide, N-(hydroxymethyl)acrylamide, and diacetone acrylamide, and methacrylamide compounds such as methacrylamide, and these compounds may be used alone or in combination of two or more. It can be used as
これらのアクリルアミ１〜県北合物のうもではアクリル
アミドか最も好ましく、またアクリルアミドと他のアク
リルアミド系化合物、メタクリルアミド系化合物の一種
以４二の併用も好ましい。For these acrylamides, acrylamide is most preferable, and a combination of acrylamide and one or more of other acrylamide compounds and methacrylamide compounds is also preferable.
架橋剤としてはｒ ＥｌｃｃＬｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
Ｊ １９８１．２゜２２０−２２８等上記載の公知の化
合物（一種または二種以上の組合せ）を用いることがで
きる。架橋剤の具体例としては、Ｎ、Ｎ’ −メチレン
ビスアクリルアミド（ＢＩＳ）；Ｎ、Ｎ“−プロピレン
ビスアクリルアミド（ＰＢＡ）、ジ（アクリルアミドジ
メチル）エーテル（ＤＡＥ）； ｌ、２−ジアクリルア
ミドエチレングリコール（ＤＥＧ）；エチレンウレアビ
スアクリルアミド（ＥＵＢ）；エチレンジアクリレート
（ＥＤＡ）、Ｎ、Ｎ’ −ジアリルタータルジアミド（
Ｎ、Ｎ’−ｄｉａｌｌｙｌｔａｒＬａｒｄｉａｓｉｄｅ
： ＤＡＴＤ） ；およびＮ、Ｎ’ −ビスアクリリ
ルシスタミン（Ｎ、Ｎ’−ｂｉｓａｃｒｙｌｙｌｃｙｓ
ｔａｍｉｎｅ。As a crosslinking agent, rElccLrophoresis
J 1981.2°220-228 and the like (one type or a combination of two or more types) of the known compounds described above can be used. Specific examples of crosslinking agents include N,N'-methylenebisacrylamide (BIS); N,N"-propylenebisacrylamide (PBA), di(acrylamide dimethyl) ether (DAE); l,2-diacrylamide ethylene glycol (DEG); ethylene ureabisacrylamide (EUB); ethylene diacrylate (EDA), N,N'-diallyltartardiamide (
N,N'-dialyltarLardiaside
: DATD); and N,N'-bisacrylylcystamine (N,N'-bisacrylylcystamine);
Tamine.
ＢＡＣ） ′：Ｊの二官渣性化合物か挙げられる。BAC)': Bifunctional residue compounds of J can be mentioned.
架橋剤の量は、単一を体と架橋剤の総ｉ′Ｉｆ量に対し
て約２〜３０ｗｔ％、好ましくは約３〜１０ｗｔ％の範
囲である。The amount of crosslinking agent ranges from about 2 to 30 wt%, preferably from about 3 to 10 wt%, based on the total i'If amount of single body and crosslinking agent.
ゲルＣ度としては、Ｓ 、 Ｉｔ ｊ ｅ ｒ ｔ ｃ
ｎ ： ｒ Ａ ｒ ｃ ｌ＋ 。The gel C degree is S, Itjertc
n: r A r c l+.
１１ｉｏｃｈｅｍ、 Ｂ’＋ｏｐｈｙｓ、 Ｊ
ｌ （５ｕｐｐ１． ）、 １４７（１９６２）
上記載の定義に従って表示して、単が体、架橋剤および
水からなるゲル膜の容積に対して、単量体と架橋剤の量
か約３ ｗ ／ ｖ％から約３０ ｗ ／ ｖ％の範囲
で好ましく用いられる。11iochem, B'+ophys, J
l (5upp1.), 147 (1962)
Expressed according to the above definition, the amount of monomer and crosslinker is about 3 w/v% to about 30 w/v%, based on the volume of the gel film consisting of monomer, crosslinker and water. It is preferably used within the range.
ポリアクリルアミドゲル膜に含有させる変性剤は、少な
くとも１個のカルバモイル基を持つ化合物であり、その
具体例としては、尿素、ホルムアミド等が挙げられる。The modifier contained in the polyacrylamide gel membrane is a compound having at least one carbamoyl group, and specific examples thereof include urea, formamide, and the like.
これらのうちで尿素が特に好ましく用いられる。変性剤
は、単量体と架橋剤とを含む水性ゲルの容積に対して、
約４０〜６０ｗ ｔ ／ ｖ％の範囲の剣で用いられる
。尿素を用いる場合には、単量体と架橋剤とを含む水性
ゲルｌ見に対し約６モル（約３６０ｇ）から飽和溶解量
まて、好ましくは約７モル（約４ｚｏｇ）から飽和溶解
量までの範囲の賃て用いることができる。Among these, urea is particularly preferably used. The modifier is
Used in swords in the range of approximately 40-60 wt/v%. When using urea, the amount is from about 6 mol (about 360 g) to a saturated dissolution amount, preferably from about 7 mol (about 4 zog) to a saturated dissolution amount per aqueous gel containing a monomer and a crosslinking agent. It can be used for a range of purposes.
ポリアクリルアミドゲル膜には水溶性ポリマーを含有さ
せることができる。The polyacrylamide gel membrane can contain a water-soluble polymer.
水溶性ポリマーとしては、付加重合型または縮毛金型の
水溶性ポリマーを用いることがてきる。As the water-soluble polymer, an addition polymerization type or curly-hair type water-soluble polymer can be used.
付加重合型ポリマーの、ｒ４体例としては、ポリビニル
アルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミ
ド笠の非ｒオン性水溶性ポリマーが挙げられる。縮重合
型ポリマーの具体例としてポリエチレングリコール、ポ
リプロピレングリコール等の非イオン性水溶性ポリアル
キレングリコールか挙げられる。水溶性ポリマーの分子
量は、約１万から約１００万の範囲のものが好ましい。Examples of the r4 polymer addition polymer include non-r-ion water-soluble polymers such as polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, and polyacrylamide caps. Specific examples of condensation polymers include nonionic water-soluble polyalkylene glycols such as polyethylene glycol and polypropylene glycol. The molecular weight of the water-soluble polymer preferably ranges from about 10,000 to about 1,000,000.
これらの水溶性ポリマーのうちでは、ポリエチレングリ
コール、ポリアクリルアミドか特に好ましい。Among these water-soluble polymers, polyethylene glycol and polyacrylamide are particularly preferred.
水溶性ポリマーは、単量体と架橋剤の合計玉量に対して
約２ｗｔ％から約１００ ｗ ｔ％の範囲、好ましくは
約５ ｗ ｔ％から約５０ ｗ ｔ％の範囲のかて用い
られる。水溶性ポリマーを添加することにより、ポリア
クリルアミドゲル膜は可塑性を有するようになるため、
裁断加工時に壊れることがなくなり、またゲル膜は乾燥
時にも可塑性を有するようになり、もろさか改良され、
壊れにくくなるとの利点かある。また、水溶性ポリマー
の分子量、および添加賃を選択することにより、ゲル膜
の粘度をコントロールすることもできる。The water-soluble polymer is used in an amount ranging from about 2 wt% to about 100 wt%, preferably from about 5 wt% to about 50 wt%, based on the total amount of monomer and crosslinker. By adding a water-soluble polymer, the polyacrylamide gel membrane becomes plastic, so
It no longer breaks during the cutting process, and the gel film has plasticity even when drying, improving its brittleness.
It has the advantage of being less likely to break. Furthermore, the viscosity of the gel film can be controlled by selecting the molecular weight of the water-soluble polymer and the additive amount.
ポリアクリルアミドゲル１すにはアガロースを含有させ
ることができる。アガロースは公知のアガロースであれ
ば特に制限はなく、低電気浸透性、中電気浸透性、高電
気浸透性アガロースのいずれをも用いることができる。The polyacrylamide gel 1 can contain agarose. The agarose is not particularly limited as long as it is a known agarose, and any of low electroosmotic, medium electroosmotic, and high electroosmotic agaroses can be used.
用いることのてきるアガロースの例としては特開昭５５
−５７３０号、特開昭５５−１１０９４６号、特表昭５
７−５０２０９８号等の公報に開示されているアガロー
ス等がある。An example of agarose that can be used is JP-A-55
-5730, Japanese Patent Publication No. 55-110946, Special Publication No. 1973
Examples include agarose disclosed in publications such as No. 7-502098.
アガロースは、中量体と架橋剤とを含むゲル組成液の容
積に対して約０．２ｗ／ｖ％から約２ ｗ ／ ｖ％、
好ましくは約０．３ｗ／ｖ％から約１．２ｗ／ｖ％の割
合にて添加される。ゲル膜にアガロースを添加すること
により、ゲル形成用溶液温度を変化させることにより、
適当な溶液粘度にコントロールすることが可能となり、
その流動性を市めることができ、またゲル膜を成形する
時には成形しやすくなるとの利点かある。Agarose is about 0.2 w/v% to about 2 w/v%, based on the volume of the gel composition solution containing the intermediate and the crosslinking agent.
It is preferably added at a rate of about 0.3 w/v% to about 1.2 w/v%. By adding agarose to the gel membrane and changing the temperature of the gel forming solution,
It becomes possible to control the solution viscosity to an appropriate level,
It has the advantage of being able to maintain its fluidity and making it easier to mold a gel film.
ポリアクリルアミドゲル膜にはｐＨ１ａ衝剤を含有させ
ることができる。緩衝剤としては、ｐＨ８，０から１０
．０、好ましくはｐＨ８，０から９．０の範囲内のｐＨ
値に緩衝できる緩衝剤であれば、いずれをも用いること
ができる。用いうる緩衝剤としては、１１本化学会編ｒ
化学便覧 基礎編１（東京、丸み輛１９６６年発行）
１３１２−１コ２０頁：ｒ Ｄａｔａ Ｆｏｒ Ｒｉｏ
ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｊ （Ｒ，Ｍ、
Ｃ。The polyacrylamide gel membrane can contain a pH 1a buffer. As a buffer, pH 8.0 to 10
．． 0, preferably within the range of pH 8.0 to 9.0
Any buffering agent that can buffer the value can be used. As buffering agents that can be used, there are 11 books compiled by the Chemical Society of Japan.
Chemistry Handbook Basic Edition 1 (Tokyo, published by Marumida 1966)
1312-1 page 20: r Data For Rio
chemical research J (R,M,
C.
Ｄａｗｓｏｎ ｃＬ ａｔ ｇ 第２版、 ０ｘｆ
ｏｒｄ ａＬ ｔｈｅ Ｃ１ａｒｃｎｄｏｎ Ｐｒｅｓ
ｓ、１９６９年発行） ４７６−５０８ベージ；ｒ
ＲｉｏｃｈｅｍｉｓＬｒｙ Ｊ、５，４６７（１９６６
） ；ｒ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ 旧ｏｃｈｅｖｉ
ｓＬｒｙ Ｊ １０４．：１０ロー３１０（＋９８
０）等の刊行物上記載の緩衝剤があげられる。そして、
その具体例としてはトリス（ヒドロキシメチル）アミノ
メタン（Ｔｒｉｓ） ［ＣへＳ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ
Ｎ。Dawson cL at g 2nd edition, 0xf
ord aL the C1arcndon Pres.
s, published in 1969) 476-508 pages; r
Riochemis Lry J, 5,467 (1966
) ;r Analytical old ochevi
sLry J 104. :10 low 310 (+98
Examples include buffers described in publications such as No. 0). and,
A specific example is tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris) [C to S Registry
N.
７７−８６−１１ 、 Ｎ、 Ｎ−ビス（２−ヒドロキ
シエチル）グリシン（［１ｉｃｉｎｃ） 、 Ｎ −２
−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎｏ−２−ヒドロキシ
プロパン−３−スルホン酸のＮａ塩またはに塩等、Ｎ−
２−ヒトロキシエチルビベラジンーＮ’ −３−プロパ
ンスルホン酸のＮａ塩またはｙｃ１１！！３．Ｎ−［ト
リス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパ
ンスルホン酸のＮａ塩またはに塩および、これらのいず
れかと必要により組合せられる酸、アルカリまたは塩等
をあげることができる。77-86-11, N, N-bis(2-hydroxyethyl)glycine ([1icinc), N-2
-Hydroxyethylpiperazine-No-2-hydroxypropane-3-sulfonic acid Na salt or Ni salt, etc., N-
Na salt of 2-hydroxyethylbiverazine-N'-3-propanesulfonic acid or yc11! ! 3. Examples include the Na salt or di-salt of N-[tris(hydroxymethyl)methyl]-3-aminopropanesulfonic acid, and acids, alkalis, or salts combined with any of these as necessary.
特に好ましい緩衝剤の例としてはＴｒｉｓ、ホウ酸およ
びＥＤＴＡ・２Ｎａ塩の組合せ（ｐＨ８，３）かある。An example of a particularly preferred buffer is a combination of Tris, boric acid and EDTA.2Na salt (pH 8.3).
未発ＩＪ１においてポリアクリルアミドゲル膜はアクリ
ルアミドに代表される単量体、二官億性のアリル（ａｌ
ｌｙｌ ）化合物またはアクリル化合物（架橋剤）、水
溶性ポリマー、およびアガロースを実質的に均一に溶解
させた水溶液中で単量体と架橋剤とをラジカル架橋重合
させて得られるものであり、単；−，４２体と架橋剤か
ら形成された三次元架橋重合体に水溶性ポリマーとアガ
ロースが実質的に分散されて、後二者のポリマー釦が三
次元架橋重合体とがらみあっている構造を有すると推定
される。In undeveloped IJ1, the polyacrylamide gel membrane is composed of monomers represented by acrylamide, difunctional allyl (al
lyl) compound or an acrylic compound (crosslinking agent), a water-soluble polymer, and agarose are substantially uniformly dissolved in an aqueous solution. It has a structure in which a water-soluble polymer and agarose are substantially dispersed in a three-dimensional cross-linked polymer formed from a -,42 body and a cross-linking agent, and the latter two polymer buttons are entangled with the three-dimensional cross-linked polymer. It is estimated that
上記のラジカル架４６ｍ合反応は、分子状酸素の不存在
下て過酸化物の存在および／または紫外線照射笠の公知
の方法により発生させることができる。この反応を加熱
および紫外線照射により加速することもできる。The above-mentioned radical bridge 46m combination reaction can be caused by a known method in the absence of molecular oxygen, in the presence of peroxide, and/or in the presence of ultraviolet irradiation. This reaction can also be accelerated by heating and UV radiation.
ラジカル架橋重合用触媒としては、ｒ Ｅｌｃｃｔｒ
。As a catalyst for radical crosslinking polymerization, rElcctr
.
ｐｈｏｒｅｓｉｓＪ １９８１．２．２１：ｌ−２１９
，同１９８１．２．２２０−２２８：青水、永井編［最
新電気泳動法Ｊ （１’１７３年発行）等上記載の公
知の低温ラジカル重合開始剤のうちから適宜選択して用
いることができる。phoresisJ 1981.2.21:l-219
, 1981.2.220-228: Aomizu, Nagai eds. [Latest Electrophoresis Method J (1'173 issue), etc. The low temperature radical polymerization initiators described above can be appropriately selected and used.
好ましいラジカル重合開始剤の具体例としては、β−シ
メチルアミノブロピ才二トリル（ＤＭＡＰＮ）−ベルオ
クソニ硫酸アンモニウム混合物。A specific example of a preferable radical polymerization initiator is a β-dimethylaminopropylene nitrile (DMAPN)-beroxonisulfate ammonium mixture.
Ｎ、Ｎ、Ｎ’ 、Ｎ’ −テトラメチルエチレンジアミ
ン（ＴＥＭＥＤ）−ベルオクソニ硫酸アンモニウム混合
物、ＴＥＭＥＤ−リボフラビン混合物、ＴＥＭＥＤ−リ
ボフラビン−ｉＭ酸化水素混合物と紫外線照射の組合せ
等が挙げられる。ラジカル重合開始剤の含有發は、中量
体と架橋剤の合計重量に対して約０．３〜５ ＋１’？
、 ＋１′ｃ％、そして好ましくは約０．５〜３ Ｔｉ
−＋１’ｉ％の範囲である。Examples include combinations of N, N, N', N'-tetramethylethylenediamine (TEMED)-beroxonisulfate mixture, TEMED-riboflavin mixture, TEMED-riboflavin-iM hydrogen oxide mixture and ultraviolet irradiation. The content of the radical polymerization initiator is approximately 0.3 to 5 +1' to the total weight of the intermediate and crosslinking agent.
, +1'c%, and preferably about 0.5-3 Ti
-+1'i% range.
ゲル媒体層は、支持体りの前記の樹脂中間層の七に直接
あるいは接若剤層などの他の中間層を介して上記のゲル
形成液を公知の方法により塗布して設けたのち、ゲル形
成液を架橋重合させることにより形成することがてきる
。The gel medium layer is formed by applying the above-mentioned gel-forming liquid directly or through another intermediate layer such as an attractive agent layer to the above-mentioned resin intermediate layer of the support by a known method. It can be formed by cross-linking polymerizing a forming liquid.
ゲル形成液を支持体の表面で架橋重合させる場合には、
ゲル形成液塗布層のＬをさらにカバーフィルム、シート
または板などの被覆材料でおおうことができる。この目
的に使用されるカバーフィルム、シート、または板とし
ては前記支持体と同様な素材からなり、更に支持体同様
、酸素透過渣を低下させているものを用いることができ
る。この被覆材料の厚さは３００ｇｍ以下であり、実用
的に好ましい厚さの範囲は約４〜２００ｇｍであり、特
に好ましい範囲は約４ルｍ〜１００ルｍである。When cross-linking and polymerizing the gel-forming liquid on the surface of the support,
The gel-forming liquid coating layer L can be further covered with a covering material such as a cover film, sheet or plate. The cover film, sheet, or plate used for this purpose may be made of the same material as the support and, like the support, has reduced oxygen permeation residue. The thickness of this coating material is less than 300 gm, with a practically preferred thickness range of about 4 to 200 gm, and a particularly preferred range of about 4 to 100 gm.
ポリアクリルアミドゲル膜には、必要に応じて抗酸化剤
などの他の添加剤を含有させることができる。抗酸化剤
としては、ゲル膜に配合しうろことが知られている種々
の化合物を用いることができる。抗酸化剤の具体例とし
てはジチオスレイトール、２−メルカプトエタノールを
挙げることができる。The polyacrylamide gel film may contain other additives such as an antioxidant, if necessary. As the antioxidant, various compounds known to be incorporated into the gel film can be used. Specific examples of antioxidants include dithiothreitol and 2-mercaptoethanol.
その他の添加剤としては湿潤剤があり、ポリアクリルア
ミドゲル膜にはグリセリン、エチレングリコール等のポ
リオール化合物を含有させることもてきる。ポリオール
化合物の含有ツ正は、ゲル膜の容桔に対して約５〜約４
０ ｗ ／ ｖ％の範囲から選ばれる。ポリオール化合
物のうちてはグリセリンか特に好ましい。湿潤剤を配合
することによりゲル膜の保存時の極端な水分の蒸発によ
る乾燥を防ぐことが可ずｔとなり、また極端な乾燥に起
因するもろさを防ぎ、ひびわれを防ぐ等のゲル膜の物性
か改みされるとの利点かある。Other additives include wetting agents, and the polyacrylamide gel membrane can also contain polyol compounds such as glycerin and ethylene glycol. The content ratio of the polyol compound is about 5 to about 4 with respect to the volume of the gel membrane.
Selected from a range of 0 w/v%. Among the polyol compounds, glycerin is particularly preferred. By adding a wetting agent, it is not possible to prevent the gel film from drying out due to extreme water evaporation during storage, and it also improves the physical properties of the gel film, such as preventing brittleness caused by extreme dryness and preventing cracking. There are advantages to being revised.
本発明の電気泳動用ル奴体材料は、重連の諸文献等上記
載の公知の方法に従って、水ト型および垂直型平板電気
泳動法、ディスク電気泳動泳動状等のいずれにも用いる
ことができる。The electrophoresis material of the present invention can be used for both horizontal plate electrophoresis, vertical plate electrophoresis, disk electrophoresis, etc., according to the known methods described above in various publications. can.
以Ｆに本発明の実施例を記載するが、これらは本発明の
範囲を限定するものてはない。Examples of the present invention are described below, but these are not intended to limit the scope of the present invention.
［実施例１］
紫外線照射処理により表面を親木性にした厚さ１８０ｐ
ｍの無色透明ポリエチレンテレフタレートシート（支持
体）上に、塩化ビニリデン・塩化ビニル（９：ｌ）共重
合体のラテックス（この塩化ビニリデン・塩化ビニル（
９：ｌ）共重合体の層厚２０ｇｍに形成したフィルムの
状態における１ｖ素透過かは約５ｃｃ／ｍ２ー ａｔｅ
・ｄａｙ ）を１１１１Ｄして、層厚が約５ｐｍの樹
脂層を形成した。[Example 1] Thickness 180p with surface made wood-friendly by ultraviolet irradiation treatment
A latex of vinylidene chloride/vinyl chloride (9:1) copolymer (this vinylidene chloride/vinyl chloride (
9:l) The 1V elementary permeability of a film formed with a copolymer layer thickness of 20gm is approximately 5cc/m2-ate.
・day) was 1111D to form a resin layer having a layer thickness of about 5 pm.
上記の樹脂層か付設された支持体の酸素透過係数は４Ｃ
ｃ／ｒｎ′・ａＬ烏・ｄａｙであった。The oxygen permeability coefficient of the support with the above resin layer attached is 4C
It was c/rn'・aLkarasu・day.
支持体上に設けられた樹脂層のＬに、アクリルアミド７
．６０ｇ、８１３４００ｍｇ、リボフラビン（０，２５
ｗＬ％水溶液）１．５ｍＭ、尿素４２ｇ、 トリス（
ヒドロキシメチル）アミノメタン［ＣＡＳ Ｒｅｇｉ
ｓｔｒｙ Ｎｏ、 ７７−８６−１ ］ １ 、２１ｇ
、ホウ酸０゜６５４ｇおよびＥＤＴＡ ・２Ｎａ１１！
７５ ｍ Ｋを含有する１００ｍ文の溶液に重合開’Ｉ
ｆ剤としてベルオクソニ硫酸アンモニウム（５ｗｔ％）
１．３ｍｉ、ＴＥＭＥＤ３３．Ｕを加えたものを０．３
ｍｍの厚みに塗布成形し、１００Ｗ高圧水銀灯を１０ｃ
ｍの距離から照射し、１０分間静置しポリアクリルアミ
ドゲル膜を得た。Acrylamide 7 is added to L of the resin layer provided on the support.
．． 60g, 813400mg, riboflavin (0,25
wL% aqueous solution) 1.5mM, urea 42g, Tris (
Hydroxymethyl)aminomethane [CAS Regi
try No. 77-86-1] 1, 21g
, boric acid 0°654g and EDTA ・2Na11!
Polymerization in a 100 m solution containing 75 m K
Ammonium belloxonisulfate (5wt%) as f agent
1.3mi, TEMED33. 0.3 plus U
Coating and molding to a thickness of mm, and applying a 100W high pressure mercury lamp to a 10c
It was irradiated from a distance of m and allowed to stand for 10 minutes to obtain a polyacrylamide gel film.
［比較例１］
ポリエチレンテレフタレートシート（支持体）にに、塩
化ビニリデン・塩化ビニル（９：ｌ）共重合体の塗布層
を設けなかったこと以外は実施例１と同様にして支持体
上にポリアクリルアミドゲル膜を形成した。[Comparative Example 1] A polyethylene terephthalate sheet (support) was coated with polyethylene terephthalate on a support in the same manner as in Example 1, except that a coating layer of vinylidene chloride/vinyl chloride (9:1) copolymer was not provided on the polyethylene terephthalate sheet (support). An acrylamide gel membrane was formed.
なお、上記の支持体の酸素透過係数は１７ｃｃ／ ｒｒ
ｒ’ ・ａｓｓ −ｄａｙであった。In addition, the oxygen permeability coefficient of the above support is 17cc/rr
It was r' ・ass -day.
［参考例１］
支持体としてポリエチレンテレフタレートシートの代り
にガラス板を用い、塩化ビニリデン・塩化ビニル（９：
ｌ）共重合体の塗布層を設けなかったこと以外は実施例
１と同様にして支持体」二にポリアクリルアミドゲル膜
を形成した。[Reference Example 1] Using a glass plate instead of a polyethylene terephthalate sheet as a support, vinylidene chloride/vinyl chloride (9:
l) A polyacrylamide gel film was formed on the support in the same manner as in Example 1 except that the copolymer coating layer was not provided.
［電気泳動試験］
実に例１、比較例１および参考例１て得られたポリアク
リルアミドゲル膜にサンプル注入［］を形成し１次いて
ゲル膜に厚さ６３ｐｍのポリエチレンテレフタレートシ
ート（カバーシート）をかぶせた。[Electrophoresis test] Sample injection [ ] was formed on the polyacrylamide gel membranes obtained in Example 1, Comparative Example 1, and Reference Example 1, and then a polyethylene terephthalate sheet (cover sheet) with a thickness of 63 pm was placed on the gel membrane. Covered.
このポリアクリルアミドゲル膜を使用して、ジデオキシ
法により調製された試料を電気泳動にかけ、ＤＮＡ塩基
配列決定の実験を行なった。Using this polyacrylamide gel membrane, a sample prepared by the dideoxy method was subjected to electrophoresis to conduct a DNA base sequencing experiment.
すなわち、電気泳動終了後に、ゲル膜に対して一８０°
Ｃてオートラジオグラフィー処理を常法に従って行ない
、得られた泳動パターンの可視画像にノ、（いてＤＮＡ
塩基配列の決定操作を行なった。In other words, after electrophoresis, the gel membrane is rotated at 180°.
The autoradiography process was carried out according to a conventional method, and the visible image of the electrophoresis pattern obtained was
The nucleotide sequence was determined.
実施例１および参照例１のゲル膜により得られた泳動パ
ターンは高い解像力（実施例１のゲル膜における塩基解
読数：１９８．参照例１のゲル膜における塩基解°読数
：１９２）を示し、解読が容易であった。一方、比較例
１のゲル１漠により得られた泳動パターンの解像力は、
実施例１および参照例１のゲル膜により得られた泳動パ
ターンの解像力に比較して低く、塩基解読数も１３１と
低かった。The migration patterns obtained with the gel membranes of Example 1 and Reference Example 1 showed high resolution (number of bases read in the gel membrane of Example 1: 198; number of bases read in the gel membrane of Reference Example 1: 192). , which was easy to decipher. On the other hand, the resolution of the migration pattern obtained with Gel 1 of Comparative Example 1 was as follows:
The resolving power of the migration pattern obtained with the gel membranes of Example 1 and Reference Example 1 was lower than that, and the number of bases decoded was also low at 131.
［実施例２］
支持体Ｊ二に設ける中間樹脂層をポリアクリロニトリル
（このポリアクリロニトリルの層厚２０ＪＬｍに形成し
たフィルムの状態におけるｉ？素素通過量約２ＣＣ／ｒ
ｎ′・ａＬＩＩ−ｄａｙ）から、厚さをｉ。[Example 2] The intermediate resin layer provided on the support J2 is made of polyacrylonitrile (the i?element passing rate in the state of a film formed to a layer thickness of 20 JLm) is approximately 2 CC/r.
n'・aLII-day), the thickness is i.
ｇｍの層として形成した以外は実施例１と同様にして中
間樹脂層を有する支持体を形成した。A support having an intermediate resin layer was formed in the same manner as in Example 1 except that it was formed as a gm layer.
Ｌ記の樹脂層か付設された支持体の酸素透過係数は２
ｃ ｃ ／ｒｎ’ ・ａＬｍ −ｄａｙであった。The oxygen permeability coefficient of the support attached with the resin layer of L is 2
c c /rn' ·aLm -day.
次いて、１−記支持体上に中間樹脂層の−Ｌに実施例１
と同様にしてポリアクリルアミドゲル膜を形成した。Next, Example 1 was applied to -L of the intermediate resin layer on the support described in 1-.
A polyacrylamide gel membrane was formed in the same manner as described above.
［電気泳動試験］
実施例２、比較例１および参考例１で得られたポリアク
リルアミドゲル膜にサンプル注入口を形成し、次いてゲ
ル膜に厚さ５０７ｚｍのポリエチレンテレフタレートシ
ート（カバーシート）をかぶせた。[Electrophoresis test] A sample injection port was formed in the polyacrylamide gel membrane obtained in Example 2, Comparative Example 1, and Reference Example 1, and then a polyethylene terephthalate sheet (cover sheet) with a thickness of 507 zm was covered over the gel membrane. Ta.
Ｌ記のポリアクリルアミドゲル膜を使用して、コ２ Ｐ
−Ｄ Ｎ Ａをマキサム・ギルバート分解した試料を
電気泳動にかけ、ＤＮＡ塩基配列決定の実験を行なった
。Using the polyacrylamide gel membrane described in L,
- A sample of DNA subjected to Maxam-Gilbert digestion was subjected to electrophoresis, and an experiment was conducted to determine the DNA base sequence.
すなわち、電気泳動終了後に、ゲル膜に対して−８０’
Ｃてオートラジオグラフィー処理を常法に従って行ない
、得られた泳動パターンの可視画像に基いてＤＮＡ塩基
配列の決定操作を行なった。That is, after electrophoresis, -80'
Autoradiography was carried out according to a conventional method, and the DNA base sequence was determined based on the visible image of the electrophoresis pattern obtained.
実施例２８よび参照例１のゲル膜により得られた泳動パ
ターンは高い解像力（実施例１のゲル膜における塩基解
読数：６５．参照例１のゲル膜における塩基解読数二６
１）を示し、解読か容易てあった。一方、比較例１のゲ
ル膜により得られた泳動パターンの解像力は、実施例１
および参照例１のゲル膜により得られた泳動パターンの
解像力に比較して低く、塩基解読数も４１と低かった。The migration patterns obtained with the gel membranes of Example 28 and Reference Example 1 have high resolution (number of bases decoded in the gel membrane of Example 1: 65; number of bases decoded in the gel membrane of Reference Example 1: 26).
1) and was easy to decipher. On the other hand, the resolution of the migration pattern obtained with the gel membrane of Comparative Example 1 was
The resolution of the electrophoretic pattern obtained with the gel membrane of Reference Example 1 was low, and the number of bases decoded was also low at 41.
Claims (1)
架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲルからな
り、変性剤として少なくとも１個のカルバモイル基をも
つ化合物を含む電気泳動用媒体層およびプラスチック材
料製支持体を含む電気泳動用媒体材料であって、該電気
泳動用媒体層と支持体層との間に、該支持体材料よりも
酸素透過係数が低い樹脂材料からなる樹脂中間層が備え
られていることを特徴とする電気泳動用媒体材料。 ２、上記樹脂中間層か０．５〜２０μｍの層厚を有する
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の電気泳動
用媒体材料。 ３、上記樹脂中間層が、層厚２０μｍに形成したフィル
ムの状態における酸素透過量が１５ｃｃ／ｍ＾２・ａｔ
ｍ・ｄａｙ以下の樹脂材料よりなることを特徴とする特
許請求の範囲第１項記載の電気泳動用媒体材料。 ４、上記樹脂中間層が、塩化ビニリデン・塩化ビニル共
重合体、ポリビニルアルコール、ポリアクリロニトリル
、ポリ塩化ビニリデン、ビニルアルコール・エチレン共
重合体、塩化ビニリデン・アクリロニトリル共重合体、
およびアクリロニトリル・メチルアクリレート・ブタジ
エン共重合体からなる酸素低透過性樹脂材料を含むこと
を特徴とする特許請求の範囲第１項記載の電気泳動用媒
体材料。 ５、上記樹脂中間層が上記支持体に塗布により形成され
ており、かつ該樹脂中間層と支持体とが形成する積層体
の酸素透過量が、１０ｃｃ／ｍ＾２・ａｔｍ・ｄａｙ以
下であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
電気泳動用媒体材料。 ６、プラスチック材料製支持体がポリエチレンテレフタ
レートからなることを特徴とする特許請求の範囲第１項
記載の電気泳動用媒体材料 ７、上記電気泳動用媒体層がさらに水溶性ポリマーおよ
びアガロースを含むことを特徴とする特許請求の範囲第
１項乃至第６項のいずれかの項記載の電気泳動用媒体材
料。 ８、上記変性剤が尿素またはホルムアミドであることを
特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第６項のいずれか
の項記載の電気泳動用媒体材料。[Scope of Claims] 1. Electrophoresis consisting of an aqueous polyacrylamide gel obtained by crosslinking polymerization of an acrylamide compound and a crosslinking agent in the presence of water, and containing a compound having at least one carbamoyl group as a denaturing agent. A media material for electrophoresis comprising a media layer for electrophoresis and a support made of a plastic material, the material being made of a resin material having an oxygen permeability coefficient lower than that of the support material between the media layer for electrophoresis and the support layer. An electrophoretic medium material comprising a resin intermediate layer. 2. The electrophoretic medium material according to claim 1, wherein the resin intermediate layer has a layer thickness of 0.5 to 20 μm. 3. The resin intermediate layer has an oxygen permeation rate of 15 cc/m^2・at in the state of a film formed to a layer thickness of 20 μm.
2. The electrophoretic medium material according to claim 1, characterized in that it is made of a resin material having a particle diameter of m·day or less. 4. The resin intermediate layer is made of vinylidene chloride/vinyl chloride copolymer, polyvinyl alcohol, polyacrylonitrile, polyvinylidene chloride, vinyl alcohol/ethylene copolymer, vinylidene chloride/acrylonitrile copolymer,
and a low oxygen permeability resin material comprising acrylonitrile/methyl acrylate/butadiene copolymer. 5. The resin intermediate layer is formed by coating on the support, and the oxygen permeation rate of the laminate formed by the resin intermediate layer and the support is 10 cc/m^2・atm・day or less. The electrophoretic medium material according to claim 1, characterized in that: 6. Electrophoresis medium material 7 as set forth in claim 1, wherein the support made of a plastic material is made of polyethylene terephthalate, and the electrophoresis medium layer further contains a water-soluble polymer and agarose. An electrophoretic medium material according to any one of claims 1 to 6, characterized by: 8. The electrophoretic medium material according to any one of claims 1 to 6, wherein the denaturing agent is urea or formamide.
Priority Applications (4)
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|---|---|---|---|
| JP61090622A JPS62247242A (en) | 1986-04-19 | 1986-04-19 | Medium material for electrophoresis |
| US07/040,486 US4897306A (en) | 1986-04-19 | 1987-04-20 | Medium for electrophoresis |
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| DE8787303480T DE3771571D1 (en) | 1986-04-19 | 1987-04-21 | ELECTROPHORESE MEDIUM. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61090622A JPS62247242A (en) | 1986-04-19 | 1986-04-19 | Medium material for electrophoresis |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
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Country Status (1)
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|---|---|
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0257962A (en) * | 1988-04-29 | 1990-02-27 | At Biochem | Electrophoretic medium |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07196113A (en) * | 1993-12-29 | 1995-08-01 | Murata Mach Ltd | Conveyor |
-
1986
- 1986-04-19 JP JP61090622A patent/JPS62247242A/en active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0257962A (en) * | 1988-04-29 | 1990-02-27 | At Biochem | Electrophoretic medium |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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