JPH0556821B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分野］ 本発明は、電気泳動用媒体材料に関するもので
あり、さらに詳しくは特に蛋白質等の生体高分子
成分の電気泳動分析に使用するのに適した電気泳
動用媒体材料に関するものである。[Detailed Description of the Invention] [Field of the Invention] The present invention relates to an electrophoretic medium material, and more particularly to an electrophoretic medium material suitable for use in electrophoretic analysis of biopolymer components such as proteins. This relates to media materials for use.

［発明の背景］ 電気泳動分析の代表的な態様としては、ガラス
板支持体に寒天、セルロース、セルロースアセテ
ート、デンプン、シリカゲル、ポリアクリルアミ
ド等の膜形成材料を塗布または流延して製造した
電気泳動膜に緩衝液をしみこませ、この上に分析
対象の物質を付着させ、支持体の両端に電圧をか
け、支持体の上または内部で展開（移動）させた
のち、染色し、この染色した試料の光学濃度を測
定して物質の各成分の定量分析を行なう態様を挙
げることができる。[Background of the Invention] A typical embodiment of electrophoretic analysis is electrophoresis produced by coating or casting a film-forming material such as agar, cellulose, cellulose acetate, starch, silica gel, or polyacrylamide on a glass plate support. The membrane is impregnated with a buffer solution, the substance to be analyzed is attached onto it, a voltage is applied to both ends of the support, it is developed (moved) on or within the support, and then dyed, and this stained sample One example is an embodiment in which each component of a substance is quantitatively analyzed by measuring the optical density of the substance.

このような電気泳動分析および電気泳動膜の詳
細については、電気泳動学会編「電気泳動実験法
（改訂第５版）」（文光堂、1975年発行）、青本、永
井編著「最新電気泳動法」（広川書店、1973年発
行）等に記載されている。 For details on such electrophoretic analysis and electrophoretic membranes, please refer to "Electrophoresis Experimental Methods (Revised 5th Edition)" edited by the Electrophoresis Society (Bunkodo, published in 1975), "Latest Electrophoresis" edited by Aomoto and Nagai. Law” (Hirokawa Shoten, published in 1973), etc.

近年において、電気泳動法は生体成分の分析に
多用されており、特に蛋白分析は病気診断のため
の生化学検査において頻繁に用いられている。 In recent years, electrophoresis has been frequently used to analyze biological components, and protein analysis in particular is frequently used in biochemical tests for disease diagnosis.

電気泳動用膜またはシートとしては古くから濾
紙が用いられていたが、上述のように性能上の面
から最近はアガロース膜やポリアクリルアミドゲ
ル膜が用いられるようになり、特に分子ふるい効
果を有するポリアクリルアミドゲル膜は現在最も
多く利用されている。 Filter paper has been used as a membrane or sheet for electrophoresis for a long time, but as mentioned above, agarose membranes and polyacrylamide gel membranes have recently been used from the viewpoint of performance. Acrylamide gel membranes are currently most commonly used.

ポリアクリルラミドゲル膜は、アクリルアミド
のような単量体を、重合触媒の存在下、Ｎ，
N′−メチレンビスアクリルアミドのような二官
能性の架橋剤で酸素不存在条件下で重合架橋させ
ることによつて得られている。 Polyacrylamide gel membranes are made by combining monomers such as acrylamide with N,
It is obtained by polymerization crosslinking in the absence of oxygen using a difunctional crosslinking agent such as N'-methylenebisacrylamide.

なお、ポリアクリルアミドゲル膜の製造に際し
ては変性剤として陰イオン界面活性剤が添加され
ることが多いが、蛋白質分析用ゲル膜の製造にお
いては、変性剤の必要量が少ないため、湿潤ゲル
膜に変性剤水溶液を塗布する方法、ゲル膜を変性
剤水溶液に浸漬する方法等によりゲル膜内に変性
剤を含浸させることができる。 Anionic surfactants are often added as denaturing agents when producing polyacrylamide gel membranes, but in the production of gel membranes for protein analysis, the amount of denaturing agent required is small, so it is not necessary to add denaturing agents to wet gel membranes. The modifier can be impregnated into the gel film by a method of applying an aqueous modifier solution, a method of immersing the gel film in an aqueous modifier solution, or the like.

上記の重合反応はラジカル架橋重合であり、酸
素の影響により反応が阻害されるため、ポリアク
リルアミドゲル膜は酸素を遮断した状態で調製す
る必要がある。この理由から、現在では一般に、
ポリアクリルアミドゲル膜は２枚のガラス板で形
成されたセル（一定の空間、たとえば約0.3〜１
mm厚の空間を有するもの）の中にゲル形成液を注
入し、酸素を遮断した状態で架橋重合させてゲル
膜を形成させている。しかし、この方法は二枚の
ガラス板の間でゲル膜を形成するために、取り扱
い性が悪く、かつゲル膜の量産化が困難であると
いつた大きな欠点を有している。 The above polymerization reaction is radical crosslinking polymerization, and since the reaction is inhibited by the influence of oxygen, the polyacrylamide gel membrane must be prepared in a state where oxygen is blocked. For this reason, it is now generally
The polyacrylamide gel membrane consists of a cell formed by two glass plates (a certain space, e.g. about 0.3 to 1
A gel-forming solution is injected into the membrane (with a space of mm thickness) and cross-linked and polymerized while blocking oxygen to form a gel film. However, since the gel film is formed between two glass plates, this method has major drawbacks such as poor handling and difficulty in mass-producing the gel film.

以上のようにして形成したポリアクリルアミド
ゲル膜を電気泳動媒体として用いる電気泳動操作
は、たとえば、次のようにして実施される。 An electrophoresis operation using the polyacrylamide gel membrane formed as described above as an electrophoresis medium is carried out, for example, as follows.

サンプルスロツトが上端部に設けられたポリア
クリルアミドゲル膜をガラス板に挟んだままの状
態で垂直に配置し、まず前電気泳動操作を行なつ
たのち、サンプルスロツト中に試料を一定量注入
し、次いで電気泳動操作を行なう。そして一定時
間の電気泳動を行なつた後、片面のガラス板を注
意深く除去し、染色液中に浸漬して、泳動分離し
た蛋白質もしくはその誘導体、分解物などを染色
して、泳動パターンを画像化する。 A polyacrylamide gel membrane with a sample slot at the top end is placed vertically between glass plates, and after a pre-electrophoresis operation is performed, a fixed amount of sample is injected into the sample slot. Then, electrophoresis is performed. After performing electrophoresis for a certain period of time, one side of the glass plate is carefully removed and immersed in a staining solution to stain the electrophoretically separated proteins, their derivatives, decomposition products, etc., and the electrophoresis pattern is imaged. do.

従来のアクリルアミドゲル膜を用いた電気泳動
媒体材料は上記のようにガラス板を用いるために
取り扱い性に問題があり、しばしばガラスを割つ
たりして実験を失敗することがある。この様な欠
点を改良した取り扱い性の良好な電気泳動用媒体
材料の開発は既にすすめられ、支持体としてポリ
エチレンテレフタレートなどのプラスチツク材料
からなる支持体を用い、その上にアクリルアミド
系化合物と架橋剤とを含む水溶液を塗布して塗布
層を形成し、次いで窒素雰囲気のような酸素を遮
断した状態で高圧水銀灯などを用いてその塗布層
表面に紫外線を照射し、架橋重合させポリアクリ
ルアミドゲル膜を生成させる方法が既に提案され
ている。 Conventional electrophoresis media materials using acrylamide gel membranes use glass plates as described above, which poses problems in handling, and experiments often fail due to broken glass. The development of electrophoretic media materials with improved handling properties that have improved these shortcomings has already been promoted. A coating layer is formed by applying an aqueous solution containing the following: Next, the surface of the coating layer is irradiated with ultraviolet rays using a high-pressure mercury lamp in a nitrogen atmosphere or other oxygen-blocking state to cause crosslinking and polymerization to form a polyacrylamide gel film. A method to do this has already been proposed.

上記のプラスチツク材料製の支持体を用いた電
気泳動媒体材料は、その製造が容易で、取り扱い
性も良いとの利点を有する。そして、蛋白質など
の電気泳動も、その電気泳動媒体材料を用いて行
なうことができるが、本発明者が詳細に検討した
ところによると、支持体としてガラス板を用いて
製造した従来の電気泳動媒体材料に比較すると、
その解像力が若干低下する傾向があることがわか
つた。 The electrophoretic medium material using the support made of the above-mentioned plastic material has the advantage of being easy to manufacture and easy to handle. Electrophoresis of proteins, etc. can also be carried out using the electrophoretic medium material, but according to detailed studies by the present inventor, conventional electrophoretic media manufactured using a glass plate as a support can be used. Compared to the material
It was found that the resolution tended to decrease slightly.

［発明の要旨］ 本発明の目的は、新規なプラスチツク製フイル
ム（あるいはシート）を支持体として用いたポリ
アクリルアミドゲル膜系電気泳動媒体材料を提供
することにある。[Summary of the Invention] An object of the present invention is to provide a polyacrylamide gel membrane-based electrophoretic medium material using a novel plastic film (or sheet) as a support.

本発明の目的は、特にプラスチツク製フイルム
（あるいはシート）を支持体として用いたポリア
クリルアミドゲル膜系電気泳動媒体材料であつ
て、支持体としてガラス板を用いて製造した電気
泳動媒体材料と同等もしくはそれ以上の解像力を
示す電気泳動媒体材料を提供することにある。 The purpose of the present invention is to provide a polyacrylamide gel membrane-based electrophoretic medium material using a plastic film (or sheet) as a support, which is equivalent to or equivalent to an electrophoretic medium material manufactured using a glass plate as a support. The object of the present invention is to provide an electrophoretic medium material that exhibits higher resolution.

本発明は、アクリルアミド系化合物と架橋剤と
が水の存在下で架橋重合してなるポリアクリルア
ミド系水性ゲルからなり、陰イオン界面活性剤を
含む電気泳動用媒体層およびプラスチツク材料製
支持体を含む電気泳動用媒体材料であつて、該電
気泳動用媒体層と支持体層との間に、該支持体材
料よりも酸素透過係数が低い樹脂材料からなる層
厚が１〜20μｍの樹脂中間層が備えられており、
かつ該樹脂中間層と支持体とが形成する積層体の
酸素透過量が、10c.c.／m²・atm・day以下である
ことを特徴とする電気泳動用媒体材料にある。 The present invention consists of an aqueous polyacrylamide gel formed by crosslinking polymerization of an acrylamide compound and a crosslinking agent in the presence of water, and includes an electrophoresis medium layer containing an anionic surfactant and a support made of plastic material. The electrophoresis medium material includes a resin intermediate layer having a thickness of 1 to 20 μm and made of a resin material having a lower oxygen permeability coefficient than the support material between the electrophoresis medium layer and the support layer. It is equipped with
The electrophoretic medium material is characterized in that the laminate formed by the resin intermediate layer and the support has an oxygen permeation rate of 10 c.c./m ² ·atm ·day or less.

［発明の効果］ 本発明の電気泳動用媒体材料は、上記のように
プラスチツク製支持体からの電気泳動媒体層への
酸素の透過、拡散を低下させることのできる樹脂
中間層が設けられているため、電気泳動用媒体層
（ポリアクリルアミドゲル膜）の形成のための架
橋重合反応が非常に円滑に進行し、高度に均質な
電気泳動用媒体層が形成される。従つて、そのよ
うな樹脂中間層を備えていないプラスチツク支持
体上に形成された電気泳動用媒体層に比較して、
本発明の電気泳動用媒体材料の電気泳動用媒体層
は、更に高い解像性を示す。[Effects of the Invention] As described above, the electrophoresis medium material of the present invention is provided with a resin intermediate layer that can reduce the permeation and diffusion of oxygen from the plastic support to the electrophoresis medium layer. Therefore, the crosslinking polymerization reaction for forming the electrophoretic medium layer (polyacrylamide gel membrane) proceeds very smoothly, and a highly homogeneous electrophoretic medium layer is formed. Therefore, compared to an electrophoretic media layer formed on a plastic support without such a resin interlayer,
The electrophoretic medium layer of the electrophoretic medium material of the present invention exhibits even higher resolution.

本発明において、電気泳動媒体材料の電気泳動
層と支持体側との間に酸素透過防止性の樹脂中間
層を付設することにより支持体と樹脂中間層との
積層体の酸素透過性を低下させた電気泳動媒体材
料の電気泳動特性（特に解像力）が向上する理由
は次のように推定される。 In the present invention, the oxygen permeability of the laminate of the support and the resin intermediate layer is reduced by providing an oxygen permeation-preventing resin intermediate layer between the electrophoresis layer of the electrophoresis medium material and the support side. The reason why the electrophoretic properties (particularly resolution) of the electrophoretic medium material is improved is presumed to be as follows.

電気泳動媒体材料のポリアクリルアミドゲル膜
は前述のように、アクリルアミド系化合物と架橋
剤とを含む水溶液を支持体上に塗布して塗布層を
形成し、次いで窒素雰囲気下のような無酸素雰囲
気下で高圧水銀灯などを用いてその塗布層表面に
紫外線を照射し、架橋重合させる方法により製造
される。この場合、支持体とその表面上のアクリ
ルアミド系化合物と架橋剤とを含む水溶液の塗布
層とは窒素雰囲気に囲まれている。しかし、通常
のプラスチツク製支持体は酸素透過性を有してお
り、従つて大気雰囲気下に保持していたプラスチ
ツク製支持体はその内部に少量の酸素を保持して
いることになる。このプラスチツク製支持体中の
酸素は紫外線の照射による加熱により、支持体か
ら遊離し、その一部が反応中にアクリルアミド系
化合物と架橋剤とを含む塗布層に溶け込み円滑な
架橋重合反応を阻害する。すなわち、塗布膜での
架橋反応の進行中に支持体側より酸素が侵入する
ことにより支持体側の架橋反応が阻害され、その
結果、生成するゲル膜（電気泳動用媒体層）の表
面側と支持体側とで架橋重合度に差が発生するこ
とになり、架橋重合度が不均一となるものと推定
される。この推定は、酸素透過性能の低いガラス
板を支持体として用いて同様な方法によりポリア
クリルアミドゲル膜を製造すると、後述の参考例
１に見られるように高い解像力を示す電気泳動媒
体材料が得られることからも裏付けられる。 As mentioned above, a polyacrylamide gel membrane, which is an electrophoretic medium material, is produced by applying an aqueous solution containing an acrylamide compound and a crosslinking agent onto a support to form a coated layer, and then applying the film under an oxygen-free atmosphere such as a nitrogen atmosphere. It is manufactured by a method in which the surface of the coating layer is irradiated with ultraviolet rays using a high-pressure mercury lamp or the like to cause crosslinking polymerization. In this case, the support and the coated layer of the aqueous solution containing the acrylamide compound and crosslinking agent on the surface of the support are surrounded by a nitrogen atmosphere. However, typical plastic supports are permeable to oxygen, and therefore, a plastic support held under atmospheric conditions will retain a small amount of oxygen within it. Oxygen in this plastic support is liberated from the support by heating by ultraviolet irradiation, and part of it dissolves into the coating layer containing the acrylamide compound and crosslinking agent during the reaction, inhibiting the smooth crosslinking polymerization reaction. . In other words, oxygen enters from the support side while the crosslinking reaction is progressing on the coating film, inhibiting the crosslinking reaction on the support side, and as a result, the surface side and the support side of the gel film (electrophoresis medium layer) that is formed are It is presumed that there will be a difference in the degree of crosslinking polymerization, and the degree of crosslinking polymerization will be non-uniform. This assumption is based on the fact that if a polyacrylamide gel membrane is manufactured in a similar manner using a glass plate with low oxygen permeability as a support, an electrophoretic medium material exhibiting high resolution can be obtained as seen in Reference Example 1 below. This is also supported by this.

すなわち、本発明の電気泳動媒体材料に設けた
低酸素透過性の樹脂中間層は、そのようなプラス
チツク支持体からの遊離酸素が、架橋反応に供せ
られるアクリルアミドを含む塗布層に侵入するの
を防ぐ役目（即ち、障壁としての機能）を果すも
のと考えられる。 That is, the low oxygen permeable resin interlayer provided in the electrophoretic media material of the present invention prevents free oxygen from such a plastic support from penetrating into the acrylamide-containing coating layer that is subjected to the crosslinking reaction. It is thought that it plays a protective role (that is, functions as a barrier).

［発明の詳細な記述］ 本発明の電気泳動用媒体材料の支持体は、プラ
スチツク材料から形成されるシート状物（フイル
ム状物も含む）である。このプラスチツク製シー
トとしては、任意のプラスチツク材料から形成し
たものを用いることができる。好ましいプラスチ
ツク材料の例としては、ポリエチレンテレフタレ
ート、ビスフエノールＡのポリカルボネート、ポ
リ塩化ビニル、ポリメチルメタクリレート、ポリ
エチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、セル
ロースアセテート、およびセルロースアセテート
プロピオネートをあげることができる。[Detailed Description of the Invention] The support of the electrophoretic medium material of the present invention is a sheet-like material (including a film-like material) formed from a plastic material. The plastic sheet may be formed from any plastic material. Examples of preferred plastic materials include polyethylene terephthalate, polycarbonate of bisphenol A, polyvinyl chloride, polymethyl methacrylate, polyethylene, polypropylene, polystyrene, cellulose acetate, and cellulose acetate propionate.

プラスチツク材料製支持体は公知の表面活性化
処理により表面を親水化したものであることが好
ましい。表面親水化処理のためには紫外線照射、
グロー放電処理、コロナ放電処理、火焔処理、電
子線照射、ケミカルエツチング、電解エツチング
等の公知の方法を適用することができる。 The plastic support is preferably one whose surface has been made hydrophilic by a known surface activation treatment. UV irradiation for surface hydrophilic treatment,
Known methods such as glow discharge treatment, corona discharge treatment, flame treatment, electron beam irradiation, chemical etching, and electrolytic etching can be applied.

支持体は、一般に厚さが約50〜500μｍ、好ま
しくは約70〜300μｍのものが用いられる。 The support used generally has a thickness of about 50 to 500 μm, preferably about 70 to 300 μm.

これまでに提案されているプラスチツク製支持
体を用いた電気泳動用媒体においては、プラスチ
ツク製支持体上に、直接あるいは接着剤層を介し
てポリアクリルアミドゲル形成用塗布液が塗布さ
れ、次いで窒素雰囲気下にて架橋重合反応が行な
われている。 In electrophoresis media using plastic supports that have been proposed so far, a coating solution for forming a polyacrylamide gel is applied onto the plastic support directly or through an adhesive layer, and then a nitrogen atmosphere is applied. A cross-linking polymerization reaction is taking place below.

本発明の電気泳動用媒体においては、プラスチ
ツク製支持体上に酸素透過係数が低い樹脂材料か
らなる樹脂中間層が設けられる。 In the electrophoretic medium of the present invention, a resin intermediate layer made of a resin material having a low oxygen permeability coefficient is provided on a plastic support.

上記の樹脂中間層は、層厚20μｍに形成したフ
イルムの状態における酸素透過量が15c.c.／m²・
atm・day以下の樹脂材料よりなることが好まし
く、特に層厚20μｍに形成したフイルムの状態に
おける酸素透過量が10c.c.／m²・atm・day以下の
樹脂材料よりなることが好ましい。好ましい樹脂
材料の例としては、塩化ビニリデン・塩化ビニル
共重合体、ポリビニルアルコール、ポリアクリロ
ニトリル、ポリ塩化ビニリデン、ビニルアルコー
ル・エチレン共重合体、塩化ビニリデン・アクリ
ロニトリル共重合体、アクリロニトリル・メチル
アクリレート・ブタジエン共重合体などを挙げる
ことができる。なお、上記の酸素透過量は、酸素
透過量の測定方法として一般的に利用されている
mocon法による測定値である。 The above resin intermediate layer has an oxygen permeation rate of 15 c.c./m ² in the state of a film formed to a layer thickness of 20 μm.
It is preferable to use a resin material having an oxygen permeability of 10 c.c./m ² ·atm·day or less in a film formed to a layer thickness of 20 μm. Examples of preferred resin materials include vinylidene chloride/vinyl chloride copolymer, polyvinyl alcohol, polyacrylonitrile, polyvinylidene chloride, vinyl alcohol/ethylene copolymer, vinylidene chloride/acrylonitrile copolymer, and acrylonitrile/methyl acrylate/butadiene copolymer. Examples include polymers. The above oxygen permeation rate is generally used as a method for measuring oxygen permeation rate.
This is a measured value using the mocon method.

上記樹脂中間層は、その層厚が１〜20μｍの範
囲にあるように調製する。 The resin intermediate layer is prepared so that its layer thickness is in the range of 1 to 20 μm.

樹脂中間層と上記支持体とからなる積層体の酸
素透過量は10c.c.／m²・atm・day以下であり、さ
らに７c.c.／m²・atm・day以下であることが特に
好ましい。 The oxygen permeability of the laminate consisting of the resin intermediate layer and the support is preferably 10 c.c./m ² ·atm · day or less, and particularly preferably 7 c.c./m ² ·atm · day or less. preferable.

上記の樹脂中間層の上に直接、あるいは接着剤
層などの他の中間層を介して電気泳動用媒体層が
設けられる。 An electrophoretic medium layer is provided directly on the resin intermediate layer or via another intermediate layer such as an adhesive layer.

次に電気泳動用媒体層（以下において、ゲル媒
体層、ポリアクリルアミドゲル膜あるいは単にゲ
ル膜ともいう）について説明する。 Next, the electrophoresis medium layer (hereinafter also referred to as gel medium layer, polyacrylamide gel membrane, or simply gel membrane) will be explained.

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミド
系化合物と架橋剤とを、水溶液または水分散液と
して水中に溶解または分散させてゲル形成液を調
製したのち、液中で両者を架橋重合させて架橋重
合した水性ゲル膜として形成することにより得る
ことができる。本明細書においては、特にことわ
らない限り、（水中に）溶解と（水中に）分散の
両者を含めて単に（水中に）溶解といい、水溶液
と水分散液の両者を含めて単に水溶液という。ま
た、溶媒または分散媒として、所望により加えら
れる有機溶媒と水の混合物をも包含する。 Polyacrylamide gel membrane is an aqueous gel obtained by dissolving or dispersing an acrylamide compound and a crosslinking agent in water as an aqueous solution or dispersion to prepare a gel forming liquid, and then crosslinking and polymerizing both in the liquid. It can be obtained by forming it as a film. In this specification, unless otherwise specified, the term ``dissolution (in water)'' includes both dissolution (in water) and dispersion (in water), and the term ``aqueous solution'' includes both an aqueous solution and an aqueous dispersion. . It also includes a mixture of an organic solvent and water that may be added as desired as a solvent or dispersion medium.

ポリアクリルアミドゲル膜の形成に用いること
ができるアクリルアミド系化合物の例としては、
アクリルアミド、Ｎ−メチルアクリルアミド、
Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ−（ヒドロ
キシメチル）アクリルアミド、ジアセトンアクリ
ルアミド等のアクリルアミド系化合物やメタクリ
ルアミド等のメタクリルアミド系化合物が挙げら
れ、これらの化合物は単独で、あるいは二種以上
を併用して用いることができる。これらのアクリ
ルアミド系化合物のうちではアクリルアミドが最
も好ましく、またアクリルアミドと他のアクリル
アミド系化合物、メタクリルアミド系化合物の一
種以上の併用も好ましい。 Examples of acrylamide compounds that can be used to form polyacrylamide gel membranes include:
Acrylamide, N-methylacrylamide,
Examples include acrylamide compounds such as N,N-dimethylacrylamide, N-(hydroxymethyl)acrylamide, and diacetone acrylamide, and methacrylamide compounds such as methacrylamide, and these compounds may be used alone or in combination of two or more. It can be used as Among these acrylamide compounds, acrylamide is most preferred, and a combination of acrylamide and one or more of other acrylamide compounds and methacrylamide compounds is also preferred.

架橋剤としては「Electrophoresis」1981、２、
220−228等に記載の公知の化合物（一種または二
種以上の組合せ）を用いることができる。架橋剤
の具体例としては、Ｎ，N′−メチレンビスアク
リルアミド（BIS）；Ｎ，N′−プロピレンビスア
クリルアミド（PBA）；ジ（アクリルアミドジメ
チル）エーテル（DAE）；１，２−ジアクリルア
ミドエチレングリコール（DEG）；エチレンウレ
アビスアクリルアミド（EUB）；エチレンジアク
リレート（EDA）；Ｎ，N′−ジアリルタータルジ
アミド（Ｎ，N′−diallyltartardiamide：
DATD）；およびＮ，N′−ビスアクリリルシスタ
ミン（Ｎ，N′−bisacrylylcystamine、BAC）等
の二官能性化合物が挙げられる。 As a crosslinking agent, "Electrophoresis" 1981, 2,
220-228, etc. (one type or a combination of two or more types) can be used. Specific examples of crosslinking agents include N,N'-methylenebisacrylamide (BIS); N,N'-propylenebisacrylamide (PBA); di(acrylamide dimethyl) ether (DAE); 1,2-diacrylamide ethylene glycol. (DEG); Ethyleneureabisacrylamide (EUB); Ethylene diacrylate (EDA); N,N'-diallyltartardiamide (N,N'-diallyltartardiamide)
DATD); and bifunctional compounds such as N,N'-bisacrylylcystamine (BAC).

架橋剤の量は、単量体と架橋剤の総重量に対し
て約２〜30wt％、好ましくは約３〜10wt％の範
囲である。 The amount of crosslinker ranges from about 2 to 30 wt%, preferably from about 3 to 10 wt%, based on the total weight of monomer and crosslinker.

ゲル濃度としては、S.Hjerten：「Arch.
Biochem.Biophys.」１（Suppl.）、147（1962）に
記載の定義に従つて表示して、単量体、架橋剤お
よび水からなるゲル膜の容積に対して、単量体と
架橋剤の量が約３〜30w／ｖ％の範囲で好ましく
用いられる。 As for the gel concentration, S. Hjerten: "Arch.
Biochem. Biophys.” 1 (Suppl.), 147 (1962). It is preferably used in an amount of about 3 to 30 w/v%.

本発明の電気泳動用媒体材料は主として蛋白質
または複合蛋白質（たとえばリポプロテイン、糖
プロテインなど）の分析に有利に用いられるもの
であり、電気泳動用媒体層には、変性剤として陰
イオン性界面活性剤を含有させる。 The electrophoresis medium material of the present invention is mainly used to advantageously analyze proteins or complex proteins (e.g. lipoproteins, glycoproteins, etc.), and the electrophoresis medium layer contains an anionic surfactant as a denaturing agent. contain the agent.

陰イオン界面活性剤を電気泳動用媒体層に含有
させることにより、蛋白質または複合蛋白質の効
率的な分離およびそれらの分子量測定が可能とな
る。 By including an anionic surfactant in the electrophoresis medium layer, it becomes possible to efficiently separate proteins or complex proteins and measure their molecular weights.

陰イオン性界面活性剤の例としてはアルキル硫
酸塩が挙げることができ、特に炭素原子数10以上
の長鎖アルキル基を有するアルキル硫酸塩が好ま
しく用いられる。塩を形成する陽イオンとして
は、ナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウ
ムイオン等のアルカリ金属イオンが一般的であ
り、これらのうちではナトリウムイオンが用いや
すい。アルキル硫酸塩のうちではドデシル硫酸塩
（ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等）が
好ましく、なかでもドデシル硫酸ナトリウム
（SDS）が最も好ましい。SDSを本発明のゲル媒
体層に含有させることにより蛋白質または複合蛋
白質の効率的な分離およびそれらの分子量測定が
可能となる。 Examples of anionic surfactants include alkyl sulfates, and alkyl sulfates having a long chain alkyl group having 10 or more carbon atoms are particularly preferably used. As cations that form salts, alkali metal ions such as sodium ions, potassium ions, and lithium ions are generally used, and among these, sodium ions are easily used. Among the alkyl sulfates, dodecyl sulfate (sodium salt, potassium salt, lithium salt, etc.) is preferred, and among them, sodium dodecyl sulfate (SDS) is most preferred. By incorporating SDS into the gel medium layer of the present invention, it becomes possible to efficiently separate proteins or complex proteins and measure their molecular weights.

変性剤としての陰イオン界面活性剤の含有量は
ゲル形成液に対して、約0.05〜2.0w／ｖ％、好ま
しくは約0.1〜1.5w／ｖ％の範囲である。 The content of the anionic surfactant as a modifier is in the range of about 0.05 to 2.0 w/v%, preferably about 0.1 to 1.5 w/v%, based on the gel forming solution.

ポリアクリルアミドゲル膜には水溶性ポリマー
を含有させることができる。 The polyacrylamide gel membrane can contain a water-soluble polymer.

水溶性ポリマーとしては、付加重合型または縮
重合型の水溶性ポリマーを用いることができる。
付加重合型ポリマーの具体例としては、ポリビニ
ルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアク
リルアミド等の非イオン性水溶性ポリマーが挙げ
られる。縮重合型ポリマーの具体例としてポリエ
チレングリコール、ポリプロピレングリコール等
の非イオン性水溶性ポリアルキレングリコールが
挙げられる。水溶性ポリマーの分子量は、約１万
から約100万の範囲のものが好ましい。これらの
水溶性ポリマーのうちでは、ポリエチレングリコ
ール、ポリアクリルアミドが特に好ましい。 As the water-soluble polymer, addition polymerization type or condensation polymerization type water-soluble polymer can be used.
Specific examples of addition polymers include nonionic water-soluble polymers such as polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, and polyacrylamide. Specific examples of condensation polymers include nonionic water-soluble polyalkylene glycols such as polyethylene glycol and polypropylene glycol. The molecular weight of the water-soluble polymer preferably ranges from about 10,000 to about 1,000,000. Among these water-soluble polymers, polyethylene glycol and polyacrylamide are particularly preferred.

水溶性ポリマーは、単量体と架橋剤の合計重量
に対して約２〜100wt％の範囲、好ましくは約５
〜50wt％の範囲の量で用いられる。水溶性ポリ
マーを添加することにより、ポリアクリルアミド
ゲル膜は可塑性を有するようになるため、裁断加
工時に壊れることがなくなり、またゲル膜は乾燥
時にも可塑性を有するようになり、もろさが改良
され、壊れにくくなるとの利点がある。また、水
溶性ポリマーの分子量および添加量を選択するこ
とにより、ゲル膜の粘度をコントロールすること
もできる。 The water-soluble polymer is present in an amount ranging from about 2 to 100 wt%, preferably about 5 wt% based on the total weight of monomer and crosslinker.
Used in amounts ranging from ~50wt%. By adding a water-soluble polymer, the polyacrylamide gel film becomes plastic, so it will not break during cutting, and the gel film also becomes plastic when drying, improving its brittleness and preventing it from breaking. This has the advantage of being less difficult. Furthermore, the viscosity of the gel film can be controlled by selecting the molecular weight and amount of the water-soluble polymer added.

ポリアクリルアミドゲル膜にはアガロースを含
有させることができる。アガロースは公知のアガ
ロースであれば特に制限はなく、低電気浸透性、
中電気浸透性、高電気浸透性アガロースのいずれ
をも用いることができる。用いることのできるア
ガロースの例としては特開昭55−5730号、特開昭
55−110946号、特表昭57−502098号等の公報に開
示されているアガロース等がある。 The polyacrylamide gel membrane can contain agarose. There are no particular restrictions on the agarose as long as it is a known agarose, with low electroosmotic properties,
Either medium electroosmotic or high electroosmotic agarose can be used. Examples of agarose that can be used include JP-A-55-5730 and JP-A-Sho.
There are agaroses disclosed in publications such as No. 55-110946 and Japanese Patent Publication No. 57-502098.

アガロースは、単量体と架橋剤とを含むゲル組
成液の容積に対して約0.2〜2w／ｖ％、好ましく
は約0.3〜1.2w／ｖ％の割合にて添加される。ゲ
ル膜にアガロースを添加することにより、ゲル形
成用溶液温度を変化させることにより、適当な溶
液粘度にコントロールすることが可能となり、そ
の流動性を止めることができ、またゲル膜を成形
する時には成形しやすくなるとの利点がある。 Agarose is added at a rate of about 0.2 to 2 w/v%, preferably about 0.3 to 1.2 w/v%, based on the volume of the gel composition containing the monomer and crosslinking agent. By adding agarose to the gel film, it is possible to control the viscosity of the solution to an appropriate level by changing the temperature of the gel forming solution, and its fluidity can be stopped. This has the advantage of being easier to do.

ゲル媒体層にはPH緩衝剤を含有させることもで
きる。緩衝剤としては、電気泳動分析される試料
に応じて、PH2.5から10.0の範囲内のPH値に緩衝
できる公知の緩衝剤から適宜選択して用いること
ができる。 The gel medium layer can also contain a PH buffer. The buffer can be appropriately selected and used from known buffers that can buffer the pH value within the range of PH2.5 to 10.0, depending on the sample to be electrophoretically analyzed.

用いうる緩衝剤としては、日本化学会編「化学
便覧 基礎編」（東京、丸善(株)1966年発行）1312
−1320ページ；青木、永井編「最新電気泳動法」
（東京、広川書店、1973年発行320−322ページ；
「Data for Biochemical Research」（R.M.C.
Dawson et al.編、第２版、Oxford at the
Clarendon Press、1969年発行）476−508ペー
ジ；「Biochemistry」５、467（1966）、
「Analytical Biochemistry」104、300−310
（1980）等に記載の緩衝剤が挙げられる。 Buffers that can be used are listed in "Chemical Handbook Basic Edition" edited by the Chemical Society of Japan (Tokyo, published by Maruzen Co., Ltd. in 1966) 1312
−1320 pages; “Latest electrophoresis methods” edited by Aoki and Nagai
(Tokyo, Hirokawa Shoten, published 1973, pages 320-322;
“Data for Biochemical Research” (RMC
Edited by Dawson et al., 2nd edition, Oxford at the
Clarendon Press, 1969) pages 476-508; "Biochemistry" 5, 467 (1966),
“Analytical Biochemistry” 104, 300−310
(1980) and the like.

緩衝剤の例としては、バルビタールを含む緩衝
剤、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
（Tris）を含む緩衝剤、燐酸塩を含む緩衝剤、ホ
ウ酸塩を含む緩衝剤、酢酸または酢酸塩を含む緩
衝剤、クエン酸またはクエン酸塩を含む緩衝剤、
乳酸または乳酸塩を含む緩衝剤、グリシンを含む
緩衝剤、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）
グリシン（Bicine）、Ｎ−２−ヒドロキシエチル
ピペラジン−N′−２−ヒドロキシプロパン−３
−スルホン酸（HEPPSO）またはその塩、Ｎ−
２−ヒドロキシエチルピペラジン−N′−３−プ
ロパンスルホン酸（EPPS）またはその塩、Ｎ−
［トリス（ヒドロキシメチル）］−３−アミノプロ
パンスルホン酸（TAPS）またはその塩等をおよ
び、これらのいずれかと必要により組合せられる
塩、アルカリ、または塩等を挙げることができ
る。好ましい緩衝剤の具体例としては、燐酸二水
素カリウム−燐酸水素二ナトリウム、Tris・ホ
ウ酸ナトリウム、Tris・ホウ酸ナトリウム・
EDTA2Na塩、Tris・クエン酸、バルビタール
ナトリウム・酢酸ナトリウム、バルビタールナト
リウム・塩酸、バルビタール・バルビタールナト
リウム、酢酸・酢酸ナトリウム、乳酸・乳酸ナト
リウム、クエン酸−燐酸水素二ナトリウム、ビシ
ン（Bicine）、HEPPSO、HEPPSOナトリウム
塩、EPPS、EPPSナトリウム塩、TAPS、
TAPSナトリウム塩等を挙げることができる。 Examples of buffers include barbital-containing buffers, tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)-containing buffers, phosphate-containing buffers, borate-containing buffers, acetic acid or acetate-containing buffers. agents, buffers containing citric acid or citrate;
Buffers containing lactic acid or lactate, buffers containing glycine, N,N-bis(2-hydroxyethyl)
Glycine (Bicine), N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-hydroxypropane-3
-Sulfonic acid (HEPPSO) or its salt, N-
2-Hydroxyethylpiperazine-N'-3-propanesulfonic acid (EPPS) or its salt, N-
Examples include [tris(hydroxymethyl)]-3-aminopropanesulfonic acid (TAPS) or a salt thereof, and salts, alkalis, or salts combined with any of these as necessary. Specific examples of preferred buffers include potassium dihydrogen phosphate-disodium hydrogen phosphate, Tris/sodium borate, and Tris/sodium borate.
EDTA2Na salt, Tris/citric acid, sodium barbital/sodium acetate, sodium barbital/hydrochloric acid, barbital/sodium barbital, acetic acid/sodium acetate, lactic acid/sodium lactate, citric acid-disodium hydrogen phosphate, Bicine, HEPPSO, HEPPSO Sodium salt, EPPS, EPPS sodium salt, TAPS,
Examples include TAPS sodium salt.

本発明においてポリアクリルアミドゲル膜はア
クリルアミドに代表される単量体、二官能性のア
リル（allyl）化合物またはアクリル化合物（架
橋剤）、水溶性ポリマー、およびアガロースを実
質的に均一に溶解させた水溶液中で単量体と架橋
剤とをラジカル架橋重合させて得られるものであ
り、単量体と架橋剤から形成された三次元架橋重
合体に水溶性ポリマーとアガロースが実質的に分
散されて、後二者のポリマー鎖が三次元架橋重合
体とからみあつている構造を有すると推定され
る。 In the present invention, the polyacrylamide gel membrane is an aqueous solution in which a monomer represented by acrylamide, a bifunctional allyl compound or acrylic compound (crosslinking agent), a water-soluble polymer, and agarose are substantially uniformly dissolved. It is obtained by radical crosslinking polymerization of a monomer and a crosslinking agent in a three-dimensional crosslinked polymer formed from a monomer and a crosslinking agent, and a water-soluble polymer and agarose are substantially dispersed in the three-dimensional crosslinked polymer formed from the monomer and crosslinking agent. It is presumed that the latter two polymer chains have a structure in which they are entangled with the three-dimensionally crosslinked polymer.

上記のラジカル架橋重合反応は、分子状酸素の
不存在下で過酸化物の存在および／または紫外線
照射等の公知の方法により発生させることができ
る。この反応を加熱および紫外線照射により加速
することもできる。 The above-mentioned radical crosslinking polymerization reaction can be caused by a known method such as the presence of peroxide and/or ultraviolet irradiation in the absence of molecular oxygen. This reaction can also be accelerated by heating and UV radiation.

ラジカル架橋重合用触媒としては、「Electro
phoresis」1981、２、213−219、同1981、２、
220−228；青木、永井編「最新電気泳動法」
（1973年発行）等に記載の公知の低温ラジカル重
合開始剤のうちから適宜選択して用いることがで
きる。好ましいラジカル重合開始剤の具体例とし
ては、β−ジメチルアミノプロピオニトリル
（DMAPN）−ペルオクソ二硫酸アンモニウム混
合物、Ｎ，Ｎ，N′，N′−テトラメチルエチレン
ジアミン（TEMED）−ペルオクソ二硫酸アンモ
ニウム混合物、TEMED−リボフラビン混合物、
TEMED−リボフラビン−過酸化水素混合物と紫
外線照射の組合せ等が挙げられる。ラジカル重合
開始剤の含有量は、単量体と架橋剤の合計重量に
対して約0.3〜５重量％、そして好ましくは約0.5
〜３重量％の範囲である。 As a catalyst for radical crosslinking polymerization, “Electro
phoresis" 1981, 2, 213-219, 1981, 2,
220−228; Aoki, Nagai eds. “Latest Electrophoresis Methods”
(Published in 1973) and other known low-temperature radical polymerization initiators can be appropriately selected and used. Specific examples of preferred radical polymerization initiators include β-dimethylaminopropionitrile (DMAPN)-ammonium peroxodisulfate mixture, N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine (TEMED)-ammonium peroxodisulfate mixture, TEMED. - riboflavin mixture,
Examples include a combination of TEMED-riboflavin-hydrogen peroxide mixture and ultraviolet irradiation. The content of the radical polymerization initiator is about 0.3 to 5% by weight based on the total weight of monomer and crosslinking agent, and preferably about 0.5% by weight.
-3% by weight.

ゲル媒体層は、支持体上の前記の樹脂中間層の
上に直接あるいは接着剤層などの他の中間層を介
して上記のゲル形成液を公知の方法により塗布し
て設けたのち、ゲル形成液を架橋重合させること
により形成することができる。 The gel medium layer is formed by coating the gel forming liquid on the resin intermediate layer on the support by a known method, either directly or through another intermediate layer such as an adhesive layer, and then forming the gel. It can be formed by crosslinking and polymerizing a liquid.

ゲル形成液を樹脂中間層の表面で架橋重合させ
る場合には、ゲル形成液塗布層の上をさらにカバ
ーフイルム、シートまたは板などの被覆材料でお
おうことができる。この目的に使用されるカバー
フイルム、シート、または板としては前記支持体
と同様な素材からなり、更に支持体と同様に、酸
素透過能を低下させているものを用いることがで
きる。被覆材料の厚さは300μｍ以下であり、実
用的に好ましい厚さの範囲は約４〜200μｍであ
り、特に好ましい範囲は約4μｍ〜100μｍである。 When the gel-forming liquid is cross-linked and polymerized on the surface of the resin intermediate layer, the gel-forming liquid coating layer can be further covered with a covering material such as a cover film, sheet, or plate. The cover film, sheet, or plate used for this purpose may be made of the same material as the support, and may also have a reduced oxygen permeability like the support. The thickness of the coating material is 300 μm or less, with a practically preferred thickness range of about 4 to 200 μm, and a particularly preferred range of about 4 μm to 100 μm.

ポリアクリルアミドゲル膜には、必要に応じて
抗酸化剤などの他の添加剤を含有させることがで
きる。抗酸化剤としては、ゲル膜に配合しうるこ
とが知られている種々の化合物を用いることがで
きる。抗酸化剤の具体例としてはジチオスレイト
ール、２−メチルカプトエタノールを挙げること
ができる。 The polyacrylamide gel film may contain other additives such as an antioxidant, if necessary. As the antioxidant, various compounds known to be able to be incorporated into the gel film can be used. Specific examples of antioxidants include dithiothreitol and 2-methylcaptoethanol.

その他の添加剤としては湿潤剤があり、ポリア
クリルアミドゲル膜にはグリセリン、エチレング
リコール等のポリオール化合物を含有させること
もできる。ポリオール化合物の含有量は、ゲル膜
の容積に対して約５〜約40w／ｖ％の範囲から選
ばれる。ポリオール化合物のうちではグリセリン
が特に好ましい。湿潤剤を配合することによりゲ
ル膜の保存時の極端な水分の蒸発による乾燥を防
ぐことが可能となり、また極端な乾燥に起因する
もろさを防ぎ、ひびわれを防ぐ等のゲル膜の物性
が改善されるとの利点がある。 Other additives include wetting agents, and the polyacrylamide gel film can also contain polyol compounds such as glycerin and ethylene glycol. The content of the polyol compound is selected from the range of about 5 to about 40 w/v% based on the volume of the gel membrane. Among the polyol compounds, glycerin is particularly preferred. By adding a wetting agent, it is possible to prevent the gel film from drying out due to extreme water evaporation during storage, and it also improves the physical properties of the gel film, such as preventing brittleness caused by extreme dryness and preventing cracking. It has the advantage of

本発明の電気泳動用媒体材料は、前述の諸文献
等に記載の公知の方法に従つて、水平型および垂
直型平板電気泳動法、デイスク電気泳動泳動法等
のいずれにも用いることができる。 The electrophoresis medium material of the present invention can be used in both horizontal and vertical plate electrophoresis, disk electrophoresis, etc. according to the known methods described in the above-mentioned documents.

以下に本発明の実施例を記載するが、これらは
本発明の範囲を限定するものではない。 Examples of the present invention are described below, but these are not intended to limit the scope of the present invention.

実施例 １ 紫外線照射処理により表面を親水性にした厚さ
180μｍの無色透明ポリエチレンテレフタレート
シート（支持体）上に、塩化ビニリデン・塩化ビ
ニル（９：１）共重合体のラテツクス（この塩化
ビニリデン・塩化ビニル（９：１）共重合体の層
厚20μｍに形成したフイルムの状態における酸素
透過量は約５c.c.／m²・atm・day）を塗布して、
層厚が約5μｍの樹脂層を形成した。Example 1 Thickness with surface made hydrophilic by ultraviolet irradiation treatment
A latex of vinylidene chloride/vinyl chloride (9:1) copolymer (layer thickness of this vinylidene chloride/vinyl chloride (9:1) copolymer was formed on a 180 μm colorless transparent polyethylene terephthalate sheet (support) to a thickness of 20 μm. The amount of oxygen permeation in the film state is approximately ^5c.c./m2・atm・day).
A resin layer having a layer thickness of approximately 5 μm was formed.

上記の樹脂層が付設された支持体の酸素透過係
数は４c.c.／m²・atm・dayであつた。 The oxygen permeability coefficient of the support provided with the above resin layer was 4 c.c./m ² ·atm ·day.

支持体上に設けられた蒸着層の上に、アクリル
アミド9.5ｇ、BIS0.5ｇ、リン酸水素二ナトリウ
ム・十二水塩3.58ｇ、リン酸二水素ナトリムウ・
二水塩0.33ｇ、およびSDS0.10ｇを含有する100
mlの溶液に重合開始剤としてペルオフソ二硫酸ア
ンモニウム（５重量％）1.3ml、TEMED33μを
加えたものを0.3mmの厚みに塗布成形し、窒素雰
囲気下にて、100w高圧水銀灯を10cmの距離から
照射し、10分間静置しポリアクリルアミドゲル膜
を得た。 On the vapor deposition layer provided on the support, 9.5 g of acrylamide, 0.5 g of BIS, 3.58 g of disodium hydrogen phosphate dodecahydrate, and sodium dihydrogen phosphate
100 containing 0.33g dihydrate and 0.10g SDS
1.3 ml of ammonium peroffsodisulfate (5% by weight) as a polymerization initiator and TEMED 33μ were added to 1.3 ml of solution to a thickness of 0.3 mm, and a 100 W high-pressure mercury lamp was irradiated from a distance of 10 cm under a nitrogen atmosphere. , and left to stand for 10 minutes to obtain a polyacrylamide gel membrane.

比較例 １ ポリエチレンテレフタレートシート（支持体）
上に、塩化ビニリデン・塩化ビニル（９：１）共
重合体の塗布層を設けなかつたこと以外は実施例
１と同様にして支持体上にポリアクリルアミドゲ
ル膜を形成した。Comparative example 1 Polyethylene terephthalate sheet (support)
A polyacrylamide gel film was formed on the support in the same manner as in Example 1 except that a coating layer of vinylidene chloride/vinyl chloride (9:1) copolymer was not provided thereon.

なお、上記の支持体の酸素透過係数は17c.c.／
m²・atm・dayであつた。 The oxygen permeability coefficient of the above support is 17c.c./
It was ^m2・atm・day.

参考例 １ 支持体としてポリエチレンテレフタレートシー
トの代りにガラス板を用い、塩化ビニリデン・塩
化ビニル（９：１）共重合体の塗布層を設けなか
つたこと以外は実施例１と同様にして支持体上に
ポリアクリルアミドゲル膜を形成した。Reference Example 1 A glass plate was used as the support instead of the polyethylene terephthalate sheet, and a coating layer of vinylidene chloride/vinyl chloride (9:1) copolymer was not provided on the support in the same manner as in Example 1. A polyacrylamide gel membrane was formed.

［電気泳動試験］ 実施例１、比較例１および参考例１で得られた
ポリアクリルアミドゲル膜にサンプル注入口を形
成し、次いでゲル膜に厚さ63μｍのポリエチレン
テレフタレートシート（カバーシート）をかぶせ
た。[Electrophoresis test] A sample injection port was formed in the polyacrylamide gel membrane obtained in Example 1, Comparative Example 1, and Reference Example 1, and then a 63 μm thick polyethylene terephthalate sheet (cover sheet) was covered over the gel membrane. .

このポリアクリルアミドゲル膜を使用して、標
準蛋白質試料を電気泳動にかけ、分離実験を行な
つた。 Using this polyacrylamide gel membrane, a standard protein sample was subjected to electrophoresis to conduct a separation experiment.

電気泳動終了後に、ゲル膜のカバーフイルムを
静かにはがして除去し、ゲル膜全体を0.1％コー
マシーブルー水溶液に浸漬して、泳動ゾーンを青
色に染色した。 After the electrophoresis was completed, the cover film of the gel membrane was gently peeled off and removed, and the entire gel membrane was immersed in a 0.1% Comassie blue aqueous solution to dye the migration zone blue.

実施例１および参照例１のゲル膜により得られ
た泳動パターンは高い解像力を示し、解読が容易
であつた。一方、比較例１のゲル膜により得られ
た泳動パターンの解像力は、実施例１および参照
例１のゲル膜により得られた泳動パターンの解像
力に比較して低かつた。 The migration patterns obtained with the gel membranes of Example 1 and Reference Example 1 showed high resolution and were easy to decipher. On the other hand, the resolution of the migration pattern obtained with the gel film of Comparative Example 1 was lower than that of the migration pattern obtained with the gel films of Example 1 and Reference Example 1.

また、実施例１および参照例１のゲル膜により
得られた泳動パターンのスマイリング効果による
中央部泳動列と両側部泳動列との泳動距離の差は
いずれも小さい値であつたが、比較例１のゲル膜
により得られた泳動パターンのスマイリング効果
による中央部泳動列と両側部泳動列との泳動距離
の差は大きかつた。 In addition, the difference in migration distance between the central migration row and both side migration rows due to the smiling effect of the migration patterns obtained with the gel membranes of Example 1 and Reference Example 1 was small, but Comparative Example 1 Due to the smiling effect of the electrophoresis pattern obtained by the gel membrane, there was a large difference in migration distance between the central electrophoresis column and the side electrophoresis columns.

実施例 ２ 支持体上に設ける中間樹脂層をポリアクリロニ
トリル（このポリアクリロニトリルの層厚20μｍ
に形成したフイルムの状態における酸素透過量は
約２c.c.／m²・atm・day）から、厚さを10μｍの
層として形成した以外は実施例１と同様にして中
間樹脂層を有する支持体を形成した。Example 2 The intermediate resin layer provided on the support was made of polyacrylonitrile (the layer thickness of this polyacrylonitrile was 20 μm).
The amount of oxygen permeation in the state of the film formed is approximately 2c.c./m ² ·atm ·day), so a support having an intermediate resin layer was prepared in the same manner as in Example 1 except that it was formed as a layer with a thickness of 10 μm. formed a body.

上記の樹脂層が付設された支持体の酸素透過係
数は２c.c.／m²・atm・dayであつた。 The oxygen permeability coefficient of the support provided with the above resin layer was 2 c.c./m ² ·atm ·day.

次いで、上記支持体上に中間樹脂層の上に実施
例１と同様にしてポリアクリルアミドゲル膜を形
成した。 Next, a polyacrylamide gel film was formed on the intermediate resin layer on the support in the same manner as in Example 1.

［電気泳動試験］ 実施例２、比較例１および参考例１で得られた
ポリアクリルアミドゲル膜にサンプル注入口を形
成し、次いでゲル膜に厚さ50μｍのポリエチレン
テレフタレートシート（カバーシート）をかぶせ
た。[Electrophoresis test] A sample injection port was formed in the polyacrylamide gel membrane obtained in Example 2, Comparative Example 1, and Reference Example 1, and then a polyethylene terephthalate sheet (cover sheet) with a thickness of 50 μm was covered over the gel membrane. .

このポリアクリルアミドゲル膜を使用して、標
準蛋白質試料を電気泳動にかけ、分離実験を行な
つた。 Using this polyacrylamide gel membrane, a standard protein sample was subjected to electrophoresis to conduct a separation experiment.

電気泳動終了後に、ゲル膜のカバーフイルムを
静かにはがして除去し、ゲル膜全体を0.1％コー
マシーブルー水溶液に浸漬して、泳動ゾーンを青
色に染色した。 After the electrophoresis was completed, the cover film of the gel membrane was gently peeled off and the entire gel membrane was immersed in a 0.1% Comassie Blue aqueous solution to stain the migration zone blue.

実施例１および参照例１のゲル膜により得られ
た泳動パターンは高い解像力を示し、解読が容易
であつた。一方、比較例１のゲル膜により得られ
た泳動パターンの解像力は、実施例１および参照
例１のゲル膜により得られた泳動パターンの解像
力に比較して低かつた。 The migration patterns obtained with the gel membranes of Example 1 and Reference Example 1 showed high resolution and were easy to decipher. On the other hand, the resolution of the migration pattern obtained with the gel film of Comparative Example 1 was lower than that of the migration pattern obtained with the gel films of Example 1 and Reference Example 1.

また、実施例１および参照例１のゲル膜により
得られた泳動パターンのスマイリング効果による
中央部泳動列と両側部泳動列との泳動距離の差は
いずれも小さい値であつたが、比較例１のゲル膜
により得られた泳動パターンのスマイリング効果
による中央部泳動列と両側部泳動列との泳動距離
の差は大きかつた。 In addition, the difference in migration distance between the central migration row and both side migration rows due to the smiling effect of the migration patterns obtained with the gel membranes of Example 1 and Reference Example 1 was small, but Comparative Example 1 Due to the smiling effect of the electrophoresis pattern obtained by the gel membrane, there was a large difference in migration distance between the central electrophoresis column and the side electrophoresis columns.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １ アクリルアミド系化合物と架橋剤とが水の存
在下で架橋重合してなるポリアクリルアミド系水
性ゲルからなり、陰イオン界面活性剤を含む電気
泳動用媒体層およびプラスチツク材料製支持体を
含む電気泳動用媒体材料であつて、該電気泳動用
媒体層と支持体層との間に、該支持体材料よりも
酸素透過係数が低い樹脂材料からなる層厚が１〜
20μｍの樹脂中間層が備えられており、かつ該樹
脂中間層と支持体とが形成する積層体の酸素透過
量が、10c.c.／m²・atm・day以下であることを特
徴とする電気泳動用媒体材料。 ２ 樹脂中間層が、層厚20μｍに形成したフイル
ムの状態における酸素透過量が15c.c.／m²・atm・
day以下の樹脂材料よりなる特許請求の範囲第１
項記載の電気泳動用媒体材料。 ３ 樹脂中間層が、塩化ビニリデン・塩化ビニル
共重合体、ポリビニルアルコール、ポリアクリロ
ニトリル、ポリ塩化ビニリデン、ビニルアルコー
ル・エチレン共重合体、塩化ビニリデン・アクリ
ロニトリル共重合体、およびアクリロニトリル・
メチルアクリレート・ブタジエン共重合体からな
る酸素低透過性樹脂材料を含む特許請求の範囲第
１項記載の電気泳動用媒体材料。 ４ 樹脂中間層と支持体とが形成する積層体の酸
素透過量が、７c.c.／m²・atm・day以下である特
許請求の範囲第１項記載の電気泳動用媒体材料。 ５ プラスチツク材料製支持体がポリエチレンテ
レフタレートからなる特許請求の範囲第１項記載
の電気泳動用媒体材料。 ６ 電気泳動用媒体層がさらに水溶性ポリマーお
よびアガロースを含む特許請求の範囲第１項記載
の電気泳動用媒体材料。[Scope of Claims] 1. An electrophoresis medium layer comprising an aqueous polyacrylamide gel obtained by crosslinking polymerization of an acrylamide compound and a crosslinking agent in the presence of water, and containing an anionic surfactant, and a support made of plastic material. an electrophoretic medium material comprising a phosphorescent material, the electrophoretic medium layer and the support layer having a layer thickness of 1 to 1, comprising a resin material having an oxygen permeability coefficient lower than that of the support material;
A 20 μm resin intermediate layer is provided, and the oxygen permeation rate of the laminate formed by the resin intermediate layer and the support is 10 c.c./m ² ·atm · day or less. Media materials for electrophoresis. 2 The resin intermediate layer has an oxygen permeation rate of ^15c.c./m2・atm・in the state of a film formed to a layer thickness of 20μm.
Claim 1 consisting of a resin material of less than day
Electrophoresis medium material described in Section 1. 3. The resin intermediate layer is made of vinylidene chloride/vinyl chloride copolymer, polyvinyl alcohol, polyacrylonitrile, polyvinylidene chloride, vinyl alcohol/ethylene copolymer, vinylidene chloride/acrylonitrile copolymer, and acrylonitrile/vinylidene chloride copolymer.
The electrophoretic medium material according to claim 1, comprising a low oxygen permeability resin material made of a methyl acrylate-butadiene copolymer. 4. The electrophoretic medium material according to claim 1, wherein the laminate formed by the resin intermediate layer and the support has an oxygen permeation amount of 7 c.c./m ² ·atm ·day or less. 5. The electrophoretic medium material according to claim 1, wherein the support made of plastic material is made of polyethylene terephthalate. 6. The electrophoresis medium material according to claim 1, wherein the electrophoresis medium layer further contains a water-soluble polymer and agarose.