JPS62247242A - 電気泳動用媒体材料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分野］ 本発明は、電気泳動用媒体材料に関するものであり、さ
らに詳しくは、特にＤＮＡの塩基配列決定操作に用いる
のに適した電気泳動用媒体材料に関するものである。

［発明の背景］ 化学分解法（Ｍａｘａｍ−Ｇｉｌｂｅｒｔ法等）、ジデ
オキシ法等による核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）の塩ノ、（配
列決定法においては、電気泳動用媒体層としてポリアク
リルアミドゲル膜を用いたスラブ電気泳動操作か必須の
操作となっている。特に近年において遺伝子関連の研究
か進むにつれて、ＤＮＡ塩基配列決定の操作の迅速化か
急務となっている。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミドのような
巾Ｈ，Ｈ０体を触媒の存在下にてＮ、Ｎ’　−メチレン
ビスアクリルアミドのような二官１七性の架橋剤を用い
架橋重合させることにより得られる。

なお、ＤＮＡ塩基配列決定用のポリアクリルアミドゲル
膜の形成に際して通常は、尿素あるいはホルムアミドの
ような少なくとも１個のカルバモイル基をもつ化合物変
性剤を含有させる。

■−記の重合反応はラジカル架橋重合てあり、酸素の影
響により反応か阻害されるため、ポリアクリルアミドゲ
ル膜は酸素を遮断した状態で調製する必要がある。この
理由から、現在では一般に、ポリアクリルアミドゲル膜
は２枚のガラス板て形成されたセル（一定の空間、たと
えば約０．３〜１ｍｍ厚の空間を有するもの）の中にゲ
ル形成液を注入し、１％ｊ素を遮断した状ｙＥで架橋重
合させてゲル膜を形成させている。しかし、この方法は
二枚のガラス板の間でゲル膜を形成するために、取り扱
い性が悪く、かつゲル膜の量産化か困難であるといった
大きな欠点を有している。

以上のようにして形成したポリアクリルアミドゲル膜を
電気泳動媒体として用いる電気泳動操作は、たとえば、
次のようにして実施される。

サンプルスロットか上端部に設けられたポリアクリルア
ミドゲル膜をガラス板に挟んだままの状態で垂直に配こ
し、まず前電気泳動操作を行なったのち、サンプルスロ
ット中に試料（マキサム・ギルバート分解した３２　ｐ
ラベル化ＤＮＡなど）を一定量注入し、次いで電気泳動
操作を行なう、そして一定時間（例、約６時間〜１２時
間）の電気泳動を行なった後１片面のガラス板を注意深
く除去し、その露出面をポリ塩化ビニリデンフィルムな
どの合成樹脂製フィルムでゲル膜を覆い、この状ｆＥｉ
にてオートラジオグラフィー処理を行なう。

このオートラジオグラフィー処理は、ポリアクリルアミ
ドゲル 線フィルム、増感スクリーンを順次のせて，低温（たと
えば、−８０℃）で一定時間（たとえば、約１０〜２０
時間）露光を行ない，そして露光終了後．ｘｍフィルム
を現像し、ＤＮＡの分離泳動パターンを画像化する処理
である。このようにして得られたＤＮＡの分離泳動パタ
ーンに基づいてＤＮＡの塩基配列を決定することができ
る。

オートラジオグラフィー処理は以上のように長時間を必
要とするため、その迅速化か望まれ、更に読みとりの高
分解能化も望まれている。

従来のアクリルアミドゲル膜を用いた電気泳動媒体材料
は上記のようにガラス板を用いるために取り扱い性に問
題があり、しばしばガラスを割ったりして実験を失敗す
ることがある。更に、オートラジオグラフィーに際し，
上記のように片面のガラスを除く・必要かあり、この時
にゲル膜を破損したりする事もあり、この操作は非常に
熟練を必要とする。したがって、この様な欠点を改良し
た取り扱い性の良好なポリアクリルアミドゲル膜の開発
が既にすすめられ、支持体としてポリエチレンテレフタ
レートなどのプラスチック材料からなる支持体を用い、
その上にポリアクリルアミドゲル膜を形成した電気泳動
媒体材料が既に提案されている。

上記のプラスチック材料製の支持体を用いた電気泳動媒
体材料は、その製造か容易て、珈り扱い性も良いとの利
点を有する。そして、ＤＮＡ分解物などの電気泳動も、
その電気泳動媒体材料を用いて行なうことがてきるが、
本発明者か詳細に検討したところによると、支持体とし
てガラス板を用いて製造した電気泳動媒体材料に比較す
ると、その解像力か若−「低下する傾向があることがわ
かった。

［発明の要旨］ 本発明の目的は、新規なプラスチック製フィルム（ある
いはシート）を支持体として用いたポリアクリルアミド
ゲル膜系電気泳動媒体材料を提供することにある。

本発明の目的は、特にプラスチック製フィルム（あるい
はシート）を支持体として用いたポリアクリルアミドゲ
ル膜系電気泳動媒体材料であって、支持体としてガラス
板を用いて製造した電気泳動媒体材料と同等の解像力を
示す電気泳動媒体材料を提供することにある。

未発ＩＪＩは、アクリルアミド系化合物と架橋剤とが木
の存在ドて架橋組合してなるポリアクリルアミド系水性
ゲルからなり、変性剤として少なくとも１個のカルバモ
イル基をもつ化合物を含む電気泳動用媒体層およびプラ
スチック材料製支持体を含む電気泳動用媒体材料であっ
て、該電気泳動用媒体層と支持体層との間に、該支持体
材料よりも酸素透過係数か低い樹脂材料からなる樹脂中
間層か備えられていることを特徴とする電気泳動用媒体
材料からなるものである。

［発明の効果］ 本発明の電気泳動用媒体材料は、上記のようにプラスチ
ック製支持体からの電気泳動媒体層への酸素の透過、拡
散を低下させることのできる樹脂中間層か設けられてい
るため、電気泳動用媒体層（ポリアクリルアミドゲル膜
）の形成のための架橋重合反応が非常に円滑に進行し、
高度に均質な電気泳動用媒体層が形成される。従って、
そのような樹脂中間層を備えていないプラスチック支持
体上に形成された電気泳動用媒体層に比較して、本発明
の電気泳動用媒体材料の電気泳動用媒体層は、更に高い
解像性を示す。

［発明の詳細な記述］ 本発明の電気泳動用媒体材料の支持体は、プラスチック
材料から形成されるシート状物（フィルム状物も含む）
である。このプラスチック製シートとしては、任意のプ
ラスチック材料から形成したものを用いることができる
。好ましいプラスチック材料の例としては、ポリエチレ
ンテレフタレート、ビスフェノールＡのポリカルボネー
ト、ポリ塩化ビニル、ポリメチルメタクリレート、ポリ
エチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、セルロース
アセテート、およびセルロースアセテートプロピオネー
トをあげることができる。

プラスチック材料製支持体は公知の表面活性化処理によ
り表面を親水化したものであることが好ましい０表面親
木化処理のためには紫外線照射、グロー放電処理、コロ
ナ放電処理、火焔処理、電子線照射、ケミカルエツチン
グ、電解エツチング等の公知の方法を適用することがて
きる。

支持体は、一般に厚さか約５０〜５００ｇｍ、好ましく
は約７０〜３００７ｚｍのものか用いられる。

これまでに提案されているプラスチック製支持体を用い
た電気泳動用媒体においては、プラスチック製支持体上
に、直接あるいは接着剤層を介してポリアクリルアミド
ゲル形成用塗布液が塗布され、次いで窒素雰囲気下にて
架橋重合反応が行なわれている。

本発明の電気泳動用媒体においては、プラスチック製支
持体上に、該支持体の材料よりも酸素透過係数が低い樹
脂材料からなる樹脂中間層が設けられる。

上記の樹脂中間層は、層厚２０１Ｌｍに形成したフィル
ムの状態における酸素透過量が１５ｃｃ／ｍ２・ａｔ−
・ｄａｙ以下の樹脂材料よりなることが好ましく、特に
層厚２０ｐｍに形成したフィルムの状ｙ６における酸素
透過量が１０ｃｃ／ｒｎ’・ａＬ−・ｄａｙ以下の樹脂
材料よりなることが好ましい、好ましい樹脂材料の例と
しては、塩化ビニリデン・塩化ビニル共重合体、ポリビ
ニルアルコール、ポリアクリロニトリル、ポリ塩化ビニ
リデン、ビニルアルコール・エチレン共重合体、塩化ビ
ニリデン・アクリロニトリル共重合体、アクリロニトリ
ル・メチルアクリレート・フタジエン共重合体などを挙
げることができる。なお、Ｌ記の酸素透過量は、酸素透
過量の測定方法として一般的に利用されているｍ　ｏ　
ｃ　ｏ　ｎ法による測定値である。

上記ｖＡ脂中間層は約０．５〜２０ｐＬｍの層厚を右す
ることが好ましく、さらに約ｌ〜８ｐｍの層厚を右する
ことが特に好ましい。

樹脂中間層と上記支持体とがらなる積層体の酸素透過量
は１０ｃｃ／ｒｎ’・ａｔｍ　−ｄａｙ以丁であること
が好ましく、さらに７　ｃ　ｃ　／ｒｒｆ　−ａＬｍ　
・ｄａｙ以下であることが特に好ましい。

］二記の樹脂中間層のＬに直接、あるいは接着剤層など
の他の中間層を介して電気泳動用媒体層カ一般けられる
。

次に′ｉ［気泳動用媒体層（以下において、ゲル媒体層
、ポリアクリルアミドゲル膜あるいは単にゲル膜ともい
う）について説明する。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミド系化合物
と架橋剤とを、水溶液または水分散液として水中に溶解
または分散させてゲル形成液を調製したのち、液中て両
者を架橋重合させて架橋刊合した水性ゲル膜として形成
することにより得ることができる。本明細書においては
、特にことわらない限り、（水中に）溶解と（水中に）
分散の両者を含めて単に（水中に）溶解といい、水溶液
と水分散液の両者を含めて巾に水溶液という。また、溶
媒または分散媒として、所望により加えられる有機溶媒
と水の混合物をも包含する。

ポリアクリルアミドゲル膜の形成に用いることができる
アクリルアミド系化合物の例としては、アクリルアミド
、Ｎ−メチルアクリルアミド。

Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ−（ヒドロキシメ
チル）アクリルアミド、ジアセトンアクリルアミド等の
アクリルアミド系化合物やメタクリルアミド等のメタク
リルアミド系化合物が挙げられ、これらの化合物は単独
で、あるいは二種以上を併用して用いることがてきる。

これらのアクリルアミ１〜県北合物のうもではアクリル
アミドか最も好ましく、またアクリルアミドと他のアク
リルアミド系化合物、メタクリルアミド系化合物の一種
以４二の併用も好ましい。

架橋剤としてはｒ　　ＥｌｃｃＬｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
Ｊ　１９８１．２゜２２０−２２８等上記載の公知の化
合物（一種または二種以上の組合せ）を用いることがで
きる。架橋剤の具体例としては、Ｎ、Ｎ’　−メチレン
ビスアクリルアミド（ＢＩＳ）；Ｎ、Ｎ“−プロピレン
ビスアクリルアミド（ＰＢＡ）、ジ（アクリルアミドジ
メチル）エーテル（ＤＡＥ）；　ｌ、２−ジアクリルア
ミドエチレングリコール（ＤＥＧ）；エチレンウレアビ
スアクリルアミド（ＥＵＢ）；エチレンジアクリレート
（ＥＤＡ）、Ｎ、Ｎ’　−ジアリルタータルジアミド（
Ｎ、Ｎ’−ｄｉａｌｌｙｌｔａｒＬａｒｄｉａｓｉｄｅ
　：　ＤＡＴＤ）　；およびＮ、Ｎ’　−ビスアクリリ
ルシスタミン（Ｎ、Ｎ’−ｂｉｓａｃｒｙｌｙｌｃｙｓ
ｔａｍｉｎｅ。

ＢＡＣ）　′：Ｊの二官渣性化合物か挙げられる。

架橋剤の量は、単一を体と架橋剤の総ｉ′Ｉｆ量に対し
て約２〜３０ｗｔ％、好ましくは約３〜１０ｗｔ％の範
囲である。

ゲルＣ度としては、Ｓ　、　Ｉｔ　ｊ　ｅ　ｒ　ｔ　ｃ
　ｎ　：　　ｒ　　Ａ　ｒ　ｃ　ｌ＋　。

１１ｉｏｃｈｅｍ、　　Ｂ’＋ｏｐｈｙｓ、　　Ｊ　　
ｌ　　（５ｕｐｐ１．　　）、　　１４７（１９６２）
上記載の定義に従って表示して、単が体、架橋剤および
水からなるゲル膜の容積に対して、単量体と架橋剤の量
か約３　ｗ　／　ｖ％から約３０　ｗ　／　ｖ％の範囲
で好ましく用いられる。

ポリアクリルアミドゲル膜に含有させる変性剤は、少な
くとも１個のカルバモイル基を持つ化合物であり、その
具体例としては、尿素、ホルムアミド等が挙げられる。

これらのうちで尿素が特に好ましく用いられる。変性剤
は、単量体と架橋剤とを含む水性ゲルの容積に対して、
約４０〜６０ｗ　ｔ　／　ｖ％の範囲の剣で用いられる
。尿素を用いる場合には、単量体と架橋剤とを含む水性
ゲルｌ見に対し約６モル（約３６０ｇ）から飽和溶解量
まて、好ましくは約７モル（約４ｚｏｇ）から飽和溶解
量までの範囲の賃て用いることができる。

ポリアクリルアミドゲル膜には水溶性ポリマーを含有さ
せることができる。

水溶性ポリマーとしては、付加重合型または縮毛金型の
水溶性ポリマーを用いることがてきる。

付加重合型ポリマーの、ｒ４体例としては、ポリビニル
アルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミ
ド笠の非ｒオン性水溶性ポリマーが挙げられる。縮重合
型ポリマーの具体例としてポリエチレングリコール、ポ
リプロピレングリコール等の非イオン性水溶性ポリアル
キレングリコールか挙げられる。水溶性ポリマーの分子
量は、約１万から約１００万の範囲のものが好ましい。

これらの水溶性ポリマーのうちでは、ポリエチレングリ
コール、ポリアクリルアミドか特に好ましい。

水溶性ポリマーは、単量体と架橋剤の合計玉量に対して
約２ｗｔ％から約１００　ｗ　ｔ％の範囲、好ましくは
約５　ｗ　ｔ％から約５０　ｗ　ｔ％の範囲のかて用い
られる。水溶性ポリマーを添加することにより、ポリア
クリルアミドゲル膜は可塑性を有するようになるため、
裁断加工時に壊れることがなくなり、またゲル膜は乾燥
時にも可塑性を有するようになり、もろさか改良され、
壊れにくくなるとの利点かある。また、水溶性ポリマー
の分子量、および添加賃を選択することにより、ゲル膜
の粘度をコントロールすることもできる。

ポリアクリルアミドゲル１すにはアガロースを含有させ
ることができる。アガロースは公知のアガロースであれ
ば特に制限はなく、低電気浸透性、中電気浸透性、高電
気浸透性アガロースのいずれをも用いることができる。

用いることのてきるアガロースの例としては特開昭５５
−５７３０号、特開昭５５−１１０９４６号、特表昭５
７−５０２０９８号等の公報に開示されているアガロー
ス等がある。

アガロースは、中量体と架橋剤とを含むゲル組成液の容
積に対して約０．２ｗ／ｖ％から約２　ｗ　／　ｖ％、
好ましくは約０．３ｗ／ｖ％から約１．２ｗ／ｖ％の割
合にて添加される。ゲル膜にアガロースを添加すること
により、ゲル形成用溶液温度を変化させることにより、
適当な溶液粘度にコントロールすることが可能となり、
その流動性を市めることができ、またゲル膜を成形する
時には成形しやすくなるとの利点かある。

ポリアクリルアミドゲル膜にはｐＨ１ａ衝剤を含有させ
ることができる。緩衝剤としては、ｐＨ８，０から１０
．０、好ましくはｐＨ８，０から９．０の範囲内のｐＨ
値に緩衝できる緩衝剤であれば、いずれをも用いること
ができる。用いうる緩衝剤としては、１１本化学会編ｒ
化学便覧　基礎編１（東京、丸み輛１９６６年発行）　
１３１２−１コ２０頁：ｒ　Ｄａｔａ　Ｆｏｒ　Ｒｉｏ
ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｊ　（Ｒ，Ｍ、
Ｃ。

Ｄａｗｓｏｎ　　ｃＬ　ａｔ　ｇ　　第２版、　０ｘｆ
ｏｒｄ　ａＬ　ｔｈｅ　Ｃ１ａｒｃｎｄｏｎ　Ｐｒｅｓ
ｓ、１９６９年発行）　４７６−５０８ベージ；ｒ　　
ＲｉｏｃｈｅｍｉｓＬｒｙ　Ｊ、５，４６７（１９６６
）　　；ｒ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　　旧ｏｃｈｅｖｉ
ｓＬｒｙ　　Ｊ　　１０４．：１０ロー３１０（＋９８
０）等の刊行物上記載の緩衝剤があげられる。そして、
その具体例としてはトリス（ヒドロキシメチル）アミノ
メタン（Ｔｒｉｓ）　　［ＣへＳ　Ｒｅｇｉｓｔｒｙ　
Ｎ。

７７−８６−１１　、　Ｎ、　Ｎ−ビス（２−ヒドロキ
シエチル）グリシン（［１ｉｃｉｎｃ）　、　Ｎ　−２
−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎｏ−２−ヒドロキシ
プロパン−３−スルホン酸のＮａ塩またはに塩等、Ｎ−
２−ヒトロキシエチルビベラジンーＮ’　−３−プロパ
ンスルホン酸のＮａ塩またはｙｃ１１！！３．Ｎ−［ト
リス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパ
ンスルホン酸のＮａ塩またはに塩および、これらのいず
れかと必要により組合せられる酸、アルカリまたは塩等
をあげることができる。

特に好ましい緩衝剤の例としてはＴｒｉｓ、ホウ酸およ
びＥＤＴＡ・２Ｎａ塩の組合せ（ｐＨ８，３）かある。

未発ＩＪ１においてポリアクリルアミドゲル膜はアクリ
ルアミドに代表される単量体、二官億性のアリル（ａｌ
ｌｙｌ　）化合物またはアクリル化合物（架橋剤）、水
溶性ポリマー、およびアガロースを実質的に均一に溶解
させた水溶液中で単量体と架橋剤とをラジカル架橋重合
させて得られるものであり、単；−，４２体と架橋剤か
ら形成された三次元架橋重合体に水溶性ポリマーとアガ
ロースが実質的に分散されて、後二者のポリマー釦が三
次元架橋重合体とがらみあっている構造を有すると推定
される。

上記のラジカル架４６ｍ合反応は、分子状酸素の不存在
下て過酸化物の存在および／または紫外線照射笠の公知
の方法により発生させることができる。この反応を加熱
および紫外線照射により加速することもできる。

ラジカル架橋重合用触媒としては、ｒ　　Ｅｌｃｃｔｒ
。

ｐｈｏｒｅｓｉｓＪ　１９８１．２．２１：ｌ−２１９
，同１９８１．２．２２０−２２８：青水、永井編［最
新電気泳動法Ｊ　　（１’１７３年発行）等上記載の公
知の低温ラジカル重合開始剤のうちから適宜選択して用
いることができる。

好ましいラジカル重合開始剤の具体例としては、β−シ
メチルアミノブロピ才二トリル（ＤＭＡＰＮ）−ベルオ
クソニ硫酸アンモニウム混合物。

Ｎ、Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’　−テトラメチルエチレンジアミ
ン（ＴＥＭＥＤ）−ベルオクソニ硫酸アンモニウム混合
物、ＴＥＭＥＤ−リボフラビン混合物、ＴＥＭＥＤ−リ
ボフラビン−ｉＭ酸化水素混合物と紫外線照射の組合せ
等が挙げられる。ラジカル重合開始剤の含有發は、中量
体と架橋剤の合計重量に対して約０．３〜５　＋１’？
、　＋１′ｃ％、そして好ましくは約０．５〜３　Ｔｉ
−＋１’ｉ％の範囲である。

ゲル媒体層は、支持体りの前記の樹脂中間層の七に直接
あるいは接若剤層などの他の中間層を介して上記のゲル
形成液を公知の方法により塗布して設けたのち、ゲル形
成液を架橋重合させることにより形成することがてきる
。

ゲル形成液を支持体の表面で架橋重合させる場合には、
ゲル形成液塗布層のＬをさらにカバーフィルム、シート
または板などの被覆材料でおおうことができる。この目
的に使用されるカバーフィルム、シート、または板とし
ては前記支持体と同様な素材からなり、更に支持体同様
、酸素透過渣を低下させているものを用いることができ
る。この被覆材料の厚さは３００ｇｍ以下であり、実用
的に好ましい厚さの範囲は約４〜２００ｇｍであり、特
に好ましい範囲は約４ルｍ〜１００ルｍである。

ポリアクリルアミドゲル膜には、必要に応じて抗酸化剤
などの他の添加剤を含有させることができる。抗酸化剤
としては、ゲル膜に配合しうろことが知られている種々
の化合物を用いることができる。抗酸化剤の具体例とし
てはジチオスレイトール、２−メルカプトエタノールを
挙げることができる。

その他の添加剤としては湿潤剤があり、ポリアクリルア
ミドゲル膜にはグリセリン、エチレングリコール等のポ
リオール化合物を含有させることもてきる。ポリオール
化合物の含有ツ正は、ゲル膜の容桔に対して約５〜約４
０　ｗ　／　ｖ％の範囲から選ばれる。ポリオール化合
物のうちてはグリセリンか特に好ましい。湿潤剤を配合
することによりゲル膜の保存時の極端な水分の蒸発によ
る乾燥を防ぐことが可ずｔとなり、また極端な乾燥に起
因するもろさを防ぎ、ひびわれを防ぐ等のゲル膜の物性
か改みされるとの利点かある。

本発明の電気泳動用ル奴体材料は、重連の諸文献等上記
載の公知の方法に従って、水ト型および垂直型平板電気
泳動法、ディスク電気泳動泳動状等のいずれにも用いる
ことができる。

以Ｆに本発明の実施例を記載するが、これらは本発明の
範囲を限定するものてはない。

［実施例１］ 紫外線照射処理により表面を親木性にした厚さ１８０ｐ
ｍの無色透明ポリエチレンテレフタレートシート（支持
体）上に、塩化ビニリデン・塩化ビニル（９：ｌ）共重
合体のラテックス（この塩化ビニリデン・塩化ビニル（
９：ｌ）共重合体の層厚２０ｇｍに形成したフィルムの
状態における１ｖ素透過かは約５ｃｃ／ｍ２ー　ａｔｅ
　・ｄａｙ　）を１１１１Ｄして、層厚が約５ｐｍの樹
脂層を形成した。

上記の樹脂層か付設された支持体の酸素透過係数は４Ｃ
ｃ／ｒｎ′・ａＬ烏・ｄａｙであった。

支持体上に設けられた樹脂層のＬに、アクリルアミド７
．６０ｇ、８１３４００ｍｇ、リボフラビン（０，２５
ｗＬ％水溶液）１．５ｍＭ、尿素４２ｇ、　　トリス（
ヒドロキシメチル）アミノメタン［ＣＡＳ　　Ｒｅｇｉ
ｓｔｒｙ　Ｎｏ、　７７−８６−１　］　１　、２１ｇ
、ホウ酸０゜６５４ｇおよびＥＤＴＡ　・２Ｎａ１１！
７５　ｍ　Ｋを含有する１００ｍ文の溶液に重合開’Ｉ
ｆ剤としてベルオクソニ硫酸アンモニウム（５ｗｔ％）
１．３ｍｉ、ＴＥＭＥＤ３３．Ｕを加えたものを０．３
ｍｍの厚みに塗布成形し、１００Ｗ高圧水銀灯を１０ｃ
ｍの距離から照射し、１０分間静置しポリアクリルアミ
ドゲル膜を得た。

［比較例１］ ポリエチレンテレフタレートシート（支持体）にに、塩
化ビニリデン・塩化ビニル（９：ｌ）共重合体の塗布層
を設けなかったこと以外は実施例１と同様にして支持体
上にポリアクリルアミドゲル膜を形成した。

なお、上記の支持体の酸素透過係数は１７ｃｃ／　ｒｒ
ｒ’　・ａｓｓ　−ｄａｙであった。

［参考例１］ 支持体としてポリエチレンテレフタレートシートの代り
にガラス板を用い、塩化ビニリデン・塩化ビニル（９：
ｌ）共重合体の塗布層を設けなかったこと以外は実施例
１と同様にして支持体」二にポリアクリルアミドゲル膜
を形成した。

［電気泳動試験］ 実に例１、比較例１および参考例１て得られたポリアク
リルアミドゲル膜にサンプル注入［］を形成し１次いて
ゲル膜に厚さ６３ｐｍのポリエチレンテレフタレートシ
ート（カバーシート）をかぶせた。

このポリアクリルアミドゲル膜を使用して、ジデオキシ
法により調製された試料を電気泳動にかけ、ＤＮＡ塩基
配列決定の実験を行なった。

すなわち、電気泳動終了後に、ゲル膜に対して一８０°
Ｃてオートラジオグラフィー処理を常法に従って行ない
、得られた泳動パターンの可視画像にノ、（いてＤＮＡ
塩基配列の決定操作を行なった。

実施例１および参照例１のゲル膜により得られた泳動パ
ターンは高い解像力（実施例１のゲル膜における塩基解
読数：１９８．参照例１のゲル膜における塩基解°読数
：１９２）を示し、解読が容易であった。一方、比較例
１のゲル１漠により得られた泳動パターンの解像力は、
実施例１および参照例１のゲル膜により得られた泳動パ
ターンの解像力に比較して低く、塩基解読数も１３１と
低かった。

［実施例２］ 支持体Ｊ二に設ける中間樹脂層をポリアクリロニトリル
（このポリアクリロニトリルの層厚２０ＪＬｍに形成し
たフィルムの状態におけるｉ？素素通過量約２ＣＣ／ｒ
ｎ′・ａＬＩＩ−ｄａｙ）から、厚さをｉ。

ｇｍの層として形成した以外は実施例１と同様にして中
間樹脂層を有する支持体を形成した。

Ｌ記の樹脂層か付設された支持体の酸素透過係数は２　
ｃ　ｃ　／ｒｎ’　・ａＬｍ　−ｄａｙであった。

次いて、１−記支持体上に中間樹脂層の−Ｌに実施例１
と同様にしてポリアクリルアミドゲル膜を形成した。

［電気泳動試験］ 実施例２、比較例１および参考例１で得られたポリアク
リルアミドゲル膜にサンプル注入口を形成し、次いてゲ
ル膜に厚さ５０７ｚｍのポリエチレンテレフタレートシ
ート（カバーシート）をかぶせた。

Ｌ記のポリアクリルアミドゲル膜を使用して、コ２　Ｐ
　−Ｄ　Ｎ　Ａをマキサム・ギルバート分解した試料を
電気泳動にかけ、ＤＮＡ塩基配列決定の実験を行なった
。

すなわち、電気泳動終了後に、ゲル膜に対して−８０’
Ｃてオートラジオグラフィー処理を常法に従って行ない
、得られた泳動パターンの可視画像に基いてＤＮＡ塩基
配列の決定操作を行なった。

実施例２８よび参照例１のゲル膜により得られた泳動パ
ターンは高い解像力（実施例１のゲル膜における塩基解
読数：６５．参照例１のゲル膜における塩基解読数二６
１）を示し、解読か容易てあった。一方、比較例１のゲ
ル膜により得られた泳動パターンの解像力は、実施例１
および参照例１のゲル膜により得られた泳動パターンの
解像力に比較して低く、塩基解読数も４１と低かった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アクリルアミド系化合物と架橋剤とが水の存在下で
   架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲルからな
   り、変性剤として少なくとも１個のカルバモイル基をも
   つ化合物を含む電気泳動用媒体層およびプラスチック材
   料製支持体を含む電気泳動用媒体材料であって、該電気
   泳動用媒体層と支持体層との間に、該支持体材料よりも
   酸素透過係数が低い樹脂材料からなる樹脂中間層が備え
   られていることを特徴とする電気泳動用媒体材料。 ２、上記樹脂中間層か０．５〜２０μｍの層厚を有する
   ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の電気泳動
   用媒体材料。 ３、上記樹脂中間層が、層厚２０μｍに形成したフィル
   ムの状態における酸素透過量が１５ｃｃ／ｍ＾２・ａｔ
   ｍ・ｄａｙ以下の樹脂材料よりなることを特徴とする特
   許請求の範囲第１項記載の電気泳動用媒体材料。 ４、上記樹脂中間層が、塩化ビニリデン・塩化ビニル共
   重合体、ポリビニルアルコール、ポリアクリロニトリル
   、ポリ塩化ビニリデン、ビニルアルコール・エチレン共
   重合体、塩化ビニリデン・アクリロニトリル共重合体、
   およびアクリロニトリル・メチルアクリレート・ブタジ
   エン共重合体からなる酸素低透過性樹脂材料を含むこと
   を特徴とする特許請求の範囲第１項記載の電気泳動用媒
   体材料。 ５、上記樹脂中間層が上記支持体に塗布により形成され
   ており、かつ該樹脂中間層と支持体とが形成する積層体
   の酸素透過量が、１０ｃｃ／ｍ＾２・ａｔｍ・ｄａｙ以
   下であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
   電気泳動用媒体材料。 ６、プラスチック材料製支持体がポリエチレンテレフタ
   レートからなることを特徴とする特許請求の範囲第１項
   記載の電気泳動用媒体材料 ７、上記電気泳動用媒体層がさらに水溶性ポリマーおよ
   びアガロースを含むことを特徴とする特許請求の範囲第
   １項乃至第６項のいずれかの項記載の電気泳動用媒体材
   料。 ８、上記変性剤が尿素またはホルムアミドであることを
   特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第６項のいずれか
   の項記載の電気泳動用媒体材料。