JPS62112068A - ビリルビンの定量法 - Google Patents
ビリルビンの定量法Info
- Publication number
- JPS62112068A JPS62112068A JP25250785A JP25250785A JPS62112068A JP S62112068 A JPS62112068 A JP S62112068A JP 25250785 A JP25250785 A JP 25250785A JP 25250785 A JP25250785 A JP 25250785A JP S62112068 A JPS62112068 A JP S62112068A
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- JP
- Japan
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- bilirubin
- oxidase
- dye
- mbth
- reaction
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- Pending
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ビリルビン・オキシダーゼを用いて、被検液
例えは体液中のビリルビンを定量する方法に関する。
例えは体液中のビリルビンを定量する方法に関する。
従来、体液中のビリルビンの定量法としては、ジアゾス
ルファニル酸の如きジアゾニウム塩を用いるジアゾ法と
いう化学的測定法が主にもちいられている（金井泉、金
井正光共著、臨床検査法提要、第２８版、第■−２４頁
、昭和５３年、金庫出版発行）。しかしながらかかる化
学的測定法では反応の特異性、操作の煩雑性、試薬の刺
激腐食性などの欠点があり、自動分析装置への導入、維
持、管理および正確な測定などの点で多くの問題がある
ことが指摘されている。
ルファニル酸の如きジアゾニウム塩を用いるジアゾ法と
いう化学的測定法が主にもちいられている（金井泉、金
井正光共著、臨床検査法提要、第２８版、第■−２４頁
、昭和５３年、金庫出版発行）。しかしながらかかる化
学的測定法では反応の特異性、操作の煩雑性、試薬の刺
激腐食性などの欠点があり、自動分析装置への導入、維
持、管理および正確な測定などの点で多くの問題がある
ことが指摘されている。
また、最近、ビリルビン−オキシダーゼを用いて体液中
のビリルビンを定量する方法が開発されつつある。特公
昭５８−１１１９４号にアガリカス−ビスポーラス（Ａ
ｇａｒｉｏｕｇ ｂｉｉｐｏｒｕｓ）から調製したビリ
ルビン特異性菌性酵素組成物がビリルビンと特異的に反
応して色変化を生じる作用を有するとの記載がある。該
酵素組成物とビリルビンの反応において、過酸化水素は
該酵素組成物の調製法により生成する場合と生成しない
場合があるっそれ故、該酵素組成物をビリルビン含有被
検体に作用させ、過酸化水素生成量からあるいはビリル
ビンの変化を光学的に測定することからビリルビンを定
量する方法が提案されているが、該酵素組成物のビリル
ピンに対する反応が単一の酵素によって触媒されるのか
、あるいは複数の酵素系によって触媒されるのか非常に
不明確である。また、ビリルビンに対する該酵素組成物
の性質も充分に記載されていないのでビリルビンの定量
に有利な方法であるとはいい難い。また特開昭５９−１
７９９９号ζこは、ミロセシウム属の生産するビリルビ
ン・オキシダーゼ（このビリルビン・オキシダーゼにつ
いては特開昭５８−１４１７８３号参照）を用いて体液
中のビリルビンを定量する場合、該酵素単独では血清中
のビリルビンの存在形態の中のアルブミン結合型ビリル
ビンに作用しないため、反応促進４］として界面活性剤
、好ましくはコール酸ナトリウムを添加した状態で、ビ
リルビンの変化を光学的に測定し、ビリルビンを定量す
る方法が報告されている。本発明者らは先に担子菌、エ
ビタケ（Ｔｒａｃｈｙｄｅｒｍａ ｔｓｕｎｏｄａｅ）
の生産する新規ビリルビン舎オキシダーゼＭ−１（特願
昭５８−２１８８９５号参照）を含有するビリルビン用
試薬組成物をビリルビン含有被検液に作用させ、それに
より生じるビリルビンの変化を光学的に測定するビリル
ビンの定置方法について提案した（特願昭５９−１０５
６０４号）。該方法は反応促進剤無添加でもビリルビン
の定量が可能である点および反応促進剤を使用する場合
コール酸ナトリウムより約１３倍効果の高いデオキシコ
ール酸ナトリウムを用いる点で従来法より優れている。
のビリルビンを定量する方法が開発されつつある。特公
昭５８−１１１９４号にアガリカス−ビスポーラス（Ａ
ｇａｒｉｏｕｇ ｂｉｉｐｏｒｕｓ）から調製したビリ
ルビン特異性菌性酵素組成物がビリルビンと特異的に反
応して色変化を生じる作用を有するとの記載がある。該
酵素組成物とビリルビンの反応において、過酸化水素は
該酵素組成物の調製法により生成する場合と生成しない
場合があるっそれ故、該酵素組成物をビリルビン含有被
検体に作用させ、過酸化水素生成量からあるいはビリル
ビンの変化を光学的に測定することからビリルビンを定
量する方法が提案されているが、該酵素組成物のビリル
ピンに対する反応が単一の酵素によって触媒されるのか
、あるいは複数の酵素系によって触媒されるのか非常に
不明確である。また、ビリルビンに対する該酵素組成物
の性質も充分に記載されていないのでビリルビンの定量
に有利な方法であるとはいい難い。また特開昭５９−１
７９９９号ζこは、ミロセシウム属の生産するビリルビ
ン・オキシダーゼ（このビリルビン・オキシダーゼにつ
いては特開昭５８−１４１７８３号参照）を用いて体液
中のビリルビンを定量する場合、該酵素単独では血清中
のビリルビンの存在形態の中のアルブミン結合型ビリル
ビンに作用しないため、反応促進４］として界面活性剤
、好ましくはコール酸ナトリウムを添加した状態で、ビ
リルビンの変化を光学的に測定し、ビリルビンを定量す
る方法が報告されている。本発明者らは先に担子菌、エ
ビタケ（Ｔｒａｃｈｙｄｅｒｍａ ｔｓｕｎｏｄａｅ）
の生産する新規ビリルビン舎オキシダーゼＭ−１（特願
昭５８−２１８８９５号参照）を含有するビリルビン用
試薬組成物をビリルビン含有被検液に作用させ、それに
より生じるビリルビンの変化を光学的に測定するビリル
ビンの定置方法について提案した（特願昭５９−１０５
６０４号）。該方法は反応促進剤無添加でもビリルビン
の定量が可能である点および反応促進剤を使用する場合
コール酸ナトリウムより約１３倍効果の高いデオキシコ
ール酸ナトリウムを用いる点で従来法より優れている。
上記酵素法は反応の特異性による正確な定置が可能であ
る点で化学的方法より優れた方法であるが、臨床診断方
法としての性格上、より迅速な測定方法の開発が望まれ
る。そこで本発明者らはビリルビンの定量方法について
鋭意検討を重ねた結果、ビリルビン含有被検液に３−メ
チル−２−ベンゾチアゾリノン−ヒドラゾン（以下ＭＢ
ＴＩ（と略記する）２１よび新規ビリルビン・オキシダ
ーゼＭ−１に作用させた後、酸性にして生成する青色色
素を光学的に測定することよりなるビリルビンの定検法
を既に提案した（特願昭５９−１５２５３３号）。この
方法は新規ビリルビン・オキシダーゼＭ−１がＭＢＴＨ
とビリルビンの縮合反応を融媒し、生成する縮合物質を
酸性条件下比色定量する方法で、新規ビリルビン・オキ
シダーゼＭ−１の存在下、ＭＩＩＩＴＨトビリルビンの
縮合反゛しがビリルビンの酸化よりも迅速に進行するこ
とを利用したものである。
る点で化学的方法より優れた方法であるが、臨床診断方
法としての性格上、より迅速な測定方法の開発が望まれ
る。そこで本発明者らはビリルビンの定量方法について
鋭意検討を重ねた結果、ビリルビン含有被検液に３−メ
チル−２−ベンゾチアゾリノン−ヒドラゾン（以下ＭＢ
ＴＩ（と略記する）２１よび新規ビリルビン・オキシダ
ーゼＭ−１に作用させた後、酸性にして生成する青色色
素を光学的に測定することよりなるビリルビンの定検法
を既に提案した（特願昭５９−１５２５３３号）。この
方法は新規ビリルビン・オキシダーゼＭ−１がＭＢＴＨ
とビリルビンの縮合反応を融媒し、生成する縮合物質を
酸性条件下比色定量する方法で、新規ビリルビン・オキ
シダーゼＭ−１の存在下、ＭＩＩＩＴＨトビリルビンの
縮合反゛しがビリルビンの酸化よりも迅速に進行するこ
とを利用したものである。
本発明の目的は、被検液中のビリルビンの新規定値法の
、開発にあり、上述のビリルビン・オキシダーゼＭ−１
以外のビリルビン−オキシダーゼを用いて、迅速にそし
て正確かつ簡単にビリルビンを定量する方法を提供する
ことにある。
、開発にあり、上述のビリルビン・オキシダーゼＭ−１
以外のビリルビン−オキシダーゼを用いて、迅速にそし
て正確かつ簡単にビリルビンを定量する方法を提供する
ことにある。
本発明を概説すれは、本発明はビリルビンの定量方法に
関する発明であって、ビリルビン含有被検液にＭＢＴＨ
２よひビリルビン・オキシダーゼ（ビリルビン・オキシ
ダーゼＭ−１’ｔ−除く）を作用させた後、酸性にして
生成する青色色素を光学的に測定することよりなる。
関する発明であって、ビリルビン含有被検液にＭＢＴＨ
２よひビリルビン・オキシダーゼ（ビリルビン・オキシ
ダーゼＭ−１’ｔ−除く）を作用させた後、酸性にして
生成する青色色素を光学的に測定することよりなる。
本発明者らはｌ′ｉ１Ｊ述した新規ビリルビン・オキシ
ダーゼＭ−１以外のビリルビン・オキシダーゼを用いて
ビリルビンの定量方法を検討した結果、従来のビリルビ
ン−オキシダーゼもＭＢＴＨトビリルビンの縮合反応を
触媒し、生成する縮合物質を酸性条件下、比色定量する
ことによりビリルビンの定量が可能であること８よびビ
リルビン−オキシダーゼの存在下、 ＭＢＴＨとビリル
ビンの縮合反応がビリルビンの酸化よりも迅速に進行す
ることを見出し本発明を完成した。
ダーゼＭ−１以外のビリルビン・オキシダーゼを用いて
ビリルビンの定量方法を検討した結果、従来のビリルビ
ン−オキシダーゼもＭＢＴＨトビリルビンの縮合反応を
触媒し、生成する縮合物質を酸性条件下、比色定量する
ことによりビリルビンの定量が可能であること８よびビ
リルビン−オキシダーゼの存在下、 ＭＢＴＨとビリル
ビンの縮合反応がビリルビンの酸化よりも迅速に進行す
ることを見出し本発明を完成した。
本発明に使用されるビリルビン・オキシダーゼＭ−１ｕ
外のビリルビン・オキシダーゼとしては、例えばミロセ
シウム嘱の生産するビリルビン・オキシダーゼあよひス
エヒロタケ属の生産するビリルビン−オキシダーゼが挙
げられる。
外のビリルビン・オキシダーゼとしては、例えばミロセ
シウム嘱の生産するビリルビン・オキシダーゼあよひス
エヒロタケ属の生産するビリルビン−オキシダーゼが挙
げられる。
これらのビリルビン・オキシダーゼの一般的な性質につ
いては、ＲＵ者は特公昭６０−１２０３２号に後者は特
開昭５９−１３５８８０号に記載されている。
いては、ＲＵ者は特公昭６０−１２０３２号に後者は特
開昭５９−１３５８８０号に記載されている。
なあ、ミロセシウム属２よびスエヒロタケ属の生産する
ビリルビン・オキシダーゼの活性測定はビリルビンの４
６０１ｍの吸収の減少より求めた。即ち、オメガ高ビリ
ルビンコントロール血清（米国、ハイランド社製） ０
．１ ｍｅ、 ＋）ン酸緩衝液（ｐＨ７，０） ３
００マイクロモルおよび適当に希釈した酵素液０．１
ｍｅ、反応液量３．０ ｍｅで３７℃、１０分間反応さ
せ、ビリルビンに基づ＜４６０ｎｌＴ＋の吸収減少を測
定した。ビリルビン・オキシダーゼの１単位は上記反応
系で１分間に１マイクロモルのビリルビンを酸化する醇
素澄として表示した。
ビリルビン・オキシダーゼの活性測定はビリルビンの４
６０１ｍの吸収の減少より求めた。即ち、オメガ高ビリ
ルビンコントロール血清（米国、ハイランド社製） ０
．１ ｍｅ、 ＋）ン酸緩衝液（ｐＨ７，０） ３
００マイクロモルおよび適当に希釈した酵素液０．１
ｍｅ、反応液量３．０ ｍｅで３７℃、１０分間反応さ
せ、ビリルビンに基づ＜４６０ｎｌＴ＋の吸収減少を測
定した。ビリルビン・オキシダーゼの１単位は上記反応
系で１分間に１マイクロモルのビリルビンを酸化する醇
素澄として表示した。
ビリルビンの定量法
本発明者らは、体液中のビリルビンの定量方法について
鋭意検討を・重ねた結果、ビリルビン、オキシダーゼが
、ＭＢＴＨとビリルビンの酸化縮合を触媒することを利
用して、ビリルビンの定量かり能であること七見出した
。本発明に従えば、上記の性ｆｋ利用してビリルビン含
有被検液、例えば血清２よび尿など体液中のビリルビン
を定量することができる。例えば血清などの検体１０〜
１００声ｌにＭＢＴＨＯ，１〜３マイクロモル、ｐＨ５
，０〜７．０の緩衝液Ｊよびビリルビン・オキシダーゼ
ｏ、ｏｏｓ〜０．５単位を加えて、２０〜４０℃、好ま
しくは３７℃で、１〜２０分間、好ましくは３〜６分間
反応させると、５２０ｎｆｆ＋および５５０ｎｍ付近に
極大吸収をもつ赤色色素を生成する。この赤色色素は酸
性条件下、例えば塩酸または硫酸酸性下の条件では６１
０ｎｆｌｌに極大吸収をもちかつ分子吸光係数が大きい
青色色素に変換するので、この青色色素’に６１０ｎｍ
で測定することにより検体中のビリルビンを定量するこ
とができる。
鋭意検討を・重ねた結果、ビリルビン、オキシダーゼが
、ＭＢＴＨとビリルビンの酸化縮合を触媒することを利
用して、ビリルビンの定量かり能であること七見出した
。本発明に従えば、上記の性ｆｋ利用してビリルビン含
有被検液、例えば血清２よび尿など体液中のビリルビン
を定量することができる。例えば血清などの検体１０〜
１００声ｌにＭＢＴＨＯ，１〜３マイクロモル、ｐＨ５
，０〜７．０の緩衝液Ｊよびビリルビン・オキシダーゼ
ｏ、ｏｏｓ〜０．５単位を加えて、２０〜４０℃、好ま
しくは３７℃で、１〜２０分間、好ましくは３〜６分間
反応させると、５２０ｎｆｆ＋および５５０ｎｍ付近に
極大吸収をもつ赤色色素を生成する。この赤色色素は酸
性条件下、例えば塩酸または硫酸酸性下の条件では６１
０ｎｆｌｌに極大吸収をもちかつ分子吸光係数が大きい
青色色素に変換するので、この青色色素’に６１０ｎｍ
で測定することにより検体中のビリルビンを定量するこ
とができる。
例えば、オメガ高ビリルビンコントロール血清（２０グ
／ｄｌ） （米国ハイランド社製）１００ｆｉｔに、
ＭＢＴＨ１マイクロモル、０．３Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，０） １．Ｏｍｇおよびミロセシウム起源のビリ
ルビン拳オキシダーゼ０．２単位加えて、総液量２．
Ｏｍｅで、３７℃、５分間反応させると、５２０ｎｆｆ
ｌおよび５５０ｎｍ付近に極大吸収をもつ赤色色素を生
成する。この物質にＩＮのＨＣＩ！１、Ｏｍｇを添加し
、酸性下の条件にすると６１０ｎｆｆｌに極大吸収をも
ちかつ分子吸光係数が大きい青色色素が生成する（第１
図参照）。すなわち第１図は、波長（ｎ）（横軸）と吸
光度（縦軸）との関係で示したグラフであり、第１図に
２いて赤色色素の吸収スペクトルは点線で青色色素の吸
収スペクトルを実線で示す。
／ｄｌ） （米国ハイランド社製）１００ｆｉｔに、
ＭＢＴＨ１マイクロモル、０．３Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，０） １．Ｏｍｇおよびミロセシウム起源のビリ
ルビン拳オキシダーゼ０．２単位加えて、総液量２．
Ｏｍｅで、３７℃、５分間反応させると、５２０ｎｆｆ
ｌおよび５５０ｎｍ付近に極大吸収をもつ赤色色素を生
成する。この物質にＩＮのＨＣＩ！１、Ｏｍｇを添加し
、酸性下の条件にすると６１０ｎｆｆｌに極大吸収をも
ちかつ分子吸光係数が大きい青色色素が生成する（第１
図参照）。すなわち第１図は、波長（ｎ）（横軸）と吸
光度（縦軸）との関係で示したグラフであり、第１図に
２いて赤色色素の吸収スペクトルは点線で青色色素の吸
収スペクトルを実線で示す。
以下に本発明によるビリルビンの定量方法を実施例をも
って示すが、本発明は以下の実施例に限定されるもので
はない。
って示すが、本発明は以下の実施例に限定されるもので
はない。
実施例 １
５’Ｗ／ｄｅ、 １０Ｗ／ｄｉ、 １５り／＃、 ２Ｃ
）１５１／ ｄｉの各ビリルビン溶液〔オメガ高ビリル
ビンコントロール血清（米国、ハイランド社製）〕を調
製し、この各溶液Ｑ、 ｌ ｍｅに０．３ Ｍ ＩＪン
酸緩衝液（ｐＨ７，０） １．Ｏｍｇ、 １０ｍＭ
のＭＢＴＨＯ，１ｍｅ ｂよびミロセシウム起源のビリ
ルビン・オキシダーゼ０，２単位を加え、各々総べ量を
２． Ｏｍｅとし、３７℃、５分間反応させり後、ＩＮ
ノＨｃ／１．Ｏｍｇ ｉ添加して６１０１ｍの吸光度（
ＯＤサンプル）を測定する。別に対照として各ビリルビ
ン溶液でビリルビン書オキシダーゼ無添加の場合の６１
０ｎｍの吸光度（ＯＤブランク）を測定し、Δ０Ｄ６１
゜（ＯＤサンプル−〇Ｄブランク）を求めた。
）１５１／ ｄｉの各ビリルビン溶液〔オメガ高ビリル
ビンコントロール血清（米国、ハイランド社製）〕を調
製し、この各溶液Ｑ、 ｌ ｍｅに０．３ Ｍ ＩＪン
酸緩衝液（ｐＨ７，０） １．Ｏｍｇ、 １０ｍＭ
のＭＢＴＨＯ，１ｍｅ ｂよびミロセシウム起源のビリ
ルビン・オキシダーゼ０，２単位を加え、各々総べ量を
２． Ｏｍｅとし、３７℃、５分間反応させり後、ＩＮ
ノＨｃ／１．Ｏｍｇ ｉ添加して６１０１ｍの吸光度（
ＯＤサンプル）を測定する。別に対照として各ビリルビ
ン溶液でビリルビン書オキシダーゼ無添加の場合の６１
０ｎｍの吸光度（ＯＤブランク）を測定し、Δ０Ｄ６１
゜（ＯＤサンプル−〇Ｄブランク）を求めた。
結果を第２図に示す。すなわち第２図は、検量線をビリ
ルビン濃度（ｆｎり／ｄＩり （横軸）と吸光度差（
△０Ｄ６１゜）（縦軸）との関係で示したグラフである
。
ルビン濃度（ｆｎり／ｄＩり （横軸）と吸光度差（
△０Ｄ６１゜）（縦軸）との関係で示したグラフである
。
実施例 ２
実施例１と同様なビリルビンの希釈系列を調製し、この
各溶液Ｑ、 ｌ ｍｅに０．３Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ
５，５） １．Ｏｍｇ、 １０ｍＭのＭＢＴＨＱ】
ｍｅ Ｊｌ）よびスエヒロタケ起源のビリルビン・オキ
シダーゼ０．０５単位を加え、実施例１と同様に反応を
行ない、△ＯＤ ＠１０を求め検量線を作成した。結果
を第３図に示す。すなわち第３図は検量線をビリルビン
濃度（”ｌ／ｄｉ＞ （、横軸）と吸光度差（△ＯＤ
６、。）（縦軸）との関係で示したグラフである。
各溶液Ｑ、 ｌ ｍｅに０．３Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ
５，５） １．Ｏｍｇ、 １０ｍＭのＭＢＴＨＱ】
ｍｅ Ｊｌ）よびスエヒロタケ起源のビリルビン・オキ
シダーゼ０．０５単位を加え、実施例１と同様に反応を
行ない、△ＯＤ ＠１０を求め検量線を作成した。結果
を第３図に示す。すなわち第３図は検量線をビリルビン
濃度（”ｌ／ｄｉ＞ （、横軸）と吸光度差（△ＯＤ
６、。）（縦軸）との関係で示したグラフである。
以上説明したとおり、本発明によりビリルビン・オキシ
ダーゼＭ−１以外のビリルビン・オキシダーゼおよびＭ
ＢＴＨ％用いるビリルビンの新規定型法が提供される。
ダーゼＭ−１以外のビリルビン・オキシダーゼおよびＭ
ＢＴＨ％用いるビリルビンの新規定型法が提供される。
本発明の方法は被検液中のビリルビンを、迅速に正確か
つ簡単に定量できるという顕著な効果を有する。
つ簡単に定量できるという顕著な効果を有する。
第１図はミロセシウム起源のビリルビン・オキシダーゼ
によるビリルビンとＭＢＴＦＩの反応生成物（赤色色素
）の吸収スペクトル（無線）と塩酸酸性上生成した青色
色素の吸収スペクトル（実線）を示したグラフである。 第２図は本発明の定量方法の実施例１にどける検量線を
ビリルビン濃度と吸光度との関係で示したグラフである
。 第３図は実施例２に２ける検量線をビリルビン濃度と吸
光度との関係で示したグラフである。
によるビリルビンとＭＢＴＦＩの反応生成物（赤色色素
）の吸収スペクトル（無線）と塩酸酸性上生成した青色
色素の吸収スペクトル（実線）を示したグラフである。 第２図は本発明の定量方法の実施例１にどける検量線を
ビリルビン濃度と吸光度との関係で示したグラフである
。 第３図は実施例２に２ける検量線をビリルビン濃度と吸
光度との関係で示したグラフである。
Claims (1)
- １、ビリルビン含有被検液に３−メチル−２−ベンゾチ
アゾリノン−ヒドラゾンおよびビリルビン・オキシダー
ゼ（ビリルビン・オキシダーゼＭ−１を除く）を加え反
応を行なわせ、次いで反応液を酸性とした後、光学的に
ビリルビンを定量することを特徴とするビリルビンの定
量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25250785A JPS62112068A (ja) | 1985-11-11 | 1985-11-11 | ビリルビンの定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25250785A JPS62112068A (ja) | 1985-11-11 | 1985-11-11 | ビリルビンの定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62112068A true JPS62112068A (ja) | 1987-05-23 |
Family
ID=17238331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25250785A Pending JPS62112068A (ja) | 1985-11-11 | 1985-11-11 | ビリルビンの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62112068A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0433977A2 (en) * | 1989-12-18 | 1991-06-26 | Nippon Shoji Kabushiki Kaisha | Method for optical measurement of bilirubin and reagent therefor |
-
1985
- 1985-11-11 JP JP25250785A patent/JPS62112068A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0433977A2 (en) * | 1989-12-18 | 1991-06-26 | Nippon Shoji Kabushiki Kaisha | Method for optical measurement of bilirubin and reagent therefor |
| US5262304A (en) * | 1989-12-18 | 1993-11-16 | Nippon Shoji Kabushiki Kaisha | Method for optical measurement of bilirubin and reagent therefor |
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