JPS6175261A - 免疫複合体定量用標準物質 - Google Patents
免疫複合体定量用標準物質Info
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- JPS6175261A JPS6175261A JP17945684A JP17945684A JPS6175261A JP S6175261 A JPS6175261 A JP S6175261A JP 17945684 A JP17945684 A JP 17945684A JP 17945684 A JP17945684 A JP 17945684A JP S6175261 A JPS6175261 A JP S6175261A
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は生体液（例えば血清等）中の免疫複合体を定ｆ
ｉｔする際に用いる標準物質に閃する。
ｉｔする際に用いる標準物質に閃する。
免疫複合体の定量は免疫複合体に対し特異的に反応する
物質（以下「特異的反応物質」という）（例えば補体第
一成分の亜成分であるＣｌ１ｑ ｅ ９ウマチ因子、補
体第三成分（Ｃ３）レセプター、フングルチニン等）と
既知濃度の標準物質を用いて標準曲線を作成し、これを
基準にして検体中の免疫複合体の濃度を決定する方法に
より行なわれている。
物質（以下「特異的反応物質」という）（例えば補体第
一成分の亜成分であるＣｌ１ｑ ｅ ９ウマチ因子、補
体第三成分（Ｃ３）レセプター、フングルチニン等）と
既知濃度の標準物質を用いて標準曲線を作成し、これを
基準にして検体中の免疫複合体の濃度を決定する方法に
より行なわれている。
この際の標準物質として最も好ましいものは既知濃度の
免疫複合体であるが、免疫複合体自体は非常に不安定な
ため実用的でない。そこでこの代用として精製した免疫
グロブリンＧ（以下ｒＩｇＧＪという）をアルカリ処理
、熱処理あるいは化学的架橋剤処理等により重合ののち
、ゲル濾過等により未反応のＩｇＧを除いた重合ＩｇＧ
が通常用いられている。
免疫複合体であるが、免疫複合体自体は非常に不安定な
ため実用的でない。そこでこの代用として精製した免疫
グロブリンＧ（以下ｒＩｇＧＪという）をアルカリ処理
、熱処理あるいは化学的架橋剤処理等により重合ののち
、ゲル濾過等により未反応のＩｇＧを除いた重合ＩｇＧ
が通常用いられている。
この種の標準物質においては、被験物質である免疫複合
体が特異的反応物質と結合する能力（以下「親和力」と
いう）と同一の親和力を有するものであることが望まし
い。しかし従来標準物質として用いている上述の重合Ｉ
ｇＧはこの親和力が必らずしも同一でなく、しかも製造
ごとに親和力に差が生じるため、この標準物質を用いて
作成した標準曲線は測定条件が同一（測定温度、測定時
間。
体が特異的反応物質と結合する能力（以下「親和力」と
いう）と同一の親和力を有するものであることが望まし
い。しかし従来標準物質として用いている上述の重合Ｉ
ｇＧはこの親和力が必らずしも同一でなく、しかも製造
ごとに親和力に差が生じるため、この標準物質を用いて
作成した標準曲線は測定条件が同一（測定温度、測定時
間。
反応温度１反応時間が同一である他、用いる試薬も同一
製造ロフトとする等、全てが同一）のときのみ使用でき
、例えば使用する試薬の製造ロットが変った場合には前
回ロフトの試薬における測定値と一致するよう試薬を調
整しなければならない。
製造ロフトとする等、全てが同一）のときのみ使用でき
、例えば使用する試薬の製造ロットが変った場合には前
回ロフトの試薬における測定値と一致するよう試薬を調
整しなければならない。
さらに標準物質が非常に不安定であることから、各施設
で用詩作製しなければならないため、繁雑で施設間のデ
ータ比較ができない不便さがあった。
で用詩作製しなければならないため、繁雑で施設間のデ
ータ比較ができない不便さがあった。
本発明者は、従来の方法により作製した重合ＩｇＧをセ
ファ四−ス４Ｂ（ファルマシア社製）を用いたカラムク
ロマトグラフィにより分画し検討を重ねた結果、分子量
が排除限界（２０００万）以上の重合ＩｇＧを除くこと
により、重合度組成比の一定した重合ＩｇＧが得られる
こと、更に重合度の高い（分子量の大きい）重合ＩｇＧ
はど特異的反応物質との親和力が大きいこと等の知見を
得た。
ファ四−ス４Ｂ（ファルマシア社製）を用いたカラムク
ロマトグラフィにより分画し検討を重ねた結果、分子量
が排除限界（２０００万）以上の重合ＩｇＧを除くこと
により、重合度組成比の一定した重合ＩｇＧが得られる
こと、更に重合度の高い（分子量の大きい）重合ＩｇＧ
はど特異的反応物質との親和力が大きいこと等の知見を
得た。
本発明者はこの知見に基づき更に検討を加える中で分子
ｆｆ１２０００万未満の重合ＩｇＧのみを取り出し、こ
れを標準物質として免疫複合体を測定した結果、異なっ
た測定条件下、すなわち製造ロフトの異なった特異的反
応物質試薬を用いた場合でも測定値に大きなバラツキは
見られず、変動係数も低値であることを確認し、更にま
た当該標準物質に蛋白を安定化させることのできる物質
を添加することにより長期間安定に保つことができると
の知見を得て本発明を完成するに至った。
ｆｆ１２０００万未満の重合ＩｇＧのみを取り出し、こ
れを標準物質として免疫複合体を測定した結果、異なっ
た測定条件下、すなわち製造ロフトの異なった特異的反
応物質試薬を用いた場合でも測定値に大きなバラツキは
見られず、変動係数も低値であることを確認し、更にま
た当該標準物質に蛋白を安定化させることのできる物質
を添加することにより長期間安定に保つことができると
の知見を得て本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は分子量が２０００万未満の重合ＩｇＧ
画分を用いることを特徴とする免疫複合体定量用標準物
質である。この標準物質は更に必要に応じ蛋白を安定化
させることのできる物質を添加することにより、長期間
安定に保存できる。
画分を用いることを特徴とする免疫複合体定量用標準物
質である。この標準物質は更に必要に応じ蛋白を安定化
させることのできる物質を添加することにより、長期間
安定に保存できる。
本発明の免疫複合体定量用標準物質は例えば次の如くし
て製造される。すなわち、精製したＩｇＧを従来の方法
、例えばグルタルアルデヒドの如き ・化学的架橋
剤処理および熱処理によって重合ＩｇＧを製造する。次
いでこれをゲル濾過し、分子量が２０００未満の重合Ｉ
ｇＧ画分、好ましくは１０００以下１００万以上の重合
ＩｇＧ画分を集め必要に応じ蛋白を安定化させることの
できる物質を０．１％〜５９ｇ好ましくけ０．２〜１％
添加して免疫複合体室４用標準物質とする。蛋白を安定
化させることのできる物質としてはヒト由来、牛由来の
血清アルブミンあるいは卵白アルブミン等が挙げられる
が、中でも牛由来の血清アルブミンが好ましい。
て製造される。すなわち、精製したＩｇＧを従来の方法
、例えばグルタルアルデヒドの如き ・化学的架橋
剤処理および熱処理によって重合ＩｇＧを製造する。次
いでこれをゲル濾過し、分子量が２０００未満の重合Ｉ
ｇＧ画分、好ましくは１０００以下１００万以上の重合
ＩｇＧ画分を集め必要に応じ蛋白を安定化させることの
できる物質を０．１％〜５９ｇ好ましくけ０．２〜１％
添加して免疫複合体室４用標準物質とする。蛋白を安定
化させることのできる物質としてはヒト由来、牛由来の
血清アルブミンあるいは卵白アルブミン等が挙げられる
が、中でも牛由来の血清アルブミンが好ましい。
本発明の免疫複合体定量用標準物質は特異的反応物質に
対する親和力が免疫複合体の親和力により近いため、従
来の標準物質に比べてその標準白ットの違いによる検体
測定値の変動も少なく、従って２１ｒ５定値の繰り返し
精度が極めて高い。更にまた蛋白を安定化させることの
できる物質を添加すを用いることにより各測定施設間に
おける測定データの比較も可能となり、免役複合体測定
の臨床的有用性を更に高めるものである。
対する親和力が免疫複合体の親和力により近いため、従
来の標準物質に比べてその標準白ットの違いによる検体
測定値の変動も少なく、従って２１ｒ５定値の繰り返し
精度が極めて高い。更にまた蛋白を安定化させることの
できる物質を添加すを用いることにより各測定施設間に
おける測定データの比較も可能となり、免役複合体測定
の臨床的有用性を更に高めるものである。
実施例によって本発明を説明する。本実施例においては
、便宜上、特異的反応物質としてｃｌｑをとり上げこれ
にマーカーとしてラテックスを結合させた特異的反応物
質からなる試薬を用いて本発明の標準物質の説明を行な
うが、本発明の標準物質はこの実施例に限定されること
なく、広く免疫複合体定量用標準物質として使用しうる
。
、便宜上、特異的反応物質としてｃｌｑをとり上げこれ
にマーカーとしてラテックスを結合させた特異的反応物
質からなる試薬を用いて本発明の標準物質の説明を行な
うが、本発明の標準物質はこの実施例に限定されること
なく、広く免疫複合体定量用標準物質として使用しうる
。
実施例１゜
分子Ｊ［ｉ２０００万以上の重合ＩｇＧからなる標準物
質と分子ｆｆ１２０００万未満の重合ＩｇＧからなる標
準物質（本発明）の比較 （１）標準物質の作製 ■比較例標準物質の作製 分子Ｒ２０００万以上の重合ＩｇＧ画分を０．５２牛血
清アルブミンを含む０．９％Ｎ＊Ｏ１浴液テ１倍、２倍
、４倍、８倍、１６倍に希釈して標準物質とした。
質と分子ｆｆ１２０００万未満の重合ＩｇＧからなる標
準物質（本発明）の比較 （１）標準物質の作製 ■比較例標準物質の作製 分子Ｒ２０００万以上の重合ＩｇＧ画分を０．５２牛血
清アルブミンを含む０．９％Ｎ＊Ｏ１浴液テ１倍、２倍
、４倍、８倍、１６倍に希釈して標準物質とした。
■本発明の標準物質の作製
分子ｆｆ１２０００万未満の重合ＩｇＧ画分を上記■と
同様にして希釈し、標準物質を作製した。
同様にして希釈し、標準物質を作製した。
（２）Ｃ１ｑ結合ラテックスの作製
ウサギ血清より米増等の方法（Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、
、 １０６巻３０４頁、１９７１年）に従いＣ１ｑを部
分精製し、■自殺が２■／−になるように調整したのち
０．４ ｄを採り、これに０．１ ｘｒＪの１０％ラテ
ックス（ダウ・ケミカル社製１粒！０．４５５μ）およ
びＬ ５ ｍｌの０．０５％エマルジット１６（第一化
学薬品社製）を混合し、室温で１時間反応させた。次い
でこれに０．１ Ｘエマルジット１６液１０ａＡ！を加
え、２５０００ｘｆ２０分間遠心したのち、上清を捨て
残渣を蒸γｄ水で洗浄した。
、 １０６巻３０４頁、１９７１年）に従いＣ１ｑを部
分精製し、■自殺が２■／−になるように調整したのち
０．４ ｄを採り、これに０．１ ｘｒＪの１０％ラテ
ックス（ダウ・ケミカル社製１粒！０．４５５μ）およ
びＬ ５ ｍｌの０．０５％エマルジット１６（第一化
学薬品社製）を混合し、室温で１時間反応させた。次い
でこれに０．１ Ｘエマルジット１６液１０ａＡ！を加
え、２５０００ｘｆ２０分間遠心したのち、上清を捨て
残渣を蒸γｄ水で洗浄した。
十分洗浄したのち、２！Ｌｔの０．１％エマルジット１
６液に混和しＣ１ｑ結合ラテックス試薬とする。
６液に混和しＣ１ｑ結合ラテックス試薬とする。
このようにしてＬｏｔ＆１〜４のＣ１ｑ結合ラテックス
試薬を作製した。
試薬を作製した。
（３）検体中の免疫複合体の定量
上記（２）で作製した製造ロフトの異なる４つのＣ１ｑ
結合ラテックスＣＬｏｔ油１〜４）と上記（１）の標準
物質を用いて検体中の免疫複合体を定量した。定量方法
は次のとおりである。
結合ラテックスＣＬｏｔ油１〜４）と上記（１）の標準
物質を用いて検体中の免疫複合体を定量した。定量方法
は次のとおりである。
先ずＣ１ｑ結合ラテックス１００μＬを採り、これに０
．５ Ｍ ＮａＣｆ１ 、０．０５％ＮａＮ３．０．０
５ Ｋエマルジッ）１６．１％ポリエチレングリコール
６０００を含む１０ｍＭリン酸緩衝液４００μλを加え
、更に標準物質または検体を５０μＬ加えて混合し３０
℃で３０分間反応させたのちｉ −ＰｉＴ■（レーザー
ネ７エロメーター、 中外ｉＷ販売）にて散乱光強度を
測定し、標準物質の散乱光強度を基準にして検体中の免
疫複合体の量を求めた。測定結果は表−１および表−２
に示したとｉりである。この結果、分子ｊ１２０００万
以上の重合ＩｇＧ画分からなる標準物質を用いた場合で
は、Ｃ１ｑ結合ラテックスの製造ロフトにより検体測定
値が変動しやすく変動係数（ＣＶＸ）も全体的に大きい
数値を示した。一方、分子量が２０００万未満の重合Ｉ
ｇＧ画分からなる標準物質（本発明）を用いた場合には
Ｃ１ｑ結合ラテックスの製造ロット間差は解消されてい
た。
．５ Ｍ ＮａＣｆ１ 、０．０５％ＮａＮ３．０．０
５ Ｋエマルジッ）１６．１％ポリエチレングリコール
６０００を含む１０ｍＭリン酸緩衝液４００μλを加え
、更に標準物質または検体を５０μＬ加えて混合し３０
℃で３０分間反応させたのちｉ −ＰｉＴ■（レーザー
ネ７エロメーター、 中外ｉＷ販売）にて散乱光強度を
測定し、標準物質の散乱光強度を基準にして検体中の免
疫複合体の量を求めた。測定結果は表−１および表−２
に示したとｉりである。この結果、分子ｊ１２０００万
以上の重合ＩｇＧ画分からなる標準物質を用いた場合で
は、Ｃ１ｑ結合ラテックスの製造ロフトにより検体測定
値が変動しやすく変動係数（ＣＶＸ）も全体的に大きい
数値を示した。一方、分子量が２０００万未満の重合Ｉ
ｇＧ画分からなる標準物質（本発明）を用いた場合には
Ｃ１ｑ結合ラテックスの製造ロット間差は解消されてい
た。
表−１
（分子量２０００万以上の重合ＩｇＧからなる標準物質
）表−２ （本発明の免疫複合体定量用標準物質）実施例２ 本発明の標準物質の安定性 分子量が１００万〜１０００万の範囲の重合ＩｇＧ に
牛血清アルブミン０．５％を加えた。これを４０℃の加
熱条件下に放置し、経日的（Ｏ日月。
）表−２ （本発明の免疫複合体定量用標準物質）実施例２ 本発明の標準物質の安定性 分子量が１００万〜１０００万の範囲の重合ＩｇＧ に
牛血清アルブミン０．５％を加えた。これを４０℃の加
熱条件下に放置し、経日的（Ｏ日月。
７日月、２０日目、５０日目）にＣＩＣＬ結合ラテック
スと反応させ（反応条件は実施例１と同じ）散乱光強度
（ＳＬＩ）を測定しその結果を図に示した。この図から
明らかな如く本発明の標準物質は７日以降５０日の間は
ぼ一定の散乱光強度を示し、長期間の安定性が認められ
た。
スと反応させ（反応条件は実施例１と同じ）散乱光強度
（ＳＬＩ）を測定しその結果を図に示した。この図から
明らかな如く本発明の標準物質は７日以降５０日の間は
ぼ一定の散乱光強度を示し、長期間の安定性が認められ
た。
図は本発明の免疫複合体定量用標準物質の安定性を示す
。
。
Claims (3)
- （１）分子量が２０００万未満の重合ＩｇＧ画分を用い
ることを特徴とする免疫複合体定量用標準物質。 - （２）蛋白を安定化させることのできる物質を添加して
なる特許請求の範囲第（１）項記載の免疫複合体定量用
標準物質。 - （３）蛋白を安定化させることのできる物質が牛血清ア
ルブミンである特許請求の範囲第（２）項記載の免疫複
合体定量用標準物質。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17945684A JPS6175261A (ja) | 1984-08-30 | 1984-08-30 | 免疫複合体定量用標準物質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17945684A JPS6175261A (ja) | 1984-08-30 | 1984-08-30 | 免疫複合体定量用標準物質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6175261A true JPS6175261A (ja) | 1986-04-17 |
| JPH055061B2 JPH055061B2 (ja) | 1993-01-21 |
Family
ID=16066168
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17945684A Granted JPS6175261A (ja) | 1984-08-30 | 1984-08-30 | 免疫複合体定量用標準物質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6175261A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0318758A (ja) * | 1989-06-15 | 1991-01-28 | Nitsusui Seiyaku Kk | 凝集抗体 |
| US6070328A (en) * | 1996-04-26 | 2000-06-06 | Hasegawa Hamono Kabushiki Kaisha | Scissors |
-
1984
- 1984-08-30 JP JP17945684A patent/JPS6175261A/ja active Granted
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS=1979 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0318758A (ja) * | 1989-06-15 | 1991-01-28 | Nitsusui Seiyaku Kk | 凝集抗体 |
| US6070328A (en) * | 1996-04-26 | 2000-06-06 | Hasegawa Hamono Kabushiki Kaisha | Scissors |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH055061B2 (ja) | 1993-01-21 |
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