JPS6153241A - カルボン酸のアルキルエステルの発酵法による製法および装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 この発明は酪酵技術を用いて、食物、チューインガム、
歯みがきペースト、医薬品、咬みたばこ、喫煙たばこ、
香料成分、コロン水、或いは固形、液体の陰イオン系、
陽イオン系、非イオン系、両性イオン系洗剤、付番高分
子製品、繊維ソフトナー成分、繊維ソフトナー製品、化
粧品、整髪用製品などの着香製品の香り又は味を増加、
或いは強化するのに、官能的に有用な性質を持つと知ら
れている成る洩の天然に存在するエステルを生成し、回
収する製法に関するものである。

問題点を解決するための手段 本発明のエステルは式 〔式中Ｒ，、Ｒ，及びＲ１は水素又はメチル基を表わし
、Ｒ′はＣ！　−Ｃ，低級アルイル基、点線は炭素−炭
素一重結合又は炭素−炭素二重結合であり、さらにＲ，
、Ｒ２及びＲ１の内少なくとも１つはメチル基である〕
で表わされる。

これらのエステルは式、 （式中、Ｒ，、Ｒ，およびＲ１は上記と同意義である） で表わされるアミノ酸とＣ，−Ｇ、低級アルコールとの
反応式 で表わされる酵素反応で生成される。

勿論、上記反応によって得られ要理合物には、式、 （式中、Ｒ１、Ｒ２ｓ　ＲｓおよびＲ′は上記と同意義
である） で表わされるエステルの他に多くのエステルが含まれる
ことは、以上のさらに詳しく説明及び実施例に記載され
る如く明らかである。

反応式 で示される反応は、例えば プレタノミセス　アノマルス・−・ＡＴＣＣ１０５５９
れか一つ） ラス・・・ＩＡＭ　４１７６．４２００Ｙ　　−１３８
０ 一ト、デ、フアーメ ンタシオンセスイン ダストリアルス （Ｉｎａｔ、Ｄｅ。

Ｆｅｒｍｅｎ　ｔａｃ　１ｏｎｅ　５ Ｉｎｄｕｓｔｒｌａｌｅ＋ｓ　） シゾサツカロミセス　ポンペイ・・・ＮＲＲＬＹ　−１
６４、滋〕 ＣＢＳｆ’ｉセントラルプラウ　フォル　シュ〆ルカル
チアーズ（Ｃａｎｔｒａａｌｂｕｒｅａｕ　ＶｏｏｒＳ
ｃｌｔｉｍｍｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ　）　（オランダ）
である。

１４Ｍは応用微生物♀研究所（Ｗ、京）である。

Ａ　ＨＵは北海道大学農学部（孔係）である。

等の微生物が反応混合物中に存在することにもたらされ
るものである。

反応は式、 で表わされる例えば、Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン
、又はＬ−バリンの様なアミノ酸の１つ又はこれらの混
合物と、デキストロース、マルトース、ラクトース、フ
ラクトース、サクロース、黒糖密、コーンシラツブ、固
形コーンシラツブ、コーンスターチ及びエチルアルコー
ル等の炭素源とを入れた醗酵槽に空気を通すことにより
行なわれる。醸酵槽中のアミノ酸又は混合アミノ酸の濃
度は、醗酵槽中の偲介の０．１　ｖＪ’！’ｌ−チから
１．０７ｉ量係である。又醗酵槽中の炭素源の濃度は醸
酵槽中の総量の０，５幅から８．０係である。

用いられる他の物質としでは、イソブタノール、バター
油、ココナツツ油等があげられる。

８Ｗ＃反応は、酸性度はｐＨ４，ｏかも約７．５で、反
応温度は２０℃から３５℃の間で行なわれる。

好ましくは、ｐｉｌは４．７５から７．０の間で、反応
温度は２２℃から２８℃である。醗酵反応の時間は、２
０時間から約１００時間で、醗酵温度、空気流通速度、
醗酵プロス酸性度、炭素源の注入速度等の醗酵条件によ
り異なる。又、エチルアルコールをその濃度が、例えば
醗酵プロス全量の０．８ｊｉｆｆｉ優から０．９重量俤
に保つようＩＣ加えることが望丑しい。

本発明で重要な点は、反応式 一哉わされるの酵反応より生じた式、 １＜３ で表わされ、乙エステル生我物を、生成されると同時に
採取されることである。

醗酵中、式、 に３ で表わされるエステル及び詳しく後述される如く他の有
用なエステルが共に、醗酵プロス中に通じた空気により
取り出される。このエステルを含むを気流はフィルター
及びコンデンサーを経て冷却され、冷却された空気流は
１つ又はそれ以上の活性炭ベッドを通り、式、 Ｒ。

で表わされるエステル及び他の有効なエステルが採取さ
れる。飽和又はほぼ飽和された活性炭は活性炭ベッドの
容器よシ外され、適轟な蒸留溶剤と混合される。活性炭
と蒸留溶剤の混合物は、個別又は同時に蒸留カラムとコ
ンデンサーの備えた槽に入れられ、蒸留により、活性炭
。

蒸留溶剤及びエステルの混合物よりエステルが採取され
る。

得られたエステルは、さ眞に分画蒸留又は分離精製ガヌ
クロマトグラフィーによシ８製される。

本発明の製法により生成されるｊ１々の有用な天然に存
在するエステルとしては、式、で表わされるチグリン酸
エチル、式、 人。△ で表わされる酢酸エチル、式、 で表わされるイソ酪酸エチル、式 ％式％ で表わされるプロピオン酸エチル、式、で表わされるイ
ンバレリアン酸エチル、式、で表わされるイソバレリア
ン酸イソアミル、式、で表わされる七ネシオ酸エチ／−
１式 で表わされる２−メチル酪酸イソブチル、及び式、 で表わされるチグリン酸イノブチル等が挙げられる。

さらに詳しく本発明を添附図面を用いて説明すると第１
図において反応式。

で表わされる反応は、醗酵槽１０で行なわれる。

ここでＲ１ｓ　Ｒ２及びＲ８は水素又はメチル基を表わ
し、Ｒは低級アルキル基を表わし、但しＲ１、Ｒ１及び
Ｒ，の内少なくとも１つはメチル基である。

タンク５８に貯蔵された式、 で表わされるアきノ酸は、ポンプ６２によりパルプ６４
ｔ−経て、ライン６０を通り槽１０に入れられる。タン
ク５０に貯蔵されたエチルアルコールは、ポンプ５４に
よねバルブ５６を経てライン５２を通り醗酵槽１０に入
れられる。

例えば第１リン酸カリウム、又は硫酸マグネシウム７水
和物の乾８２膣又はそれらを含む水溶液は、タンク７４
より直接又はポンプ７８によシバルプ８０を経てライン
７６を通り醗酵槽１０に入れられる。

ｆｆ１４２に貯蔵される接び材料を含む培養液、生長細
胞の懸濁液はポンプ４６によりバルブ４Ｂを経て醗酵槽
１０に入れられる。

炭水源、例えばデキストロース水溶液は、貯蔵タンク３
４よシボンブ３８によシバルプ４゜を経て葭酵槽１０に
入れられる。醍、酵ｍ＃ｉブαペラ１４を持つ攪拌機１
２で１□５　Ｏｒｐｍから５００　ｒ：ｐｍの速さでか
き混ぜられる。又タンク４２よυ接種材料を人乳る前に
、　ＷＩＳＳ合物に消泡剤を加えることが望ましい。タ
ンク２４よ択空気はフィルター装置２２に、バルブ２６
を経てライン２８より送られる。空気の一部はバルブ３
２を経てライ／３０を通シ、スパージャ−１’Ｅ！９．
により崩卯バッチ１３に注入される。

又空気の一部はバルブ２０を経てライン１Ｂを通り、ス
パージャ−１６８によシ醗酵機１０に１１の、高さまで
入れられた醗酵バッチ１３に注入でＡる。上部の空気層
、は「酵パッチよ）ボン７’［Ｊｉｌ必顆とする場合）
により、ライン８２を通りバルブ８Ｂを経て空気フィル
ター８８を遥）、ライン！１０により冷却器３２の冷却
コイＡ−９４に至る。熱交換器９２は溶媒Ｓ６をライン
！１８′ｔ−通し、バルブ１００　ｔ−＆テ？’ｉｆ＝
却：’　イ／’９４に通し、さらにライン１０２を通し
、保持タンク１０４に入れること罠より操作される。

熱交換器ｇ２よ〉出る空気は式。

肌１ （式中、Ｒ＊　ｓ　Ｒ！及びＲｓはそれぞれ水素又はメ
チル基を示し、点線は炭素−炭素一重結合又は炭素−炭
素二重結合を示し、Ｒ′はＣ，−ｃ、低級アルキル基で
あ〕、Ｒ１、Ｒｚ及びＲ３の肉食なくとも１つはメチル
基である）で表わされるエステルを含み、ライン１０６
を通りバルブ１０Ｂを経てポンプ１１ｏ（必要とする場
合）によ〕トラップ１１２に通され、水分が空気中より
除かれ液１１８として集められる。エステルを含ち気体
は孔１２２よシ出され、上層部１２０を経て孔１２４よ
）ライン１２６を通り、バルブ１２８を経てポンプ１３
０　（必１１する場合）により活性炭ベッド１５６及び
１６４に送シ込まれる。活性炭ベッド１５６のみに醗酵
エステル生成物が送り込まれる場合は、バルブ１６２が
閉じられ、ライン１３２に入らない様にされポンプ１３
８（必要とする場合）でもって、ライン１３４を通シパ
ルプ１３６を経て送り込まれる。エステルは活性炭ベッ
ド１５６の中の活性炭により吸着される。反応に活性炭
ベッド１６４のみが使用される場合には、バルブ１３６
が閉じられ、エステルはライン１３２を通り、バルブ１
６２を経てポンプ１６０（必要とする場合）で送り込ま
れる。エステルは活性炭ベッド１５６に飽和するまで送
り込み、さらに活性炭ベッド１６４に飽和するまで送シ
込むことも出来る。活性炭ベッド１６４にエステルと空
気の混合物か通される間に、活性炭ペッド１５６Ｆｉ容
Ｇ１４Ｂより出され、コンベヤー１５８／１８４により
４１１１９６に送シ込むことも出来る。ライン１３４ｔ
−通りベッド１５６に送られたエステルと空気の混合物
からエステルが吸着される間、非吸着物質と空気は、活
性炭ベッド１５６よ勺パルプ１５４を経てライン１５０
を通り、外界１５２に出される。

ライン１３２より入るエステルと空気の混合物から全て
のエステルが容器１６６中にある活性炭ベッド１６４に
吸着されると、容器１６６は開けられエステルの吸着し
た活性炭は、固体コンベヤーライン１８２と１８４でも
って槓１９Ｂに内れられる。活性炭ベッド１６４を通り
抜けた非吸着の気体と空気は、ライン１７６を通りバル
ブ１１４を経て孔１７８よシ外界１８０に出される。

槽１９６に入れられたエステルの吸着した固形活性炭は
蒸留溶剤、例えばプロピレングリコール等を、貯蔵タン
ク１８８よりライン１９Ｇを通りバルブ１９４を経てポ
ンプ１９２テ４っで檀１９６に入れることによシ混合さ
れる。又は、同時にプロピレングリコ−・ル等の蒸留溶
剤を、貯蔵タンク１４０よりラインＩＡ２を通シバルプ
１４４を峰てポンプ１４１５でもって容器１４８に入れ
て、槽１４８中の活性炭ベッド１５６と容器１４８中で
混合することも出来る。

得られたエステルを吸着した活性炭と蒸留溶剤’ｋ　含
むスラリーは、ポンプでもってライン１５８と１８４を
通カパルブ２０７を経てスラリーコンベヤで孔２１６よ
り槽１９６に入れられる。

代りＫ、貯蔵タンク１６８に入れられた蒸留溶剤をパル
プ１７０を経てポンプ１７２でもって容器１６６に入れ
ることによシ、エステルを吸着した活性炭ベッド１６４
と蒸留溶剤とを混合することも出来る。得られた溶剤と
エステルを吸着した活性炭からなる容器１６６中のスラ
リーは、ポンプによりスラリーコンベヤーでもってライ
ン１８２と１８４を通りバリダ２０７を経て、孔１８６
と２１６よシ槽１９６に入れられる。

タンク１９６に入れられたスラリー２０８は、モーター
２００で作動するプロペラ２０Ｇを備えた攪拌器２０２
と、任意に用いられるバッフル１９日でもって攪拌され
１１￥ＪＦＲＪ’に蒸ＩＥ嘔れる。

タンク１９Ｇ及び内容物は、加熱コイル２０１と加熱器
１９９により加熱される。又タンク　　′１９Ｇは蒸留
カラム２１８を備えた蓋２０４とアジテータ−２０８及
び、示されていないが温度コントロール装置等が備え付
けられている。

蒸留においては、エステルは蒸気層２１０よりライン２
１４を通り、蒸留カラム２１８を通り、さらにライン２
２０を通り熱交換器２２２、さらにコイル２２４（熱交
換器の一部）とライン２３０を経てポンプ２３６（ライ
ン２４０１７）パルプ２４２を閉じた状態で）でもって
、ライン２３２ｔ−通りパルプ２３４を、ｌて、受容器
２３８に入れられることも出来る。

熱交換器２２２は２２８より入り２２Ｇよシ出る冷媒に
より、対流熱交換でもって冷却される。又は、パルプ２
３４を閉じて得らｌｔたエステル混合物をポンプ２４４
でもってライン２４０よりパルプ２４２を経て、分留カ
ラム２４６に通すことも出来る。こうしてエステルの混
合物を分留し、低沸点エステル（例えば、プロピオン酸
エチル）はライン２４８を通シ、還流分離器２５Ｇでも
って還流部分は蒸留カラムの上層部に、ライン２５２を
通り戻され、残りの低沸点部はう゛・イン２５４を通り
ポンプ２６０でもってパルプ２６２を経て、保持タンク
２５６に入れられる。同じ様に高沸点部は、蒸留カラム
よシライン２５８を通りポンプ２６４によりパルプ２６
Ｇを経て、保持タンク２６Ｂに入れられる。

第２図は、第１図の装置の断面図であり、濃縮トラップ
１１２及び活性脚ベッド１５６と１６４ｔ−入れる活性
炭ベッド容器１４８と１６６を詳しく示したものである
（ここでは任意に用いられる混合溶剤を加える装置は示
されていない）。

第３図は、第１図の装置の断面図であシ、エステルを吸
着した固体分１５６と１６４とは、それらを混合したも
のをポツパー１８７に入れ、注入ライン１８９より孔１
８６、ライン１９１を通り、孔２１６よシ蒸留槽に入れ
られる状態を詳しく示したものである。スラリー２０８
は、活性炭ベッド１５６と１６４と、タンク１８８書り
ポンプ１９２によりライン１９０を通りパルプ１９４を
経て入れられる蒸留溶剤と混合する事により得られる。

蒸留カラム２１８ａは蓋２０４ａに蒸留出来る様に備え
っけである。

エステルの吸着された活性炭（１５６及び１６４）に入
れるのに使用したホッパー１８７を除いた後、孔１８６
、パルプ２０９を持つライン２８６に置き換える。パル
プは閉じた状態テ、攪拌モーター２０Ｇを作動し、プロ
ペラ２０６によりスラリー２０８を攪拌する。このよう
に蒸留を蒸留カラム２１８ｂを用いて、第４図に示す如
くに行なう。蒸留中はパルプ１９４及び２０９は閉じた
状態で、モーターは作動したままである。

第５図は、この発明の製法を行なうに当り、より望まし
い装置の設置を示す。

醗酵槽３３３は、バッフル３２９と攪拌器３２８を備え
ている。醗酵槽３３３への全ての添加は、殺菌ラインで
もって行なわれる。

貯蔵タンク３０４の無音デキストロース（５０パーセン
ト水溶液）とタンク３００の原培養液はそれぞれ、ライ
ン３０５及びライン３０１を通りパルプ３０６及びパル
プ３０２を経て、ポンプ３０３によりライン３０７に合
流され、バルブ３０８を経て、醸ｒ＃槽３３３に入れら
れる。

７５パーセントエチルアルコール水溶ｉは、　ポンプ３
１９により貯蔵タンク３１７よシバルブ３１８を経てラ
イン３２０よシ醗酵槽３３３に入る。

貯蔵タンク２９０からは、式、 いは混合物として、ライン２９１を通り、パルプ２９２
を経てポンプ２９３により、孔２９４よシ醗酵バッチ３
３４に入れられる。空気は槽３２１よりライン３２２を
通わ、無口フィルター３２３を経て、ライン３２４を通
りパルプ３２５を経て、スパージャ−３２６と３２７に
より醗酵バッチ３３４に注入される（空気泡が番号３３
２で示しである）。醗酵中、水酸化ナトリウム（例えｌ
ｌ１５０パー七ント水溶液）が貯蔵タンク３０９よりバ
ルブ３１０を経て、ｐ■検知装置＋３３１）でコントロ
ールされるポンプ３１１でもって醗酵槽３３３に注入さ
れ、消泡剤（例えばシリコン消泡剤ンが貯蔵タンク３１
３よりバルブ３１４を経てライン３１６よシ泡検知装置
４００をコントロールライン４０１につながれたポンプ
３１５でもって加えられる。

醗酵中、主として生成するエステルは式、Ｒ。

で表わされ、ここでＲ１、Ｒ１及びＲ８はそれぞれ水素
又はエチル基を示し１点線は炭素−炭素一重結合又は炭
素−炭素一重結合を示し、又Ｒ′はＣ，−Ｃ，低級アル
キル基であり、又Ｒ，，Ｒ，及びＲ１の肉食なくとも１
つはメチル基を示す。これらのエステルは醗酵混合物３
３４より、気泡３３２の中に含１れ１蒸留Ｉされる。

エステルと空気との・混合物は、フィルター３３７を経
てライン３３６より熱又換器３４０のコイル３３９に入
る。熱交換器は、例えば３４１から入り３４２に出る冷
媒の対流熱交換によシ冷却される。冷却されたエステル
と空気の気体混合物は、ライン３４３を通シ、凝縮トラ
ップ３４４に孔３４５より入り、凝縮物は３４７に集め
られる。エステルと空気の混合物は、さらにライン３４
８に孔３４６から入シ、容器３５３Ａに入れられた活性
炭ベッド３５３、又は容器３５２Ａに入れられた活性炭
ベッド３５２に送り込まれる。エステルと空気の混合気
体が、活性炭ベッド３５２のみに送り込まれる場合は、
バルブ３５１は閉じられ、ライン３５１人に入らぬよう
にする。こうしてエステルと空気の混合物は、バルブ３
５０を経てライン３４９より活性炭ベッド３５２に入れ
られ、エステルが吸着されたあとの非吸着気体は３５４
より出される、。

容器３５３Ａに入れられた活性炭ベッド３５３が使用さ
れる場合は、パルプ３５１が開かれ。

パルプ３５０か閉じられる。こうして、エステル−空気
の混合物はバルブ３５１を経て、ライ−７３５１人より
活性炭ベッド３５３に入る。非吸着気体と空気は３５５
で出る。

活性炭ベッドが飽和した時、活性炭は槽３５３Ａよりラ
イン３５６、例えば固体コンベヤーでもって蒸留装置３
５９に入れられる。又は、エステルを吸着した活性炭３
５２は槽３５２Ａより、ライン３５８を通り、固体フン
ベヤ−３５７でもって蒸留装置ｆｆ３５９に入れられる
。又蒸留器３５９には、貯蔵タンク３６３よりライン３
６４を辿υ、ポンプ３Ｇ６（必要とする。場合）により
蒸留溶剤（例えばプロピレングリコール）が加えられる
。作動中の蒸留器は、加熱コイル３６２で力ｒ！熱され
る。エステル蒸留物は、ライン３６８を通りコンデンサ
ー３Ｇ９を通る。コンデンサーは、例えば冷却溶剤を対
流的に３７１より入れ、３７０よυ出すことにより冷却
することが出来る。

コンデンサー（３６９及び３７２で示される）は、出口
３７３に接続さｈている。凝縮したエステルは、ポンプ
３７５により、ライン３７３を通り、パルプ３７４を経
て、生成物受容器３７６に入力られ、さらに精製又は分
留する為にライン３７７で送られるう 無菌のデキストロース炭素源は、好ましくは、３０口か
ら原培養液で接続する直前に一度に加えることも出来る
。

貯蔵タンク３００の原培養液は、醗酊槽に貯蔵タンク３
０４からデキストロースを加、するのに用Ａたポンプ、
即ち３０３とラインを用いて加えるのが好ましい。又好
ましい設置状態は第５図に示す如くである。

エチルアルコールおよびｐ■を調整する水綬化ナトリウ
ム溶液は、もともと無菌であるので無菌にする必要はな
い。しかしそれらの入る口は無菌にする必要がある。

第６図は、第５図に示された装置の部分の詳細図で活性
炭ベッド３５２及び３５３の設置状態を示す。

ここでエステルと空気との混合物は、ライン３４Ｂより
、同時に活性炭ベッド３５２及び３５３にそれぞれパル
プ３５０．３５１を経て、ライン３４９を通り送り込ま
れる。その様な場合には、ライン４５６のパルプ４５７
及びライン４５Ｂのパルプ４５９は閉じられ、エステル
を含まない空気は、ライン３５４と３５５を通りパルプ
４５２と４５５を経て、ライン４５３と４５４で外界４
６２と４６３に出される（パルプ４５１は閉じた状態で
ある）。

代りに活性炭ベッド３５３と３５２とは、連続的に操作
することが出来、エステルと空気の混合物を先ず活性炭
ベッド３５２に通し、その後活性炭ベッド３５３に通す
ことによりより効果的に吸着をさせることが出来、全体
の操作を能率よくすることが出来る。従って例えば、パ
ルプ３５１を閉じた状態にし、パルプ３５０を開けてお
く。さらにパルプ４５９を閉じパルプ４５７を開き、パ
ルプ４５５と４５２とを閉じ、パルプ４５１を開けてお
く。こうするとエステルと空気の混合物は、ライン３４
Ｂを通υ、パルプ３５０を経てライン３４９より活性炭
ベッド３５２に入る。ここでエステルと空気の混合物中
の７０パーセントのエステルが吸着される。

残シのエステルと空気の混合物は、ライン３５４及び４
５６を通り、パルプ４５１を経てライン３５５よシ活性
炭ペッド３５３に入シ、残シのエステルがエステルと空
気混合物より吸着される。空気と吸着されなかったガス
は、ライン４５６よりパルプ４５７を経て外界４６１に
出される。

その後、第５図に示した如くエステルの吸着した活性炭
３５２と３５３とは３５６と３５７とで取り出され、さ
らにスラリー化されて蒸留に供される。

第６図の装置は第５図のさらなる変形であシ、上記の代
りに、活性炭ベッド３５２と３５３は。

第２図の活性炭ベッドで示した如く交互に操作すること
が出来る。最初罠パルプ３５１と４５９、並びに４５１
を閉じておく。エステルと空気の混合物は、ライン３４
８より、ライン３４９を通シパルプ３５０を経てベッド
３５２に入る。

非吸着ガスと空気からなる不要ガスはライン３５４を通
り、パルプ４５２ｔ″経てライン４５３より外界４６２
に出る。飽和時、即ち活性炭が吸着エステルで飽和した
時、パルプ３５０とパルプ４５７が閉じられ、パルプ４
５１は閉じたままにして、パルプ３５１を開ける。エス
テルと空気の混合物は、ライン３４８、ライン３５１Ａ
を任て活性炭ペッド３５３に入る。非吸着ガスと空気は
ライン３５５を通り、パルプ４５４を経て、ライン４５
５よシ外界４６３に出る。

実施例 以下に掲げる実施例は、この発明に従って製法を実飽し
たものを記述したものである。特定の使用される物質の
量、使用される原料の種類、イーストを含む微生物の同
類や菌株等は、この発明を説明するものであり、制限す
るものではない。

実施例１ 第１図の装置において醗酵槽１０に、接種、材料として
１ｔのゲオトリチュム　フラグランス（Ｇｅｏｔｒｉｃ
ｈｕｍ　ｆｒａｇｒａｎ！１）　（ＡＴＣＣ１１２４７
）　％０．３ｑｂ溶液にするに充分なイソロイシン、６
％デキストロース水溶液、０．０５ｑ６硫ｒＲマグネシ
ウム７水和物と、０．０２１）ウィーン■（ＴＷＥＥＮ
■〔８０ポリオヤシエチレンと　２０ソルビタンモノオ
レエートとの混合物）を入れる。

醗酵槽を４００　ｒｐｍで攪拌し、温度を２５℃に保つ
。空気注入速度は】分間１６１とする。

ｐＨの値は５．０５から５．２５の間に調整する。

反応は基本的には次に示す通りである。

エチルアルコールを反応混合物に１時間１０ｄの割合で
加える゛（２５時間に総１２５０ｒｎｔのエチルアルコ
ールを加える）。

エステルの吸着した活性炭は水蒸気で処理し、エステル
を含む凝縮分を得る。１（ｌのこのエステルを含む凝縮
分を１０　ｍｌの蒸留水と混ぜ１．５１．の、Ｖオ、■
１□（ＦＲｇＯＮ■０、）で抽出する。得られたフレオ
ン抽出層は無水硫酸マグネシウムで乾燥し、窒素気流で
０．５９まで濃縮する。得られた濃縮液は、ガスクロマ
トグラフィー質量分析（ＧＣＭＳ）で分析し、その結果
は次の通りであった。

第７図は実施例１にもとづきインロイシンの醗酵によシ
得られる種々のエステルを含む反応生成物のガスクロマ
トグラフィーの図である。

（栄件：４００謂Ｘ０．０３５ｍガラスキャピラリーカ
ラム、５Ｅ−３０、温度プログラム７〇−１９０℃（２
℃／ｍ１ｎ）。図中ピークはガスクロマトグラムに示さ
れており、これらのピークの同定は第１表にピーク番号
と化合物塩で示しである。

得られた生成物は、果実様、りんご様、いちご様及びミ
ント様の香りがし、３ｐｐｍでの呈味はりんご、なし、
いちごなどの果実フレーバーとして有用である。

４　ｐｐｍの割合で、得られた生成物をサンキスト”　
（５ＵＮＫＩＳＴ■）のオレンジシー−スジラップに加
え、ジュースを調整した。出来たものはすぐれた自然の
オレンジの香りと味がし、りんご、なし、いちご様の下
味が供う。

以下の実施例は、第２表に示す条件で上記の反応を行っ
たもので、生成物は主生成物であるチグリン酸エチルと
２−メチル酪酸エチルとの２つのエステルのパーセント
より計算したものである。

実施例２ 反応： す ３日間の間、１ｔの接種材料としてゲオトリチュム　フ
ラグランス（Ｇｓｏｔｒｌｃｈｕｍ　ｆｒａｇｒａｎａ
）（ＡＴＣＣ１１２４７）を培着する。

この接種材料を第５図の貯蔵タンク３００より醗酵槽３
３３に加える。

ロイシンを全体の０．５５％になるように醗酵バッチに
加える。全体の醗酵バッチの量は、２２ｔである。貯蔵
タンク３０４より無菌の５０％セレローゼ■ｔｃｇＲｇ
Ｌｏｓｇ■）水溶液を、その濃度が全体の６％になる様
に醗酵槽３３３に加える。

さらにアンペレックス■（ＡＭＢＲＥＸｏ）を全体の０
．１％になる様に、硫酸マグネシウム７水和物を全体の
０．０５％になる様に、第２リン酸カリウムを全体の０
．１９６トウイーン［Ｆ］８０（ＴＷＢＥＮ■８０）を
全体の０．０２％になる様に加える。

醗酵槽を４０　Ｏｒｐｍの速度で攪拌し、空気を１分間
１６ｔの速度で通す。活性炭トラップ３５２と３５３は
、それぞれ３００．！ｉＩと１５０Ｉの活性炭をつめて
おく。ｐ■の値は貯蔵タンク３０９より水酸化ナトリウ
ムを加えることにより５．０５から５．２５に保つ。

貯蔵タンク３６３にはプロピレングリコールを入れ、活
性炭ベッド３５２と３５３とからエステルを吸着した活
性炭とスラリーを作るために用いる。

２４時間の間、エチルアルコールを反応液に常にその濃
度が０．６５％から０．６７５％に保たれる様に加える
。反応液に加えたエチルアルコールの総量は５００−で
あった（７５チエチルアルコール水溶液を醗酵槽３３３
に貯蔵槽３１７よシライン３２０を通して加えた）。

エステルを吸着した活性炭は、プロピレングリコールと
バッチ蒸留装置３５９で混ぜられ、コンデンサー３７２
を用いて蒸留する。ロイシンの醗酵により得られるエス
テル金倉む反応生成物（他の化合物も含む）は分析によ
り第８図に示されるクロマトグラムを得た（条件：クロ
モソルプ１０１　（Ｃｈｒｏｍｏａｏｒｂ　１０１　）
　。

６′×０．１２５“カラム、温度プログラムＺｏｏ−２
５０℃（２０℃／ｍ１ｎ））。

ピーク番号８０１で示されるピークは酢酸エチルである
。さらに８０２は未反応エチルアルコール、８０３はプ
ロピオン酸エチル、８０４はイソ酪酸エチル、８０５は
２−メチル酪酸エチル、８０６はインパレリアン酸エチ
ル、８０７はイソアミルアルコール、８０８はセネシオ
酸エチル、８０９はチグリン酸エチルである。しかし生
成物の大部分はインバレリアン酸エチルである。インバ
レリアン酸エチルは式、メνべＯ△ で表わされ、セネシオ酸エチルは式、 で表かされ、チグリン酸エチルは式。

で表わされる。第９図はインパレリアン酸エチルのガス
クロマトグラフィーのスペクトルで、そのエステルはに
８図のピーク番号８０６に示されている。第１０図はセ
ネシオ酸エチルのガスクロマトグラフィーのスペクトル
で、そのエステルは第８図のピーク番号８０８に示され
ている。

実施例３ 反応： 接種材料を１を量で２４時間ゲオトリチュム７ラグラン
／Ｃ（Ｇｅｏｔｒｌｃｈｕｍ　ｆｒａＨｒａｎｇ　）（
ＡＴＣＣ１１２４７）を培養させることによシ調製する
。

第５図の醗酵槽３３３を用い、前述の実施例ト同様にロ
イシンの代りにイソロイシンを出発物質として用いて行
なう。

醗酵の温度は２５℃、攪拌は４　Ｑ　Ｏｒｐｍとし、空
気注入は１ｔにつき１分間に０．７３１の速度とする。

又ｐ１＋は５．０５から５．３５に保つ。糖としてセレ
ローゼ■（ＣＦ、ｎＥＬＯ８Ｆ、■）２００１をｒＢＯ
％バッチの中に６チとなる様に、別に無菌状態として５
０パーセント溶液としたものを加える。インロイシンの
醗酵溶液中の初期濃度は０．５５チであシ、第２リン鐵
カリウムの量は０．１チ、硫酸マグネシウム７水和物は
０．Ｑ５チ。

■ トウイーンの８０　（ＴＶ／ＥＥＮ　　８０）は０．０
２％である。シリコン消泡剤を時々貯蔵タンク３１３よ
りライン３１６金通し、酬酵槽３３３に消泡するために
加える。この添加は、泡検知器４００によりコントロー
ルされる。７５チエチルアルコール水溶液を、ｒｆＲ槽
３１γより４８時間の間に４５０　ｒｎｌ、１時間に約
１１−の速度で加え、エチルアルコールの醗酵バッチ３
３４中の濃度を０．４９チから０．８２％に保つ。

醗酵で生成したエステルは、容器３５２Ａに入れられた
活性炭ベッド３５２と、容器３５３Ａに入れられた活性
炭ベッド３５３でトラップされる。活性炭ベッド３５２
の活性炭の量は３００ｇ（７１，５ｇのエステル混合物
を得る）で、活性炭ベッド３５３の活性炭の位は１５０
ｇ（エステル混合物１１．７．！ｉ＋を得る）である。

エステルを吸着した活性炭パッチは、蒸留槽３５９に３
６１の様に入れられ、プロピオングリコールと（２５０
ｍｌ　）と混ぜられる。得られたスラリーは、蒸留カラ
ム３５９のプレート３６０で蒸留分離され、ライン３６
８を通り、コンデンサー３６９／３７２を経てライン３
７４より化１７保持タンク３７６に入る。

第１１図は、エチルアルコールの存在下にイソロイシン
の醗酵により生成式れたエステル混合物のガスクロマト
グラムである（条件：５０ｍＸ０．３２ｍフユーズド　
シリカ　カラム、カルボワックス２０Ｍ、ｍ度プログラ
ム７５−２２５℃（２℃／ｍ１ｎ））。

ピーク番号１１０１のピークはプロピオン酸エチルであ
シ、１１０２のピークはイソ酪酸エチル、１１０３のピ
ークはシリコン消泡剤である。ピーク番号１１０・４の
、ピークは酪酸エチルで、１１０５のピークは２−メチ
ル酪酸エチル、１１０６のピークはイノバレリアン酸エ
チル、１１０Ｔのピークはチクリン殴エチル、１１０８
のピークはシリコン消泡剤、１１ａ９のピークは２−メ
チル−１−ブタノール、１１１０のピークはインバレリ
アン酸イノアミルであり。

１１１１のピークはシリコン消泡剤である。

第１１図は、一番目のエステルトラップ、即ち活性炭パ
ッチ３５２にトラップされたエステル混合物のガスクロ
マトグラムのプロファイルである。第１２図は、二番目
のエステルトラップ、即ち活性炭パッチ３５３にトラッ
プされたエステル混合物のガスクロマトグラムのプロフ
ァイルであろ（第１１図のガスクロマトグラフィーと同
じ条件である］。

ピーク番号１２０１で示されるピークは酢酸エチルで、
１２０２のピークはエチルアルコール、１２０３のピー
クはプロピオン酸エチル、１２（１４のピークはイソ酪
酸エチル、１２０５のピークはプロピオンアルデハイド
プロピレングリコールアセタール、１２０Ｇのピークは
インバレリアン酸エチル、１２０５Ａのピークは２−メ
チル酪酸エチル、１２０７のピークはシリコン消泡剤、
１２０８のピークは２−メチル−１−ブタノール、１２
ｎ’ｉのピークはチグリ／ｌ！！エチル、１２１０のピ
ークはイノバレリアン酸イソアミルとインパレリアン酸
ｎ−アミル、及び１２１１のピークはシリコン消泡剤で
ある。

実施例４ エステル混合物の合成 反応： 接種材料として、３日間９０ｍｊのゲオトリチュム　フ
ラグランス（Ｇａｏｔｒｉａｈｕｍ　ｆｒａｇｒａｎｓ
　）（ＡＴＣＣ２４５１２）を成長さす。

第５図の装置及び実施例２の方法な用いて、醗酵槽３３
３にデキストロースを醗酵パッチ（全体量３．５１　）
に５％デキストロースとなる様に加える。４　ｍｔの消
泡剤と４０ｒｎｌのエチルアルコールとを加える。空気
は１分に付２ｔの速度で注入する。醗酵パッチは、４０
０　ｒｐｍで攪拌し、ｐｉは１モル水酸化カリウム水溶
液で６．５−６．７に調整維持する。２つのカラム３５
２と３５３とにはそれぞれ１００ｇのアンパライト■Ｘ
ＡＤ−２１ｉ［（ポリビニルベンゼンスルホン酸樹脂）
を入れる。

２３ＩＩのイソロイシンを醗酵パッチに加える。

醗酵反応は３日間行ない。その後樹脂ベッドはフレオン
■１１３で抽出し、７レオン抽出液は３０％重炭酸ソー
ダ溶液と食塩水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥する
。溶媒を窒素で除くと２．０４，９の残渣が得られる。

これを常圧で蒸留すると２留分が得られ、第一の留分け
６２．１係の゛２−メチル酪酸エチルと１９．１３　％
のチプリン酸エチルを含み、第二留分は、２８．５　％
の２−メチル酪酸エチルと２７．４　％のチグリン酸エ
チルを含む。

実施例５ 反応： 接種材料としてＩＱＯｄのゲオトリチュムフラグラｙス
（Ｇｅｏｔｒｌｃｈｕｍ　ｆｒａｇｒａｎａ　）（ＡＴ
ＣＣ１１２４７）を４９時間培養する。

第５図の製置及び実施例２の方法を用いて、３ｔの醗酵
パッチを、５％デキストロースと０．５５％インロイシ
ンとが含まれる様に調整する。

醗酵は２５℃で行い、攪拌速度は４０　Ｏｒｐｍとし、
空気は１分間４ｔの速度で注入する。ｐＨは１モルの水
酸化カリウム溶液を用いて６．５にコントロールする。

エチルアルコールは、７２時間かけて４０ｒｌの量を徐
々に加える。１２０時間後、酵酵反応を止め、反応中外
部よりの冷却で１０℃に保たれていた１００１１の活性
炭トラップに水蒸気を水蒸気濃縮物が１０００　ｍｌ貯
まる１で通す。水蒸気ｍｗＩ物はフレオンｏ１１３で抽
出し、抽出液は無水硫酸マグネシウムで乾燥する。溶媒
を除くと１．４２ｇのエステル混合物が得られる。

これには８１．５５％の２−メチル酪酸エチルと４．６
％のチグリン酸エチルを含む。

醗酵槽の残部を５１７ラスコに移し、３２℃で３５■Ｈ
ｇ　　の圧で蒸留すると２００ｍＡの液体が得られる。

この蒸留磨をフレオン■１１３で抽出すると４５Ｉｖの
エステル混合物が得られる。

活性炭トラップは、さらにアセトンで抽出されアセトン
抽出液を乾燥する。溶媒を除くと５．３８．ｐのエステ
ル混合物が得られ、それは２３チの２−メチル酪酸エチ
ルと１３．７％のチグリン酸エチルとを含んでいた。

実施例６　　　　′ エステル混合物の合５！− 反応： ２８１容量の醗酵槽に１１０ｇのイソロイシン、２２ｇ
の第２リン酸カリウム、２２Ｊｉ’のイーストエΦス、
１１ｇの硫酸マグネシウム７水和物、及びｌ１００Ｆの
無菌５０チデキストロー７水溶液を含む醗酵反応液２２
１を入れる。

ｐＩｆの値を６．５に調整し、ゲオトリテユム　フラグ
ランス（Ｇｅｏｔｒｌａｈｕｍ　ｆｒａｇｒａｎａ　）
　（ＡＴＣＣ１１２４７）　Ｆ）ｆｇＭ　１．０００　
ｔｎ！　（３日間培養シフ’ｃもの）ｔ−接種材料とし
て加える。ｐＨの値は、５モル水酸化カリウム水溶液に
、より、５．０から５．５の間に保つ。発泡はシリコン
消泡剤にてコントロールする。又通気は醗甫反応ｉｌ　
ｔＫつき、１分間５ｔの割合とする。エチルアルコール
は１時間につき４ｄの割合で反応液に加え、反応溶液中
にエチルアルコールが０．５％から０．８７５係になる
様にする（加えた総量は、７５チエチルアルコールで２
９４ｄであった）。

結果として、第１活性炭トラツプ３５２より最初抽出に
より、２６．６４の２−メチル酪酸エチルと１７．３　
’ｊのチグリン酸エチルとを含む１０８、５　ｇのエス
テル混合物を得た。この活性炭トラップを再使用するこ
とにより１８．８　％の２−メチル酪酸エチルと１５．
９％のチグリン酸エチルとを含む７．４８　ｇのエステ
ル混合物を得た。第２活性炭トラツプ３５３よりｉｄ、
３８．３・メの２−メチル酪酸エチ、ルと６．９３ｆｉ
のチグリン酸エチルとを含む８．２４．９のエステル混
合物が得られた。この活性炭トラップを再使用すること
により更に３９６７％の２−メチル酪酸エチルと１．７
チのチグリン酸エチルとを含む４．９ｇのエステル混合
物を得た。更に第１トラツプの再抽出により３６．３％
の２−メチル酪酸エチルと５．７嘔のチグリン酸エチル
とを含む７．８９　ｇのニスデル混合物が得られ、又第
２トラツプの再抽出からは３９．７９ｇの２−メチル酪
酸エチルと３．１２％のチグリン酸エチルとを含む５，
１２Ｉのエステル混合物を得た。

要約丁れば、合計６３．１７のエステル混合物が得られ
、以下に記す成分を含む。

メチル酪酸エチル　　　　　　　　２．５２−メチル酪
酸エチル　　　　　４３．４イソバレリアン酸エチル　
　　　１６．２２−メチル−１−ブタノール　　　２．
９チグリン酸エチル　　　　　　　３２．０実施例７ 反応： 実施例６と同様の方法で反応を行なった。但し、以下に
記す項目については変えて行なった。

（１）　　インロイシ／の代りにロイシンを用いた。

（２）消泡剤は用いなかった。

（３）接種材料の量は２００ｄであった。

（４）　　ｐＨの値は５に保った。

（５）醗酵パッチの攪拌は５９０　ｒｐｍの速度であっ
た。

主生成物はインパレリアン酸エチルで、少量のセネシオ
酸エチルが副生ずる。

実施例８ エステル混合物の合成 反応： ４．５％溶液を２４時間培養する。

以下に示す醗酵パッチを第５図の醗酵槽３３３に加える
。

バリン　　　　　　　　　４ 硫酸マグネシウム７水和物　　　　０．０５第２リン酸
カリウム　　　　　　０．１アムベレツクス［Ｆ］　　
　　　　０．１ヤＶ。−＋！［Ｆ］　　　　　　　　４
．５トウイーン［Ｆ］８０　　　　　　　　　０．０２
醗酵反応は、以下に記す条件で７２時間行う。

通気レベル・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・０．７３ｔ／ｍ１ｎ（醗酵
パッチ１ｔに付） 攪拌速度・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・４　Ｑ　Ｏｒｐｍ温庇
　・・・・・・・・・・・・叫・・叫・・・・・・・曲
・・・・・・　２４〜２６℃ρ■範囲　・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・５．００−５．１０エチルアルコール総
使用量　・・・・・・・・・・・・・・・　５５０＋＋
＋／回収補助蒸留硫剤　・・・・・・・・・・・・・・
・・・・プロピレングリコール８酵バツチの総量は２２
１とした。

活性炭トラップから合計７４．５．９のエステル混合物
を得、それに含まれる成分は以下に記す通りである。

プロピオン酸エチル・・・・・・・川・・・山・・　１
０．３％イア酪ａエチル・川・・・回団・山・山・印・
　３７．０％イソバレリア２酸エチル　・・・・用…旧
・・　２８．１％チグリン酸エチル・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・　　４６５％第１３図
はエチルアルコールの存在下でバリンの醗酵に占る反応
で生成したエステル混合物のガスクロマトグラムを示す
。ピーク番号１３０１のピークはエチルアルコールであ
り、１３０２のピークはプロピオン酸エチル、１３０３
のピークはイソ酪酸エチル、１３０４のピークはイソパ
レリアン酸エチルと２−メチル酪酸エチルであり、１３
０５のピークはチグリン酸エチルである。

反応混合物にチグリン酸エチルが含まれていたのは、接
種材料に少量のイソロイシンが含まれていたからである
。又イソバレリアン酸エチルのピーク（Ｃ２−メチル酪
酸エチルが含まれていたのは、接種材料にインロイシン
が不純物として含１れでいたからである。

実施例９ エステル混合物の合成 反応： 実施例８と同様の方法で反応を行なった。但し、以下に
記す項目については変えて行なった。

（１）　　エチルアルコールの代シに１６５　ｍｌのイ
ンブタ７ノールを用いた。

（２）バリンの代りに０．４５１の濃度でイソロイシン
を醗酵バッチに加えた。

第１４図はインブタノールの存在下にインロイシンの醗
酵により生成したエステル混合物のガスクロマトグラム
である。

ピーク番号１４０１で表わされるピークはプロピオン酸
イソブチルであり、１４０２のピークはイソ酪酸イソブ
チル、１４０３のピークは２−メチル酪酸イソブチルと
イソパレリアン酸イソブチルで、１４０４はチグリン酸
イソブチルのピークである。

【図面の簡単な説明】

ｗｃ１図は本発明方法の実施に適する装置の系統図、 第２図ないし第４図は第１図の装置の部分系統図、 第５図は本発明方法の実施に適する他の装置の系統図。 第６図は第５図の装置の部分系統図、 第７図は実施例１の反応生成物のガスクロマトグラム、 Ｗ２Ｂ図ないし第１０図は実施例２の反応生成物のガス
クロマトグラム、 第１１図および第１２図は実施例３の反応生成物のガス
クロマトグラム、 第１３図は実施例８の反応生成物のガスクロマトグラム
、および 第１４図は実施例９の反応生成物のガスクロマトグラム
である。 第１図ないし第６図において、 １０．３３３・・・醗酵タンク、 １２．２０２・・・攪拌機、 １３．３３４・・・醗酵パッチ、 １４．２０６・・・プロペラ２ １６．３２６，３２７・・・スパージャ−１２２，３２
３，３３７・・・フィルター、２４．３４．４２．５０
．５ａ、６Ｇ−７４，９６，１４０，ＩＧＯ１１８Ｂ、
１９１３．２９０．３００．３０４，３０９，３１３．
３１７．３２１．３６３・・・タンク ３４．４２．５０．５８．６６．７４．９６．１４０．
１１１ｉ８．１８８．１９６・・・貯蔵タンク８８・・
・空気フィルター ９２．３６９．３７２・・・コンデンサー９４．２２４
．３３９・・・コイル １１２．３４４・・・トラップ １４Ｂ、１５６．１６４．３５２．３５３・・・活性炭
ベッド容器 １６６・・・容器 １８７・・・ポツパー １９９％２０１．３ｆｉ２・・・加熱器１９８．３２９
・・・バッフル ２００・・・モーター ２０４．２０７・・・タンクのフタ ２１８．３５９・・・蒸留器 ２２２．３４０・・・熱交換器 ２３８．２７６・・・受容器 ２４６・・・分留カラム ２５０・・・還流分離器 ３３１・・・ｐｎ検知装置 ３６０・・・蒸留器のタナ ３６２・・・加熱コイル ３８．４Ｂ、５４．６２．７０．７Ｂ、８４゜１１０．
１３０，１３８．１４６，１６０゜１９２．２３６，２
４４．２６２，２６４゜２９３．３０３，３１１．３６
６．３７５・・・ポンプ ２Ｇ、　　２６、３２、４０．４Ｂ　、　５６、６４゜
７２、　８０．　８６、　ｔｏｏ、　　１　ｏ　８、１
２８．１３６、１４４、１５４、１６２、１１０゜１７
４．１９４，２０９，２３４．２４２．２６（１，２６
６，２９２，３０２，３０６゜３０８、　３１Ｑ、　　
３２５、３５０　、３５１゜３６４．３７４，４５１．
４５２，４５５％４５７．４５９、 代ノエ人　三宅正失他１名 ｊ浸　　　　　　　＄迄 ＦＩＧ、７ ５０　　　　　＋００　　　　１５０ ＦＩＧ、ｌｌ

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒ＿１Ｒ＿２およびＲ＿３はメチル基又は水素で
   あり、点線は炭素−炭素一重結合又は炭素−炭素二重結
   合を示し、又Ｒ′はＣ＿２−Ｃ＿５、アルキル基である
   〕 で表わされる天然に存在するＣ＿４−Ｃ＿５カルボン酸
   のＣ＿２−Ｃ＿５アルキルエステル。
2. （２）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒ＿１、Ｒ＿２およびＲ＿３は前記と同意義を有
   する〕 で表わされるアミノ酸とＣ＿２−Ｃ＿５アルコールとを
   上記エステルの少なくとも１つを生産できる微生物の存
   在下に反応させることにより 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒ＿１、Ｒ＿２およびＲ＿３は前記と同意義を有
   し、Ｒ′はＣ＿２−Ｃ＿５アルキル基である〕で表わさ
   れる天然に存在するＣ＿４−Ｃ＿５カルボン酸のＣ＿２
   −Ｃ＿３アルキルエステルを製造することを特徴とする
   天然に存在するＣ＿４−Ｃ＿５カルボン酸のＣ＿２〜Ｃ
   ＿５アルキルエステルの製法。
3. （３）上記微生物は、 ￥ブレタノミセス￥　￥アノマルス￥ （￥Ｂｒｅｔｔａｎｏｍｙｃｅｓ￥　￥ａｎｏｍａｌｕ
   ｓ￥）￥キヤンデイダ￥　￥ルセイ￥ （￥Ｃａｎｄｉｄａ￥　￥ｋｒｕｓｅｉ￥）￥キヤンデ
   イダ￥　￥リポリテイカ￥ （￥Ｃａｎｄｉｄａ￥　￥ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ￥）￥
   キヤンデイダ￥　￥プシユドトロピカリス￥（￥Ｃａｎ
   ｄｉｄａ￥　￥ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ￥）
   ￥セラトシステイス￥　￥モニリホルミス￥（￥Ｃｅｒ
   ａｔｏｃｙｓｔｉｓ￥　￥ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ￥
   ）￥ゲオトリチユム￥　￥フラグランス￥ （￥Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ￥　￥ｆｒａｇｒａｎｓ￥）
   ￥ゲオトリチユム￥　￥ペニシラタウム￥ （￥Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ￥　￥ｐｅｎｉｃｉｌｌａｔ
   ｕｍ￥）￥ゲオトリチユム￥　￥スアベオレンス￥ （￥Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ￥　￥ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ
   ￥）￥ハンゼニユラ￥　￥アノマラ￥　￥バル￥．￥オ
   クトスポラス￥ （￥Ｈａｎｓｅｎｕｌａ￥　￥ａｎｏｍａｌａ￥　￥ｖ
   ａｒ￥．￥ｏｃｔｏｓｐｏｒｕｓ￥）￥ハンゼニユラ￥
   　￥サトルニユス￥（￥ハンゼニユラ￥　￥スアベオレ
   ンス￥） 〔￥Ｈａｎｓｅｎｕｌａ￥　￥ｓａｔｕｒｎｕｓ￥（￥
   Ｈ．￥　￥ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ￥）〕￥ハンゼニユラ
   ￥　￥スブペリクロサ￥ （￥Ｈａｎｓｅｎｕｌａ￥　￥ｓｕｂｐｅｌｌｉｃｕｌ
   ｏｓａ￥）￥ローエクエラ￥　￥アピクラタ￥ （￥Ｋｌｏｅｃｋｅｒａ￥　￥ａｐｉｃｕｌａｔａ￥）
   ￥ピチア￥　￥フアリノサ￥ （￥Ｐｉｃｈｉａ￥　￥ｆａｒｉｎｏｓａ￥）￥サツカ
   ロミセス￥　￥ローキシＮｏ．６７５￥（￥Ｓａｃｃｈ
   ａｒｏｍｙｃｅｓ￥　￥ｒｏｕｘｉｉ　Ｎｏ．６７５￥
   ）￥シゾキツカロミセス￥　￥ポンベイ￥ （￥Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ￥　￥ｐ
   ｏｍｂｅｉ￥）および ￥スポロボロミセス￥　￥オードルス￥ （￥Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ￥　￥ｏｄｏｒｕｓ
   ．￥）の中から選ばれる特許請求の範囲第（２）項記載
   の製法。
4. （４）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ＿１、Ｒ＿２及びＲ＿３はメチル基又は水素で
   あり、又Ｒ＿１、Ｒ＿２及びＲ＿３の内少なくとも１つ
   はメチル基である）で表わされるアミノ酸とＣ＿２−Ｃ
   ＿５アルカノールとの反応を行なう装置、反応混合物に
   通気する装置、通気により生成物を活性炭ベツドに運ぶ
   装置、スラリー溶媒により活性炭をスラリーにする装置
   、得られたスラリーを蒸留装置に運ぶ装置、及び活性炭
   ベツドより分離されて得られた生成物を採取する装置か
   らなることを特徴とする天然に存在するＣ＿４−Ｃ＿５
   カルボン酸のＣ＿２−Ｃ＿５アルキルエステルを製造す
   る装置。