JPS61274696A - 抗生物質クロロポリスポリンｂまたはｃ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の目的〕 本発明は新抗生物質クロロポリスボリンＢおよびＯ（Ｃ
ｈｌｏｒｏｐｏｌｙａｐｏｒｉｎ　ＢおよびＣ）、その
製造法およびそれを有効成分とする抗菌剤に関するもの
である。本発明者らは、栃木基で採取した土壌から分離
したミクロポリスボラ属に属する５ＡＮＫ６０９８３株
が、主としてグラム陽性細菌に対して有効な新抗生物賀
クロロポリスボリンＢおよびＣを生産することを見出し
た。

本発明のクロロポリスボリンＢおよびＣはその諸性状よ
シバンコマイシン（Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）、７ボバル
シｙ　（Ａｖｏｐａｒｃｉｎ）　ｈるいはＡ　−３５５
１２群物質などと同様のグリコペプチド系抗生物質に類
縁の抗生物質であり、構成成分中、アミノ酸組成および
中性糖組成、高圧Ｆ紙″亀気泳動、並びにＯ／ｆｉｔ（
％）などにより公知のグリコペプチド系抗生Ｐ４１ＩＪ
ｊｉＸとは明らかに区別され新抗生物質と判明した。

〔発明の構成〕

本発明のクロロポリスボリンＢおよびＣは下式中、クロ
ロポリスボリンＢはＲ１がリストサミン（Ｒ１日切Ｂａ
ｍ１ｎｓ）を示し、Ｒ２がマンノース（Ｍａｎｎｏｓｅ
）を示し、Ｒ５がグルコース（ｅｌｕｃｏｓｅ　）を示
し、Ｒ４がラムノース（Ｒｈａｍｎｏｓｅ）を示す＠ク
ロロポリスポリンＣはＲ１がリストサミンを示し、ス Ｒ２がマンノースを示し、Ｒ３がゲルコイ示し、Ｒ４が
水素原子を示す。

クロロポリスボリンＢおよびＣは下記のような理化学的
および生物学的性状を有する。

１、　クロロポリスポリンＢｉ酸塩 １）物質の性状二両性水溶性、白色粉末２）比旋光度：
〔α瞠５−６４．５°（０、１，０４，０，Ｉ　Ｎ塩酸
溶液） ３）元素分析値し）：　０　、４８．３３；Ｈ、５，０
５；　Ｎ　。

５．４８　；　Ｃ１、５，１１；　８　、　ｔｏｏ　；
４）酸加水分解： 中性ｓ；グルコース、マンノース、ラムノース アミノ酸；３−クロロ−４−ヒドロキシフェニルグリシ
ン、Ｎ−メチル−Ｐ−ヒドロキシフェニルグリシン 第１図に示す通９０、ＩＮ塩酸溶液では２８０ｎｍ６）
赤外線吸収スペクトルニジＫＢｒ、、７１ａｘ ＫＢｒディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは第２
図に示す通りでめる◎ ｌ）核磁気共鳴吸収スペクトル：（δ：　）９９ｍ ジメチルスルホキシド中、内部基準にＴＭＳ　（テトラ
メチルシラン）を使用して測定したスペクトル（２７０
ＭＨ＝　）は第３図に示す通りである。

８）溶解性： 水、メタノールに可溶、アセトンに難溶、酢酸エチル、
クロロホルム、ベンゼンに不溶。

９）呈色反応：ニンヒドリン、ライドンスミス反応に陽
性。

１０）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値０．６５吸１１
剤；イーストマンセルロースシート展開溶媒；ｎ−ブタ
ノール：ピリジン：酢酸：水（１５：１０：３：１２） １１）高圧Ｆ紙電気泳動： ０、１　Ｍ　トリス塩酸緩衝液（ＰＨ７，５）中で東洋
Ｐ戯４５１Ａを用いた高圧Ｆ紙電気泳動（３３００ｖｏ
１ｔ／　６０ｃｒＩｔ、１時間）において、原点より陰
極側への移動距離は４ｃＩＩＬであった。なお、移動距
離はバチルス・ズブチリスルｃ工２１９を被検菌として
、バイオオートダラムにより求めた。

１２）分子式 ％式％ ＦＡＢ−３１８による実測の結果、１８４６（ＭＥ　１
８４７）でめった。− １４）抗菌カニ 一般グラム陽性、グラム陰性細菌に対するクロロポリス
ボリンＢの最小発育阻止濃度（Ｍ工Ｃ）はミュラー・ヒ
ントン寒天培地（ディフコ社製）、嫌気性菌に対しては
ＧＡＭ寒天培地（白水製薬■製）を用いた寒天培地稀釈
法によって測定した。

その結果は第１表および第２表に示す通りである。

１５）毒性： マウス（ＩＯＲ、雄、５週令）に対するＬＤ　５Ｑ（１
，ｖ、）は２１５１ｎ９／ｋｇテアッた。

λ　クロロポリスボリンＣ硫゛酸塩 １）物質の性状：両性水溶性、白色粉末２）比旋光度：
〔α〕二５−６４．４°（０、１，０Ｂ　、　０．　Ｉ
　Ｎ塩酸溶液） ３）元素分析値（％）　：　０　、５Ｇ、５３　：Ｈ、
４，６９；Ｎ　、　６．１４：０／　、　５．６２　；
　８　、１．１２　；４）酸加水分解： 中ｉ糖；　ｙルコース、マンノース アミノ酸；３−クロロ−４−ヒドロキシフェニルグリシ
ン、Ｎ−メチル−ｐ−ヒドロキシフェニルグリシン ５）紫外線吸収スペクトル：λ　ｎｍ（１！！’％）ｗ
ａｘ　　　　　１ｃｍ 第４図に示す通ｊ５　Ｇ、　Ｉ　Ｎ塩酸溶液では２１１
０ｎｍＫＢｒディスクで測定した赤外線吸収スペクトル
は第５図に示す通りである。

Ｔ）核磁気共鳴吸収スペクトル：（δ：　）９９ｍ ジメチルスルホキシド中、内部基準にＴＭ８　（テトラ
メチルシラン）を使用して測定したスペクトル（４００
ＭＨｚ　）は第６図に示す通９でらる・８）溶解性： 水、メタノールに可溶、アセトンに難溶、酢酸エチル、
クロロホルム、ベンゼンに不溶。

９）呈色反応：ニンヒドリン、ライドンスミス反応に陽
性。

１の薄層クロマトグラフィー：Ｒｆｉ　　Ｏ，６５吸着
剤；イーストマンセルロースシート展開溶媒；ｎ−ブタ
ノール：ピリジン：酢酸：水（１５：１Ｇ：３：１２） １１）分子式 ％式％ ＩＦＡＢ　−Ｍ８による実測の結果、１７０Ｇ（ＭＨｌ
７０１）でめった。

１３）抗菌カニ 一般グラム陽性、グラム陰性細菌に対するクロロポリス
ボリンＣの最小発育阻止濃度（Ｍ工Ｃ）はミュラー・ヒ
フトン寒天培地（ディフコ社製）、嫌気性菌に対しては
ＣＡＭ寒天培地（日水製槃■製）を用いた寒天培地稀釈
法によって測定した。

その結果は第１表および第１表に示す通りである。

１４）毒性： マウス（工ＯＲ，雄、５週令）に対するＬＤ５Ｑ（１，
ｖ、）は２５０１Ｒ９／ｋｇ”ｅあツタ。

第　　　１　　　表 スタフィロコッカス働アウレタスＩＰＤム２０９Ｆ　、
ＴＯ−１１，５６１，５６スタフイロコツカス・アウレ
ウス５ＡＮＫ７０１７５　　　　　１１３　　　　　１
．５６スタフイロコツカス働アウレクス　スミス　　　
　　　１２．５　　　　　６．２５スメフイロコツカス
・エピデルミゾイス５ＡＮＫ７１５７５　　３．１３　
　　　　３．１３エンテロコツカス・２エカリス５ａｘ
Ｋ７１７７８　　　　　　１．５　Ｂ　　　　　　１．
５６バｆｋＸｅズブチリスＰＯＩ２１９　　　　　　　
　　’　　　　（Ｌ７８　　　　０．７８ミコバクテリ
クム・スメグマチスＡＴＯＯ６Ｇ７　　　　　２５　　
　　　　１２．５エツジエリヒフ、コ９−）ＪＩＢ、Ｔ
ＪＯ−２）１０Ｇ　　　　　）１００クレブシエラ・ニ
ュウモニｚＰＯＩ６Ｇ２　　　　　　　　＞１００　　
　　）１００シユードモナス・エルギノーザＮ０ＴＯ１
０４９０＞Ｉ　Ｇｏ　　　　　＞Ｉ　Ｇ。

セラｆ７−　マルセツセンス８ＡＮＫ７３０６０　　　
　　　　＞Ｉ　Ｇｏ　　　　）Ｉ　Ｇ。

第　　　２　　　表 バクテロイデスＯフラジリス　　　　　　　　　　　＞
１００　　　　　）１００ユウバクテリウム・シリンド
ロイデス　　　　　　　　６．２５　　　　　３．１３
フッバクテリウム番ネクロホラム　　　　　　　　＞１
００　　　　）１００ペプトストレプトコツカス・サツ
カロリティカス　　６．２５　　　　　　＆１３ペブト
ストレプトコツカス・バーブルス　　　　　　０．７８
　　　　　０．３９プロピオシくクテリウム・アクネス
　　　　　　　　０．ｒ８　　　　　０．３９クロスト
リデイクム・シンビオ−サム　　　　　　　　１．５６
　　　　　０．３９クロストリデイクム・ラモーサム　
　　　　　　　　　Ｌ５６　　　　　１．５６クロスト
リデイウム自パー７リンゲンス　　　　　　　０．２０
　　　　　０．１０クロストリデイウム・デイフイシル
　　　　　　　　　０．１８　　　　　０．３９以上か
ら、クロロポリスボリンＢおよびＣはスタフィロコッカ
ス・アウレウス、スタフィロコッカス・エピデルミゾイ
ス、エイテロコツカス・フェカリス、バチルス・ズブチ
リス、ミコバクテリウム・スメグマチス等のグラム陽性
細菌及びユウパクテリクム・シリンドロイデス、ペブト
ストレプトコツ力ス番サツカロリティカス、プロピオニ
バクテリウム・アクネス、クロストリディウム・シンビ
オ−サム、クロストリディウム・パーフリンゲンス、ク
ロストリディウム・デイフイシル等の嫌気性のグラム陽
性細菌に有効である。

クロルポリスポリ／Ｂおよび０を生産する５ＡＮＫ６０
９８３株の菌学的性状は次の通りである０ｓＡＮｘ　６
０９８３株の同定にあたってはＸＢＰ　（インターナシ
ョナル・ストレプトミセス―プロジエク　ト　（Ｉｎｔ
ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　
　Ｐｒｏｊｅｃｔ））規定の培地およびワックスマン（
８，Ａ、Ｗａｋｓｍａｎ）の勧告〔ジ・アクチノミセイ
テス（Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）、２巻〕
の培地等を用いて培養した。培養は通常２８６Ｃで行っ
た◎ １）形態学的特徴 ８ＡＮＩＣ６０９８３株は各種培地上で比較的良好な生
育を示す。気菌糸は肉眼上はとんどの培地で認められな
いが、グリセロール・アスパラギン寒天培地やポテトエ
キス・人参エキス寒天培地上では着生ずる場合もある。

気菌糸および栄養菌糸の先端あるいは中程に胞子の連鎖
が観察され、その数は１〜２０個、時には２０個以上の
場合もある＠菌糸の明瞭な断裂は認められないが、培養
後期に断裂が認められる場合もある。

２）各種培養基上の諸性状 ５ＡＮＩＣ６０９８３株はうす黄〜黄茶〜黄味灰に生育
する。はとんどの培地上には気菌糸が認められないが、
一部の培地には白の気菌糸が着生する。

可溶性色素の産生は認められない。第３表に主な培地上
での培養性状を示す＠ 色調の表示は日本色彩研究新版１標準色票”のカラーチ
ップナンバーを表わす。

第３表　　各穐培地上の培養性状 （２８℃、１４日間培養） Ｇ：生育、ムＭ：気菌糸、Ｒ：裏面、ＳＰ：可溶性色素
３）生理学的性質 ８ＡＮＫ６０９８３株の生理学的諸性質を第十表に示す
Ｏ 第十表　生理学的物質 分解　　アデニン　　　　　− カゼイン　　　　　＋ キサンチン　　　　− ヒボキサンチン　　＋ 澱粉の加水分解　　　　　　士 ゼラチンの液化　　　　　　十 ミルクの凝固８　　　　　　− ミルクのペプトン化８ 硝酸塩還元　　　　　　　　十 ＤＮａａｅ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　＋メラノイド様色素産生　工ｓｐ１　− 工ｓｐ６　　− １日ｐ７　　− 有機酸産生　　酢酸ナトリウム　　　−コハク酸ナトリ
ウム　　− クエン酸ナトリウム　　− ピルビン酸ナトリウム　　　− 酒石酸ナトリウム　　　　− Ｄ−グルコース　　　　　＋ Ｌ−アラビノース　　　　＋ Ｄ−キシロース　　　　＋ イノシトール　　　　　＋ Ｄ−マンニトール　　　＋ Ｄ−フルクトース　　　　＋ Ｌ−ラムノース　　　　　＋ シュクロース　　　　　　＋ ラフィノース　　　　　　＋ 炭素源の資化性　Ｄ−グルコース　　　　＋Ｌ−アラビ
ノース　　　　＋ Ｄ−キシロース　　　　＋ イノ７トール　　　　　＋ Ｄ−マンニトール　　　＋ Ｄ−フルクトース　　　　＋ Ｌ−ラムノース　　　　　＋ シュクロース　　　　　　十 Ｎａｐ／耐性　　　３チ　　　　　　　　＋５％　　　
　　　　　　　　　± ７４　　　　　　　　　　　　± 生育ａ度範囲　１０℃　　　　　　　　　−２０＋ ２８＋ ３１＋ リ　菌体内成分について エム・ピー・レジエバリヤー（Ｍ、Ｐ、　ｌ８ｃｈｅｖ
ａｌｉｅｒ）らの方法（エイ・ディーラ（Ａ、Ｄｉθｔ
＋ｉ）ら著、放線菌の分類（Ａａｔｉｎｏｍｙａｅｔｅ
　ｔａｘｏｎｏｍｙ）、２２５頁、１９８０年〕に従い
、菌体の酸加水分解物のペーパークロマトグラフィーに
よる分析を行った結果、メソジアミノピメリン酸および
アラビノース、ガラクトースが認められ、細胞壁のタイ
プは■型であることか確認された。また全菌体線型はＡ
型であった＠さらに内円らの方法〔ジャーナルーオブ嘲
ジェネラルｅアプライド・マイクロバイオロジー（Ｊ、
ｅｅｎ、ム１）１）ｌ　、Ｍｔａｒｏｂｉｏｌ、）、２
３巻、２４９貞、１９１７年〕に従い細胞壁のアシル基
を調べたところアセチル基型であった＠ ところで、現在知られている放線菌の中で、胞子を菌糸
の中間に形成するような属は報告されていない。そして
、他の諸性質から類縁する属を検索するとアクテノボリ
スボラ（Ａｃｔｉｎｏｐｏｌｙａｐｏｒａ）属、サツカ
ロポリスポラ（ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ）
属、シュートノカルシア（Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉ
ａ　）属、ミクロポリスボラ（Ｍｉｃｒｏｐｏｌｙｅｐ
ｏｒａ　）属等があげられる。

しかし、アクチノボリスボラ属およびサツカロポリスボ
ラ属は、両属とも気菌糸の先端にのみ胞子を着生するこ
との他、前者が高度好塩性属でめること、後者がグリコ
リル基型のアシル基を有すること等から５ＡＮＫ　６０
９８３株とは属を異にする。また、シュートノカルシア
属は本株と同様、気菌糸および栄養菌糸に胞子を着生す
るが、その位置は菌糸の先端のみであること、また出芽
法による胞子の発芽が認められること等により日ＡＮＫ
　６０９８３株と属を異にするものと考えられる。ミク
ロポリスボラ属と本ＥＩＡｐＫ　６０９８３株の相異は
、胞子の着生位置が前者が菌糸の先端のみに形成するの
に対し、後者が先端および中間に形成する点のみである
。

胞子の着生位置が菌糸の先端、中間のいずれかによるこ
とが分類学的にどのような意味を持つかについては未だ
学界でも議論されたことかはとんとない現在、この差の
みをもって属を分けることは適当でない。

従って、本発明者らは５ＡＮＫ　６０９８３株をミクロ
ポリスポラ属の一新種とするのが最も妥当であると考え
、ミクロポリスボラ　エスピー―（Ｍｉｃｒｏｐｏｌｙ
ｓｐｏｒａ　ｓｐ、）　５ＡＮＫ　６０９８３　（微工
研条寄第５３８号；　ＦＩＲＭ　ＢＰ−５３８）と命名
した。

以上、クロロポリスポリンＢおよびＣの生産菌について
説明したが、放線菌の諸性質は一定したものでなく、自
然的、人工的に容易に変化することは周知の通シでアシ
、本発明で使用しうる菌株はミクロポリスポラ属に属す
る、クロロポリスボリンＢおよびＣを生産するすべての
菌株を包含するものである。

本発明における培養は一般放線菌における培養方法に準
じて行われ、液体培地中での振盪培養あるいは通気撹拌
培養によるのが好ましい。

培地成分としては、たとえば炭素源としてブト’７糖％
　マルトース、シュクロース、マンニット、糖蜜、グリ
セリン、デキストリン、澱粉、大豆油、綿実油などが、
窒素源として大豆粉、落花生粉、綿実粉、フ′アーマミ
ン、魚粉、コーン・スチープ参りカー、ペプトン、肉エ
キス、イースト、イースト・エキス、硝酸ソーダ、硝酸
アンモニウム、硫酸アンモニウムなどが、また、無機塩
として食塩、燐酸塩、炭酸カルシウム、微量金属塩など
が必要に応じて適宜添加される。

液体培養に際してはシリコン油、植物油、界面活性剤等
が消泡剤として適宜使用される。

培地のｐＨは中性附近、培養温度は２４℃から３０℃、
特に２８℃前後が好°ましい。培養の経過に伴って生産
されるクロロポリスボリンＢおよび０の力価の経時的変
化は、バチルス・ズブチリスｐｏＩ　２１９及びスタフ
ィロコッカス・アウレウスＩＦＤ奔２０９　ＰＪｃ−１
を被検菌としたペーパーディスク（東洋科学産業■製、
直径８　ｗｘ、　ＴｈｔｃｌＣ）検定法により測定され
る。通常５５〜１０時間の培養でクロロポリスボリンＢ
およびＣの生産量は最高値に達する。主として培養液中
の液体部分に存在するクロロポリスボリンＢ゛および０
は、培養終了後、菌体その他の固型部分をけい七う±等
を濾過助剤とする濾過操作、あるいは遠心分離によって
除去し、そのＦ液あるいは上清中から抽出拳精製するこ
とによって得られる。

クロロポリスボリンＢおよび０はその物理化学的性状を
利用することにより、たとえは吸着剤を用いて採取する
ことができる。吸着剤としてはたとえば、活性炭、ある
いは吸着用樹脂であるｙｙパーライトＭＡＤ−２、ＸＡ
Ｄ−４、ＸＡＤ−１等（ローム・アンド・ハース社製）
−？ダイヤイオンＨＰ１Ｇ　、　ＨＰ２Ｇ　、　０ＨＰ
２０Ｐ　、　ＨＰ５Ｇ　（三菱化成工業■製）、ポリア
ミドゲル等が使用され、クロロポリスボリンＢおよびＣ
を含む液を上記の如き吸着剤の層を通過させてクロロポ
リスボリンＢおよび０を含む液に含まれる不純物を吸着
させて取りのぞくか、またはクロロポリスボリンＢおよ
びＣを吸着させた後、メタノール水、アセトン水、ｎ−
プメノール水などを用いて溶出させることによって得ら
れる０ このようにして得られたクロロポリスボリンＢおよびＣ
を分離・精製するためには、アとセル（旭化成工業■製
）などのセルロースあるいはセファデックスＬＨ−２０
（ファルマシア社製）などを用いた分配カラムクロマト
グラフィー；逆相用担体を用いた逆相カラムクロマトグ
ラフィー；またはクロロポリスボリンＢおよびＣと混在
する不純物との溶媒に対する分配率の差を利用した抽出
法、あるいは向流分配法などが有効な方法といえる。以
上の分離・精製手段を単独めるいは適宜組み合せ、反復
用いることによりクロロポリスボリンＢおよび０を分離
−精製することができる。クロロポリスボリンＢおよび
０は、また一般の脂溶性抗生物質と同じく、培養条件に
よっては培養液中の菌体部分に存在する。この場合は、
アルコール類、アセトン等の親水性有機溶媒によって抽
出し、抽出液より溶媒を除去し、次いで水溶液とした後
、培養Ｆ液からと同様の方法で抽出精製することができ
る。

〔発明の効果〕

クロロポリスボリンＢおよびＣはグラム陽性細菌に対し
て強い抗菌力を示すことから、ヒトおよび動物のこれら
の細菌に起因する疾病の予防および治療に用いられる。

また、グリコペプチド系公知抗生物質の中には反すう動
物および家畜における飼料効率を増大嘔せるための補足
的手段として利用されているものもあるが、本物質につ
いても同様の効果が期待される。

以上から、クロロポリスボリンＢおよびＣは各種細菌感
染性疾患を対照とする抗菌剤として使用される。その投
与形態としては皮下注射、静脈内注射、筋“肉注射、半
開などによる非経口投与法あるいは°錠剤、カプセル剤
、散剤、顆粒剤などによる経口投与法があげられる。投
与量は対象疾患、投与経路および投与回数などによって
異なるが、例えば成人に対して通常は１日０．１Ｆ乃至
１０Ｆを１回または数回に分けて投与するのが好ましい
。

次に実施例、製剤例をあげて本発明をさらに具体的に説
明する。

実施例１゜ ミクロポリスポラ・エスピー５ＡＮＫ８０９８３株をＡ
培地８０ｍ１を含む５００ｍ／容三角フラスコに一白金
耳接種し、２２０　ｒｐｍの回転振盪培養機にょシ２８
℃で８４時間培養した。この培養液２５ｍｚをＢ培地ｓ
ｏｏｍｚを含む２１容三角フラスコ４本に接種し、２２
０　ｒｐｍの回転振盪培養機にょシ２８℃で２４時間培
養した。この培養液７５０　ｍｌを、Ｂ培地Ｉｓ／を含
む３０Ｚ容ジャーファーメンタ−２基に接種し、２８℃
、回転数１５゜ｒ　ｐｍ／分、通気量１５Ｅ／分で６゛
３時間通気撹拌培養した。この培養液３０／に濾過助剤
としてセライト５４５を加えて濾過すると、涙液３０／
が得られた・このｐ液をダイヤイオンＨＩ’２Ｇ、　３
　／に吸着ぢせ、水洗し５Ｏｃｓアセトン水で溶出し、
得られた活性分画より減圧下でア七トンを留去後、凍結
乾燥すると粗粉末４４ｆが得られた。

得られた粗粉末４１９を水に溶解しダイヤイオンＨＰ２
Ｇ、　１．８　／に吸着させ水５／、次いで１０チアセ
トン水２１で洗浄後、５０俤アセトン水４１で溶出した
。溶出液を減圧下で１１に濃縮し、５０００ｒｐｍ、で
遠心分離し、得られた沈澱を乾固するとクロロポリスボ
リンＢおよびＣを含む粉末９．６ｆが得られた。得られ
た粉末９．６１を５０％メタノール水１ｚＫｍ解し、あ
らかじめ５０％メタノール水で調製した酸性アルミナ（
ウエルム社製）２０（１ｍ／に吸着させ同一溶媒で溶出
すると活性分画１．１７が得られた。得られた活性分画
をＤＯＷ８Ｘ　２１　Ｋ　（０Ｈ−）　６０　ｍｌに通
過させ、更に得られた活性分画１．２ｊを減圧下で３０
ｆｌｌＪ／に濃縮し凍結乾燥すると、粉末１．２３１が
得られた。得られた粉末１２３　ｆをｐＨ４，０の塩酸
水に溶解し、水で充填したポリアミド（クエルム社製）
５６１１に吸着させ、水４００ｆｆｉ／とメタノール１
，２１を用いてグラジェント浴出により１分画２０ｍｚ
でフラクション８０まで溶出した・次いで、クラクショ
ン３０から６０までを集め、減圧下でメタノールを留去
し、次いで凍結乾燥するとクロロポリスボリンクおよび
Ｏを含む白色粉末７３８１１Ｉ９が得られた＠ Ａ培地 グルコース　　　　　　　　　３　％ 生イースト　　　　　　　　　　　１　　チ大豆粉　　
　　　　　　　　３　％ 炭酸カルシウム　　　　　　０．４　　％硫酸マグネシ
ウム　　　　　　０．２　　％。

ニラサンａｎ−４４ｚ（消泡剤）　　　　０．０１チ（
ｐＨｒ、ｏ） Ｂ培地 グルコース　　　　　　　　　５　チ イーストエキス　　　　　　０．１　　チ大豆粉　　　
　　　　　　　１　％ ポリペプトン　　　　　　　０，４　　％牛肉エキス　
　　　　　　　　０４　　チ塩化ナトリウム　　　　　
　０．２５％炭酸カルシウム　　　　　　０，５　　％
ニラサン０Ｂ−４４２（消泡剤）　　　　０．０１チ（
ｐＨ７，２） このようにして得られたクロロポリスボリンＢおよびＣ
を含む白色粉末４．４２を８０ｆｆｌ／のアセトニトリ
ル：緩衝液（０，２％へブタルスルホ／酸ナトリウム、
２．５チ酢酸及び０．５％濃アンモニア水を含む）−１
ｓ：ａｓよりなる混合溶媒に溶解し、システム５００（
ウオーターズ社製）のブレツブパックＣ１８カートリッ
ジに吸着させ、同混合溶媒系で１００〜１５０ｆｎｌ／
分の流速で展開溶出するとクロロポリスボリンＢは溶出
液量ａｏｏｍｚから１７００ｍ／の間に、クロロポリス
ボリン０は溶出液量１１ｏｏｍｔから４１００ｍｚの間
にそれぞれ溶出された。前者の活性分画を集めｐＨを１
．０に調整後減圧下濃縮し、アセトニトリルを留去した
。この濃縮液を、ダイヤイオンＨＰ　２０のカラム（ｔ
ｏｏｍｇに吸着させ、水で洗浄後、ＴＯチアセトン水ｓ
ｏａｍｚにて溶出した０溶出液を減圧下で濃縮し、凍結
乾燥することによシ、粉末としてクロロポリスボリンＢ
のへブタンスルホン酸塩を得た。この粉末２００１ｉｐ
を５１１１１の水に溶解し、１０％ドデシル硫酸ナトリ
ウム水溶液を滴下し、生ずる沈澱を３００Ｏｒｐｍで１
０分間遠心分離し回収した。更にこの沈澱を水に懸濁し
、同様に遠心分離を行なって沈澱を洗浄した。

この操作を更に３回くシ返して、沈澱を洗浄後、３ｆｆ
ｔ／のメタノールに溶解した。不溶物を濾過し、そのＦ
液に０．５　Ｍ　）リエチルアミン硫酸塩のメタノール
溶液を滴下し、生ずる沈澱を３００Ｏｒｐｍで１０分の
遠心分離によシ、回収した。この沈澱を新たに少量のメ
タノールに＠濁し、同様の遠心分離によって沈澱を得た
。この操作を更に３回くりかえしたのち、得られた沈澱
を水１．５ｆＦＩｌに溶解し、不溶物を除去後、凍結乾
燥することによりクロロポリスボリンＢ硫酸塩６５ｍ９
が得られた。

一方、後者の活性分画は、これを集めｐＨを乙０に調整
後、減圧上濃縮しアセトニトリルを醒去した。この濃縮
液をダイヤイオンＨＰ２Ｑのカラム（５ｏｍ／）に吸着
させ、水で洗浄後、７０％アセトン水３０Ｏｆｆ＋／に
て溶出した。溶出液を減圧上濃縮し凍結乾燥することに
より、クロロポリスボリンＣのへブタンスルホン酸塩を
含む粉末１、Ｏｆが得られた。この粉末を１０１ｎｌの
前述のシステム５００で使用した混合溶媒系に溶解し、
１回当り１ｔｎｌずつローバーカラムＲＰ−１１１（Ｂ
サイズ、メルク社製）に吸着させ、前述のシステムＳＯ
Ｏで使用した混合溶媒系で１３ｆＦ１１！／分の流速で
展開溶出すると、混在するクロロポリスポリ／Ｂが１８
分から２０分に溶出され、クロロポリスボリンＣが３０
分から４０分の間に溶出された。この操作を５回くシか
えし、クロロポリスポリンＣ分画を集め、ｐＨを５．８
に調整後減圧上濃縮した。４ｏｍｚのダイヤイオンＨＰ
２０に吸着させ、水洗後２００ｍ１の５０チアセトン水
で溶出した。溶出液を減圧下濃縮後、凍結乾燥し、２５
０　ｒｎ９のクロロポリスボリンＣの粗粉末を得た。

この粉末を５ｍ／の５０チメタノール水に溶解し、あら
かじめ５０％メタノール水で平衡化したトヨパールＨＷ
４ＯＦ　（東洋ｉ違工業■製）ｔ５０ｆｆｉ／のカラム
に吸着させ、同溶媒系で流速０．６ｆｎ１７Ｊで展開溶
出し、溶出液を２．５ｆｒＩｔずつ分画していくと、フ
ラクション４５１から６４までにクロロポリスボリンＣ
のへブタンスルホン酸塩が溶出された。このものの硫酸
塩を得るために更に以下の如き操作を行なった。すなわ
ち、トヨパールカラムの溶出液を減圧上濃縮し、１０％
ドデシル硫酸す）　ＩＪウム水溶液を滴下し、生ずる沈
澱を３００Ｏｒｐｍで１０分の遠心分離により回収した
。更にこの沈澱を水に懸濁し、同様に遠心分離を行なっ
て沈澱を洗浄した。この操作を更に３回くシかえして沈
澱を洗浄後、３１ｎｌのメタノールに溶解した。不溶物
を戸遇した後、ｐ液に０．５　Ｍ　トリエチルアミン硫
酸塩のメタノール溶液を滴下し、生ずる沈澱を３０００
ｒｐｍで１０分の遠心分離により回収し、更にメタノー
ルに懸濁し、遠心分離によって上清を除き洗浄した。

この操作を３回くりかえし、得られた沈澱を水ｔ５ｍ／
に＃解し、不溶物を除去後、凍結乾燥することによりク
ロロポリスボリンＣ硫酸塩５４〜が得られた。

実施例２゜ ミクロポリスボラ・エスピー８ＡＮＫ　６０９ｇ３　　
株を実施例１のＡ培地ａｏｍｔを含む５００ｆｆ＋／容
三角フラスコに一白金耳接種し、２２０　ｒｐｍの回転
振盪培養機により２８℃で１２時間培養した。この培養
液２５ｆ７？／をＢ培地５００ｍ／を含む２／容三角フ
ラスコ６本に接種し２４時間培養後、更にこの培養液全
量を同培地６０１！を含む１００１容タンクに接種し２
４時間培養した。この種培養５１５１ずつを３００ｔの
同培地を含む６００１容タンク２基にそれぞれ接種し、
通気量３００／／分、内圧１．０　ｋｇ／ａｎ２、Ｄ、
０．３〜５　ｐｐｍ、　６７時間で通気撹拌培養を行な
った。この培養液に濾過助剤として上２イト５４５を加
えてＰ遇すると、涙液５５０／が得られた。このＦ液を
ダイヤイオンＨＰ２０カラム（６０／）に通しクロロポ
リスボリンＢを吸着させ、水洗し、５０％アセトン水で
溶出した。得られた活性分画５ＴＯ／を減圧下アセトン
を留去し酋縮液２８０１を得た◎この濃縮液を２００７
のｎ−ブタノールで２回抽出し、不純物を除去後、減圧
下で水層を５ｔまで濃縮した・この濃縮液のｐＨを１Ｎ
　ＮａＯＨでｐＨ５，８に調整後、４．２２のポリアミ
ドカラム（ウエルム社製）に吸着させ水で展開溶出した
。通過液をすて溶出液を１ｊずつ分画するとクロロポリ
スボリンＢは分画３から９に溶出された。活性分画ＴＩ
をＩＨＯ／にてｐＨを４．０に調整後、減圧下で濃縮し
凍結乾燥することによりクロロポリスボリンＢ塩酸塩４
２１が得られた〇 次に製剤例を示す。

製剤例１．　経口用カプセル剤 クロロポリスボリンＢ　　　　　１００１Ｒ９乳糖　　
　　　１００ トウモロコシ澱粉　　　　　　　１４８．５ステアリン
酸マグネククム　　　　　　１．５５０１Ｆ９ 上記処方の粉末を混合し、３０メツシユのふるいを通し
た後、この粉末３５０　タを２号ゼラチンカプセルに入
れ、カプセル剤とした。

製剤例２　経口用カプセル剤 クロロポリスボリンＣのカプセル剤については、製剤例
１のクロロポリスボリンＢの代夛にクロロポリスボリン
Ｃを用いて、同一の組成によシ製造し、カプセル剤とし
た。

【図面の簡単な説明】

第１図はクロロポリスボリンＢの紫外線吸収スペクトル
を示し、第２図は同物質の赤外線吸収スペクトルを示し
、第３図は同物質の核磁気共鳴スペクトルを示す・ 第４図はクロロポリスボリンＣの紫外線吸収スペクトル
を示し、第５図は同物質の赤外線吸収スペクトルを示し
、第６図は同物質の核磁気共鳴スペクトルを示す〇

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するクロロポリスポリンＢおよびＣｏ 但し、式中、クロロポリスポリンＢはＲ＿１がリストサ
   ミンを示し、Ｒ＿２がマンノースを示し、Ｒ＿３がグル
   コースを示し、Ｒ＿４がラムノースを示す。 クロロポリスポリンＣはＲ＿１がリストサミンを示し、
   Ｒ＿２がマンノースを示し、Ｒ＿３がグルコースを示し
   、Ｒ＿４が水素原子を示す。 ２、ミクロポリスポラ属に属するクロロポリスポリンＢ
   およびＣ生産菌を培養し、その培養液よりクロロポリス
   ポリンＢおよびＣを採取することを特徴とするクロロポ
   リスポリンＢおよびＣの製造法。 ３、ミクロポリスポラ属に属するクロロポリスポリンＢ
   およびＣ生産菌がミクロポリスポラエスピー・ＳＡＮＫ
   ６０９８３株（微工研条寄第５３８号）である特許請求
   の範囲第２項記載の製造法。 ４、クロロポリスポリンＢおよび／またはＣを有効成分
   とする抗菌剤。