KR950013857B1 - 신규 항생물질 무레이도마이신 a, b, c 및 d 그의 제조 방법 및 치료학적 용도 - Google Patents

신규 항생물질 무레이도마이신 a, b, c 및 d 그의 제조 방법 및 치료학적 용도 Download PDF

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KR950013857B1 KR1019870005014A KR870005014A KR950013857B1 KR 950013857 B1 KR950013857 B1 KR 950013857B1 KR 1019870005014 A KR1019870005014 A KR 1019870005014A KR 870005014 A KR870005014 A KR 870005014A KR 950013857 B1 KR950013857 B1 KR 950013857B1
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다께시 기노시따
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가와무라 요시부미
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Abstract

내용 없음.

Description

신규 항생물질 무레이도마이신 A, B, C 및 D 그의 제조 방법 및 치료학적 용도
제 1 도는 무레이도마이신 A의 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
제 2 도는 무레이도마이신 A의 적외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
제 3 도는 무레이도마이신 A의 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸다.
제 4 도는 무레이도마이신 C의 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
제 5 도는 무레이도마이신 C의 적외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
제 6 도는 무레이도마이신 C의 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸다.
제 7 도는 무레이도마이신 B의 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
제 8 도는 무레이도마이신 B의 적외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
제 9 도는 무레이도마이신 B의 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸다.
제10도는 무레이도마이신 D의 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
제11도는 무레이도마이신 D의 적외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다. 및
제12도는 무레이도마이신 D의 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸다.
본 발명은 "무레이도마이신(mureidomycins) A, B, C 및 D"로 명명한 특정한 신규 항생물질에 관한 것으로서, 이들의 제조방법 및 이들중 최소한 1종을 활성 성분으로 함유하는 항균 조성물도 또한 제공한다.
종래의 항생물질들에 대해 일반적인 병원성 세균 균주들의 내성이 증대되고 있는 상황하에서, 이들 세균들에 대항하여 항균활성을 나타낼 광범위한 각종 항생물질들의 개발이 보다 더 필요시되어 왔다. 상술한 필요성이 때때로 현존하는 항생물질의 일부를 화학적으로 변형시킴으로써 만족될 수도 있으나, 완전히 새로운 종류의 항생물질의 개발은 병원균에 의해 유발되는 질병의 치료에 있어서 놀라운 가능성을 유도한다.
최근에 본 발명자들은 균주 SANK 60486이라 명명한, 새로이 분리한 미생물에 의해 생성되는 발효배지로부터 새로운 종류의 항생물질을 개발하여 "무레이도마이신"이라 명명 하였는 바, 이들은 4종으로 분리되어 "무레이도마이신 A, B, C 및 D"로 명명하였다. 상기 미생물은 토양으로부터 분리되었으며 스트렙토마이세스(Streptomyces) 종에 속하는 균주로 확인되었다. 본 발명자들은 이들 신규 항생물질이 그람-음성균, 각별하게는 슈도모나스(Pseudomonas) 속에 속하는 균주들에 대하여 특히 유효하다는 것을 알아냈다.
따라서, 본 발명의 목적은, 새로운 조성물 형태로서의 유용한 항균 활성을 갖는 특정한 신규 화합물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 화합물들중 최소한 1종을 활성성분으로 함유하는 약학 조성물 및 상기 화합물들중 최소한 1종을 활성성분으로 이용한 세균 감염질환의 치료 또는 예방 방법을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른 신규 화합물들의 구조식이 아직 완전히 밝혀지지 않고 있으므로, 이들 본 발명 화합물들을 이하에 기재하는 그들의 물리-화학적 특성들로 분류 및 정의하고자 한다.
[무레이도마이신 A의 물리-화학적 특성]
1) 특성 및 외관 : 양성, 수용성, 백색 분말 ;
2) 고유 광회전도 :
Figure kpo00002
=+40.9°(C=0.69,50% v/v 수성 메탄올) ;
3) 원소 분석 :
C : 49.73% ; H, 5.65% ; N : 12.0% ; S, 3.40% ;
수화물로서의 측정
4) 분자량 : 840(고분해질량 스펙트럼), FAB MS : 841,31798(QM+)
(FAB MS : Fast Atom Bombardment Mass Spectroscopy) ;
5) 분자식 : C38H48N8O12S1;
6) 산 가수분해 생성물 : 우라실, m-티로신, 2-아미노-3-N-메틸아미노부티르산 ;
7) 자외선 흡수 스펙트럼 : λmaxnm(
Figure kpo00003
260nm(348)/중성수 ; 258nm(358)/0.01N 수성 HCl : 240nm(499), 265nm(330쇼울더) 및 295nm(78, 쇼울더)/0.01N 수성 NaOH : 스펙트럼은 첨부하는 도면 제1a 및 1b도내에 나타낸다.
8) 적외선 흡수 스펙트럼(KBr) υmaxcm-1KBr 디스크내에서 측정한 스펙트럼을 첨부하는 도면 제 2 도내에 나타낸다 ;
9) 핵자기 공명 스펙트럼, δppm : 외부 표준으로서 TMS(테트라매틸실란)를 사용하여 디메틸 술폭시드내에서 스펙트럼(400MHz)을 측정하였으며, 그 결과를 첨부하는 도면 제 3 도에 나타낸다 ;
10) 용해성 : 물 및 메탄올에 용해되고, 아세톤에 약간 용해되며 및 에틸 아세테이트, 클로로포름 및 벤젠에 용해되지 않음.
11) 정색 반응 : 닌히드린, 황산, 요오드, 염화제이철 및 바이어반응에 대하여 양성을 나타냄 ;
12) 얇은막 크로마토그래피 :
Rf 값 : 0.36
흡착제 : 실리카겔 플레이트(머어크, 키젤겔(Kiselgel) 60F254) ;
전기용매 : 부탄올, 프로판올 및 물의 4 : 2 : 1 부피비 혼합물 ;
13) 고속 액체 크로마토그래피 ;
컬럼 : 아쿠아실(Aquasil) SS 372N(센슈 가가꾸사 제)
전기용매 : 클로로포름, 이소프로판올, 메탄올 및 물의 200 : 100 : 100 : 40 부피비 혼합물.
유동율 : 1ml/분
보지시간 : 3.92분
[무레이도마이신 B의 물리-화학적 특성]
1) 특성 및 외관 : 양성, 수용성, 백색 분말 ;
2) 고유 광회전도 : [α]25 D=-70°(C=0.3,50%v/v 수성 메탄올) ;
3) 원소 분석 :
C, 50.67% ; H, 6.36% ; N, 12.62% ; S, 3.13%
수화물로서 측정 ;
4) 분자량 : 842(고분해질량 스펙트럼),
FAB MS : 843. 33289(QM+)
5) 분자식 : C38H50N8O12S1;
6) 산 가수분해 생성물 :
디히드로우라실, m-티로신, 2-아미노-3-N-메틸아미노-부티르산 ;
7) 자외선 흡수 스펙트럼 : λmaxnm(
Figure kpo00004
255nm(194)/중성수 : 255nm(186)/0.1N 수성 HCl ; 245nm(325) 및 295nm(85,쇼울더)/0.1N 수성 NaOH ; 스펙트럼은 첨부하는 도면 제 7 도에 나타난다.
8) 적외선 흡수 스펙트럼(KBr), υmaxcm-1:
KBr 디스크내에서 측정한 스펙트럼을 첨부하는 도면 제 8 도에 나타낸다.
9) 핵자기 공명 스펙트럼, δppm :
외부 표준으로서 TMS를 사용하여 중수내에서 측정한 스펙트럼(270MHz)을 첨부하는 도면 제 9 도에 나타낸다.
10) 용해성 : 물 및 메탄올에 용해되고, 아세톤에 약간 용해되며 및 에틸 아세테이트, 클로로포름 및 벤젠에 용해되지 않음 ;
11) 정색 반응 : 닌히드린, 황산, 요오드, 염화제이철 및 바이어 반응에 대하여 양성을 나타냄 ;
12) 얇은막 크로마토그래피 :
Rf 값 : 0.34
흡착제 : 실리카겔 플레이트(머어크, 키젤겔 60 F254)
전개용매 : 부탄올, 프로판올 및 물의 4 : 2 : 1 부피비 혼합물.
13) 고속액체 크로마토그래피 :
컬럼 : 아쿠아실 SS 372-N(센슈 가가꾸사 제)
전개용매 : 클로로포름, 이소프로판올, 메탄올 및 물의 200 : 100 : 100 : 40부피비 혼합물
유동율 : 1ml/분
보지시간 : 3.94분
[무레이도마이신 C의 물리-화학적 특성]
1) 특성 및 외관 : 양성, 수용성, 백색 분말 ;
2) 고유 광회전도 :
Figure kpo00005
=+16.7°(C=0.57, 50%v/v 수성 메탄올) ;
3) 원소분석 :
C, 49.44% ; H, 5.50% ; N, 12.53% ;
S, 3.09%-수화물로서 측정 ;
4) 분자량 : 897(고분해질량 스펙트럼),
FAB MS : 898. 33687(QM+) ;
5) 분자식 : C40H51N9O13S1;
6) 산 가수분해 생성물 :
우라실, 글리신, m-티로신, 2-아미노-3-N-메틸아미노-부티르산 ;
7) 자외선 흡수 스펙트럼 : λmaxnm(
Figure kpo00006
258nm(292)/중성수 : 259nm(312)/0.01N 수성 HCl ; 240nm(444), 265nm(276, 쇼울더) 및 295nm(72, 쇼울더)/0.1N 수성 NaOH ; 스펙트럼은 첨부하는 도면 제4a 및 4b도에 나타난다 ;
8) 적외선 흡수 스펙트럼(KBr) υmaxcm-1:
KBr 디스크내에서 측정한 스펙트럼을 첨부하는 도면 제 5 도에 나타낸다.
9) 핵자기 공명 스펙트럼, δppm :
TMS를 외부표준으로 사용하여 중수내에서 측정한 스펙트럼(270MHz)을 첨부하는 도면 제 6 도에 나타낸다.
10) 용해성 : 물 및 메탄올 : 가용성, 아세톤 : 난용성 에틸아세테이트, 클로로포름 및 벤젠 : 불용성
11) 정색 반응 : 닌히드린, 황산, 요오드, 염화제이철 및 바이어 반응에 대하여 양성을 나타냄.
12) 얇은막 크로마토그래피 :
Rf 값 : 0.29
흡착제 : 실리카겔 플레이트(머어크, 키젤겔 60 F254)
전개용매 : 부탄올, 프로판올 및 물의 4 : 2 : 1 부피비 혼합물.
13) 고속액체 크로마토그래피 :
컬럼 : 아쿠아실 SS 372-N(센슈 가가꾸사 제)
전개용매 : 클로로포름, 이소프로판올, 메탄올 및 물의 200 : 100 : 100 : 40부피비 혼합물
유동율 : 1ml/분
보지시간 : 6.29분
[무레이도마이신 D의 물리-화학적 특성]
1) 특성 및 외관 : 양성, 수용성, 백색분말 ;
2) 고유 광회전도 :
Figure kpo00007
=-30°(C=0.52,50%v/v 수성 메탄올) ;
3) 원소 분석 :
C, 48.79% ; H, 5.86% ; N, 12.42% ;
S, 3.26%-수화물로서 측정 ;
4) 분자량 : 899(고분해질량 스펙트럼),
FAB MS : 900. 35617(QM+)
5) 분자식 : C40H53N9O13S1;
6) 산 가수분해 생성물 :
디히드로우라실, 글리신, m-티로신, 2-아미노-3-N-메틸아미노-아미노부티르산 ;
7) 자외선 흡수 스펙트럼 : λmaxnm(
Figure kpo00008
255nm(191)/중성수 : 255nm(184)/0.1N 수성 HCl ; 245nm(346) 및 295nm(90,쇼울더)/0.1N 수성 NaOH ; 스펙트럼은 첨부하는 도면 제10도에 나타난다.
8) 적외선 흡수 스펙트럼(KBr), υmaxcm-1:
KBr 디스크내에서 측정한 스펙트럼을 첨부하는 도면 제11도에 나타낸다.
9) 핵자기 공명 스펙트럼, δppm :
TMS를 외부표준으로 사용하여 중수내에서 측정한 스펙트럼(270MHz)을 첨부하는 도면 제12도에 나타낸다.
10) 용해성 : 물 및 메탄올 : 가용성, 아세톤 : 난용성, 에틸아세테이트, 클로로포름 및 벤젠 : 불용성
11) 정색 반응 : 닌히드린, 황산, 요오드, 염화제이철 및 바이어 반응에 대하여 양성을 나타냄 ;
12) 얇은막 크로마토그래피 :
Rf 값 : 0.26
흡착제 : 실리카겔 플레이트(머어크, 키젤겔 60 F254)
전개용매 : 부탄올, 프로판올 및 물의 4 : 2 : 1 부피비 혼합물.
13) 고속액체 크로마토그래피 :
컬럼 : 아쿠아실 SS 372-N(센슈 가가꾸사 제)
전개용매 : 클로로포름, 이소프로판올, 메탄올 및 물의 200 : 100 : 100 : 40부피비 혼합물
유동율 : 1ml/분
보지시간 : 7.24분
본 발명은 약학적으로 수용 가능한 상기 화합물들의 염 및 에스테르도 또한 제공한다.
본 발명은 또한 스트렙토마이세스 속에 속하는 무레이도 마이신 A, B, C 또는 D 생산 미생물을 배양배지에서 배양하고, 이어서 상기 배양배지로부터 무레이도마이신 A, B, C 또는 D 또는 그들의 염을 분리한 후, 임의로 분리한 화합물을 염화, 탈염화 또는 에스테르화시킴으로써 무레이도마이신 A, B, C 또는 D 및 이들의 에스테르를 제조하는 방법도 제공한다.
나아가, 본 발명은 상술한 무레이도마이신 A, B, C 또는 D 또는 그들의 염 또는 에스테르를 약리학상 허용되는 담체 또는 희석제와 혼합한 약학 조성물도 제공한다.
또한, 본 발명은 무레이도마이신 A, B, C 또는 D 또는 이들의 염 또는 에스테르를 인체를 비롯한 동물에 투여하여 세균 감염을 치료 또는 예방하는 방법도 제공한다.
무레이도마이신 A, B, C 및 D 및 그들의 염은 본 명세서내에서 스트렙토마이세스 SP, SANK 60486으로 명명한, 스트렙토마이세스 속에 속하는 균주를 배양함으로써 수득할 수 있으며, 그들은 이하에 기재하는 균학적 성질들을 갖는다. 이들 특성들은 ISP[인터내쇼날 스트렙토마이세스 프로젝트(International Streptomyces Project)]에 따라 처방된 각종 배지 또는 "디 악티노마이세테르(The Actinomycetes)" 제 2 권에서 에스.에이.왁스만(S.A. Waksman)이 추천한 배지상에서, 별다른 지시가 없는한 모든 경우에 있어서 온도 28℃에서 배양하여 측정한 것들이다.
1. 형태적 특성
일반적으로, 한천배지상에서 미생물가지의 기저 균사는 잘 성장하고, 미생물 가지의 기중균사는 단순하다.
포자사슬은 직선내지 곡선을 형성한다. 포자사슬위에 형성된 포자의 수는 10~50, 또는 보다 더 많은 것으로 밝혀졌다. 포자들은 타원형으로서, 0.5~0.8㎛×0.7~1.1㎛ 범위내의 크기이고 ; 평활한 표면을 갖는다.
기중균사의 축바퀴 가지, 균핵, 포자낭등과 같은 별다른 기관들은 관찰되지 않았다.
2. 배양특성
각종 유형의 배양 배지상에서 28℃에서 14일 동안 배양하여 이하의 표 1에 나타낸 특성들을 알아내었다.
색감의 표시는 닛뽕 시끼사이 겐뀨쇼(Nippon Shikisai Kenkyusho)에서 출판된 "가이드 투칼라 스탠다드(Guide to Color Standard)"에 기술되어 있는 칼라 팁 넘버(Color tip number)로 나타낸다.
하기표에서 사용하는 약어는 다음과 같다 :
G : 성장, AM : 기중균사, R : 역상, SP : 가용성 안료
[표 1]
Figure kpo00009
3. 생리학적 특성
균주 SANK 60486의 생리학적 특성은 이하의 표 2에 나타내는 바와 같다.
[표 2]
Figure kpo00010
* 배양배지 1 : 이스트 배아밀 한천 배지(ISP 2) :
배양배지 2 : 트립톤 이스트 추출물 배지(ISP 1) :
배양배지 3 : 팹톤 이스트 추출물 철 한천 배지(ISP 6) :
배양배지 4 : 티로신 한천 배지(ISP 6) :
프리담 고틀립(Pridham Gottlieb) 한천 배지(ISP 9)상에서 28℃에서 14일동안 배양한후, 균주 SANK 60486에 의한 탄소원의 동화특성은 이하의 표 3에서 나타내는 바와 같다.
[표 3]
Figure kpo00011
상기 표내에서 : +동화기능, -동화불가능을 나타냄.
4. 세포벽 조성
균주 SANK 60486의 세포벽을 비, 베커 등의 방법[B. Becker et al, 어플라이드 마이크로바이올로지(Applied Microbiology), 12, 421~423(1964)]에 따라 조사한 결과, 세포벽내에서 L L-디아미노피멜산 및 글리신이 검출되었다.
균주 SANK 60486의 확인은 인터내쇼날 스트렙토마이세스 프로젝트 ; 버기즈 매뉴얼 오브 디터미네이티브 박테리올로지(Bergey's Manual of Determinative Bacteriology) 8판 ; 에스.에이.왁스만이 편집한 "디악티노마이세테스" 및 기타 스트렙토마이세테스와 관련된 최근의 문헌들을 참고로 하였다.
상술한 자료들을 근거로하여, 본 균주는 스트렙토마이세스 플라비도비렌스(Streptomyces flavidovirens)의 균주로 확인되었으며, 본 명세서내에서는 스트렙토마이세스 플라비도비렌스 SANK 60486(FERM P-8636)으로 기재하기로 한다.
상기 균주 SANK 60486은 1986년 2월 4일자로 일본국 통상산업성, 공업 기술원 미생물 공업기술 연구소에 수탁번호 FERM P-8636으로 기탁되었으며, 부다페스트 협약에 규정된 조건에 따라 상기 기관에 1987년 4월 17일자고 수탁 번호 FERM BP-1347로서 재기탁되어 있다.
또한, 상기균주는 1987년 7월 28일자로 한국 과학 기술원에 KCTC 8275P의 수탁번호로 기탁되어있다.
균주 SANK 60486이 무레아도마이신 A, B, C 및 D를 생산한다는 것은 상기에서 이미 밝힌 바 있다.
그러나, 주지되어 있는 바와 같이, 방선균류(actinomycetes)의 일반적인 범주에 속하는 미생물들의 특성들이 현저히 상이할 수 있고, 또한 이들 미생물들은 자연적인 요인 및 인공적인 수단에 의한 유도 결과 둘다에 기인하여 쉽게 변이를 일으킬 수도 있다. 따라서, 본 발명의 방법은 스트렙토마이세스 속으로 분류될 수 있으며 균주 SANK 60486과 무레이도마이신 A, B, C 및 D를 생산하는 독특한 특성을 공유하는 모든 미생물의 이용을 포함한다.
본 발명 방법에서 사용하는 미생물로서는 스트렙토마이세스 플라비도비렌스 종의 균주가 바람직하고, 스트렙토마이세스 플라비도비렌스 SANK 60486(FERM P-8636)이 보다 더 바람직하다.
본 발명에 따라서, 무레이도마이신 A, B, C 및 D를 생산하기 위한 스트렙토마이세스 속의 미생물의 배양은 방선균류종의 배양시 통상적으로 이용되는 조건들하에서, 바람직하기로는 액체 배양으로, 및 알맞게는 진탕 또는 교반 및 통기 조건하에서 실시한다. 배양용 영양배지는 방선균류의 배양시 통상적으로 이용되는 성분들을 함유하는, 종래의 것들과 동일한 배지를 사용한다. 보다 상세히는, 배지는 1종 이상의 동화 가능한 탄소원, 적당한 예로는 글루코오스, 말토오스, 수크로오스, 만니콜, 몰라세, 글리세롤, 덱스트린, 전분대두오일 및 면실유 ; 1종 이상의 동화 가능한 질소원, 적당한 예로는 대두분, 땅콩가루, 면실가루, 파르마민(pharmamine), 생선가루, 옥수수 침지액, 펩톤, 고기 추출물, 생 이스트, 압착 이스트, 이스트 추출물, 질산나트륨, 질산암모늄 또는 황산암모늄 ; 및 1종 이상의 무기염류, 예를들면 염화나트륨, 인산염, 탄산칼슘 및 미량 금속염을 함유하여야 한다.
액체배지내에서 배양하고자할 경우에는, 일반적으로 소포제(예. 실리콘오일, 식물성 오일 또는 적당한 표면화성제)를 배지내에 배합하는 것이 유리하다.
배양은 실질적으로 중성 pH 값에서 20~37℃ 바람직하기로는 약 22℃의 온도에서 실시하는 것이 적당하다.
배양의 진행에 따른 무레이도마이신 A, B, C 및 D의 생산은 항생물질의 생산(미생물 배양에 의한 생산)을 측정하는 데 이용되며, 거의 또는 전혀 정교한 작업을 요구하지 않는 종래의 각종 미생물 분석기술로 측정할 수 있다.
적당한 예로는 페이퍼 디스크-한천 확산 분석법(예를들면, 도요 가가꾸 상꾜 가부시끼가이샤가 제조한 직경 약 8mm의 페이퍼 디스크 사용)을 이용하고, 시험 생물체로서는, 예를들면 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa ; 녹농균)를 사용한다.
무레이도마이신 A, B, C 및 D의 생산량은 통상적으로 72~96 시간 배양한후 최대량에 도달하므로, 상기 최대량에 도달되는 시간보다 늦지 않은때에 무레이도마이신을 배양배지로부터 분리하는 것이 절대적으로 바람직하다.
그러나, 상술한 최대량에 도달하는 시간이 배양 조건 및 기술에 따라 달라질 수도 있으므로, 환경조건에 따라서 적정하게 보다 짧거나 또는 긴 시간을 선택한다. 적정 배양시간은 알맞는 모니터 기술, 예를들면 상술한 바 있는 기술들을 이용하여 일상적인 실험에 의해 모두 경우에 있어서 쉽게 알아 낼 수 있다.
무레이도마이신 A, B, C 및 D는 주로 배양배지의 액체부분내에 방출되므로, 균사를 비롯한 고형물질을, 예를들면 여과(바람직하기로는 규조토와 같은 여과 보조제 사용) 또는 원심분리하여 제거함으로써 회수할 수 있다. 이어서, 이들을 종래의 기술들을 이용하여 분리된 액체부로부터 회수하고, 필요하다면 이어서 정제 및/또는 각각을 분리할 수 있다.
항생물질, 무레이도마이신 A, B, C 및 D는 그들의 물리화학적 특성들을 이용하여 분리, 수거 및 정제할 수 있다.
적당한 방법의 예로서는 : 용매를 이용한 추출 ; 수지, 예를들면 도웩스 SBR-P (도우화학사)와 같은 음이온 교환수지 또는 도웩스 50W(도우화학사) 또는 IRC-50, CG-50(롬 엔드 하스 캄파니)과 같은 양이온 교환수지를 이용한 이온교환 ; 흡착제로서 활성탄소를 이용한 크로마토그래피 또는 암버라이트 XAD-2, XAD-4 또는 XAD-7(롬 엔드 하스 캄파니)와 같은 비-이온계 흡착수지 또는 디아이온(Dision) HP 10, HP 20, CHP 20P 또는 HP 50(미쓰비시 케미칼 인다스트리즈, 엘티디.)을 이용하는 크로마토그래피 ; 및 실리카겔 또는 알루미나 크로마토그래피를 들 수 있다. 나아가, 대사물들의 분리, 수거 및 정제는 아비셀(Avicel), 아사히 케미칼 인다스트리 씨오., 엘리디.) 또는 세파덱스 LH-20(파마시아사)과 같은 셀룰로오스를 이용한 분별 컬럼 크로마토그래피 : 세파덱스 C10, G-25, G-50 또는 G-100(파마시아사) 또는 도요퍼얼(Toyopearl) HW-40[도요 소다 주식회사(TOYO SODA Mfg. Co., Ltd]를 이용한 겔 여과 ; 결정화법 ; 및 재결정법들중 임의의 1가지 방법 또는 여러가지 방법을, 필요하다면 임의의 순서대로 병용하거나 반복 실시하여 수행할 수 있다. 상술한 "도웩스(Dowex)", "암버라이트(Amberlite)", "디아이온", "아비셀", "세파덱스(Sephadex)" 및 "도요퍼얼"은 모두 상품명이다.
배양조건에 따라서는, 무레이도마이신 A, B, C 및 D가 배양배지의 균사내에 존재할 수도 있으므로, 이때에는 종래의 기술들을 이용하여 배양배지로부터 추출한다.
예를들면, 친수성 유기용매(예, 알코올 또는 아세톤)로 추출하고, 이어서 추출물로부터 용매를 제거하여 잔류물을 수거한후, 수성매질내에 용해시킬 수 있다. 생성된 용액으로부터 무레이도마이신을 추출하여 상술한 방법들로 정제할 수 있다.
무레이도마이신 A, B, C 및 D를 크로마토그래피를 이용하여 각각 분리하는 것이 바람직하다.
수득된 무레이도마이신 A, B, C 및 D는 상술한 물리화학적 성질들을 갖는다.
무레이도마이신 A, B, C 및 D는 특성면에 있어서 양성을 지니므로 염 및 에스테르를 형성할 수 있으며, 따라서 이들 염 및 에스테르들도 또한 본 발명의 일부를 치지한다. 이들 염 및 에스테르들의 특성은 제한되어 있지 않으나, 단의약 또는 수의약적인 목적으로 사용하고자 할 경우, 이들은 반드시 의약적으로 수용가능하여야 한다. 즉, 유리된 형태의 비염화 또는 비에스테르화 화합물과 비교하여 독성이 증가되거나 또는 활성을 전혀 또는 심각한 정도로 잃지 않아야 한다.
상술한 염의 형성용으로서 적당한 산으로는 : 염산, 황산 또는 인산과 같은 무기산 ; 아세트산, 시트르산, 타르타르산, 말론산, 말레산, 말산, 푸마르산, 이타콘산, 시트라콘산 또는 숙신 산과 같은 유기 카르복실산 ; 및 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 나프탈렌술폰산 또는 p-톨루엔술폰산과 같은 유기 술폰산을 예로 들 수 있다.
적당한 에스테르의 예로서는 : C1-C6, 보다 바람직한 하기로는 C1-C4알킬 에스테르, 예를들면 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, t-부틸, 펜틸 및 헥실 에스테르 ; 벤질, P-니트로벤질 및 벤즈히드릴 에스테르와 같은 아르알킬 및 디아릴알킬 에스테르 ; 알콕시 및 알킬잔기가 모두 C1-C4인 알콕시카르보닐알킬 에스테르, 특히 알콕시카르보닐메틸 에스테르로서, 예를들면 에톡시카르보닐메틸 및 t-부톡시카르보닐메틸 에스테르 ; 알콕시 및 알킬잔기가 둘다 C1-C4인 알콕시카르보닐옥시알킬 에스테르, 특히 2-(알콕시카르보닐옥시) 에틸 에스테르, 예를들면 2-메톡시카르보닐옥시에틸, 2-에톡시카르보닐옥시에틸 및 2-t-부톡시카르보닐옥시에틸 에스테르 ; 및 기타 다른 특이한 에스테르로서 예를들면 프탈리딜, 치환된 프탈리딜, 펜아실, 치환된 펜아실(예. P-니트로펜아실) 및 (5-메틸-2-옥소-1, 3-디옥솔렌-4-일) 메틸 에스테르를 들 수 있다.
카르복시기는 알맞은 염기들과 염을 형성할 수도 있다.
상기염의 특성도 또한 마찬가지로 제한되어 있지는 않으나, 단 치료목적으로 사용하고자 할 경우에는, 약리학적으로 수용가능한 염이어야 한다. 이들 염기와의 염으로서는 금속, 특히 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘염과 같은 알칼리 금속 및 알칼리 토금속과의 염 ; 암모늄염 ; 시클로헥실아민, 디이소프로필아민 또는 트리메틸아민과 같은 유기아민과의 염 ; 및 리신 또는 아르기닌과 같은 염기성 아미노산과의 염을 예로 들수 있다.
무레이도마이신 A, B, C 및 D가 염의 형태로 분리될 경우, 이들 염은 종래의 방법, 예를들면 이온-교환수지 또는 흡착제를 이용한 역상 크로마토그래피를 실시하여 유리된 형태의 비염화 화합물로 전환시킬 수 있다.
마찬가지로, 유리된 형태의 비염화 화합물을 종래의 기술들을 이용하여 염화시킬 수 있다. 에스테르는 종래의 에스테르화 공정을 이용하여 제조할 수 있다.
각종 그림-양성 및 그림-음성군에 대한 무레이도마이신 A, B, C 및 D의 최소억제 농도(MIC)를 필러-힌톤 한천배지(디프코 제조)를 사용하여 2-배 한천 희석법으로 측정하였다. 결과는 이하의 표 4에 나타내는 바와 같다.
[표 4]
Figure kpo00012
상기 데이타로부터, 무레이도마이신 A, B, C 및 D가 그람-음성균, 특히 슈도모나스 속에 속하는 균들에 대하여 활성을 갖는다는 것을 알 수 있다.
루에이도마이신 A, B, C 및 D 400mg/ml을 생쥐에게 정맥내 투여하였을때 독성은 전혀 관찰되지 않았다.
상술한 자료들로부터 무레이도마이신 A, B, C 및 D가 세균 감염으로 인한 각종 질환의 항생물질로서 유용하다는 것을 알 수 있다. 투여 경로는 광범위하게 다양하여 비경구(에.피하, 정맥내 또는 근육내 주사좌제) 또는 경구(정제, 캡슐, 분말 또는 과립의 형태로 투여가능함) 투여할 수 있다. 투여량은 물론 치료하고자하는 질병의 특성, 환자의 연령, 상태 및 체중 및 투여 경로 및 시간에 따라 다르기는 하나 ; 성인환자인 경우에 있어서, 1일 투여량으로서 0.1~10g이 바람직하며 상기 투여량을 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다.
이하에는 실시예들을 기술하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다.
[실시예 1]
[활성 대사물의 제조]
스트렙토마이세스 플라비도비렌스 SANK 60486 1백금이를 이하에 나타내는 조성(백분율은 중량을 기준으로한 값임)을 갖는 배지 A 80ml를 함유하는 500ml 삼각플라스크내에 접종한다.
배지 A
글르코오스 3%
압착이스트 1%
대두분 3%
탄산칼슘 0.4%
황산마그네슘 7수화물 0.2%
소포제
[닛산디스포옴(Nissans Disfoam)CB-442] 0.01%
물 균형치
(멸균전 pH7.2)
이어서 220r.p.m의 회전식 진탕기를 이용하여 미생물을 22℃에서 84시간 동안 배양한다.
생성된 종배양물 25ml를 상술한 조성을 갖는 배지 A 각각 500ml를 함유하는 4개의 2-l 삼각플라스크에 각각 접종한다. 이어서 220r.p.m의 회전식 진탕기를 이용하여 22℃에서 24시간동안 미생물을 배양한다.
생성된 배양 배지들을 합한다. 이어서 상기 배지 750ml를 배지 A 15l를 함유하는 30l 용량의 발효기 2개에 각각 접종하고, 통기율 15l/분하에서 150r.p.m으로 교반하며 22℃에서 96시간동안 미생물을 배양한다.
상기 시간 경과후, 상술한 바와같이 분리하여 배양한 배양배지의 배치들을 합하여 총 30l의 배양배지가 수득되었다.
상기 배양배지에 셀라이트(Celite) 545[존즈-만빌레 프로덕츠 코오퍼레이손(Johns-Manville Products Corp. 뉴저어지, 미합중국)제품의 등록상표] 여과보조제를 첨가하고, 혼하물을 여과하여 여액 30l가 수거되었다. 상기 여액을 크로마토그래피 컬럼내의 암버라이트 XAD-2(3l)에 흡착시킨다. 컬럼을 정제수 15l 및 이어서 15% v/v 메탄올을 함유하는 물 12l로 번갈아 세정한후, 40%v/v메탄올을 함유하는 물 15l로 용출시킨다. 이어서 활성성분을 함유하는 분획들을 감압하게 증류하여 그로부터 메탄올을 제거한 후, 잔류용액을 동결건조시킨 결과 조생성물 17.4g이 분말로 수득되었다.
상기 조 분말 17g을 정제수 3l에 용해시키고, 용액을 암버라이트 CG-50(H+) 800ml를 함유하는 컬럼에 통과시켜 활성성분을 흡착시킨다. 0.5M 암모니아수를 사용하여 상기 컬럼으로부터 활성 성분을 용출시킨다. 용출된 활성 분획들(3.5l)을 수거한 후, 감압에 증발시켜 1.0l의 부피로 농축시킨다. 농축물(1.0l)을 0.1M 중탄산암모늄 수용액으로 미리-평형시킨 400ml의 DE-52이온 교환기[와트단자(Whatman Ltd.)]에 통과시켜 활성성분을 컬럼에 흡착시킨다. 상기 컬럼을 0.2M 중탄산암모늄수로 용출시킨다. 활성성분을 함유하는 분획들(800ml)을 수거하여 디아이온(Diaion)HP 20[미쓰비시 케미칼 인다스트리즈, 엘티디.(Mitsubishi Chemical Industries, Ltd.)]
20ml를 함유하는 컬럼에 흡착시킨 후, 상기 컬럼을 50% v/v 수성 아세톤 500ml로 용출시켜 활성성분을 수거하였다. 활성성분을 함유하는 분획들을 감압하에 증발시켜 농축시키고, 이어서 동결건조시킨 결과 무레이도마이신 A, B, C 및 D를 함유하는 조 분말상 생성물 1.6g이 수득되었다.
상기 조 분말 1.5g을 정제수 200ml에 용해시키고, 0.05M 중탄산암모늄수로 미리-평형시킨 DE-52 500ml를 함유하는 컬럼에 활성성분을 흡착시킨다. 컬럼 0.05M 중탄산암모늄수로 세정하고, 이어서 0.1M 중탄산암모늄수로 용출시켜 각각 20ml의 용출액을 함유하는 분획들을 수거하였다.
[실시예 2]
[무레이도마이신 A 및 C의 분리]
실시예 1의 말단부에 기술한 바와같이 분별한 분획 제80~130호를 디아이온 HP 20 컬럼에 흡착시켜 탈염화시킨다.
탈염화된 용출액을 감압하에 증발시켜 농축시키고, 잔류물을 동결건조시켜 무레이도마이신 A 및 C를 함유하는, 부분 정제된 생성물 309mg이 분말로 수득되었다. 상기 부분 정제된 분말 300mg을 실리카겔 (100g) 컬럼 크로마토그래피에 부하고, 부탄올, 프로판올 및 물의 8 : 4 : 1 부피비 혼합물로 용출시켜 용출액 각각 20ml씩을 함유하는 분획들을 수거하였다. 크로마토그램에는 2종의 활성 성분의 존재에 기인하는 2개의 피이크가 나타났다.
분획 제13~36호를 수거하여 물과 혼합하고, 이어서 감압하에 증발시켜 농축시킨 후, 동결건조시킨 결과 조무레이도마이신 A 33mg이 분말로 수득되었다.
유사한 방법으로, 분획 제56~75호로부터 조무레이도마이신 A 66mg이 분리되었다.
[실시예 3]
[무레이도마이신 A의 제조 및 정제]
조 무레이도마이신 A 30mg(실시예 2에서 제조)을 30% v/v 수성 메탄올에 용해시킨 용액을 도요퍼얼 HW-40 1000ml를 함유하는 컬럼에 흡착시키고, 상기 컬럼을 30% v/v 수성 메탄올로 용출시켜 각각 10ml의 용출액을 함유하는 분획들을 수거하였다. 분획 제50~70호를 활성 성분으로 수거하여, 이들을 암버라이트 CG50(H+형) 10ml를 함유하는 컬럼에 흡착시키고, 이어서 0.5M 암모니아수로 용출시킨다.
활성성분을 함유하는 분획들을 수거하여 감압하에 증발시켜 농축시키고, 이어서 동결건조시킨 결과 상술한 특성들을 갖는 무레이도마이신 A 24mg이 수득되었다.
[실시예 4]
[무레이도마이신 C의 제조 및 정제]
조 무레이도마이신 C 60mg(실시예 2에서 제조)을 30% v/v 수성 메탄올에 용해시킨 용액을 도요퍼얼 HW-40 1000ml를 함유하는 컬럼에 흡착시키고, 상기 컬럼을 30% v/v 수성 메탄올로 용출시켜 각각 10ml의 용출액을 함유하는 분획들을 수거한다. 분획 제65~85호를 활성 성분으로 수거하여 이들을 암버라이트 CG50(H+형) 10ml를 함유하는 컬럼에 흡착시키고, 이어서 0.5M 암모니아수로 용출시킨다.
활성 분획들을 수거하여 감압하에 증발시켜 농축시키고, 이어서 동결건조시킨 결과 상술한 특성들을 갖는 무레이도마이신 C 49mg이 수득되었다.
[실시예 5]
[무레이도마이신 B 및 D의 분리]
실시예 1의 말단부에 기술한 바와 같이 분별한 분획 제25~60호를 수거하여 디아이온 HP20 컬럼에 흡착시켜 탈염화시킨다. 탈염화된 용출액을 감압하에 증발시켜 농축시키고, 잔류물을 동결건조시켜 무레이도마이신 B 및 D를 함유하는 부분 정제된 생성물 510mg이 분말로 수득되었다.
상기 부분 정제된 분말 500mg을 실리카겔(100g) 컬럼 크로마토그래피에 부하고, 부탄올, 프로판올 및 물의 8 : 4 : 1 부피비 혼합물로 용출시켜 각각 20ml의 용출액을 함유하는 분획들을 수거한다. 크로마토그램에는 2종의 활성 성분의 존재에 기인하는 2개의 피이크가 나타났다. 분획 제37~55호를 수거하여 물과 혼합하고, 이어서 감압증발시켜 농축시킨 후, 동결건조시킨 결과 조 무레이도마이신 B 74mg이 분말로 수득되었다. 유사한 방법으로, 분획 제76~110호로 부터 조 무레이도마이신 D 67.5mg이 분리되었다.
[실시예 6]
[무레이도마이신 B의 제조 및 정제]
조 무레이도마이신 B 70mg(실시예 5에서 제조)을 30% v/v 수성 메탄올에 용해시킨 용액을 도요퍼얼 HW-40 1000ml를 함유하는 컬럼에 흡착시키고, 상기 컬럼을 30% v/v수성 메탄올로 용출시켜 각각 10ml의 용출액을 함유하는 분획들을 수거한다. 분획 제55~제75호를 활성 성분으로 수거하여, 이들을 암버라이트 CG50(H+형) 10ml를 함유하는 컬럼에 흡착시키고 0.5M 암모니아수로 용출시킨다. 활성 성분을 함유하는 분획들을 수거하여 감압하에 증발시켜 농축시키고, 이어서 동결건조시킨 결과 상술한 특성들을 갖는 무레이도마이신 B 45mg이 수득되었다.
[실시예 7]
[무레이도마이신 D의 제조 및 정제]
조 무레이도마이신 D 65mg(실시예 5에서 제조)을 30% v/v 수성 메탄올에 용해시킨 용액을 도요퍼얼 HW-40 1000ml를 함유하는 컬럼에 흡착시키고, 상기 컬럼을 30% v/v 수성 메탄올로 용출시켜 각각 10ml의 용출액을 함유하는 분획들을 수거한다. 분획 제65~제85호를 활성 성분으로 수거하여 이들을 암버라이트 CG50(H+형) 10ml를 함유하는 컬럼에 이들을 흡착시키고, 이어서 0.5M 암모니아수로 용출시킨다. 분획들을 수거하여 감압하에 증발시켜 농축시키고, 이어서 동결건조시킨 결과 상술한 특성들을 갖는 무레이도마이신 D 40mg이 수득되었다.
[실시예 8]
[경구 투여용 캡슐]
하기 분말들 :
무레도마이신 A 100mg
락토오스 100mg
옥수수 전분 148.5mg
스테아린산 마그네슘 1.5mg
350mg
을 혼합한 후, 30-메쉬 시이브[타일러(Tyler)표준]에 거른다. 혼합물(350mg)을 젤라틴 캡슐 2호에 봉입함으로써 목적하는 캡슐이 수득되었다.
[실시예 9]
[경구 투여용 캡슐]
하기분말들 :
Figure kpo00013
을 혼합한 후, 30-메쉬 시이브(타일러 표준)에 거른다.
혼합물(350mg)을 젤라틴 캡슐 2호 내에 봉입함으로써 목적하는 캡슐이 수득되었다.
[실시예 10]
[주사제]
무레이도마이신 A 1.0g을 1/15M 인산염 완충용액 5.0ml에 용해시키고, 상기 용액을 5ml 앰푸울내에 봉입한다.
앰푸울을 통상적인 방법으로 멸균시킴으로써 목적하는 주사액이 수득되었다.
[실시예 11]
[주사제]
무레도마이신 C 1.0g을 1/15M 인산염 완충용액 5.0ml에 용해시키고, 상기 용액을 5ml 앰푸울내에 봉입한다. 앰푸울을 통상적인 방법으로 멸균시킴으로써 목적하는 주사액이 수득되었다.
[실시예 12]
[경구투여용 캡슐]
하기 분말들 :
무레이도마이신 B 100mg
락토오스 100mg
옥수수전분 148.5mg
스테아린산 마그네슘 1.5mg
350mg
을 혼합하여 30-메쉬 시이브(타일러 표준)에 거른다.
이어서, 혼합물(350mg)을 젤라틴 캡슐 2호 내에 봉입함으로써 목적하는 캡슐이 수득되었다.
[실시예 13]
[경구 투여용 캡슐]
하기 분말들 :
Figure kpo00014
을 혼합하여 30-메쉬 시이브(타일러 표준)에 거른다. 이어서, 혼합물(350mg)을 젤라틴 캡슐 2호내에 봉입함으로써 목적하는 캡슐이 수득되었다.
[실시예 14]
[주사제]
무레이도마이신 B 1.0g을 1/15M 인산염 완충용액 5.0ml에 용새키고, 상기 용액을 5ml 앰푸울내에 봉입한다. 앰푸울을 통상적인 방법으로 멸균시킴으로써 목적하는 주사액이 수득되었다.
[실시예 15]
[주사제]
무레이도마이신 D 1.0g을 1/15M 인산염 완충용액 5.0ml에 용해시키고, 상기 용액을 5ml 앰푸울내에 봉입한다. 앰푸울을 통상적인 방법으로 멸균시킴으로써 목적하는 주사액이 수득되었다.

Claims (13)

  1. 하기 물리-화학적 성질들을 가짐을 특징으로 하는 무레이도마이신 A, B, C 또는 D를 생산하는 스트렙토마이세스(Streptomyces)속의 미생물을 배양 배지에서 배양하고, 배양 배지로부터 무레이도마이신 A, B, C 또는 D 또는 그의 염을 분리하고, 이어서 필요하다면 분리된 화합물을 염화, 탈염화 또는 에스테르화 시킴을 특징으로 하는 무레이도마이신 A, B, C 또는 D의 제조방법 :
    [1] 무레이도마이신 A
    1) 특성 및 외관 : 양성, 수용성, 백색 분말 ;
    2) 고유 광회전도 :
    Figure kpo00015
    =+40.0°(C=0.69, 50% v/v 수성 메탄올) ;
    3) 원소 분석 :
    C, 49.73% ; H, 5.65% ; N, 12.08% ; S, 3.40%-수화물로서 측정 ;
    4) 분자량 : 840(고분해 질량 스펙트럼), FAB MS : 841.31798(QM+)
    (FAB MS : Fast Atom Bombardment Mass Spectroscopy) ;
    5) 분자식 : C38H48N8O12S1;
    6) 산 가수분해 생성물 :
    우라실, m-티로신, 2-아미노-3-N-메틸아미노부티르산 ;
    7) 자외선 흡수 스펙트럼 : λmax nm
    Figure kpo00016
    260nm(348)/중성수 ; 258nm(358)/0.01N 수성 HCl ; 240nm(499), 265nm(330, 쇼울더) 및 295nm(78, 쇼울더)/0.01N 수성 NaOH ; 스펙트럼은 첨부하는 도면 제1a 및 1b도 내에 나타낸다 ;
    8) 적외선 흡수 스펙트럼(KBr). υmax cm-1;
    KBr 디스크 내에서 측정한 스펙트럼을 첨부하는 도면 제 2 도 내에 나타낸다 ;
    9) 핵자기 공명 스펙트럼, δppm :
    외부 표준으로서 TMS(테트라메틸실란)을 사용하여 디메틸술폭시드내에서 스팩트럼(400MHz)을 측정하였으며, 그 결과를 첨부하는 도면 제 3 도에 나타낸다 ;
    10) 용해성 :
    물 및 메탄올 : 가용성,
    아세톤 : 난용성,
    에틸아세테이트, 클로로포름 및 벤젠 : 불용성
    11) 정색 반응 : 닌히드린, 황산, 요오드, 염화제이철 및 바이어 반응에 대하여 양성을 나타냄 ;
    12) 얇은막 크로마토그래피 ;
    Rf 값 : 0.36
    흡착제 : 실리카겔 플레이트(머어크, 키젤겔(Kieselgel) 60F254)
    전개용매 : 부탄올, 프로판올 및 물의 4 : 2 : 1 부피비 혼합물
    13) 고속 액체 크로마토그래피 :
    컬럼 : 아쿠아실(Aquasil) SS 372-N(센슈가가꾸사제)
    전개용매 : 클로로포름, 이소프로판올, 메탄올 및 물의 200 : 100 : 100 : 40부피비 혼합물
    유동율 1ml/분
    보지 시간 : 3.92분
    [2] 무레이도마이신 B
    1) 특성 및 외관 : 양성, 수용성, 백색 분말 ;
    2) 고유 광회전도 :
    Figure kpo00017
    =-7°(C=0.3 50% v/v 수성 메탄올) ;
    3) 원소 분석 :
    C, 50.67% ; H, 6.36% ; N, 12.62% ; S, 3.13%-수화물로서 측정 ;
    4) 분자량 : 842(고분해 질량 스펙트럼), FAB MS : 843.33289(QM+)
    5) 분자식 : C38H50N8O12S1;
    6) 산 가수분해 생성물 :
    디히드로우라실, m-티로신, 2-아미노-3-N-메틸아미노-부티르산 ;
    7) 자외선 흡수 스펙트럼 : λmax nm
    Figure kpo00018
    255nm(194)/중성수 ; 255nm(186)/0.01N 수성 HCl ; 245nm(325), 295nm(85, 쇼울더)/0.1N 수성 NaOH ; 스펙트럼은 첨부하는 도면 제 7 도 내에 나타난다 ;
    8) 적외선 흡수 스펙트럼(KBr). υmax cm-1;
    KBr 디스크 내에서 측정한 스펙트럼을 첨부하는 도면 제 8 도 내에 나타낸다 ;
    9) 핵자기 공명 스펙트럼, δppm :
    외부 표준으로서 TMS를 사용하여 중수내에서 측정한 스펙트럼(270MHz)을 첨부하는 도면 제 9 도에 나타낸다 ;
    10) 용해성 :
    물 및 메탄올 : 가용성,
    아세톤 : 난용성,
    에틸아세테이트, 클로로포름및 벤젠 : 불용성
    11) 정색 반응 : 닌히드린, 황산, 요오드, 염화제이철 및 바이어 반응에 대하여 양성을 나타냄 ;
    12) 얇은막 크로마토그래피 :
    Rf 값 : 0.34
    흡착제 : 실리카겔 플레이트(머어크, 키젤겔 60F254)
    전개용매 : 부탄올, 프로판올 및 물의 4 : 2 : 1 부피비 혼합물
    13) 고속 액체 크로마토그래피 :
    컬럼 : 아쿠아실 SS 372-N(센슈가가꾸사제)
    전개용매 : 클로로포름, 이소프로판올, 메탄올 및 물의 200 : 100 : 100 : 40부피비 혼합물
    유동율 1ml/분
    보지 시간 : 3.92분
    [3] 무레이도마이신 C
    1) 특성 및 외관 : 양성, 수용성, 백색 분말 ;
    2) 고유 광회전도 :
    Figure kpo00019
    =+16.7
    Figure kpo00020
    (C=0.57, 50% v/v 수성 메탄올) ;
    3) 원소분석 :
    C, 49.44% ; H, 5.50% ; N, 12.53% ; S, 3.09%-수화물로서 측정 ;
    4) 분자량 : 897(고분해 질량 스펙트럼), FAB MS : 898.33687(QM+)
    5) 분자식 : C40H51N9O13S1;
    6) 산 가수분해 생성물 :
    우라실, m-티로신, 2-아미노-3-N-메틸아미노부티르산 ;
    7) 자외선 흡수 스펙트럼 : λmax nm
    Figure kpo00021
    258nm(292)/중성수 ; 259nm(312)/0.01N 수성 HCl ; 240nm(444), 265nm(276, 쇼울더) 및 295nm(72, 쇼울더)/0.01N 수성 NaOH ; 스펙트럼은 첨부하는 도면 제4a 및 4b도 내에 나타낸다 ;
    8) 적외선 흡수 스펙트럼(KBr). υmax cm-1;
    KBr 디스크 내에서 측정한 스펙트럼을 첨부하는 도면 제 5 도 내에 나타낸다 ;
    9) 핵자기 공명 스펙트럼, δppm :
    TMS를 외부 표준으로 사용하여 중수내에서 측정한 스펙트럼(270MHz)을 첨부하는 도면 제 6 도에 나타낸다 ;
    10) 용해성 :
    물 및 메탄올 : 가용성
    아세톤 : 난용성
    에틸아세테이트, 클로로포름및 벤젠 : 불용성
    11) 정색 반응 : 닌히드린, 황산, 요오드, 염화제이철 및 바이어 반응에 대하여 양성을 나타냄 ;
    12) 얇은막 크로마토그래피 ;
    Rf 값 : 0.29
    흡착제 : 실리카겔 플레이트(머어크, 키젤겔 60F254)
    전개용매 : 부탄올, 프로판올 및 물의 4 : 2 : 1 부피비 혼합물
    13) 고속 액체 크로마토그래피 :
    컬럼 : 아쿠아실 SS 372-N(센슈가가꾸사제)
    전개용매 : 클로로포름, 이소프로판올, 메탄올 및 물의 200 : 100 : 100 : 40부피비 혼합물
    유동율 1ml/분
    보지 시간 : 6.29분
    [4] 무레이도마이신 D
    1) 특성 및 외관 : 양성, 수용성, 백색 분말 ;
    2) 고유 광회전도 :
    Figure kpo00022
    =-30°(C=0.52, 50% v/v 수성 메탄올) ;
    3) 원소 분석 :
    C, 48.79% ; H, 5.86% ; N, 12.42% ; S, 3.26%-수화물로서 측정 ;
    4) 분자량 : 899(고분해 질량 스펙트럼), FAB MS : 900.35617(QM+)
    5) 분자식 : C40H53N9O13S1;
    6) 산 가수분해 생성물 :
    디히드로우라실, m-티로신, 2-아미노-3-N-메틸-아미노부티르산 ;
    7) 자외선 흡수 스펙트럼 : λmaxnm
    Figure kpo00023
    255nm(191)/중성수 ; 255nm(184)/0.1N 수성 HCl ; 245nm(346), 295nm(90, 쇼울더)/0.1N 수성 NaOH ; 스펙트럼은 첨부하는 도면 제10도 내에 나타낸다 ;
    8) 적외선 흡수 스펙트럼(KBr). υmaxcm-1;
    KBr 디스크 내에서 측정한 스펙트럼을 첨부하는 도면 제11도 내에 나타낸다 ;
    9) 핵자기 공명 스펙트럼, δppm :
    TMS를 외부 표준으로 사용하여 중수에서 측정한 스펙트럼(270MHz)을 첨부하는 도면 제12도에 나타낸다 ;
    10) 용해성 :
    물 및 메탄올 : 가용성
    아세톤 : 난용성
    에틸아세테이트, 클로로포름및 벤젠 : 불용성
    11) 정색 반응 : 닌히드린, 황산, 요오드, 염화제이철 및 바이어 반응에 대하여 양성을 나타냄 ;
    12) 얇은막 크로마토그래피 ;
    Rf 값 : 0.26
    흡착제 : 실리카겔 플레이트(머어크, 키젤겔 60F254)
    전개용매 : 부탄올, 프로판올 및 물의 4 : 2 : 1 부피비 혼합물
    13) 고속 액체 크로마토그래피 :
    컬럼 : 아쿠아실 SS 372-N(센슈가가꾸사제)
    전개용매 : 클로로포름, 이소프로판올, 메탄올 및 물의 200 : 100 : 100 : 40부피비 혼합물
    유동율 1ml/분
    보지 시간 : 7.24분
  2. 제 1 항에 있어서, 균주가 스트렙토마이세스 플라비도비렌스(Streptomyces flavidovirens) SANK 60486(FERM P 8636, FERM BP-1347)인 무레이도마이신 A, B, C 또는 D의 제조방법.
  3. 제1 또는 2항에 있어서, 배양 온도가 20~37℃인 무레이도마이신 A, B, C 또는 D의 제조방법.
  4. 제 3 항에 있어서, 온도가 약 22℃인 무레이도마이신 A, B, C 또는 D의 제조방법.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 산소 조건하에 배양을 실시하는 무레이도마이신 A, B, C 또는 D의 제조방법.
  6. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 배양 배지로부터 무레이도마이신 A를 분리하는 방법.
  7. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 배양 배지로부터 무레이도마이신 B를 분리하는 방법.
  8. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 배양 배지로부터 무레이도마이신 C를 분리하는 방법.
  9. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 배양 배지로부터 무레이도마이신 D를 분리하는 방법.
  10. 제 1 항에서 정의한 무레이도마이신 A 또는 그의 염 또는 에스테르를 인간을 제외한 동물에 투여함을 특징으로 하는 세균 감염의 치료 또는 예방 방법.
  11. 제 1 항에 있어서, 정의한 무레이도마이신 B 또는 그의 염 또는 에스테르를 인간을 제외한 동물에 투여함을 특징으로 하는 세균 감염의 치료 또는 예방 방법.
  12. 제 1 항에서 정의한 무레이도 마이신 C 또는 그의 염 또는 에스테르를 인간을 제외한 동물에 투여함을 특징으로 하는 세균 감염의 치료 또는 예방 방법.
  13. 제 1 항에 있어서 정의한 무레이도 마이신 D 또는 그의 염 또는 에스테르를 인간을 제외한 동물에 투여함을 특징으로 하는 세균 감염의 치료 또는 예방 방법.
KR1019870005014A 1986-05-20 1987-05-20 신규 항생물질 무레이도마이신 a, b, c 및 d 그의 제조 방법 및 치료학적 용도 KR950013857B1 (ko)

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