JPS6121089A - 抗生物質２７１−４ｓａまたは２７１−４ｓｂ、およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規抗生物質２７１−４８Ａまたは２７１−
４ＳＢ、およびその製造法に関するっ本発明者らは、多
種類の土壌などの試料を採取して、それから分離される
微生物についてそれらの生産する抗生物質を探索したと
ころ、ある種の微生物が新規な抗生物質を生産すること
、該微生物はストレプトミセス属に属すること、該微生
物を適宜の栄養培地および培養条件で培養することによ
り該抗生物質を培養物中に蓄積させうろことを知り、こ
の新規な２種の抗生物質をおのおの２７１−４８Ａおよ
び２７１−４ＳＢと称することにした。

本発明は、かかる知見にもとづいてさらに研究しＴこ結
果、完成されＴこものである。

すなわち本発明は、（１）抗生物質２７１−４８Ａまた
は２７１−４ＳＢ、（２）ストレプトミセス属に属する
抗生物質２７１−４８Ａおよび２７１−４ＳＢ生産菌を
培地に培養し、培養物中に抗生物質２７１−４８Ａおよ
び２７　ｔ　−４ＳＢを蓄積せし、め、これを採取する
ことを特徴とする抗生物質２７１−４ＳＡまたは２７１
−４ＳＢの製造法に関する。

本願においては、抗生物質２７１−４８Ａおよび２７１
−４１３を、単にｒ２７１−４８ＡＪおよびｒ２ｒｔ−
４ＳＢＪと称することもある。

本発明において、２７１−４８Ａおよび２７１−４ＳＢ
は、ストレプトミセス属に属し２７１−４ＳＡおよび２
７１−４ＳＢを生産する能力を有する微生物を好気的に
培養し、通常菌体および培養液中に２７１−４８Ａおよ
び２７１−抹 ４８’Ｂを蓄積させ、これを爺取することによって製造
される。該微生物の例としては、本発明者が兵庫県内の
一土壌から分離した２ｒｒ−４Ｓ株が挙げられ、その菌
学的性質は次の通りである。

ｌ）形態学的性質 合成および天然培地において、基中菌糸は寒天中によく
伸長し、ジグザグ状ないしゆるやかな波状を呈する。ま
た、各種分類培地上で、灰白色ないし淡黄色の気菌糸を
着生し、その成熟し１こ菌糸を顕微鏡で観察すると不規
則な分岐が見られる。培養試料を走査電子顕微鏡で観察
したところ、胞子の大きさは０．６ｘ　０．８　（ｆｉ
）の楕円球状であり、その平面は平滑であつＴコ。胞子
は平均８０個以上、直鎖上に連鎖しており、胞子のう、
菌核等の特異な構造体は認められない。

２）培養性状 培地および試験方法は、イー・ビー・シャーリング（Ｉ
ｎｔ、　Ｊ、　８ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　１
５巻、８１Ｂ頁、１９６６年）の方法にしたがった。

結果を第１表に示す。以下は特記しない限り２７℃、２
週間目の各培地における観察である。色調は標準色とし
てカラートーンマニュアル（財団法人日本色彩研究所〕
を用いて決定し１こ。

３）生理的諸性質 ２７１−４８株の生理的諸性質は第２表に示す通りであ
る。

４）細胞壁組成 ジアミノピメリン酸は、ＬＬ−型やあり、アラヒノース
、ガラクトースは認められない。

亀２表　　生理的諸性質 第３表　　炭素源の利用性 以上、重囲の菌学的性状を要約すると次の通りである。

細胞壁組成はＬＬ−ジアミノピメリン酸を有スる。又、
形態的には直鎖上の胞子鎖を形成し、胞子の表面は平滑
である。培養上の諸性質としては、基中菌糸は黄色ある
いは淡褐色を呈し、気菌糸は灰白色あるいは淡黄色の色
調を呈する。

可溶性色素ならびにメラニン様色素は生産しなむ）。

これらの結果から、本菌株はストレプトミセス属に属す
る菌種であり、ブリドハムとトレスナーの分類（バージ
ェイス・マニュアル・オブ・デタミネーティブ・バクテ
リオロシー第８版、１９７４年、７４８〜８２９頁）に
よる、イエローシリースに属する菌種であると考えられ
る。

これらの菌種のうちストレプトミセスルポリスが２７１
−４８株ときわめて似た菌学的性質を有していることか
ら、本発明者らは２７１−４Ｓ株をストレプトミセス・
レボリスｎｏ、２７１−４８（微工研菌寄第７６２６号
）と命名した。

本発明の方法において、抗生物質２７１−４８Ａおよび
２７１−４ＳＢを生産する微生物を培養する培地として
は、ストレプトミセス属微生物の培養に常用される炭素
源・窒素源・無機物等を含む各種の培地を使用すること
が出来る。

培地の炭素源としては、ブドウ楯、麦芽糖、デンプン、
デキストリン、グリセリン、糖蜜なとである。また、窒
素源としては、ｔことえは、大豆粉、コーンステイープ
リカー、綿実粉、ヘフトン、肉エキス、乾燥酵母、カゼ
イン加水分解物、アンモニウム塩、硝酸塩などである。

無機物の例は、リン酸塩、マグネシウム、カリウム、カ
ルシウム、ナトリウム、鉄、マンガンなどの塩類である
。

培養は通常好気的に行なわれ、通気攪拌培養が好適であ
る。培養温度は微生物が発育し、抗生物質２７１−４８
Ａおよび２７１−４ＳＢを生産する範囲で適宜変更でき
るが、好ましいのは２７〜８２℃である。ｐＥ［は６〜
７が好ましい。

培養時間は種々の条件によって異なるが、通常６０〜１
００時間程度で培養物中に蓄積される抗生物質２７１−
４８Ａおよび２７１−４ＳＢが最高力価に達する。

培養終了後、培養物からの抗生物質２７１−４８Ａおよ
び２７１−４ＳＢの採取は、微生物の培養物より前述の
理化学的性状を有する抗生物質を分離精製する公知の手
段を単独ま１こは組合わせて行なうことが出来る。１こ
とえば不純物との溶解度の差を１０用する手段、活性炭
、マクロポーラス非イオン系樹脂、シリカゲル、アルミ
ナ等各種の吸着剤の吸着親和力の差を利用する手段、イ
オン交換樹脂による不純物の除去手段のいずれもかそれ
ぞれ却独で、ま１こ組合せであるいは反覆して利用され
る。

実用的な分離精製法の一例を示すと次のとおりである。

培養物を菌体と沖液に分別する。菌体はアセトンまＴこ
はメタノールで抽出し、その抽出液を濃縮したのちｎ−
ブタノール、イソブタノール等の有機溶媒で抽出する。

一方沖液は、水と分離し〜抗生物質２７１−４８Ａおよ
び２７１−４ＳＢを溶解せしめる有機溶媒（ｎ−ブタノ
ール、イソブタノール等）で抽出する。その後脂溶性物
質の精製において通常用いられる公知の方法により抗生
物質２７１−４８Ａおよび２７１−４ＳＢを回収する。

１ことえは、抽出液（ｎ−ブタノール層）を水、炭酸水
素ナトリウム水、希塩酸水で順次洗浄後再度水洗し、減
圧濃縮後、エーテル等を加えて有効成分を析出させ、遠
心分離あるいは沖過により２７１−４ＳＡおよび２７１
−４ＳＢの粗物質が得られる。得られ１こ粗物質は、分
子ふるい的効果をもつセファデックス■（８ｅｐｈａｄ
ｅｘ　）　Ｌ　ＥＩ　−２０（ファルマシア社・スウェ
ーデン）等を担体としたカラムでメタノール等のアルコ
ール類を展開溶媒として使用して精製できる。さらに精
製するｔこめには種々の吸着クロマトグラフィーが利用
できる。

吸光剤としては、抗生物質の吸着に一般に使用される担
体（例えば、吸着性樹脂、シリカゲル、アルミナ等）が
使用できる。吸着剤としてシリカゲルを用いるときは、
非極性溶媒（例えばクロロホルムなどのハロゲン化炭化
水素）とメタノールのような極性溶媒との混合比を変化
させることによりクロマトグラフィー分離が行なわれる
。この段階で２７１−４８Ａと２７１−４ＳＢとを分離
できる。

２７１−４８Ａおよび２７１−４ＳＢは、２価の金属イ
オンと複合体を形成させることで薬理学的に許容し得る
複合体とすることも出来る。

好ましくは、カルシウム複合体とすることでその効果最
大とするＣとが出来る。

２７１−４８Ａおよび２７１−４ＳＢは、それぞれの紫
外部吸収スペクトルからヘプタエン（ｈｅｐｚａｅｎｅ
　）　　を発色団（クロモフォア一つとし、ま１こ赤外
部吸収スペクトル上１７２０ＣＩＩ−１にラクトンカル
ボニルの吸収が認められる。ま１こ２７１−４ＳＡおよ
び２７１−４ＳＢは酸で化学的に分解するとマイコサミ
ン、アルカリで化学的に分解するとｐ−アミノアセトフ
ェノンを与えることから、アミノ配糖体、芳香環を有す
るヘプタエン・マクロライド（ｈｅｐｔａｅｎｅｍａｃ
ｒｏｌｉｄｅ　）と推定されろ。アミノ配糖体、芳香環
を含むヘプタエン・マクロライド抗生物質としては、種
々の化合物が知られている。たとえば、キーｒ　ンディ
シデイン（０ａｎｄｉｃｉｄｉｎ　）、トリＤＶイシン
Ａ　（Ｔｒｉｃｏｍｙｃｉｎ　Ａ　）、　レボリンＡ、
　Ｂ　（Ｌｅｖｏｒｉｎ　Ａ％Ｂ　）　、パトリシン（
Ｐａｔｒｉｃｉｎ　）などが挙げられるが、　これらの
化合物の分子量はすべて１，０００を超えるものである
のに対し、本抗生物質２７１−４８Ａおよび２７１−４
Ｂの分子量は、それぞれ８９９．８８９であること、ま
たこれらの公知のへブタエン抗生物質の窒素含量は、約
１〜３％である↓ のに対して本抗生物質２７１−４Ａおよび２７１−４Ｓ
Ｂは、ソｔ’ＬｆｔＬ８．５８　ｓ、　４．９４　％　
テすることから、本抗生物質２７１−４ＳＡおよび２７
１−４ＳＢは新規化合物であると考えられる。各種微生
物に対する最少阻止濃度（ＭＩＯ）を第４表に示す。な
おここに示し１こ各画については寒天希釈法にてそれぞ
れＭＩＣを測定した。

次に本発明の実施例を示すが、この実施例は単なる一例
を示すものであって、本発明を限定するものではない。

実施例 ストレプトミセス・レボリスｎｏ、２７１−４８（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　１ｅｖｏｒｉｓ　ｎｏ、２７１
−４ｓ　、微工研菌寄第７６２６号）の斜面培養から１
白金耳を種培地に接種し、２７℃で２日間培養後、２％
の割合で前培養培地に接種しＴコ。

２７℃で３日間培養後、３０Ｉ！容ジャーファーメンタ
−中の１８Ｊの培地に２チの割合で接種し、３２℃で７
２時間、通気量１ｏｔＺ分、攪拌速度２５　Ｏｒ、ｐ、
ｍの条件で通気攪拌培養を行った。種培地及び前培養培
地の組成はグルコース１％、酵母エキス１％、本培養培
地の組成ｉ、ｔグ２．Ｄ−ユ６．ツィトア■（デ４フコ
社製）２チ、Ｎａ０Ｊ　Ｏ，５チで、使用時にそれぞれ
ｐＨ７，８に調整した後、１２１℃で１５分間滅菌した
。培養後、培養液１８Ｉ！をｔ過によす歯体と培養上清
に分離し１こ。得られた菌体に８０チアセトン５１！を
加え攪拌抽出し、これを沖別して８０−アセトン抽出液
を得１こ。一方、培養上清には等容のｎ−ブタノールを
加え抽出し、ｎ−ブタノール層を分離してｎ−ブタノー
ル抽出液とし１こ。各々の抽出液を減圧下で濃縮乾固し
１こ後、３０〇−のメタノールに溶解した。不溶物を沖
別した後、全量をメタノールで平衡化したセファデック
ス■（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　　Ｌ　Ｈ−２０カラム（
ファルマシア社製　４Ｊ）に上層し、メタノールで溶出
し、３０−ずつ分画しｆこ。ここで得られ１こ活性画分
を減圧下で濃縮し、ジエチルエーテルを加えて粉末を析
出させ室温で一晩放置した後、沖取することにより粗粉
末１２０＃　ｅ得た。コノ抗生物質２７１−４８Ａおよ
び２７１−４ＳＢを含む粗粉末をクロロホルム／メタノ
ール（２：１）に溶解し、あらかじめクロロホルムで充
填したシリカゲルカラム（メルク社、キーセルゲル６０
，１２０ｙ−）の上端に添加した。カラムを順次クロロ
ホルム／メタノール（２：　１，８００ｓｇ）およびク
ロロホルム／メタノール／ｎ−ブタノール／アンモニア
水（６：８：　１　：　１．　１，０００−）の順で溶
出し、１０−ずつ分画した。

ここでクロロホルム／メタノール／ｎ−ブタノール／ア
ンモニア水（６：８：１：１）の混合溶媒による溶出で
２７１−４ＳＡと２７１−４ＳＢは分離された。各々の
活性画分を減圧下で濃縮し、ジエチルエーテルを加えて
粉末を析出させ一晩放置した後沖取することにまり、そ
れぞれ抗生物質２７１−４８Ａ８０η、抗生物質２７１
−４ＳＢ　　８ｍｖｋ得た。

これらの性質は、前記した理化学的性質および生物学的
性質と一致しｔコ。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質２７１−４８Ａおよび２７１−４ＳＢ
の紫外線吸収スペクトル（メタノール中で測定）を示す
。縦軸は分子吸光係数、横軸は波長を表わす。第２図は
２７１−４８Ａ　および２７１−４ＳＢの赤外線吸収ス
ペクトル（ＫＢ　ｒ法）を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 〔１〕非定型粉末として次の理化学的性質を有する抗生
   物質２７１−４ＳＡまたは２７１−４ＳＢ （１）元素分析（％） ▲数式、化学式、表等があります▼ （２）分子量および分子式（元素分析およびマススペク
   トルメトリーにより推定） ▲数式、化学式、表等があります▼ （３）比旋光度 ２７１−４ＳＡ〔α〕＾１＾０＿Ｄ＝１２８．７（Ｃ＝
   ０．１、ジメチルスルホキサイド）２７１−４ＳＢ〔α
   〕＾１＾０＿Ｄ＝２１．８２（Ｃ＝０．１、ジメチルス
   ルホキサイド） （４）紫外線吸収スペクトル： 第１図の通り。 （５）赤外線吸収スペクトル： 第２図の通り。 （６）溶剤に対する溶解性（２７１−４ＳＡ、２７１−
   ４ＳＢとも） 可溶；ジメチルスルホキサイド、メタノール、アセトン
   、水飽和ｎ−ブタノール 難溶；クロロホルム、ｎ−ブタノール 不溶；エーテル、ヘキサン （７）呈色反応 ニンヒドリン反応；陽性 アニスアルデヒド−硫酸法；陽性 Ｉ＿２吸収；陽性 （８）塩基性・酸性・中性の区別 ２７１−４ＳＡ、２７１−４ＳＢともに両性物質 （９）物質の色 ４７１−４ＳＡ、４７１−４ＳＢともに黄色 （１０）融点 ４７１−４ＳＡ、４７１−４ＳＢともに３００℃以上 〔２〕ストレプトミセス属に属する抗生物質２７１−４
   ＳＡおよび２７１−４ＳＢ生産菌を培地に培養し、培養
   物中に抗生物質２７１−４ＳＡおよび２７１−４ＳＢを
   生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする抗生
   物質２７１−４ＳＡまたは２７１−４ＳＢの製造法 〔３〕ストレプトミセス属に属する抗生物質２７１−４
   ＳＡおよび２７１−４ＳＢ生産菌が、ストレプトミセス
   ・レボリスｎｏ．２７１−４Ｓ（微工研菌寄第７６２６
   号）である特許請求の範囲第２項記載の製造法