JPH02255655A - 新規生理活性物質ｄｃ１１８ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の背景〕 本発明は新規物質に、さらに詳しくはストレプトミセス
φクロモフスカスに属する菌株Ｄｃ１１８株によって産
生されうる、過酸化脂質生成阻害作用を有する新規物質
ＤＣ１１８に、関する。

生体において発生した過酸化脂質は、血管をは〔発明の
詳細な説明〕 く新規物質ＤＣ１１８＞ １）化学構造 本発明による新規物質ＤＣ１１８は、前記の式（Ｉ）で
示される化学構造を有する。

ＤＣｌｌｇの化学構造は、プロトン核磁気共鳴スペクト
ル、炭素１３核磁気共鳴スペクトル、紫外部吸収スペク
トル、光外部吸収スペクトル、質量分析スペクトルを詳
細に検討することによって前記の通り決定された。

２）　物理化学的性状 （１）外　観　淡褐色粉末 （２）融　点　１４９〜１５２℃（分解）（３）溶解性
　メタノール、エタノール、クロロホルム、ベンゼン、
アセトン、酢酸エチルに可溶、ｎ−ヘキサンに微溶、水
に不溶 （４）Ｒｆ値（メルク社製「シリカゲル６０　Ｆ　２５
４　Ｊ使用） クロロホルム−メタノール（１００：１　）　　０．６
０（５）ＦＤ−ＭＳスペクトル（ｍ／ｚ）　２９５　（
Ｍ”　）（６）紫外吸収スペクトル　　第１図 λｓａｘｎｍ（ｇ）　　２１８　（１５，２９Ｘ１０’
）（メタノール中）　　２３５　（１４，０５Ｘ１０’
）２５４　（７，６２ｘｌＯ’） ２６６　（６，０３Ｘ１０４） ３０３　（８，２９Ｘ１０’） ３４２　（２，０１ｘｌＯ’） （７）赤外吸収スペクトル　　第２図 （ＫＢｒディスク法） （８）プロトン核磁気共鳴スペクトル　　第３図（５０
０メガヘルツ、重クロロホルム中）（９）炭素１３核磁
気共鳴スペクトル　　第４図（１２５メガヘルツ、重ク
ロロホルム中）（■０）元素分析 ＣＨＮ　　　　　Ｏ 分析値Ｃ％）　　８１．　２８　８．　５５　４．７４
　５．４３計算値（１）　８１．　３１　８．　５３　
４．　７４　５．４２（１１）分子式　　Ｃ２０Ｈ２５
Ｎ　Ｏ＜ＤＣｌｌｇの製造〉 く概要〉 ＤＣｌｌｇは現在のところ微生物の培養によってのみし
か得られていないが、類縁化合物の合成化学的または微
生物学的修飾によって製造することも、あるいは全合成
化学的に製造することもできよう。

微生物の培養による場合の菌株としては、ストレプトミ
セス属に属するＤＣ１１８生産能を有するものが使用さ
れる。具体的には、本発明者らの分離したストレプトミ
セスφりロモフスカスＤＣ１１８株がＤＣｌｌｇを生産
することが本発明者らによって明らかにされているが、
その他の菌株については、抗生物質生産菌単離の常法に
よって適当なものを自然界より分離することが可能であ
る。また、ストレプトミセス・クロモフスカスＤＣ１１
８株を含めてＤＣｌｌｇの生産菌を放射線照射その他の
変異処理に付して、ＤＣｌｌｇの生産能を高める余地も
残されている。さらにまた、このＤＣ１１８株のＤＣ１
１８物質生産をコードする遺伝子を有する組換え体によ
る遺伝子工学的手法によることもできる。

＜ＤＣ１１８株〉 ＤＣ１１８生産能を有するストレプトミセス属の菌株と
して本発明者らの見出しているＤＣ１１８株は、下記の
内容のものである。

１、由来および寄託番号 ＤＣ１１８株は宮崎県宮崎市で採取した土壌から分離さ
れたものであり、平成元年２月８日に工業技術院微生物
工業技術研究所に寄託されて［微工研条寄第２２７５号
Ｊ　　（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２２７５）の番号を得てい
る。

２、菌学的性状 ＤＣ１１８株の菌学的性状は、以下のとおりである。

１）形態 ＤＣ１１８株はシュクロース・硝酸塩寒天培地上では生
育が貧弱であるが、その他の培地上では中程度に生育す
る。気菌糸は、スターチ・無機塩寒天培地では中程度に
着生するが、イースト・麦芽寒天培地、オートミール寒
天培地、シュクロース・硝酸塩寒天培地、栄養寒天培地
上では貧弱で、その他の培地ではほとんど観察されなか
った。基土菌糸より生じた気菌糸は単純分枝をなして伸
長し、胞子の連鎖は１０〜５０個、胞子鎖は螺旋状だが
不完全な螺旋が多く、ループ状のものも多くみられる。

瓶子の形は円筒形〜俵形で、大きさは０．５〜０．７μ
ｍＸＯ１９〜１．１μｍであり、その表面はとげ状であ
る。

胞子嚢、鞭毛胞子、菌核などの特殊形態は詔められない
。

２）各種培地上の生育状態 ＤＣ１１８株を各種培地に２７℃、３週間培養した結果
は、第１表に示すとおりである。

３）生理的性質 ＤＣ１１８株の生理的性質は、第２表に示すとおりであ
る。

４）炭素源の利用性 ＤＣ１１８株の炭素源の利用性（ブリドハム・ゴトリー
ブ寒天培地上）は、第３表に示すとおりである。

５）ジアミノピメリン酸の分析 細胞壁構成アミノ酸の一つであるジアミノピメリン酸を
分析した結果、ＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出された
。

以上の菌学的性状から、ＤＣ１１８株はストレプトミセ
ス属の一菌株と判断され、以下のような特徴を有する。

（１）胞子鎖は螺旋状〜ループ状で、胞子の表面はとげ
状である。

（２）気菌糸の着生はスターチ・硝酸塩寒天培地以外で
は総じて貧弱で、その色は、黄味白色〜明るいオリーブ
灰、裏面の色は、うす黄色〜うす黄茶色〜黄茶色である
。

（３）ペプトン・イースト・鉄寒天培地でメラニン様色
素を生成するが、チロシン寒天培地、トリプトン・イー
スト液体培地ではメラニン様色素は認められない。また
、可溶性色素は認められない。

（４）シュクロース、ラムノース、ソルビトールは資化
されない。

上記性状より、ｌ５Ｐ（インターナショナル・ストレプ
トミセス・プロジェクト）の記Ｍ　（Ｅ、Ｂ。

Ｓｈｉｒｌｌｎｇ　ａｎｄ　Ｄ、Ｇｏｔｔｌｉｅｂ：　
Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓｔ、Ｂａｃｔ、　１８６９−１８９
．２７９−３９２　（１９８８）；　１９３９１−５１
２　（１９８９）；２２２８５−３９４　（１９７２）
）およびバーシーズ・マニュアル・オブ・デターミネイ
ティブ・バクテリオロジ−（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎ
ｕａｌ　ｏｆ’　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｌｖｅ　Ｂａｃ
ｔｅｒｌ−ｏｌｏｇｙ　）第８版（１９７４）を参考に
近縁な既知菌種を検索すると、ストレプトミセス・クロ
モフスカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｅｈｒｏｍｏ
ｆｕｓｃｕｓ　）　　（Ｉｎｔ、Ｊ。

５ｙｓｔ、Ｂａｅｔ、：　１ｇ、　３０７　（１９６８
））が最も近似している。

ＤＣ１１８株とストレプトミセス・クロモフスカスとを
比較すると、螺旋状の胞子鎖および表面がとげ状の胞子
を有する形態的特徴、ペプトン・イースト・鉄寒天培地
でメラニン様色素を産生ずる点、ならびに気菌糸の色調
などで両者は良く一致する。相違する点としては、ＤＣ
１１８株がトリプトン・イースト液体培地でメラニン様
色素を産生じない点およびラムノースを資化しない点等
があげられる。

以上のようにＤＣ１１８株は、若干の相違はあるものの
、基本的性状においてストレプトミセス・クロモフスカ
スと良く一致することから、ストレブトミセスークロモ
フスカスと同定するのが妥当である。したがって、ＤＣ
１１８株をストレプトミセス・クロモフスカス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｎ＋ｙｃｅｓｃｈｒｏｍｏｆｕｓｃｕｓ）　Ｄ
　Ｃ１１８株と命名する。

第１表 第２表 第３表 ＋：利用する　−二利用しない く培養／ＤＣ１１８の生産〉 化合物ＤＣ１１８は、ストレプトミセス属に属するＤＣ
１１８生産菌を適当な培地で好気的に培養し、培養物か
ら目的物を採取することによって製造することができる
。

培地は、ＤＣ１１８生産菌が利用しうる任意の栄養源を
含有するものでありうる。具体的には、例えば、炭素源
としてグルコース、シュークロース、マルＦ−ス、グリ
セロール、スターチおよび油脂類などが使用でき、窒素
源として大豆粉、魚粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母エキス
およびコーンステイープリカーなどの有機物ならびにア
ンモニウム塩または硝酸塩、たとえば硫酸アンモニウム
、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの無機物
が利用できる。また、必要に応じて、塩化ナトリウム、
塩化カリウム、炭酸カルシウム、燐酸塩、重金属塩など
無機塩類を添加することができる。発酵中の発泡を抑制
するために、常法に従って適当な消泡剤、例えばシリコ
ン油を添加することもできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
方法と同じく、好気的液体培養法が最も適している。培
養温度は２０〜３７℃が適当であるが、２５〜３０℃が
好ましい。この方法でＤＣ１１８の生産量は、振盪培養
、通気攪拌培養ともに培養５日間で最高に達する。

このようにしてＤ０１１８の蓄積された培養物が得られ
る。培養物中では、ＤＣ１１８はその一部は培養濾液中
に存在するが、その大部分は菌体中に存在する。

このような培養物からＤＣ１１８を採取するには１１合
目的的な任意の方法が利用可能である。そのひとつの方
法は抽出の原理に基くものであって、具体的には、培養
と戸液中のＤＣ１１８についてはこれを水不混和性のＤ
Ｃ１１８用溶媒（前記参照）例えば酢酸エチルなどで抽
出する方法、あるいは菌体内のＤＣ１１８については濾
過、遠心分離などで得た菌体集体をメタノール、エタノ
ール、アセトンなどで処理して回収する方法などがある
。

菌体を分離せずに培養物そのままを上記の抽出操作に付
すこともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出
の範鴫に入れることができる。

培養物からＤＣ１１８を採取する他のひとつの方法は吸
着の原理に基くものであって、既に液状となっているＤ
Ｃ１１８含有物、たとえば培養濾液あるいは上記のよう
にして抽出操作を行うことによって得られる抽出液を対
象として、適当な吸着剤、たとえばシリカゲル、活性炭
、「ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ　　（三菱化成社製）など
を用いて目的のＤＣ１１８を吸着させ、その後、適当な
溶媒にて溶離させることによってＤＣ１１８を得ること
ができる。このようにして得られたＤＣ１１８溶液を減
圧濃縮乾固すれば、ＤＣ１１８粗標品が得られる。

このようにして得られるＤＣ１１８の粗標品をさらに精
製するためには、上記の抽出法および吸着法にゲル濾過
法、高速液体クロマトグラフィーなどを必要に応じて組
合せて必要回数行えばよい。

たとえば、シリカゲルなどの吸着剤、「セファデックス
ＬＨ−２０Ｊ　　（ファルマシア社製）などのゲルか通
則を用いたカラムクロマトグラフィーｒＭＭＣバック」
　（山村科学社製）などを用いた高速液体クロマトグラ
フィーおよび向流分配法を適宜組合せて実施することが
できる。具体的には、たとえば、ＤＣ１１８粗標品を少
量のメタノールに溶解し、「セファデックスＬＨ−２０
Ｊカラムに付し、メタノールで活性画分を溶出させ、濃
縮乾固するとＤＣ１１８の純品が得られる。

＜ＤＣ１１８の用途〉 本発明による化合物ＤＣ１１８は、後記のように優れた
過酸化脂質生成抑制作用を有するという点で有用であり
、例えば脳、心臓、末梢における循環障害に基く各種疾
患や炎症、浮腫などの諸病態に対する予防・治療剤とし
て期待されるものである。

医薬品として使用する場合の製剤化および投与方法は、
従来公知の種々の方法が適応できる。すなわち、投与方
法としては、注射、経口、直腸投与などが可能である。

製剤形態としては、注射剤、顆粒剤、錠剤、粉末剤、坐
剤などの形態がとり得る。

また、経口または直腸内投与の場合は、徐放化製剤とし
て用いてもよい。

薬剤化の際には、ＤＣ１１８に悪影響を与えない限り、
医薬用に用いられている種々の補助剤、すなわち、担体
やその他の助剤、例えば安定剤、防腐剤、無痛化剤、乳
化剤など、が必要に応じて使用され得る。

製剤において、ＤＣ１１８の含量は、製剤形態により広
範囲に変えることが可能である。

ＤＣ１１８の投与量は、成人１人１日当り０．０１〜１
０００ｍｇ程度であるが、年齢、病態、症状に応じて適
宜増減することが更に好ましい。

く実験例〉 く過酸化脂質生成抑制作用〉 （方法） ウィスター系雄うット脳を断頭により摘出し、６７ｍＭ
のリン酸緩衝液（ｐ　Ｈ７，４）でホモジナイズして、
脳ホモジネートを調製した。このラット脳ホモジネート
をアスコルビン酸１００μＭ１Ｆ　ｅ　Ｓ　０４１０　
ａ　Ｍ　１および試験薬物と３７℃で１時間インキュベ
ートし、インキュベート混合物中に生成したマロンジア
ルデヒド（ＭＤＡ）を、八木ら（Ａｎａｌ、Ｂｌｏｃｈ
ｅｍ、、９５．３５１．（１９７９））によるチオバル
ビッール酸法によって測定した。この間ＤＡ量（ａ）お
よびコントロール値（ｂ）（試験薬物を加えないときの
ＭＤＡ量）から、過酸化脂質生成抑制率を下式により求
めた。

次に、試験薬剤の各濃度における過酸化脂質生成抑制率
から回帰直線式を求めて、試験薬剤の過酸化脂質生成５
０％抑制濃度（ＩＣ５ｏ）を算出した。

試験物質は水に難溶なので、メタノールで溶解、希釈後
に試験に供した。

（結果） 上記の結果より、ＤＣ１１８には強い過酸化脂質生成抑
制作用が認められた。

く製造〉 １）種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解してｐＨ７，４に調整したものである。

グリセロール　　３０．　Ｏｇ 魚粉　　２０．　Ｏｇ 炭酸カルシウム　　２．０ｇ 上記培地１００ｍ１を５００ｍ１のイボ付三角フラスコ
へ分注し、殺菌後、ストレプトミセス・クロモフスカス
ＤＣ１１８株（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２２７５）をスラン
トより１白金耳接種し、２７℃にて３日間振盪培養した
ものを種母とした。

２）培養 種母の調製の際に使用したものと同じ組成を有する生産
培地を２５リツトルずつ５０リツトル容ジャーファーメ
ンタ−に分注殺菌したものへ、上記種母１００ｍ１を添
加し、２７℃にて４日間、１５０ｒｐｍ、０．６ＶＶＭ
の通気攪拌培養を行った。

３）ＤＣ１１８の採取 上記の条件で培養後、培養液（５０リツトル）を濾過し
、菌体を２５リツトルのアセトンで抽出し、抽出液を５
リツトルに濃縮後、ｐＨを１０に調整し、等量の酢酸エ
チルで２回抽出する。抽出液を濃縮後、０．１リツトル
のクロロホルムに溶解し、シリカゲル（和光純薬製「ワ
ノーゲル　Ｃ−２００」）’のカラム（５ｃａφＸ５０
０１ｍ）に吸着させ、クロロホルムで溶出する。活性フ
ラクションを濃縮乾固するとＤＣ１１８の粗標品を得る
。

この粗標品を、少量のメタノールに溶解し、セファデッ
クスＬＨ−２０カラム（２ｃｍφ×１２０ｃｏ＋）によ
るゲル濾過にかけ、メタノールで展開した。ＤＣ１１８
画分を濃縮乾固し、ＤＣ１１８精製品２６＋１ｇを得た
。

トルを模写したものである。

第４図は、ＤＣ１１８の重クロロホルム中における１２
５メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写した
ものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 次式（ I ）で示される新規生理活性物質ＤＣ１１８。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）