JPS61152698A - Production of alpha-l-aspartyl-l-phenylalanine methyl ester - Google Patents

Abstract

PURPOSE:N-Formyl-alpha-L-aspartyl-L-phenylalanine is treated with methanol-HCl and the main product is hydrolyzed to give the titled compound in high yield through an industrially simplified process. CONSTITUTION:N-Formyl-alpha-L-aspartyl-L-phenylalanine is treated with methanol-HCl, preferably at 20-60 deg.C for 1-30hr to effect deformylation and diesterification to form alpha-L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester as a major product. Then, the resultant dimethyl ester is hydrolyzed in hydrochloric acid to give the objective compound. EFFECT:There is no problem on stability, because L-phenylalanine methyl ester is not used.

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−７エニルアラニ
ンメチルエステルの新規な製造法に関する。さらに詳し
くは、Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−７スバルチルーＬ−フェ
ニルアラニンをメタノール中、塩化水素の存在下に処理
し、α−Ｌ−アスパルチル−し一７エニルアラニンジメ
チルエステルを主生成物として生成させたのち、該α−
Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンジメチルエス
テルを塩酸中、必要に応じてメタノール存在下に加水分
解することを特徴とするα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フ
ェニルアラニンメチルエステルの製造法に関するもので
ある。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION (Field of Industrial Application) The present invention relates to a novel method for producing α-L-aspartyl-L-7 enylalanine methyl ester. More specifically, N-formyl-α-L-7subarthyl-L-phenylalanine is treated in methanol in the presence of hydrogen chloride to produce α-L-aspartyl-17-enylalanine dimethyl ester as the main product. Later, the α-
The present invention relates to a method for producing α-L-aspartyl-L-phenylalanine methyl ester, which comprises hydrolyzing L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester in hydrochloric acid and optionally in the presence of methanol.

α−Ｌ−７スバルチルーし一フェニルアラニンメチルエ
ステル（以下、α−ＡＰＭと略記する）は、通称、１１
アスパルテームＩ′と呼ばれる化合物で、甘味剤として
重要な物質である。その甘味度はしょ糖の２００倍に近
く、甘味の質もしょ糖に類似しており、しかも低カロリ
ーであるため、ダイエツト甘味剤として、最近、その需
要が増大して（・る。α-L-7 Subarthyl-monophenylalanine methyl ester (hereinafter abbreviated as α-APM) is commonly known as
A compound called aspartame I', which is an important substance as a sweetener. Its sweetness is nearly 200 times that of sucrose, its sweetness is similar to sucrose, and it is low in calories, so its demand as a diet sweetener has increased recently.

（従来技術） α−ＡＰＭの化学的製造方法は、既に、数多（開示され
ている。すなわち、１）アスパラギン威無水物の塩酸塩
とＬ−フェニルアラニンメチルエステルを縮合する方法
（例えば、特公昭５ｌ−４００６９）、２）　　Ｎ−保
護アスパラギン酸無水物とＬ−フェニルアラニンメチル
エステルを縮合し、つづいて脱保護する方法（例えば、
特開昭４６−１３７０、特開昭５１−１１３８４１　）
、３）　　Ｎ−保護アスパラギン酸−β−ベンジルエス
テルをＬ−フェニルアラニンメチルエステルとを縮合剤
の存在下に反応し、つづいて脱保護して製造する方法（
特開昭５９−１３０８４６）、４）　　Ｎ−カルボキシ
アスパラギン酸無水物とＬ−フェニルアラニンメチルエ
ステルを反応させる方法（特開昭４８−９６５５７　）
など種々の方法がある。(Prior Art) A number of chemical methods for producing α-APM have already been disclosed (i.e., 1) a method of condensing asparagine anhydride hydrochloride and L-phenylalanine methyl ester (for example, 5l-40069), 2) A method of condensing N-protected aspartic acid anhydride and L-phenylalanine methyl ester, followed by deprotection (e.g.
(Japanese Patent Publication No. 46-1370, Japanese Patent Application Publication No. 51-113841)
, 3) A method for producing N-protected aspartic acid-β-benzyl ester by reacting with L-phenylalanine methyl ester in the presence of a condensing agent, followed by deprotection (
4) Method of reacting N-carboxyaspartic acid anhydride with L-phenylalanine methyl ester (Japanese Patent Application Laid-open No. 48-96557)
There are various methods such as

しかしながら、これらの方法はいずれも一方の反応原料
としてＬ−フェニルアラニンメチルエステルを用（・る
ものであり、フェニルアラニンをメ９　　チルエステル
化する工程が繁雑である。その上、本発明者らの検討結
果によれば、このフェニルアラニンメチルエステルは遊
離の形態では溶液中で２分子縮合して環化し、２，５−
ジベンジルジケトピペラジ／に変化し易い化合物であり
、その安定性に問題があることがわかった。このことは
その製造において工業的には種々のトラブルを引き起す
原因になるものである。However, all of these methods use L-phenylalanine methyl ester as one of the reaction raw materials, and the process of converting phenylalanine into methyl ester is complicated. According to the authors, this phenylalanine methyl ester, in its free form, condenses two molecules in solution and cyclizes to form 2,5-
It was found that it is a compound that easily changes into dibenzyldiketopiperazi/, and that there is a problem with its stability. This causes various industrial problems in the manufacturing process.

したがって、α−ＡＰＭの製造に関しては上記欠点のな
い、即ち、Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルを用（
・ない方法の開発が望まれて（・る。Therefore, for the production of α-APM, L-phenylalanine methyl ester is used (
・It is desired to develop a method that does not exist.

Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルを用いな（・方法
としては、Ｎ〜ホルミルアスパラギアｄ１ｇ水物を氷酢
酸中、Ｌ−フェニルアラニンと縮合してＮ−ホルミル−
α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンを製造し
、ついで脱ホルミル化してα−Ｌ−アスパルチル−し一
フェニルアラニンとした後、メタノールでエステル化し
てα−ＡＰＭを製造する方法（特公昭５５−２６１３３
号）、およびこの方法におけるα−Ｌ−アスパルチル−
Ｌ−フェニルアラニンをエステル化してα−ＡＰＭとす
る工程の改良方法（特開昭５３−８２７５２号）が知ら
れているにすぎない。Using L-phenylalanine methyl ester (method is as follows: 1 g of N-formyl asparagia hydrate is condensed with L-phenylalanine in glacial acetic acid to form N-formyl-
A method for producing α-APM by producing α-L-aspartyl-L-phenylalanine, then deformylating it to α-L-aspartyl-phenylalanine, and then esterifying it with methanol (Japanese Patent Publication No. 55-26133
), and α-L-aspartyl- in this method
There is only one known method for improving the process of esterifying L-phenylalanine to produce α-APM (Japanese Patent Application Laid-open No. 82752/1983).

（発明が解決しようとする問題点） しかしながら、前者の方法はエステル化反応を非水系に
近し・状態で実施するために反応に選択性がなく、目的
のエステル化のみならず、アスパラキ７　ｅ　側のβ−
カルボン酸基へのエステル化やジエステル化反応も多量
に起り、そのためにα−ＡＰＭ収率が低いという欠点が
ある。また、後者の方法はエステル化反応を水の共存下
に行ってα−ＡＰＭの選択率を高めているが、α−ＡＰ
Ｍ単離収率はたかだか５０〜６０％Ｃ対α−Ｌ−アスパ
ルチル−し−フェニルアラニン）であり、収率面で必ず
しも十分とは言えない。この方法を同一反応器で、Ｎ−
ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニ
ンからα−Ｌ−アスパルチル−し一フェニルアラニンを
その場で生成させて、つ（・でエステル化してα−ＡＰ
Ｍを製造するには、Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチ
ル−し一フェニルアラニンの脱ホルミル化反応がペプチ
ド結合の開裂を抑えるために低レベルの塩酸存在下に実
施せねばならず、しかも、引きつづき行うエステル化反
応がコンパクトな系で行う関係上、少量のメタノール−
水−塩酸系で行わねばならな（・。この場合、原料のＮ
−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−し一７エニルアラ
ニンはこのメタノール量の少ない塩酸水溶液には比較的
難溶であり、しかも溶媒量が少ないので、原料装入後の
反応混合物は泥状化する。したがって、工業的には攪拌
等に種々のトラブルを生じ易く、操作面で問題がある。(Problems to be Solved by the Invention) However, in the former method, since the esterification reaction is carried out in a state close to that of a non-aqueous system, there is no selectivity in the reaction. side β−
A large amount of esterification and diesterification reactions to carboxylic acid groups also occur, resulting in a disadvantage that the yield of α-APM is low. In addition, the latter method performs the esterification reaction in the coexistence of water to increase the selectivity of α-APM, but
The isolated yield of M is at most 50 to 60% (C to α-L-aspartyl-phenylalanine), which is not necessarily sufficient in terms of yield. This method was carried out in the same reactor with N-
Formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine is generated in situ from formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine, and esterified with
To prepare M, the deformylation reaction of N-formyl-α-L-aspartyl-monophenylalanine must be carried out in the presence of low levels of hydrochloric acid to suppress peptide bond cleavage, and Because the subsequent esterification reaction is carried out in a compact system, a small amount of methanol
It must be carried out in a water-hydrochloric acid system (in this case, the raw material N
-Formyl-α-L-aspartyl-17-enylalanine is relatively poorly soluble in this aqueous hydrochloric acid solution with a small amount of methanol, and since the amount of solvent is small, the reaction mixture becomes muddy after charging the raw materials. . Therefore, industrially, various troubles such as stirring are likely to occur, and there are problems in terms of operation.

さらに、この後者の方法ではα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ
−７二二ルアラニンジメチルエステルハ好マしくない副
生物として、その副生を極力抑制する反応条件の選択が
必要であることが示めされている。Furthermore, in this latter method, α-L-aspartyl-L
It has been shown that -7 2-22-alanine dimethyl ester is an undesirable by-product and that it is necessary to select reaction conditions to suppress the by-product as much as possible.

このように前記のα−ＡＰＭの製造方法は中間原料の安
定性、反応操作の点または収率等の点で一長一短があり
、必ずしも満足できる方法ではない。As described above, the above method for producing α-APM has advantages and disadvantages in terms of stability of intermediate raw materials, reaction operations, yield, etc., and is not necessarily a satisfactory method.

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、前記のよりなα−ＡＰＭ製造技術の現状
を踏まえ、さらに工業的に効率の良い製造法につ（・て
、とくに、原料として、化合物の安定性に問題のあるし
一フェニルアラニンメチルエステルを用いず、またこの
化合物を経由することなく製造できるＮ−ホルミル−α
−Ｌ−アスパルチル−し一フェニルアラニンに着目して
該化合物からのα−ＡＰＭ製造法について鋭意検討した
。その結果、このＮ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル
−Ｌ−フェニルアラニンをメタノール中塩化水素存在下
に処理すると、脱ホルミル化反応とジエステル化反応が
温和な条件下に進行してα−Ｌ−アスパルチル−し一フ
ェニルアラニンジメチルエステルが主生成物として生成
すること、ならびにこの化合物を積極的に製造し、引き
つづいて塩酸中必要に応じてメタノール存在下に加水分
解することにより高収率でα−ＡＰＭが製造できること
を見出し、本発明を完成するに至った。本発明の方法は
、従来、知られていない新規なα−ＡＰＭ製造方法であ
る。(Means for Solving the Problems) Based on the current state of the above-mentioned α-APM manufacturing technology, the present inventors have developed a more industrially efficient manufacturing method (in particular, as a raw material, N-formyl-α, which has problems with the stability of the compound, can be produced without using phenylalanine methyl ester or via this compound.
Focusing on -L-aspartyl-monophenylalanine, a method for producing α-APM from this compound was intensively investigated. As a result, when this N-formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine was treated in methanol in the presence of hydrogen chloride, the deformylation reaction and diesterification reaction proceeded under mild conditions, resulting in α-L-aspartyl - phenylalanine dimethyl ester is produced as the main product, and α-APM can be produced in high yield by actively preparing this compound and subsequently hydrolyzing it in hydrochloric acid optionally in the presence of methanol. The present inventors have discovered that it is possible to produce the following, and have completed the present invention. The method of the present invention is a novel method for producing α-APM that has not been previously known.

本発明の方法に用いられる原料はＮ−ホルミル−α−Ｌ
−７スパルチルーＬ−フェニルアラニ／であり、この化
合物は、Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物とＬ
−７エニルアラニンとの縮合によって製造できる。例え
ばそれぞれ公知の方法により得られるＮ−ホルミル−Ｌ
−アスパラギン酸無水物とＬ−フェニルアラニンとを、
氷酢酸中８０℃以下の温度で反応させて得ることができ
る（特公昭５５−２６１３３号）。The raw material used in the method of the present invention is N-formyl-α-L
-7 spartyl-L-phenylalani/, and this compound is composed of N-formyl-L-aspartic anhydride and L-
It can be produced by condensation with -7 enylalanine. For example, N-formyl-L obtained by a known method
- aspartic acid anhydride and L-phenylalanine,
It can be obtained by reaction in glacial acetic acid at a temperature of 80°C or lower (Japanese Patent Publication No. 55-26133).

この縮合反応では、Ｎ−ホルミル−β−Ｌ　−７スバル
チルーし一フェニルアラニンが同時に副生ずるが、通常
、この異性体は分離して、原料として用いる。しかしな
がら、必ずしも、高純度のものを用いる必要はなく、前
記異性体が多少混入したものを用いても何ら差し支えな
い。In this condensation reaction, N-formyl-β-L-7subarthyl-phenylalanine is simultaneously produced as a by-product, but this isomer is usually separated and used as a raw material. However, it is not necessarily necessary to use a highly pure one, and there is no problem even if one containing some of the above-mentioned isomers is used.

本発明の方法は、Ｎ−ホルミル−α−Ｌ　−７スパルチ
ルーＬ−フェニルアラニンをメタノール中、塩化水素の
存在下に処理して、α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニ
ルアラニンジメチルエステルを生成する工程とこのα−
Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンジメチルエス
テルを塩酸中、必要に応じてメタノール存在下に加水分
解してα−ＡＰＭを生成させる工程より成る。The method of the present invention comprises the steps of treating N-formyl-α-L-7spartyl-L-phenylalanine in methanol in the presence of hydrogen chloride to produce α-L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester; α−
It consists of a step of hydrolyzing L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester in hydrochloric acid, optionally in the presence of methanol, to produce α-APM.

先づ第一のＮ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−
７エニルアラニンからα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェ
ニルアラニンジメチルエステルを製造する工程は、塩化
水素を溶解したメタノール溶［中ＫＮ−ホルミルーα−
Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンを装入するか
、Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−７スバルチルーし一フェニル
アラニンを溶解または懸濁したメタノール溶液中に塩化
水素を導入して反応させる。反応温度および反応時間は
１０〜７０℃、０，５〜５０時間、好ましくは２０〜６
０℃、１〜３０時間である。この反応によって、Ｎ−ホ
ルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン
は脱ホルミル化ならびにジエステル化が進行してα−Ｌ
＝アスパルチルーＬ−フェニルアラニンジメチルエステ
ルカ生成スる。First, N-formyl-α-L-aspartyl-L-
The process of producing α-L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester from 7-enylalanine is carried out using a methanol solution [medium KN-formyl-α-
Hydrogen chloride is introduced into a methanol solution in which L-aspartyl-L-phenylalanine is charged or N-formyl-α-L-7subartyl-phenylalanine is dissolved or suspended, and the reaction is carried out. The reaction temperature and reaction time are 10-70°C, 0.5-50 hours, preferably 20-6
0°C for 1 to 30 hours. Through this reaction, N-formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine undergoes deformylation and diesterification, resulting in α-L
= Aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester is formed.

この反応において、゛メタノールの使用量は原料のＮ−
ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−７二二ルアラニ
ンに対して０．５重量倍、好ましくは１重量倍以上であ
る。使用量の上限については特に制限はないが、あまり
過剰に用いると、容積効率が小さく、また、反応後の濃
縮操作に多くのエネルギーを要し好ましくな（・。通常
、２０重量倍以下で使用される。In this reaction, the amount of methanol used is
The amount is 0.5 times by weight, preferably 1 times or more by weight relative to formyl-α-L-aspartyl-L-7 2-2-2-alanine. There is no particular restriction on the upper limit of the amount to be used, but if it is used in excess, the volumetric efficiency will be low and the concentration operation after the reaction will require a lot of energy, which is undesirable. be done.

また、塩化水素の使用量は、原料のＮ−ホルミル−α−
Ｌ−７スバルチルーし一７エニルアラニンに対して０．
８当量以上、好ましくは１当量以上である。使用量の上
限に特に制限はな（・が、あまり過剰に用いることはペ
プチド結合の開裂のおそれが生じるので、通常、５当量
以下で使用される。In addition, the amount of hydrogen chloride used is based on the raw material N-formyl-α-
0.0 for L-7 Subarthyl-17-enylalanine.
It is 8 equivalents or more, preferably 1 equivalent or more. There is no particular upper limit to the amount to be used (but if too much is used, there is a risk of cleavage of the peptide bond, so it is usually used in an amount of 5 equivalents or less).

塩化水素の使用量が０．８当量より少ないと、脱ホルミ
ル化反応ならびにジエステル化反応が十分に起こらない
。If the amount of hydrogen chloride used is less than 0.8 equivalent, the deformylation reaction and the diesterization reaction will not occur sufficiently.

以上のような反応によって、Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−ア
スパルチル−Ｌ−フェニルアラニンがらα−Ｌ−７スバ
ルチルーし一フェニルアラニンジメチルエステルを主生
成物として生成させる。°この生成物は塩酸塩の形態で
メタノールに溶解している。Through the above reaction, N-formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine is converted into α-L-7 subaltyl-monophenylalanine dimethyl ester as the main product. °This product is dissolved in methanol in the form of hydrochloride.

次にこの生成したα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニル
アラニンジメチルエステルを塩酸中で加水分解すること
によりα−ＡＰＭを製造する。この加水分解工程はα−
Ｌ−アスパルチル−Ｌ７ｚニルアラニンジメチルエステ
ルを含有する反応生酸液中の溶媒メタノールを留去した
のち、塩酸水溶液を装入して実施される。Next, α-APM is produced by hydrolyzing the generated α-L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester in hydrochloric acid. This hydrolysis step is α-
After distilling off the solvent methanol in the reaction raw acid solution containing L-aspartyl-L7z nylalanine dimethyl ester, the reaction is carried out by charging an aqueous hydrochloric acid solution.

α−Ｌ−７スバルチルーし一フェニルアラニノジメチル
エステル生成の反応溶液からの溶媒のメタノールの留去
の方法としては、反応溶液を減圧下に濃縮乾固するか、
または譲縮途中で適当量の水を加えて、引きつづき減圧
下に残存メタノールを留去することによって行われる。The method for distilling off the methanol solvent from the reaction solution for producing α-L-7 subaltiyl-monophenylalaninodimethyl ester is to concentrate the reaction solution to dryness under reduced pressure,
Alternatively, it can be carried out by adding an appropriate amount of water during the conversion and subsequently distilling off the remaining methanol under reduced pressure.

ここに得られたα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルア
ラニノジメチルエステル塩酸塩ある（・はこのものの水
溶液に所定量の塩酸を加えて該α〜Ｌ−アスパルチル−
Ｌ−フェニルアラニンジメチルエステルからα−ＡＰＭ
を製造する。この際、必要に応じて新たにメタノールを
添加してもよ（・。The α-L-aspartyl-L-phenylalaninodimethyl ester hydrochloride obtained here is the α-L-aspartyl-L-aspartyl-
α-APM from L-phenylalanine dimethyl ester
Manufacture. At this time, additional methanol may be added if necessary.

この加水分解工程で使用する塩酸量は原料のＮ−ホルミ
ル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−７エ二ルアルアラニン
して０．５〜１０モル比、好ましくは１〜５モル比であ
る。また順／濃度としては系内に残存する水を考慮して
［ＨＣ＃／（水＋ＨＣｌ）〕×１００で規定される濃度
として３〜３０重量％、好ましくは５〜２５重量％の遊
離塩酸濃度になるようにする。この範囲に調整すること
によってα−ＡＰＭ塩「俊塩が沈殿として析出し易くな
り、高（・α−ＡＰＭ収率を得ることができる。また、
このα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニ／ジメ
チルエステルの塩酸加水分解によるα−ＡＰＭの製造は
、前記のようにメタノールの共存下に実施することもで
きる。この場合、メタノールの使用量としては原料のＮ
−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラ
ニン基準で５モル比以下の範囲で使用するのがα−ＡＰ
Ｍの収率の点から好ましい。The amount of hydrochloric acid used in this hydrolysis step is 0.5 to 10 molar ratio, preferably 1 to 5 molar ratio, based on the raw material N-formyl-α-L-aspartyl-L-7 enylaralalanine. In addition, the order/concentration is 3 to 30% by weight, preferably 5 to 25% by weight of free hydrochloric acid concentration as defined by [HC#/(water + HCl)] x 100 considering the water remaining in the system. so that it becomes By adjusting to this range, the α-APM salt becomes easy to deposit as a precipitate, and a high α-APM yield can be obtained.
The production of α-APM by hydrochloric acid hydrolysis of α-L-aspartyl-L-phenylalani/dimethyl ester can also be carried out in the coexistence of methanol as described above. In this case, the amount of methanol used is
α-AP is used in a molar ratio of 5 or less based on formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine.
It is preferable from the viewpoint of the yield of M.

加水分解反応の温度は０〜５０℃、好ましくは１０〜４
０℃である。反応温度が０℃より低いと、加水分解反応
が著しく緩慢となり、反応完結までに著しく長時間を必
要とし、工業的には好ましくなく、また５０℃より高し
・と、α−ＡＰＭ塩酸塩の溶解度が上がり、α−ＡＰＭ
塩酸塩が沈殿として析出しにくく、α−ＡＰＭ収率が低
下すると同時にペプチド結合の開裂等の副反応も生じ易
く、好ましくない。反応時間は１〜７日間でこれによっ
てα−ＡＰＭが高収率に生成する。The temperature of the hydrolysis reaction is 0 to 50°C, preferably 10 to 4°C.
It is 0°C. If the reaction temperature is lower than 0°C, the hydrolysis reaction will be extremely slow and it will take a long time to complete the reaction, which is not preferred industrially. Increased solubility and α-APM
The hydrochloride salt is difficult to precipitate, which lowers the α-APM yield and also tends to cause side reactions such as cleavage of peptide bonds, which is not preferable. The reaction time is 1 to 7 days, and α-APM is produced in high yield.

α−Ｌ−７スバルチルーし一フェニルアラニンジメチル
エステルの塩酸中での加水分解によって生成したα−Ａ
ＰＭは塩酸塩として系外に析出する。α-A produced by hydrolysis of α-L-7 subaltiyl monophenylalanine dimethyl ester in hydrochloric acid
PM precipitates out of the system as hydrochloride.

したがって、反応後、α−ＡＰＭを単離するには、反応
混合物を必要に応じて冷却し、Ｐ別することにより、先
づα−ＡＰＭ塩酸塩を単離する。その後このα−ＡＰＭ
塩酸塩を水中、溶解或いは懸濁状態で水酸化ナトリウム
または炭酸ナトリウム等のアルカリでα−ＡＰＭの等電
点（ｐＨ＝４．８）に中和することによって遊離のα−
ＡＰＭを得ることができる。Therefore, in order to isolate α-APM after the reaction, α-APM hydrochloride is first isolated by cooling the reaction mixture as necessary and separating the P from the reaction mixture. Then this α-APM
Free α-
APM can be obtained.

この加水分解反応にお〜・ては目的物であるα−ＡＰＭ
のをまかにα−Ｌ−アスパルチル−し一フェニルアラニ
ンおよびＮ−Ｌ−（α−アミノ−β−メトキシカルボニ
ルプロピオニル）Ｌフェニルアラニンの副生も起るが、
α−ＡＰＭの塩酸塩が反応系に難溶のものとして沈殿析
出し、しかもエステルの加水分解によってメタノールの
生成モ起り、そのため反応液中のこれらの副生成物の量
は一定レベルを越えることはなく反応系内に溶解してお
り、α−ＡＰＭのみが逐次生成し増加してくる。そして
最終的にα−ＡＰＭの高収率が達成されるものである。In this hydrolysis reaction, the target product α-APM
However, by-products of α-L-aspartyl-phenylalanine and N-L-(α-amino-β-methoxycarbonylpropionyl)L-phenylalanine also occur.
The hydrochloride of α-APM precipitates as a poorly soluble substance in the reaction system, and methanol is also generated by hydrolysis of the ester, so the amount of these byproducts in the reaction solution never exceeds a certain level. α-APM is not dissolved in the reaction system, and only α-APM is successively produced and increased. Finally, a high yield of α-APM is achieved.

（実施例） 以下、実施例によって本発明の詳細な説明する。(Example) Hereinafter, the present invention will be explained in detail with reference to Examples.

尚、実施例中の高速液体クロマトグラフィーの分析条件
は次の通りである。The analysis conditions for high performance liquid chromatography in Examples are as follows.

高速液体クロマトグラフィーでの分析条件カラム：ＹＭ
ＣｐａｃｋＡ−３１２６ｍ罵φＸ１５０ｍ（充填剤：　
ＯＤＳ　） 移動相：　０．００５Ｍ／ｌヘプタンスルホン酸ナトリ
ウム水溶液：メタノール−６５：３５ （体積比） （リン酸でｐＨ＝２．５に調整） 流量：１ｍｌ／ｍｉｎ 検出器：紫外分光光度計 実施例１ 塩化水素５．５１を溶解したメタノール溶、Ｉ２ｓ。Analysis conditions for high performance liquid chromatography Column: YM
Cpack A-3126m φX150m (filler:
ODS) Mobile phase: 0.005 M/l sodium heptane sulfonate aqueous solution: methanol - 65:35 (volume ratio) (Adjusted to pH = 2.5 with phosphoric acid) Flow rate: 1 ml/min Detector: Ultraviolet spectrophotometer implementation Example 1 A methanol solution containing 5.5 liters of hydrogen chloride, I2s.

ｍｌ中ＫＮ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル、−Ｌ−
フェニルアラニン３０．８　ｙ−（０，１モル）ヲ加エ
テ溶解し室温で２００時間反応せた。反応溶液の一部を
とり高速液体クロマトグラフィーにて分析の結果α−Ｌ
−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンジメチルエステ
ルの生成率は１００％であった。KN-formyl-α-L-aspartyl, -L- in ml
30.8 Y-(0.1 mol) of phenylalanine was dissolved in the solution and reacted at room temperature for 200 hours. A portion of the reaction solution was analyzed using high performance liquid chromatography and α-L
The production rate of -aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester was 100%.

反応溶液を減圧下に濃縮乾固した。この残有に水１６．
７Ｐ及び３５％塩酸１２．５Ｐを加え２０〜２５°Ｃで
４日間反応させた。その後、反応混合物を０〜５℃に冷
却し３時間かきまぜたのち析出して（・るα−ＡＰＭ塩
酸塩を戸別し、１規定の冷塩酸で洗浄した。α−ＡＰＭ
塩酸塩の湿ケーキ収量３６．２？、高速液体クロマトグ
ラフィーでの分析の結果、α−ＡＰＭ含有量（遊離換算
）は２２．ＩＰ（収率７５．２％／Ｎ−ホルミルーα−
Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンノであった。The reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure. Water 16.
7P and 12.5P of 35% hydrochloric acid were added and reacted at 20-25°C for 4 days. Thereafter, the reaction mixture was cooled to 0 to 5°C and stirred for 3 hours, and α-APM hydrochloride was precipitated from door to door and washed with 1N cold hydrochloric acid.α-APM
Hydrochloride wet cake yield 36.2? As a result of high performance liquid chromatography analysis, the α-APM content (free equivalent) was 22. IP (yield 75.2%/N-formyl α-
It was L-aspartyl-L-phenylalanine.

このα−ＡＰＭ塩酸塩の湿ケーキを水２２０　、ｎｌに
懸濁し１０％水酸化ナトリウムで中和した（ｐＨ−４，
８）。０〜５℃に冷却し、析出した遊離のα−ＡＰＭを
戸別し、冷水で洗浄後真空乾燥した。α−ＡＰＭ収１１
２０．３７、収率６９０％Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−アス
ノ４ルチルーし−フェニルアラニン〔α〕賃＝＋　１５
．９’　（Ｃ二４．１５規定ギ酸） 高速液体クロマトグラフィーでの分析結果はα−ＡＰＭ
Ｏ外に不純物は認められなかった。This wet cake of α-APM hydrochloride was suspended in 220 ml of water and neutralized with 10% sodium hydroxide (pH-4,
8). The mixture was cooled to 0 to 5°C, and the precipitated free α-APM was separated from each other, washed with cold water, and then dried in vacuum. α-APM yield 11
20.37, yield 690% N-formyl-α-L-asno-4-ruty-phenylalanine [α] = + 15
．． 9' (C24.15 normal formic acid) Analysis result by high performance liquid chromatography is α-APM
No impurities were observed outside of O.

実施例２ メタノール９ＱｍＪに塩化水素ガス４．４Ｆを溶解し、
この溶液中にＮ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ
−フェニルアラニン３０．８７　（０，１モル）を加え
、４０〜４５°Ｃで４時間反応させた。反応ｉｔ高速液
体クロマトグラフィーにて分析の結果、α−Ｌ−７スハ
ルチルーＬ−フェニルアラニンジメチルエステルの生成
率は９５％であった。反応溶液を減圧下に濃縮乾固した
。次にこの残有に水２８７ｚ及び濃塩酸２０．９？を加
えて溶解し３０°Ｃで反応を行った。反応開始２時間後
にα−ＡＰＭ塩酸塩の種結晶を添加しさらに２日間同温
度で反応を行った。その後、反応混合物を０〜５°Ｃに
冷却し同温度で２時間かきまぜたのち、析出して℃・る
α−ＡＰＭ塩酸塩の沈殿を戸別し５℃以下に冷却された
５％塩酸水溶液で洗浄することによりα−ＡＰＭ塩酸塩
の湿ケーキ４５．１５’を得た。このものを高速液体ク
ロマトグラフィーで分析の結果、α−ＡＰＭ含有量（遊
離換算）は２４．１　ｙ−（収率８２．１％／Ｎ　−ホ
ルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン
）であった。このα−ＡＰＭ塩酸塩の湿ケーキを水２５
０　ｍｌに加えて加温溶解し２０％炭酸ナトリウム水溶
液でｐＨ＝４．８に中和し５℃に冷却して析出した遊離
のα−ＡＰＭを戸別し冷水で洗浄後真空乾燥した。α−
ＡＰＭ収量２２．０ξ収率７４．８％／Ｎ−ホルミルー
α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン〔α’］
”　＝＋　１５．８°（Ｃ−４，１５規定ギ酸） 実施例３ 実施例２にお（・てα−Ｌ−アスパルチル−し一フェニ
ルアラニンジメチルエステルの加水分解の温度時間を２
０℃４日間とする以外は実施例２と全く同様に反応を行
うことによって収率８１８８％／Ｎ−ホルミル−α−Ｌ
−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンでα−ＡＰＭ塩
酸塩を得た。中和後の遊離α−ＡＰＭ）収量は２ｔＢ（
収率７３５％／Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−
し−フェニルアラニン）であった。Example 2 Hydrogen chloride gas 4.4F was dissolved in methanol 9QmJ,
In this solution, N-formyl-α-L-aspartyl-L
- 30.87 (0.1 mol) of phenylalanine was added and reacted at 40-45°C for 4 hours. As a result of analysis by reaction IT high performance liquid chromatography, the production rate of α-L-7 suharthyl-L-phenylalanine dimethyl ester was 95%. The reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure. Next, add 287 z of water and 20.9 z of concentrated hydrochloric acid to this residue. was added and dissolved, and the reaction was carried out at 30°C. Two hours after the start of the reaction, seed crystals of α-APM hydrochloride were added, and the reaction was continued for another two days at the same temperature. Thereafter, the reaction mixture was cooled to 0 to 5°C and stirred at the same temperature for 2 hours, and the precipitated α-APM hydrochloride was separated from each other in 5% aqueous hydrochloric acid solution cooled to below 5°C. By washing, a wet cake of α-APM hydrochloride 45.15' was obtained. As a result of analyzing this product by high performance liquid chromatography, the α-APM content (free equivalent) was 24.1 y- (yield 82.1%/N-formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine). there were. This α-APM hydrochloride wet cake was mixed with 25 ml of water.
The solution was added to 0 ml and dissolved by heating, neutralized to pH=4.8 with a 20% aqueous sodium carbonate solution, cooled to 5° C., and the precipitated free α-APM was separated from each other, washed with cold water, and then vacuum-dried. α−
APM yield 22.0ξYield 74.8%/N-formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine [α']
” = + 15.8° (C-4,15 normal formic acid)
The yield was 8188%/N-formyl-α-L by carrying out the reaction in exactly the same manner as in Example 2 except that the reaction was carried out at 0°C for 4 days.
α-APM hydrochloride was obtained with -aspartyl-L-phenylalanine. The yield of free α-APM after neutralization is 2 tB (
Yield 735%/N-formyl-α-L-aspartyl-
phenylalanine).

実施例４〜８ Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−７エニルア
ラニン３０．８％　（０，１モル）を用（・て実施例２
と同様にしてα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラ
ニンジメチルエステルとし、得られた反応溶液を減圧下
に濃縮乾固した。この残有に塩酸及び場合によってメタ
ノールを添加して、それらの量を変えてα−Ｌ−アスパ
ルチル−Ｌ−フェニルアラニンジメチルエステルを加水
分解してα−ＡＰＭの製造を行った結果を表−１に示す
。Examples 4 to 8 Example 2 using 30.8% (0.1 mol) of N-formyl-α-L-aspartyl-L-7 enylalanine
α-L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester was obtained in the same manner as above, and the resulting reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure. Table 1 shows the results of hydrolyzing α-L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester and producing α-APM by adding hydrochloric acid and, if necessary, methanol to this residue and varying their amounts. show.

尚、α−ＡＰＭ塩酸塩の単離は反応後０〜５℃に冷却し
て戸別、そして冷１規定塩酸で洗浄することによった。The α-APM hydrochloride was isolated after the reaction by cooling to 0 to 5° C. and washing with cold 1N hydrochloric acid.

また、遊離α−ＡＰＭはα−ＡＰＭ塩酸塩を水に溶解ま
たはけんだ（し２０％炭酸ナトリウム水溶液で中和し、
０〜５℃に冷却後、戸別、冷水洗浄し、真空乾燥するこ
とによって得た。Free α-APM can be obtained by dissolving or suspending α-APM hydrochloride in water (and neutralizing it with a 20% aqueous sodium carbonate solution,
After cooling to 0 to 5°C, the samples were washed with cold water and vacuum dried.

実施例９ メタノール’ＨＯＩｒｒｌ中に塩化水素ガス２７．２！
？を溶解した。この溶液中にＮ−ホルミル−β−Ｌ−ア
スパルチル−Ｌ−フェニルアラニンを５％含有ス６Ｎ−
ホルミルーα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニ
ン１３５．５　Ｐ　（０，４４モル）を塀え４５〜５０
℃で４時間反応させた。反応溶液を高速液体クロマトグ
ラフィーで分析の結果α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェ
ニルアラニンの生成は９５％以上であった。反応溶液を
減圧下に濃縮液の重量がおよそ２００５’になるまで濃
縮した。次に水１５０１を加えＪび減圧下に濃縮液の重
量が２００１になるまで濃縮し、溶媒のメタノールを留
去した。次にメタノール１４．１７、水４４１及び３５
％塩酸９２．０％を加え、さらにα−ＡＰＭ塩酸塩の種
結晶を添加し３０°Ｃで３日間反応させた。その後反応
混合物を０〜５℃で３時間かきまぜたのち、析出して（
・るα−ＡＰＭ塩酸塩をＰ別し、５℃以下に冷却された
１規定塩酸で洗浄することによりα−ＡＰＭ塩酸塩の湿
ケーキ１７０．６ｙ−を得た。高速液体クロマトグラフ
ィー分析の結果、α−ＡＰＭ含有量（遊離換算）は１０
２　Ｐ　（収率８３．０％／Ｎ−ホルミルーα−Ｌ−７
スバルチルーし一フェニルアラニン）であった。このα
−ＡＰＭ塩酸塩を水１１にケンダクさせ２０〜２５℃で
１０％水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ４，８に中和した
。０〜５℃に冷却しｒ過、冷水洗浄後、真空乾燥するこ
とにより遊離α−ＡＰＭ　９２．５　Ｐ　（収率７５．
３％／Ｎ−ホルミルーα−Ｌ−７スバルチルーし一フェ
ニルアラニン）ヲ得た。〔α）　　＝１６．１°（Ｃ＝
４．１５規定ギ酸）（発明の効果） 本発明の方法によるα−ＡＰＭ製造方法は、次のような
利点を有する。すなわち、１）原料のＮ−ホルミル−α
−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルを アラニンはＬ−フェニルアラニン／使用するものであり
、安定性の問題があるし一フェニルアラ二つ ンメチルエステルＸ使用を回避でき、さらに工程１が簡
略化できる、２）　　Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−７スパル
チルーＬ−フェニルアラニン脱ホルミル化ならびにジエ
ステル化反応はこれらをメタノールに溶解して反応させ
るので反応操作性に曖れ、例えば攪拌等のトラブルがな
い、３）α−ＡＰＭが高収率で得られる等の利点を有す
る。このように、本発明の方法はα−Ｌ−アスパルチル
−し一フェニルアラニンメチルエステルの製造方法とし
て工業的意義が大きいものである。Example 9 Hydrogen chloride gas in methanol'HOIrrl 27.2!
? was dissolved. This solution contains 5% N-formyl-β-L-aspartyl-L-phenylalanine.
Formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine 135.5 P (0.44 mol) 45-50
The reaction was carried out at ℃ for 4 hours. Analysis of the reaction solution by high performance liquid chromatography revealed that the production of α-L-aspartyl-L-phenylalanine was 95% or more. The reaction solution was concentrated under reduced pressure until the weight of the concentrate was approximately 2005'. Next, 1,501 liters of water was added, and the mixture was concentrated under reduced pressure until the weight of the concentrate became 2,001 ml, and methanol as a solvent was distilled off. Next, methanol 14.17, water 441 and 35
% hydrochloric acid (92.0%) was added, seed crystals of α-APM hydrochloride were further added, and the mixture was reacted at 30° C. for 3 days. Thereafter, the reaction mixture was stirred at 0 to 5°C for 3 hours, and then precipitated (
- The α-APM hydrochloride was separated from P and washed with 1N hydrochloric acid cooled to below 5°C to obtain 170.6y- of a wet cake of α-APM hydrochloride. As a result of high performance liquid chromatography analysis, the α-APM content (free equivalent) was 10
2P (yield 83.0%/N-formyl α-L-7
Subarthyl-phenylalanine). This α
-APM hydrochloride was dissolved in 11 parts of water and neutralized to pH 4.8 with a 10% aqueous sodium hydroxide solution at 20-25°C. After cooling to 0 to 5°C, filtration, washing with cold water, and vacuum drying, 92.5 P of free α-APM (yield 75.
3%/N-formyl-α-L-7subarthyl-phenylalanine) was obtained. [α) = 16.1° (C =
4.15N Formic Acid) (Effects of the Invention) The method for producing α-APM according to the method of the present invention has the following advantages. That is, 1) the raw material N-formyl-α
-L-aspartyl-L-phenyl is used as alanine/L-phenylalanine/L-phenylalanine/alanine, which has a stability problem, but it is possible to avoid the use of one-phenyla-di-done methyl ester X, and furthermore, process 1 can be simplified. ) N-formyl-α-L-7 spalty-L-phenylalanine deformylation and diesterification reactions are performed by dissolving them in methanol, so there is no ambiguity in reaction operability, such as troubles such as stirring, 3) α - It has advantages such as APM can be obtained in high yield. As described above, the method of the present invention has great industrial significance as a method for producing α-L-aspartyl-monophenylalanine methyl ester.

Claims (1)

【特許請求の範囲】[Claims] １）Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニ
ルアラニンをメタノ−ル中塩化水素存在下に処理してα
−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンジメチルエ
ステルを主生成物として生成させたのち、このα−Ｌ−
アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンジメチルエステル
を塩酸中、必要に応じてメタノール存在下に加水分解す
ることを特徴とするα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニ
ルアラニンメチルエステルの製造法1) N-formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine is treated in methanol in the presence of hydrogen chloride to obtain α
After producing -L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester as the main product, this α-L-
A method for producing α-L-aspartyl-L-phenylalanine methyl ester, which comprises hydrolyzing aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester in hydrochloric acid, optionally in the presence of methanol.