JPS61225198A - Production of alpha-l-aspartyl-l-phenylalaninemethyl ester or hydrochloride thereof - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To obtain industrially advantageously the titled compound useful as an artificial sweetener with low calorie, by condensing N-formyl-L-aspartic anhydride with L-phenylalanine, and bringing the reaction product into contact with hydrochloric acid in the presence of methanol without isolating the reaction product. CONSTITUTION:N-Formyl-L-aspartic anhydride is condensed with L-phenylalanine in water at 7-12pH, to give N-formyl-alpha-L-aspartyl-L-phenylalanine. The reaction product is not isolated, the reaction mixture is successively acidified with hydrochloric acid, and brought into contact with hydrochloric acid in the presence of methanol, to precipitate alpha-L-aspartyl-L-phenylalaninemethyl ester hydrochloride. The precipitate is separated, and optionally the hydrochloride is neutralized, to give the aimed compound.

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ　フェニルアラニ
ンメチルエステルまたはその塩酸塩の製造法に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION (Industrial Application Field) The present invention relates to a method for producing α-L-aspartyl-L phenylalanine methyl ester or its hydrochloride.

本発明ノα−Ｌ−アスパルチル−ＴＪ　−フェニルアラ
ニンメチルエステル（以下、α−ＡＰ’Ｍ、［と略ス）
は“アスパルテーム“の慣用名で称される化合物で人工
甘味剤として有用な物質である。α-L-Aspartyl-TJ-phenylalanine methyl ester of the present invention (hereinafter referred to as α-AP'M, [abbreviated as S)]
is a compound commonly known as "aspartame" and is a substance useful as an artificial sweetener.

しよ糖のおよそ２００倍の甘味度を有し、質的にもしよ
糖に類似しており、しかも低カロリーであるため、ダイ
エツト甘味剤として最近その需要が著しく増大している
。It has about 200 times the sweetness of sucrose, is qualitatively similar to sucrose, and is low in calories, so its demand as a dietary sweetener has increased significantly recently.

（従来技術およびその問題点） α−ＡＰＭの製造法に関しては、既に数多くの方法が開
示されている。(Prior Art and its Problems) Many methods have already been disclosed for producing α-APM.

すなわち、（１）アスパラギン酸無水物の塩酸塩とＬ−
フェニルアラニンメチルエステルヲ縮合スる方法（例え
ば、特公昭５ｌ−４００６９）、（２）Ｎ−保護アスパ
ラギン酸無水物とＬ−フーニルアラニンメチルエステル
を縮合し、つづいて脱保護する方法（例えば、特開昭４
６−１３７０　、特開昭５１−−１．１．３　ｓ　４１
．　）、（３）Ｎ−保護アスパラギン酸−β−ベンジル
エステルとＬ−フェニルアラニンメチルエステルとを縮
合剤の存在下に反応し、つづいて脱保護して製造する方
法（特開昭５９−１．３０８４．６　）、（４）Ｎ−カ
ルボギンアスパラギン酸無水物とＬ−フェニルアラニン
メチルエステルと反応させる方法（特開昭４．８−９６
５５７）など種々の方法がある。That is, (1) aspartic anhydride hydrochloride and L-
A method of condensing phenylalanine methyl ester (for example, Japanese Patent Publication No. 51-40069), (2) a method of condensing N-protected aspartic acid anhydride and L-phenylalanine methyl ester, and then deprotecting it (for example, Japanese Patent Publication No. 51-40069). Kaisho 4
6-1370, Japanese Patent Publication No. 51-1.1.3 s 41
．． ), (3) A method for producing by reacting N-protected aspartic acid-β-benzyl ester and L-phenylalanine methyl ester in the presence of a condensing agent, followed by deprotection (Japanese Patent Application Laid-Open No. 1983-13084 .6), (4) A method of reacting N-carboginic aspartic anhydride with L-phenylalanine methyl ester (Japanese Patent Application Laid-open No. 48-96
There are various methods such as 557).

しかしながら、これらの方法はいずれも一方の反応原料
としてＬ−フェニルアラニンメチルエステルを用いるも
のであり、Ｌ−フェニルアラニンをメチルエステル化し
て、アスパラギン酸の活性誘導体との反応につなぐまで
の工程が繁雑である。However, all of these methods use L-phenylalanine methyl ester as one of the reaction raw materials, and the steps from converting L-phenylalanine into methyl ester to connecting it to the reaction with an active derivative of aspartic acid are complicated. .

その上、本発明者らの検討結果によれば、このＬ−ツー
ニルアラニンメチルエステルは遊離の形態では溶液中で
２分子縮合して環化し、２，５−ジベンジルジケトピペ
ラジンに変化し易い化合物であることがわかった。この
ことはα−Ａ、　Ｐ　Ｍ製造において種々の厄介な問題
を引き起す原因になるものである。Furthermore, according to the study results of the present inventors, in the free form, this L-thunylalanine methyl ester condenses two molecules in a solution and cyclizes, changing into 2,5-dibenzyldiketopiperazine. It was found that it is a simple compound. This causes various troublesome problems in the production of α-A and PM.

したがって、α−Ａ　Ｐ　Ｍの製造に関してはト記欠点
のない、すなわちＬ−フェニルアラニンメチルエステル
を用いない方法の開発が望まれている。Therefore, it is desired to develop a method for producing α-APM that does not have the above disadvantages, that is, does not use L-phenylalanine methyl ester.

ところで、］、−フェニルアラニンメチルエステルを用
いない方法としてはＮ−ホルミルアスパラギン酸無水物
を氷酢酸中、Ｌ−フェニルアラニント縮合してＮ−ホル
ミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンを
製造し、次に脱ホルミル化してα−Ｌ−アスパルチル−
Ｌ−フェニルアラニンとしたのち、該化合物をメタ、ノ
ール中でエステル化する方法（特公昭５５−２６１．３
３号）、およびα−Ｌ−アスパルチル＝Ｌ−フェニルア
ラニンをエステル化してα−Ａ、　Ｐ　Ｍを製造する工
程の改良方法（特開昭５３−８２７５２号）が知られて
いる。By the way, as a method that does not use -phenylalanine methyl ester, N-formyl-aspartic anhydride is condensed with L-phenylalanine in glacial acetic acid to produce N-formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine. Next, α-L-aspartyl-
A method of converting L-phenylalanine into esterification in methanol and alcohol (Japanese Patent Publication No. 55-261.3)
No. 3) and a method for improving the process of producing α-A, PM by esterifying α-L-aspartyl=L-phenylalanine (Japanese Patent Application Laid-open No. 82752/1982) are known.

しかしながら、前者の方法はエステル化反応を非水系に
近い状態で実施するために反応選択性がなく、目的のエ
ステル化のみならず、アスパラギン酸側のβ−カルボン
酸基へのエステル化やジエステル化反応も多量に起り、
そのためにα−ＡＰＭ収率が低いという欠点がある。ま
た後者の方法はエステル化反応を水の共存下に行ってα
−ＡＰＭの選択率を高めているが、α−ＡＰＭ単離収率
はたかだか５０〜６０係（対α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ
−フーニルアラニン）であり、収率面で必ずしも十分と
は言えない。However, the former method lacks reaction selectivity because the esterification reaction is carried out in a nearly non-aqueous state, and it is not only possible to perform the desired esterification, but also to esterify or diesterify the β-carboxylic acid group on the aspartic acid side. A large number of reactions occur,
Therefore, there is a drawback that the yield of α-APM is low. In addition, the latter method performs the esterification reaction in the coexistence of water and α
-Although the selectivity of APM is increased, the isolation yield of α-APM is at most 50-60% (vs. α-L-aspartyl-L).
-funylalanine), and the yield is not necessarily sufficient.

Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルヲ用いない別の方
法として、Ｌ−アスパラギン酸−β−メチルエステルの
Ｎ−カルボキシ酸無水物とＬ−フェニルアラニンを縮合
しα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン−β−
メチルエステルをＭｍし、この化合物をメタノールを含
有する塩酸水溶液中で分子内エステル交換反応させてα
−ＡＰＭを製造する方法が最近開示された（特開昭５９
−２２５１５２号、特開昭５９−２２５１５３号）。Another method that does not use L-phenylalanine methyl ester is to condense the N-carboxylic acid anhydride of L-aspartic acid-β-methyl ester with L-phenylalanine to obtain α-L-aspartyl-L-phenylalanine-β-.
Mm the methyl ester, and intramolecular transesterification of this compound in an aqueous hydrochloric acid solution containing methanol to obtain α.
- A method for manufacturing APM has recently been disclosed (Japanese Patent Application Laid-Open No. 1983-1973)
-225152, JP-A-59-225153).

しかしながら、この方法はアスパラギン酸のβ−メチル
エステルを製造するエステル化反応が選択性に乏しく収
率が低いこと、またこのものをホスグンと反応させて製
造されるＮ−カルボキシ酸無水物が塩基との接触等によ
り重合し易い性質があるために、工業的には取扱が難し
いなどの欠点を有する方法である。However, in this method, the esterification reaction to produce β-methyl ester of aspartic acid has poor selectivity and yield is low, and the N-carboxylic acid anhydride produced by reacting this with phosgun is a base. This method has the disadvantage that it is difficult to handle industrially because it tends to polymerize due to contact with other substances.

このように従来のα−Ａ、　Ｐ　Ｍの製造法では中間原
料の安定性、収率あるいは安全性等の点で一長一短があ
り、必ずしも効率のよい製造法がないのが現状である。As described above, conventional methods for producing α-A and PM have advantages and disadvantages in terms of stability, yield, safety, etc. of intermediate raw materials, and the current situation is that there is no necessarily efficient production method.

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、前記のようなα−ＡＰＭ製造技術の現状
を鑑み、また前述したような溶液中での安定性に問題の
あるＬ−ツーニルアラニンメチルエステルを用いずに、
さらに効率よくα−ＡＰＭを製造する方法を鋭意検討し
た。とくに、α−ＡＰＭの製造技術は前述のように一般
に原料からα−Ａ　Ｐ　Ｍに至るまでの工程が長いこと
を考慮して、できるだけ工程を簡素化して効率よくα−
ＡＰＭを製造する方法について検討を重ねた。(Means for Solving the Problems) In view of the current state of α-APM manufacturing technology as described above, the present inventors have discovered that L-tunylalanine, which has the problem of stability in solution as described above, without using methyl ester,
Furthermore, we conducted extensive research into methods for efficiently producing α-APM. In particular, the production technology for α-APM takes into account that the process from raw materials to α-APM is generally long as mentioned above, and the process is simplified as much as possible to efficiently produce α-APM.
We have repeatedly considered methods for manufacturing APM.

本発明者らは、先にＮ−ホルミル−し−アスパラギン酸
無水物とＬ−フーニルアラニントノ縮合が水溶媒中で不
純物の副生をほとんど伴うことなく、しかも縮合生成物
はβ−異性体（Ｎ−ホルミル−β−Ｌ−７スパルチルー
Ｌ−フェニルアラニン）よりもα−異性体（Ｎ−ホルミ
ル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン）カ
圧倒的て多く生成することを見出し、α−ＡＰＭ製造の
ための重要な中間体であるＮ−ホルミル−α−り一アス
パルチルーＬ−フェニルアラニンノ改良すれた製造法を
見出し、既に出願した（特願昭５９−２６４６１８号）
。The present inventors have previously demonstrated that the tonocondensation of N-formyl-di-aspartic acid anhydride and L-funylalanine was carried out in an aqueous solvent with almost no by-product of impurities, and that the condensation product was a β-isomer. It was discovered that the α-isomer (N-formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine) was produced in far greater amounts than the α-isomer (N-formyl-β-L-7spartyl-L-phenylalanine), and α-APM We have discovered an improved method for producing N-formyl-α-ri-aspartyl-L-phenylalanine, which is an important intermediate for the production, and have already filed an application (Japanese Patent Application No. 264,618/1982).
.

さらに、この知見をもとにしてα−ＡＰＭの製造法を鋭
意検討し、Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物と
Ｌ−ツーニルアラニンとを水中で反応させたのち、縮合
生成物を反応系より単離することなく、該反応混合物を
連続的にα−Ａ　Ｐ　Ｍまで一つの反応器で行える方法
を見出すに至ろた。Furthermore, based on this knowledge, we intensively investigated the production method of α-APM, and after reacting N-formyl-L-aspartic acid anhydride and L-tunylalanine in water, we reacted the condensation product. We have now discovered a method that allows the reaction mixture to reach α-A PM continuously in one reactor without isolation from the system.

原料から目的のα−Ａ　Ｐ　Ｍまで多段の反応工程を一
つの反応器で行う場合には、一般的には各反応に付随す
る種々の夾雑物が、目的の反応および最終のα−ＡＰＭ
の品質に望ましくない影響を及ぼすととが考えられる。When multiple reaction steps from raw materials to the target α-APM are carried out in one reactor, various impurities accompanying each reaction generally interfere with the target reaction and the final α-APM.
It is thought that this may have an undesirable effect on the quality of the product.

と（にＮ−ホルミル−Ｌ　−アスパラギン酸無水物とＬ
−フェニルアラニンとの縮合に際して、目的のα−異性
体のほかに２０係以上の収率でβ−異性体が副生じ、し
かもまたこの縮合反応混合物中にはＮ−ホルミル−し−
アスパラギン酸無水物が、羊に水と反応して開環したＮ
−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸および場合によっては
未反応のＬ−フェニルアラニンなどを含有し、比較的複
雑な系を形成していることが多い。それにも拘らず、本
発明者らの検討結果によれば、Ｎ−ホルミル−Ｌ−アス
パラギン酸無水物とＬ−フェニルアラニンとを水中で反
応させて得られた反応混合物をメタノールの存在下に塩
酸と接触させるごとにより、縮合生成物の脱ホルミル化
反応およびエステル化反応が温和な条件下に進行し、し
かも反応によって生成した種々の化合物のうちα−ＡＰ
Ｍのみが、種々の夾雑物の影響を受けることなく塩酸塩
として系外に析出してくることがわかり、これらの知見
に基づいて本発明を完成するに至った。and (N-formyl-L-aspartic anhydride and L
- During the condensation with phenylalanine, in addition to the desired α-isomer, the β-isomer is produced as a by-product with a yield of 20 coefficients or more, and furthermore, N-formyl-
Aspartic anhydride reacts with water to form a ring-opened N
It often contains -formyl-L-aspartic acid and, in some cases, unreacted L-phenylalanine, forming a relatively complex system. Nevertheless, according to the study results of the present inventors, a reaction mixture obtained by reacting N-formyl-L-aspartic acid anhydride and L-phenylalanine in water was mixed with hydrochloric acid in the presence of methanol. With each contact, the deformylation reaction and esterification reaction of the condensation product proceed under mild conditions, and among the various compounds produced by the reaction, α-AP
It was found that only M precipitates out of the system as a hydrochloride without being affected by various impurities, and based on these findings, the present invention was completed.

すなわち、本発明はＮ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸
無水物とＬ−ツーニルアラニンを水中、ｐｌ（７〜１２
の範囲で縮合したのち、生成したＮ−ホルミルーα−Ｌ
−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンをＩＮ−：１ｌ
ｆｆｆすることなく、引きつづき該反応混合物を塩酸酸
性としメタノールの存在下に塩酸と接触させ、析出した
α−ＡＰＭ塩酸塩を分離し、必要に応じて該塩酸塩を中
和することからなるα−ＡＰＭまたはその塩酸塩の製造
法である。That is, the present invention provides N-formyl-L-aspartic acid anhydride and L-thunylalanine in water at pl (7 to 12
After condensation in the range of , the generated N-formyl α-L
-Aspartyl-L-phenylalanine IN-: 1l
fff, the reaction mixture is subsequently made acidic with hydrochloric acid, brought into contact with hydrochloric acid in the presence of methanol, the precipitated α-APM hydrochloride is separated, and if necessary, the hydrochloride is neutralized. - A method for producing APM or its hydrochloride.

本発明の方法ではＮ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無
水物を原料として用いる。原料のＮ−ホルミル−Ｌ−ア
スパラギン酸無水物は公知の製造方法、例えば、Ｌ−ア
スパラギン酸をギ酸および無水酢酸と反応させることに
よって容易に製造することができる。In the method of the present invention, N-formyl-L-aspartic acid anhydride is used as a raw material. The raw material N-formyl-L-aspartic anhydride can be easily produced by a known production method, for example, by reacting L-aspartic acid with formic acid and acetic anhydride.

本発明の方法は、まず第１にＮ−ホルミル−Ｌ−アスパ
ラギン酸無水物とＬ−フェニルアラニンを水中ｐＨ７〜
１２の範囲で縮合し、Ｎ−ホルミル−α−Ｔ、−７スパ
ルチルーＬ−フェニルアラニンを生成させる。In the method of the present invention, first of all, N-formyl-L-aspartic acid anhydride and L-phenylalanine are mixed in water at pH 7 to
12 to produce N-formyl-α-T, -7 spartyl-L-phenylalanine.

Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物の使用量はＬ
−フェニルアラニンに対して理論量以北用いれば良く、
とくに過剰て用いる必要はない。The amount of N-formyl-L-aspartic anhydride used is L
- For phenylalanine, it is sufficient to use more than the stoichiometric amount,
There is no need to use it in excess.

本発明の方法において使用する溶媒の水の量は。The amount of solvent water used in the method of the present invention is:

縮合反応後引きつづいて実施するα−Ａ、　Ｐ　’Ｍ製
造８重量倍以下を用いるのがよい。勿論１０重量倍を越
える水中で縮合反応を実施しても反応上は特に問題はな
いが１反応後濃縮操作が必要となる。It is preferable to use not more than 8 times the weight of α-A and P'M in the subsequent production of α-A and P'M after the condensation reaction. Of course, even if the condensation reaction is carried out in water exceeding 10 times the weight, there is no particular problem in terms of the reaction, but a concentration operation is required after one reaction.

反応の方法は水にＬ−フェニルアラニンおよびアルカリ
を装入して溶解または懸濁した液中にＮ−ホルミルアス
パラギン酸無水物を少量づつ連続的にまたは分割して装
入する。この際反応溶液のｐ　Ｉ−（は７〜１２の範囲
に保つようにアルカリ水溶液を滴下して調整する。初め
にＬ−］−二ルアラニンを溶解または懸濁させるのに用
いるアルカリおよび反応時のｐＨ調整用のアルカリとし
ては、リチウム、ナトリウムまたはカリウムなどのアル
カリ金属の水酸化物、酸化物、炭酸塩または重炭酸塩、
あるいはカルシウムまたはマグネシウムなどのアルカリ
土類金属の水酸化物、酸化物、炭酸塩または重炭酸塩な
どが多用される。勿論、原料の無水物に対して不活性な
トリエチルアミンで代表される有機塩基を用いても問題
はない。反応液のｐＨが１２を越える強アルカリ性条件
下ではＮ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物の水に
よる開環反応が増大し、そのためにＮ−ホルミル−Ｌ−
アスパラギン酸無水物の使用量が増加すると同時にβ−
異性体以外の副生物の生成も起るので好ましくない。ま
た、反応時のｐＨが酸性側に片寄ると反応が緩慢になり
無水物の水による開環反応が優先的に起り易くなり好ま
しくない。The reaction is carried out by charging L-phenylalanine and an alkali in water, dissolving or suspending them, and adding N-formyl aspartic anhydride in small amounts continuously or in portions. At this time, the p I-( of the reaction solution is adjusted by dropping an aqueous alkali solution so that it is kept in the range of 7 to 12. First, the alkali used to dissolve or suspend L-]-dialanine and Alkali for pH adjustment include hydroxides, oxides, carbonates or bicarbonates of alkali metals such as lithium, sodium or potassium;
Alternatively, hydroxides, oxides, carbonates, or bicarbonates of alkaline earth metals such as calcium or magnesium are often used. Of course, there is no problem in using an organic base represented by triethylamine, which is inert to the raw material anhydride. Under strongly alkaline conditions where the pH of the reaction solution exceeds 12, the ring-opening reaction of N-formyl-L-aspartic anhydride with water increases, and therefore N-formyl-L-
As the amount of aspartic anhydride increases, β-
This is not preferable since by-products other than isomers are also produced. Furthermore, if the pH during the reaction is biased toward the acidic side, the reaction becomes slow and the ring-opening reaction of the anhydride with water tends to occur preferentially, which is not preferable.

反応温度はＮ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物の
水により加水分解反応を抑制する意味で３０°Ｃ以下、
さらに好ましくは２００Ｃ以下である。The reaction temperature is 30°C or less in order to suppress the hydrolysis reaction of N-formyl-L-aspartic anhydride with water.
More preferably, it is 200C or less.

下限については特に制限はないが工業的見地より一２０
°Ｃ以上である。尚この縮合反応に際して反応に不活性
で且つ水と混和性の有機溶媒を併用することもできる。There is no particular limit on the lower limit, but from an industrial standpoint it is 120
It is above °C. In this condensation reaction, an organic solvent which is inert to the reaction and miscible with water may also be used.

上記のようにしてＮ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無
水物とＬ−フェニルアラニンとの水中での縮合反応によ
りＮ−ホルミル−α−Ｌ−アスパチルーＬ−フェニルア
ラニンが主生成物として生成するが、前述のようにその
異性体であるＮ−ホルミル−β−Ｌ−アスパルチル−Ｌ
−フェニルアラニンも一部副生ずる。その生成比は７５
　：２０〜８０：２０であり、目的物とβ−異性体とを
併せての総合収率は、通常、Ｌ−フェニルアラニンに対
して９５係以上である。ここに生成したＮ　−ホルミル
−α−Ｌ−７スパルチルーＬ−フェニルアラニノは本発
明においては単離せずに、反応混合物をそのまま用いて
、次のα−Ａ、　Ｐ　ｉＶＩ製造反応を行う。As described above, N-formyl-α-L-aspatyl-L-phenylalanine is produced as the main product by the condensation reaction of N-formyl-L-aspartic acid anhydride and L-phenylalanine in water. Its isomer N-formyl-β-L-aspartyl-L
- Phenylalanine is also partially produced as a by-product. Its production ratio is 75
:20 to 80:20, and the overall yield of the target product and the β-isomer is usually a factor of 95 or higher relative to L-phenylalanine. In the present invention, the N-formyl-α-L-7 spartyl-L-phenylalanino produced here is not isolated, but the reaction mixture is used as it is to carry out the next reaction for producing α-A and P iVI.

したがって１本発明の方法は、Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−
アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンを含有する前記反
応混合物から一つの反応器でα−ＡＰＭを製造するもの
で、基本的には該反応混合物を塩酸酸性とし、メタノー
ル存在下に塩酸と接触させることにより生成したα−Ａ
ＰＭを塩酸塩として系外に析出させる。Therefore, 1 the method of the present invention provides N-formyl-α-L-
α-APM is produced in one reactor from the reaction mixture containing aspartyl-L-phenylalanine, and basically the reaction mixture is made acidic with hydrochloric acid and brought into contact with hydrochloric acid in the presence of methanol. α-A
PM is precipitated out of the system as a hydrochloride.

前述の縮合反応混合物を塩酸酸性とするには、反応混合
物中に塩化水素を導入するかまたは濃塩酸を添加する。To make the aforementioned condensation reaction mixture acidic with hydrochloric acid, hydrogen chloride is introduced into the reaction mixture or concentrated hydrochloric acid is added.

そしてここに得られた混合物をメタノールの存在下に塩
酸と接触させるごとにより脱ホルミル化反応とエステル
化反応が進行し、結果としてα−ＡＰＭが生成し、どれ
が塩酸塩として系外に析出してくる。Each time the resulting mixture is brought into contact with hydrochloric acid in the presence of methanol, deformylation and esterification reactions proceed, resulting in the production of α-APM, which is precipitated out of the system as a hydrochloride. It's coming.

メタノールの使用量は縮合反応によって生成したＮ−ホ
ルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン
に対して少なくとも１当量以上、好ましくは出発原料の
し一フェニルアラニンに対して１当量以上用いるのが良
い。メタノール使用量の上限については、あまり過剰に
用いると反応系のメタノール濃度が高くなり、反応によ
って生成したα−ＡＰＭ塩酸塩の溶解度が上がり、α−
ＡＰＭ塩酸塩が析出しにくくなると同時に生成したα−
ＡＰＭがさらにエステル化され、α−Ｌ−アスパルチル
−Ｌ−フェニルアラニンジメチルニスチルの副生が増加
して好ましくない。The amount of methanol used is at least 1 equivalent or more based on N-formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine produced by the condensation reaction, preferably 1 equivalent or more based on the starting material phenylalanine. Regarding the upper limit of the amount of methanol used, if it is used in excess, the methanol concentration in the reaction system will increase, the solubility of α-APM hydrochloride produced by the reaction will increase, and α-
α- generated at the same time as APM hydrochloride becomes difficult to precipitate.
APM is further esterified and the by-product of α-L-aspartyl-L-phenylalanine dimethylnystyl increases, which is undesirable.

したがって、通常はＬ−フェニルアラニンに対して６モ
ル比以下、また 〔（メタノール）／（メタノール＋Ｔ−（ＣＩ＋Ｉ（２
０）　］×１００で規定される濃度として３０重量係以
下が好ましい。メタノールは前記縮合反応混合物を塩酸
酸性にする前に添加してもよいし、あるいは塩酸酸性と
した後で添加してもよい。Therefore, the molar ratio to L-phenylalanine is usually 6 or less, and [(methanol)/(methanol+T-(CI+I(2)
0) ]×100, preferably 30% by weight or less. Methanol may be added before the condensation reaction mixture is made acidic with hydrochloric acid, or may be added after the mixture is made acidic with hydrochloric acid.

接触させる塩酸は出発原料のＬ−フェニルアラニンに対
して１〜１０当量の範囲の量で使用するのがよい。また
本発明は反応によって生成したα−ＡＰＭを塩酸塩とし
て遂次系外に析出させることによってα−ＡＰＭの高い
収率を達成できるものであり、α−ＡＰＭ塩酸塩を析出
し易くするために接触時の反応系の塩酸濃度も重要な因
子である。塩酸濃度としては（（ＨＣＩ　）／（ＨＣ１
＋Ｈ２０））×１００で規定される濃度として３〜３３
重量係。The hydrochloric acid to be brought into contact is preferably used in an amount ranging from 1 to 10 equivalents based on the starting material L-phenylalanine. Furthermore, the present invention can achieve a high yield of α-APM by sequentially precipitating α-APM produced by the reaction as a hydrochloride out of the system, and in order to facilitate the precipitation of α-APM hydrochloride, The concentration of hydrochloric acid in the reaction system during contact is also an important factor. The hydrochloric acid concentration is ((HCI)/(HC1)
3 to 33 as the concentration defined by +H20))×100
Weight staff.

好ましくは５〜３０重量係である。Preferably it is 5 to 30 weight ratio.

塩酸濃度が低すぎると目的のエステル化反応が起りにく
くなる。また塩酸濃度が高すぎると生成したα−Ａ、　
Ｐ　Ｍ塩酸塩の溶解度が一部がり系外に〆出しにくくな
り、α−ＡＰＭ収率が低下する。If the hydrochloric acid concentration is too low, the desired esterification reaction will be difficult to occur. In addition, when the concentration of hydrochloric acid is too high, α-A generated,
The solubility of PM hydrochloride is partially reduced, making it difficult to get it out of the system, resulting in a decrease in α-APM yield.

本発明の方法において、縮合反応混合物と塩酸とを接触
させる温度は０°Ｃ乃至反応混合物の沸点、好ましくは
Ｏ〜６０８Ｃである。低すぎると脱ホルミル化及びエス
テル化反応が進行しにくくなり完応完結まで著しく長時
間を要し工業的には好ましくなく、また高すぎる場合に
はペプチド結合の解裂等の望ましくない副反応が誘起さ
れて、同じく好ましくない。In the method of the present invention, the temperature at which the condensation reaction mixture and hydrochloric acid are brought into contact is from 0°C to the boiling point of the reaction mixture, preferably from 0 to 608°C. If it is too low, the deformylation and esterification reactions will be difficult to proceed and it will take a very long time to complete the reaction, which is not desirable from an industrial perspective.If it is too high, undesirable side reactions such as cleavage of peptide bonds may occur. Induced is also undesirable.

尚、本発明の方法においては、縮合反応混合物を塩酸と
接触させる際に縮合反応に用いたアルカリと塩酸との中
和により相当する無機塩が生成する力瓢接触時に系外に
析出していれば接触の途中で分離することも可能である
。In the method of the present invention, when the condensation reaction mixture is brought into contact with hydrochloric acid, the alkali used in the condensation reaction is neutralized with hydrochloric acid to produce a corresponding inorganic salt. For example, it is also possible to separate in the middle of contact.

本発明においては反応によって生成したα−ＡＰＭは塩
酸塩として系外に析出する。従って反応後は必要に応じ
て反応混合物を冷却後ｒ過することによりα−ＡＰＭ塩
酸塩が単離される。ここて単離されたα−ＡＰＭ塩酸塩
は水中、懸濁または溶液状態で水酸化ナトリウム、炭酸
ナトリウム。In the present invention, α-APM produced by the reaction is precipitated out of the system as a hydrochloride. Therefore, after the reaction, if necessary, the reaction mixture is cooled and then filtered to isolate α-APM hydrochloride. The α-APM hydrochloride isolated here is dissolved in water, in suspension or solution state, in the form of sodium hydroxide or sodium carbonate.

炭酸水素ナトリウムまたはアンモニア等のアルカリで中
和することにより遊離のα−ＡＰＭに変換することがで
きる。It can be converted to free α-APM by neutralization with an alkali such as sodium hydrogen carbonate or ammonia.

（実施例） 以下実施例により本発明の詳細な説明する。(Example) The present invention will be explained in detail below with reference to Examples.

尚、実施例中の高速液体クロマトグラフィの分析条件は
次の通りである。The analysis conditions for high performance liquid chromatography in Examples are as follows.

高速液体クロマトグラフィーでの分析条件カーｙ　ム：
　ＹＭＣｐａｃｋＡ−３１２６ｍｍφＸ　１．５０　ｍ
ｕ（充填剤：０ＤＳ） 移動相：　０．００５Ｍ／ｌ　　へブタンスルホン酸ナ
トリウム水溶液：メタノール−６５：３５（体積比） （リン酸でｐｆ（二２．５に調整） 流量：　１　ｍｌ　／　ｍｉｎ 検出器：紫外分光光度計 実施例１ ６６りの水中に固形の水酸化ナトリウム５．０９を加え
て溶かし、さらにＬ−フェニルアラニン１９．８　り（
０，１，２モル）を装入して溶解し、０°Ｃに冷却した
。Analysis conditions for high performance liquid chromatography:
YMCpackA-3126mmφX 1.50m
u (filling agent: 0DS) Mobile phase: 0.005 M/l sodium hebutanesulfonate aqueous solution: methanol - 65:35 (volume ratio) (pf (adjusted to 2.5 with phosphoric acid) Flow rate: 1 ml/min Detector: Ultraviolet spectrophotometer Example 1 Add and dissolve 5.09 g of solid sodium hydroxide in 66 g of water, and then add 19.8 g of L-phenylalanine (
0,1,2 mol) was charged and dissolved, and cooled to 0°C.

つぎにこの溶液中にＮ−ホルミル−し−アスパラギン酸
無水物１．８．８　’７　（０，１３モル）を０〜５°
Ｃで３０分間で徐々に装入した。この際４５係水酸化ナ
トリウム水溶液を滴下して反応液のｐＨを９〜１１に保
った。その後同温度で１時間反応させた。反応液の一部
をとり高速液体クロマトグラフィーにて分析の結果、Ｎ
−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラ
ニンとＮ−ホルミル−β−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェ
ニルアラニンの生成比は７５．４：２４，６であり、ま
た両者併せての総合収率は９６．８　％　（対し一フェ
ニルアラニン）であった。Next, 1.8.8'7 (0.13 mol) of N-formyl-di-aspartic acid anhydride was added to this solution at 0 to 5°C.
It was gradually charged at C for 30 minutes. At this time, a 45% aqueous sodium hydroxide solution was added dropwise to maintain the pH of the reaction solution at 9-11. Thereafter, the mixture was reacted at the same temperature for 1 hour. A portion of the reaction solution was analyzed using high performance liquid chromatography, and as a result, N
The production ratio of -formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanine and N-formyl-β-L-aspartyl-L-phenylalanine was 75.4:24.6, and the total yield of both was 96. .8% (to one phenylalanine).

この反応混合物中にメタノール１４，４　！７を加え、
ついで２６．８９の塩化水素を５５°Ｃ以下の温度で導
入し、さら［５０〜５５℃で１時間反応させた。Methanol 14,4! in this reaction mixture! Add 7,
Then, 26.89 g of hydrogen chloride was introduced at a temperature below 55°C, and the reaction was further carried out at 50-55°C for 1 hour.

その後２５°Ｇに冷却し２０〜２５℃で４日間反応させ
た。反応混合物を５℃以下に冷却し０〜５℃で３時間か
きまぜたのち析出しているα−ＡＰＭ塩酸塩をｒ過し、
冷水で洗浄することにより白色のα−ＡＰＭ塩酸塩の湿
ケーキを得た。この湿ケーキを高速液体クロマトグラフ
ィーにて分析の結果１．９．３！７のα−Ａ　Ｐ−Ｍを
含有していた。収率５４．７　係（対し一フェニルアラ
ニノ）実施例２ 実施例１で得られたα−ＡＰＭ塩酸塩の湿ケーキを水２
００−に懸濁させ２０〜２５°Ｇで２０％炭酸す）　Ｉ
Ｊウム水溶液で中和した（　ｐＨ＝５　、　Ｏ）。Thereafter, it was cooled to 25°G and reacted at 20 to 25°C for 4 days. After cooling the reaction mixture to below 5°C and stirring at 0 to 5°C for 3 hours, the precipitated α-APM hydrochloride was filtered,
A white wet cake of α-APM hydrochloride was obtained by washing with cold water. Analysis of this wet cake by high performance liquid chromatography revealed that it contained α-A PM of 1.9.3!7. Yield 54.7 Example 2 The wet cake of α-APM hydrochloride obtained in Example 1 was dissolved in water 2
00- and carbonated 20% at 20-25°G) I
It was neutralized with an aqueous solution of Jumium (pH=5, O).

その後５°Ｃに冷却し同温度で１時間かきまぜてから析
出している結晶を沢過し、冷水で洗浄後真空乾燥するこ
とによって遊離のα−Ａ　Ｐ−Ｍを得た。Thereafter, the mixture was cooled to 5°C, stirred at the same temperature for 1 hour, and precipitated crystals were filtered off, washed with cold water, and dried under vacuum to obtain free α-A PM.

収量１７．４２ このものを高速液体クロマトグラフィーにて分析の結果
、α−ＡＰＭ以外に不純物は検出されなかった。また比
旋光度は以下の通りであった。Yield: 17.42 As a result of analyzing this product by high performance liquid chromatography, no impurities other than α-APM were detected. Further, the specific optical rotation was as follows.

実施例３ フレーク状水酸化カリウム７．０２を１１０ｇの水に；
容かしさらＫＬ−ツーニルアラニン　１．９．１１（０
，１，２モル）を装入して溶解し０℃に冷却した。Example 3 7.02 g of flaked potassium hydroxide in 110 g of water;
Ukasashisara KL-tunylalanine 1.9.11 (0
, 1.2 mol) was charged, dissolved and cooled to 0°C.

この水溶液中にＮ−ホルミルアスパラギン酸無水物１．
８．８　！７　（０，１３モル）を０〜５°Ｃで３０分
間で徐々に装入した。この間５０係水酸化カリウム水溶
液１６．０を同時に滴下して反応液のｐＨを８〜１１に
保った。その後同温度でさらに１時間攪拌した。反応液
の一部をとり高速液体クロマトグラフィーにて分析の結
果、Ｎ−ホルミル−α−り一アスパルチルーＬ−フェニ
ルアラニントＮ　　ｉ／ｌｚミル−β−Ｌ−アスパルチ
ル−Ｌ−フェニルアラニンの生成比は７７：２３であり
、また両者併せての総合収率は９８．９％であった。こ
の反応混合物中にメタノール〕９．２りを加え、ついで
４０，２Ｑの塩化水素を５５℃以下の温度で導入し、さ
らに５０〜５５°Ｃで３０分間反応させた。その後室温
まで冷却し室温でさらに５日間反応させた。In this aqueous solution, 1.N-formylaspartic anhydride was added.
8.8! 7 (0.13 mol) was introduced gradually over a period of 30 minutes at 0-5°C. During this time, 16.0% of a 50% potassium hydroxide aqueous solution was simultaneously added dropwise to maintain the pH of the reaction solution at 8-11. Thereafter, the mixture was further stirred at the same temperature for 1 hour. A portion of the reaction solution was analyzed using high performance liquid chromatography, and the production ratio of N-formyl-α-ri-aspartyl-L-phenylalanine N i/lzmil-β-L-aspartyl-L-phenylalanine was 77. :23, and the total yield of both was 98.9%. 9.2 ml of methanol was added to the reaction mixture, and then 40.2Q hydrogen chloride was introduced at a temperature below 55°C, and the reaction was further carried out at 50-55°C for 30 minutes. Thereafter, the mixture was cooled to room temperature and reacted at room temperature for an additional 5 days.

反応後、反応混合物を５°Ｃ以下に冷却し０〜５℃で３
時間かきまぜたのち析出しているα−ＡＰＭ塩酸塩をｆ
過し冷水で洗浄することにより白色のα−ＡＰＭ塩酸塩
を得た。高速液体クロマトグラフィーにて分析の結果１
７．４　！７のα−Ａ　Ｐ　Ｍを含有していた。　収率
４９．３％（対し−）＝ニルアラニン） 実施例４ 水酸化ナトリウム５．０シを６６！７の水に溶かしさら
に■」−フェニルアラニン　１９．８　！７　（０，１
，２モル）を装入して溶解し一５℃に冷却した。つぎに
この水溶液中にＮ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水
物１８．８　’７　（０，１３モル）を１０℃以下の温
度を保っておよそ１時間で少しづつ装入した。After the reaction, the reaction mixture was cooled to below 5°C and incubated at 0-5°C for 3
After stirring for an hour, the precipitated α-APM hydrochloride was
White α-APM hydrochloride was obtained by washing with filtered and cold water. Results of analysis by high performance liquid chromatography 1
7.4! It contained 7 α-APM. Yield: 49.3% (vs. -) = Nylalanine) Example 4 5.0% of sodium hydroxide was dissolved in 66!7% of water, and ■ - Phenylalanine 19.8%! 7 (0,1
, 2 mol) was charged, dissolved and cooled to -5°C. Next, 18.8'7 (0.13 mol) of N-formyl-L-aspartic acid anhydride was charged into this aqueous solution little by little over approximately 1 hour while maintaining the temperature at 10 DEG C. or lower.

この間３０係水酸化す）　ＩＪウム水溶液（１，９，０
ｇ）を滴下して反応液のｐＨを８〜１１に保った。その
後同温度で１時間反応させた。反応液の一部をとり高速
液体クロマトグラフィーにて分析の結果Ｎ−ホルミル−
α−Ｌ−７スパルチルーＬ−フェニルアラニンとＮ−ホ
ルミル−β−Ｌ−７スノクルチルーＬ−フーニルアラニ
ンの生成比は７６．１　：２４．９でありまた両者併せ
ての総合収率は９７．４係（対し一フェニルアラニン）
であった。During this period, IJum aqueous solution (1,9,0
g) was added dropwise to maintain the pH of the reaction solution at 8-11. Thereafter, the mixture was reacted at the same temperature for 1 hour. A portion of the reaction solution was analyzed using high performance liquid chromatography, and the results showed that N-formyl-
The production ratio of α-L-7 spartyl-L-phenylalanine and N-formyl-β-L-7 snocurti-L-phenylalanine was 76.1:24.9, and the total yield of both was 97.4. Section (vs. phenylalanine)
Met.

この反応混合物中にメタノール８．３ｇを加え、ついで
３５．９９の塩化水素を５５℃以下の温度で導入し、さ
らに５０〜５５℃で１時間反応させたのち３０°Ｃに冷
却して同温度でさらに７日間反応させた。反応後実施例
１と同様に処理することによりα−ＡＰＭ２０．５！７
を含有するα−ＡＰＭ塩酸塩を得た。収率５３．６％（
対し一フーニルアラニン） （発明の効果） 本発明の方法はその溶液中での安定性に問題のあるＬ−
フェニルアラニンメチルエステルヲ用１．−ることなく
、Ｌ−ツーニルアラニンを直接使用できる利点がある。8.3 g of methanol was added to this reaction mixture, then 35.99 g of hydrogen chloride was introduced at a temperature below 55°C, and the reaction was further carried out at 50-55°C for 1 hour, then cooled to 30°C and kept at the same temperature. The reaction was continued for another 7 days. After the reaction, α-APM20.5!7 was obtained by the same treatment as in Example 1.
α-APM hydrochloride containing .alpha.-APM hydrochloride was obtained. Yield 53.6% (
(Effects of the Invention) The method of the present invention is applicable to L-4, which has a problem with stability in solution.
For phenylalanine methyl ester 1. There is an advantage that L-thunylalanine can be used directly without -

その上、このＬ−フェニルアラニンを原料として一つの
反応器で最終目的物であるα−ＡＰＭまでを製造できる
。従来、中間体を単離してα−ＡＰＭを製造する種々の
方法があるが、これらに比較して原料的に高価なＬ−ツ
ーニルアラニンの損失もな（、また作業性の点からも極
めて効率の良（・α−ＡＰＭの製造法である。しかも、
Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物とＬ−フェニ
ルアラニンの縮合時に副生ずるβ−異性体は、メタノー
ル存在下での塩酸との接触により脱ホル゛ミルならびに
エステル化され種々の化合物を生成するが。Moreover, using this L-phenylalanine as a raw material, the final target product, α-APM, can be produced in one reactor. Conventionally, there are various methods for producing α-APM by isolating intermediates, but compared to these methods, there is no loss of L-tunylalanine, which is an expensive raw material (and it is also extremely easy to work with). It is an efficient method for producing α-APM.Moreover,
The β-isomer produced by the condensation of N-formyl-L-aspartic anhydride and L-phenylalanine is deformylated and esterified by contact with hydrochloric acid in the presence of methanol to produce various compounds. .

α−ＡＰＭ塩酸塩の析出に悪影響を及ぼすことなく、こ
れらは析出したα−ＡＰＭ塩酸塩を分離したあとの母液
に全て移行する。したがって、この母液を加水分解すれ
ば、出発原料のＬ−ツーニルアラニンおよびＬ−アスパ
ラギン酸としてそれぞれが比較的高い濃度で回収される
ことになり、そのため加水分解後これらの物質を単離す
るに際してエネルギー的に損失の大きい濃縮操作が不要
になるなどの副次的特徴も持ち併せる。All of these are transferred to the mother liquor after separating the precipitated α-APM hydrochloride without adversely affecting the precipitation of α-APM hydrochloride. Therefore, if this mother liquor is hydrolyzed, the starting materials L-thunylalanine and L-aspartic acid will be recovered in relatively high concentrations, so that it will be difficult to isolate these substances after hydrolysis. It also has secondary features such as eliminating the need for concentration operations that involve large energy losses.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １）Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物とＬ−フ
ェニルアラニンを水中ｐＨ７〜１２の範囲で縮合したの
ち、生成したＮ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ
−フェニルアラニンを単離することなく、引きつづき反
応混合物を塩酸酸性としメタノールの存在下に塩酸と接
触させ、析出したα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニル
アラニンメチルエステル塩酸塩を分離し、必要に応じて
該塩酸塩を中和することを特徴とするα−Ｌ−アスパル
チル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルまたはその
塩酸塩の製造法。 ２）Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無水物とＬ−フ
ェニルアラニンとの水中での縮合反応をＬ−フェニルア
ラニンに対して１０重量倍以下の水を用いて行う特許請
求の範囲第１項記載の方法[Claims] 1) N-formyl-α-L-aspartyl-L produced by condensing N-formyl-L-aspartic acid anhydride and L-phenylalanine in water at a pH in the range of 7 to 12.
- Without isolating phenylalanine, the reaction mixture is subsequently acidified with hydrochloric acid and brought into contact with hydrochloric acid in the presence of methanol to separate the precipitated α-L-aspartyl-L-phenylalanine methyl ester hydrochloride; A method for producing α-L-aspartyl-L-phenylalanine methyl ester or its hydrochloride, which comprises neutralizing the hydrochloride. 2) The method according to claim 1, in which the condensation reaction of N-formyl-L-aspartic acid anhydride and L-phenylalanine in water is carried out using water in an amount not more than 10 times the weight of L-phenylalanine.