JPS61115027A - 新リンホカイン２とその製法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、腫瘍細胞に対して細胞障害活性を有する新す
ンホカイ／Ｉ［とその製法および用途に関する。

腫瘍細胞に対して細胞障害活性を有するリンホカインと
しては、リンホトキシ／やツモア　ネクロシス　ファク
ターなどが知られている。

リンホトキシ／は、青木隆−ほか共著「リンホヵイ／」
新免疫学叢書６．８７−１０５頁（１９７９年）医学書
院、Ｂｌｏｏｍ　Ｂ、Ｒｅ　＆　Ｇｌａｄｅ　Ｐ、Ｒ，
共編ｒＩｎＶｉｔｒｏ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ｃｅｌ
ｌ　　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　ＪＡｃａ
ｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　（１９７１年）およびＣｅｌ
ｌｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＶｏｗ、　８Ｂ、８８
８〜４０２頁（１９７Ｆ！Ｎ−）などに記載され、ツモ
ア　ネクロシス　ファクターは、Ｃａｒｓｗｅｌｌ　Ｅ
ＲＡ、　ｅｔ　　ａｌ、、　　Ｐｒ、　Ｎａｔｌ、　　
Ａｃａｄ、　Ｓｃｔ、＋。

Ｕ、Ｓ、Ａ、、　Ｖｏｌ、　７２、Ｎｏ、９８６６６〜
３６７０頁（１９７５年）およびＥ、Ｐｉｃｋｉｉ　Ｔ
ｕｍｏｒ　Ｎｅｃｒｏｓｉｓ　Ｆａｃｔｏｒ　ｉｎＬｙ
ｍｐｈｏｋｉｎｅｓ　Ｖｏｌ、　ｎ　、　２３５〜２７
２頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ（１９８１年）な
どに記載されている。

また、最近、大西治夫らが特開昭５８−１４６２９８号
公報でリンホカイ／の一種である抗腫瘍性糖蛋白質を明
らかにしている。

本発明者らは、す／ホカイ／について多年研究してきた
。その結果、従来知られているこれらリンホカイ／とは
全く違った理化学的性質を有する新り／ホカイ／［の存
在を認め、その製法を確立し、さらに各種悪性腫瘍細胞
に対する細胞障害活性を認め、その用途を確立して本発
明を完成し友。

すなわち、本発明は、理化学的性質が、■分子量 ２０、０００　＋　２，０００ ■等電点 ｐＩ　＝　６．２±０．３ ■易動度 Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥで、Ｒｆ＝０．２９±０．０２■　
紫外線吸収スペクトル ２８０ｎｍ付近に最大吸収 ■　溶剤に対する溶解性 水、生理食塩水またはリン酸塩緩衝液に可溶エチルエー
テル、酢酸エチルまたはクロロポルムに難溶乃至不溶 ■　呈色反応 ローリ−法またはミクロビューレット法で蛋白質陽性反
応を示し、フェノール硫酸法またはアノトロン硫酸法で
糖質陽性反応を示す０作　用 り、２．細胞に対して細胞障害活性を示し、ＫＢ細胞に
対する細胞増殖抑制活性およびインターフェロン活性を
実質的に示さず ■　水溶液での活性安定性 ｐＨ７，２で３０分間保持する条件により６０’Ｃまで
安定、４℃で１６時間保持する条件によりｐＨ４，０乃
至１１．０の範囲で安定　−°　　・匍−一自圭自自麺
一一 ■　−１０℃での凍結貯蔵で１ケ月以上安定である新り
／ホカイ／Ｘ（本明細書を通じて、本物質を新リンホカ
インＩと云う。）と、その製法および用途に関する。

新すンホカイ／■の製法は、新すンホカイン■産生能を
有するヒト由来の細胞、例えば白血救、リンパ球、培養
株化された細胞などに誘導剤を作用させて生成せしめれ
ばよい。

ヒト由来の白血球、す７７球は、ヒトから採取した血液
を分離して調製すればよい。

培養株化されたヒト由来の細胞は、常法に従って、生体
外（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　）で増殖させた細胞が使用でき
る。

しかしながら、本発明の場合には、培養株化された細胞
の増殖に際し、ヒト以外の温血動物体内に直接移植する
か、または拡散チャ／バー内へ接種して、その温血動物
の体液の供給を受けながら増殖させる方が望ましい。

即ち、生体外（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　）で増殖させる場合
とは違って、高価な血清などを含む栄養培地が不要、ま
たは大幅に節約できるばかりではなく、細胞増殖中の維
持管理も極めて容易であり、その上、得られた細胞から
誘導生成される新すンホカイ／ＩＩ活性が高い特徴を有
している。

ヒト以外の温血動物を利用する方法は、培養株化された
ヒト由来の細胞を、ヒト以外の温血動物体内に移植し、
あるいは、その動物の体液の供給を受けることのできる
拡散チャ／パーを動物体内に埋設して通常の飼育をすれ
ば、温血動物体から供給される栄養物を含有する体液を
利用してその細胞が容易に増殖しうるのである。

更に、生体外（ｉｎ　ｖｉｔ、ｒｏ　）で増殖させる場
合と比較して、この細胞の増殖が安定であること、その
増殖速度が大きいこと、得られる細胞量が多いこと、更
には、細胞当りの新リンホカイン■の収量が著しく増加
することも大きな特徴である。

本発明で使用する培養株化されたヒト由来の細胞は、ヒ
ト以外の温血動物体内に移植して容易に増殖し得て、し
かも新り／ホカイ／Ｉ産生能を有する細胞であればよく
、例えば「蛋白質核酸酵素Ｖｏ１．２０、Ｎｏ、　６　
ｊ　６１６〜６４３頁（１９７５年）に記載されている
ヒト由来の各種株化細胞を用いることができる。とりわ
け、ｒ　Ｊｏｕ’ｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｖｏｌ、　Ｉ　Ｊ１１６〜
１１７頁（１９７５年）に記載されているＮａｍａｌｖ
ａ細胞、Ｉ　、　Ｍｉｙｏｓｈｉ著「Ｎａｔｕｒ＠Ｖｏ
１．２６７　Ｊ　８４３〜８４４頁（１９７７年）に記
載されているＢＡＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−１細胞、Ｎ
ＡＬＬ−１細胞、「Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｖｏｌ、　１１３　Ｊ　１３８４〜
１３４５頁（１９７４年）記載のＭ−７００２細胞、Ｂ
−７１０１細胞、「組織培養」第６巻、第１３号、５２
７〜５４６頁（１９８０年）Ｋ記載されているＪＢＬ細
胞、ＥＢＶ−８ａ細胞、Ｅ　Ｂ　Ｖ　−ｗａ細胞、ＥＢ
Ｖ−）ＩＯ細胞、ＭＯＬＴ−３細胞や、その他ＢＡＬＭ
−２細胞、ＣＣＲ’Ｆ−ＳＢ細胞（ＡＴＣＣｃｃｒ。

１２０　）　ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞、ＤＮＤ−４１細胞
などの株化されたリッパ芽球様細胞や、また、正常な単
核細胞、顆粒性白血球細胞などを各種ウィルス、薬剤、
放射線などで処理し培養株化させた細胞などが好適であ
る。

また、これらヒト由来の細胞の新り／ホカイ／肛産生能
を有する遺伝子を、ψ１１えば、ポリエチレ／ゲルコー
ルや七／ダイウィルスなどを利用する細胞融合の手段、
ＤＮＡＩＪガーゼ、制限酵素（ヌクレアーゼ）、ＤＮＡ
ポリメラーゼなどの酵素を利用する遺伝子組み換えの手
段などによって処理し、その増殖速度を高めたり、細胞
当りの新り／ホカイ／］Ｉ産生能を高めたりして使用し
てもよく、本明細書に記載する株化細胞のみに限定され
るものではない。これらの細胞は、後に述べる新り／ホ
カイン１を誘導生成させるまでの過程で、単独、または
２種以上を混合して自由に利用される。必要ならば、こ
れに、例えばヒトから採取し調製される白血球、リンパ
球などを併用することもできる。

本発明で使用する温血動物は、ヒト由来の細胞が増殖し
得るものであればよく、例えばニワトリ、ノ・トなどの
鳥類、イヌ、ネコ、サル−ウサギ、ヤギ、ブタ、ウマ、
ウシ、モルモット、ラット、ヌードラット、ハムスター
　Ｈマウス、ヌードマウスなどの唾乳類が使用できる。

これらの動物にヒト由来の細胞を移植すると好ましくな
い免疫反応を起すおそれがあるので、その反応をできる
だけ抑えるため、使用する動物はできるだけ幼若な状態
、即ち卵、胚、胎児、または新生期、幼少期のものの方
が好ましい。

ま友、これら動物に例えば２００〜６００レム程度のエ
ンクス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血清
若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処理をほど
こして、免疫反応を弱めて移植してもよい。

使用する動物がヌードマウスあるいはヌードラットの場
合には、成長したものであっても免疫反応が弱いので、
これらの前処理を必要としたこともなく。

培養株化されたヒト由来の細胞が移植でき、急速に増殖
できるので特に好都合である。

ま念、培養株化されたヒト由来の細胞を例えば先づハム
スターに移植し増殖させた後、この細胞を更にヌードマ
ウスに移植するなどのように、ヒト以外の温血動物間で
移植してヒト由来の細胞の増殖をより安定化したり、更
にそれらから誘導生成される新り／ホカイノ■量を増加
させることも自由である。

この場合、同種間、同属間は勿論のこと、同綱間、同門
間移植でありでもよい。ヒト由来の細胞を移植する動物
体内の部位は、移植した細胞が増殖しうる部位であれば
よく、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下など自由に選ば
れる。

また、動物体内にヒト由来の細胞を移植することなく、
動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過膜、例えば孔
径約１０　〜１０　　ｍを有するメンブランフィルタ−
１限外濾過膜筐たはフォローファイバーなどを設けた公
知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体内、例
えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を含む体液
の供給を受けつつ、そのチャ／バー内で前述の培養株化
されたヒト由来の細胞を何れも増殖させることができる
。

また必要に応じて、このチャ／バー内の栄養物を含む溶
液を動物体内の体液と接続し、潅流させるようにしたチ
ャ／バーを、例えば動物体表に取付け、チャ／バー内の
ヒト由来の細胞の増殖状態をその表面に設けた窓を通じ
て透視できるようにすることも、また、このチャ／バ一
部分のみを着脱交換できるようにして動物を屠殺せずに
寿命一杯細胞を増殖させて、動物個体当りの細胞生産量
を更に高めることもできる。

これらの拡散チャ／バーを利用する方法は、ヒト由来の
細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト由来の細胞
のみが容易に採取できるだけでなく、好まし７＜すい免
疫反応を起す心配も少ないので、免疫反応を抑制する前
処置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用できる特
徴を有している。

移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育管理
を続ければよく、移植後といえども特別の取扱いは何ら
必要としないので好都合である。

ヒト由来の細胞を増殖させるための期間は通常１〜１０
週の期間で目的を達成することができる。このようにし
て得られるヒト由来の細胞数は動物個体当り約１０〜１
０　　個、またはそれ以上に達することも見出した。

換言すれば、動物生体内で増殖させたヒト由来の細胞数
は、動物個体当り移植した細胞数の約１０２〜１０７倍
、またはそれ以上にも達し、生体外の栄養培地に接種し
て増殖させる場合の約１０〜１０倍、またはそれ以上に
も達して、新リンホカイン■の製造のために極めて好都
合である。

このようにして増殖させたヒト由来の細胞から新り／ホ
カイ／■を誘導生成させる方法は自由である。

それが、増殖した動物体内のままで新すンホカイン■誘
導剤を作用させることもできる。例えば、腹腔内の腹水
に浮遊状で増殖したヒト由来の細胞に、また皮下に生じ
た腫瘍細胞に、新すンホカーｆノＴＩ誘導剤を直接作用
させて新り／ホカイン■を誘導生成させ、次いで、その
血清、腹水または腫瘍から新すノホカイノ■を精製採取
すればよい。

また、ヒト由来の増殖細胞をヒト以外の動物体内から取
シ出し、生体外で新すンホカイ７Ｉ［誘導剤を作用させ
て新すノホカイ７ＩＩを誘導生成させることもできる。

例えば、腹水中で増殖したヒト由来の細胞を採取し、ま
たは皮下に生じ几ヒト由来の細胞を含む腫瘍を摘出、分
散し、得られる細胞を約２０〜４０℃に保った栄養培地
に細胞濃度が約１０５〜１０８／罰になるよう浮遊させ
、これに新り／ホカイ／■誘導剤を作用させることによ
って新り／ホカイ／■を誘導生成させ、これを精製採取
すればよい。

更に、ヒト由来の細胞を拡散チャ／バー内で増殖させた
場合は、増殖させた細胞をチャンバー内のままで、また
はチャ／バーから取り出して、新すンホカイン■誘導剤
を作用させ、新すンホカイ／１を誘導生成させることも
できる。

また、前述のようにヒト以外の温血動物を利用して得ら
れるヒト由来の細胞を、必要ならば、更にイ／ビトｏで
１〜４日間程度培養し細胞の増殖世代を同調させるなど
した後、新すンホカイ／■誘導剤を作用させ新すノホカ
イ７Ｋを誘導生成させることも自由である。

また、例えば、増殖させたヒト由来の細胞に先づ動物体
内のままで新り／ホカイン■を誘導生成すせた後１次い
で、同一動物個体の特定の部位または全体から採取した
ヒト由来の細胞に動物体外で新リンホカイン■を誘導生
成させる方法、また、一度新り／ホカイノにの誘導生成
に使用した細胞を、更に２度以上新り／ホカイ／■の誘
導生成に使用する方法。

または動物体内に埋設、若しくは接続するチャ／バ−を
交換して得られる細胞数を増加させる方法などによって
、使用する動物個体当りの新すンホカイン■生成量を更
に高めることも自由である。

本発明の新り／ホカイ／Ｉ［誘導剤としては、α−イン
ターフェロン誘導剤として知られているウィルス、核酸
、ヌクンオチドなどやγ−インターフェロン誘導剤とし
て知られているフィトヘマグルチニン、コンカナバリン
Ａ１ポークウイードミトーゲン、リポポリサツカリド、
工／トドキシ／、多糖類、細菌などが適宜用いられる。

また、感作化された細胞にとっては、抗原も新り／ホカ
イ／Ｉの誘導剤である。

更に、ヒト由来の細胞から新り／ホカイン■を誘導生成
させるに際し、新り／ホカイ／■誘導剤として、α−イ
ンターフェロン誘導剤とｒ−インターフェロン誘導剤と
を併用することにより新すンホカイン亘の生産量を高め
ることも自由である。

また、これら誘導生成によって新り／ホカイ／１が産生
されるだけでなく、種特異性の高いヒトインターフェロ
／も同時に産生されることが判明した。

このことは、貴重な２種以上のヒト生理活性物質の同時
生産を可能にし、更に、ヒト由来の細胞の高度利用を可
能にし、新り／ホカイン■及びヒトインターフェロンを
大量に安価に供給する点からきわめて好都合である。

このようにして誘導生成された新すンホカイ／■は、公
知の精製分離法、例えば、塩析、透析、濾過、遠心分離
、濃縮、凍結乾燥などを行うことによって容易に精製分
離し、採取することができる。更に高度の精製を必要と
した場合には、例えば、イオン交換体への吸着−溶出、
ゲル濾過および等電点分画、電気泳動、イオン交換クロ
マトグラフィー、高速度液体クロマトグラフィー、カラ
ムクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフイ
ーなど公知の方法を組合せれば、最高純度の新り／ホカ
イン■を採取することも可能である。

また、このようにして得られた新すンホカイ／■を、抗
原としてヒト以外の温血動物を免疫し、該動物から抗体
産生細胞を採取して、この細胞と骨髄腫細胞とを融合せ
しめ、得られる融合細胞から抗折リンホカイ／■抗体産
生能を有する融合細胞を選択し。

この選択細胞を増殖させ、生成したモノクローナル抗体
を、例えば、ブロムシア／活性化セファロースと反応、
させて得られる固定化モノクローナル抗体を用いて精製
し、高純度の新り／ホカイ／■を高収率で採取すること
も有利に用いることができる。

このようにして精製し製造された新リンホカイン■は、
理化学的性質が、 ■分子量 ２０、０００±２．０００ ■等電点 ｐＩ＝６．２±０．８ ■易動度 Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥで、Ｒｆ”０．２９土０．０２■　
紫外線吸収スペクトル ２８０　ｎｍ付近に最大吸収 ■　溶剤に対する溶解性 水、生理食塩水またはリン酸塩緩衝液に可溶エチルエー
テル、酢酸エチルまたはクロロホルムに難溶乃至不溶 ■　呈色反応 ローリ−法またはミクロビニ−レット法で蛋白質陽性反
応を示し、フェノール硫酸法またはアノトロン硫酸法で
糖質陽性反応を示す 胞増殖抑制活性およびインターフェロ／活性を実質的に
示さず ■　水溶液での活性安定性 ｐＨ７，２で３０分間保持する条件により６０℃まで安
定、４℃で１６時間保持する条件によりｐＨ４，０乃至
１１．０の範囲で安定 ■　−１０℃での凍結貯蔵で１ケ月以上安定であること
が判明した。

また、新り／ホカイ／ｌは、マウスＬ、２．細胞のみな
らず、多くのヒト腫瘍細胞に障害を与え死滅させる能力
を有しているが、ヒト正常細胞には実質的に障害を与え
ないことも判明した。

従って、新すンホカイ／ｌ［は、これを含有する組成物
などとして、新り／ホカイ／！［感受性疾患、例えば、
悪性腫瘍の予防剤、治療剤なかでも、従来、治療がきわ
めて困難とされていたヒトの各種悪性腫瘍治療剤として
有利に用いることができる。

新り／ホカイン■の活性は、標的細胞としてＫＢ細胞、
またはＬ９□、細胞を用いて測定した。即ち、ＫＢ細胞
を用いる場合には、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅ
ｒａｐｙ　ＲｅｐｏｒｔｓＰａｒｔａ　ａ、ｖｏｌ　、
３、歯、２、Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　１９７２の記載に準
じて、ＫＢ細胞の増殖抑制活性を測定しＩＬ９２９細胞
を用いる場合には、Ｅ、Ｐｉｃｋ編、Ｔｕｎｏｒ　Ｎｅ
ｃｒｏｓｉｓＦａｃｔｏｒ　ｉｎ　”　Ｌｙｍｐｈｏｋ
ｉｎｅｓ　’　Ｖｏｌ、Ｉ、ＰＰ−２４５〜２４９、Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　（１９８１年）の記載に
準じて、アクチノマイシ／Ｄ存在下でのり、２．細胞に
与える細胞障害活性を測定した。本明細書では、特にこ
とわらない限り、Ｌ、２．細胞を用いる活性測定方法を
採用した。

ヒトに種特異性の高いインターフェロンの活性は「蛋白
質核酸酵素Ｊ　Ｖｏｌ、　２０、Ｎｏ、６．６１６〜６
４３頁（１９７５年）に報告されているヒト羊膜由来の
ＦＬ細胞を使用して公知のフリーク半減法で測定した。

赤血球凝集価はＪ、Ｅ、　５ａｌｋ著ｒ　Ｔｈｅ　Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｊ　Ｖｏｌ、
４９．８７頁、（１９４４年）の方法に準じて測定した
。

次に１本発明を実験で説明する。

実験Ａ−１部分精製した新リンホカイン■の調製 新生児のハムスターに、ウサギから公知の方法で調製し
た抗血清を注射して、ハムスターの免疫反応を弱めた後
、その皮下にＢＡＬＬ−１細胞を移植し、その後通常の
方法で３週間飼育した。皮下に生じた腫瘤を摘出して細
切し、生理食塩水中で分散させほぐした。得られた細胞
を血清添加のＲＰＭＩ　　１６４０培地（ｐＨ７，２）
で洗浄し、同培地に約２　Ｘ　１０’／ｄ　ニなるよう
懸濁した。本細胞懸濁液に対して、ｄ当り約４００赤血
球凝集価のセンダイウィルスを添加し、３７℃で２４時
間保って新りンホヵインＩを誘導生成させた。

これを約４℃、約１，０００Ｆで遠心分離し、沈澱物を
除去し、得られた上清をｐＨ７，２，０，０１Ｍ　ＩＪ
ン酸塩緩衝液を含有する生理的食塩水で２０時間透析し
、更に、精密濾過して得た濾液を、抗インター７二ロ／
抗体を固定化している抗体カラムに流し、その非吸着画
分を採取し、更に、これをクロマトフォーカッシ／グ法
により活性画分を採取し、濃縮し、凍結乾燥して新すン
ホカイン■活性を含有する粉末を得た。

本粉末の比活性は、約１０６単位／η蛋白質でありた。

また、新リンホカイン１の収量は、ハムスター１匹当り
約２，０００万単位であった。

実験Ａ−２抗折リンホカイ７Ｔｉ抗体の調製実験Ａ−１
の方法で得た新り／ホカイン亘を生理食塩水に蛋白質濃
度として約０．０５ｗ／ｖ％になるように溶解し、これ
とフロイント完全アジェバント乳化液とを等量混合して
、この混合液０．２　ｍをマウスの皮下に注射し、７日
後再び同様に注射してマウスを免疫した。その抗体産生
能を有する細胞に抗折り／ホカインＩ抗体を誘導生成せ
しめ、このマウスからひ臓を摘出し、細切分散して得ら
れるひ臓細胞とマウス骨髄腫細胞Ｐ　８−Ｘ６８−Ａｇ
　８　（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）と
を、血清無含有Ｅａｇｌｅの最少基本培地で調製した５
０Ｗ／Ｖ％ポリエチレングリコール−１０００溶液（ｐ
Ｈ７，２、温度３７℃）に、それぞれ１０４／１ｎｌに
なるように浮遊させて５分間保った後、前記基本培地で
２０倍に希釈し、次いで、ＤａｙλｓｏｎなどがＳ罰ａ
ｔｉ　ｃＣｅｌｌ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、　Ｖｏｌ、　２
．１７５〜１７６頁（１９７６年）に報告している方法
に準じてヒボキサンチン−アミノプテリン−チミジン培
養液で増殖しうる融合細胞を採取し、この融合細胞から
抗折リンホカイン■抗体産生能を有する融合細胞を選択
した。得られた融合細胞をマウス腹腔内に１匹当り約１
０個移植して２週間飼育した後、これを屠殺して腹水、
血液などの体液を集め、遠心分離し、この上清を硫安塩
析して飽和度３０〜５０チの沈澱画分を集め、次いで透
析し。

更に、この液を、実験Ａ−１の方法で得た新すンホカイ
７ＩＩをブロムシアン活性化セファロ−スト室温下で反
応させて得られる固定化新すンホカイ／■ゲルを用いて
アフィニティクロマトグラフィーを行ない、抗折リンホ
カイン■抗体画分を得、透析した後濃縮し、凍結乾燥し
て新リンホカイン■のモノクローナル抗体粉末を採取し
た。

本品は、新り／ホカインＩの細胞障害活性に対して免疫
学的に特異的な中和活性を示した。

実験Ａ　−８高純度に精製した新り／ホカイ７Ｔ１の調
製とその理化学的性質 実験Ａ−１の方法で調製した新リンホカイン■の部分精
製品を、実験Ａ−２の方法で調製したモノクローナル抗
体を固定化したゲルを用いてアブィニティクロマトグラ
フィーを行ない新リンホカイン■の活性画分を採取し、
透析し、濃縮して凍結乾、燥した。

本品は、高純度に精製された新リンホカイン１であって
、その比活性は、約１０９単位／η蛋白質であった０ 本品を用いて、理化学的性質を調査した。

■分子量 に、Ｗｅｂｅｒ　ａｎｄ　Ｍ、０ｓｂｏｒｎ、　Ｊ、Ｂ
ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、。

Ｖｏ　ｌ、　２４４　、４４０６頁（１９６９年）の記
載に準じて、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
により調べた。即ち、０．１％ＳＤＳ存在下、１０チア
クリルアミドゲルカラムに試料約１０μ２を負荷し、カ
ラム当り８ｍＡで４時間泳動後、抽出し、その活性測定
から分子量を求めたところ、２０，０００±２．０００
であった。

■等電点 スウェーデン、ＬＫＢ社製、等電点電気泳動用ゲル、商
品名ＡＭＰＨＯＬＩＮＥ　　ＰＡＧＰＬＡＴＥ（ｐＨ３
，５〜９．５）を用いて、２５Ｗ、２時間泳動した結果
、等電点ｐＩは６．２土０．３であった。

■　電気易動度 Ｂ、Ｊ、　Ｄａｖｉｓ　１Ａｎｎ、　Ｎ、Ｙ、　Ａｃａ
ｄ、　Ｓｃｉ、、　Ｖｏｌ、１２１．４０４頁（１９６
４年）の記載に準じて、７．５チアクリルアミドゲルカ
ラムに試料約１０μｇ負荷し、ｐＩ（８，８、カラム当
り３ｍＡで２時間泳動後、抽出してその活性測定から電
気易動度を求めたところ、　Ｒ，０，２９土０．０２で
あった。

■　紫外線吸収スペクトル 株式会社島津製作所製の分光光度計、商品名ＵＶ　−２
５０を用いて紫外部での吸収スペクトルを調べた結果、
２８０ｎｍ付近に最大吸収を示した。

■　溶剤に対する溶解性 水、生理食塩水またはリン酸塩緩衝液に可溶エチルエー
テル、酢酸エチルマｆｃはクロロホルムに難溶乃至不溶
であった。

■　呈色反応 ローリ−法またはミクロビューレット法で蛋白質陽性反
応を示し、フェノール硫酸法またはアノトロン硫酸法で
糖質陽性反応を示した。

■作　用 り、２．細胞に対して細胞障害活性を示した。ＫＬ細胞
に対する細胞増殖抑制活性およびインターフェロン活性
は実質的に示さなかった。

■　水溶液での活性安定性 １）熱安定性 約１×１０単位／ｍ７！の試料を各温度によりｐＨ７，
２で３０分間保持した後、残存する活性を測定した結果
、６０℃まで安定であった。

２）　　Ｐ）Ｉ安定性 約Ｉ　Ｘ　１０６単位／ｄの試料０．１ｄを各ｐｉ（緩
衝液（ｐＨ２〜７−Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ　ｂｕｆｆｅｒ
、　ｐＨ７〜Ｂ　−Ｐｈｏｓｐｈａｔ　　ｂｕｆｆｅｒ
、　ｐＨ８〜１１−　Ｇｌｙｃｉｎｅ　−ＮａＯＨｂｕ
ｆｆｅｒ　）　１ｍｌに加え、４℃で１６時間保持した
後、このＱ、１ｍｌをｐＨ７，２，０，０５Ｍ　ＩＪ　
／酸塩緩衝液でｐ）Ｉ７．２に調整して残存する活性を
測定した結果。

ｐＨ４，０乃至１１．０の範囲で安定であった。

３）ディスバーゼ（ＤＩＳＰＡＳＥ）に対する安定性約
１×１０５単位／ａの試料にディスパーゼ（合同酒精株
式会社製造のパシラス属細菌由来のプロテアーゼ）　１
００単位／―になるように加え、ｐＨ７，２、温度３７
℃で０乃至２時間反応させ、経済的にす／プリフグし、
牛血清アルプミ／を１ｗ／ｖ％になるように加えて反応
を止めた。

この液の新り／ホカイ／■の残存活性を測定した結果、
新り／ホカイ７Ｎ［はディスバーゼ処理により不安定で
、その反応につれて新すンホヵイ／ＩＩの活性が失なわ
れた。

■　凍結貯蔵による安定性 ｐＨ７，２の水溶液を一１０℃で凍結し１ケ月間貯蔵し
た後、融解し、活性を測定した結果、活性の低下は見ら
れなかった。

以上の結果から、新すンホカイ／Ｉ［は、従来知られて
いるリンホトキシ７、ＴＮＦ、インター７エロ７などの
リンホカインとは、明らかに違った理化学的性質を有す
る。

実験Ｂ　−１悪性腫瘍細胞に対する増殖抑制作用実験Ａ
−１，または実験Ａ−３の方法で得た新り／ホカイン■
を用いて、ヒト由来の各種細胞に対する増殖抑制作用を
調べた。

牛胎児血清を補足した公知の栄養培地１ｒａｌにヒト由
来の各種細胞を１０６個ずつとり、１日培養した後、こ
れに実験Ａ−１、または実験Ａ−８の方法で調製したｉ
ＩＪンホカイノ■を５０単位または５００単位含有する
生理食塩水９．１ｍ／を加え、３７℃で２日間培養した
。培養終了後％Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ　Ｖｏｌ、２２．　Ｎｏ、４．６７１〜６７７頁（
１９７１年）に記載されている方法に準じて、染色剤ニ
ュートラルレッドで生細胞を染色し、続いて、この染色
剤をアシドエタノールで溶出し、溶出液の５４０ｎｍに
おける吸光度から生細胞量を測定した。

なお、対照実験には、新すノホカイン五を含まない生理
食塩水０．１Ｍを用いた。

細胞の増殖抑制率（チ）は、次の式から算出した。

細胞増殖抑制率（％）＝ その結果を、第１表に示し念。

第１表 （注）表中の数値は細胞の増殖抑制率（％）を示す。

第１表の結果から明らかなように、新り／ホカイン■は
１．正常細胞に対してほとんど影響を与えず、各種の悪
性腫瘍細胞に対してはその増殖を著るしく抑制すること
が判明した。また、その効果は、高度に精製したものの
みならず１部分精製したものであってもよいことが判明
した。

実験Ｂ　−２ ＢＡＬＢ／Ｃマウスに、マウス肉腫Ｍａｔｈ　　Ａ細胞
を移植し、その移植後１０日目から、実験Ａ−３の方法
で得られた新リンホカインＩを生理食塩水に溶解した状
態で、毎日１回、１００または１，０００単位／　Ｋｆ
ずつ１５日間静脈注射を行った。その後、マウスを層殺
して腫瘍の重量を測定した。

その結果、第２表に示した。

第　　２　表 憂危険率５％以下で、対照の値に比較し、推計学的に有
意差あり。

実験Ｂ　−３ ＢＡＬＢ／Ｃ由来ヌードマウスにヒト乳癌組織片を背部
皮下に移植し、その腫瘍体積が約２００藺　　になった
時期から、実験Ａ−１、まｆＣ，は実験Ａ−３の方法で
得られた新り／ホカイノ■を生理食塩水に溶解した状態
で、毎日１回、１００または１，０００単位／ＫＩｉず
つ２０日間静脈注射を行った。その後、ヌードマウスを
層殺して腫瘍の重量を測定した。

その結果を、第３表に示した。

“危険率５％以下で、対照の値に比較し、推計学的に有
意差あり。

実験Ｂ　−４ 生後２０日のマウスを使用して、実験Ａ−８の方法で得
られた新り／ホカイノ１の急性毒性試験をしたところ、
新り／ホカイ７ＩＩの毒性は極めて低く、腹腔内に注射
した時のしＤ５ｏは、１０９単位以上であることが判明
した。

以上の実験からも明らかなように、本発明の新り／ホカ
イ／■は、生体外（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　）のみならず、
生体内においても悪性腫瘍の増殖抑制に有効であり。

その有効用量から見て安定性は極めて高い。

本発明の新り／ホカイ／■の成人１日当りの用量は５〜
５００，０００．０００単位であり、好ましくは局所注
射および点眼などの局所適用用量は５〜１０．０００．
０００単位、軟膏または坐剤などの経皮または経粘皮適
用の場合ｌＯ〜５０，０００．０００単位、静注および
筋注など全身注射の場合５０〜１００．０００．０００
単位、経口投与の場合５００〜５００，０００．０００
単位であるが、用法あるいは症状に応じて適宜増減する
ことができる。必要に応じて任意、慣用の製薬用担体、
基剤あるいは賦形剤とともに慣用の方法で医薬用製剤に
調製することができる。その使用量は、新すンホカイ７
ｆｉの毒性、有効量および安全性を考慮すると医薬用製
剤ダラム当り５単位以上の新リンホカインＩを含有せし
めるのが望ましい。

新すンホカイ７Ｔ１ｔ−含有する新すンホカイン亘感受
性疾患予防剤、若しくは治療剤は、その目的に応じてそ
の形状を自由に選択できる。

経口投与剤としては、カプセル剤、錠剤、散剤などの腸
溶製剤、直腸内投与剤としては直腸坐剤、注射剤として
は１例えば、用量に注射用蒸溜水に溶解して使用する凍
結乾燥注射剤、その他点鼻もしくは点眼、軟膏剤として
用いることもできる。

また、新すンホカイ／■を用いて悪性腫瘍を治療するに
際し１例えば、患者の腫瘍の一部を取り、これを新す／
ホカイン■で処理することによって、その腫瘍の免疫原
性を高めた後、腫瘍患者の体内に戻、すことにより、こ
の悪性腫瘍の治療をより効果的に行うこともできる。ま
た、新すンホカイ／ＩＩと共に各種抗腫瘍剤、例えばイ
ンターフェロン、ＴＮＦ、リンホトキシノ、ＴＣＧＦな
どの他のり／ホカイン、β−１，３グルカ／、リポポリ
サツカリドなどの抗腫瘍性多糖類、５−Ｆ’Ｕなどの代
謝拮抗剤、マイトマイシｙなどの抗生物質などと併用し
て新す／ホカイン亘の抗腫瘍効果を更に高めることも有
利に実施できる。

以下、実施例Ａで本発明における新リンホカイン■の製
造例を、実施例Ｂで本発明における新すンホカイ／亘の
組成物である各種薬剤の製造例を述べる。

実施例Ａ−１ ヒト由来のリンパ芽球様細胞ＢＡＬＬ−１細胞を牛胎児
血清を２０チ補足したＥａｇｌｅの最少基本培地（ｐＨ
７，４）に接種し、３γＣで常法に従い生体外（ｉｎ　
ｖｉｔｒｏ　）に浮遊培養した。得られた細胞を血清無
添加のＥａｇｌｅの最少基本培地（ｐＨ７，４）で洗浄
し、同培地に約Ｉ　Ｘ　１０７／ｍＡ’になるように懸
濁しｔｏ　この懸濁液にセンダイウィルスをｍｌ当り約
１．０００赤血球凝集価添加し、３８℃で１日保って新
り／ホカイン！を誘導生成させ友。これを４℃、約１，
００（ｌで遠心分離し、得られた上清をｐ）１７．２　
、０．０１　Ｍ　ＩＪ　ｙ酸塩緩衝液を含有する生理食
塩水で１５時間透析し、更に精密濾過して得た濾液を実
験Ａ−１と同様に抗イノターフェロ／抗体のカラムに流
し、その非吸着画分を、実験Ａ　−８で述べた方法でモ
ノクローナル抗体のゲルカラムを用いてアフイニティク
ロマグラフイーにより精製し、濃縮して比活性約１０９
単位／η蛋白質を有する新り／ホカイ７Ｉ［の濃縮液を
得た。

活性収率は、誘導生成時の懸濁液ｌｔ当り約１５０万単
位であった。

実施例Ａ　−２ 新生児のハムスターに、ウサギから公知の方法で調製し
た抗血清を注射して）・ムスターの免疫反応を弱めた後
、その皮下に培養株化され之ヒト由来のリンパ芽球様細
胞ＢＡＬＬ−１細胞を移植し、その後通常の方法で３週
間飼育した。皮下に生じた約１５ｆの腫瘤を摘出し細切
し、生理食塩水中で分散させほぐした。得られた細胞を
血清無添加のＲＰＭＩ　　１６４０培地（ｐＨ７，２）
で洗浄し、同培地に約５×１０シ１１に懸濁した。この
懸濁液に、センダイウィルスｆａｇ当り約１，０００赤
血球凝集価及びＥ、ｃｏｌｉ由来の工／トドキシンをｍ
ｌ当り約１０μｔを添加し、３７℃で１日間保りて新す
ンホカイン五を誘導生成させた。これを約４℃、約１，
０００　ｔで遠心分離し、沈澱物を除去し。

得られた上清をｐ）Ｉ　７．２．０．０１ＭＩＪン酸塩
緩衝液を含有する生理食塩水で２１時間透析し、更に精
密濾過して得た濾液を、実施例Ａ−１と同様に抗体カラ
ムを用いて精製し、得られる溶液を濃縮し、凍結乾燥し
て比活性約１０９単位／■蛋白質を有する新リンホカイ
ン■の粉末を得た。

活性収率は、約３，２００万単位であった。

実施例Ａ　−３ 成長したヌードマウスの腹腔内に、培養株化されたヒト
由来のリンパ芽球様細胞ＴＡＬＬ−１細胞の移植後１通
常の方法で５週間飼育した。この腹腔内へ、約ａ、ｏｏ
ｏ赤血球凝集価のニーーカッスル病ウィルスを紫外線に
よって予めほとんど失活させて注入し、２４時間後に屠
殺して腹水を採取した。以後、実施例Ａ−２と同様に精
製し濃縮乾燥して新すンホカイ／■の粉末を得た。

活性収率は、ヌードマウス１匹当り約３５０万単位であ
った。

実施例Ａ−４ 成長した普通マウスに約４００レムのエックス線を予め
照射してマウスの免疫能を弱めた後、そのマウスの皮下
に培養株化されたヒト由来のリンパ芽球様細胞Ｍｏｎｏ
−１細胞を移植し、その後通常の方法で８週間飼育した
。皮下に生じた約１０Ｆの腫瘤を摘出した後、実施例Ａ
−２と同様にして細胞を分散させた。

この細胞を実施例Ａ−２と同様に懸濁した後、この懸濁
液に、センダイウィルスをｍｔ当り約５００赤血球凝集
価及びコノカナバリンＡをｄ当り０．８μｔを添加し、
３７℃で１日間保って新り／ホカイン■を誘導生成させ
た。以後、実施例Ａ−２と同様に精製、濃縮、乾燥して
新リンホカイン１の粉末を得た。

活性収率は、マウス１匹当り４０００万単位であり実施
例Ａ−５ 新生児のハムスターに実施例Ａ−２と同様にして培養株
化されたヒト由来のリンパ芽球様細胞Ｎａｍａｌｖａ細
胞を移植し、その後通常の方法で４週間飼育した。

皮下に生じた約２０１の腫瘤を実施例Ａ−２と同様にほ
ぐして約８　Ｘ　１０’／ＩＩＩ／の細胞懸濁液を得た
。本懸濁液にセンダイウィルスを１１を当り約１，００
０赤血球凝集価を添加し８６℃で２日間保って新すンホ
カイｙＩ［を誘導生成させ次いで実施例Ａ−１と同様に
精製濃縮して新り／ホカインＩの濃縮液を得た。

活性収率は、・・ムスク−１匹当り約２，２００万単位
であっ之。

実施例Ａ　−６ 孔径０．５ミクロンのメツブランフィルターを設けた内
容量的１０ｍ１のプラスチック製円筒型拡散チャ／バー
内に、培養株化されたヒト由来のリンパ芽球様細胞ＮＡ
ＬＬ−１細胞を生理食塩水で浮遊させ、これを成長した
ラットの腹腔内に埋設した。このラットを通常の方法で
４週間飼育した後、この拡散チャンバーを取り出した。

これによシ得られたヒト由来の細胞の濃度は約５　Ｘ　
１０８／ｍｌであって、生体外の栄養培地に炭酸ガスイ
ンキュベーター中で増殖させる場合の約１０倍以上にも
達することがわかった。この細胞を実施例Ａ−２と同様
に懸濁し、この懸濁液に、ｍｌ当り約５００赤血球凝集
価のニエーカノスル病ウィルスを紫外線で予めほとんど
失活させて加え、さらにフィトヘマグルチニンをｄ当り
約５０μ？加え３７℃で１日間保って新リンホカイン１
を誘導生成させた。

以後、実施例Ａ−２と同様に精製し、濃縮、乾燥して新
すノホカイノ１の粉末を得た。

活性収率は、ラット１匹当り約８００万単位であった。

実施例Ａ−７ ３７℃で５日間保ったニワトリの受精卵に、ヒト由来の
株化細胞ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞を移植した後、３７°Ｃ
で１週間保った。この卵を割卵した後、増殖細胞を採取
した。この細胞を実施例Ａ−１と同様に５Ｘ１ｏ６／＋
ｔ／ｌに懸濁した。この懸濁液にｍｌ当り約５００赤血
球凝集価のセンダイウィルスを添加し、３７℃で１日間
保ってＩｔ　１７７ホカイン１を誘導生成させ、次いで
実施例Ａ−２と同様に精製し、濃縮乾燥してｉｌＪ　・
ノホカイン■の粉末を得た。

活性収率は、受精卵１０個当り約７０万単位であった。

実施例Ｂ　−１注　射　液 実施例Ａ−２で調製した新す／ホカインＩＦ　５００．
０００単位を２００Ｍの生理食塩水に溶解し、メンブラ
ンフィルタ−を用いて無菌的に濾過する。濾液を滅菌し
たガラス容器に２ゴずつ充填して凍結乾燥し、これを密
栓して、゛凍結乾燥粉末製剤とした。

本品は、乳癌、肺癌、肝癌、白血病などの治療に好適で
ある。

実施例Ｂ−２注　射　剤 実施例Ｂ−１の注射剤の製造において、新すノホカイン
ＩＩ　５００．０００単位と共に、リンパ芽球様細胞由
来のα−インター７エロノａｏｏ、　ｏｏｏ、　ｏｏｏ
単位を生理食塩水２００　ｍｌに溶解したほかは、実施
例Ｂ−１と同様に製造して凍結乾燥粉末製剤を得た。

本品は、乳癌、肺癌、肝癌、胃癌、白血病などの各種悪
性腫瘍に対して、実施例Ｂ−１の注射剤と比較して顕著
に優れた治療効果を発揮する。

実施例Ｂ−８軟　膏　剤 実施例Ａ−８で調製した新リンホカイン■を常法に従い
少量の流動パラフィンに研和した後、ワセリンを加え２
０．０００単位／ｌの軟膏薬とした。

本品は、皮膚癌、乳癌、リンパ腫などの治療に好適であ
る。

実施例Ｂ　−４点　眼　剤 蒸溜水５ｏｏｙ　トメ−フェニルエチルアルコール５ｍ
ｌと実施例Ａ−４で調製した新リンホカイン■を２０、
０００．０００単位とに等張化するよう食塩を加え一蒸
溜水で１．０００　＋ｎｌとし点眼剤とした。

本品は、網膜芽細胞腫などの治療に好適である。

実施例Ｂ　−５腸溶性錠剤 実施例Ａ−７で調製した新リンホカイン■を常法に従っ
て澱粉とマルトースとを混合使用して打錠するに際し、
新リンホカイン■を製品１錠（１ｏｏ１ｎ９）当υ２０
０．０００単位になるように含有せしめて錠剤を製造し
、これにメチルセルロースフタレートをコーチイブして
腸溶性錠剤とした。

本品は、大腸癌、結腸癌、肝癌などの治療に好適である
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）理化学的性質が、 ［１］分子量 ２０，０００±２，０００ ［２］等電点 ｐＩ＝６．２±０．３ ［３］易動度 Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥで、Ｒｆ＝０．２９±０．０２［４
   ］紫外線吸収スペクトル ２８０ｎｍ付近に最大吸収 ［５］溶剤に対する溶解性 水、生理食塩水またはリン酸塩緩衝液に可溶エチルエー
   テル、酢酸エチルまたはクロロホルムに難溶乃至不溶 ［６］呈色反応 ローリー法またはミクロビューレット法で蛋白質陽性反
   応を示し、フェノール硫酸法またはアントロン硫酸法で
   糖質陽性反応を示す ［７］作用 Ｌ＿９＿２＿９細胞に対して細胞障害活性を示し、ＫＢ
   細胞に対する細胞増殖抑制活性およびインターフェロン
   活性を実質的に示さず ［８］水溶液での活性安定性 ｐＨ７．２で３０分間保持する条件により６０℃まで安
   定、４℃で１６時間保持する条件によりｐＨ４．０乃至
   １１．０の範囲で安定 ［９］−１０℃での凍結貯蔵で１ケ月以上安定である新
   リンホカインII。 （２）ヒト由来の細胞に誘導剤を作用させて生成した理
   化学的性質が、 ［１］分子量 ２０，０００±２，０００ ［２］等電点 ｐＩ＝６．２±０．３ ［３］易動度 Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥで、Ｒ＿ｆ＝０．２９±０．０２［
   ４］紫外線吸収スペクトル ２８０ｎｍ付近に最大吸収 ［５］溶剤に対する溶解性 水、生理食塩水またはリン酸塩緩衝液に可溶エチルエー
   テル、酢酸エチルまたはクロロホルムに難溶乃至不溶 ［６］呈色反応 ローリー法またはミクロビューレット法で蛋白質陽性反
   応を示し、フェノール硫酸法またはアントロン硫酸法で
   糖質陽性反応を示す ［７］作用 Ｌ＿９＿２＿９細胞に対して細胞障害活性を示し、ＫＢ
   細胞に対する細胞増殖抑制活性およびインターフェロン
   活性を実質的に示さず ［８］水溶液での活性安定性 ｐＨ７．２で３０分間保持する条件により６０℃まで安
   定、４℃で１６時間保持する条件によりｐＨ４．０乃至
   １１．０の範囲で安定 ［９］−１０℃での凍結貯蔵で１ケ月以上安定である新
   リンホカインIIを採取することを特徴とした新リンホカ
   インIIの製法。 （３）理化学的性質が、 ［１］分子量 ２０，０００±２，０００ ［２］等電点 ｐＩ＝６．２±０．３ ［３］易動度 Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥで、Ｒ＿ｆ＝０．２９±０．０２［
   ４］紫外線吸収スペクトル ２８０ｎｍ付近に最大吸収 ［５］溶剤に対する溶解性 水、生理食塩水またはリン酸塩緩衝液に可溶エチルエー
   テル、酢酸エチルまたはクロロホルムに難溶乃至不溶 ［６］呈色反応 ローリー法またはミクロビューレット法で蛋白質陽性反
   応を示し、フェノール硫酸法またはアントロン硫酸法で
   糖質陽性反応を示す ［７］作用 Ｌ＿９＿２＿８細胞に対して細胞障害活性を示し、ＫＢ
   細胞に対する細胞増殖抑制活性およびインターフェロン
   活性を実質的に示さず ［８］水溶液での活性安定性 ｐＨ７．２で３０分間保持する条件により６０℃まで安
   定、４℃で１６時間保持する条件によりｐＨ４．０乃至
   １１．０の範囲で安定 ［９］−１０℃での凍結貯蔵で１ケ月以上安定である新
   リンホカインIIを、これに特異性を示すモノクロナル抗
   体を用いて精製し、採取することを特徴とした特許請求
   の範囲第２項記載の新リンホカインIIの製造方法。 （４）理化学的性質が、 ［１］分子量 ２０，０００±２，０００ ［２］等電点 ｐＩ＝６．２±０．３ ［３］易動度 Ｄｉｓｃ−ＰＡＧＥで、Ｒ＿ｆ＝０．２９±０．０２［
   ４］紫外線吸収スペクトル ２８０ｎｍ付近に最大吸収 ［５］溶剤に対する溶解性 水、生理食塩水またはリン酸塩緩衝液に可溶エチルエー
   テル、酢酸エチルまたはクロロホルムに難溶乃至不溶 ［６］呈色反応 ローリー法またはミクロビューレット法で蛋白質陽性反
   応を示し、フェノール硫酸法またはアントロン硫酸法で
   糖質陽性反応を示す ［７］作用 Ｌ＿９＿２＿９細胞に対して細胞障害活性を示し、ＫＢ
   細胞に対する細胞増殖抑制活性およびインターフェロン
   活性を実質的に示さず ［８］水溶液での活性安定性 ｐＨ７．２で３０分間保持する条件により６０℃まで安
   定、４℃で１６時間保持する条件によりｐＨ４．０乃至
   １１．０の範囲で安定 ［９］−１０℃での凍結貯蔵で１ケ月以上安定である新
   リンホカインIIを含有することを特徴とした組成物。 ５）組成物が新リンホカインIIと共に他のリンホカイン
   を含有することを特徴とした特許請求の範囲第４項記載
   の組成物。 （６）他のリンホカインがインターフェロンであること
   を特徴とした特許請求の範囲第５項記載の組成物。 （７）組成物が、抗腫瘍剤であることを特徴とした特許
   請求の範囲第４、５、６項記載の組成物。