JPS6038120B2 - 抗生物質エンジユラサイジンの製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はストレプトミセス属に属し、エンジュラサイジ
ン分泌性および／またはｍ−フロローＤＬ−チ。

シン耐性を有するエンジュラサィジン生産菌株を培養し
、培養物中にエンジュラサィジンを生成著積せしめ、こ
れを採取することを特徴とするエンジュラサィジンの製
造法に関するものである。抗生物質エンジュラサィジン
（ｅｎｄｍａｃｉｄｉｎ＝ェンラマィシン：ｅｍａｍｙ
ｃｉｎ）は広汎なグラム陽性菌に対して生育阻止効果を
有し、現在飼料添加などの目的に使用されている有用な
ポリベプチド系抗生物質である。

エンジュラサィジンの製造法としては、ストレプトミセ
ス・フアンジサイデイクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｆｕｎｇｃｉｄｉｃ雌）地．Ｂ一５４７７株（『０一
１２４３９，ＡＴＣＣＭ．２１０１３）を用いる方法（
特公昭４５一１１４「ジャーナル オブ アンチビオチ
クス」２１巻 １２６頁（１９６８））が知られている
が、本発明者らは本菌株（ストレプトミセス・ファンジ
サィディクス恥．Ｂ−５４７７）の育種改良により、エ
ンジュラサィジン高力価生産株を得ることを目的として
広汎な研究を行った結果、エンジュラサィジン分泌性お
よび／またはｍ−フロロ−ＤＬ−チロシン耐性を有する
変異株が親株の数倍のエンジュラサィジンを生成するこ
とを見し、出し、本発明を完成するに至った。

本発明の変異株について具体的に説明する。

エンジュラサィジンは液体培地中でも固体培地上でも、
通常その殆どは生産菌の菌体内に箸積される。ここで云
うエンジュラサィジン分泌性変異株とは、固体培地上で
親株のコロニーが菌体外にエンジュラサイジンを分泌ま
たは透過拡散しない条件下で、エンジュラサイジンをコ
ロニーの周辺に分泌または透過拡散する様になった変異
株である。エンジュラサィジン分泌性変異株の取得方法
は次の如くである。紫外線、Ｎーメチル−Ｎ′ーニトロ
−Ｎ−ニトロソグアニジン、Ｘ線等一般に用いることの
できる変異手段で変異処理した胞子又は菌糸断片をブイ
ヨン寒天平板に撒き、平板（径９伽）当り１０ケから数
十ケのコロニーを形成させる。コロニーが充分生育した
時点、即ち２８ｑｏで４日から６日目に被検菌バチルス
・ズブチリスＰＣ１２１９の胞子を混合した軟寒天を重
層する。３７℃で１曲時間培養後、周囲に被検菌の生育
阻止帯を形成するコロニーを分離するとこれがエンジュ
ラサィジン分泌性変異株である。

紫外線照射コロニー１万個中に１ないし３個の割合で出
現する。か）る方法で得た多数のエンジュラサイジン分
泌性変異株は親株に比べて高いエンジュラサィジン生産
能を示す。特に加燐酸培地でそれは約２倍となった。た
とえば前記ストレプトミセス・ファンジサィディクス恥
．Ｂ−５４７材朱を親株としてここで得られるストレプ
トミセス・ファンジサイディクスＣＡＢ−４５３珠（Ｉ
ＦＯ−１４０３６：徴工研菌寄第５７２８号；ＡＴＣＣ
Ｎｏ．３１７２９）は有利に使用できる株の一例である
。一方、ｍ−フロローＤＬ−チロシン耐性変異株の取得
方法は次の如くである。

親株であるＢ−５４７７株は、グルコース１．０％、硫
酸アンモニウム０．２％、リン酸１カリ０．１％、食塩
０．１％、硫酸マグネシウム０．１％、炭酸カルシウム
０．２％、硫酸第一鉄ｌｐｐｍ、塩化マンガンｌｐｐｍ
、硫酸亜鉛ｌｐｐｍ、寒天２．０％からなる最少寒天平
板培地に３ｙ／の【以上のｍ−フロロ−ＤＬ−チロシン
が含まれると生育することが出来ない。それ故、親株の
自然突然変異によって、または親株を通常の変異剤によ
って変異させることによって、３ｙ／のと以上のｍ−フ
ロロ−ＤＬーチロシン含有最少培地上に生育出来る様に
なった菌株をｍ−フロロ−ＤＬ−チロシン耐性変異株と
云う。エンジュラサィジンを高力価に生産する変異株を
得るには、通常６０ｙ〜２００ｙ／地のｍ−フロローＤ
Ｌ−チロシンを含有する最少寒天平板上で充分生育する
菌株を取得する３ことが好ましい。即ち親株の胞子懸濁
液を変異処理なしにまたは適当な変異処理後、６０〜２
００ｙ／地のｍーフロロ−ＤＬ−チロシンを含む最少寒
天平板に接種し、２８『０で５日〜７日間培養後生育し
て来るコロニーを分離すればｍ−フロロ−ＤＬ−３チロ
シン耐性株が得られる。変異剤としては紫外線の他遍常
一般に用いられるＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎーニト
ロソグアニジン、メチルメタンスルホン酸、Ｘ線などが
有効に用いることができる。ｍ−フロローＤＬーチロシ
ン耐性株の出現瀕４度は通常１ぴ〜１０７の生菌数に１
個の割合である。この様にして分離したｍーフロロ−Ｄ
Ｌーチロシン耐性株のうち、多数の株が親株に比べて約
２倍の高いエンジュラサィジン生産館を有している。た
とえば前記ストレプトミセス・ファンジサィディクスＢ
−５４７方珠を親株としてここで得られるストレプトミ
セス・フアンジサイデイクスＥｍ３６−３株（ｍ○−１
４０３７；徴工研菌寄第５７２９号；タ ＡＴＣＣ肺．
３１７３０）は有利に使用できる一例である。かくして
得られる本発明にかかわる菌株のエンジュラサィジン分
泌性とｍ−フロローＤＬーチロシン耐性は、エンジュラ
サィジンの生産性に対し０相加的あるいは相乗的な効果
を示し、とりわけ分泌性およびｍ−フロローＤＬ−チロ
シン耐性を合せ持つ二重変異株は親株にくらべてエンジ
ュラサィジンの生産館が数倍にも上昇することが見し・
出された。

この様な二重変異株を得る方法は前述し夕たエンジュラ
サィジン分泌性変異株の取得方法とｍ−フロロ−ＤＬ−
チロシン耐性変異株の取得方法を適宜縫合せればよい。
すなわち、あらかじめ親株からエンジュラサィジン分泌
性変異株を誘導し、この分泌性変異株から上述の方法に
従ってｍ−フロロ−ＤＬーチロシン耐性株を分離するこ
とにより得られ、たとえば本方法により前記ストレプト
ミセス・ファンジサィディクスＣＡＢ−４５３珠を経て
得られるストレプトミセス・ファンジサィディクスＥｍ
ｔ２ー１４０株（ｍ○−１４０８８；徴工研菌寄第５７
３０号：ＡＴＣＣＮｏ．３１７３１）は有利に使用でき
る一例である。

また、先に分離したｍ−フロロ−ＤＬ−チロシン耐性変
異株に前述した方法によりエンジュラサィジン分泌性を
付与し二重変異株を分離することも出来る。さらにこれ
らの変異株は前記変異剤を用いることなく自然発生した
変異株からも得ることができる。

この様にして得られたそれぞれの変異株の菌学的性質は
いずれもエンジュラサィジン分泌性および／またはｍ−
フロロ−ＤＬ−チロシン耐性を除き親株（特公昭４５−
１１４およびジャーナル オブアンチビオチクス２１巻
１２６頁（１９６８）に記載されたストレプトミセス・
ファンジサイデイクスＮｏ．Ｂ−５４７刀珠（ＩＦＯ−
１２４３９；ＡＴＣＣＮｏ．２１ｏ１３）と全く同じで
ある。

これら変異株の培養に当っては、通常微生物の培養に用
いられる炭素源、窒素源、無機塩あるいは有機酸塩を含
む培地が用いられる。

炭素源としては、たとえば、澱粉、デキストリン、ラク
トース、マルトース等の炭水化物、大豆油、チキンオイ
ル、ラード等の油脂を単独または絹合せて用いること出
来る。窒素源としては、たとえば、コーングルテンミー
ル、コーンスチープリカー、綿実柏、尿素、硫安等の有
機物および無機物が用いられる。またカリウム、ナトリ
ウム、マグネシウム、亜鉛コバルト、鉄、マンガン、燐
酸等の無機物が適宜使用される。その他有機酸塩として
、たとえば、乳酸、酒石酸、マレィン酸等のカリウム、
ナトリウム塩が有効に用いることができる。培養は、振
鶴または通気蝿梓等の好気的条件下に行うのがよく、培
養温度は、通常２０００から３７０にて行うのがよい。
ＰＨは６から９が望ましい。以上の様な培養条件下で５
日から９日間培養することにより、エンジュラサィジン
が培養物中に高力価に蓄積されるが、その１例として、
第１表に示す２種類の塔地を用いて培養した場合の親株
との対比は第２表に示すとおりである。第２表から明ら
かな様に、分泌性変異株は特に加燐酸培地であるＡ培地
で親株よりエンジュラサィジン生産能が優れ、またｍー
フロローＤＬ−チロシン耐性変異株は特に無機燐酸無添
加塔地であるＢ培地に於て親株よりエンジュラサィジン
生産能が優れている。

さらに両者の性質を兼備した二重変異株は両培地で親株
の５ないし８倍のエンジュラサィジン生産能を示す。第
１表 主醗酵培地 第２表 親株と変異株のエンジュラサィジン生産能培養
条件は実施例２．に同じ 親株によって生成されるエンジュラサィジンは主に菌体
中に集積されることが知られている〔「ジャーナル オ
ブ アンチビオチクス」、２１巻１２６頁（１９６８）
、持公昭４５−１７１５８〕。

本発明で用いる分泌性および／またはｍーフロローＤＬ
ーチロシン耐性株においても生成されるエンジュラサィ
ジンの大部分は、培養物の炉取菌体画分または遠心分離
による沈澱画分に含まれる。多分、エンジュラサィジン
の遊離塩基が水に雛溶性であることから、変異株の菌体
外に放出されたエンジュラサィジンも菌体や培地中の固
型物と共に炉取されたり、沈澱したりするものと想定さ
れる。このことから、これら変異株によって生成蓄積さ
れたエンジュラサィジンを培養物から採取するに当って
は、親株の生成するエンジュラサイジンの採取に適用さ
れた公知の種々の方法〔特公昭４５−１１４；特公昭４
５一１７１斑；「ジャーナル オブ アンチビオチクス
」、２１巻１３８頁（１９６８）〕を採用することが出
来る。たとえば、菌体を含む炉取醗酵残澄から塩酸酸性
のメタノール水、アセトン水でエンジュラサィジンを抽
出後、活性炭および合成吸着樹脂吸着法、イオン交換樹
脂法、有機溶媒抽出法、塩折、濃縮、凍結乾燥操作等が
有力な手段として用いられる。また飼料添加物として低
純度品でよい場合には菌体を炉取、水洗後、ドライヤー
で直接乾燥させる方法をとることも出来る。以下実施例
をもって本発明を説明するが、これは単なる例示であっ
て、何ら本発明を制限するものではない。なお、培養物
中に生成したエンジュラサィジンは、塩酸酸性７０％ア
セトンで培養物より抽出後、バチルス・ズブチリス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓｓ肋ｔｉｌｉｓ）ＰＣ１２１９を検定菌
とし、エンジュラサィジン・モノ塩酸塩（エンジュラサ
イジンＡ：エンジュラサィジンＢ＝５８：４２）の結晶
を標準として生物学的に定量した。実施例 １−【１’ ストレプトミセス・フアンジサイデイクスＮｏ．Ｂ−５
４７材朱（ＩＦＯ−１２４３９，ＡＴＣＣＮｏ．２１０
１３）を胞子形成培地（可溶性澱粉１．０％、酵母エキ
ス０．２％、粉末寒天２．０％，ｐＨ７．０）８叫を含
む試験管斜面に接種し、２がｏで１０日間培養し、胞子
を形成させた。

生成した胞子を白金耳で掻きとり、５の【の滅菌水に懸
濁した。この懸濁液にはおよそ５．１×１ぴ個／の‘の
胞子を含んでいた。これをガラスフィルターＭ．２（４
０〜５０ミクロン）で炉過した。得られた炉過胞子懸濁
液は約２．６×１ぴ個／机上の胞子を含んでいた。この
胞子懸濁液４の‘をガラス平板（径９ｃｍ）に移し、暗
室で４０伽の距離から紫外線（ｌＯＷ、殺菌ランプ）を
１０分間、平板を揺すりながら照射した。この条件で９
９．８％の胞子が死滅した。得られた紫外線照射胞子懸
濁液を滅菌水で、生残胞子数が０．１机と当り３０〜５
の固程度になる様に希釈した。この希釈液０．１私をブ
イヨン寒天培地（ベプトン０．５％、肉エキス０．５％
、食塩０．５％、粉末寒天２．０％、ｐＨ７．２）１５
叫を含む平板（径９肌）に撒き２８ｑｏで４日間培養し
た。かくして得られる生成コロニ−数３０〜５の題の平
板に、バチルス・ズブチリスＰＣ１２１９の胞子約１×
１ぴ個／凧とを含むブイヨン軟寒天塔地（寒天濃度０．
７％）５Ｍを重層し、３７ｑ０で１曲寺間培養した。こ
の様に処理したコロニ−約２万１千個のうち９個のコロ
ニーがその周囲に１５〜２３肋（直径）のバチルス・ズ
プチリスＰＣ１２１９の生育阻止円を生じた。この９個
のコロニーをブイヨン寒天平板で純化し、前述の胞子形
成斜面培地に移植した。この斜面培養から胞子懸濁液を
調製し、再度ブイヨン寒天平板に１０〜２０個のコロニ
ーを形成させ、２８こ０で４日後、前記と同じバチルス
・ズブチリスＰＣ１２１９の胞子を含むブイヨン軟寒夫
を童層し、３？○で１６時間培養後、形成されるバチル
ス・ズプチリスＰＣ１２１９の生育阻止円の直径を測定
した。９株のうち３株はバチルス・ズブチリスＰＣ１２
１９の生育阻止円形成を示さず、５株は直径１５〜２＆
舷の生育阻止円を形成した。

残り１株は最も大きなバチルス・ズブチリスＰＣ１２１
９の生育阻止円（直径２４胸）を示した。これをストレ
プトミセス・ファンジサイデイクスＣＡＢ一４５３珠と
命名した。実施例 １−‘２１ 実施例１−ｍと同じ方法で得たストレプトミセス・ファ
ンジサィディクスＮｏ．Ｂ−５４７７株（ＩＦＯ−１２
４３９，ＡＴＣＣＭ．２１０１３）の胞子懸濁液（１．
２×１ぴ個／肌【）の０．１の‘をｍ−フロロ−ＤＬ−
チロシン１２５ｙ／の‘を含む最少寒天培地１５Ｍの入
った平板に撒き、２８℃で６日間培養した。

平板当り約２００個のコロニーを形成するが、このうち
比較的大きなコロニー（約１．５脇〜２．０肋、約１０
個／平板）を、ｍーフロローＤＬーチロシン１２５ｙ／
奴を含む同じ最少寒天塔地に画線した。２８ｏｏで５日
間培養後、生育して来た菌株をｍ−フロロ−ＤＬ−チロ
シン耐性株として分離した。

かくして得られた１２９珠を第１表に示すＢ培地で２８
℃で８日間培養して力価を調べて、最も高い力価を示し
た１株をストレプトミセス・フアンジサイデ十イクスＥ
ｍｔ３６−３株と命名した。実施例 １−｛３１ 実施例１一（１｝で得たストレプトミセス・ファンジサ
ィディクスＧＡＢ−４５３朱から実施例１一【１｝と同
じ方法で胞子懸濁液（２．１×ｌぴ個／泌）を得た。

この胞子懸濁液１の【を２００ｙ／の‘のＮーメチル−
Ｎ′ーニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを含むブイョン
培地５の‘に楯菌し２８００で４時間振渇した。この処
理により約７３％の胞子が死滅した。この処理液を３，
００仇ｐｍ２粉ふ間遠Ｄ分離した。沈澱した胞子を１の
‘の滅菌水で懸濁した。この胞子懸濁液０．１の‘をｍ
ーフロロ−ＤＬーチロシン６０ｙ／奴を含む最少寒天塔
地１５机‘の入った平板（径９伽）に撒き２８ｑｏで６
日間培養した。６日後平板当り約１８の固のコロニーを
生ずるが、そのうち比較的大きなコロニ−（１．５脚〜
２．仇蛇、約１０個／平板）をｍーフロローＤＬーチロ
シン６０ｙ／の‘を含む同じ最少寒天塔地に画線して、
２８ｏｏで６日間培養した。

６日後生育して来た菌株をストレプトミセス・フアンジ
サイデイクスＧＡＢ−４５３珠のｍーフロロ−ＤＬ−チ
ロシン耐性菌として胞子形成斜面に移植した。

かくして得られた７９珠を第１表に示すＢ塔地で２８ｑ
ｏで８日間培養し、その力価を調べると、総株が親株で
あるストレプトミセス・ファンジサィディクスＧＡＢ−
４５３珠より高い力価を示し、その中で最も高い力価を
示した１株をストレプトミセス・フアンジサイデイクス
Ｅｍｔ ２−１４の珠と命名した。本菌株を実施例１−
ｍに示す方法で調べたところ、そのコロニーは周囲にバ
チルス・ズブチリスＰＣ１２１９の生育阻止円（直径２
４伽）を形成し、エンジュラサイジン分泌能に変化はな
かつた。実施例 ２コーンスチープリカー３．５％、コ
ーンフラワー２．５％、コーングルテンミール０．５％
、炭酸カルシウム３．０％、アクトコール（梢泡剤）０
．０５％よりなるｐＨ６．２の種培養培地２０の‘を２
００の上客の三角フラスコに分注し１２０ｑｏで１粉ご
間蒸気滅菌した。

この種培地に、実施例１−糊で取得したストレプトミセ
ス・ファンジサィディクスＥｍｔ２−１４０株（び○−
１４０８８）の胞子懸濁液１舷（約２×１び個の胞子を
含む）を接種し、２８０○で２独特間振糧培養した。つ
いで第１表に示した王酉醗酵Ｂ培地３０叫を２００のと
客の三角フラスコに分注し、１２０００で３０分間蒸気
滅菌した。この醗鍵髪培地を含む三角フラスコに上記種
培養培地２．５Ｍを移植し、２８ｑＣで８日間娠濠培養
した。かくして得られた酉叢鍵蓬液は４３３０仏ｇ／の
‘のエンジュラサイジンを含んでいた。この醗酵液２の
こ炉過助剤ハィフロスパーセル４雌を加え、炉紙（東洋
炉紙Ｎｏ．２）を敷いた直径３０ｃののヌッッェで吸引
炉遇した。得られた炉取菌体画分を６その脱イオン水で
洗浄炉過した。得られた４８０ｇの洗浄湿菌体画分を１
その脱イオン水でスラリ−とし、これにメタノール２〆
を加えた。即日ＣＩを加えＰＨを３から４に維持し、室
温で３時間燈拝した。炉過により抽出炉液２８１０肌【
（エンジュラサィジン含量２４６０山ｇ／の【）を得た
。この酸性抽出液をＩＯＮＮａＯＨでｐＨ６．０に調整
した。これにハイフロスーパーセル３０ｇを加え、生じ
た非晶型の沈澱物を炉去した。得られた中和抽出炉液２
７００肌を活性炭カラム（５００の‘）に通した。この
カラムを６０％メタノール５００の‘、および脱イオン
水１そで洗浄後、０．０州のＨＣＩを含む７０％ァセト
ン水でエンジュラサィジンを漆出した。得られたエンジ
ュラサイジン溶出画分１．３そ（４６１０山ｇ／机上）
を４５午○以下で５００の‘迄減圧濃縮した。これにメ
タノール２００叫を加えて再度５００肌迄減圧濃縮した
。これを２回繰り返して、アセトンを留去した。得られ
た濃縮液５４０心に水９００叫、メタノール１１００の
‘および食塩１２．舷を加えた後、ＩＱＮＮａＯＨでｐ
Ｈを７に調整した。生じた非晶性沈澱物を炉去し、炉液
２５３０私（２１７３ムｇ／泌）を得た。この炉液を予
め、０．０１ＮＨＣＩを含む７０％メタノール４〆と５
０％メタノール３そで洗浄した７００泌のアンバーライ
トＸＡＤ−２のカラムに通した。カラムを０．５％食塩
を含む５０％メタノール２夕と脱イオン水１．５そで洗
浄後、０．００鮒ＨＣＩを含む５０％メタノールでエン
ジュラサィジンを総出した。得られたエンジュラサィジ
ンの溶出画分６５０泌（７５３０山ｇ／の‘）に聡の活
性炭を加え３帖う間燈梓後、活性炭を炉去し、清澄液６
２０机‘を得た。この清澄液を９０Ｍのアンバーライト
ＩＲ−１２０日型カラム、続いて９０の‘のアンバーラ
イトＩＲ−４５０日型カラムを通過させ脱塩を行った。
ＩＲ・‐１２０とＩＲ−４５のカラムはさらに９０の‘
の５０％メタノールを順次流して、付着する有効物質を
洗い出し通過液と合せた。かくして６５０の‘の通過液
を得た。この通過液の一部を０．１ＮＨＣＩで希釈し、
２７２肌の吸光度から計算するとエンジュラサィジン含
量は３．９礎であった。この溶液を州ＨＣＩでＰＨ４．
０に調整し、約１２０私迄減圧濃縮した。この濃縮液を
氷冷し、１州ＮａＯＨでｐＨ９に調整した。生じたエン
ジュラサイジンの遊離塩基を遠沈分離によって集め、さ
らに冷した７０％メタノール水約２０の【で洗浄した。
このエンジュラサィジン遊離塩基に等モルのＩＮＨＣ１
（１．６の‘）と４０の【のメタノールを加えて溶解し
た。さらにｐＨを７に調整した。この溶液を減圧下に約
１５の‘迄濃縮すると白色結晶を生じた。これを５℃で
２日間放置した後、ガラスフィルター（Ｎｏ．４）で結
晶を淀取した。炉取した湿粗結晶を水３の‘とメタノー
ル２６の‘に懸濁し、５０〜５８０に加湿溶解した。こ
の溶液に粉末活性炭３０雌を加え４０００で２０分網拝
し、ミリポアフィルター（ＦＨ）により活性炭を炉去し
た。得られた炉液を約１５私迄減圧濃縮すると結晶が析
出し始めた。これを５℃で２日間冷保存した後、グラス
フィルターで結晶を炉取した。５０午Ｃ，１即時間減圧
乾燥するとエンジュラサイジン・モノ塩酸塩の白色プリ
ズム状結晶が約２．６礎得られた。

融点：２４０〜２４５ｑ０（分解） 元素分析値（％）Ｃ５２．５６±０．５；日６．２０土
０．３；Ｎ１４．７０±０．５；ＣＩ４．２０±０．５
旋光度：〔ａ〕登３十８７ｏ 士１０（ｃ＝０．５、ジ
メチルホルムアミド）紫外部吸収：入紙ＷＣ１ｎｍ（Ｅ
脇）＝２３１（２２０土１０），２７２（１２３±１０
）エンジュラサイジンＡ：エンジュラサイジンＢ＝６２
．３８（高速液体クロマトグラフィーによる）実施例
３実施例２と同じ種培養塔地５００の‘を２そ客の坂口
フラスコに分注し、１２０００で３０分間蒸気滅菌した
。

このフラスコに実施例１−【３’で取得したストレプト
ミセス・フアンジサイデイクスＥｍｔ ２−１４の朱（
ｍ○−１４０機）の胞子懸濁液２泌（胞子数約１び個）
を接種し、２がｏで２４時間振濠培養した。得られた種
培養液５００机を上記と同じ種培養培地３０そを含む５
０そ客醗酵槽に移植し、通気量毎分３０夕、凝枠毎分２
８０回転、２８ｏ０で２報時間培養した。この種培養液
８そを第１表に示した主酸鍵菱Ｂ培地１００そを含む２
００〆客の醗酵槽に移植し、通気毎分１８０夕、櫨梓毎
分１８０回転、２８こ０で８日間通気燈伴培養した。か
くして得られた醗酵液８８そ中には４５３０仏ｇ／の‘
のエンジュラサイジンが含まれてし、た。実施例 ４ 実施例２と同じ種培地２０叫を含む２００叫客の三角フ
ラスコに、実施例１一【１｝で取得したストレプトミセ
ス・ファンジサイディクスＣＡＢ−４５３株（ｍ０−１
４０３６）の胞子懸濁液１奴（約１．５×１ぴ個の胞子
を含む）を接種し、２が０で２岬時間振糧培養した。

ついで第１表に示した主醗酵Ａ培地３０の‘を２００の
（客の三角フラスコに分注し、１２０ｑ０，３０分間蒸
気滅菌した。この醗酵塔地を含む三角フラスコに上記種
培養塔地２．５机を移植し、２８ｑｏ，８日間振顔培養
した。かくして得られた醗酵液は１８７０仏ｇ／地のエ
ンジュラサイジンを含んでいた。実施例 ５実施例２と
同じ種培地２０地を含む２００Ｍ客の三角フラスコに実
施例１一【２｝で取得したストレプトミセス・ファンジ
サィディクスＥｍｔ３６一３株（印○−１４０３７）の
胞子懸濁液１の‘（約３×１ぴ個の胞子を含む）を接種
し、２が○で２蝿寿間振鶴培養した。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレプトミセス属に属し、エンジユラサイジン分
   泌性および／またはｍ−フロロ−ＤＬ−チロシン耐性を
   有するエンジユラサイジン生産菌株を培養し、培養物中
   にエンジユラサイジンを生成蓄積せしめ、これを採取す
   ることを特徴とするエンジユラサイジンの製造法。