JPS60199801A - 動物に対する植物成長ホルモンの投与方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、動物に対する植物成長ホルモンの投与方法に
関する。

植物の成長、分化に強い効力をもつ植物成長ホルモン、
特にオーキシン類およびジベレリン類が蚕の成長にも微
量で効果のあることは、本発明者が先に発見し、すでに
特開昭５７−１６６９４２号において発表している。し
かしながら、これら植物成長ホルモンは極微量で有効で
ある一方、きわめて不安定であるため、多くの要因によ
シ分解を受け易く、生体外ばかりでなく、生体内に入っ
てからも諸条件、たとえば光、温度、分解酵素などによ
り分解を受け、１生理作用を発揮するまでに不活性な化
合物に変化し効力を失ってしまう。事実、植物成長ホル
モンを蚕に与えた場合、その成長効果が認められないか
、殆んど認められないことが非常に多かった。特に、温
夏の影響が大きく、飼育時の温度が若干ちがってもその
効果に大きな差を生じ、効果に安定性を欠くことがわか
ってきた。

この様に動物の体温などを含めて温度による影響を受け
易いことは限られた温度範囲でしか利用できないことに
なり、変温動物では飼育温度の管理がむつかしく、恒温
動物では効果をあげることが極めて困難であった。

本発明は、かかる従来の問題点に鑑み、植物成長ホルモ
ンが効率的にその生理作用を発揮する様な動物に対する
植物成長ホルモンの投与方法を提供することを目的とす
る。

本発明は、この目的を達成すべく種々検討した結果、植
物成長ホルモンを水中に二分子層膜全形成可能な脂質（
以下単に脂質という）とともに与えることによシ、植物
成長ホルモンの特に生俳内での安定化を図り、効率的に
生理作用を発揮する様にした細物成長ホルモンの投与方
法を提供するに至ったものである。即ち、植物成長系ル
モンがその生理作用を発揮する前に分解されてしまう原
因を横側したところ、動物の生体内及び動物の餌となる
他物中に植物成長ホルモンの分解酵素が多く含まれてお
り、動物の生体内においてこの分解酵素が温度・光など
と相乗−的に作用して植物成長ホルモンを激しく９解さ
せるということ、およびその分Ｍ作用は生体外での温度
や光による分解よりもはるかに太きいというととがわか
ったのである。一方、本発明者は前記脂質と植物成長ホ
ルモンに関して鋭意研究した結果、オーキシン数及びジ
ベレリンと脂質との間に％異的なアフイニテイ（ａｆｆ
ｉｎｉｔｙ）が存在し、少量の水の存在下において常温
で両者を振とり又は混合するだけで容易に結合して安定
な化合物をつくり、しかもその化合物が植物成長ホルモ
ンとしての生理作用を肩することを発見したのである。

かくして、植物成長ホルモンを６１（記脂質と共に与え
ることによシ少くとも生体内で植物成長ホルモンを安定
化させ、生体内での植物成長ホルモンの分解を扇動に阻
止してその生理作用を効率的に発揮せしめることができ
るということが判明したのである。

詳細に説明すると、一般に植物成長ホルモンは植物の葉
、茎、根などに広く分布し、伸長、発根、細胞***など
多くの生理作用を示すが、その負は極め工微量で有効で
あり、その水溶液ＩＩ！ａｊ）０゜０１μＰ−１０μノ
の濃度で細胞に対する生理作用を発揮する。植物に含ま
れるこの植物成長ホルモンの量は極めて少なく、分離、
精製、定量などに当っては細心の注意が必要であシ、な
かでもオーキシン類はとくに不安定な物質であり、光お
よび空気中の酵素によって酸化、分触され易いはかりで
なく、組織中の分解酵素の影！＃を強く受ける。従って
、精製操作はできるだけ暗所でしかも速やかに行う必要
があシ、定量を行う場合にもメタノール、アセトンなど
の抽出溶媒を氷冷して扱うなど軸心の注意が必要であっ
た。ところで、前述した様に植物成長ホルモンが蚕に対
して成長促進作用を示すことを発見したことから、桑葉
にも同じ植物成長ホルモンが存在する筈であシ、それを
抽出すべく種々実験を行っていたところ、クロロホルム
や四塩化炭素を溶媒とし、これにホスファチジルコリ・
ン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノール
アミンなどの前記脂質を加えて抽出すると、室温でも容
易にオーキシン類が抽出されてくることを発見したので
ある。即ち、細切した生桑葉にクロロホルムまたは四塩
化炭素を加え、ジューサーを用いて室温にて抄出を行い
、吸引濾過してｐ液をとり、そのｐ液から減圧下で溶媒
を溜去すると、白色粘馴のペクチン状またはゴム状の物
質が得られた。ところが、同じくクロロホルムまたは四
塩化炭素などの溶媒に前記脂質を溶かし、この液を用い
て同様に抽出を行い、濾過してｒ液の溶媒を減圧下で溜
去すると白色の粘着昂物質とはならず、加えた脂質と同
様のものが得られた。これを、冷メタノールにて数回抽
出し、濾過して得たＦ液から減圧下でメタノールを溜去
したのち、さらにエチルエーテルを用いて不純物を除去
し、得られた残暑についてシリカゲル薄層クロマトによ
シ、溶媒としてイソプロピルアルコール；酢酸メチル：
アンモニア水（２５％）　＜５５＋４５＋２０）を用い
、エールリッヒ反応によるインドール化合物の検出を行
なったところ、数種のスポットが認められ、その中にイ
ンドール酢酸のスポットが検出された。この様な方法で
植物葉から植物成長ホルモンを抽出できたのははじめて
のことで、この現象は前記脂質とオーキシン類との間に
特異的なアフイニテイのあることを示している。そして
、この結果に基づいて本発明者がさらに実験したところ
、前記脂質と植物成長ホルモンは、少量の水の存在下で
常温で振とり又は混合するだけで容易に結合し、安定な
化合物をつ〈シ、シかもそれが植物成長ホルモンとして
の生理効果をもつことが判明したのである。又、前記脂
質にステリン、とくに植物性ステリンを結合させたもの
においても同様に安定な化合物をつ＜シ、シかもステリ
ンを入れたものは入れないものよりもさ７すに温度に対
する安定性が強いことも明らかになった。かくして、こ
の脂質−植物成長ホルモン又は脂少−ステリンー植物成
長ホルモンのもつ生理作用を利用するに筋っでは、予じ
めこの様に結合させたものを利用してもよいが、脂質又
は脂質−ステリンを植物成長ホルモンとは別に用意して
おき、用にのぞんで混合又は−緒に投与するだけでも植
物成長ホルモンとしての効果を安定して発揮することが
判明したのである。

具体的な投与法としては、動物の栄養または成長を支持
するに足る栄養物を含んだ飼料組成物に対して混合また
は散布する方法、あるいは動物の皮膚などから皮下吸収
されるように直接動物に散布する方法、あるいは養殖槽
の水または海水に添加する方法などが考えられる。

適用範囲としては、蚕などの昆虫や魚類などの変温動物
に限らず、鳥類あるいは家畜や人などの咄乳動物など恒
温動物にも適用可能であシ、こうして動物に適用するこ
とによシ動物性貸白質の生合成が促進され、動物の成長
促進や健康増進をはかることができるものである。

植物成長ホルモンとしては、広義のオーキシン類や各種
ジベレリンなどが含せれる。ここで広義のオーキシン類
とはインドール酢酸等の狭義のオーキシン類のほか、グ
ルコビラノースなどの配糖体、類縁化合物であるたとえ
ばオキシインドール酢酸、オキシフェニル酢酸などのオ
キシオーキシン類、チオオキシフェニル酢酸、チオオキ
シフェニル酢酸などのチオオキシオーキシン類、インド
ールチオ酢酸、オキシインドールチオ酢酸などのインド
ールチオ酢酸などを含み、ジベレリン類としてはジベレ
リンＡｓのほか各種ジベレリンを含むもので、これらの
ものを単独で用いてもよく、２〜３種を混合使用しても
よい。また、合成品だけでなく、植物体には植物成長ホ
ルモンが豊富に含まれているので、この植物体よシ遊離
されてくる植物成長ホルモンまたは有機酸などを作用さ
せ、ＰＨをかえて遊離状態にさせた植物成長ホルモンを
利用することもできる。

前記脂質、即ち水中に二分子層膜を形成り」能な脂質と
しては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン
、ホスファチジルグリセリン、スフィンゴミエリン、カ
ルシオリビン、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタ
ノールアミン、リゾホスファチジルコリン、ガングリオ
シドなどの燐脂質が適当であるが、そのほか７−ジヒド
ロコレステロール、酸化コレステロール、α−トコフェ
ロール、クロロフィル、キサントフィル、グリセリンジ
ステアレート、グリセリンモノオレアート、ソルビタン
モノオレアート、ドデシル酸リン酸、モノオレイルリン
酸、糖脂質なども用いることができ、これらのものを単
独で使用してもよく、２〜３れ顛混合使用してもよい。

なお、他物成長ホルモンと結合した脂質からの他物成長
ホルモンの透過性は、脂質の相転移温度とも密接な関係
があり、相転移温度によって植物成長ホルモンの膜透過
性、ひいては安定性が左右されるので、用途に応じて脂
質會かえて利用することが大切であり、たとえは魚など
比較的低温の場合には脂質脂肪酸の不飽和度の高いもの
、体温の高い恒温動物では側鎖の長い飽和度の高い脂肪
ｒｋの入った脂’Ｒｋ使用するのがよい。

ステリンには、植物性ステリンとして、β−シトステロ
ール、スチグマステロール、カンベステｏ　−ルｆｘ　
ト（Ｄ　外、β−シトステロール−β−Ｄ−グルコサイ
ドなどのグルコサイドやエステルなども使用でき、動物
性ステリンであるエルゴステロール、コレステロールな
ども使用することができる。また、これらのものを含む
天然物、たとえば大豆油なども使用するとしができる。

このほか植物成長ホルモンの分解を防ぐフラボノイド又
はポリフェノール酸なども加えると安定性か強くなり、
ペクチンなども効果がある。このとき使用するフラボノ
イドとしては、モリン、クエルセチン、インクエルシト
リン、ミリセチン、ヘスベリジンなどのほかクワノン、
モラセチンなどを用いるとよく、ポリフェノール酸とし
ては没食子酸、プロトカテキュ酸、コーヒー酸、クロロ
ケン酸などを用いることができる。また安定性をよくす
るためカルシウム又（ｄ、シ）二ンヲ加えるのも有効で
ある。

投与形態の一例をおけると、ホスファチジルコリン、ホ
スファチジルセリンなどの脂質をクロロ乃、ルム、四塩
化炭素などの溶媒にに♀かし、必要に応じてステリン、
その他を加えてとかし、ナス型フラク、コに入れてよく
混合し１、これをロータリーエバポレータにて減圧下で
溶媒を除去して器壁に二分子層Ｐｒ’ｔ＋　Ｉｔつくる
。これ全減圧デシケータ中に１２Ｉ５１Ｆｆｕ」放餉し
て完全に溶媒を除去する。こうして、ｌＪｇ負捷たは脂
質士ステリン−の二分子層膜を作り、これを植物成長ホ
ルモンまたは植物成長ホルモンを含む倍散剤と混合して
おき、用にのぞんで水を加えて混合し、適宜方法で投与
する。

別の投与形態としては創記二分子層膜の形態のその除水
を加えて練り合わせておく方が効果が大きいが駆足はさ
れない。さらに、脂質も上記の様な処理を施さすに原料
粉末のま＼用いても良い。

植物成長ホルモンの使用量は、たとえは人工飼料に使用
する層１合は飼料１００ｖ中に１×和　μＶ〜１ｒｎｇ
程度でよい。この量はオーキシン、ジベレリンなど植物
成長ホルモンの種類に関係なくはソ同じである。

以下、実験例九ついて説明する。

実験例１ 第１表に示−を基本飼料（１）に、脂質又は脂質＋β−
シトステロールと、インドールαトｒｔｌ＜　又＆：ｔ
　ジベレリンＡ３とをそれぞれ加えた飼料をつくり、こ
の飼料で蚕を飼育した。また、別に第１表に括弧書きで
示した様に基本゛飼料（１）にｚ」シて桑葉末を和係増
やし、セルロース粉末を釦％減らした基本飼料（２）を
つくり、この飼料との比較をも行なった。なお、基本飼
料の調製は原料粉末１に５Ｑｒ　Ｌで２，２倍量の水を
加え練合した後１１５℃、３０分間加熱滅菌した。

また、前記脂質は、ナス型フラスコ内で７オスフアチジ
ルコリン５０曙をクロロホルム５０ｔｒ！に溶かし、フ
ラッシュエバポレータで回転しながら減圧下で溶媒を涌
去し、さらにデシケータ−にて乾録し、溶媒を完全に除
去した後、冷暗所に保存したものであり、前記脂質＋β
−シトステロールは、同じくフオスファチジルコリン５
０ｇｎＩ及びβ−シトステロール２５ｍｐｆクロロホル
ム５０ｍ／に溶かし、以後同様にしてつくったものであ
る。

第　１　表　基本飼料　（重量％） 奈葉末　２０　、０　（３０、０）　無機塩　０．５（
０，５）脱脂大豆粉末　ｓ６．５（３６，５）　ビタミ
ン混合物　０５（０，５）セルロース粉末１４．０（４
，０）　アスコルビン酸　１．０（１，０）馬鈴薯でん
ぷん１９．５（１９，５）　イノジット　０５（０，５
）＾　糖　５．０（５，０）　塩化コリン　０．１（自
６１）クエン酸　２．０（２，０）　ソルビン酸　０４
（０，４）０外は基本飼料（］）の組成 ０内は基本飼料（２）の組成 試験は蛸化した！！１蚕を掻立て、それぞれ２９℃およ
び２５℃で飼育を行なった。掻立後９日目の飼育成績を
第２表に示す。試験区は各区６０頭を飼育し、蚕品種は
郡秋×秀月を使用した。

第　２　表　（１） 第２表（２） ※　基本飼料１０ｖ当りの植物成長ホルモンのμ２数４
Ｉ※　掻立９日月の９数 この結果から次の様なと吉がわかる。即ち、桑葉末には
植物成長ホルモンが含１れていると思われるが、２０％
桑葉末ではその量が少ないため体重が小さく、それにイ
ンドール酢酸を加えてやると体重が増加し、さらに脂質
または脂少十ステリンを加えるとさらに体重が増加する
。桑葉末量ヲ３０チに増やすと植物成長ホルモンの量も
増える結果として体重も増加する。また、２９℃、９日
間では遊離状態で加えられた植物ホルモンは分解を受け
るため体重増加量が少ないこともわかる。

実験例２ 桑葉育における４令２日及び３日月にそれぞれ１回づ＼
給桑直前の蚕にインドール酢酸またはジベレリンと脂質
または脂質及びβ−シトステロールの溶液をそれぞれ混
合したものを噴窮し、直ちに給桑して飼育をつｙけ、添
加以後の飼育は通常通り行って面の成績を調査した。試
験区は各区２００頭、蚕品種は錦秋×鐘和、飼育温度は
４令２〜３日のみ２５℃、そのほかは自然温度（１８℃
〜２６℃）とした。第３表にその結果を示す。

第　６　表 壷　−頭当りの１０　μｉ数 この実験例から植物成長ホルモンを脂質ビ共に経皮投与
しても′＃４重及び繭層１の両方について顕著な効果が
得られることがわかる。

実東例五 また、植物成長ホルモンが脂質によって安定化すること
を実証するため、別の実験を行なった。

植物成長ホルモンは光、温度、金属イオンなどによシ分
解を受けるが、最も鋭敏でしかも特異的に分解されるの
は分＃酵素によるものである。そこで、植物成長ホルモ
ンとしてインドール酢酸を用い、分解酵素としてはよく
用いられるｗｈｏｌｅ　ｃｙｔ−ｏｐｌａ６ｍ　ｏｆ　
Ｆｉｔｉｏｌａｔｅ４　Ｐｅａ　Ｓｅｅｄｌｉｎｇ（ｘ
　７ドウ豆の苗からとったもの）を用いて安定性分検討
した。

即ち、脂質または脂質＋β−シトステロールとインドー
ル酢酸溶液をよく混合した後分解酢素を入れ、２５℃、
ＰＨ６，６の燐酸紅伽液中に放良し、それぞれ１、ろ、
５時間後にとり出し、５分間煮沸して反応金止めた後、
サルコアスキー反応を用い、呈色液の５３０ｎｍにおけ
る吸光度を測定してその安定性を比較した。その結果は
第６表に示す通シで、インドール酢酸のみの場合、５時
間後にはほとんど分解されてしまうのに反し、脂質又は
脂質＋β−シトステロールを加えたものはその分解率が
非常に少ないことを示している。このことは、分解酵素
の特異性からいって植物成長ホルモンが脂質又は脂質＋
β−シトステロールと結合して安定な化合物をつくって
いることを証明している。

第　４　表　インドール酢酸の安定性

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 植物成長ホルモンを水中に二分子層膜を形成可能な脂質
   とともに与えることを特徴とする動物に対する植物成長
   ホルモンの、投与方法。