JPS5941141B2 - 尿及び体液の「ろ」過材 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、尿及び体液中の微量生体成分を免疫学的に測
定するための沢過材に関する。

尿及び体液中に分泌されるホルモンその他微量の生体成
分を測定して、その結果を臨床診断あるいは病気の予後
判定に利用することは広く行われている。

近年の臨床化学及び免疫化学の進歩に伴つてこれをより
精密に測定する方法が研究開発され、臨床医学の進歩に
大きな貢献をしている。たとえば尿中の人絨毛性ゴナド
トロピンｈＣＧを測定することにより妊娠の確定、その
状態の診断、絨毛性腫瘍の診断及び予後判定等を行うこ
と、人胎盤性ラクトージエンｈＰＬ）エストリオール等
を測定することにより妊娠、胎盤及び胎児の状態等の診
断を行うこと、あるいは尿中の人フィブリン体分解産物
ＦＤＰの量を測定することにより腎疾患の補助診断及び
予後観察を行うことなどがあげられる。これらの場合に
は微量測定が要求されるので、一般には免疫化学を応用
した方法、たとえば血球（又はラテックス）を担体とし
た直接凝集反応、あるいは凝集阻止反応を用いる方法が
利用されている。

前者はｈＣＧ、、ＦＤＰあるいは人フイブリノーゲんＦ
ｇ等を抗原としてウサギ、モルモツト、山羊等の動物に
免疫して得られる抗体を、赤血球又はラテックス粒子の
表面に感作させ、これを被験尿と混和し、この場合粒子
が凝集を起こせば該抗体に対応する抗原が尿中に存在し
ていることを知るものである。また後者は血球又はラテ
ックス粒子に抗原を感作させ、これと対応する抗体及び
被験尿を混和し、この場合粒子が凝集を起こさなければ
尿中に抗原が存在していることを知るものである。この
両反応においては、抗体又は抗原の粒子への感作量を規
定することにより最少検出量（感度）を調整することが
できるので、定性的検出だけでなく定量も可能である。
さらにより感度のよい精密な測定が要求される場合には
、放射免疫測定法が行われる。これはたとえば被験尿中
の抗原とその抗体との反応系に、一定量の同位元素標識
抗原を加えて競合反応を行わせ、抗体と結合した標識抗
原量を測定することにより、被験尿中の抗原量を知るも
のである。しかしこれらの免疫反応はきわめて特異性の
高い反面、その反応系は微妙な影響を受けやすい。

特に尿は複雑な成分を含み、しかも個体差が大きいため
、尿中の微量成分を免疫学的に測定する場合にしぱしぱ
尿成分の非特異的な干渉作用に直面し、たとえば非妊娠
を妊娠と誤判定したり、ＦＤＰの含量が感度以下にもか
かわらず陽性と誤判定したりすることがある。これを避
けるため通常は体液又は尿は測定の前に必ず▲過又は遠
心したのち検体としている。しかし▲紙等を用いる一般
の▲過方法では、尿中の被測定物質のｒ紙への吸着損失
が生じ、検出感度に近い存在量の場合には見のがす危険
性があつた。まして精密な定量値が要求される場合には
、臨床上重大な誤判定をおかす危険性があつた。またポ
リアクリロニトリル系合成繊維又は酢酸セルロース繊維
が沢過材として用いられることが知られている。

しかしこれらの繊維を用いてたとえば１０ｍＩＵ／ｍｌ
のＨＣＧを沢過した場合には、１０〜２２％の吸着損失
が生じることが知られた。本発明者らは先に、繊維体を
特定の物質で処理することにより従来の沢過材の有する
前記の欠点を除去しうることを見出した（特開昭５２−
８３９３０号）。この発明は、測定系における免疫学的
に不活性な物質で処理した綿状繊維から成る免疫学的測
定のための尿及び体液の沢過材である。本発明者らはさ
らに研究を進めた結果、綿状繊維の代わりに合成樹脂の
発泡体又は焼結体を同様に処理したものを用いる場合に
も、尿及び体液中に含まれる非特異的反応を起こす物質
を有利に除去し、かつ被測定物質の吸着損失を防止でき
ることを見出した。

本発明はこの知見に基づくもので、測定系における免疫
学的に不活性な物質で処理した合成樹脂の発泡体又は焼
結体からなる、尿及び体液の免疫学的測定のためのｒ過
材である。

本発明の▲過材は、合成樹脂の発泡体又は焼結体（以下
合成樹脂多孔質体と略称する）を、測定系における免疫
学的に不活性な物質で処理することにより製造される。

この処理は、合成樹脂多孔質体を好ましくは不活性物質
の溶液に浸漬（微量吸着）することにより行われ、次い
で水洗し又は水洗することなく乾燥する。合成樹脂多孔
質体としては、多孔質を有する種種の合成樹脂物質が用
いられる。

好ましいものは、たとえばポリビニルホルマールを基質
とする発泡体、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリア
ミドなどの焼結体である。該合成樹脂多孔質体は連続気
孔及び高い気孔率を有し、流体抵抗が低いものが特に好
ましい。この種の合成樹脂多孔質体は、多量の試料の沢
過にも好適である。合成樹脂多孔質体は公知の方法によ
り製造することができるが、市販品を用いてもよい。免
疫反応においてはその系に対して特定の交叉反応を示す
ものがある。

たとえばＨＣＧに対する人黄体形成ホルモンＨＬＨｌ人
卵胞刺激ホルモン（ＨＦＳＨ）等、またＦＤＰに対する
Ｆｇ等は、それぞれの系に対して使用することができな
い。また人の生体成分を測定する場合には、人に由来す
る血清性蛋白質は好ましくない。免疫反応を阻害する金
属イオンを含む溶液も好ましくない。測定系における免
疫学的に不活性な物質としては、好ましくは蛋白質、た
とえば牛、馬、モルモツト、ラツト等の動物の血清アル
ブミンが用いられ、特に牛血清アルブミンＢＳＡが好ま
しい。グリシン等のアミノ酸類及びポリペプタイドも不
活性物質として用いられる。さらにキレート剤、たとえ
ばエチレンジアミン四酢酸ＥＤＴＡをこれら不活性物質
と併用すると、非特異的反応を押える効果をより向上さ
せることができる。不活性物質は、一般に０．０５〜１
％、特に０．１〜０．５％の水溶液として用いることが
好ましく、さらにこの溶液にＥＤＴＡを１〜２０ｗｇ／
Ｍｌｌｌ特に２〜１０ｍｇ／ｍｌ添加することが好まし
い。

不活性物質の補助的な効果を加味し、かつ免疫反応に適
したＰＨ域を保つために、水溶液の代わりに緩衝液とす
ることがより好ましい。本発明の沢過材は任意の種々の
形状、たとえばプロツク状、円柱状、シート状、板状、
小片状、粒状その他の形で使用することができ、免疫学
的に不活性な物質で処理する前又はその後にこれらの形
状としてよい。

免疫学的測定に用いられる尿及び体液は通常は少量であ
るから、その普通の▲過装置に適合する形状が好ましい
。たとえばガラス製ロードの場合は、シート状の▲過材
をｒ紙のようにして用いるか、ロード内壁に合わせた円
錐形の沢過材をロードにはめ込んで、あるいは有孔板と
ほぼ同じ直径の円形シート又は円板としてその上に載せ
て用いられる。またロード、スポイト又はプラスチツク
製チユーブの管状部に円柱状の▲過材を密接に挿入して
用いてもよい。たとえば内径約５Ｔｍのポリエチレン製
チユーブに本▲過材を１〜２ａ１］の長さで詰め、この
チユーブをスポイ卜の先に装着して使用する。本沢過材
は通常使用に際して尿及び体液により若干膨潤し、ロー
ド壁又は管壁に密接する。本▲過材は、人の尿及び体液
たとえばを髄液などを沢過するために用いられ、このほ
か動物たとえば家畜、家禽、愛玩動物の尿及び体液の▲
過に用いてもよい。

本発明による合成樹脂多孔質体の▲過材を使用する場合
は、尿及び体液中の被測定物質の吸着損失を防ぎ、かつ
尿及び体液中での反応に悪影響を及ぼす成分（非特異的
な反応を起こす物質）を除去することができる。

これによつてきわめて精度の高い定量結果が得られ、こ
れを臨床診断に利用することができる。たとえば妊娠の
診断、ならびに癌、腎等の疾患その他の内分泌疾患の診
断の資料を得るため、尿及び体液中の微量生体成分の微
量定量を高精度で行うことができる。なお妊娠の診断の
場合は、比較的多量のＨＣＧ（１１Ｖ／ｍｌ以上）を測
定することにより行われるが、絨毛性腫瘍の予後判定に
は５０１↓４ｄ程度の微量ＨＣＧを定量する必要がある
。本発明の沢過材を用いると、このような微量定量にお
いても高精度の結果が得られる。実施例 １ ポリビニルホルマール発泡体を、ＢＳＡＯ．ｌ％及びＥ
ＤＴＡ５ｌｌ！ｇ／ｍｌを含有するグリシン一ＮａＯＨ
緩衝液（ＰＨ９．２、μ＝０．２４）に一夜浸漬し、次
いで発泡体を取り出して乾燥すると、本発明の▲過材が
得られる。

実施例 ２ ポリプロピレン焼結体を、ＢＳＡＯＯ．５％水溶液に一
夜浸漬したのち乾燥して、▲過材とする。

実施例 ３ポリエチレン焼結体を、ラツト血清アルブミ
ン０．５％を含有するグリシン緩衝液に一夜浸漬したの
ち乾燥して、沢過材とする。

下記試験例において、試料のｒ過は次のようにして行つ
た。

未処理の合成樹脂多孔質体、ならびに実施例１〜３と同
様に処理して得られた本発明の▲過材を、それぞれ１〜
２Ｃ０１の長さで内径５ｗｉのポリエチレン製チユーブ
に充填し、このチユーブをスポイトの先にはめ込む。Ｐ
過材を通して試料をスポイトに吸入したのち、チユーブ
を除去すｊ］ つ る。

スポイト中のｒ過された試料を次いで試験（測定）のた
めに使用する。なおすべての試験例において１例につき
１．０ｍ１の試料を用いて試験した。試験例 １ 健康非妊娠婦人尿５０例について、ラテツクス直接凝集
反応（感度１．０１Ｖ／ｍｌ）により試験した。

その結果、未ｒ過尿では３８例力坪（疑陽性）ないし＋
（陽性）を示した（即ちＨＣＧに基因しない非特異的凝
集反応を示した）。また未処理のポリビニホルマール発
泡体、ポリプロピレン焼結体又はポリエチレン焼結体で
ｒ過した尿では、それぞれ３例、５例及び４例が士ない
し＋を示した。これに対し前記合成樹脂多孔質体を実施
例１〜３と同様に処理して得られた本発明の沢過材を用
いて▲過した尿は、いずれの場合にも全例が一（陰性）
を示した。これらの結果から、尿を沢過しないと非特異
的反応が生じること、ならびに各種合成樹脂多孔質体を
用いても、測定系における免疫学的に不活性な物質で処
理しなければ、非特異的反応を完全に除去できないこと
が明らかである。試験例 ２ 正常妊娠婦人の５週目ないし３か月目の尿１００例につ
いて、ポリビニルホルマール発泡体、ポリプロピレン焼
結体又はポリエチレン焼結体を実施例１〜３と同様に処
理して得られた本発明の沢過材を用いて▲過し、得られ
た▲過尿をラテツクス凝集反応（感度１．０１切４ｄ）
及び赤血球凝集阻止反応（感度０．５１↓４Ｊ）により
それぞれ試験した。

その結果ポリエチレン焼結体では９７％、ポリプロピレ
ン焼結体では９８％、ポリビニルホルマール発泡体では
１００％の陽性率を示した。試験例 ３ （ラテツクス凝集反応によるＨＣＧＯ）Ｐ過材への吸着
試験）健康非妊娠婦人尿にＨＣＧを第１表に示す濃度で
溶解し、第１表に示す各種合成樹脂多孔質体を用いてそ
れぞれ▲過し、ラテツクス直接凝集反応（感度１．０１
↓４ｄ）により試験した。

その結果（凝集像の変化）を第１表に示す。表中の記号
十は陽性、士は疑陽性、一は陰性を意味する。この結果
から明らかなように、未処理の合成樹脂多孔質体では規
定どおりの感度を示さず、本発明により測定系における
免疫学的に不活性な物質で処理した▲過材を用いること
によつて初めて１．０１↓４ｄの規定の感度を示した。
試験例 ４ （放射免疫測定法によるＨＣＧＯＰ過材の吸着試験）健
康男子尿５例に濃度１０ｍＩＶ／ｍｌとなるようにＨＣ
Ｇを溶解し、これを試験例３と同様にして第２表に示す
ｒ過材を用いて▲過し、各▲過尿中に残存するＨＣＧ量
を放射免疫測定法により定量した。

その結果を第２表に示す。表中の数値は残存ＨＣＧ料（
％）を示す。この結果から、本発明のｒ過材は低濃度の
ＨＣＧ溶液の場合にも優れた改善効果を示すことが知ら
れる。

試験例 ５ 尿中のＦＤＰを抗人フイブリノーゲンウサギγ−グロブ
リン感作ラテツクス試薬（感度０．５μｇ／ｍｌ）を用
いて、直接凝集反応により試験した。

試験例１と同様に、未済過尿では感度以下のＦＤＰ存在
量にもかかわらず、健康男子尿５０例中４０例に非特異
的な凝集像を示した。これに対し本発明の▲過材を用い
てｒ過した尿は感度以下の疋存在量では全例が陰性を示
した。このことより尿中のＦＤＰ量を定量する場合にも
尿を予め▲過しなければならないことが明らかである。
試験例 ６ （ＦＤＰの▲過材への吸着試験） 健康男子尿５例に濃度１００μ【４ｄとなるようにＦＤ
Ｐを溶解し、これを第３表に示す▲過材を用いて沢過し
、各沢過尿に残存するＦＤＰ量を放射免疫測定法により
定量した。

その結果を第３表に示す。表中の数値は残存ＦＤＰ量（
％）を示す。この結果からＦＤＰはＨＣＧに比べて吸着
性が大きいが、本発明の沢過材を用いることにより優れ
た改善効果が得られることが認められる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 測定系における免疫学的に不活性な物質で処理した
   合成樹脂の発泡体又は焼結体から成る、免疫学的測定の
   ための尿及び体液の濾過材。