JPS5935597B2 - アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 - Google Patents
アンジオテンシン変換酵素の活性測定法Info
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- JPS5935597B2 JPS5935597B2 JP55181307A JP18130780A JPS5935597B2 JP S5935597 B2 JPS5935597 B2 JP S5935597B2 JP 55181307 A JP55181307 A JP 55181307A JP 18130780 A JP18130780 A JP 18130780A JP S5935597 B2 JPS5935597 B2 JP S5935597B2
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- angiotensin
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアンジオテンシン変換酵素の活性測定法に関し
、下記一般式(上式中Xは0H.NH2またはN(CH
3)2であり、R1がHの場合にはR2はHであり、R
1がの場合はR2はCH2CH(CH3)2 である)で示される合成基質X−ヒプリル一L一ジペブ
チド、ヒブリカーゼおよび4−アミノアンチピリンを含
有する溶液とアンジオテンシン変換酵素を含有する溶液
とを混合し、この混合液に酸化剤を添加して生成される
キノンイミン色素の濃度を、比色法によつて測定する段
階を含むことを特徴とするアンジオテンシン変換酵素の
活性測定法に関するものである。
、下記一般式(上式中Xは0H.NH2またはN(CH
3)2であり、R1がHの場合にはR2はHであり、R
1がの場合はR2はCH2CH(CH3)2 である)で示される合成基質X−ヒプリル一L一ジペブ
チド、ヒブリカーゼおよび4−アミノアンチピリンを含
有する溶液とアンジオテンシン変換酵素を含有する溶液
とを混合し、この混合液に酸化剤を添加して生成される
キノンイミン色素の濃度を、比色法によつて測定する段
階を含むことを特徴とするアンジオテンシン変換酵素の
活性測定法に関するものである。
アンジオテンシン変換酵素(以下ACEと略記する)は
生体内においてアンジオテンシンIに作用し、そのC一
末端のジペプチドすなわちL−ヒスチジル一L−ロイシ
ンを遊離せしめて、血圧上昇作用のある活性型のアンジ
オテンシンを生成する酵素である。
生体内においてアンジオテンシンIに作用し、そのC一
末端のジペプチドすなわちL−ヒスチジル一L−ロイシ
ンを遊離せしめて、血圧上昇作用のある活性型のアンジ
オテンシンを生成する酵素である。
この酵素はレニン・アンジオテンシン系あるいはキニン
・カリクレーン系と関連して生体内で重要な役割をして
いるが、この酵素の血中でのレベルによつてサルコイド
ーシスの診断をすることができる。従つて上記ACEの
酵素活性を測定することは生理的あるいは臨床的に有意
義であり、従来その測定法として、(1)放射性同位元
素を用いる方法、(2)螢光を用いる方法、(3)液体
クロマトグラフイ一による方法などが提案されているが
、これらの方法は特殊な装置を必要とするために一般的
な方法として用いられていない。
・カリクレーン系と関連して生体内で重要な役割をして
いるが、この酵素の血中でのレベルによつてサルコイド
ーシスの診断をすることができる。従つて上記ACEの
酵素活性を測定することは生理的あるいは臨床的に有意
義であり、従来その測定法として、(1)放射性同位元
素を用いる方法、(2)螢光を用いる方法、(3)液体
クロマトグラフイ一による方法などが提案されているが
、これらの方法は特殊な装置を必要とするために一般的
な方法として用いられていない。
また上記の方法の他にカツシユマンらの提案した方法が
あり、この方法では合成基質ヒプリル一L−ヒスチジル
一L−ロイシンを用い、これをACEを含有している試
料(例えば血清、体液など)と所定時間反応せしめた後
、反応停止剤例えば塩酸を添加し、生成したヒプリル酸
を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチルを蒸発して乾固した
後、蒸留水に溶解し、紫外部において吸光度を測定して
ヒプリル酸の濃度を求め、これから計算によつてACE
の活性を求める。本発明は、上記の方法と異なり、AC
Eの活性を簡単に測定する方法を提供するものであるが
、本発明者は、上記と同じ合成基質、ヒプリカーゼ、4
−アミノアンチピリン、ペルオキシダーゼおよび過酸化
水素からなる試薬を、アンジオテンシン変換酵素を含有
する液体に混合し、生成されるキノンイミン色素の濃度
を比色法によつて測定する段階を含む、アンジオテンシ
ン変換酵素の活性測定法を提案したが、上記ペルオキシ
ダーゼは安定性において欠けるところがあり、さらに価
格も高いという欠点がある。本発明はこの欠点を改善す
るために開発されたものであつて、本発明者らは上記ベ
ルオキシダーゼと過酸化水素の代りに、下記に示すよう
な酸化剤を用いることによつて、アンジオテンシン変換
酵素の活性を、安定にかつ安価に測定しうることを発見
した・本発明はこの発見に基づくものであつて、酸化剤
としては、過ヨウ素酸、過臭素酸、過塩素酸、フエリシ
アン化カリウム、硝酸セリウムアンモニウム、クロラミ
ンT1クロラミンB,無水クロム酸などであり、このう
ちでも過ヨウ素酸が最も効果的に用いられる。
あり、この方法では合成基質ヒプリル一L−ヒスチジル
一L−ロイシンを用い、これをACEを含有している試
料(例えば血清、体液など)と所定時間反応せしめた後
、反応停止剤例えば塩酸を添加し、生成したヒプリル酸
を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチルを蒸発して乾固した
後、蒸留水に溶解し、紫外部において吸光度を測定して
ヒプリル酸の濃度を求め、これから計算によつてACE
の活性を求める。本発明は、上記の方法と異なり、AC
Eの活性を簡単に測定する方法を提供するものであるが
、本発明者は、上記と同じ合成基質、ヒプリカーゼ、4
−アミノアンチピリン、ペルオキシダーゼおよび過酸化
水素からなる試薬を、アンジオテンシン変換酵素を含有
する液体に混合し、生成されるキノンイミン色素の濃度
を比色法によつて測定する段階を含む、アンジオテンシ
ン変換酵素の活性測定法を提案したが、上記ペルオキシ
ダーゼは安定性において欠けるところがあり、さらに価
格も高いという欠点がある。本発明はこの欠点を改善す
るために開発されたものであつて、本発明者らは上記ベ
ルオキシダーゼと過酸化水素の代りに、下記に示すよう
な酸化剤を用いることによつて、アンジオテンシン変換
酵素の活性を、安定にかつ安価に測定しうることを発見
した・本発明はこの発見に基づくものであつて、酸化剤
としては、過ヨウ素酸、過臭素酸、過塩素酸、フエリシ
アン化カリウム、硝酸セリウムアンモニウム、クロラミ
ンT1クロラミンB,無水クロム酸などであり、このう
ちでも過ヨウ素酸が最も効果的に用いられる。
また上記一般式で示される合成基質X−ヒプリル一L−
ジペプチドのうち、式を有するp−ヒドロキシヒプリル L−グリシル −L−グリシン、 または式 を有するp−ヒドロキシヒプリル一L−ヒスチジル一L
−ロイシンが、合成基質として特に用いられる。
ジペプチドのうち、式を有するp−ヒドロキシヒプリル L−グリシル −L−グリシン、 または式 を有するp−ヒドロキシヒプリル一L−ヒスチジル一L
−ロイシンが、合成基質として特に用いられる。
本発明の方法による測定の原理は次の通りである。
血清、体液など、ACEを含有する液体に、既述した一
般式で示されるX−ヒプリル一L−ジペプチドを加える
と、X−ヒプリル酸とジペプチドを生じ、これにヒプリ
カーゼを加えるとX一安息乏香酸とグリシンを生じ、X
一安息香酸は、上述したような酸化剤によつて酸化され
て4−アミノアンチピリンと縮合し、キノンイミン色素
を生成する。
般式で示されるX−ヒプリル一L−ジペプチドを加える
と、X−ヒプリル酸とジペプチドを生じ、これにヒプリ
カーゼを加えるとX一安息乏香酸とグリシンを生じ、X
一安息香酸は、上述したような酸化剤によつて酸化され
て4−アミノアンチピリンと縮合し、キノンイミン色素
を生成する。
このキノンイミン色素の濃度を比色法によつて測定する
ことによつて上記ACEの活性を知ることができる。上
記本発明の測定法の原理を式をもつて示すと次のとおり
である。
ことによつて上記ACEの活性を知ることができる。上
記本発明の測定法の原理を式をもつて示すと次のとおり
である。
本発明の測定法の実施例を下記に示す。
例
p−ヒドロキシヒプリル一L−ヒスチジル一L−ロイシ
ン5.6mM1ヒプリカーゼ1U14−アミノアンチピ
リン2mM、塩化ナトリウム0.5Mおよびホウ酸0.
1Mを含有する試薬(PH8.3)0.5m1に、血清
501t1を加え、37℃で20分間反応せしめた後、
この反応液に、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)3
mMと過ヨウ素酸ナトリウム17.5mMを含有する反
応停止液0.5mjを加(え37℃の温度に5分間保持
し、キノンイミン色素を生成せしめた後、波長505n
mの光の吸光度を測定し、その値をAとした。
ン5.6mM1ヒプリカーゼ1U14−アミノアンチピ
リン2mM、塩化ナトリウム0.5Mおよびホウ酸0.
1Mを含有する試薬(PH8.3)0.5m1に、血清
501t1を加え、37℃で20分間反応せしめた後、
この反応液に、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)3
mMと過ヨウ素酸ナトリウム17.5mMを含有する反
応停止液0.5mjを加(え37℃の温度に5分間保持
し、キノンイミン色素を生成せしめた後、波長505n
mの光の吸光度を測定し、その値をAとした。
一方、上記反応停止液0.5m1に、ホウ酸0.1M含
有溶液0.5m1を加えた後、血清0.05m1を加え
てブランクテスト用試薬を調製し、この試薬の吸光度を
上記と同様に測定し、その値をBとした。
有溶液0.5m1を加えた後、血清0.05m1を加え
てブランクテスト用試薬を調製し、この試薬の吸光度を
上記と同様に測定し、その値をBとした。
ACEの活性単位(MU)は次式によつて計算される。
測定を20回繰返して得た結果は次の通りであつた。
測定を20回繰返して得た結果は次の通りであつた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 下記一般式で表わされるX−ヒプリル−L−ジペプ
チド、ヒプリカーゼおよび4−アミノアンチピリンを含
有する溶液と、アンジオテンシン変換酵素を含有する液
体とを混合し、この混合液に酸化剤を添加して生成され
るキノンイミン色素の濃度を、比色法によつて測定する
段階を含むことを特徴とするアンジオテンシン変換酵素
の活性測定法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 上式中XはOH、NH_2またはN(CH_3)_2で
あり、R_1がHの場合にはR_2はHであり、R_1
が▲数式、化学式、表等があります▼の場合はR_2は
CH_2CH(CH_3)_2である。 2 X−ヒプリル−L−ジペプチドが下記式を有するX
−ヒプリル−L−グリシル−L−グリシンであることを
特徴とする特許請求の範囲第1項記載のアンジオテンシ
ン変換酵素の活性測定法。 ▲数式、化学式、表等があります▼3 X−ヒプリル−
L−ジペプチドが下記式を有するX−ヒプリル−L−ヒ
スチジル−L−ロイシンであることを特徴とする特許請
求の範囲第1項記載のアンジオテンシン変換酵素の活性
測定法。 ▲数式、化学式、表等があります▼4 酸化剤が過ヨウ
素酸、過臭素酸、過塩素酸、フェリシアン化カリウム、
硝酸セリウムアンモニウム、クロラミンT、クロラミン
Bまたは無水クロム酸であることを特徴とする特許請求
の範囲第1項記載のアンジオテンシン変換酵素の活性測
定法。
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP55181307A JPS5935597B2 (ja) | 1980-12-23 | 1980-12-23 | アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 |
US06/330,110 US4407944A (en) | 1980-12-23 | 1981-12-14 | Method for determining the activity of the angiotensin-converting enzyme |
FR8123502A FR2496694B1 (fr) | 1980-12-23 | 1981-12-16 | Procede de determination de l'activite de l'enzyme transformant l'angiotensine |
NLAANVRAGE8105704,A NL183833C (nl) | 1980-12-23 | 1981-12-17 | Werkwijze voor het bepalen van de activiteit van het angiotensine omzettende enzym. |
GB8138282A GB2090403B (en) | 1980-12-23 | 1981-12-18 | Determining the activity of the angiotensin -converting enzyme |
DE19813150416 DE3150416A1 (de) | 1980-12-23 | 1981-12-19 | Verfahren und reagenz zur bestimmung der aktivitaet von angiotensin-konvertierendem enzym |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP55181307A JPS5935597B2 (ja) | 1980-12-23 | 1980-12-23 | アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS57105197A JPS57105197A (en) | 1982-06-30 |
JPS5935597B2 true JPS5935597B2 (ja) | 1984-08-29 |
Family
ID=16098379
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP55181307A Expired JPS5935597B2 (ja) | 1980-12-23 | 1980-12-23 | アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4407944A (ja) |
JP (1) | JPS5935597B2 (ja) |
DE (1) | DE3150416A1 (ja) |
FR (1) | FR2496694B1 (ja) |
GB (1) | GB2090403B (ja) |
NL (1) | NL183833C (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH027157Y2 (ja) * | 1983-09-02 | 1990-02-21 | ||
JPH0448320Y2 (ja) * | 1987-10-09 | 1992-11-13 |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5985299A (ja) * | 1982-11-05 | 1984-05-17 | Fujirebio Inc | カルボキシペプチダ−ゼaの活性測定方法 |
AU621245B2 (en) * | 1989-10-17 | 1992-03-05 | Boehringer Mannheim Gmbh | Hydrolase substrates, a process for the preparation thereof and agents containing them |
DE102022132512A1 (de) | 2022-12-07 | 2024-06-13 | Diasys Diagnostic Systems Gmbh | Testsystem zur Messung der Enzymaktivität des Angiotensin-konvertierenden Enzyms (ACE) |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IT986838B (it) * | 1972-05-12 | 1975-01-30 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Complesso di reagenti per la deter minazione enzimatica del glucosio sistema glucosio ossidasi perossi dasi con metodo manuale e automati co con lettura a termine o in cinetica |
US4108726A (en) * | 1976-07-15 | 1978-08-22 | Research Corporation | Sarcoidosis test |
US4115374A (en) * | 1977-05-10 | 1978-09-19 | James Walter Ryan | Substrates for angiotensin converting enzyme |
US4260682A (en) * | 1979-04-04 | 1981-04-07 | Ryan James W | High sensitivity assays for angiotensin converting enzyme |
JPS5823080B2 (ja) * | 1979-09-26 | 1983-05-12 | 富士レビオ株式会社 | アンジオテンシン変換酵素の活性測定法 |
-
1980
- 1980-12-23 JP JP55181307A patent/JPS5935597B2/ja not_active Expired
-
1981
- 1981-12-14 US US06/330,110 patent/US4407944A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-12-16 FR FR8123502A patent/FR2496694B1/fr not_active Expired
- 1981-12-17 NL NLAANVRAGE8105704,A patent/NL183833C/xx not_active IP Right Cessation
- 1981-12-18 GB GB8138282A patent/GB2090403B/en not_active Expired
- 1981-12-19 DE DE19813150416 patent/DE3150416A1/de active Granted
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH027157Y2 (ja) * | 1983-09-02 | 1990-02-21 | ||
JPH0448320Y2 (ja) * | 1987-10-09 | 1992-11-13 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE3150416C2 (ja) | 1987-02-12 |
NL8105704A (nl) | 1982-07-16 |
FR2496694B1 (fr) | 1985-10-25 |
GB2090403A (en) | 1982-07-07 |
DE3150416A1 (de) | 1982-08-12 |
FR2496694A1 (fr) | 1982-06-25 |
JPS57105197A (en) | 1982-06-30 |
GB2090403B (en) | 1984-05-16 |
US4407944A (en) | 1983-10-04 |
NL183833C (nl) | 1989-02-01 |
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