JPS5880556A - 過酸化物の比色定量のための色原体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、過酸化物特に酵素および（または）化学反応
によって生成された過酸化物の定量法を実施するだめの
還元を可能にする試薬物質に関する。

多くの反応が、高い反応速度を達成するため、または、
まれには、終点制御を可能にするために、酵素の寄与を
利用していることが知られている。

（して、この酵素反応の多くは、それ自身、担体と酸素
との間の相互作用を含み、そしてその生成物のひとつは
退散化水素であり、その量は出発化合物の警に比例する
。一方、また純粋に化学的でありそしてその反応過鵬で
最終生成物としての過　　・酸化物が生じ、その生成量
もまた初期条件における反応で導入された生成物の量に
比例するようカム範囲の反応が存在する。

さらに、過酸化水素および通常すべての過酸化物は、ベ
ルオ牟シダーゼ（ＰＯＤ）やカタラーゼのような特定の
酵素の使用を利用する反応に効果を与える担体として用
いられる。

このような酵素は、過酸化物を消費して適嶋な物質を酸
化する触媒作用をなし、過酸化物は還元される（特定の
例である過酸化水素の場合、還元は結果として水を与え
る）；一方で生成される酸化状態の物質は、存在する過
酸化物の量に比例し、そして過酸化物を生成する予備的
な反応に関係する出発担体の量に比例する。

下記のよう女一般的形式に従う過酸化水素の比色定量法
のための多くの試薬が提案されてきた。

（無色） 酸化状態のアクセプター十Ｈユ０ （有色） 還元状態のアクセッターとして様々な物質が用いられて
おり、そのような物質として、たとえば。

Ｑ−ジアニシジン、０−トリジン、０−フェニレンジア
ミン、グアヤク脂、アドレナリン、ン、ノールフタレイ
ン、ムＢＴｌｉｉ　（コ、ａ′−７ジノージー（３〜エ
チル−ベンゾグアゾリン−６−スルホン酸）フェロシア
ン化物、その他の物質がある。

／９Ｊ７４から１９１１３年にかけて、ｇ１ａｅｎｓｔ
ａ＠ａｔ（そしてひき続いてｉｃｍｅｒａｏｎ　）は、
ダーアミノーアンチビリンが、多数の芳香族化合物ある
いは複素稼式化合物の存在下で、たとえにフェロシアン
化物のような酸化性物質の作用によって１着色された反
応生成物を生せしめることを示した。

ひき続いて、Ｔｒｉｎｄθｒがこのような事実を再試鹸
し、仮は下記の形式に従って生物学的流体のグルコース
を定ｍ″′する比色法を与えたニゲルコース オキシダーゼ グルコース十ＨＪＣ＋　＋　０．２　　　　　　　グル
コン酸十ＢλｏコＨユ０，２＋ｌ−アミノアンチピリン
＋７エノール　（ＰＯＩ））型子ノン（有色ン十ＨユＯ ｉｖ３を都に’１ｉａｅｎａｔａｅｄｔは、酸化剤の存
在下で参−アミノアンチピリンとともに縮合され得る芳
香族化合物のなかに、芳香族アミンがあることを指摘し
てｉた。

このような教示にもとづ′いて、多くの研究者が、一連
の色原体を作ったが、それらはダーアミノアンチビリン
な含めて、水素原子上で置換し得る芳香族アミノ（Ｎ、
Ｍ−ジメチルアニリン、Ｎ、Ｎ−ジエチルアニリン）％
さらには、Ｉｌｌ、Ｎ−ジエチルトルイジン、Ｎ−エチ
ル−Ｎ−エチルアセトアミド−！−トルイジンのような
芳香族環で置換するアミンを用いることを提案するもの
であった。

我々は、多くの芳香族アミノ酸が、４１−アミノアンチ
ピリンまたは同様の化合物と酸化性物質の存在下で縮合
可能であり、その結果着色化合物を与えることを発見し
、これが本発明の技術的本質である。

そのような化合物は、上述した芳香族アミンを置き換え
ているので、多くの利点を与える。

すなわち： １、得られた着色縮合生成物は、対応する芳香族アミン
とともに得られた着色生成物よりも高いモル吸光係数を
持つ。

コ、上述した芳香族アミノ酸は、同体であり、それゆえ
、固体混合物に含まれ得るが、これらは、液体であるｈ
＜ｕの芳香族アミンと異なる。

３、この芳香族アミノ酸は、類似の芳香族アミンとは異
なり、有毒ではない。

本出願人は、／　ｆｔＯ年６月り／日に特許されたＵ、
　　Ｋ、Ｐａｔｅｎｔ　、／１５八ｊへ４１．＄６７号
の所有者であり、この特許は、特定の色原体化合物に関
するものであり、これもまた過酸化物の定量に適し、ダ
ーアミノーアンチビリン（あるーは類似化合物）および
ポールキュール（ｐｏｌｅｃｕｌｅ）に、フェノール型
の一〇Ｈ基を少なくもｌっ有する芳香族環を少なくとも
含む成分からなる。

生物学的流体中で酵素的に生成された過酸化水素の定量
において、上記化合物は、満足な結果を得ることを可能
にする。

しかしながら、多くの場合、物質および生物学的流体中
に微量濃度で存在する代謝物質によって酵素的に生成さ
れた過酸化水素を定量するためには１色原体が高い感度
を有することが肝賛である。

亭−アミノ−アンチピリンとフェノールまたはｐ。

ヒドロ中ジペンゾエイトを用いる色原体系よりも約参倍
以上の感度を持つ本明細書で例示されたいくつかの組成
物に関する色原体系が礼られ、この色原体系は、生物学
的流体の小量での試料を使用することを可能にするもの
であり（一方、使われる試薬は充分正確でかつ信頼性が
ある）、このことはまた、反応混合物の中の試験される
試料中に同時に存在するかもしれガい電在的妨害物質の
浸度を減少させるという付随的利点をもたらす。

したがって、本発明の第１の目的は、過酸化物の定量に
適するｆＴ却な色原体組成物を提供することにあり、さ
らに詳しくは、生物学的流体中に含まれる担体から酵素
的に生成される過酸化水素の定量に適する色原体組成物
を提供することにあり、この化合物は、ｌ−フェニル−
５−ピラゾリノンから誘導される化学構造に結合された
反応性基を少なくとも含む化合物と、下式の構造を有す
る芳香族アミノ酸とからなる： （式中、ＥおよびＰ７は、相互に同一があるいは異なり
、水素あるいは炭化水素性基でもよく、そして一方、又
は、水素または１価の陽イオンでありうる。） これら後記の化合物の中で、オルト−あるいはメターア
ミノ安届香酸とＮ−フルキルメタアミノ安息香誘導体、
上記すべてのメタ置換銹導体が特に興味深いことが明ら
かとなった。これら後記の化合′４ｋＪｃＤ中で、シ素
摩子が完全に置換された酸によって最も１ぐれた効果が
示された。

ダーアミノーアンチビリンに代わる系で使用される主た
る化合物の中で、次に示すようなものを列配することが
できる： アミノフェナジン（林タージェチルアミノーコ。

３、−ジノチル−７−７エニルー３−ビ５１９ｙ−！−
オン；スルファ建ビリン（コＪ３−ジメチルー１−２ユ
ニルー５−ピラゾロン−弘−７ミノメタンスルホン酸ナ
トリクム塩）； ジブピレン（（／−フェニル−２，３−ジメチル−５−
ビラゾロンーダーイルのナトリワム塩）インブチルアミ
ノメタンスルホン酸塩）；プロビルフェナジン（４Ｉ−
イソプロビルーコ。

３−ジメチル−７−７エニルー３−ピラゾリン−３−オ
ン）； トザリノｙ　（ｔｈｏｚａｌｉｎｏｎｅ　）　（コージ
メチルアミノー！−フェニル−λ−オキサゾリンーダー
オン）； メタンピロン（１−フェニルーコ、３−ジメチルーｊ−
ｔ’ｙゾロン−亭−メチルアミノメタンスルホネートナ
トリワム塩）。

以下において、ここで述べた色原体の系の酸化反応の一
般的なパターンを示すが、ここでは、色原体に対する駿
化剤としてペルオキシダーゼの存在下で過酸化水素が用
いられている。とは−え、またその他の過酸化物や適当
表絨化剤がこの目的のためにふされしい。

Ｃ，）１６ 反応の原理は以下の通りである： 適当ｆｂ　＆　厩の過酸化物を含む溶液と、本明細書で
述べた色原体の１つを含むＩＩ＆伽浩沿とを混合する。

完全に発色したら、適当な波長で測光する０発色した色
は、過酸化物の＆ＭＬに比例する。試薬は、以下の成分
を含んで調製することができる。

以下Ｏ％＆）〜ｄ）を含む粉末試薬： Ｓ）　　リンＷｉ塩、ＴＲより、アミノプロパンジオー
ルアセテートおよび他の誘導体あるいはその他の等個物
からつくられ得る叙釦系、 １＋）　　防腐性およびかびを抑制する物質、Ｃ）ダー
ア電ノーアンチピリンお工びその軌間種類の物質および
芳香族アミノ酸を含む色原体系、ｄ）ペルオキシダーゼ
。

尿酸の定量 適用蓋の成分は以下の通りである： 試験する物質を、手動あるいは自動的に、酸素（ウリカ
ーゼとペルオキシダーゼ）と色原体とを含む試薬ととも
に全部緩衝液中で混合する。尿１が酵素によって酸化さ
れ、そして反応の色が埃われた後に、適当力波長で手動
かまたは自動によって光学的読み取りを行なう。

生じた色は、試料中に存在する尿酸の蓋に比例する。

このような反応パターンに従って、この試薬に対するｈ
親は次のようＫなる： 単一の混合物中に、Ｗ素および色原体の反応に必要なす
べての化合物、あるいは、酵素である９リカーセとＰＯ
Ｄ％験伽剤（リン師塩、ＴＲｌ５．アセテート、γミノ
７０パンジオールおよび誘導体およびその他の物質）、
芳香族アミノ酸と亭−アミノアンチピリン（または同様
の化合物）、抗菌剤、表面活性剤および潜在的妨害を防
止するに適した化合物を含むことができる。

用意した区架糸中の試薬の崇度ニリン酸塩緩衝ゼｓＯＶ
ｈ。

ＩＮ；朱 １ｗ型性 ！１０　ｎｍでのムと尿酸の濃度の間の相関関係は、試
料中の尿ＷＩ論度がに岬／ｄｌまで１型であった。

比較 Ｆｏｓａａｔｉ　、　Ｐ、、　、　Ｐｒｅｎｏｉｐｅ　
ｈ　Ｌ−（Ｑｕａｄ、　５ｃｌａｖ。

Ｄｉａｇｎ、　正、１．１１１１　）による方法での比
較試験は次の結果を与えた： （Ｙ　−ｍ　Ｆｏｓａａｔｉの方法） ｙ−／、０θ／　Ｘ　−０，０３６１１１１）／ｄｌ　
　ｒ−θ、？ｆｆ！４ｒ、平均亭、６　Ｉｖ／ｄｉ　８
　Ｄ　０００ｇ　、　１ｌｌｊ／ｄｌＯ，Ｖ、　Ｓ露１
．を亭。

１一連の操作の中′の精度 ム〃、平均亭、ｙ　ｓＩＩ／ｄ１Ｂ、Ｄ、　ｏ、ｔコ■
／ａ　ＩＣ，Ｖ、　Ｓ−コ、ｔダ・

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ／、　／−フェニル−！−ピラゾリノンから誘導される
   化学構造に結合された反応性基を少なくとも含む化金物
   と下記の式の芳香族アミノ酸とからなる、過酸化物の比
   色法による定量に適した色原体組成物； （ここで、ＲおよびＲ７は、相互に同一かあるいは異な
   り、水素あるいは炭化水素性基でもよく、そして、一方
   、！は水素または１価の陽イオンでありうる。） コ、ｌ−フ、ニルー５−ピラゾリノンから誘導される化
   学構造がダーアｉノアンテビリンである、特許請求の範
   囲第１項に記載の色原体組成物。