JPS59172425A - 新規な血液凝固因子誘導体およびその製造法ならびにそれを含有する血液凝固促進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は血液凝固因子を化学修飾した誘導体およびその
製造法ならびにこれを含有してなる血液凝固促進剤に関
する。

血液の凝固活性が低下する疾病の一つとして血友病があ
る。血友病においては、先天的に凝固因子の欠損または
機能不全が存在するため、自然にあるいは些細な外傷に
よって深部組織に大きな血腫を生じたり、止血が遷延す
るという症状を呈するが、治療法としては不足する因子
の補充以外にはない。ところが、この補充療法も、血友
病Ａもしくは７オンウイルブランド病において不足する
凝固第■因子及び血友病Ｂにおいて不足する凝固■因子
などの血中半減期は各々１５時間及び２５時間であり、
血液の凝固活性維持のためには繁回の注射による投与が
必要とされてきた。しかも、これら凝固因子は不安定で
あり、消化管内で分解を受は易いため経口投与での有効
性は期待されず、静脈注射もしくは点滴を選ばざるを得
なかった。その結果、この疾病の治療が患者によって一
生涯続くため、治療に当っては、患者のみならず医師や
家族の負担が大きく、患者の社会生活の妨げとなってぃ
た。

本発明者らは、これらの血液凝固因子欠損または機能不
全の疾病の患者、およびその医師や家族の負担を軽減す
るべく検討を重ねた結果、血中での活性持続時間が延長
し、なおかつ経口投与可能な新規血液凝固因子誘導体を
見い出し、本発明を完成した。

従って、本発明の目的は血中で凝固活性の持続する凝固
因子のアミノ酸側鎖にポリアルキレングリコール誘導体
を結合してなる新規血液凝固因子誘導体を提供すること
にある。

他の目的は、上記の新規血液凝固因子誘導体を製造する
方法を提供することにある。

更に他の目的は、上記の新規血液凝固因子誘導体を含有
する経口投与でも使用可能な血液凝固促進剤を提供する
ことにある。

本発明の新規血液凝固因子誘導体は、血液凝固因子のア
ミノ酸側鎖に、カップリング剤を介して、置換基として
アルキル基またはアルカノイル基を含有していてもよい
分子量２００〜２Ｑ、ＯＯＯのポリアルキレングリコー
ルを結合してなる４のである。

ここにいう血液凝固因子とは、人血漿由来で血液凝固の
カスケードを完成させるために必要な因子■〜Ｘ■、お
よびそれらの活性型（Ｉａ　−ＸＩＩＩａ）　、フラグ
メント、コンブレックスも含む。

ポリアルキレングリコールとしては、ポリエチレングリ
コール、ポリプロピレングリコールオヨヒエチレングリ
コーループロピレングリコール共重合体などが含まれる
が、ポリエチレングリコールが好ましい。

また、ポリアルキレングリコールの置換基であるアルキ
ル基としては、メチル基、エチル基、ステアリル基など
が、またアルカノイル基としてはアセチル基、グロピオ
ニル基などがあげられるが、メチル基が特に好ましい。

ポリアルキレングリコールの分子量としては、２００〜
２へ０００のうち１．０００〜１０，０００が好ましい
。

カップリング剤としてはポリアルキレングリコールと結
合し、さらに血液凝固因子のアミノ酸側鎖のアミノ基と
結合できるものなら特に限定されないが、塩化シアヌル
、フッ化シアヌル等のハロゲン化シアヌル、ジブロモア
ル代 無水コハク酸誘導体、更にポリ６≠レングリコールとク
ロロ酢酸エチルエステルを反応させ、次いでヒドラジン
で処理し、得られたヒドラジドを亜硝酸で処理して得ら
れるアシルニトロベンジルクロライド、ｐ−ニトロフェ
ニルグリセリルエーテル等を反応させてポリ−チル、３
−（ｐ−ニトロンエノキシ）−２−ヒドロキシブロビル
エーテルヲ得、とのニトロ基を還元後、ジアゾ化して得
られるジアゾニウム塩などがあげられ、ハロゲン化シア
ヌルが特に好ましい。また、このハロゲン化シアヌルの
場合、ポリアルキレングリコールと血液凝固因子を結合
した後、残存するハロゲン原子が水酸基ｉＣｉｔ換され
てもよい。

本発明の新規血液凝固因子誘導体は、置換基としてアル
キル基またはアルカノイル基を含有していてもよい分子
量２００〜２０，０００り製造される。反応は、血液凝
固因子の凝固活性の低下が少ない条件で行なわなければ
ならない。すなわち緩衝液等でｐＨを調節しな２４時間
が好ましい。緩衝液のｐｇは血液凝固因子が完全には失
活しない範囲であれば任意に選択できるが、好ましくは
５〜９の範囲であり、またカップリング剤の種類等によ
っても決定される。ポリアルキレングリコールドカップ
リング剤の結合物の試薬量は、目的とする修飾度とのか
ねあいにより決定される。

すなわち、修飾度を高めようとすれば、高いｐＨで試薬
濃度を増し、長時間反応を行い、修飾度を低めようとす
れば、低いｐＨで試薬濃度を減じ、短時間反応を行う。

これらの修飾条件を適宜組み合わせることにより、安定
ポリアルキレングリコールとカップリング剤の結合物の
反応終了後、未反応の試薬は血液凝固因子活性を低下さ
せないそれ自体公知の生化学的方法、例えばゲーｐ過、
透析、イオ７交換クロマトグラフィーおよびアフィニテ
ィークロマトグラフィー等の方法を単独でもしくは組み
合わせることにより除去される０なお、製造した新規血
液凝固因子誘導体は、緩衝液や塩を含む状態あるいは単
品として凍結して保存するか、もしくは凍結乾燥して保
存の活性は使用したポリアルキレングリコールとカップ
リング剤の結合物の種類、修飾度によって異なる。例え
ば血液凝固第Ｘ因子をモノメチルエーテルポリエチレン
クリコール−４，６−ジクロロ−１，５，５−トリアジ
ンで修飾し、Ｆ［因子欠乏血漿の凝固時間の補正効果で
活性を測定すると、分子量５５０のもので１０ｍＭ　で
修飾したものは未修飾第Ｘ因子の１１＆８％を、また分
子量１５，０００のもので２ｍＭ　　では６６．６　％
を示した。これらは、第Ｘ１■、■因子をも含有してい
るため、それぞれの因子欠乏血漿を用いて第Ｘ因子と同
様に活性を測定すると、第Ｘ因子活性は各々２１０，１
１５．１％、第■因子活性は１１５．５．１０＆１チ、
第■因子活性は１０４．９．８五５チを示した〇一方、
ポリエチレングリコールの末端に置換のないもので修飾
を行うと、分子量６，０００のもので５ｍＭで修飾した
第Ｘ因子の活性は７１．８％、分子量３，３５０のもの
で５　ｍＭ　　で修飾した第Ｘ因子の活性は７１５チで
あった。末端がステアリルエーテルで分子量３．２０　
［１の活性化ポリエチレンクリコール、即チモノステア
リルエーテルホリエチレンクリコール−４，６−ジクロ
ロ−１，５，５−１−リアジンで５　ｍＭ　で修飾した
第Ｘ因子の活性は７ｔｏ％、第Ｘ因子活性は１５７．５
％、第■因子活性は１１［Ｌ３チ、第■因子活性は８９
４チであった。末端がステアリルエステルで分子量２，
７００の活性化ポリエチレングリコールで５　ｍＭ　で
修飾した第Ｘ因子の活性は９ＥＬ１％、第Ｘ因子活性は
１５９．１チ、第Ｘ因子活性は１０ＥＬ９’％、第Ｘ因
子活性は９１．４　％であった。

次に修飾試薬濃度と活性との関係を示す。

例えば平均分子量５ｏｏｏのモノメチルニーｍＭ　で未
修飾第Ｘ因子の９１．２　％、１４４ｍＭで９７．９．
４．２　ｍＭ　　で１１３チをそれぞれ示した。これら
の第Ｘ因子活性は、それぞれ１０４．４．１０５．５．
２０３　％、第■因子活性は１０ａ４．１１＆３．１０
４．７％、第Ｘ因子活性は８７．４．７４．７．１０２
．５％であった。

また、本発明で得られるポリアルキレングリコールで修
飾された新規血液凝固因子誘導体を犬に経口投与した所
、血中への移行が観察された。例えば、前述の平均分子
量ｓ、ｏｏ。

Ｏモノメチルエーテルポリエチレングリコール−４，６
−ジクロロ−１，５，５−）リアジンで修飾試薬濃度４
２　ｍＭ　で修飾した第Ｘ因子を牛乳に混入させ経口投
与した所、血中への移行が観察され、しかもこの時その
生理活性は持続していた。即ち、経口投与後１゜２．４
，６．８間装目に採血、クエン酸血漿を分離すると、こ
れらの血漿では投与前の血漿に比較して部分トロンボプ
ラスチン時間（ＰＴＴ）およびプロトロンビン時間（Ｆ
Ｔ）はいづれも短縮し、第Ｘ因子欠乏血漿の凝固時間補
正効果も著しかった。また第■、■、Ｘ因子の活性も持
続していた事から、第Ｘ因子製剤に共存するこれらの凝
固因子もポリエチレングリコール修飾を受け、消化管か
ら吸収され、血中へ移行したと考えられる。尚、未修飾
第Ｘ因子の経口投与では、補正効果は、生理的変動の域
中であった。また対照実験として、修飾試薬である平均
分子量５０００のモノメチルエーテルポリエチレングリ
コール−４，６−ジクロロ−１，５，５−）リアジンの
みの経口投与も行い、比較検討も行ったた試薬濃度を前
記実験の半分以下の１．７２ｍＭとして同様に調製した
修飾第Ｘ因子の経口投与実験では、欠乏血漿の凝固時間
補正効果が少なかった事から、経口投寿後消化管からの
吸収を可能ならしめるためには、一定以上の修飾度が必
要である事がわかる。

次に、血液凝固因子製剤を平均分子量５，０００のモノ
メチルニーデルポリエチレングリコール−４，６−ジク
ロロ−ｉ、５．５−）リアジンの２−１　ｎｎＭ、　２
−９４ｍＭおよび４．２　ｍＭ濃度で修飾し、混、金物
として犬に経口投与すると、第１肩因子の血中への移行
が観察された。即ち、投与犬の血漿は、投与前に比較し
てＰＴＴ。

ＦＴ共に短縮し、第■因子欠乏血漿の凝固時間補正効果
も著しかった。また、それらの効果は投与後８時間でも
観察された。一方、対照実験として未修飾第■因子を経
口投与すると、２時間後に一過性に凝固時間補正効果が
時間の延長した優れた血液凝固促進剤である事がわかる
。

本発明の新規血液凝固因子誘導体を医薬と、して用いる
場合は、第■因子誘導体を血友病Ａもしくは７オンウイ
ルブランド病に、第Ｘ因子誘導体を血友病Ｂに対して使
用し、また、凝固因子生合成低下性あるいは消費性出血
に対しても使用するが、投与方法としては静脈注射、点
滴、経口投与があげられる。現在市販の血液凝固因子製
剤には、ｐＨや浸透圧調節の目的で、アミノ酸や塩類が
添加しであるが、本発明における新規血液凝固因子に、
これらもしくは他の公知の添加剤、賦形剤、安定化剤等
を添加する事は、何ら差し支えない。

また、経口投与用の剤型として、添加剤、賦形削を加え
て、散剤、課粒剤、錠剤、カプセルなどにすることもで
きる。尚、腸溶、性の剤型とすれば、更に好ましい。

次に実施例をあげて本発明の詳細な説明するが、もとよ
り本発明はこれにより何ら制限を受けるものではない。

また、これら修飾方法は、血液凝固因子の任意の製造工
程に導入できる。

実施例１゜ モノメチルエーテルポリエチレンクリコール−４，６−
ジクロロ−ｒ、３．５−トリアジン： ポリエチレングリコールモノメチルエーテル（平均分子
量５，０００　）　２５．Ｏｆ　（（ＬＤ０５モル）を
乾燥ベンゼン２００ｄに加温溶解し、今後無水炭酸す）
　ＩＪウム５．０？および塩化シアヌル２．７５ｆ　（
０，０１５モルノを加え室温にて一晩攪拌した。反応終
了後、濾過し、戸液に石油エーテル６００ｍ１を加え、
沈殿物を吸引濾過にて得、少量の石油エーテルで洗浄し
た。乾燥ベンゼン−石油エーテルによる再沈殿ｆ：３回
繰り返して精製し、モノメチルエーテルポリエチレンク
リコール−４，６−ジクロロ−１，５，５−トリアジン
の白色粉末を定量的に得た。このものは、加水分解後、
塩素イオンの定性反応（ＡｇＮ０３）を示した。

同様に、平均分子量５５０，７００，２．０００゜１０
．０００および１５，０００のポリエチレングリコール
モノメチルエーテル、平均分子量３．２００のポリエチ
レングリコールモノステアリルエーテル、平均分子量２
，７００のポリエチレングリコールステアリルニステル
モ塩化シアヌルとを反応させ、各平均分子量のモノメチ
ルエーテルポリエチレンクリコール−４，６−ジクロロ
−１，３，５−）リアジン。

モノステアリルエーテルポリエチレングリコール−４，
６−ジクロロ−１，３，５−）リアジン、モノステアリ
ルエステルポリエチレングリコール−４，６−ジクロロ
−１，６゜５−トリアジンを定量的に得た。

実施例２ ポリエチＶングリコールー４−クロロ−６−ヒドロキン
−１，５，５−トリアジン：ポリエチレングリコール（
平均分子量 ｉｓ、０００）３３．６ｒを乾燥ベンゼン１５〇−に加
温溶解し、今後無水炭酸ナトリウム１．６２および塩化
シアヌルα７４２を加え室温にて一晩攪拌した。水１．
Ｏｄを添加後、室温にて６時間、４０°で更に一晩攪拌
した。−不溶物を遠心分離（２，０００ｒｐｍ、１０分
間）により除去、上清を減圧留去した。残渣をベンゼン
に加温溶解、留去した。この操作を更に２回繰り返した
。残渣を減圧乾燥し、ポリエチレングリコール−４−ク
ロロ−６−ヒドロキシ−１，５，５−トリアジンの白色
ろう状固体を定量的に得た。同様に平均分子量１，００
０およびｓ、ｓｓｏのポリエチレングリコールと塩化シ
アヌルとを反応させ、各平均分子量のポリエチレングリ
コール−４−クロロ−６−ヒドロキシ−１，５，５−ト
リアジンを定量的に得た。

実施例＆ モノメチルエーテルポリエチレングリコール−４，６−
ジクロロ−１，３，５−）リアジン修飾第■因子（ＰＥ
Ｇ５、ｏｏｏ−■−４２ｍＭ）： 第Ｘ因子（「コーナイン」、カッター社製）４００単位
の凍結乾燥製剤を蒸留水６ｄに溶解しＱ、１Ｍリン酸緩
衝液（ｐ　Ｈ７，０）中、水冷下３０分間透析した。透
析後内容物を同緩衝液で１０ゴにメスアップし、アプロ
チニン（「レバルシン」、持出製薬■製）１．６６ｍ１
と、実施例１にて調製した平均分子量５，０００のモノ
メチルエーテルポリエチレングリコール−４，６−ジク
ロロ−１，５，５−）リアジンｚ４４ｓｖ（最終濃度４
．２ｍＭ）ｉ添加した。水冷攪拌下、３時間反応させ、
同緩衝液中Ｄ°、１時間、更にα４５％食塩水中θ°、
１時間透析した。透析後、内容物をバイアルビンに移し
、凍結乾燥して白色粉末状のモノメチルエーテルポリエ
チレングリコール−４゜６−ジクロロ−１，３，５−）
リアジン修飾第■因子（ＰＫＧ　５，０００−■−４，
２ｍＭ　　）で、アプロチニンを含まないＰＥＧ５．０
０ローｆ）（−４，２ｍＭ　　を調製した。、：ｐ　Ｋ
Ｇ　５，０００−ＩＫ−４，２ｍＭ（アプロチニンを含
まない）の第■因子活性は、第■因子欠乏血漿凝固時間
補正効果で測定すると、未修飾第■因子の１１３チであ
った。

実施例４゜ モノメチルエーテルポリエチレンクリコール−４，６−
ジクロロ−１，３，５−）リアジン修飾第■因子（ＰＫ
０５，００　Ｄ−ＩＸ−１，７２ｍＭ　および−２，４
４ｍＭ）：実施例３と同様に第Ｘ因子４００単位と実施
例１にて調製した平均分子量５・０００のモノメチルニ
ーデルポリエチレングリコール−４，６−ジクロロ−１
，５，５−トリアジン１００ｍｑｃ最終濃度１．７２ｍ
Ｍ）および２００り（最終濃度λ４４　ｍＭ　）　　か
らそれぞれＰＥＧ５、０００−　ｆ）（−１，７２ｍＭ
　および−２，４４ｍＭを調製した。

実施例６と同様に第■因子活性を測定すると、ＰＥ１Ｇ
５，０００−■−１，７２ｍＭ　　で９１．２チ、−２
，４４ｍＭで　９７−９　％であった。

実施例５ モノメチルエーテルポリエチレングリコール−４，６−
ジクロロ−１，３，５−トリアジン修飾筒■因子（Ｐ’
ＢＧ５，０００−■−２，１ｍＭ、−２，９４ｍＭおよ
び−４，２ｍＭ　）　：第■因子（「ニーエイト」、カ
ッター社製）５００単位の凍結乾燥製剤を蒸留水１０π
ｅに溶解しαＩ　Ｍ　リン酸緩衝液（ｐＨ７Ｏ）中、水
冷下３０分間透析した。透析後内容物を３等分し、各々
を同緩衝液で４．２８−にメスアップした。実施例１に
て調製した平均分子量５．０００のモノメチルエーテル
ポリエチレングリコール−４，６−ジクロロ−１，５，
５−トリアジン４５■（最終濃度２．１　ｍＭ　）　　
、６６〜（同２．９４ｍＭ）および９０■（同４．２ｍ
Ｍ）を添加した。水冷攪拌下、６時間反応させ、各々を
同緩衝液中０°、１時間、更に０．４　ｓ　％食塩水中
０°、１時間透析した。透析後、内容物をバイアルビン
に移し、凍結乾アジン修飾第■因子（ＰＥＧ５，０００
−■−Ｚ１ｍＭ、−２．９４ｒｒ、λ（および−４，２
ｍＭ）を得た。

実施例＆ モノメチルエーテルポリエチレングリコール−４，６−
ジクロロ−１，５，５−）リアジン修飾トロンビン（Ｐ
　ＫＧ　５，０００−’Ｉ［ａ−２、１ｍＭ　、−λ９
４　ｍＭおよび−４，２ｍＭ　）　：実施例４と同様に
、第■因子の代りにトロンビン（「トロンピンーミドリ
」、ミドリ十字■製）５００単位を３等分して実施例１
にて調製した平均分子量ｓ、ｏｏｏのモノメチルエーテ
ルポリエチレングリコール−４，６−ジクロロ−１，５
，５−トリアジン４５■（最終濃度２．１ｍＭ）、６３
■（同２．９４　ｍＭ）および９０１１ｆ（同ｔｚｍＭ
）と反応させ、各々ＰＥＧ５＋０００−１［ａ−２，１
ｍＭ５−２．９４ｍＭ　　および−４，２ｍＭを得た。

実施例７ ポリエチレングリコール−４−クロロ−６−ヒドロキシ
−１，５，５−）リアジン修飾第■因子（ＰＫＧ６，０
００−■−！ｉ０ｍＭ）：第Ｘ因子（「コーナイン」、
カッター社製）４００単位の凍結乾燥製剤を蒸留水１０
ｆｎＡに溶解しαＩＭｌｊン“酸緩衝液（ｐ　Ｈ７，０
）中、水冷下６０分間透析した。透析後内容物を同緩衝
液で２０−にメスアップ、１０等分した。

このうち２−に、実施例２にて調製した平均分子量６，
０００のポリエチレングリコール−４−クロロ−６−ヒ
ドロキシ−１，５，５−トリアジン６０η（最終濃度５
．０　ｍＭ　）を添加した。水冷攪拌下、６時間反応さ
せ、０．１ＭＫＨ２ＰＯ４２−を加え反応を停止して、
　ＰＦｉＧ６．０００−　Ｋ−４５，ＯｍＭ　の澄明な
水溶液を得た。同様な方法で平均分子量３．５５０のポ
リエチレンクリコール−４−クロロ−６−ヒドロキシ−
１，５，５−トリアジン６五５１ｎｙ（最終濃度５．０
ｍＭ）よりＰＥＧ３，３’５０−■−５，０ｍＭ　　を
得た。

実施例３と同様に第■因子活性を測定すると、ＰＥＧ　
６，０００−に−５，０ｍＭ　　で７１．８チ、ＰＥＧ
３．３５０−１）（−５，０ｍＭで７７．５チであった
。

実施例ａ モノメチルエーテルポリエチレンクリコール−４，６−
ジクロロ−１，３，５−トリアジン修飾第■因子（ＰＥ
Ｇ５５０−１）（１０，０ｍＭ　　およびＰ　Ｂ　Ｇ　
１５ｔ　０００−　■−２，０ｍＭ　％実施例６と同様
な方法で平均分子量５５０および１５，０００のモノメ
チルエーテルポリエチレンクリコール−４，ｔｓ−ジク
ロロ−１゜３．５−１＝リアジン１ｔＯａｙ（最終濃度
１０．０ｍＭ　　）および６　ａ　Ｏｒｑ　（同２−　
ＯｍＭ　）よりＰＥＧ５５０−■−ＩＱ、ＱｍＭ　およ
びＰ　Ｅ　Ｇ１５，０００−　（Ｋ　−２，０ｍＭ　　
を得た。

実施例６と同様に第■因子活性を測定すると、ＰＥＧ５
５０−■−１［ＬＯｍＭ　　で１１五８チ、Ｐ　Ｅ　Ｇ
　１５．０００−　■−２−ＯｍＭで６６．６チであっ
た。

実施例２ モノステアリルエーテルポリエチレングリコール−４，
６−ジクロロ−１，５，５−）リアジン修飾第■因子（
ｐｉＧ３，２ｏｏ−ＩＫ−五〇　ｍＭ　）　： 実施例６と同様な方法で半均分子−ＴｔＬ　３ｒ　２０
０のモノステアリルエーテルポリエチレングリコール−
４，６−ジクロロ−１，５，５−）リアジン１θ２岬（
最終濃度５．０ｍＭ）よりＰＥＧ３，２００−ＤＣ−３
，０ｍＭ　　を得た。実施例３と同様な方法で第■因子
活性を測定すると、７４．０％であった。

実施例ＩＱ。

モノステアリルエステルポリエチレングリコール−４，
６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン修飾第■因子（
ＰＥＧ２．７００−■−５，０ｍＭ）： 実施例６と同様な方法で平均分子量２，７００のモノス
テアリルエステルポリエチレングリコール−４，６−ジ
クロロ−１，５，５−）リアジン２ス０■（最終濃ｅ　
ａ　ｏ　ｍＭ）よりＰＥＧ２，７００−■−！１０ｍＭ
　　を得た。

実施例５と同様な方法で第■因子活性を測定すると、９
量１条であった。

実施例１１゜ ＰＥＧ５，０００−１：（−４，２ｍＭ　の経口投与実
験： 健康なピーグル犬（♀、１ｏＫｒ）より約４ｍｌ採血を
行った。次に実施例３Ｑてて調製したＰＥＧ　５，００
０−　■−４−２ｍＲの凍結乾燥品４０単位　を約１０
０　ｔｒｔの牛乳に溶解し、経口投与した。投与後１，
２．．４，６．８時間後に約４−ずつ採血を行った。各
血液に１／９容の！Ｌ８％クエン酸ナトリウム液を抗凝
固剤として加え、遠心分離を行い血漿を分画した。

血漿にセファロプラステンとカルシウムイオンを加え部
分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）および組織トロン
ボプラスチンとカルシウムイオンを加えプロトロンビン
時間（ＦＴ）を測定した。更に因子欠乏血漿の凝固時間
補正効果をＱｕｉ　ｃｋ：の−投法により測定した。投
与前の血漿の補正効果を１００チとし、その’　／　２
　ｇ、１　／　４量の補正効果をそれぞｎ５０チ、２５
％とし、両対数グラフに検量線を作成し各時間に採血し
て得られた血漿の補正効果を相対チで求めた。また、実
施例４にて調製したＰ’ＦｊＧ５．０００−ＩＸ−１，
７２ｍｈＬｉ）よび−２，４４ｍＭ　についても同様な
実験を行った。更に対照実験として、未修飾第■因実施
例１２゜ ＰＥＧ５，０００−■の経口投与実験：実施例５にて調
製したＰＥＧ５，０００−■−２，１ｍＭ　の１７７単
位、ＰＥＧ５，０００−■−２，９４ｍＭ　の１７７単
位およびＰ、Ｅ　Ｇ５．０００−■−４，２ｍＭ　の１
７７単位を混合し、実施例１０の方法と同様に犬に経口
投与を行い、経時的に採血、血漿の分析を行った。

更に対照実験として、未修飾第■因子５００

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１０にて行った動物実験のＰＴＴを示
す。 叶−一〇二未修飾第■因子（アプロチニン無し）投与穴
−−−−−−・：　ＰＥＧ５，０ｎＯ−ＩＫ−４，２ｍ
Ｍ（アプロチニン無し〕投与穴ｒ−−１：　ＰＥＧ５，
０００−に−４，２ｍＭ（アプロチニン入り）投与火弟
２図は、実施例１０にて行った動物実験のＦＴを示す０
第３図は、実施例１０にて行った動物実験の第Ｘ因子活
性を示す。 第４図は、実施例１０にで行った動物実験の第Ｘ因子活
性を示す。 第５図は、実施例１０にて行った動物実験の第Ｘ因子活
性を示す。 第６図は、実施例１１にて行った動物実験のＰＴＴを示
す。 ←０：未修飾第■因子（アプロチニン無し）投与穴←−
−：　ＰＥＧ５，０００−■−２，１ｍＭ、−２，９４
ｍＭおよび−４，ｚｍＭ（アプロチニン無し）投与火弟
７図は、実施例１１にて行った動物実験のＦＴを示す。 第８図は、実施例１１にて行った動物実験の第Ｘ因子活
性を示す。 第　１１羽 ｂｅｆｏｒｅｌ　　２　　　４　　　６　　　８（ｈｒ
）ｂｅｆｏｒｅｌ　　２　　　４　　　６　　　８　　
（ｈｒ）第３図 ｂｅｆｏｒｅｌ　　２　　　４　　　６　　　８　　（
ｈｒ）第　４１」 ｂｅｆｏｒｅｌ　　２　　　４　　　６　　　８　　（
ｈｒ）第　６　図 ｂｅｆｏｒｅ　Ｌ　２　　４　　６　　８　（ｈｒ）第
　７１］

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）血液凝固因子のアミノ酸側鎖に、カップリング剤
   を介して、置換基としてアルキル基またはアルカノイル
   基を含有していてもよい分子量２００〜２Ｇ、０００の
   ポリアルキレングリコールが結合してなる新規血液凝固
   因子誘導体。 （２）　　ポリアルキレングリコールがポリエチレング
   リコールである特許請求の範囲第１項記載の新規血液凝
   固因子誘導体。 （５）　　ポリアルキレングリコールがポリエチレ゛　
   　ングリコールモノメチルエーテルである特許請求の範
   囲第１項または第２項記載の新規血液凝固因子誘導体。 （４）、ｌＪフルキレングリコールの分子量が１．００
   ０〜１１１１１．０００である特許請求の範囲第１項〜
   第３項のいずれかの項記載の新規血液凝固因子誘導体。 （５）　　カップリング剤がハロゲン化シアヌルである
   特許請求の範囲第１項〜第４項いずれかの項記載の新規
   血液凝固因子誘導体。 （６）血液凝固因子が第■因子、第■因子、第■因子、
   第Ｘ因子、第Ｘ因子のいずれかである特許請求の範囲第
   １項〜第５項いずれかの項記載の新規血液凝固因子誘導
   体。 （７）血液凝固因子と、置換基としてアルキル基または
   アルカノイル基を含有していてもよい分子量２００〜２
   ０．０００のポリアルキレングリコールとカップリン剤
   の結合物を反応させることを特徴とする、血液凝固因子
   のアミノ酸側鎖に、カップリング剤を介して、置換基と
   してアルキル基またはアルカノイル基を含有していても
   よい分子量２００〜２．Ｑ、　０００のポリアルキレン
   グリコールが結合してなる新規血液凝固因子ｔ導体の製
   造法。 （８）　　血液凝固因子のアミノ酸側鎖に、カップリン
   グ剤を介して、置換基としてアルキル基または゛アルカ
   ノイル基を含有していてもよい分子量２００〜２０．０
   ００のポリアルキレングリコールが結合してなる新規血
   液凝固因子誘導体を含有することを特徴とする血液凝固
   促進剤。 （９）投与経路が経口である特許請求の範囲第８項記載
   の血液凝固促進剤。