JPS59138201A - 新規な硫酸化アミノ多糖及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、式： （ただし、式中、ｎは、５０から１００の整数を示す。

） で表わされる新規な硫酸化アミノ多糖及びその製造法に
関するものである。

α−１，６−結合したＤ−グルコピラノースのポリマー
には、微生物、例えばロイコノストック・メッセンテロ
イデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ　ｍｅｓｅｎｔｅｒ−
ｏｉｄｅｓ）によって生産されるデキストジンがある。

デキストランは、それ自身血漿増量剤として有用である
が、その硫酸エステル（デキストラン硫酸）は、脂血清
澄作用を有し、血中のコレステロール、トリグリセリド
を低下させる。又抗ヒアルロニダーゼ作用及び繊維素溶
解作用も有しており、高脂血症や動脈硬化症の治療に有
効な薬剤として知られている。これらの生理活性は、分
子量が大きいほど、又イオウ含有量の高いほど強いが、
それと共に毒性も強くなることが知られている。

Ｒ＝Ｈ：デキストラン Ｒ＝ＳＯＮａ：デキストラン硫酸 一方、動物組織中に存在するムコ多糖類のへパリンは、
強い血液凝固抑制作用、脂血清澄作用など広範な生理作
用を有しており、その活性は人工のヘパリノイドに比べ
、非常に強いが、標品の品質が一定でなく、又構造が複
雑で単離方法も煩雑である。ヘパリンは、その分子中に
硫酸化されたアミノ糖、例えは、下記の如きユニットを
有することが特徴的である。

（ただし、式中、ＸはＨ又はＳＯを示す。）そこで、デ
キストランの如くα−１，６結合した糖鎖を消し、しか
もその分子中にヘパリンの如きアミノ基を含む多糖及び
その硫酸化物を合成できれば、種々の生理的機能が期待
できる。しがしこのようなアミン多糖は、天然には発見
されていないので合成によらなければならないが、アミ
ノ糖単糖の重合による多糖の人工的合成は技術的に極め
て困難であるとされていた。しかしながら、先に本発明
者らによって、アミノ糖の前駆物質としてアジド糖を用
いることにより、初めてα−１，６結合した糖鎖を有し
、その分子中に、ヘパリンの如きアミン基を含む重合度
の高いアミノ糖ポリマ−及びそのグルコースとのコポリ
マーが合成された（特開昭５７−１８０６０３号、同５
７−１８０６０４号、同５７−１８０６０５号、同５７
−１８０６０６号公報参照〕。

本発明者らは、更に、血液凝固抑制作用、脂血清澄作用
が期待できる上記化合物の硫酸化物の合成について鋭意
研究を行った結果、これを初めて合成することに成功し
、不発明を完成するに至ったものである。

以下に本発明を詳述する。

まず、本発明の出発物質は、式 （ｎは、５０から１００の整数を示す。）で表わされ、
その合成例を示せは、次の如くである。

（ただし、式中、Ｂｚは、ベンゾイル基、Ｍｓは、メタ
ンスルホニル基を示し、Ｂｎ、ｎは前記に同じ。） （４’−ｂ）（５−８）＜ｇ−ｂ） 化合物（２）は、β−Ｄ−グルコピラノースより誘導さ
れる１，６−アンヒドロ−β−Ｄ−グルコピラノース（
１）を、ベンゾイルクロライドで処理することにより、
容易に得ることかできる［Ｍ．Ｃｅｒｎｙｅｔａｌ　Ｃ
ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　Ｃｚｅｃｈｏｓｌｏｖ、Ｃｈｅｍ
、Ｃｏｒｒｒｎｕｎ。

Ｖｏｌ、２６、２５４２（１９６１）参照。〕。

化合物（２）を乾燥ピリジンに溶解し、氷冷する。

攪拌しながらメタンスルホニルクロリドを滴下し、徐々
に室温にもどす。３時間後、大量の氷水中にあけ攪拌す
ると、化合物（３）の粗結晶が析出する。

濾別、水洗、乾燥後、メタノールから再結晶すると白色
結晶の化付物（３）を得る。

化合物（３）をクロロホルムにとかし氷冷する。これに
、金属ナトリウムをメタノールに溶解して調製したナト
リウムメトキシド溶液を、攪拌しつつ滴下する。混合物
を室温に一晩放置後、５％塩酸で中和し、減圧濃縮乾固
する。残漬をアセトンで５回抽出し、抽出液を減圧濃縮
すると油状物を得る。シリカゲルのカラムクロマトグラ
フィ（展開溶媒クロロホルム−メタノール、１００：１
ｖ／ｖ）で精製すると化合物（４−ａ）と（４−ｂ）の
重合物を得る。

化合物（４−ａ）と（４−ｂ）の重合物を、乾燥したテ
トラヒドロフランに溶かし、水冷下水素化ナトリウム（
純度６０％）を、加えて３０分間攪拌する。次に、臭化
ベンジルを加え、室温で４時間反応させる。氷冷した飽
和塩化アンモニウム水溶液を加え、３０分攪拌後、エー
テルで３回抽出する。抽出液を無水硫酸マグネシウムで
乾燥後、減圧濃縮し、生じた油状物を、シリカケルのカ
ラムクロマトグラフ（展開溶媒ベンゼン−酢酸エチル２
０：／ｖ／ｖ）で精製すると、油状の化合物（５−ａ）
と（５−ｂ）の混合物が得られる。

化合物（５−ａ）と（５−ｂ）の混合物を、エタノール
と飽和塩化アンモニウム水の混合溶媒に溶かし、アジ化
ナトリウムを加えて攪拌しつつ６０時間加熱還流する。

冷却後、蒸溜水を加え、エタノールを減圧下除去し、残
った水溶液をクロロホルムで抽出する。抽出液を無水硫
酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮すると油状物を得る
。シリカゲルのカラムクロマトグラフ（展開溶媒、ベン
ゼン−エーテル、２０：１ｖ／ｖ）で精製すると、化合
物（６−ａ）と（６−ｂ）の混合物を得る。

化合物（６−ａ）と（６−ｂ）の混合物を乾燥テトラヒ
ドロフランに溶かし、氷冷する。水素化ナトリウム（糖
度６０％）を加え３０分攪拌後、集化ベンジルを加える
。室温で３時間攪拌後、氷冷した飽和アンモニウム水溶
液を加え、さらに３０分攪拌する。この混合溶液をエー
テルで抽出し、抽出液を無水硫酸マグネシウムで乾燥後
、減圧濃縮すると油状物を得る。シリカゲルのクロマト
グラフ（展開溶媒、ヘキサン−酢酸エチル５：／ｖ／ｖ
）で精製すると油状の化合物（７）を得る。これは放置
しておくと結晶化し、シクロヘキサンから再結晶が可能
である。

化合物（７）を１０−５ｍｍＨｇの高真空下、一夜真空
乾燥し、予め水素化カルシウムによって乾燥した塩化メ
チレンに真空アンプル中で溶解する。この溶液を−６０
℃にて、予め重合管中で３０分間反応させてある五フッ
化リン、フッ化ベンゾイル、塩化メチレン中に混合し−
６０℃にて２３時間反応後、重合アンプルを開管し、メ
タノールを注ぎ込む。この際、ポリマーが沈澱するので
、これにクロロホルムを、ポリマーが十分に溶解するま
で加え、重炭酸ナトリウム水溶液で中和し、水洗して、
無水硫酸ナトリウムで乾燥する。乾燥剤を濾別除去した
後、濾液を濃縮して、石油ベンジンを加えて再沈する。

溶解、濃縮、再沈の操作をさらに２回行ないベンゼンに
溶解し、凍結乾燥を行ない、ポリマー（８）を得る。

化合物（７）の使用量、重合時間を変えて、上記と同様
に反応を行うことにより、種々の分子量、重合度を有す
るポリマーを得ることができる。

これを、次の方法により還元を行って、本発明の出発物
質であるアミノ多糖（Ｉ）を得る。

ポリマー（８）の還元は、バーチ還元、即ち液体アンモ
ニア中のアルカリ金属により行なう。アルカリ金属とし
ては、カリウム、ナトリウム、リチウムが挙げられる。

アルカリ金属はポリマー中の１ユニットに対し、６原子
以上加えることが必要で、通常はその３倍量であること
が望ましい。ポリマー（８）は、予め適当な溶媒例えば
、１，２−ジメトキシエタン、ジグリム中に溶解してお
いたものを加える。

反応温度は、約−７０〜−８０℃が適当であり、反応時
間は、約３０分〜３時間が適当である。

すなわち、金属ナトリウムと液体アンモニアを混合して
−７８℃に保持し、ポリマー（８）の１，２−ジメトキ
シエタン溶液を徐々に滴下する。１，２−ジメトキシエ
タンは予め金属ナトリウムで十分に乾燥しておく必要が
ある。反応の際は、糸が均一となるように攪拌しておく
のがよい。所定時間反応を行った後、エタノールまたは
塩化アンモニウムを加えることにより反応を停止し、少
量の水を加えて一夜放置してアンモニアを蒸発させる。

本反応のポリマーは塩化メチレンで抽出して取り除く。

蒸留水にて３日間透析し、不溶部があればこれを濾別し
た後、不溶部は真空乾燥し、可溶部こは濃縮し凍結乾燥
することにより、本発明の出発物質のアミノ多糖（１）
を得る。

かくして、得られた出発物質から次の反応により、本発
明の目的である硫酸化アミノ多糖を得る。出発物質のア
ミノ多糖を前処理して膨潤させた後適当な溶媒に懸濁さ
せる。溶媒としては、ピリジン、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミド等が適当である。この懸濁液を
硫酸化剤（及び前記溶媒）と共に反応させる。硫酸化剤
としては、クロルスルホン酸、ピペリジン−Ｎ−硫酸等
が適当である。硫酸化剤の使用量は、出発物質のアミノ
単糖基に対して、２０〜３０モル用いるのが適当である
。反応温度、反応時間は、溶媒、硫酸化剤によっても異
なるが、約７０〜１００℃、４５〜６０分が適当である
。反応液、放冷し、蒸留水を加えて反応を停止し、次い
で、アルカリ、例えは水素化カルシウムで中和し、エタ
ノール等を加えて、ポリマーを沈澱をせる。これを遠心
分離して、蒸留水に溶解し、透析後、濃縮乾燥すること
によって目的の硫酸化アミノ多糖を付る。

次に、本発明を、実施例により詳述する。

ポリマー（１）（Ｍｎ＝３．５×１０４、ＤＰｎ＝９５
（１００ｍｇ、ＮＨ２基：０．６２１ｍｍｏｌ、ＯＨ基
：分離する。次にエタノール（２０ｍｌ）中で３回、続
いてエーテル（２０ｍｌ）中で３回攪拌遠心分離し、予
め乾燥したピリジン（８ｍｌ）中に懸濁させる。この懸
濁液を予め０℃で反応させたピロルスルホン酸（１ｍｌ
、１５ｍｍｏｌ）と乾燥ピリジン（６ｍｌ）中に加え、
沸騰している湯浴に浸し、１時間反応させる。放冷後、
蒸留水（２０ｍｌ）を加えて反応を停止し、２．５Ｎ水
酸化ナトリウム水浴液（７．５ｍｌ）で中和し、エタノ
ール（５０ｍｌ）を加えてポリマーを沈澱させる。これ
を遠心分離して、蒸留水に溶解し、３日間透析後、濃縮
、凍結乾燥することによって硫酸化アミン多糖（Ａ）を
得る。（１８３、７ｍｇ、８１．０％） 〔ポリマー（Ａ）の物理的性質〕 　　　　　　　　　　　　　　Ｃ　　　　Ｈ　　　　Ｎ
　　　　　Ｓ元素分析値　実測値　２０．１６　４．１
８　３．７５　１６．１４計算値｛Ｃ６Ｈ９Ｏ１９ＮＳ
３Ｎａ２）１９．７３　２．４８　３．８３　１７．５
６　　　（Ｃ６Ｈ９Ｏ１０ＮＳ２Ｎａ２・５Ｈ２Ｏ）１
５．８３　４．２１　３．０８　１４．０８ニンヒドリ
ン反応：陰性 １Ｒ：５８０ｃｍ−１（Ｍ） ８００ｃｍ−１（Ｍ） ６１０ｃｍ−１（Ｍ） １２４０ｃｍ−１（Ｓ、ｂｒｏａｄ） １５１０ｃｍ−１（Ｍ） １３Ｃ−ＮＭＲ：δ９７．５３ｐｐｍ（１Ｃ、Ｃ−１）
７５．５４ ７４．６８（３Ｃ、Ｃ−２、Ｃ−４、Ｃ−５）７１．０
３ ６８．０７（１Ｃ、Ｃ−６） ５５．７５（１Ｃ、Ｃ−３）

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）式： （ただし、式中、ｎは５０から１００の整数を示す）で
   表わされる硫酸化アミン多糖。
2. （２）式： （ただし、式中、ｎは５０から１００の整数を示す。）
   で表わされるアミノ多糖を硫酸化することを特徴とする 式： （ただし、式中、ｎは前記を同じ） で表わされる硫酸化アミノ多糖の製造法。