JPS5910324B2 - 皮膚または毛髪用化粧料組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ある種の酵素の美容法への応用ならびにこれ
らの酵素を含む化粧料組成物に関する。

本発明はより正確には、酵素、ペルオキシド・ジスムタ
ーゼ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ−ｄｉｓｍｕｈｓｅｓ）の
美容法への応用、とくにこれらの酵素を含む皮膚および
毛髪用化粧料組成物に関する。ペルオキシド・ジスムタ
ーゼは、下記の反応：２０丁＋２Ｈ＋→Ｈ２Ｏ２＋０を
によつてペルオキシド・イオンの不均化 （ｄｉｓｍｕｔａｔｉｏｎル起こさせることのできる酵
素であることは公知である。

牛の赤血球から抽出されたペルオキシド・ジス５ ムタ
ーゼ（Ｍａｒｋｏｖｉｔ２、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、
２３４巻４０頁、１９５９年）および大腸菌Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａｃｏｌｉから抽出されたペルオキシド・ジ
スムターゼ（ＫｅｅｌｅおよびＦｒｉｄｏｖｉｃｈ、、
Ｊ。

Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ２４５巻第６１７６頁１９７０年）
１０は即知である。仏国特許出願第７３１３６７０号明
細書には数種の海洋細菌から抽出された新規なペルオキ
シド・ジスムターゼならびにそれらの製法が記載されて
いる。

１５この方法は、海洋細菌の培養体を水中に分散させ、
約４℃に保ち、ついで媒体のｐＨを６．５−８好ましく
は約７に調節し、混合物を数分間５０−６０℃に熱し、
約４℃に冷却し、この温度において遠心分離にかけ、上
澄に中性塩を用いて第１の２０分別沈澱を生じさせ、再
び遠心分離にかけ、上澄に中性塩を用いて第２の分別沈
澱を生じさせ、遠心分離にかけることからなる。

この方法の一変形においては、最后の遠心分離で捕集さ
れた沈澱物をｐＨ７．８の燐酸塩緩衝液に溶解し、かく
得られ２５た溶液を同じｐＨ７．８の燐酸塩緩衝液に対
して透析することからなる有利な一段階の清浄法によつ
てこの方法を完結することができる。海洋細菌培葉体か
ら抽出した酵素は同様に最后の遠心分離の生成物をｐＨ
７．８の燐酸塩緩衝液に再溶解し同じ３０緩衝液に対し
て透析した后クロマトグラフィ望ましくは塔クロマトグ
ラフィ、とくに連続三塔式、すなわち第１のＳｅｐｈａ
ｄｅｘＧ２００のゲルの培、ジエチルアミノエチルＳｅ
ｐｈｄｅｘ（ＤＥＡＥ−ＳｅｐｈａｄｅｘＡ−５０）の
塔および第２の３５Ｓｅｐ「小ΣＧ２００のゲルの塔か
らなるクロマトグラフィによつて純粋にすることができ
る。水中の細菌分散物のｐＨを６．５−８に調節するこ
とは上記の方法の第１段階をなすものであるが、そのた
めにはたとえば２規定アンモニア液を用い続い、て塩化
カリ好ましくはＫＣｌ３Ｍを加える。

かく得られた混合物を次に数分間だけ好ましくは３−４
分間５０−６０℃とする。次に混合物を約４℃に冷却す
る。上記の方法の以後の各工程はすべてこの温度で行わ
れる。上記方法の各工程を構成する分別沈澱操作は上述
のとおり水溶液中において中性塩望ましくは硫酸アンモ
ニウムを用いて行なわれる。

前記特許出願明細書記載の方法の有利な実施形式におい
ては、被処理混合物すなわち酵素抽出物が４℃において
飽和の約３０ないし３５％の終末濃度となるような量の
硫酸アンモニウムを加えて第１の分別沈澱を行なう。

しかしながら硫酸アンモニウムの全量または一部を、混
合物が４℃において飽和の約３０ないし３５％の最終末
温度となる程度の量の１種またはそれ以上の他の適当な
塩により代替できることに留意すべきである。上記方法
の一変形においては、限外▲過システム、たとえば多孔
管のごとき多孔質装置を用いるシステム、とくに分子量
４００００を越える分子を保留・濃縮する第１の多孔管
と所望の酵素は通過させるが残留細菌は保留しかくして
滅菌酵素抽出物を得る第２の多孔管とを用いるシステム
を使用し得る。同様に第２の分別沈澱は、被処理混合物
すなわち酵素抽出物の濃度が４℃における飽和の、約７
０ないし７５％の最終濃度となるような量の硫酸アンモ
ニウム（ＮＨ４），ＳＯ４を添加して有利に実施し得る
。

上述の方法によつて各種海洋細菌から得られたペルオキ
シド・ジスムターゼはすべてヘマチン質でない鉄を含ん
だペルオキシド・ジスムターゼであり、これらの酵素は
前述の文献に記載のペルオキシド・ジスムターゼすなわ
ちエリトロクプレインおよび大腸菌抽出酵素であり、２
価のカチオン、すなわち前者では銅および亜鉛、後者で
はマンガンを含んでいるものの活性を示す。

上記のペルオキシド・ジスムターゼ中の金属の存在の検
出は原子吸収分光分析により実施し得る。

同様に比色分析により行なうこともできる。この場合に
は、酵素製剤の電気泳動ゲルに第一鉄Ｆｅ２，十の特殊
着色剤バトフエナントロリン、場合ｊによつて更にヒド
ラジンなど還元剤を存在させて着色する。

この分析を行うためには、ゲルを長さ方向に二つに切り
、その一方をブルードコマシ（ＢｌｕｅｄｅｃＯＯｍａ
８ｓｉｅ）中に、一方をバトフエナントロリン中に装入
する。後者において蛋白のバンドの位置に淡紅色の環が
生じるときは試験は陽性である。しかし公知のとおり、
このような淡紅色環の発生は第一鉄の、この試験の場合
、蛋白中にペルオキシド・ジスムターゼの存在を示すと
考えることができる。また蛋白標識のため放射性鉄を用
い、それによつて存在している２価金属カチオンの化学
当量を定めることができる。

海洋Ｍ菌の細胞から抽出したスーパーオキシド・ジスム
ターゼはヘマチン質でない鉄を含み、分子量は約４００
００±２５００で、等電点は約４ないし７である。

酵素活性はＰＨ約８．５ないし１０で最高であり、その
最適値はＰＨ約９．５にある。中性硫酸アンモニウムの
、４℃における７０−８０％の飽和溶液中に貯蔵するこ
とにより、酵素を長期間活性に保つことができる。上記
方法により調製したペルオキシド・ジスムターゼの活性
の測定は、それらによる、酸素／ヒポキサンチン／キサ
ンチンオキシダーゼ／ルミノールの酵素系の起こす化学
ルミネツセンス反応の抑制を評価することにより行い得
るが、この方法を以下に示す。

この抵抗性の酵素系は、ルミノールと反応して化学ルミ
ネツセンスを起こすことのできるＯ：イオンの遊離を起
こす。この系にペルオキシド・ジスムターゼを添加する
ことにより実際にＧが捕捉され、かくしてこの反応で発
せられる光の強さの低減を生じさせる。ペルオキシド・
ジスムターゼは実際に下記の反応：２０Ｔ＋２Ｈ，＋→
Ｈ，Ｏ，′＋０， に触媒として作用する。

その場合、この反応の基質として、キサンチン・オキシ
ダーゼとキサンチンまたはヒポキサンチンとを作用させ
る酵素反応により生じるペルオキシド・イオンを用いる
とき、こうして得られたペルオキシドイオンは極めて不
安定で自然発生的に光を発する。

しかしながらこの光は極めて微弱で、測定結果には十分
な再現性がない。これが、生じたペルオキシドイオンの
量を明かにするため化学ルミネツセント物質、ルミノー
ルすなわち５−アミノ−２・３−ジヒトロー１・４一フ
タラジン・ジオンを用いて実施における分析 ３装置を
補完する理由である。

ルミノール＋０ｉ→発光と酸化生成物 仏国特許出願第７３・１３６７０号明細書記載の技術に
よれば、ペルオキシド・ジスムターゼの活性を、ある種
の配位子の存在において分子状酸素の水溶液中のＦｅ２
＋、Ｎｉ２＋またはＣＯ２＋一イオンからなる、ルミノ
ールの酸化を増進することのできる接触系・ペルオキシ
ド・イオン生成系によつて測定する。

この系中に導かれたペルオキシド・ジスムターゼは０ｉ
イオンの量を低減し従つてまた発光を低減する。

定量は下記のようにして行なう： 下記の反応混合物を用いる： ルミノール １０−３Ｍ０．３ｍ１ 燐酸塩緩衝液 １０−３ＭＰＨ７．８０．３ａＥＤＴＡ
１０−３Ｍ０．３ｍ１水（右の容積にする十分な量）
２ＷＬＩこれにキナンチン・オキシダーゼを５
０μｌ（キサンチン・オキシダーゼ１▼／ｍｌの溶液を
１．０５ｄ）加える。

この混合物を銀メツキを施した容器に装入し光電子増倍
管の前におく。

ヒポキサンチン０．３μモルを含む溶液１ｒｎ！，の基
質を容器に注入して反応を開始させる。そのとき光子束
が発生しこれが、光電子増倍管の作用の下に、電流を起
こし、その強さをピコアンメータで測定し記録する。

反応の開始に先立ち、評価すべきペルオキシド・ジスム
ターゼ５μｌを反応混合物に導入すると、この発光の抑
制が行なわれる。そのときペルオキシド・ジスムタ一傳
素単位を任意に、発光を５０％抑止するこの酵素の量と
して定める。

この単位はそれゆえ使用するペルオｊキシド・ジスムタ
一傳素および酵素の源に無関係である。

しかし同様に前記方法によるペルオキシド・ジスムター
ゼの活性は、ルミノール０．５μモルとＰＨ７．８の燐
酸塩緩衝液０．１７ミリモルのを含む溶液２ｄに電気化
学的還元により調製したＯ←イオン（Ｊ．Ｍ．ＣＯｒｄ
．．ＩＦｒｉｄＯｖｉｔｃｈ，．Ｊ．Ｂ．Ｃ．２４４巻
？（１９６９年）６０４９−６０５５頁）の溶液１ＷＬ
Ｉを直接に注入して上述のものと同じ反応の抑制を起こ
させて、評価することができることが注目される。

ある場合には、目的とする応用面におけるペルオキシド
・ジスムターゼの効力を相当長期間にわたつて評価する
ためには、物質の酸化を促進するのが有利なことがある
。

これを実施するためには、３６５ｍμの照射により還元
したフラビンを用いるかあるいは酵素系たとえばキサン
チン・オキシドダーゼ／ヒポキサンチン／酸素系を用い
て操作を行う。還元フラビンにより酸化を促進するとき
はフラビン・モノヌクレオチド（Ｖ）１０−４Ｍ１ＥＤ
ＴＡ１０−３Ｍおよび燐酸塩緩衝液１０−２ＭのＰＨ７
．Ｏの溶液を石英容器に入れＭ３６５フイルタを備えた
Ｚｅｉｓｓ分光螢光計中におき照射する。

急速に生起する光還元を、発生して来る５３０ｍμの螢
光の強さの減退を追求することにより追跡する。還元の
終に、空気の存在下で強く溶液を撹拌しながら、再酸化
を完了しペルオキシドイオンＯ丁を生じさせる。

フラビンの還元・再酸化のサイクルはフラビンモノヌク
レオチドの構造を変化させずに複数回反復できることに
注意すべきである。この方法の一変形においては、上述
のごとき溶液を連続撹拌しながらこれにＵｌｔｒａｖｉ
ＯｌｅｔＰｒＯｄｕｃｔｓＩｎｃ．製のランプＢｌＯＯ
Ａを用いて３６５ｍμの照射下で操作を行うことができ
る。ヒポキサンチン／キサンチン・オキシダーゼ／酸素
の酵素系により酸化を促進したいときには、ヒポキサン
チン１０−３Ｍ０．３ｍ１１燐酸塩緩衝液１ＭｐＨ７．
８０．３ｄ，．ＥＤＴＡ１０−３Ｍ０．３ｄ、水２．１
ａおよびキサンチンオキシダーゼ１〜／ｄ溶液０．０５
ｒｎ１を含む溶液を用いるのが有利である。今般、本発
明者らはペルオキシド・ジスムターゼが皮膚および毛髪
を保護する性質を有し、従つてこれらを美容法に利用し
得ることを認めた。ペルオキシド・ジスムターゼは天然
のケラチン組織の統合性を維持して皮膚および毛髪をと
くに保護することを可能にする。この保護作用はケラチ
ンの酸化現象を抑制することに基づくものと考えられる
。ペルオキシド・ジスムターゼは皮膚細胞呼吸を増進し
皮膚の質・触覚の柔かさ・しなやかさおよび弾性を維持
しまたは向上させる。毛髪用組成物中にこれらの物質を
存在させることにより頭皮の状態を維持または向上させ
ることが可能であり同時にこれらの組成物を用いる人の
手の皮膚が保護される。更にペルオキシド・ジスムター
ゼは紫外線によつて起きる炎症から皮膚を保護すること
が認められた。

これらの種々の性質によりペルオキシド・ジスムターゼ
は皮膚用または毛髪用の化粧料組成物中に使用可能であ
る。

酸化還元特性によつてペルオキシド・ジスムターゼは更
に化粧料組成物のある種の成分の変敗を起こす酸化また
は自動酸化の現象を防止するので、化粧料組成物の保護
および安定化に役立つ。

たとえばこれらのペルオキシド・ジスムターゼは多数の
化粧料組成物中に存在する脂肪質の酸敗を防止する。ま
たより一般的には、化粧料組成物中の全工ての酸化性ま
たは自動酸化性物質の変敗を妨げる。とくにペルオキシ
ド・ジスムターゼはその使用前においては酸化性の強い
ある種の化合物の酸化を防止することのできることが認
められた。とくに：
ご（ａ）通常使用される酸化剤（過酸化水素水、過硫酸
塩、尿素過酸化物、金属塩など）によるかあるいは空気
中の酸素より発色する酸化染料中に用いられるある種の
着色化合物または着色剤前駆物質
５これらの着色化合物は塩基、カ
プラまたはロイコ化合物である、とくに：ー仏国特許第
１３７４９８３号明細書およびその追加特許第８４３２
４号明細書に記載されるごときある種のオルトアミノフ
エノール誘導 ４体−たとえば仏国特許第１１３３５９
４号、同第１１６６１７２号、第１２６４７０７号明細
書に記載されるごときある種のジヒドロキシ−５・６−
インドール誘導体および同族のアミン化合物、−仏国特
許第２０５６７９９号および同第２１７４４７３号明細
書に記載されるごときある種のロイコ化合物、一仏国特
許第１４７３８４３号、同第 ２０１７９９５号および同第２０１６１２３号明細書に
記載のある種の塩基、（ｂ）ある種のパーマネット用還
元性化合物、たとえばアルカリ性亜硫酸塩、メルカプタ
ンおよび誘導体、とくに仏国特許第１１７５５６０号お
よび同第２００５６４８号明細書に記載されているもの
。

ペルオキシド・ジスムターゼの存在しないときは、亜硫
酸塩の酸化により、この場合下記の反応式に従つてペル
オキシド・ラジカルのアニオンが生ずる：ＳＯ『＋２０
，→２Ｇ＋ＳＯ３ 有機塩基とくに酸性樹脂〔たとえばカルボポル型または
酢酸ピニルークロトン酸型のカルボキシビニル樹脂また
はガントし（Ｇａｎｔｒｅｚ）型の無水マレイン酸様の
構造を含む樹脂〕を含む化粧料組成物の中和に用いられ
るトリエタノールアミンなどの第三アミンの照射（Ｉｒ
ｒａｄｉａｔｉＯｎ）は酸素の存在においてペルオキシ
ドイオンの生成に有利に作用する。

ペルオキシド・ジスムターゼの添加はこれらのイオンの
破壊を可能にし、かくしてこれらのイオンにより惹起さ
れる酸化反応が避けられる。酸化チタンおよび酸化亜鉛
は多数の化粧料中に用いられているが、照射によりペル
オキシド・イオンを生じ酸化反応を起こさせる。

ペルオキシド・ジスムターゼの存在はこれらの酸化を避
けることを可能にする。

本発明はベルオキシド・ジスムタ一傳素を美容法に応用
することを目的とする。

本発明は該酵素を皮膚用または毛髪用の衛生または化粧
料組成物中に含有させることを主な特徴とする。

本発明においてはペルオキシド・ジスムターゼ酵素は、
とくに皮膚および毛髪を構成している生活ケラチン質の
保護剤の役割をすることができる。

この保護剤の役割は、一方では皮膚頭皮または毛髪の天
然ケラチン組織の統合性を、予防的にせよ変敗の抑止の
ためにせよ、維持するにあり、他方では皮膚または頭皮
の質（柔かさ、しなやかさ、弾性）の維持または向上に
また紫外線の（若干の Ｊ反応とくに炎症の源としての
）有害な作用に対する皮膚の保護にある。本発明によれ
ば、ペルオキシド・ジスムターゼは同様に化粧料組成物
中に存在する酸化性または自動酸化性物質の保護剤の役
割をすることができ ｌる。

かくしてペノレオキシド・ジスムターゼは、自動酸化性
の強い化合物を含む組成物中に添加された場合、該組成
物を：一その貯蔵中にあるいは
ｌ一ケラチン繊維および／または皮膚との接触させて使
用する際に、たとえ后から酸化の段階が必要である場合
においても、酸化から保護することができる。

顔料がケラチン繊維中によく浸透しなくなるよ 二うな
早過ぎる自動酸化を避けるために、パラフエニレンジア
ミンおよびその誘導体、オルトアミノフエノール（場合
によつては直接染料の存在において）などの化合物を基
材とする毛染組成物（染色組成物またはジャンプ式着色
剤）を毛髪上に保：持し分布させる場合をとくに引用す
ることができる。

后者の場合は、組成物使用中に自動酸化現象を一時的に
抑制し従つてまた遅らせることが問題である。

同様に、本発明のペルオキシド・ジスムターゼの応用は
、着色の最終的進行に先立ちロイコ化合物およびジヒド
ロキシ・インドールの型の化合物の保護を可能にする。

同様にケラチン繊維の、パーマネットの最初の段階で用
いる水硫化物誘導体還元剤（それらの保存の際およびそ
れらの使用の際）からの保護を可能にする。本発明によ
れば少なくとも１種のペルオキシド・ジスムターゼ酵素
を適当な付形剤中に含んでいることを特徴とする衛生ま
たは化粧料向の組成物が提供される。

更に本発明によれば、少なくとも１種のペルオキシド・
ジスムターゼ酵素を皮膚にまたは毛髪に適用することを
特徴とする美容法が提供される。

本発明により使用可能なペルオキシド・ジスムターボ酵
素は動物、細菌または植物の何れに由来するものでもよ
い。本発明において使用可能なペルオキシド・ジスムタ
ーゼとしては、とくに細菌から抽出したもの、茸類から
抽出したものまたは血液から抽出したものがあげられる
が、これらに限定されるものではない。

細菌から抽出したペルオキシド・ジスムターゼの例のう
ち、大腸菌Ｅｓｃｈｅ８ｌｃｈｉａｃＯｌｉから抽出し
たものがとくにあげられる：茸類から抽出したベルオキ
シド・ジスムターゼのうち、とくにひらたけの類Ｐｌｅ
ｕｒＯｔｕ８ｖｌｅａｒｉｕ８から抽出したものがあげ
られる。

血液から抽出したペルオキシド・ジスムターゼのうち、
とくにエリトロクプレインがあげられる。同様に数種の
海洋細菌たとえば ＰｈＯｔＯｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｈＯ８ｐｈＯｒｅｕｍ
，ＰｈＯｔＯｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｅｉＯｇｎａｔｈｉ
またはＰｈＯｔＯｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｅｐｉａなどの
種から抽出したペルオキシド・ジスムターゼが挙げられ
る。

種々の使用可能の種としては、ＰｈＯｔＯｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍｐｈＯｓｐｈＯｒｅｕｍ腐ＡＴＣＣｌｌＯ４Ｏ、
ＰｈＯｔＯｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｅｉＯｇｎａｔｈｉ７
ｉ６ＡＴＣＣ２５５２ｌ、ＰｈＯｔＯｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍｓｅｐｉａ７ｌ６ＡＴＣＣｌ５７Ｏ９、Ｅ８ｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａｃＯｌｉＡＡＴＣＣｌ５２２４およびＰｌｅ
ｕｒＯｔｕｓＯｌｅａｒｉｕｓｇｉｌｌｅｔ（パリ陰花
植物研究所）などの種が列挙できる。

本発明において用いられるペルオキシド・ジスムターゼ
はすでに文献中に記載されている方法を適用して調製で
きる。

海洋細菌の種から抽出したペルオキシド・ジスムターゼ
は前記仏国特許出願第７３１３６７０号明細書に記載の
方法によつて調製できる。

この方法は前記した通りである。本発明の皮膚用組成物
は、とくにローシヨン型の溶液、水相中に油相を分散さ
せたまたは逆にして得られる乳液型の濃厚液状または半
液状の乳濁液またはクリーム型またはゲル型の濃厚軟質
の懸濁液または乳濁液である。

これらの組成物は通常の方法で調製される。

これらはとくに顔面・手または躯体用の洗浄、保護また
は手入用のクリーム（たとえばヂークリーム、ナイトク
リーム、クリンシングクリーム、着色フアンデーシヨン
クリーム、日焦どめクリーム）液状着色フアンデーシヨ
ン、クリンシングローシヨン、躯体の保護・手入用乳液
、日焦どめ乳液、洗顔ローシヨン、日焦どめローシヨン
、日焦ローシヨン、入浴用組成物または殺菌剤含有の脱
臭組成物を構成する。本発明による皮膚用組成物は、同
様に石鹸または洗浄用プロツクを構成する固形の調剤で
あり得る。

元来流動体である皮膚用組成物は加圧噴出剤も含んでい
るエアロゾル容器の形で提供することができる。

本発明による皮膚用組成物は、ペルオキシド・ジスムタ
ーゼのほかに、上述の組成物に通常用いられる活性成分
または付形剤、界面活性剤、着色剤、香料、保存剤、乳
化剤、水などの液状担体、乳液またはクリームの油相を
構成するための天然または合成の油などの脂肪質、第三
アミン、とくにトリエタノールアミンなどアミノアルコ
ールで中和したカルボキシビニル型または無水マレイン
酸型の樹脂などを含んでいる。

油相を構成するための化合物はたとえば甘扁桃油、アボ
ガド油、オリーブ油、ステアリンなどの脂肪酸エステル
、グリセリンモノステアレートすなわちプルセリン油、
パルミチン酸エチルまたは−イソプロピル、ミリスチン
酸プロピル、−ブチルまたはーセチルなどのミリスチン
酸アルキルである。そのほかセチルアルコールなど脂肪
族アルコール、ポリオキシエチレン脂肪族アルコールま
たはたとえば蜂蝋などのワツクスまたは合成ワツクスな
どである。 ５本発明の毛髪用組成物は水溶液、ア
ルコール溶液または水アルコール溶液の形で、またはク
リーム、ゲル、乳濁液の形で、あるいはまた加圧された
噴出剤も含有するエアロゾル容器の形で提供される。
ｊこ
れらの組成物はペルオキシド・ジスムターゼを主要活性
成分としてあるいは他の成分の酸化を防ぐ成分として含
有している。従来からの活性成分のほかに、通常これら
の毛髪用組成物中に存在する各種の補助剤たとえば液４
状またはゲルの形の担体、香料、着色剤、保存剤、隔離
剤、増粘剤などを含有し得る。

これらはたとえばジャンプ一、セツテイングローシヨン
、トリートメントローシヨン、整髪用クリームまたはゲ
ル、毛染組成物（とくに酸化染料）場合によつてはジャ
ンプ一毛染の形として、リストラクチユラントローシヨ
ン、パーマネット用組成物（とくにパーマネットの初期
用の組成物）などを構成する。

本発明の組成はたとえば：ー ーシヤンプ一であつてペルオキシド・ジスムターゼのほ
かにカチオン系、アニオン系または非イオン系の洗剤を
含むもの一毛染用組成物（ジャンプ一毛染を含む）であ
つてすでに前述したたとえば硫酸ｍ−ジアミノアニソー
ル、ｏ−、ｍ−またはｐ−アミノフエノール、ニトロパ
ラフエニレンジアミン、パラフエニレンジアミン、ｐ−
トルエンジアミン、５・６−ジヒドロキシインドールな
ど着色剤または着色剤前駆物質を含むもの、−メルカプ
タン、亜硫酸塩など誘導体を還元剤として含む毛髪のパ
ーマネット初期（還元剤）処理用の組成物である。

本発明の化粧料組成物はそのま工使用できる組成物であ
るかあるいは使用前に薄めねばならない濃厚品でもあり
得ることに留意すべきである。

濃厚な形で提供され得る組成物はたとえばジャンプ一ま
たは入浴用組成物である。本発明の組成物はそれゆえペ
ルオキシド・ジスムターゼの濃度について特定の範囲に
限定されないものである。しかしながら一般にはそのま
ま使用できる組惑物であり、ペルオキシド・ジスムター
ゼを０．０ゝ＼淳ないし５重量％、とくに０．０５ない
し１重量％含んでいる。保護すべき酸化性の成分がケラ
チン繊維および／または皮膚の存在において促進される
分解を受ける場合は、ペルオキシド・ジスムターゼは稀
薄または濃厚な水溶液または錯体または凍結乾燥物の形
として単独に保存しておき使用の際に組成物の他の成分
に加えることができる。

同様に、ペルオキシド・ジスムターゼが皮膚またぱ毛髪
の質を維持しまたは向上させる目的で使用される場合も
、これを使用の際に初めて組成物に加えることができる
。

本発明の組成物は従つて、一方ではペルオキシド・ジス
ムターゼを、他方では組成物の他の成分を含む複数の部
分の保管状態の形で提供することができる。

上記に示したとおり、ベルオキシド・ジスムターゼはた
とえば水溶液、錯体または凍結乾燥物として保存できる
。本発明による美容処理方法は、上記の規定したような
衛生または美容用組成物を適用することにより、これら
組成物を在来の用法技術に従つて使用することができる
。

たとえばクリーム、クリンシング乳液または日焦どめ組
成物の皮膚への適用、毛髪ローシヨンの湿つた毛髪への
適用、ジャンプ〜本発明の美容トリートメント法は、ペ
ルオキシド・ジスムターゼの有効量すなわち求められて
いる保護効果を得るのに十分な量を適用するようにして
操作する。

この美容トリートメント法は、皮膚または毛髪のケラチ
ン組織を維持すること、皮膚の質（柔軟さ、しなやかさ
、弾性）を維持しまたは向上させることあるいは紫外線
の有害な作用に対し皮膚を守ることを目的とするもので
ある。

下記の実施例は本発明を具体的説明するものであるが本
発明はこれらの実施例により限定されるものではない。

実施例１、２および３は、単に海洋細菌から抽出したペ
ルオキシド・ジスムターゼの調製法を説明することを目
的としており、この方法は仏国特許出願第７３１３６７
０号明細書に記載されている。実施例 １ Ｐｈ０ｔ０ｂａｃｔｅｒｉｕｍ１ｅｉ０ｇｎａｔｈｉ＜
７）７１６ＡＴＣＣ２５５２１の種の細菌を、ｌあたり
下記ｒ数の下記成分を含む媒体上で培養した。

１１０℃において１時間の間滅菌した。

予備培養１１を取り、一夜進行させ、媒体を容量２５０
ｄの三角フラスコ４個に分ちそれぞれで容量１２１の醗
酵器に種つけするようにした。

強く通気しながら２０℃において１２時間の間培養を続
行し、こうして液を搾つた細菌が湿つたものとして重量
１００ｆ７得られた。複数の培養からの細菌ＰｈＯｔＯ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｅｉＯｇｎａｔｈｉの湿つたもの
１３５ｆ７を水６５０ｍ１に分散させ、｛４℃に放置し
た。

媒体のＰＨが７．５に上るまで２Ｎアンモニアを加え、
続いてＫＣｌ３Ｍｌ８ｍｌを加えた。この混合物を５８
℃にし、この温度に４分間保つた后４℃まで冷却し、１
００００回／分の速度で１０分間遠心分離にかけた。

つねに４℃で操作し、上澄をＰＨ８で固形硫酸アンモニ
ウムで飽和の３５％に調節した。遠心分離にかけ上澄を
硫酸アンモニウムで飽和の７５％に上げ、４℃で一夜放
置した。沈降した蛋白を遠心分離により取得し、７５％
の硫酸アンモニウム溶液中に保存した。ｄあたり蛋白９
〜の溶液の活性は（ビウレツト）は４０単位／〜であつ
た。蛋白９即／ｍｌの溶液中のカタラーゼを比較のため
あげるとＯ単位／〜であつた。硫酸アンモニウムを用い
濃度の勾配を飽和の３５％から７５％にとつて新たに分
別沈澱した后に、蛋白１４．８即／ｍｌ（ビウレツト）
の溶液において活性１３４単位／即ないし５００単位／
〜を呈するペルオキシド・ジスムターゼが得られた。

蛋白沈降物をＰＨ７．８の燐酸塩緩衝液に溶かし４℃に
おいて４８時間透析を行なつた。酵素ペルオキシド・ジ
スムターゼを−２０℃で保存した。このものの活性を限
定するため、光電子増倍管の前におかれた器で下記の反
応混合物を入れたものを用いた。器にヒポキサンチン３
Ｘ１０−４Ｍ１−を注入して反応を開始させた。

そのとき光子束が生じて光電子増倍管の作用の下に、電
流を起こし、その強さをピコアンメータで測定しまた同
様にこの強さの変化を記録した。

反応開始前に反応混合物に、上述のとおりに調製したペ
ルオキシド・ジスムターゼの溶液５μｌを導入して、発
光の抑制が得られたが、ベルオキシド・ジスムタ一補惇
素単位は発光の５０％抑制を起こす酵素の量であると任
意に見なした。紫外分光では、ペルオキシド・ジスムタ
ーゼ抽出物はヘマチン性でない、２９０ｍμにトリプト
フアンの肩を有する蛋白の古典的なスペクトルを示した
。これの分子量を測定するため公知の二つの技法を用い
た。

その一つはサツカロースで遠心分離の勾配を測定するこ
とにあり、他のものはＳｅｃｈ＆ＤｅｘＧ２ＯＯのゲル
を用いるものである。

これの実施のために、分子量（Ｐ．Ｍ．）が既知の下記
のマーカを用いた：分子量ぱ４００００±２５００との
結論であつた。

酵素の蛋白構造の副単位を定めるために、ドデシル硫酸
ナトリウムを１０％加えたポリアクリルアミドのゲル中
で電気泳動を行なつた。

分子量約２１０００の副単位の単一型を観察した。それ
ゆえ得られたペルオキシド・ジスムターゼの分子量は２
１０００×２すなわち４２０００と推定できる。しかし
ポリアクリルアミド・ゲル上では、バトフエナントロリ
ンおよびヒドラジンの存在においては、正確に、コマシ
青によつて明示されたペルオキシド・ジスムターゼのバ
ンドの位置に赤いバンドが得られる。

蛋白溶液の比色法定量を行なつて、鉄について、酵素の
分子量を４２０００と推定して分子あたり鉄約２原子と
なる値が得られた。

蛋白０．２ワ／ｍｌの溶液の原子吸収分光分析でこの数
字が確められた。

それゆえこのペルオキシド・ジスムターゼの分子あたり
の鉄原子の数を正当に２と推定することができる。

そのほか本実施例により抽出した酵素は７０℃の温度に
おいて５分后にも活性の著しい損失を蒙らない。

このペルオキシド・ジスムターゼの電気集中によりＰＨ
ｉすなわち等電点を４．４と推定することができる。

この酵素はＰＨ約９．５で最大の活性を呈した。

ＰｈＯｔＯ−ＣｔｅｒｉｕｍｌｅｉＯｇｎａｔｈｉ腐Ａ
ＴＣＣ２５５８７の細菌種から同様の特徴を具えた同等
の酵素が得られた。実施例 ２ Ｐｈ０ｔ０ｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｅｐｉａ腐ＡＴＣＣｌ
５７Ｏ９の種の細菌の培養を細胞溶解にかけ、湿つた菌
の重量１？に水４ａの率で冷水中で撹拌する。

続いて４℃において１６０００回／分で２０分間遠心分
離した。黄色透明の上澄にＫＣｌ３Ｍを最終濃度０．１
Ｍになるまで加えた。溶液は、６０℃としてある湯浴で
３ないし４分間加熱した。

続いて４℃に冷し、遠心分離で澄明とした。上澄に固形
硫酸アンモニウムを加えて分別沈澱にかけた。

活性の区分は硫酸アンモニウムの飽和の４５％と７５％
との間で沈澱しこれを遠心分離で分離した。これを最少
量のＫ，ＨＰＯ４５×１０−３Ｍ，．ｐＨ７．８に再溶
解し、一夜の間同じ燐酸塩緩衝液に対して透析した。こ
の透析の生成物は続いてＳｅｐｈａｘＧｌＯＯまたはＧ
２ＯＯのゲル塔を燐酸塩緩衝液５×１０−３Ｍ，．ｐＨ
７．８で平衡させたものに通した。洗浄した活性区分を
限外遠心分離膜ＤｉａｆｌＯＰＭ−１０を用いて濃縮し
、続いて一夜間Ｋ，ＨＰＯ４５×１０−３Ｍ，．ｐＨ７
．８に対して透析した。ペルオキシド・ジスムターゼ酵
素は、Ｋ１…０，５Ｘ１０−３Ｍ．ｐＨ７．８で緩衝し
たＤＥＡＥ一ＳｅｐｈａｄｅｘＡ−５０の塔に吸収させ
た。

塔の蛋白をＫｉ止０４、ＰＨ７．８の直線状勾配（５×
１０−３Ｍから３Ｘ１０−１Ｍまで）を用いて洗浄した
。こうしてペルオキシド・ジスムターゼは燐酸塩１．４
Ｘ１０−１Ｍの濃度まで洗浄し、続いてこれを濃縮した
。前のものと同じ条件でＤＥＡＥ−ＳｅｐｈａｄｅｘＡ
−５０の塔で改めてＦ過を行なつた。こうして酵素を燐
酸塩１．６×１０−１Ｍまで洗浄し濃縮した。こうして
抽出・純化した蛋白はアクリルアミド・ｊゲル中での電
気泳動により（ゲルに対して蛋白１００μｔ）単一のバ
ンドを示した。

こうしてＰｈＯｔＯｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｅｐｉａの凝
固細胞２０ｆ７から純粋のペルオキシド・ジスムターゼ
３ワが得られた（ペルオキシド・ジスムターゼの活 １
性２５０ないし５０００単位／〜）。

４℃における飽和の７０−８０％の （ＮＨ４）２Ｓ０４溶液中に保存して長期間にわたり酵
素を活性に保つた。

４℃において１６時間４５０００回／分の限外遠心分離
により純粋にした酵素の分子量を測定した。

ＭａｒｔｉｎおよびＡｍｅｓの方法により、シユクロー
ス中の直線勾配５ないし２０（重量／容積）によりＢｅ
ｃｋｍａｎｎＳｐｉｎｃ娘置Ｌ２−６５Ｂ１ロータＳＷ
６５Ｋつきを用いて、沈降速度を測定した。馬の肝蔵と
酵母とのアルコール・デヒドロゲナーゼについては沈降
係数がそれぞれ４．８２と７．４とであるのに対して、
このジスムターゼについて係数３．２が見出された。こ
の沈降定数からそれゆえ抽出のペルオキシド・ジスムタ
ーゼの分子量が約４２５００と計算された。他方ではこ
の蛋白の分子には鉄２原子が含まれていることが確めら
れた。

アクリルアミド・ゲル中での電気泳動はこのジスムター
ゼについて分子量２００００ないし２０５００に相当す
る単一のバンドを示した。

こうして蛋白分子が二つの同じ副単位から成つているこ
とが示される。このペルオキシド・ジスムターゼはその
ほか１５０μｒを６０分間２０℃においてトリブシン１
０μｒで処理しても酵素活性に何らの変化がなくまたそ
のうえ分離しない蛋白の電気泳動の運動性にも変化がな
いので、トリブシンの蛋白分離作用に対して極めて抵抗
力があることが明かとなつた。

得られた酵素は熱に対して極めて安定である：２０℃、
３０℃また４０℃でさえ３０分間后に酵素作用に何ら損
失が現われない；５０℃で１５分間后に２８％の活性減
退が現われた；５０℃でノ３０分間后には活性減退はつ
ねに僅か５０％であつた。

また６０℃では３分間および１０分間の后それぞれ１０
％および５０％に過ぎなかつた。ペルオキシド・ジスム
ターゼの電気集中でこの酵素の等電点を４．１と推定で
きた。電解法で調製したＯ；イオンの溶液によつてこの
酵素がＰＨ８．５ないし１０で最大の活性を示し最適値
はＰＨ９．５にあることが確定された。

実施例 ３細菌ＰｈＯｔＯｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｈＯ８
ｐｈＯｒｅｕｍは海洋細菌であり従つて内部塩分濃度が
高いがこの菌種腐ＡＴＣＣｌｌＯ４Ｏを処理した。

細菌の細胞溶解はＥＤＴＡ溶解１０−２Ｍ．ｐＨ７．８
中において自発的であつた。

細胞の残渣０℃において２０分間１６０００回／分の遠
心分離によつて除いた。

予備的調査は、酵素ペルオキシド・ジスムターゼが５０
℃において安定であることを示したので、ＫＣｌをモル
濃度０．１まで加えた后細胞溶解液を３分間５０℃とし
て、それ自体は熱不安定の他の蛋白を除去し、変質した
蛋白は古典的遠心分離により分離した。

引続いて４℃で作業した。

この温度において硫酸アンモニウムを混合物または処理
される酵素抽出物に４℃における飽和の０から約３０％
までの濃度勾配がもたらされるような量加えることによ
つて分別沈澱を行なつた。０℃において１６０００回／
分で４５分間遠心分離して沈澱区分を除いた。

上澄に４℃における飽和の７５％とするのに必要な量の
硫酸アンモニウムを加えた。前のものと同様な遠心分離
により沈澱区分を合せた。

こうして抽出したペルオキシド・ジスムターゼを純粋に
するために、集めた沈澱を少量の燐酸塩緩衝液５Ｘ１０
−３Ｍ，．ｐＨ７．８に溶かし、抽出物（４）を得るた
めに４℃において４８時間同じ緩衝液に対して透析した
。

続いて、なお存在している蛋白を、分子量が１００００
０を超える蛋白を排除するようなメツシユのＳｅｐ−Ｅ
ｘＧｌＯＯのゲルで大きな分子が急速にゲルの外側にそ
れるものを用いて分子の大きさに従つて分離した。

分子量がそれより小さい分子はゲルを通過し、その大き
さによつて差はあるが速かに洗い去られる。これを実施
するために、Ｓｅｐｈａｄｅｘ樹脂を３時間水中に浸し
て膨脹させ、脱ガスし、吸引瀘別して水分を除いた。

これを濾適用緩衝液中に入れ、丈５０（１７７！・内径
３？の塔に注入した。緩衝液２１を通して塔を平衡させ
た。透析からの酵素抽出物囚を予め取つて窒素気圧下で
ＤｉａｆｌＯｍｉｌｌｉｐＯｒｅ（分子量−１０）の膜
を用いて５ｄの容積まで濃縮した。

この濃縮物を上記のとおり準備した塔にかけて、燐酸塩
緩衝液５×１０−３Ｍ，．ｐＨ７．８５００ｄを通して
洗浄した。その流量は８秒ごとに１滴とし、２．５！Ｉ
ＬＩずつの区分を集め、著しい活性のものを合せＤｉａ
ｆｌＯ膜を用いて濃縮した。

こうして濃縮抽出轍Ｂ）が得られた。新たな段階の浄化
を、ＤＥＡＥＳｅｐｈｄｅｘを基とするイオン交換樹脂
を用いるクロマトグラフイにより行なつた。

この樹脂を用いて蛋白はその負荷に応じて、イオンカの
発達する緩衝液により洗い出される。塔を準備するため
に、水中で膨脹させてからガスを抜き、下記の溶液（複
数）で洗つた：ＮａＯＨＯ．５ＭＫ２ＨＰＯ４Ｏ．５ Ｍ 各段階間で樹脂を蒸留水で注意してすすぎＰＨを中和近
くにした。

吸引瀘過した后、樹脂を燐酸塩緩衝液０．１Ｍ，．ｐＨ
７．８中に懸濁させ丈３０儂内径３ｃｒｎの塔に入れた
。塔は緩衝液０．１Ｍを３００ｄ通して平衡させた。こ
うして準備した塔に濃縮抽出物旧を入れた。

一旦この抽出物を完全に吸着させて、燐酸塩緩衝液０．
１Ｍ２５０ｄに除々に燐酸塩緩衝液０．５Ｍを２５０１
Ｌｔ加えて作つた燐酸塩緩衝液ＰＨ７．８５ＯＯｄで洗
出した。流量は５秒ごとに１滴とし、集めた区分の容積
は２．５ｄとした。活性の区分を統合し、硫酸アンモニ
ウムで沈降させこの形で一１８、ないし−２０℃で保存
した。ペルオキシド・ジスムターゼの純度はポリアリリ
ルアミド・ゲルでの電気泳動により管理することができ
る。

ＳｅｐｈｄｅｘＧ２ＯＯによる瀘過での洗出試験による
酵素分子量測定で、ＬＯｇ（分子量）＝ｆ（洗出容積）
の関係式と公知のマーカとによつて、抽出のペルオキシ
ド・ジスムターゼは約４００００の分子量であるとする
ことができた。

この分子量はまた遠心分離によりシユクロースの勾配か
らも決定した。

燐酸塩緩衝液５Ｘ１０−３Ｍ，．ｐＨ７．８中における
シユクロースの勾配を５％から２０％に、適当な装置で
２０％溶液２．６０ａを除々に５％溶液２２５！ＩＬＩ
に混じて、変えた。このシユクロースの勾配に分子量既
知のさまざまな蛋白マーカとペルオキシド・ジスムター
ゼとをおいた。５℃で２２時間４５０００回／分の遠心
分離により平衡が実現された。

そこで管の底に穿孔し１０滴の区分を集め、使用した各
種マーカにより呈せられる酵素作用を測定した。洗出区
分数による分子量の変化を表わす直線を抽いた后、Ｐｈ
ＯｔＯ−ＣｔｅｒｉｕｍｐｈＯ８ｐｈＯｒｅｕｍから抽
出したベルオキシド・ジスムターゼの分子量を約４００
００と推定した。これは先行の結果を確認するものであ
る。蛋白の副単位の分子量を定めるため、蛋白ならびに
副単位分子量既知のマーカを、ドデシル硫酸ナトリウム
の存在においてポリアクリルアミン・ゲルで電気泳動に
よる移動を起こさせた。

得られた価のグラフ判定によりりペルオキシド・ジスム
ターゼ分子の各副単位の分子量の値は２００００とする
ことができた。この酵素は５０℃でもなお極めて安定で
ありＰＨ約９．５で最大の酵素作用を示すことが明かと
なつた。

ペルオキシド・ジスムターゼの電気集中はそのＰＨｉす
なわち等電点を４．２と推定させた。

前述の比色試験では、予めバトフエナントロリンを加え
た電気泳動ゲル中の蛋白バンドの位置に現われる淡紅色
で、蛋白中の第一鉄の存在を明かにすることができた。
分子あたりの第一鉄の原子数は実質上２に等しいと推定
できた。実施例 ４ 光保護作用試験 この試験は米国費府ＳＯｌ顛Ｌｉｇｈｔ社発売のキセノ
ン紫外線太陽擬似装置を用いて行なう。

光はスペクトルが太陽のものと類似している２５０Ｗキ
セノンアーク灯によつて発せられ、その波長は２８５ｎ
ｍから４１０ｎｍにわたる。このスペクトルで照射する
と、太陽による紅斑が再現できる。ＭＥＤ（Ｍｉｎｉｍ
ａｌｅｒｙｔｈｅｍａｌｄＯ８ｅ）とは露出后２４ない
し４８時間紅斑があるような最短照射時間を言う。この
量は秒を単位として表わす。照射は任意の対象の背の皮
膚の部分に行なう。

露出時間を段階的に配列して、まずＭＥＤを定める。次
に各対象は５ＭＥＤの照射を受けさせ、皮膚の照射部分
若干に、付形剤と混合してクリームの形とした試験体を
適用して処理する。

皮膚の照射部分若干は付形剤単独を適用して処理する。
同時に、処理してない裸の皮膚の部分にも照射を行なう
。試験体は上述の実施例第１のようにして得られたペル
オキシド・ジスムターゼである。

露出后２４または４８時間で読取りにより紅斑の強さを
主観的に評価する。

弱い紅斑は＋、強い紅斑は＋＋で示す。

紅斑のないのはＯと表わす。得られた結果は下表にまと
めてある。実施例 ５ パラフエニレンジアミンの自動酸化 燐酸塩緩衝液ＰＨ８．６にｐ−フエニレンジアミンを溶
かして１０−３モル水溶液を作つた。

２時間后に５２０ｎｍで唄ｕ定した溶液の光学的密度は
０．０７である。

上述の実施例第１のようにして調整した酵素をｄあたり
１０単位含んでいる同じ溶液の光学的密度は０．０３６
となる。これは４９％の抑制に相当する。実施例 ６ ジヒドロキシ−５・６−インドール 燐酸塩緩衝液ＰＨ７．８にジヒトローｖ−５・６インド
ールを溶かし６．７Ｘ１０−５モルの溶液を作つた。

３３０ｎｍで測定した溶液の光学的密度は毎分０．１単
位増大する。

実施例第５記載の酵素がｄあたり４０７×１０−９ｆ７
存在するときは光学的密度は毎分０．０６２単位増大し
た。これは３８％の抑制に相当する。実施例 ７ トリヒドロキシ一１・２・４−ベンゾールの自動酸化ト
リヒドロキシ−１・２・４−ベンゾールの１０−３モル
水溶液を作る。

この溶液１ａを燐酸塩緩衝液ＰＨ７．８ｌｍｌに加える
。４８０ｎＴ！Ｌで測定したこの溶液の光学的密度は毎
分０．３７５単位増大した。

実施例第５に規定した酵素をｍｌあたり２×１０−６ｆ
添加して、光学的密度の増大は毎分０．０９単位で、こ
れは７６％の抑制に相当する。

酵素をｍｌあたり４×１０−６？添加して、光学的密度
の増大は毎分０．０６４単位となり、これは８３％の抑
制に相当する。酵素をｄあたり４０×１０−６２添加し
て、光学的密度の増大は毎分０．０２３単位となり、こ
れは９６．５％の抑制に相当する。

実施例 ８ オルトアミノフエノールの自動酸化 オルトアミノフエノールの５Ｘ１０−３モル水溶液を作
る。

下記を含む溶液を作る：重復蒸溜水
１ｍ１上記の溶液 １ｄ 燐酸塩緩衝液ＰＨ９．２ｌａｊ この水溶液の光学的密度を４３０ｎｍで観察する：１５
分后に０．２２である。

実施例第１により調製した酵素を―あたり２．７×１０
−６２添加して、１５分后の光学的密度は０．０２であ
る。

これは９１％の抑制に相当する。Ｉｄあたり２７Ｘ１０
−６ｔ添加して光学的密度は０．０１でありすなわち９
６％の抑制である。実施例 ９トリエタノールアミンの
自動酸化 トリエタノールアミンは酸性樹脂たとえばカルノ ボポ
ル型のカルボキシ−ビニル樹脂を含む化粧料組成物の中
和のために普通に用いられる有機塩基の一つである。

この型の第三アミンは酸素と電荷移動錯体を作り、これ
らの錯体は光線の作用下で分解して大量＼のペルオキシ
ド・イオンを発生させる。

后煮はそれが含まれている化粧料中に過酸化物生成を起
こすことができる。これらの過酸化物とくに（しばしば
化粧料組成物中にあるたとえばオレフイン・アルコール
など）不飽和の脂肪族りヒト誘導体は有害な作用があり
、それらの生成を抑制することが望ましい。ペルオキシ
ドイオンの指示薬としてニトロテトラゾリウム青（略号
：ＮＢＴ）（１．Ｆｒｉ０ｃ１０ｖｉｃｈおよびＣｈ．
Ｂｅ組Ｃｈａｍｐ；Ａ蕩１ｙｔｉｃａ１ｂ１０ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ４４巻２７６頁（１９７１年））を用いて、
ペルオキシド・ジスムターゼ（略号：ＳＯＤ）をトリエ
タノールアミン水溶液に添加するとペルオキシドイオン
の生成を強力に抑制することができることが見出だされ
た。

使用したＳＯＤは実施例第１において得られたものであ
る。ペルオキシド・イオン生成の抑制は５６０ｎＴｒＬ
での光学的密度と照射時間によるその増大とを測定して
評価する。トリエタノールアミンの濃度０．４％では、
１０−２ないし１０−１即／Ｒ１のオーダのＳＯＤの濃
度について著しい抑制が観察される。実施例第１で得ら
れるＳＯＤをＥ８ｃｈｉｅｒｉｃｈｉａｃＯｌｉまたは
ＰｌｅｕｒＯｔｕ８Ｏｌｅａｒｉｕａから抽出したＳＯ
Ｄの該当の量ど置換して同じ結果が得られる。

実施例 １０Ｔｉ０，の自動酸化の抑制 若干の種類の酸化チタンおよび酸化亜鉛は照射によつて
ペルオキシドイオン生成を惹起する。

こうしてニトロテトラゾリウム青を含む溶液中のＴｌＯ
，の懸濁は日光の照射によつて顔料粒子表※※面に、ペ
ルオキシドイオン生成を指示する強い青色の発色を出現
させる。同じ型の懸濁液を暗所に保つときは、もとの色
を保つている。これに反して、同じ懸濁液にペルオキシ
ドジスムターゼ溶液を添加すると、照射の際に青色の発
色が明かに抑制される。

この試験にはＴｌＯ２ｌＯＯｌ！９を濃度８Ｘ１０−５
Ｍｆ）ＮＢＴの溶液５ｍ１に懸濁させた液を用いた。

添加したＳＯＤは実施例第２で得られたもの５・１０−
２７！１ｆ１０光の中で使用または保存しておくことの
できる化粧料組成物（メーキヤツプ、日焦どめ組成物・
・・・・・）中のＴｉＯ，およびＺｎＯなど無機顔料の
重要性は公知である。

これらの組成物自体にＳＯＤを導入することはその中で
のペルオキシドイオンの生成およびそれが惹起こす変敗
を抑制する。実施例 １１リボフラビンの自動酸化の抑
制 皮膚の手入および処理のための化粧料組成物はしばしば
リボフラビン（ビタミンＢ，）を含んでいる。

事実このピタミンの存在は皮膚の正常な機能を維持する
のに必要である。リボフラビンが酸素の存在において照
射されるときペルオキシドイオン生成を起こすことはよ
く知られている。

そのイオンはそれゆえリボフラビンを含んでいる乳濁液
中で過酸化物生成を起こすことができ、その場合この現
象を抑制するためそこにペルオキシド・ジスムターゼを
加えるのが望ましい。実施例 １２ 発泡性毛染ジャンプ一 ニトロ− ｐ −フエニレンジアミン ０．００４ｆｐ
−トルィレンジアミン １ｆ実施例第３で得られるＳＯ
ＤＯ．Ｏ５， 重亜硫酸ナトリウム（ ｄ ＝ １．３２） １．２ｖ
水 全体が１００ｆ７になる量この処方のもの５０Ｖを
等量の２０倍過酸化水素水と混合し、得られたゲルを毛
髪に適用する。

３０分間放置后、毛髪をすすぎ、乾かす。

茶色の毛髪に栗色の色調が得られる。

上記の組成物において、実施例第３で得られるＳＯＤを
該当の量の実施例第１または第２で得られるＳＯＤで代
替することができる。

実施例 １３ 染料担体クリーム（酸化染色） セチル・ステアリル硫酸ナトリウ ３ｆ７ム セチルステアリルアルコール １０ｆ７ オレイン酸ジエタノールアミド ４Ｖ アンモニア ２２゜Ｂｇ１０“ 硫酸ｍ−ジアミノアニンール ０．０４８Ｐレゾルシン
０．４２０Ｖｍ−アミノフエノール塩基 ０．１５０
Ｖ ニトロ− ｐ −フエニ１／ンジアミン ０．０８５ｆ
ｐ−トルイレンジアミン ０．００５ｆ重亜硫酸ナトリ
ウム（ｄ ＝ １．３２） １．２ｆ７実施例第１のペ
ルオキシドジスム ０．１Ｐターゼ水 全体が１００ ，となる量 このクリーム３０Ｖを２０倍過酸化水素水４５′と混合
し、得られた滑らかなクリームを毛髪に適用する。

かなりに放置した后毛髪をすすぎ、乾かす。実施例 １
４ 発泡ゲルまたは濃厚溶液 酸化エチレン１２モルのオレイン ９， アノレコーノレ メチルセルロース ２．５ｆ７ 実施例第２のペルオキシドジスム ０．２ｙターゼ香料
０．１ｆ 水 全体が１００ ｆとなる量 この組成物は皮膚に適用される。

またジヒドロキシアセトンなど人為的日焦剤を添加して
皮膚日焦用組成物を形成することもできる。実施例第２
のＳＯＤの代りに該当量の実施例第１または第３のＳＯ
Ｄを用いて同様の組成物が得られた。

実施例 １５ クリーム（躯体用） シポールワツクス（Ｓｉ皿０ｖａ５ｆＦｒａｎｅ社発売
のセチル・ステアリ ルアルコール、一部はオキシエチ レン） ワセリン油 ６Ｖ ミリスチン酸イソプロビル ３Ｖ グリセリン １０ｆ 香料 ０．２Ｖ 実施例第３で得られるＳＯＤＯ．５Ｖ 水 全体が１００ ，となる量 上記組成物中の実施例第３のＳＯＤを該当量の実施例第
１のＳＯＤまたはＰｌｅｕｒＯｔｕｓＯｌｅａｒｉｕｓ
Ｇｉｌｌｅｔから抽出したＳＯＤで代替して同様なクリ
ームが得られた。

実施例 １６ クリーム（躯体用） 上記の組成物中の実施例第１のＳＯＤを該当量のＥｓｃ
ｈｅｒｉｃｈａｃＯｌｌ滝ＡＴＣＣｌ５２２４から抽出
したＳＯＤで代替して同様のクリームが得られた。

実施例 １７ 躯体用美容乳液 実施例第１で得られるＳＯＤを該当量の血液から抽出し
たＳＯＤ（エリトロクプレイン）で代替して同等の美容
乳液が得られた。

実施例 １８ 生体の皮膚の状態の改良 牝鼠について実験を行ない、それらの皮膚の状態を試験
的にプロピオン酸テストステロンの作用で変化させ、ペ
ルオキシド・ジスムターゼで局所的に処理した。

ペルオキシド・ジスムターゼの作用は皮膚の診察と各種
生化学的測定とにより評価した。

（１）実験記録： 生后４０日の牝鼠８匹ずつの４シリーズを用いる。

第１シリーズ 鼠にプロピオン酸テストステロン３０−４０ワを腹膜内
に植つける。

第２シリーズ 第１シリーズと同じ処理のほか毎週５日、日課として予
め毛を刈つた背面に、生理的食塩水０．３ａにペルオキ
シド・ジスムターゼ５単位加えたものを適用第３シリー
ズ 何ら処理しない対照 実験開始后２０日で生化学的測定のため動物は犠牲とす
る。

（２）診察： 牝鼠に投与したプロピオン酸テストステロンは皮膚に変
化を起こさせ、それらはマルピギ層の位置の細胞活性の
増進、上皮層厚の増大および皮脂障碍の増加となつて現
われる。

皮膚は厚くまた粗くなりまた接触に対して弾力性が低減
する。

これは第１シリーズで観察される。

観察は３人の別人によつて目視によらないで行なう。

これに反して第２シリーズの鼠は対照の第３シリーズの
鼠の皮膚と同様のものであつた。

皮膚は軟く、しなやかで、接触に対して弾力的である。
３）生化学的測定： 皮膚の切片で得られた結果は添附の表に示してある。

これらは１分あたりまた皮膚１ｃｒ！ｌあたりのミリ単
位で、または１分あたりまた皮膚の切片中にある蛋白〜
あたりのミリ単位で表わしてある。

これらの結果の検討は、局所的に投与したぺ５ルオキシ
ド・ジスムターゼが蛋白に帰せられるシトクロム・オキ
シダーゼに明かな作用を示すことを示す。テストステロ
ンは強い減退を起こさせるのにＳＯＤ処理は対照のもの
と同じ程度に回復するのを可能にする。シトクロム・オ
キシダーゼは細胞呼吸を特質つげることを可能にするこ
とは公知である。

ペルオキシドジスムターゼは皮膚細胞呼吸および皮膚の
質、接触に対する柔軟さ、しなやかさおよび弾力性、を
増進させる。本発明の実施の態様を要約すればつぎの通
りである。

（１）適当な付形剤中に後記発明１の実施の態様の第６
〜１０項のうちの何れかに記載されるごときペルオキシ
ド・ジスムタ一媚惇素を少なくとも１種含んでいること
。

（２）日焦どめの組成物、酸化染料組成物またはパーマ
ネットの初期用の組成物を構成すること。

（３）乳液またはクリームを構成すること。（４）ペル
オキシド・ジスムターゼを重量で０．０１ないし５％含
むこと。（５）ペルオキシド・ジスムターゼを重量で０
．０５％ないし１％含むこと。

本発明はつぎの発明１を包含する。

Ｉ ペルオキシド・ジムスターゼ酵素を皮膚用または毛
髪用の衛生または美容用組成物中に導入することを特徴
とするペルオキシド・ジスムターヤ酵素を利用する美容
法。

上記発明１の実施の態様１の実施の態様を要約すればつ
ぎの通りである。

（１）皮膚または毛髪を構成している生活キチン質の保
護剤としてペルオキシド・ジスムターゼを用いること。

（２）皮膚または毛髪のケラチン組織の統合を維持する
ため、また皮膚のしなやかさ、弾力性および柔軟さの質
の維持または向上のためにペルオキシド・ジスムターゼ
を用いること。

（３）紫外線の有害な作用に対して皮膚を守るためにペ
ルオキシド・ジスムターゼを用いること。

（４）組成物中にある酸化性または自動酸化性の成分の
酸化に対する保護剤としてペルオキシド・ジスムターゼ
を用いること。（５）酸化性成分をそれらの保存中に酸
化に対して守るなり、それらの使用中の酸化を遅らせる
なりするために、ペルオキシド・ジスムターゼを用いる
こと。

（６）ペルオキシド・ジスムターゼ酵素は細菌から抽出
したもの、茸類から抽出したものおよび血液から抽出し
たもののうちから選ばれること。

（７）ペルオキシド・ジスムターゼ酵素は海洋細菌の種
から抽出したもののうちから選ばれること。（５）ペル
オキシド・ジスムターゼは、ＥＢｃｈｅｒｉｃｈｉａｃ
Ｏｌｌから抽出したもの、ＰｌｅｕｒＯｔｕ８Ｏｌｅａ
ｒｉｕ８から抽出したものおよびエリトロクプレインか
らなるグループから選ばれること。

（９）海洋細菌の種は、ＰｈＯｔＯｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ＰｈＯＢＰｈＯｒＵｍ，．ＰｈＯｔＯｂｌｈＣｔｅｒｉ
ＵｍｌｅｉＯｇｎａｔｈｉおよびＰｈＯｔＯ−Ｃｔｅｒ
ｉｕｍＢｅＰｉ−）らなるグループから選ばれること。

αω ペルオキシド・ジスムターゼは ＰｈＯｔＯｂｖ：ＴｅｒｉｕｍｐｈＯＢｐｈＯｒｅｕｍ
屋ＡＴＣＣｌｌＯ４Ｏ、ＰｈＯｔＯｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｌｅｉＯｐｔｈｉ／１６ＡＴＣＣ２５５２１、ＰｈＯｔ
Ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｅｐｉａ腐ＡＴＣＣｌ５７５９
、Ｅ８ｃｈｅｒｃｈｉａｃＯｌｌ腐ＡＴＣＣ１５２２４
およびＰｌｅｕｒＯｔｕｓＯ−ＲｉｕＢｇｉｌｌｅｔか
ら抽出したものの５ちから選ばれること。

（自）皮膚または毛髪に、少なくとも１種のペルオキシ
ド・ジスムターボ酵素を有効な量適用すること。

（代）皮膚のケラチン組織を維持するためまたその質の
維持ないし向上のため皮膚に有効量のペルオキシド・ジ
スムターゼを適用すること。

ｌ毛髪のケラチン組織を維持するため毛髪に有効量のペ
ルオキシド・ジスムターゼを適用すること。

（自）紫外線の有害な作用に対して皮膚を守るため皮膚
に有効量のペルオキシド・ジスムターゼを適用すること
。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 少なくとも１種のペルオキシド・ジスムターゼを有
   効成分として含有することを特徴とする皮膚または毛髪
   用化粧料組成物。