JPS5848856A - ＨＢｅＡｇに対する特異抗体の製法及びＨＢｅＡｇの検出試薬 - Google Patents
ＨＢｅＡｇに対する特異抗体の製法及びＨＢｅＡｇの検出試薬Info
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- JPS5848856A JPS5848856A JP14713681A JP14713681A JPS5848856A JP S5848856 A JPS5848856 A JP S5848856A JP 14713681 A JP14713681 A JP 14713681A JP 14713681 A JP14713681 A JP 14713681A JP S5848856 A JPS5848856 A JP S5848856A
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- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は免疫グロブリンからＨＢｅＡｇに対する特異抗
体を分取する方法及びこの特異抗体によって感作された
Ｈ Ｂ ｅＡｇの検出試薬に関する。
体を分取する方法及びこの特異抗体によって感作された
Ｈ Ｂ ｅＡｇの検出試薬に関する。
本発明は詳しくは抗ＨＢ ｅ ｆｉｎ性の血漿又は血清
の免疫グロブリン（Ｉ ｇＧ ）又はこれらを分画して
得られる精製グロブリンから、Ｂ型肝炎に関係している
ＨＢｅＡｇに対する特異抗体（抗）（Ｂｅと記す）がｊ
ｌ中していることを本発明者らが新規に見い出した′１
に気泳動的に［スロウ（Ｓｌｏｗ）Ｊの免疫グロブリン
画分を、公知の分画技術によって選択的に取得する抗Ｈ
Ｂｅの製法に係り、さらにこの「スロウ」の免疫グロブ
リン画分を粒状担体に感作させて薬を提（Ｊｊ Ｕよう
とするのである。
の免疫グロブリン（Ｉ ｇＧ ）又はこれらを分画して
得られる精製グロブリンから、Ｂ型肝炎に関係している
ＨＢｅＡｇに対する特異抗体（抗）（Ｂｅと記す）がｊ
ｌ中していることを本発明者らが新規に見い出した′１
に気泳動的に［スロウ（Ｓｌｏｗ）Ｊの免疫グロブリン
画分を、公知の分画技術によって選択的に取得する抗Ｈ
Ｂｅの製法に係り、さらにこの「スロウ」の免疫グロブ
リン画分を粒状担体に感作させて薬を提（Ｊｊ Ｕよう
とするのである。
ＨＢｅＡｇは１９７２年にマグニウスとエスプマークに
より最初に発見され、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｃＡｇと共に
Ｂ ４１肝炎ウイルスに四速する第３の抗原として認め
られた〔マグニウス、 Ｌ、Ｏ，およびエスプマーク＋
Ｊ、Ａ、（Ｍａｇｎｌｕｓ、Ｌ、００ａｎｄ Ｅｐｓｍ
ａｒｋ、Ｊ、Ａ、） ザジャーナルオブインムノロジ
−（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｔｍｒｎｕｎｏｌ
ｏｇｙ）ＬＡ」、 ｌ ０１７ （１９７２） ）。
より最初に発見され、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｃＡｇと共に
Ｂ ４１肝炎ウイルスに四速する第３の抗原として認め
られた〔マグニウス、 Ｌ、Ｏ，およびエスプマーク＋
Ｊ、Ａ、（Ｍａｇｎｌｕｓ、Ｌ、００ａｎｄ Ｅｐｓｍ
ａｒｋ、Ｊ、Ａ、） ザジャーナルオブインムノロジ
−（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｔｍｒｎｕｎｏｌ
ｏｇｙ）ＬＡ」、 ｌ ０１７ （１９７２） ）。
ＨＢｅＡｇ及びＨＢｅＡｇの感作を受けたことにより産
生される抗ＨＢｅはＨＢｓ抗原賜性者に多く見い出され
、Ｂ型肝炎ウィルスの増殖と非常に関連が深く。
生される抗ＨＢｅはＨＢｓ抗原賜性者に多く見い出され
、Ｂ型肝炎ウィルスの増殖と非常に関連が深く。
ＨＢｅＡｇ及び抗ＨＢｅの測定はその感染性及びＢ型肝
炎の予後の診断の指標として臨床上非常に重要なもので
ある。すなわちＨＢｅＡｇ陽性の血液中にはＢ型肝炎ウ
ィルスの木理であるＤａｎｅ粒子が含まれていて感染性
が高く、一方■■Ｂ、ａ〜ｇが陽性であっても抗ＨＢｅ
が陽性であればその血液中にはＤａｎｅ粒子は認められ
ず、感染性はないか或はあるとしても極めて低いといわ
れている。又ＨＢｅＡｇけ慢性肝炎や・肝硬変で高率に
検出され、急性Ｂ型肝炎においてＨＢｅＡｇがその予後
の指標となる。このようにＨＢｅＡｇの測定は感染の危
険性を判断する資料を提供し、患者にあっては病状の経
過の追跡および予後の推定に役立つ。
炎の予後の診断の指標として臨床上非常に重要なもので
ある。すなわちＨＢｅＡｇ陽性の血液中にはＢ型肝炎ウ
ィルスの木理であるＤａｎｅ粒子が含まれていて感染性
が高く、一方■■Ｂ、ａ〜ｇが陽性であっても抗ＨＢｅ
が陽性であればその血液中にはＤａｎｅ粒子は認められ
ず、感染性はないか或はあるとしても極めて低いといわ
れている。又ＨＢｅＡｇけ慢性肝炎や・肝硬変で高率に
検出され、急性Ｂ型肝炎においてＨＢｅＡｇがその予後
の指標となる。このようにＨＢｅＡｇの測定は感染の危
険性を判断する資料を提供し、患者にあっては病状の経
過の追跡および予後の推定に役立つ。
ＨＢｅＡｇの検出はオフタロニー法や交叉電気泳動法の
ばか各種の免疫学的方法で簡単に行うことが出来るが、
免疫学的方法はラジオインムクアッセイ法や逆受身赤血
球凝集反応法（ＲＰＨＡ法と記す）に比べ、感度が数百
外の−から数十分の−しかなく、著しく高温度のＨＢｅ
Ａｇ Ｌか検出できない欠点がある。
ばか各種の免疫学的方法で簡単に行うことが出来るが、
免疫学的方法はラジオインムクアッセイ法や逆受身赤血
球凝集反応法（ＲＰＨＡ法と記す）に比べ、感度が数百
外の−から数十分の−しかなく、著しく高温度のＨＢｅ
Ａｇ Ｌか検出できない欠点がある。
ＲＩｊ ＨＡ法は感度の高い＋Ｖされた検出法の１つで
あり、既に真弓らがＲ，Ｐ ＨＡ法用１尚作血３ｊｐの
製法につき報告している〔ザジャーテルオブインムノロ
ジー（Ｔｉ］ｅ Ｊｏｕｒｎａｌ −ｏｆ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ ） ］、 ］ ０ 。
あり、既に真弓らがＲ，Ｐ ＨＡ法用１尚作血３ｊｐの
製法につき報告している〔ザジャーテルオブインムノロ
ジー（Ｔｉ］ｅ Ｊｏｕｒｎａｌ −ｏｆ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ ） ］、 ］ ０ 。
１５５６（１９７７））。しかしこの方法においても非
特異反応を充分抑えることは極ｉ）で１ト１穀であった
。従って簡使迅庫、特異的かつ正Ｕ（（にＨＢ ｅＡｇ
を検出し得る方法はいまだ存在せず、ＨＢｅＡｇ検出法
の確立並びに検出試薬が要望されていたつ本発明者らは
このような技術的背暇を下に、純度の高い抗ＨＢｅグロ
ブリンの取得方法を研究し、その結果目的とするＨＢｅ
Ａｇに対する特異抗体（抗ＨＢｅ）を収得することに成
功し、これを粒状担体に感作させて得られる検出試薬は
、ＨＢｅＡ、Ｈの逆受身赤血球凝集反応において従来に
なく非特異的凝集が少ないことを見い出し、本発明を完
成した。
特異反応を充分抑えることは極ｉ）で１ト１穀であった
。従って簡使迅庫、特異的かつ正Ｕ（（にＨＢ ｅＡｇ
を検出し得る方法はいまだ存在せず、ＨＢｅＡｇ検出法
の確立並びに検出試薬が要望されていたつ本発明者らは
このような技術的背暇を下に、純度の高い抗ＨＢｅグロ
ブリンの取得方法を研究し、その結果目的とするＨＢｅ
Ａｇに対する特異抗体（抗ＨＢｅ）を収得することに成
功し、これを粒状担体に感作させて得られる検出試薬は
、ＨＢｅＡ、Ｈの逆受身赤血球凝集反応において従来に
なく非特異的凝集が少ないことを見い出し、本発明を完
成した。
本発明は抗１１Ｂｅ陽性の血漿又は血清より得られる免
疫グロブリンから、電気泳動的にｒ位（特に好ましくは
、より塩基性の高いγ位）に属する「Ｓｌｏｗ ＩｇＧ
」を分取することによりＨＢｅＡｇに対する特異抗体（
抗ｎｎｅ）を製し、このＨＢｅＡｇに対する特異抗体に
よって感作された粒状担体からなるＨＢｅＡｇの検出試
薬を得るのである。
疫グロブリンから、電気泳動的にｒ位（特に好ましくは
、より塩基性の高いγ位）に属する「Ｓｌｏｗ ＩｇＧ
」を分取することによりＨＢｅＡｇに対する特異抗体（
抗ｎｎｅ）を製し、このＨＢｅＡｇに対する特異抗体に
よって感作された粒状担体からなるＨＢｅＡｇの検出試
薬を得るのである。
−ｒに免疫グロブリン（ＩｇＧ）は電気泳動的に主とし
てγ位に属するとはいえ 、 ｊｓｌｓはα位にまで
及んでおり、α位とβ位に属するものは［７アストＩｇ
Ｇ （Ｆａｓｔ ＩｇＧ）Ｊ 、ｒ位に属するものは［
スロウＩｇＧ （Ｓｌｏｗ ＩｇＧ ） Ｊと呼ばれて
いる。
てγ位に属するとはいえ 、 ｊｓｌｓはα位にまで
及んでおり、α位とβ位に属するものは［７アストＩｇ
Ｇ （Ｆａｓｔ ＩｇＧ）Ｊ 、ｒ位に属するものは［
スロウＩｇＧ （Ｓｌｏｗ ＩｇＧ ） Ｊと呼ばれて
いる。
本発明者らの知見によれば、破傷風抗体はスロウＩｇＧ
の中でも塩基性部分に抗体価が最も高い（第２８回輸血
学会発表）。このように抗体は電気泳動的に見た場合で
もその種類によって特異的に局在しており、ファス）Ｉ
ｇＧに抗体活性の集中するものもある。一方抗ＨＢｅに
関しては現在までその活性の電気泳動的な分布は不明で
あり、特に抗原抗体反応における特異性という観点から
の分布は全く不明であった。
の中でも塩基性部分に抗体価が最も高い（第２８回輸血
学会発表）。このように抗体は電気泳動的に見た場合で
もその種類によって特異的に局在しており、ファス）Ｉ
ｇＧに抗体活性の集中するものもある。一方抗ＨＢｅに
関しては現在までその活性の電気泳動的な分布は不明で
あり、特に抗原抗体反応における特異性という観点から
の分布は全く不明であった。
発明者らは抗ＨＢｅの分布を解明すべく、高度免疫抗Ｈ
Ｂｅ陽性のヒ）ｎ’ｎ漿を用いて研究を重ね、抗ＨＢｅ
がスロウＩｇＧに局在しており、特に′１１Ｌ気泳動的
に塩基性の高いｒ位に集中していることを初めて見い出
した。さらにこの抗体画分を粒状担体に感作して抗原−
抗体反応による抗体の凝集反応を行うと、従来法で得た
抗体を感作したものに比べ、極めて特異性の高い凝集反
応を示すことを見い出した。
Ｂｅ陽性のヒ）ｎ’ｎ漿を用いて研究を重ね、抗ＨＢｅ
がスロウＩｇＧに局在しており、特に′１１Ｌ気泳動的
に塩基性の高いｒ位に集中していることを初めて見い出
した。さらにこの抗体画分を粒状担体に感作して抗原−
抗体反応による抗体の凝集反応を行うと、従来法で得た
抗体を感作したものに比べ、極めて特異性の高い凝集反
応を示すことを見い出した。
免疫グロブリンは周知のように血漿又は血清を出発物と
して、エタノール分画法、硫安分画法、リバノニル分画
法、イオン交換クロマトグラフィー法、免疫吸着法また
は等′亀点分画法、さらにはこれらの方法の組合せによ
って得られる。一般に免疫グロブリンは電気泳動に対す
る挙動を異にする両分に区別され、易動度によってαｔ
、ｃｔｇ、β１．β３．。
して、エタノール分画法、硫安分画法、リバノニル分画
法、イオン交換クロマトグラフィー法、免疫吸着法また
は等′亀点分画法、さらにはこれらの方法の組合せによ
って得られる。一般に免疫グロブリンは電気泳動に対す
る挙動を異にする両分に区別され、易動度によってαｔ
、ｃｔｇ、β１．β３．。
γ１．γ２などの両分が知られている。これらのα位、
β位およびγ位のそれぞれの分画法としては陽イオン交
換クロマトグラフィ法〔イムノケミストリ＝ （Ｉｍｍ
ｕｎｏｃｈｅｍｌｓｔｒｙ） ４ 、１０１ （１９６
７））、陰イオン交換クロマトグラフィー法〔トランス
フユーシ゛ヨン（Ｔｒａｎｓ＠ｆｕｓｓｌｏｎ ） ６
、１４６ （１９６６）〕及びブロック電気泳動法〔
電気泳動実験法、Ｐ、３０３、電気泳動実験法（文光堂
）〕、等電点分画法〔生物物理化学１４（３）２１ 、
（２０９）、（１９６９））などが公知である。
β位およびγ位のそれぞれの分画法としては陽イオン交
換クロマトグラフィ法〔イムノケミストリ＝ （Ｉｍｍ
ｕｎｏｃｈｅｍｌｓｔｒｙ） ４ 、１０１ （１９６
７））、陰イオン交換クロマトグラフィー法〔トランス
フユーシ゛ヨン（Ｔｒａｎｓ＠ｆｕｓｓｌｏｎ ） ６
、１４６ （１９６６）〕及びブロック電気泳動法〔
電気泳動実験法、Ｐ、３０３、電気泳動実験法（文光堂
）〕、等電点分画法〔生物物理化学１４（３）２１ 、
（２０９）、（１９６９））などが公知である。
本発明においてはヒトの抗ＨＢｅ陽性の血漿又は血清か
ら常法に従って得た免疫グロブリンを公知の方法によっ
て分画し、γ位（γｌ、γ２）の画分、好ましくはγ２
に属する塩基性のより高・い画分を分取する。前記の公
知分画法のうち、用いる試薬、操作及び条件等に閃し、
本発明において最も好ましい分画法はイオン交換クロマ
トグラフィ法である。しかし免疫吸着法も嗜必要とされ
る高度に精製されたＨＢｅＡｇを用いること及訊製品の
多少の特異性並びに抗体価の減弱を予期するならば、用
いることができる。
ら常法に従って得た免疫グロブリンを公知の方法によっ
て分画し、γ位（γｌ、γ２）の画分、好ましくはγ２
に属する塩基性のより高・い画分を分取する。前記の公
知分画法のうち、用いる試薬、操作及び条件等に閃し、
本発明において最も好ましい分画法はイオン交換クロマ
トグラフィ法である。しかし免疫吸着法も嗜必要とされ
る高度に精製されたＨＢｅＡｇを用いること及訊製品の
多少の特異性並びに抗体価の減弱を予期するならば、用
いることができる。
イオン交換クロマトグラフィ法による分画の条件は、そ
の担体によって選択的であり、分画されたフラクション
の中から抗ＨＢｅの集中した電気泳動的にスロウＩｇＧ
に局在する両分を分取すればよい。例えば陽イオン交換
体を用いる場合は０．３〜の ０．００５Ｍリン酸紛衝液（ｐＨ４〜７）で平衡化した
担体に免疫グロブリンを吸着させ、塩濃度を上げながら
免疫グロブリンを溶出させ、溶出液から目的とする抗体
を含む分画を吟味して分取する。また陰イオン交換体を
用いる場合は０．１〜，０．００５Ｍ。
の担体によって選択的であり、分画されたフラクション
の中から抗ＨＢｅの集中した電気泳動的にスロウＩｇＧ
に局在する両分を分取すればよい。例えば陽イオン交換
体を用いる場合は０．３〜の ０．００５Ｍリン酸紛衝液（ｐＨ４〜７）で平衡化した
担体に免疫グロブリンを吸着させ、塩濃度を上げながら
免疫グロブリンを溶出させ、溶出液から目的とする抗体
を含む分画を吟味して分取する。また陰イオン交換体を
用いる場合は０．１〜，０．００５Ｍ。
ｐＨ７〜１０のリン酸緩衝液で担体を平衡化し、この担
体に免疫グロブリンを吸着させ、塩濃度を上げつつ分別
溶出させる。
体に免疫グロブリンを吸着させ、塩濃度を上げつつ分別
溶出させる。
このようにして得たｒ−グロブリンのスロウ画分は、次
いで粒状３１１ｔ体に感作させることによりＨＢｅＡｇ
の検出試薬が得られる。粒状担体としては公知のラテッ
クス樹脂類、ゴム類、無機吸着剤、及び動物（例えばヒ
ツジ、モルモット、０型のヒト、ニワトリなど）の赤血
球をホルマリンやグルタルアルデヒドで固定したものを
用いる。これらの粒状担体は約２０μ以下、特に５〜１
５μ程度のものが好適であり、水性溶媒に浮遊させて使
用するのがよい。水性溶媒としては例えば水、生理食塩
水、各種緩衝液（例えばグリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液
）などが挙げられる。通常は約０．３〜１％（容量）に
なるように粒状担体を水性溶媒に浮遊させ、ｐＨを約４
．５〜８．９に調整し、好ましくはｐｆ（を約６．０〜
８．０に調整するー。粒状担体に抗体を感作させる処理
は公知のように粒状担体と抗体を水、生理食塩水、各種
緩衝液などの水性溶媒中で接触させるのがよく、一般に
抗体含有液と上記粒状担体浮遊液を混合することによっ
て行われる。この感作処理はｐＨ約４．５〜８．６、約
１５〜３７゜Ｃの温度で行うのが好ましい。
いで粒状３１１ｔ体に感作させることによりＨＢｅＡｇ
の検出試薬が得られる。粒状担体としては公知のラテッ
クス樹脂類、ゴム類、無機吸着剤、及び動物（例えばヒ
ツジ、モルモット、０型のヒト、ニワトリなど）の赤血
球をホルマリンやグルタルアルデヒドで固定したものを
用いる。これらの粒状担体は約２０μ以下、特に５〜１
５μ程度のものが好適であり、水性溶媒に浮遊させて使
用するのがよい。水性溶媒としては例えば水、生理食塩
水、各種緩衝液（例えばグリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液
）などが挙げられる。通常は約０．３〜１％（容量）に
なるように粒状担体を水性溶媒に浮遊させ、ｐＨを約４
．５〜８．９に調整し、好ましくはｐｆ（を約６．０〜
８．０に調整するー。粒状担体に抗体を感作させる処理
は公知のように粒状担体と抗体を水、生理食塩水、各種
緩衝液などの水性溶媒中で接触させるのがよく、一般に
抗体含有液と上記粒状担体浮遊液を混合することによっ
て行われる。この感作処理はｐＨ約４．５〜８．６、約
１５〜３７゜Ｃの温度で行うのが好ましい。
このようにして得られたＨＢｅＡｇの検出試薬は、試験
例で示されるように、特異反応性が極めて高く従ってＨ
ＢｅＡｇを検出する精度が著るしく向上し、輸血後肝炎
の防止、肝炎患者の予後推定、治療効果の判定などに極
めて有効である。
例で示されるように、特異反応性が極めて高く従ってＨ
ＢｅＡｇを検出する精度が著るしく向上し、輸血後肝炎
の防止、肝炎患者の予後推定、治療効果の判定などに極
めて有効である。
本発明を実施例によって具体的に説明する。
実施例１
抗ＨＢｅ陽性のヒト血３Ｊ１１１から出発してコーンの
エタノール分画法←より粗製免疫グロブリン画分８．２
１を得る。このもののＰＨＡ法（受身赤血球凝集反応法
）での抗ＨＢｅの抗体価は、１％溶液で測定する時、１
：４０００であった。この免疫グの ロブリンｌｙをｏ、 ｏ尚すン酸緩衝液（ｐＨ４６，０
）に対して１夜透析した後、同じ緩衝液で平衡化したＣ
Ｍ−セルロース（５ｅｒｖａ ′：＃、製）のカラム（
内径３側、長さ３０ ｃｓ ）に載せて吸ヅ＾させ、平
４％化に用いたと同じ緩衝液で十分に洗浄する。次に０
゜０１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）と０．０１ Ｍ
のリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）にＮａＣ１を０．４ Ｍ
を加えた溶液を用いて濃度勾配溶出を行う。
エタノール分画法←より粗製免疫グロブリン画分８．２
１を得る。このもののＰＨＡ法（受身赤血球凝集反応法
）での抗ＨＢｅの抗体価は、１％溶液で測定する時、１
：４０００であった。この免疫グの ロブリンｌｙをｏ、 ｏ尚すン酸緩衝液（ｐＨ４６，０
）に対して１夜透析した後、同じ緩衝液で平衡化したＣ
Ｍ−セルロース（５ｅｒｖａ ′：＃、製）のカラム（
内径３側、長さ３０ ｃｓ ）に載せて吸ヅ＾させ、平
４％化に用いたと同じ緩衝液で十分に洗浄する。次に０
゜０１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）と０．０１ Ｍ
のリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）にＮａＣ１を０．４ Ｍ
を加えた溶液を用いて濃度勾配溶出を行う。
初期に溶出してくる画分はファス）ＩｇＧ画分、後期に
溶出してくるのがスロウＩ ｇ Ｇ ＩＩｉ＋１分、そ
の中間がミドルＩｇＧ （Ｍｉｄｄｌｅ ＩｇＧ ）画
分として４７（ｆ＋ Ｎｇされた。それぞれをプールし
た後、必要に応じて減圧濃縮して１％濃度に統一し、Ｐ
ＨＡ法で抗ＨＢｅの抗体価を測定したところ、７アスト
ＩｇＧ画分では１：６４にずぎないが、スロウＩ ｇ
Ｇ ｆＴ’ｌ１分では１ ： ３２０００を示し、８倍
に？１り製された。
溶出してくるのがスロウＩ ｇ Ｇ ＩＩｉ＋１分、そ
の中間がミドルＩｇＧ （Ｍｉｄｄｌｅ ＩｇＧ ）画
分として４７（ｆ＋ Ｎｇされた。それぞれをプールし
た後、必要に応じて減圧濃縮して１％濃度に統一し、Ｐ
ＨＡ法で抗ＨＢｅの抗体価を測定したところ、７アスト
ＩｇＧ画分では１：６４にずぎないが、スロウＩ ｇ
Ｇ ｆＴ’ｌ１分では１ ： ３２０００を示し、８倍
に？１り製された。
分取した各ｐＨ１１分の１％液を用いて免疫ＭＹ気泳動
を行うと、抗ＨＢｅ活性の集中したスロウＩｇＧ画分は
免疫グロブリンの中でも最も陰極側へ泳動され、ファス
）ＩｇＧ画分は最も陽極側へ泳動され、ミドルＩｇＧ画
分は両者の中間位置に泳動された。
を行うと、抗ＨＢｅ活性の集中したスロウＩｇＧ画分は
免疫グロブリンの中でも最も陰極側へ泳動され、ファス
）ＩｇＧ画分は最も陽極側へ泳動され、ミドルＩｇＧ画
分は両者の中間位置に泳動された。
実施例２
緬羊赤血球をリン酸緩衝化生理食塩水で４回洗浄し、こ
れを５％濃度の懸濁液にする。この懸濁液・―にゲルタ
ールアルデヒドの２．５％溶液を２０％の割合で加え、
室温にて６０分間反応を行い、次いで上記の生理食塩水
で４回洗浄して未反応のゲルタールアルデヒドを除くと
固定化赤血球が得られる。
れを５％濃度の懸濁液にする。この懸濁液・―にゲルタ
ールアルデヒドの２．５％溶液を２０％の割合で加え、
室温にて６０分間反応を行い、次いで上記の生理食塩水
で４回洗浄して未反応のゲルタールアルデヒドを除くと
固定化赤血球が得られる。
この固定化赤血球を５％濃度の懸濁液とし、今井らの方
法〔医学のあゆみ、７８．７５９〜７６０（１９７０）
；ｌに準じて２８０ｎｍでの吸光度が０．０１〜０．５
に相当する濃度のわに ＨＢｅを混合し、ＨＢｅＡｇの
検出試薬を得る。
法〔医学のあゆみ、７８．７５９〜７６０（１９７０）
；ｌに準じて２８０ｎｍでの吸光度が０．０１〜０．５
に相当する濃度のわに ＨＢｅを混合し、ＨＢｅＡｇの
検出試薬を得る。
比較試験
粗製免疫グロブリンを出発原料として、アフイニテイク
ロマトグラフイ法〔ザジャーナルオブインムノロジー（
Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ ） １１９．１５５６（１９７７））でＩＩＬ
！ｉｎたＩｇＧ［アフイニテイＩｇＧ （ａｆｆｉｎｉ
ｔｙ ＩｇＧ） ）とを月１いて、その−宇ｆｌをゲル
タールアルデヒド処理した緬羊赤血球に感作し、得られ
た試二廓の特１１４性を比較した。
ロマトグラフイ法〔ザジャーナルオブインムノロジー（
Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ ） １１９．１５５６（１９７７））でＩＩＬ
！ｉｎたＩｇＧ［アフイニテイＩｇＧ （ａｆｆｉｎｉ
ｔｙ ＩｇＧ） ）とを月１いて、その−宇ｆｌをゲル
タールアルデヒド処理した緬羊赤血球に感作し、得られ
た試二廓の特１１４性を比較した。
すなわち血）１羊赤血球をリンｒ投功徳比生理」よｊ’
Ａｌｌ水で４回洗浄し、これを５％濃度の一１’ｄ：ｉ
液にする。
Ａｌｌ水で４回洗浄し、これを５％濃度の一１’ｄ：ｉ
液にする。
こ・れにゲルタールアルデヒドの２．５％溶液を２０％
の割合で加え、室温にて６０分間反応を行い、次いで上
記の生理食塩水で４回洗浄して未反１ノロのゲルタール
アルデヒドを除くと固定化赤血球が得られる。
の割合で加え、室温にて６０分間反応を行い、次いで上
記の生理食塩水で４回洗浄して未反１ノロのゲルタール
アルデヒドを除くと固定化赤血球が得られる。
この固定化赤血球を５％濃度の懸濁液とし、今井らの方
法〔医学のあゆみ、７８．７５９〜７６０（１９７０）
）に準じて各種免疫グロブリンを感作した。。
法〔医学のあゆみ、７８．７５９〜７６０（１９７０）
）に準じて各種免疫グロブリンを感作した。。
抗体感作赤血球の特異性を確めるため、ＨＢ＋＋Ａｇ陽
性の人血漿２８８人について陽性及び精製抗ＨＢｅを用
いた凝集阻止反応による偽陽性の有無を調べ、ぞの結果
を次表にまとめた。ファストＩｇＧ画分でｔ感作したも
のは１為陽性が７１人と極めて高く、免疫グロブリンの
中でも７アス）ＩｇＧ画分中にはこのような非特異的反
応の原因となる成分が集められていることがわかる。一
方、従来のアフイニテイクロマトグラフイで精製したＩ
ｇＧで感作したものは、偽陽性が２６人であったが、ス
ロウＩｇＧを用いた場合はこれよりもさらに著しく改畔
されて２人であり、アフイニテイＩｇＧの１／１３にま
で少なくなった。
性の人血漿２８８人について陽性及び精製抗ＨＢｅを用
いた凝集阻止反応による偽陽性の有無を調べ、ぞの結果
を次表にまとめた。ファストＩｇＧ画分でｔ感作したも
のは１為陽性が７１人と極めて高く、免疫グロブリンの
中でも７アス）ＩｇＧ画分中にはこのような非特異的反
応の原因となる成分が集められていることがわかる。一
方、従来のアフイニテイクロマトグラフイで精製したＩ
ｇＧで感作したものは、偽陽性が２６人であったが、ス
ロウＩｇＧを用いた場合はこれよりもさらに著しく改畔
されて２人であり、アフイニテイＩｇＧの１／１３にま
で少なくなった。
抗体感作赤血球の特異性
（注）総計２８８人
このように７アストＩｇＧ画分は非特異反応が高く、ス
ロウ画分では非特異反応がその約１／３５になることか
ら、免疫グロブリンをファストＩｇＧ画分とスロウＩｇ
Ｇ画分とに分けてスロウＩｇＧ画分を取得する本発明の
有効性は明らかである。さらにこの試験結果は従来技術
で高度に精製された抗ＩＪＢｅ画分もファストＩｇＧ画
分とスロウＩｇＧ画分とに分画することの有効性を示１
唆するものである。
ロウ画分では非特異反応がその約１／３５になることか
ら、免疫グロブリンをファストＩｇＧ画分とスロウＩｇ
Ｇ画分とに分けてスロウＩｇＧ画分を取得する本発明の
有効性は明らかである。さらにこの試験結果は従来技術
で高度に精製された抗ＩＪＢｅ画分もファストＩｇＧ画
分とスロウＩｇＧ画分とに分画することの有効性を示１
唆するものである。
出願人 株式会社ミ トリ十字
Claims (3)
- （１）抗ＨＢｅ陽性の血漿又は血清より得られた免疫グ
ロブリンから、電気泳動的にγ位に属するスロウＩｇＧ
を分取することを特徴とするＨＢｅＡｇに対する特異抗
体の製法。 - （２） 上記免疫グロブリンから電気泳動的により塩
基性の高いγ位に属するスロウＩｇＧを分取する特許請
求の範囲第１項に記載のＨＢｅＡｇに対する特異抗体の
製法。 - （３）抗ＨＢ 、ａｍ性の血漿又は血清より得られる免
疫グロブリンから、電気泳動的にγ位に属するスロウＩ
ｇＧを分取して得たＨＢｅＡｇに対する特異抗体によっ
て感作された粒状拒１本からなるＨＢｅＡｇの検出試薬
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14713681A JPS5848856A (ja) | 1981-09-17 | 1981-09-17 | ＨＢｅＡｇに対する特異抗体の製法及びＨＢｅＡｇの検出試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14713681A JPS5848856A (ja) | 1981-09-17 | 1981-09-17 | ＨＢｅＡｇに対する特異抗体の製法及びＨＢｅＡｇの検出試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5848856A true JPS5848856A (ja) | 1983-03-22 |
Family
ID=15423377
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14713681A Pending JPS5848856A (ja) | 1981-09-17 | 1981-09-17 | ＨＢｅＡｇに対する特異抗体の製法及びＨＢｅＡｇの検出試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5848856A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60258127A (ja) * | 1984-06-04 | 1985-12-20 | Green Cross Corp:The | Ｂ型肝炎ワクチンの製造方法 |
| WO1990008960A1 (en) * | 1989-02-06 | 1990-08-09 | Imclone Systems, Inc. | Stabilized hepatitis e antigen suitable for immunoassays |
| CN115677853A (zh) * | 2021-07-29 | 2023-02-03 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 抗HBeAg抗体或其抗原结合片段及其应用 |
-
1981
- 1981-09-17 JP JP14713681A patent/JPS5848856A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60258127A (ja) * | 1984-06-04 | 1985-12-20 | Green Cross Corp:The | Ｂ型肝炎ワクチンの製造方法 |
| WO1990008960A1 (en) * | 1989-02-06 | 1990-08-09 | Imclone Systems, Inc. | Stabilized hepatitis e antigen suitable for immunoassays |
| CN115677853A (zh) * | 2021-07-29 | 2023-02-03 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 抗HBeAg抗体或其抗原结合片段及其应用 |
| CN115677853B (zh) * | 2021-07-29 | 2023-10-31 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 抗HBeAg抗体或其抗原结合片段及其应用 |
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