JPS5816692A - 酵素によるｌ−トリプトフアンの製造方法 - Google Patents
酵素によるｌ−トリプトフアンの製造方法Info
- Publication number
- JPS5816692A JPS5816692A JP11531681A JP11531681A JPS5816692A JP S5816692 A JPS5816692 A JP S5816692A JP 11531681 A JP11531681 A JP 11531681A JP 11531681 A JP11531681 A JP 11531681A JP S5816692 A JPS5816692 A JP S5816692A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- indole
- reaction
- reaction solution
- concentration
- serine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、インドールとＬ−セリンからエソシエリヒア
・コリ（Ｆｉｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ）
の生産するトリプトファン・シンセターゼの作用でＬ−
）リプトファンを製造する際に、原料であるインドール
を連続または断続的に添加することによって反応液中の
インドール濃度を０．１重量％以下のような低濃度に制
御し、該酵素による反応を効率よく進行させるＬ−トリ
プトファンの製造方法に関するものである。
・コリ（Ｆｉｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ）
の生産するトリプトファン・シンセターゼの作用でＬ−
）リプトファンを製造する際に、原料であるインドール
を連続または断続的に添加することによって反応液中の
インドール濃度を０．１重量％以下のような低濃度に制
御し、該酵素による反応を効率よく進行させるＬ−トリ
プトファンの製造方法に関するものである。
近年、Ｌ−）ＩＪブトファンは医薬用のみならず飼料添
加物としての効果が世の注目を集めるに至シ、工業的規
模による安価な本物質生産の期待が高まってきている。
加物としての効果が世の注目を集めるに至シ、工業的規
模による安価な本物質生産の期待が高まってきている。
Ｌ−）リプトファンを生産せしめる方法として、化学合
成法および発酵法が数多く知られているが、化学合成法
の場合はＤＬ体が合成されるためにＬ体を得るのに光学
分割しな“ければならないという欠点があり、又、発酵
法の場合は蓄積量、収率、精製、廃水処理などに欠点が
あっていずれも工業上有利な生産方法には至ってい々い
。これらの方法に代って最近酵素法によるＬ−）リプト
ファンの生産が脚光を浴びてきており、中でもトリプト
ファン・シンセターゼを用いて、インドールとＬ−セリ
ンからＬ−）リプトファンを製造する方法は工業上、非
常に有望と考えられる。
成法および発酵法が数多く知られているが、化学合成法
の場合はＤＬ体が合成されるためにＬ体を得るのに光学
分割しな“ければならないという欠点があり、又、発酵
法の場合は蓄積量、収率、精製、廃水処理などに欠点が
あっていずれも工業上有利な生産方法には至ってい々い
。これらの方法に代って最近酵素法によるＬ−）リプト
ファンの生産が脚光を浴びてきており、中でもトリプト
ファン・シンセターゼを用いて、インドールとＬ−セリ
ンからＬ−）リプトファンを製造する方法は工業上、非
常に有望と考えられる。
従来、トリプトファン・シンセターゼがインドールとＬ
−セリンからＬ−トリプトファンを合成する反応を触媒
することは知られているが、本発明者らの知見によれば
反応基質であるインドールが通常０１重量％以上の高濃
度になると酵素活性を阻害するために反応開始時に高濃
度のインドールを一括して仕込むことが出来ず、従って
インドール濃度を低濃度として反応を行わざるを得ない
ために生成するＬ−）リブトファンの濃度は通常数ｔμ
程度と非常に低く、実用的な製造方法にはＡシ得なかっ
た。この問題を解決する他の方法として、反応液中に非
イオン性の界面活性剤を添加してインドールとミセルを
形成させ、インドールの反応液中への溶解をコントロー
ルする方法が知られているが、この方法の場合は通常５
重量％以上のようなかなりの高濃度の界面活性剤を添加
する必要がありコスト上の問題に加えて、反応液からの
トリプトファンの精製分離或いは□反応廃液の廃水処理
に問題があって工業上有利な方法とは言い難いものであ
った。
−セリンからＬ−トリプトファンを合成する反応を触媒
することは知られているが、本発明者らの知見によれば
反応基質であるインドールが通常０１重量％以上の高濃
度になると酵素活性を阻害するために反応開始時に高濃
度のインドールを一括して仕込むことが出来ず、従って
インドール濃度を低濃度として反応を行わざるを得ない
ために生成するＬ−）リブトファンの濃度は通常数ｔμ
程度と非常に低く、実用的な製造方法にはＡシ得なかっ
た。この問題を解決する他の方法として、反応液中に非
イオン性の界面活性剤を添加してインドールとミセルを
形成させ、インドールの反応液中への溶解をコントロー
ルする方法が知られているが、この方法の場合は通常５
重量％以上のようなかなりの高濃度の界面活性剤を添加
する必要がありコスト上の問題に加えて、反応液からの
トリプトファンの精製分離或いは□反応廃液の廃水処理
に問題があって工業上有利な方法とは言い難いものであ
った。
本発明者らは、酵素の活性を低下させることなく、反応
終了後の反応液中に残存インドールがなくしかもＬ−）
リプトフ７ノを高濃度で生成する反応条件を種々検討し
た結果、反応液中のインドール濃度を０．１重量％以下
に保つようにインドールを連続または断続的に添加して
反応せしめることにより、酵素の活性の低下もなくしか
も高収量でＬ−）ＩＪブトファンが生成することを見出
し本発明を完成した。
終了後の反応液中に残存インドールがなくしかもＬ−）
リプトフ７ノを高濃度で生成する反応条件を種々検討し
た結果、反応液中のインドール濃度を０．１重量％以下
に保つようにインドールを連続または断続的に添加して
反応せしめることにより、酵素の活性の低下もなくしか
も高収量でＬ−）ＩＪブトファンが生成することを見出
し本発明を完成した。
本発明の方法によれば、トリプトファンを高＾
収量で生成させるだけでなく、反応液中のインドール濃
度は常に低濃度に制御されているので、反応終了時に反
応液中にインドールが殆んど残存しない利点もあり、こ
のことは後続の精製にか＼る負担を著しく軽減するもの
である。これに反し、高濃度のインドールを反応開始時
に一括に仕込む方法では、Ｌ−トリプトファンは非常に
低濃度でしか得られないばかりか、反応終了時の反応液
中の残インドール量が著しく多くなるという欠点を有し
ている。
度は常に低濃度に制御されているので、反応終了時に反
応液中にインドールが殆んど残存しない利点もあり、こ
のことは後続の精製にか＼る負担を著しく軽減するもの
である。これに反し、高濃度のインドールを反応開始時
に一括に仕込む方法では、Ｌ−トリプトファンは非常に
低濃度でしか得られないばかりか、反応終了時の反応液
中の残インドール量が著しく多くなるという欠点を有し
ている。
本発明に使用するトリプトファン・シンター生産菌とし
てはエソシェリヒア・コリに属する微生物、例えばエッ
シェリヒア・コリＭＴ−１ｏ２ｓ２（ＦＫＲＭ ＢＰ
−１９）、エッシェリヒアーコリＭ Ｔ −１０２４２
（ＩＦＫＲＭ ＢＰ−２０）など、が使用され、本酵
素を反応で使用するときには精製された酵素または菌体
または菌体を破砕して得られる無細胞抽出液、或いは酵
素または菌体を固定化して得られる固定化物を酵素源と
して使用することが出来る。インドールを連続または断
続的に添加する方法としては、インドールを粉体フィー
ダーなどを用いて粉体の状態で添加する方法、５２℃以
上に加温してインドールを溶融して液状のインドールを
滴下またはポンプで添加する方法またはメタノール、エ
タノールなどのアルコールにインドールを溶解させた後
ポンプなどで添加する方法などが使用できる。
てはエソシェリヒア・コリに属する微生物、例えばエッ
シェリヒア・コリＭＴ−１ｏ２ｓ２（ＦＫＲＭ ＢＰ
−１９）、エッシェリヒアーコリＭ Ｔ −１０２４２
（ＩＦＫＲＭ ＢＰ−２０）など、が使用され、本酵
素を反応で使用するときには精製された酵素または菌体
または菌体を破砕して得られる無細胞抽出液、或いは酵
素または菌体を固定化して得られる固定化物を酵素源と
して使用することが出来る。インドールを連続または断
続的に添加する方法としては、インドールを粉体フィー
ダーなどを用いて粉体の状態で添加する方法、５２℃以
上に加温してインドールを溶融して液状のインドールを
滴下またはポンプで添加する方法またはメタノール、エ
タノールなどのアルコールにインドールを溶解させた後
ポンプなどで添加する方法などが使用できる。
反応液中のインドール濃度をｏ、 ｉ重量％以下に保ち
ながら基質のインドールを添加するためには、反応液中
のインドール濃度を連続または断続的に測定し、この値
をフィーダー（粉体フィーダーまたはポンプなど）にフ
ィードバックする必要があるが、この反応液中のインド
ール濃度を定量する方法としては、例えば、ＰＢ０２０
Ｍのカラムを用いてガス・クロマトグラフィーで測定す
る方法または反応液中のインドールをｎ −ヘキサンな
どで抽出して２５０−２７０ｎｍに於けるインドールの
紫外部吸収を測定する方法などを採用することができる
。
ながら基質のインドールを添加するためには、反応液中
のインドール濃度を連続または断続的に測定し、この値
をフィーダー（粉体フィーダーまたはポンプなど）にフ
ィードバックする必要があるが、この反応液中のインド
ール濃度を定量する方法としては、例えば、ＰＢ０２０
Ｍのカラムを用いてガス・クロマトグラフィーで測定す
る方法または反応液中のインドールをｎ −ヘキサンな
どで抽出して２５０−２７０ｎｍに於けるインドールの
紫外部吸収を測定する方法などを採用することができる
。
本発明の製造方法によれば、インドールとＬ−セリンか
ら高収量で且つ反応液中の残インドールが殆んどなく目
的とするＬ−）リプトファンを得ることができるので、
本発明はＬ−トＩＪブトファンの工業的生産に大いに貢
献するものと思われる。
ら高収量で且つ反応液中の残インドールが殆んどなく目
的とするＬ−）リプトファンを得ることができるので、
本発明はＬ−トＩＪブトファンの工業的生産に大いに貢
献するものと思われる。
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。
実施例１
トリプトファン・シンターゼ生産菌であるエツンエリヒ
ア・コリＭ Ｔ −１ｏ２３２（ＦＥＲＭ ＢＰ−１９
）を５００ｍ１の坂ロフラスコ中の第１表に示す組成の
培地１００ｍ１に接種し、３５℃で２４時間培養した。
ア・コリＭ Ｔ −１ｏ２３２（ＦＥＲＭ ＢＰ−１９
）を５００ｍ１の坂ロフラスコ中の第１表に示す組成の
培地１００ｍ１に接種し、３５℃で２４時間培養した。
この培養液２ｏｏｍ／（フラスコ２本）を３０ｔのジャ
ーファーメンタ−中ρ第２表に示す組成の培地１５ｔに
接種し、３５℃、ｐＨ６，８（２８％アンモニア水でコ
ントロール）テ３０時間培養した。培養終了後、該培養
液を遠心集菌して湿菌体を４０２ずつ分取し、−１５℃
で２日間凍結した。この凍結菌体を反応直前に解凍し、
酵素源と、して使用した。第６表に示す組成の反応液１
ｔを用いて、反応液中のインドールは、ガスクロマトグ
ラフィーで分析しながら、消費された時点で０１１重量
％なるように断続的に添加し、最終的にインドール添加
濃度が２重量％に相当する量になる迄反応を実施した。
ーファーメンタ−中ρ第２表に示す組成の培地１５ｔに
接種し、３５℃、ｐＨ６，８（２８％アンモニア水でコ
ントロール）テ３０時間培養した。培養終了後、該培養
液を遠心集菌して湿菌体を４０２ずつ分取し、−１５℃
で２日間凍結した。この凍結菌体を反応直前に解凍し、
酵素源と、して使用した。第６表に示す組成の反応液１
ｔを用いて、反応液中のインドールは、ガスクロマトグ
ラフィーで分析しながら、消費された時点で０１１重量
％なるように断続的に添加し、最終的にインドール添加
濃度が２重量％に相当する量になる迄反応を実施した。
反応温度は３５℃、ｐＨ８，５で反応に要した時間は２
４時間であった。比較例として、反応開始時にインドー
ル濃度を２チとして一括仕込んだ組成の反応液（他の成
分は第３表に同じ）を用いて２４時間反応を実施した。
４時間であった。比較例として、反応開始時にインドー
ル濃度を２チとして一括仕込んだ組成の反応液（他の成
分は第３表に同じ）を用いて２４時間反応を実施した。
結果を第４表に示した。
第 １ 表
エールリッヒ肉エキス １０ｆポリペプトン
１０グＮａＣ１５ｆ 蒸溜水１ｔに希釈して使用（ｐＨ６，８）第 ２
表 グルコース １０ ｆ（ＮＨ，）
２ＳＯ，１，５ｆｔ’ に２ＨＰ０． １ ９ＭＹ
Ｓｏ、拳７Ｈ２０１ｆ ポリペプトン ｏ５ グ酵母エキス
ｏ５ グＬ−トリプトファン
０．１５ｆアデカノールＬＧ−８０５５ｆ 蒸溜水で１ｔに希釈して使用（ｐＨ６，８）第 ６
表 インドール １２ Ｌ−セリフ ２０１Ｆ ピリドキサプレ５′−リン酸 ０．１２
（ＮＨ，）２Ｓｏ、 １
Ｏｆ湿菌体 ４０２ 蒸溜水で１ｔに希釈して使用 第 ４ 表 実施例２ 反応液中のインドール濃度はｎ−ヘキサンで抽出して２
Ｓ６ｎｍに於けるインドールの紫外部吸収を測定する方
法で反応進行中連続的に測定し、この分析装置をインド
ールの粉体フィーダーに連動させて、反応液中のインド
ール濃度を２００ｐｐｍに制御しながら反応を行った他
は実施例１と同様の操作を施した。反応時間は１６時間
であシ、得られた結果を第５表に示した。
１０グＮａＣ１５ｆ 蒸溜水１ｔに希釈して使用（ｐＨ６，８）第 ２
表 グルコース １０ ｆ（ＮＨ，）
２ＳＯ，１，５ｆｔ’ に２ＨＰ０． １ ９ＭＹ
Ｓｏ、拳７Ｈ２０１ｆ ポリペプトン ｏ５ グ酵母エキス
ｏ５ グＬ−トリプトファン
０．１５ｆアデカノールＬＧ−８０５５ｆ 蒸溜水で１ｔに希釈して使用（ｐＨ６，８）第 ６
表 インドール １２ Ｌ−セリフ ２０１Ｆ ピリドキサプレ５′−リン酸 ０．１２
（ＮＨ，）２Ｓｏ、 １
Ｏｆ湿菌体 ４０２ 蒸溜水で１ｔに希釈して使用 第 ４ 表 実施例２ 反応液中のインドール濃度はｎ−ヘキサンで抽出して２
Ｓ６ｎｍに於けるインドールの紫外部吸収を測定する方
法で反応進行中連続的に測定し、この分析装置をインド
ールの粉体フィーダーに連動させて、反応液中のインド
ール濃度を２００ｐｐｍに制御しながら反応を行った他
は実施例１と同様の操作を施した。反応時間は１６時間
であシ、得られた結果を第５表に示した。
第 ５ 表
実施例３
トリプトファン・シンセターゼ生産菌であるエッシエリ
ヒア・コリＭ Ｔ −１０２４２（Ｆ’ＥＲＭＢＰ−２
０）を用いて実施例２と同様の操作を行なった。得られ
た結果を第６表に示した。
ヒア・コリＭ Ｔ −１０２４２（Ｆ’ＥＲＭＢＰ−２
０）を用いて実施例２と同様の操作を行なった。得られ
た結果を第６表に示した。
第 ６ 表
特許出願人
三井東圧化学株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 エノシエリヒア・コリに属する微生物の生産するトリプ
トファン・シンセターゼの存在下インドールとＬ−セリ
ンとを反応させてＬ−）リプトファンを製造する方法に
おいて、反応液中のインドール濃度を、０１重量％以下
に保つようハ ンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11531681A JPS5816692A (ja) | 1981-07-24 | 1981-07-24 | 酵素によるｌ−トリプトフアンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11531681A JPS5816692A (ja) | 1981-07-24 | 1981-07-24 | 酵素によるｌ−トリプトフアンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5816692A true JPS5816692A (ja) | 1983-01-31 |
| JPS6225353B2 JPS6225353B2 (ja) | 1987-06-02 |
Family
ID=14659589
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11531681A Granted JPS5816692A (ja) | 1981-07-24 | 1981-07-24 | 酵素によるｌ−トリプトフアンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5816692A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989003428A1 (en) * | 1987-10-12 | 1989-04-20 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Process for producing l-tryptophane |
| JP2764084B2 (ja) * | 1987-10-12 | 1998-06-11 | 三井化学株式会社 | Ｌ―トリプトファンの製造方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5756319A (en) | 1995-07-18 | 1998-05-26 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Production process of S-phenyl-L-cysteine |
-
1981
- 1981-07-24 JP JP11531681A patent/JPS5816692A/ja active Granted
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| AGRICULTURAL AND BIOLOGICAL CHEMISTRY=1974 * |
| BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA=1978 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989003428A1 (en) * | 1987-10-12 | 1989-04-20 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Process for producing l-tryptophane |
| JP2764084B2 (ja) * | 1987-10-12 | 1998-06-11 | 三井化学株式会社 | Ｌ―トリプトファンの製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6225353B2 (ja) | 1987-06-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO1983001784A1 (en) | Process for biologically producing amide | |
| FR2461753A1 (fr) | Procede de preparation d'une cephalosporine par fermentation et micro-organisme destine a la mise en oeuvre de ce procede | |
| JPS62289A (ja) | α−ケト酸からのＬ−α−アミノ酸の酵素学的製造方法 | |
| JPS5816692A (ja) | 酵素によるｌ−トリプトフアンの製造方法 | |
| JPH0928390A (ja) | グリコール酸の微生物学的製造法 | |
| JPH09154589A (ja) | エリスリトールの製造方法 | |
| JPS6155955B2 (ja) | ||
| CN114134057B (zh) | 一株酿酒酵母swgcjm001及其培养方法和应用 | |
| JPS5923794B2 (ja) | ジヒドロキシアセトンの製造法 | |
| JPH04304893A (ja) | 微生物による含窒素複素環化合物の水酸化物の製造方法 | |
| JPS6291177A (ja) | セレン含有微生物菌体 | |
| JP2800005B2 (ja) | デオキシリボ核酸の製造法 | |
| JPH0319695A (ja) | トランス―４―シアノシクロヘキサンカルボン酸アミドの製造法およびそれに用いる酵素 | |
| KR100345847B1 (ko) | 고정화효소에의한세파졸린의제조방법 | |
| JP2716477B2 (ja) | Ｓ‐カルボキシメチル‐ｌ‐システインの製造方法 | |
| JP2901458B2 (ja) | ゲンチアノースの製造方法 | |
| JP4982164B2 (ja) | ２−ヒドロキシ−４−置換ピリジンの製造方法 | |
| CN113106132A (zh) | 制备β-烟酰胺单核苷酸的方法、酶组合物及其应用 | |
| CN117025696A (zh) | 一种(2s,3r)-对甲砜基苯丝氨酸的制备方法 | |
| CN116926138A (zh) | 一种基于微生物法可控速率式生产丙烯酰胺的工艺 | |
| JPH03180188A (ja) | システインの製造法 | |
| JPS5939296A (ja) | 微生物を利用するｌ−トリプトフアンの製造法 | |
| JPS6112296A (ja) | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 | |
| JPS61247395A (ja) | Ｌ−フェニルアラニンの製造法 | |
| JPS63283591A (ja) | Ｌ−α−アミノ−ε−カプロラクタムの製造法 |