JPS58134065A

JPS58134065A - ペプチドおよびそれを有効成分とするホルモン剤

Info

Publication number: JPS58134065A
Application number: JP57016691A
Authority: JP
Inventors: Koji Kawauchi; 川内　浩司
Original assignee: Kaken Pharmaceutical Co Ltd; Kaken Chemical Co Ltd; Suntory Ltd
Current assignee: Kaken Pharmaceutical Co Ltd; Suntory Ltd
Priority date: 1982-02-03
Filing date: 1982-02-03
Publication date: 1983-08-10
Also published as: GB8302920D0; DE3303438A1; NL8300413A; FR2521133A1; AU1093783A; GB2116562A; IT8319401A0; US4460576A; IT1163077B; BE895805A; IT8319401A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は脳下垂体から成長ホルモン（以下、ＧＨと略す
）を放出させる作用を有する新規なぺプチドおよびその
塩、ならびにそれを有効成分とする成長ホルモン放出ホ
ルモン剤に関する。

ＯＨは脳下垂体ホルモンの１種であり、成長を促進する
と共に全身の体細胞に直接、間接に作用してタンパク質
合成を高め、遊離脂肪酸の利用度を高めてエネルギー利
用効率を高める働きを有しており、現在のところ小人症
の治療薬として使用されているが、前記ＧＨの作用から
みて体細胞の賦活を目的とする創傷治′癒剤としても大
いに期待できるものである。

しかしながらＧｌｉは種特異性が高く、インシュリンと
異なりウシやブタなどの脳下垂体から抽出されるＧＭを
ヒトに使用することができない。

しかも、たとえばヒ）ＧＨは１９１個の７ミノ醗から構
成されている単純タンパク質であり分子量が大きい（約
２２．０００）ため、有機合成によって合成することは
できない。したがってＧＨを同種の動物の脳下垂体から
抽出してえているのが現状であり、供給量は少なく、小
人症の治療用としても充分な量とはいえない。

ＧＨは前記のとおり脳下垂体ホルモンの１種であり、甲
状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）や黄体形成ホルモン（ＬＨ
）などと同様に視床下部の支配を受けている。視床下部
からそれぞれの脳下垂体ホルモンの分泌を特異的に促す
遊離ホルモン（または放出ホルモン）（以下、ＲＨと略
す）が分泌されていることが知られており、たとえＧａ
Ｔ８ｎでは甲状紳刺激ホルモン遊離ホルモン（ＴＲＨ）
が、ＬＨではＬＨ（−Ｒ）Ｉが単離同定されている。

ＧＭに対するＲＨ，すなわちＧＨ−ＲＨについては、シ
ャリ−が１９７１年、ブタの視床下部組織から１０個の
アミノ酸で構成されるペプチドがＧＨ−ＲＨであると発
表したが、その後の研究によりＧＭ−ＲＨとは何ら関係
のない物質であることが判明した。

それ以後、ＧＨ−ＲＨと詔められろ物質は見出されてい
ない。

それとは別に、非特異的な作用でわずかにＧＭ□ １を遊離せしめる物質が知られている。たとえばアルギニ
ン、グルカゴン、ＴＲＩ（などはそのＷ＆楢は不明であ
るがＧ）Ｉを遊離させる作用を有するといわれている。

そのほかプロスタグランジン１、テオフィリン、環状ア
デニル酸などもＧＭを遊離させる作用を有するといわれ
ているが、それらの作用は原理的にも特異的ではないこ
とは明らかである。また、神経伝達ペプチドなども多少
ＧＭを遊離させる作用を有していると考えられているが
、これとても特異的に作用するとは考えられていない。

一方、視床下部に存在するＲＨに種特異性がないことが
、ＴＲＨやｈａ−ＲＨにおける研究の結果から明らかに
されている。

本発明者は叙上の知見に基づき鋭意研究を重ねた結果、
サケの脳下垂体の抽出物から視床下部由来の新規なペプ
チドを単離し、該ペプチドが特異的に他の動物のＯＨを
遊離せしめることを見出し、本発明を完成した。

すなわち本発明は、構造式（Ｉ）：Ｈ−Ａｍｐ　−？ｈｒ　−１ｉｓｔ　−Ａｒｇ　−ｃｙ
ｓ　−Ｍｅｔ　−ｖａｌ−Ｇ／ｙ　−Ａｒｇ　−Ｖａ／
　−Ｔｙｒ　−Ａｒｇ　−Ｐｒｏ　−（！ｓ　−Ｔｒｐ
　−Ｇ／Ｉｔ　−’ＶｓＬｌ　−ＯＨ（Ｉ）で示され、
つぎの物性を有するペプチドまたはその塩に関する。

（リ　紫外＃ｉ！吸収スペクトル：　Ｍａｘ　２８０ｍ
ｍ（２）　　エールリッヒ反応、坂口反応およびパラり
反応にいずれも陽性（８）塩基性（４）水、メタノールおよび酢最に溶解、酢膳エチル、
酢酸ブチル、エチルエーテル、ヘキサン、石油エーテル
、ベンゼンおよび々ロロホルムに難溶（５）白色の粉末なお、本明細書中の各略号は、それぞゎつぎのアミノ酢
を示す。

Ａｓ＋ｐ　：アスパラギン酸Ｔｈｒ　：スレオニンＭｅｔ　：メチオニンＡｒｇ　：アルギニン０７ｓ　ニー＞シスチンｖＩ！Ｌｌ：バリンａｔｙ　ニゲリシンＴｙｒ　：チロシンＰｒｏ　ニブロリンＴｒｐ　：　）リプトファンＧ／１１　ｉグルタミンＧ／ｕ　：グルタミン酸Ａｓｘ　：アスパラギン＊ｔたはアスパラギンＱ／ｘ　
：グルタ虐ン＃またはグルタミン本発明のペプチドの塩
としては、たとえば塩酸、硫帛、酢酸、乳階、タエン酸
、シュウ醗、７マール醗、マレイン酸などとの酸付加塩
があげられる。

本発明のペプチドは、サケの脳下垂体から抽出すること
によりうろことができる。なお、サナの脳下垂体の構造
は哺乳動物と−は異なり、視床下部が脳下垂体の中に入
りこんでいるため視床下部のみを採取することはできな
い。したがって脳下垂体と視床下部の両者め採取物から
抽出を行なわなけわ・ばならない。上って本明細書にお
いては「サケの脳下垂体」を視床下部を含むものとして
用いている。

本発明のペプチドは、サケから採取され凍結されている
新鮮なサケの脳下垂体を７七トンなどで抽出し、塩析後
、その上澄液をゲル沖過クロマトグラフィーやイオン交
換りｐマドグラフィーにより単離し、逆相型嶌連液体゛
′クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＯと略す）によっ
て精製することができる。えられたペプチドに、たと゛
えば希塩酸などの無ｍｓを加えて凍結乾燥または結〃化
することなどによって容易に酸付加塩の形にすることが
できる。・本発明のペプチドはサケの視床下部由来のＧＨ−ＲＨで
あり、ＧＨを特異的に遊離せしめる作用ヲ有シ、シかも
種特異性を有さない。したがって該ペプチドを有効成分
とするＧＨ放出ホルモン剤は、ヒトの小人症や創傷の治
療に利用できるのみならず、種特異性がないため家畜の
成長促進用として用いるととができる。

本発明のベプチ゛）ドのような生理活性ペプチドは一般
に生体内に受□容体があり、その受容体に特異的に作用
して特異的な反応番惹き起すものであり、Ｇｌ（−ＲＨ
も受容体のある脳下垂体では反応してＧＨを遊離させる
が、受容体のない他の組織では無作用である。またＬ−
アミノ酸のみからなる本発明のペプチドは生体内の各種
プロテアーゼで順次分解されてしまうため作用が持続せ
ず、したがって毒作用は現われない。

一方、ペプチドでこの程度の大きさのものは抗原性をも
たないから、繰返し投与しても抗体産生を惹き起さず、
アナフイラキシーシ冒ツタを起すこともない。

投与量はＧＭよりも少量で効果を発揮し、ｕｐＡｇオー
ダーでその効果が現われる。またＧＨの投与の例におい
てみられるように投与量を増加すると効果もあがると考
えら、れ、ｍｐ／’ｋｐオーダーまでの投与も可能であ
り、通常１ｎｐ／’ｋｇ〜１０リハｐが適当である。

投与方法はペプチドで一般に採用されている注射（静脈
内、筋肉内、皮下）による方法でよい。経口投与では消
化管中で分解されて活性を失なうため適当ではないが、
消化管中で分解を受けないような製剤的工夫、たとえば
リボソーム中に入れる（マイクルカブ七ル）などの処方
によって経口投与も可能になる。その峰か直腸、舌下、
鼻などの消化管以外の粘膜から吸収させる投与方法も採
用でき、そのばあい串刺、舌下錠、点鼻スプレーなどに
製剤すればよい。賦形剤としては本発明のペプチドを分
解しないもので通常用いられているものが用いられろ。

つぎに実施例および試験例をあげて本発明を説明する。

実施例雌性シロサナから採取した新鮮な脳下垂体約１００ｐを
３５％塩酸とア七トン（１＋２８）の混合液４００鳳！
で抽出し、ついで８０％ア七トン水溶液２８０ｍＢで抽
出した。それぞれえられた抽出液を合わせて１０１のア
七トンに攪拌しながら加えて沈殿させ、酸性ア七トン沈
殿物５．０．をえた。この沈殿愉を水９０ｍｔに加えて
ｐＨ３，０としく若干ずれたときは０．１Ｎ−水増化ナ
トリウムまたは０．ＩＮ−塩酸で調整する）、これに１
０ｍｌの飽和食埃水を加えて塩析したのち沈殿を遠心分
離し、上ｉ％１をゲル濾過クロマトグラフィー（セファ
デックスＧ２５（Ｍ）、５．５ｏｍ　Ｘ６８ａｍのカラ
人使用）に付し、０．１Ｍ酢酸で溶出した（７ラクシヨ
ン量、１０ｍ／／７ラクシヨン）。そのカラムクロマト
グラムを第１図に示す。第１図に示すＱｌ）分画３２０
ｍｚをＵＭ−２メンブランフィルタ−（アミコン社製）
を用いて脱塩したのち凍結乾燥して白色の粉末ｉ　３９
ｙｔ＋、をえた。えられた粉末をイオン交換クロマトグ
ラフィー（ＯＭ−セルロース、１．６ｃｍＸ６５　、Ｏ
ｃｍのカラ人使用）に付し、酢酸アンモニウム緩衝液（
０，０ＩＮ　５ｐＨ４，６）　５００ｍ／　ニ対シテ酢
醗アンモニウム緩衝液（０，１Ｍ　Ｎ　ｐＨ７−０）を
滴下してグラジェント溶出した。そのイオン交換クリマ
ドグラムを第２図に示す。第２図に示す（８）分１ｉ１
１１０１１４を凍結乾燥して［ＧＨ−ＲＨ１，５りをえ
た。

見られた粗Ｇ）Ｉ−ＲＨをＨＰＬＯ（ファインパックシ
ル　０１８．０．４６！ｌ　Ｘ　２．５Ｑ、−のカラム
（日本分光゛工業■製）使用、０．０１Ｍ酢酸アンモニ
ウム緩衝液（ｐＨ５，０）で調整）に付し、イソプリパ
ノールを用いて直線グラディエンド（イソプロパツール
濃度１５％→４５％）溶出を行なった（フラクション量
、１ｍ／／フラクション）。その溶出曲線を第３図に示
す。なお、ＨＰＬＯはつぎの条件で行なった。温度：室
温流量：１ｍ１Ｚ分。第３図に示すη）分画１３．３ｍ
／を凍結乾燥して純度９９％以上の本発明のペプチド０
．５１ｍｐをえた。

えられたペプチドの物性はつぎのとおりであった。

物質の形状：白色の粉末分　子　量：５００〜３０００　（ゲル沖過法による）
呈色反応：エールリッヒ反応■、坂口反応■、パウリ反
応■ 溶　解　性：水、メタノールおよび酢酸に溶解、酢酸エ
チル、酢ｉ１フチル、エチルエーテル、石油エーテル、
ヘキサン、ベンゼンおよびクロロホルム仁難溶塩基性、中性、所性の区別：塩基性 ■１１゜紫外線吸収スペクトル：第４図に示す。

測定は０．１Ｎ−酢酸中、０　、１６６ｍＭの濃度で行
なった。

つぎにえられたペプチド５００μ９を蒸留水５１Ｔｌ／
に溶かし、０．１ｍ−塩酸数滴を茄えて階柱とし、これ
を凍結乾燥して本発明のペプチドの塩酸塩を５００μ、
えた。

つｅに見られたペプチドのアミノ酸組成およびアミノ醗
配列を調べた。

分析例１　〔酸加水分解によるアミノ市組成〕実施例で
えられたペプチドを６Ｎｍ酸中で１１０°０１８時間加
水分解反応に付したサンプルをＩＯ４４ＱＱアミ７市自
動分析器（ＬＫＢバイオクロム社製）を用いてアミノ醗
分析をした。その結果をつぎに示す。

アミノ酸実測値　　　　　理論値ハｘ　　　　　　　１．０　　　　　　　１Ｔｈｒ　　
　　　　　　　　　　　１．０　　　　　　　　　　　
　　　１Ｇ／ｕ　　　　　　　１．１　　　　　　　１
１．２Ｐｒｏ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　ＩＧ／ｙ１．１　　　　　　　１０ｙｓ　　　　　　　１．９　　　　　　　２Ｖａ／　
　　　　　　５．ＯＳＭｅｔ　　　　　　　　　２　、０　　　　　　　　　
２Ｔ’ｆｒ　　　　　　　　　　Ｏ、８１Ａｒｇ　　　
　　　　　　２　、５　　　　　　　　　　３Ｔｒｐ　
　　　　　　　　　１．２　　　　　　　　　　　ｌな
お、　Ｏｙｓの実測値は過ギｉｌ醗化で決定した。

分析例２［Ｎ末端アミノ醗〕タンシル法（ハートレイら、バイオキミヵ・バイオフイ
ジカ・アクタ、２１巻、第５８頁（１９５６年））にし
たがって実施例でえられたペプチドのＮ末端アミノ酸を
調べた結果、Ａｓｘであることが判明した。

分析例３（Ｏ末端アミノ酸〕、ヒドラジン分解法（赤堀ら、ブレチン・ケミカル・ソ
賃イエティ・ジャパン、２５看、第２１４　＠（１９５
２年）にしたがって実施例でえられたペプチドのＯ末端
アミノ酸を調べた結果、Ｖａ／であることが判明した。

分析例１〜３がら、本発明のペプチドは１１１１１１７
個の７ミノ醗からなるヘブタデカペプ餐ドであり、Ｎ末
端アミノ酸はＡｓｘ５Ｑ末端はＶａ／てあり、理論上の
分子量が２２１０であることが明らかになった。

分析例４〔アミノ酸配列〕実施例で見られたペプチド６６μワ（約３０ｎモル′）
を用い１エドマン−ダンシル法（クレーら、バイオケミ
カル・ジャーナル、８９Ｉ？、第３７９頁（１９６５年
））にしたがってＮ末端側からアミノ酸の配列を調べた
。その結果はつぎのとおりであった。

Ｈ−Ａ！ＩＸ　−Ｔｈｒ　−Ｍｅｔ　−Ａｒｇ　−ＯＨ
。

Ｈ−Ｍｅｔ　−Ｖｈｌ　−Ｇ／ｙ　−Ａｒｇ　−Ｖｈｌ
　−Ｔｙｒ　−Ａｒｇ　−Ｐｒｏ　−ＯＲ。

Ｈ−Ｇ／Ｘ　−Ｖｈｌ　−ＯＨ分析例５〔アミノ酸配列〕実施例で見られたペプチド８８μ、（約４ｏηモル）を
カルボキシメチル化したものを用いて、材木らによる７
０レツセン・イソシアネート法（アグリカルチエラル・
アンド・バイオロジカル・ケミストリー、４４巻、第１
５５９〜１５６３頁（１９７８年））にしたがってＮ末
端アミノ酸の配列を調べた。

その結果はつぎのとおりであった。

なお、材木らによる７０レツセン・イソシアネート法は
、微量のサンプルでアミノ酸配列を決定するのにとくに
信頼のおける分析法である。

Ｈ−Ａｓｐ　−Ｔｈｒ　−Ｍｅｔ　−Ａｒｇ　−Ｏｙｓ
　−Ｍ＠ｔ　−Ｖｈｌ　−Ｇ／７−　Ａｒｇ　−Ｖｈｌ
　−Ｔｙｒ　−Ａｒｇ　−Ｐｒｏ　−Ｏｙｓ　−Ｔｒｐ
　−Ｃ）ｌ！′１−　Ｖａ７＋　−ＯＨ分析例４〜５お
よび分析例１〜３より、本発明のペプチドは分析−５で
決定されたアミノ酸配列を有していることがわかった。

つぎにキモトリプシン消化およびトリプシン消化によっ
てそれぞれえられた酵素分解物のアミノ酸組ｒ、Ｎ末端
アミノ酸およびアミノ酸配列を調べ、分析例５で決定し
たペプチドのアミノ酸配列を確認した。

分析例６〔キモトリプシン消化〕実施例でえられたペプチド１１０りを０．２ＭｒｃＦ、
１！？アンモニウム緩衝−液（ｐ）（８，０）中で３７
００にて１時間キモトリプシン畢化した（キモトリプシ
ン・基質＝１：２５０、重攪比）。えられた消化液を１
（ＰＩＩＯ（イソプロパツール濃度を５Ｈ２Ｏ％に変え
て溶出を行なったほかは実施例に記載の条件）に付した
。その溶出曲線を第５図に示す。第５図に示す（０−２
）、（σ−４）および（０−１５）分画をそれぞれ分析
例１および２と同様にしてそれらのアミノ酸組成とＮ末
端アミノ酸を調べた。結果をつぎに示す。

（（＋−２）分画アミノ酸実測値　　　　　理論値Ａｓｘ　　　　　　　　１．０　　　　　　　１Ｔｈｒ
−１，０１Ｍｅｔ　　　　　　　　１．０　　　　　　　１Ａｒｇ
　　　　　　　　Ｏ、６１Ｎ末端アミノ酸：　Ａｓｘ（０−４）分画アミノ酸実測値　　　　　理論値Ｇ／７　　　　　　　１．０　　　　　　　１Ｖａｅ２
．２　　　　　　　２ ’ｆ７ｒ　　　　　　　　０　、９　　　　　　　１Ａ
ｒｇ　　　　　　　　Ｏ、８１に末端アミノ酸：　Ｖｈｌ（０−１５）分画アミノ酸実測値　　　　理論値Ｇ／Ｘ　　　　　　　１．Ｏ１Ｐｒｏ　　　　　　　１．２　　　　　　１Ｃｙ日　　
　　　　１．８２Ｖｈｌ　　　　　　　１．０　　　　　　１Ｍθｔ　　
　　　　　　　　　　　Ｏ，９１ｋｇ　　　　　　　１
．３　　　　　　１Ｔｒｐ　　　　　　　　　　　　　
＋　（工ｉルリッヒ猷声紋神舒玲礪ψした。）Ｎ末端ア
ミノ酸：　Ａｒｇつぎに（０−２）および（０−４”）分画はそのままで
、（０−１？ｉ）分画はカルボキシメチル化したのち、
それぞれ分析例４と同様にしてそれらのアミノ酸配列を
調べた。なお、Ｔｒｐの同定はチオグリコール酸による
加水分解を用いたエドマン−ダンシル法でＤＮ８−Ｔｒ
ｐとして同定した。また、Ｃ！ｙｓ　１′ＩＤＮ５−Ｃ
ｍ−０ｙｓとして同定した。結果をつぎに示°４、（Ｃ
−２）分画Ｈ−Ａｒｘ−Ｔｈｒ−Ｍｓｔ−Ａｒｇ−ＯＨ（０−４）
分画Ｈ−Ｖｈｌ　−Ｇ／ｙ　−Ａｒｇ　−Ｖｈｌ　−Ｔａｒ
　−ＯＨ（ｏ、１５　）分画Ｖａｌ　−ＯＨ分析例７〔トリプシン消化〕実施例でえられたペプチド８８μｇ（約３０ｎモル）を
用いて０．２Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ８，０）
中で３７°Ｃにて４時間トリプシン消化した（トリプシ
ン：基質＝ｉ：ｓｏ、重量比）。見られた消化液をＨＰ
ＬＯ（イソプロパツール１１度を→５０％に変えて溶出
を行なったほかは実施例に記載の条件）に付した。その
溶出曲線を第６図に示す。

第６図に示す（Ｔ−６）、（Ｔ−８）　、（Ｔ−２６）
および（Ｔ−２８）分画をそれぞれ分析例１および２と
同様にしてそれらのアミ／、、、、酸・、：組成および
Ｎ＊端アミノ酸を調べた。結果はつぎのとおりであった
。

（Ｔ−６）分画アミ７市実測値　　　　　理論値Ａｓｘ　　　　　　　　１．０　　　　　　　１１ｒｈ
ｒ０．９１Ｍｅｔ　　　　　　　　１．０　　　　　　　１Ａｒｇ
１．０１Ｎ末端アミノ酸：　Ａ８Ｘ（Ｔ−８）分画７６′酬　　　　実測値　　　　　ｆｌＬ論使Ｖ酊　　
　　　　　　　　１・３１Ｔｙｒ　　　　　　　　　　　１−”　　　　　　　　
　　　１Ａｊ″ｇｉ、ｏ　　　　　　　　　　　ｉＮ末
端アミノ酸：　Ｖａｌ（Ｔ−２６）分画アミノ酸　　。

、１、　　実測値　　　　　理論値Ｇ／Ｘ　　、ｌ・１ｉ１”、　　　ｏ°９１Ｐｒｏ　　
、、　　、、　　”Ｉ’・　　　　　　１．３　　　　
　　　　　　１１１１ゝＯｆｆ　　　　　　　　　　　　１．０　　　　　　　
　　　　１０ｙｓ１．６２ＶＢ、ｌ　　　　　　　　　　　　１’９　　　　　　
　　　　　２−ｔ　　　　　　　　　　　　　ＣＯＩＡ
ｒｇ　　　　　　　　　　　　　Ｏ，９１Ｔｒｐ　　　
　　　　　　　　　　＋（エールリッ改樺代吻牡均廟阿
しへ　）翼末端アミノ＠　：　Ｐｒ。

（Ｔ−２８）分画アミノ酸実＃値　　　　　理論値Ｇ／Ｘ　　　　　　　　１．１　　　　　　　１Ｐｒｏ
　　　　　　　　１．３　　　　　　　　ＩＣｋＮ　　
　　　　　　１．３　　　　　　　１０ｙｓ　　　　　
　　　１．６　　　　　　　２Ｔｈｚ　　　　　　　　
２．７　　　　　　　３１Ｊｅｔ　　　　　　　　１．
１１Ｔｙｒ　　　　　　　　Ｏ，８１ムｒｇ　　　　　　　　２．（１２Ｔｒｐ　　　　　　　　　　　　　＋　（エールリッヒ
試庫ｉ陣崎均廟曙しな、）Ｎ末端アミノ酸：　Ｖａｌつぎに（Ｔ−６）、（’ｌ’−８）および（Ｔ−２６）
分画はそのままで、（Ｔ−２８）分画はカルボキシメチ
ル化したのち、それぞれ分析例４と同様にしてそれらの
アミノ酸配列を調べた。結果はつぎのとおりであった。

（Ｔ−６）分画Ｈ−Ａ！ＩＸ　−Ｔｈｅ　−Ｍｅｔ　−Ａｒｇ　−ＯＨ
（Ｔ−８）分画Ｈ−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−Ａｒｇ　−ＯＨ（Ｔ−２６）
分画（Ｔ−２８）分画分析例６および７の結果は、分析例５で決宇された本発
明のペプチドのアミノ醐配列と何ら矛盾せず、その配列
が正しいことは明らかである０処方例〔注射液〕本発明のペプチド０．１ｍｐとグリシン５０町を滅菌精
製水５Ｉａｌに溶解したものをバイヤルビン１０本に分
注し、凍結乾燥に付して保存する。使用時に滅菌した生
理食塩水を加えて注射液とする。

試験例カラム（セファデックスＧ２５を直径１論ｍの注射器の
シリンダーに０．３〜０．５ｍ／充填し、ａ、１ｍｍ小
面血清含むクレプスリンガ−緩衝液を０．５ｍ１１分で
流す）の上端にウィスター系雄性ラットから採取した脳
下垂体前葉の細片を置き、対照液（上記のタレブスリン
ガー緩衝液）、ＴＲＨ（２μｇ／ｍｌ　）溶液および実
施例でえられた本発明のペプチド（２μ９／！ＩＩ／）
溶液をこの順序で１ｍｒｆつ展開し、流出液をフラクシ
ョンコレクターで１ｍ／ずつ分画し、各７ラクシヨンご
とに抗うツ）ＧＨ抗体（Ｎ工Ｈ標品）を用い妃・ニラジ
オイムノアッセイ法で放出されるラットＧＨの□量を測
定した。

結果を第１表に示す。

第　　　２　　　　表第１表から明らかなごとく、本発明のペプチドは対照液
に比、ぺて約５倍のＧＨの放出が訃められる。また非特
異的なＧＨ−ＲＥ様の作用があるとされているＴＩ’ｊ
Ｈに比してＧＨの放出量はほぼ同程度であるが、放出様
式が特異的であった。これはＴＲＨのばあい幅の、広い
放出を示すのに対し、本発明のペプチドでは放出が幅の
狭いものであることかられかる。

以上の結果から、禾発明のペプチドはサケのＧ）（−Ｒ
Ｅであり、異種”’ｉ動物の。・の放出を特異的に促進
する作用を有することは明らかである。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例におけるゲル濾過りｐマドグラフィーに
よって見られたカラムクロマトグラム、第２図は実施例
におけるイオに交換クロマトグラフィーによってえられ
たイオン交換クロマトグラム、第３Ｅ！Ｊは実施例にお
ける１（ＰＬＯの溶出曲線、第４図は本発明のペプチド
の紫外線吸収スペクトルチャート、第５図は分析例６に
おけるＨＰＬ（！の溶出曲線、第６図は分析例７におけ
るＨＰＬＯの溶出曲線である。手続補正書（自発）昭和５８年１月３１日１１７７件の表示昭和５７年特許願第　１６６９１　　　号２発明の名称ペプチドおよびそれを有効成分とするホルモン剤３補正
をする者４代理人〒５４０：５補正の対象（１）　　明細書の「特許請求の範囲」の欄（２）明細
書の「発明の詳細な説明」の欄６補正の内容（１）　　明細書の「特許請求の範囲」を別紙［−補正
された特許請求の範囲」のとおり補正する。（２）明細書５頁１９行のｒＧＩｎＪをｒＧｌｕＪと補
正する。（８）同１３頁１６行のｒＧＩ　ｕＪをｒＧＩ　ＸＪと
補正する。（４）　　同１４頁７〜９行の「ハートレイら・・・・
・・・１９５６年」を「グレーら、バイオケミカル・ジ
ャーナル、８９−巻、第３７９頁（１９６３年」と補正
する□（５）同１５頁１行の１分子量が２２１０　Ｊを
［分子にが三塩階塩として２２１０Ｊと補正する。（６）　　ｒｎｌ　１５頁５　行の「を用い」を［をカ
ルボキシメチル化したも□のを用い」と補正する、１（７）　　同１５頁５〜７行の「クレーら・・・・・・
・１９６３年１を「ハートレイら、バイオキミカ・バイ
Ａフイジカ・アクタ、２１巻、第５８頁（１９５６年〜
ｊと補正する。（８）　　同１５頁１０〜１２行の［）ｌ　−ｋｓｘ　
−Ｔｈｒ　−Ｍ＠ｔ　−Ａｒｇ　−ＯＨ、Ｈ−Ｍ＠ｔ　
−ＶＢ　−０ｆｆ−Ａｒｇ　−ＶＩＬ／　−Ｔｙｒ　−
Ａｒｇ　−Ｐｒｏ　−圓、Ｈ−ＧｔＸ−Ｖａ／　−ＯＨ
Ｊをと補正する。（９）　　同１６頁５行のｒＧｚｎｌをｒＧＩｕＪと補
正する。７添付書類の目録（１）補正された特許請求の範囲　　　　　　　　　　
　１通補正された待ｒｆＩＴ＃求の範囲ｒＩ　　ｍｌ造式（１）：でボされ、つぎの物性を′有するペプチドまたはその福
。（１）　　紫外Ｓｔａ収スペクトル？　Ｍａｘ　２８０
ｎｍ（２）　　エールリッヒ反応、坂口反応およびパウ
リ反応にいずれも陽性（３ン　塩基性（４）　　水、メタノールおよび酢酸に溶解、酢酸エチ
ル、酢酸ブチル、エチルエーテル、ヘキサン、石油エー
テル、ベンゼンおよびり田ロホルムにｌｌ１ｌｆ＠（５）　白色の粉末２　　Ｎ６式（１）：％式％（で示され、つきの物性ｔ−ｉ’ｖるペプチドまたはその
塩を有効成分とする成長ホルモン放出ホルモン剤。（１）紫外線吸収スペクトル：　Ｍａｘ　２８０ｎｍ（
２）エールリッヒ反応、坂口反応およびパウリ反応にい
ずれも陽性（３）　　塩基性（４）水、メタノールおよび酢酸に溶解、酢酸エチル、
酢酸ブチル、エチルエーテル、ヘキサン、石油エーテル
、ベンゼンおよびクロロホルムに離溶（５）白色の粉末」以　　ト

Claims

【特許請求の範囲】１　構造式（１）：で示され、つぎの物性を有するペプチドまたはその塩。（１）　　紫外線吸収スペクトル：　Ｍａｘ　２８０Ｔ
１ｍ（２）　　エールリッヒ反応、坂口反応およびパウ
リ反応にいずれも陽性（８）塩基性（４）水、メタノールおよび酢酸に溶解、酢酸エチル、
酢酸ブチル、エチルエーテル、ヘキサン、石油エーテル
、ベンゼンおよびクロ四ホルムに難溶（５）白色の粉末２　構造式（１）：で示され、つぎの物性を有するペプチドまたはその塩を
有効成分とする成長ホルモン放出ホルモン剤。（１）　　紫外線吸収スペクトル：　Ｍｈｘ２Ｂ０ｎｍ
（２）　　エールリッヒ反応、坂口反応およびパウリ反
応にいずれも陽性（３）塩基性（４）水、メタノールおよび酢酸に溶解、酢酸エチル、
酢酸ブチル、エチルエーテル、ヘキサン、石油エーテル
、ベンゼンおよびりｐロホルムに難溶（５）白色の粉末