JPH1175827A - 新規なキトサナーゼ生産菌とキトサナーゼの製造方法 - Google Patents
新規なキトサナーゼ生産菌とキトサナーゼの製造方法Info
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- JPH1175827A JPH1175827A JP23836397A JP23836397A JPH1175827A JP H1175827 A JPH1175827 A JP H1175827A JP 23836397 A JP23836397 A JP 23836397A JP 23836397 A JP23836397 A JP 23836397A JP H1175827 A JPH1175827 A JP H1175827A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は、医薬品などに有用な低分子化キト
サン又はキトサンオリゴ糖の製造に用いて好適な高活性
キトサナ−ゼを生産するアルスロバクタ−属に属する新
規なキトサナ−ゼ生産菌と、この新規なキトサナ−ゼ生
産菌を用いたキトサナ−ゼの製造方法に関するものであ
る。 【構成】 アルスロバクタ−（Arthrobacter）属に属す
るキトサナ−ゼ生産菌Ａ１株（微工研菌寄第16197 号）
と、キトサナ−ゼ生産菌Ａ２株（微工研菌寄第16198
号）と、キトサナ−ゼ生産菌Ａ３株（微工研菌寄第1619
9 号）と、これらのキトサナ−ゼ生産菌のうち少なくと
も１種を培養し、その培養物からキトサナ−ゼを分離採
取することを特徴とするキトサナ−ゼの製造方法であ
る。
サン又はキトサンオリゴ糖の製造に用いて好適な高活性
キトサナ−ゼを生産するアルスロバクタ−属に属する新
規なキトサナ−ゼ生産菌と、この新規なキトサナ−ゼ生
産菌を用いたキトサナ−ゼの製造方法に関するものであ
る。 【構成】 アルスロバクタ−（Arthrobacter）属に属す
るキトサナ−ゼ生産菌Ａ１株（微工研菌寄第16197 号）
と、キトサナ−ゼ生産菌Ａ２株（微工研菌寄第16198
号）と、キトサナ−ゼ生産菌Ａ３株（微工研菌寄第1619
9 号）と、これらのキトサナ−ゼ生産菌のうち少なくと
も１種を培養し、その培養物からキトサナ−ゼを分離採
取することを特徴とするキトサナ−ゼの製造方法であ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医薬品などに有用な低
分子化キトサン又はキトサンオリゴ糖の製造に用いて好
適な高活性キトサナ−ゼを生産するアルスロバクタ−属
に属する新規なキトサナ−ゼ生産菌と、この新規なキト
サナ−ゼ生産菌を用いたキトサナ−ゼの製造方法に関す
るものである。
分子化キトサン又はキトサンオリゴ糖の製造に用いて好
適な高活性キトサナ−ゼを生産するアルスロバクタ−属
に属する新規なキトサナ−ゼ生産菌と、この新規なキト
サナ−ゼ生産菌を用いたキトサナ−ゼの製造方法に関す
るものである。
【０００２】
【従来技術】キトサンはカニ、エビ等の甲殻中に含まれ
るアミノ糖からなる多糖類の１種であるキチンの脱アセ
チル化物である。当該キトサンは、以前より、金属の吸
着剤、生分解性フィルム、有機物の凝固剤、酵素などの
固定化用担体等多方面で使用されているが、近年、キト
サンには、血中コレステロ−ルの上昇抑制効果、免疫力
の向上、血圧降下作用等のさまざまな生理作用を有する
ことが判明し注目されている。又、キトサンの低分子化
物や、キトサンオリゴ糖についても抗腫瘍性や、医薬、
食品、化粧品等、様々な分野での応用が脚光を浴びてい
る。さらに、キトサンの各種重合度の低分子化物は、水
に可溶でキトサン特有の収斂味がないので、食品への添
加が容易であり、種々の生理活性効果が期待されてい
る。
るアミノ糖からなる多糖類の１種であるキチンの脱アセ
チル化物である。当該キトサンは、以前より、金属の吸
着剤、生分解性フィルム、有機物の凝固剤、酵素などの
固定化用担体等多方面で使用されているが、近年、キト
サンには、血中コレステロ−ルの上昇抑制効果、免疫力
の向上、血圧降下作用等のさまざまな生理作用を有する
ことが判明し注目されている。又、キトサンの低分子化
物や、キトサンオリゴ糖についても抗腫瘍性や、医薬、
食品、化粧品等、様々な分野での応用が脚光を浴びてい
る。さらに、キトサンの各種重合度の低分子化物は、水
に可溶でキトサン特有の収斂味がないので、食品への添
加が容易であり、種々の生理活性効果が期待されてい
る。
【０００３】キトサンを低分子化するには、酸、酵素を
用いることが一般的だが、製品の品質の安定性、副反応
の防止などの点から酵素法が有効である。キトサナ−ゼ
を生産する微生物としてはこれまで例えば、バチルス・
パミルス(Bacillus pumilus)BN-262（特開昭６３−６３
３８２号公報）や、バチルスサーキュランス(Bacillus
circulans )LCC-1株（特公平７−１６４０２号公報）
や、バチルス(Bacillus ）属No.7- 株（特公平２−２９
３１１号公報）や、バチルス(Bacillus ）属PI-7S 株
（特開平１−２４７０８１号公報）や、アルカリゲネス
(Alcaligenes)MHK-1株（特開昭６２−２０１５７１号公
報）や、シュードモーナス(Pseudomonas)H-14 株（特公
平５−２３７４０号公報）、アスペルギルスフミガ−ツ
ス(Aspergillus fumigatus) 突然変異株（特開平８−３
２２５５４号公報）などの菌株がみとめられている。
用いることが一般的だが、製品の品質の安定性、副反応
の防止などの点から酵素法が有効である。キトサナ−ゼ
を生産する微生物としてはこれまで例えば、バチルス・
パミルス(Bacillus pumilus)BN-262（特開昭６３−６３
３８２号公報）や、バチルスサーキュランス(Bacillus
circulans )LCC-1株（特公平７−１６４０２号公報）
や、バチルス(Bacillus ）属No.7- 株（特公平２−２９
３１１号公報）や、バチルス(Bacillus ）属PI-7S 株
（特開平１−２４７０８１号公報）や、アルカリゲネス
(Alcaligenes)MHK-1株（特開昭６２−２０１５７１号公
報）や、シュードモーナス(Pseudomonas)H-14 株（特公
平５−２３７４０号公報）、アスペルギルスフミガ−ツ
ス(Aspergillus fumigatus) 突然変異株（特開平８−３
２２５５４号公報）などの菌株がみとめられている。
【０００４】上記従来のキトサナ−ゼ生産菌は、コス
ト、培養日数、効率において満足するものではないう
え、キトサナ−ゼの活性においても十分に満足できるも
のではなかった。
ト、培養日数、効率において満足するものではないう
え、キトサナ−ゼの活性においても十分に満足できるも
のではなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする問題点】本発明は、従来のキ
トサナ−ゼ生産菌が生産するキトサナーゼとは異なる性
質を有し、低分子化キトサンの製造に好適な高活性のキ
トサナ−ゼを短時間に高収率で得られるようにするのが
目的である。
トサナ−ゼ生産菌が生産するキトサナーゼとは異なる性
質を有し、低分子化キトサンの製造に好適な高活性のキ
トサナ−ゼを短時間に高収率で得られるようにするのが
目的である。
【０００６】本発明者は、上記目的を達成するため、キ
トサナ−ゼを生産する微生物を自然界より広く検索した
結果、カニ・エビ加工工場の排水等から、キトサナーゼ
活性の高い細菌を見出し、そのなかから３株を分離し、
系統分類学的検討を行った。その結果、当該分離した菌
株は、アルスロバクタ−属の新種でキトサナ−ゼを多量
に生産し、かつ当該キトサナ−ゼが高活性を有すること
を見出した。本発明者は、この新しく見出したキトサナ
−ゼ生産菌と新しい知見に基づいて本発明を完成したも
のである。
トサナ−ゼを生産する微生物を自然界より広く検索した
結果、カニ・エビ加工工場の排水等から、キトサナーゼ
活性の高い細菌を見出し、そのなかから３株を分離し、
系統分類学的検討を行った。その結果、当該分離した菌
株は、アルスロバクタ−属の新種でキトサナ−ゼを多量
に生産し、かつ当該キトサナ−ゼが高活性を有すること
を見出した。本発明者は、この新しく見出したキトサナ
−ゼ生産菌と新しい知見に基づいて本発明を完成したも
のである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】特許を受けようとする第
１発明は、アルスロバクタ−（Arthrobacter）属に属す
るキトサナ−ゼ生産菌Ａ１株（微工研菌寄第16197 号）
である。
１発明は、アルスロバクタ−（Arthrobacter）属に属す
るキトサナ−ゼ生産菌Ａ１株（微工研菌寄第16197 号）
である。
【０００８】特許を受けようとする第２発明は、アルス
ロバクタ−（Arthrobacter）属に属するキトサナ−ゼ生
産菌Ａ２株（微工研菌寄第16198 号）である。
ロバクタ−（Arthrobacter）属に属するキトサナ−ゼ生
産菌Ａ２株（微工研菌寄第16198 号）である。
【０００９】特許を受けようとする第３発明は、アルス
ロバクタ−（Arthrobacter）属に属するキトサナ−ゼ生
産菌Ａ３株（微工研菌寄第16199 号）である。
ロバクタ−（Arthrobacter）属に属するキトサナ−ゼ生
産菌Ａ３株（微工研菌寄第16199 号）である。
【００１０】特許を受けようとする第４発明は、アルス
ロバクタ−（Arthrobacter）属に属するキトサナ−ゼ生
産菌Ａ１株（微工研菌寄第16197 号）、キトサナ−ゼ生
産菌Ａ２株（微工研菌寄第16198 号）、キトサナ−ゼ生
産菌Ａ３株（微工研菌寄第16199 号）の少なくとも１種
を培養し、その培養物からキトサナ−ゼを分離採取する
ことを特徴とするキトサナ−ゼの製造方法である。
ロバクタ−（Arthrobacter）属に属するキトサナ−ゼ生
産菌Ａ１株（微工研菌寄第16197 号）、キトサナ−ゼ生
産菌Ａ２株（微工研菌寄第16198 号）、キトサナ−ゼ生
産菌Ａ３株（微工研菌寄第16199 号）の少なくとも１種
を培養し、その培養物からキトサナ−ゼを分離採取する
ことを特徴とするキトサナ−ゼの製造方法である。
【００１１】本発明で用いるアルスロバクタ−(Arthrob
acter)属に属するキトサナ−ゼ生産菌A1,A2,A3株は、工
業技術院(FERM P-16197,16198,16199)として寄託されて
いるものであり、次に示す菌学的性質を有する。以下、
特に表記の無い場合、３株とも同様の性質を示す。
acter)属に属するキトサナ−ゼ生産菌A1,A2,A3株は、工
業技術院(FERM P-16197,16198,16199)として寄託されて
いるものであり、次に示す菌学的性質を有する。以下、
特に表記の無い場合、３株とも同様の性質を示す。
【００１２】(i) 形態 大きさは2.0 ×0.5 μm 〜0.8 ×0.6 μm の多形性桿
菌。鞭毛、運動性は無い。コロニ−は無色で、肉汁寒天
培地上では光沢がある。
菌。鞭毛、運動性は無い。コロニ−は無色で、肉汁寒天
培地上では光沢がある。
【００１３】(ii)生育状態 ３．０％トリプティケ−ス・ソイ・ブロ−ス（ＢＢＬ
製）、０．５％酵母エキス及び１．５％寒天培地（pH
７．０）、３０℃、２４時間培養すると明確なコロニ−
を生じる。
製）、０．５％酵母エキス及び１．５％寒天培地（pH
７．０）、３０℃、２４時間培養すると明確なコロニ−
を生じる。
【００１４】(iii) 生理学的性質 (1) グラム染色 ：陽性 (2) 胞子 ：なし (3) 酸素に対する態度：好気性 (4) オキシダ−ゼ ：陽性 (5) カタラ−ゼ ：陽性 (6) 硝酸塩の還元 ：陰性 (7) 脱窒反応 ：陰性 (8) メチルレッド試験：陰性 (9) Ｖ−Ｐ反応 ：陰性 (10) ＯＦテスト ：陰性 (11) インド−ルの生成：生成せず。 (12) 坑酸性 ：陰性 (13) デンプンの分解 ：分解せず。 (14) ゼラチンの分解 ：分解する。 (15) ウレア−ゼ ：陽性 (16) 硫化水素の生成 ＴＳＩ培地 ：生成せず。 酢酸塩液体培地 ：生成せず。 (17) クエン酸塩の利用 Koser の培地 ：利用する。 Christensen の培地：利用する。 (18) 無機窒素源の利用 硝酸塩 ：わずかに利用する。 アンモニア塩 ：利用する。 (19) 色素の生成 ：生成せず。 (20) 集落の色調 ：特徴的色素を生成せず。 (21) 集落の周辺細胞の伸長：陰性 (22) 生育可能な温度範囲 ：７〜３５℃で生育し、１
５〜３０℃で良好な生育を示す。 (23) 生育可能なｐＨ範囲 ：Ａ１、Ａ２株はpH４．５
〜１０．５、Ａ３株は４．５〜１１で育成し、３株とも
pH５〜６で良好な生育を示す。 (24) ＮａＣｌ耐性能 ：７％以下で育成。 (25) 炭素源からの酸・ガスの生育：表１に示す。 (26) 炭素源の資化性 ：表２に示す。
５〜３０℃で良好な生育を示す。 (23) 生育可能なｐＨ範囲 ：Ａ１、Ａ２株はpH４．５
〜１０．５、Ａ３株は４．５〜１１で育成し、３株とも
pH５〜６で良好な生育を示す。 (24) ＮａＣｌ耐性能 ：７％以下で育成。 (25) 炭素源からの酸・ガスの生育：表１に示す。 (26) 炭素源の資化性 ：表２に示す。
【００１５】
【表１】炭素源からの酸・ガスの生成
【００１６】
【表２】その１．炭素源の資化性 その２．炭素源の資化性
【００１７】(iv)化学分類学的性質 (1) 細胞壁のジアミノ酸 ：Ｌ−Ｌｙｓ (2) 細胞壁のアミノ酸組成：Ｌｙｓ−Ａｌａ2 (3) グリコリル試験 ：アセチル型 (4) 細胞壁のアラビノガラクタン：なし (5) ミコ−ル酸 ：なし (6) キノン系 ：ＭＫ−９（Ｈ2 ） (7) ＤＮＡ Ｇ＋Ｃｍｏｌ％：６４％
【００１８】上記の結果と「バ−ジ−ズ・マニュアル・
オブ・システマテック・バクテリオロジー、第１巻（１
９８４年）」〔Bergey's Manual of Systematic Bacter
iology,Volume 1(1984)〕〔William & Wilkins 〕) と
「バ−ジ−ズ・マニュアル・オブ・ディタ−ミネィティ
ブ・バクテリオロジー、第９巻（１９９４年）」〔”Be
rgey's Manual of Determinative Bacteriology ,Volum
e 9(1994)〕〔William& Wilkins 〕) と照らし合わせた
結果、これらの菌株はアルスロバクタ−属の新種と考え
られる。
オブ・システマテック・バクテリオロジー、第１巻（１
９８４年）」〔Bergey's Manual of Systematic Bacter
iology,Volume 1(1984)〕〔William & Wilkins 〕) と
「バ−ジ−ズ・マニュアル・オブ・ディタ−ミネィティ
ブ・バクテリオロジー、第９巻（１９９４年）」〔”Be
rgey's Manual of Determinative Bacteriology ,Volum
e 9(1994)〕〔William& Wilkins 〕) と照らし合わせた
結果、これらの菌株はアルスロバクタ−属の新種と考え
られる。
【００１９】
【作用】次に、当該アルスロバクタ−属に属するキトサ
ナ−ゼ生産菌Ａ１株（微工研菌寄第16197 号）、キトサ
ナ−ゼ生産菌Ａ２株（微工研菌寄第16198 号）、キトサ
ナ−ゼ生産菌Ａ３株（微工研菌寄第16199 号）を用いて
キトサナ−ゼを生産する方法について説明する。
ナ−ゼ生産菌Ａ１株（微工研菌寄第16197 号）、キトサ
ナ−ゼ生産菌Ａ２株（微工研菌寄第16198 号）、キトサ
ナ−ゼ生産菌Ａ３株（微工研菌寄第16199 号）を用いて
キトサナ−ゼを生産する方法について説明する。
【００２０】先ず、キトサナ−ゼの生産に使用される培
地としては、炭素源、窒素源、無機物等より選択された
ものを適量含有する培地であれば、合成培地若しくは天
然培地等、如何なるものでも使用可能である。例えば、
市販のトリプティケ−ス・ソイ・ブロ−ス（ＢＢＬ製）
３％、酵母エキス０．５％培地でもキトサナ−ゼ生産が
可能である。如何なる培地でも、酸に溶解したキトサ
ン、又は水溶性キトサン、キチンフレ−ク、キトサンフ
レ−クを添加すれば、本キトサナ−ゼの生産量を著しく
増収することが出来る。培養温度は好ましくは２５℃〜
３０℃、pH５〜６程度である。培養時間は１〜２日間で
あり、通気撹拌培養等で培養物中にキトサナ−ゼが分泌
生産される。
地としては、炭素源、窒素源、無機物等より選択された
ものを適量含有する培地であれば、合成培地若しくは天
然培地等、如何なるものでも使用可能である。例えば、
市販のトリプティケ−ス・ソイ・ブロ−ス（ＢＢＬ製）
３％、酵母エキス０．５％培地でもキトサナ−ゼ生産が
可能である。如何なる培地でも、酸に溶解したキトサ
ン、又は水溶性キトサン、キチンフレ−ク、キトサンフ
レ−クを添加すれば、本キトサナ−ゼの生産量を著しく
増収することが出来る。培養温度は好ましくは２５℃〜
３０℃、pH５〜６程度である。培養時間は１〜２日間で
あり、通気撹拌培養等で培養物中にキトサナ−ゼが分泌
生産される。
【００２１】次に、こうして出来た培養物を濾過、ある
いは遠心分離などの操作で菌体を除いた培養液をそのま
ま粗酵素液として使用することが出来る。更に、当該粗
酵素液からキトサナ−ゼを単離する場合、通常の精製手
段、例えば、塩析法、溶媒沈殿法、電気泳動法、ゲル濾
過法、硫安沈殿法などにより、容易に高純度の標品を得
ることが出来る。
いは遠心分離などの操作で菌体を除いた培養液をそのま
ま粗酵素液として使用することが出来る。更に、当該粗
酵素液からキトサナ−ゼを単離する場合、通常の精製手
段、例えば、塩析法、溶媒沈殿法、電気泳動法、ゲル濾
過法、硫安沈殿法などにより、容易に高純度の標品を得
ることが出来る。
【００２２】本発明の菌株から生産されるキトサナ−ゼ
の理学的性質を次に示す。 作用：キトサンに作用し、これを分解する。 作用温度および最適作用温度：溶解キトサンを基質と
した場合１０〜６０℃まで作用するが、最適作用温度は
５０℃である。 熱安定性：４０℃、３０分間処理でほぼ安定で、５０
℃、３０分間処理で酵素の約６０％が失活し、７０℃、
３０分間処理により完全に失活した。 作用ｐＨ範囲および最適ｐＨ：ｐＨ３〜１０の範囲に
おいて作用し、その最適ｐＨは５である。
の理学的性質を次に示す。 作用：キトサンに作用し、これを分解する。 作用温度および最適作用温度：溶解キトサンを基質と
した場合１０〜６０℃まで作用するが、最適作用温度は
５０℃である。 熱安定性：４０℃、３０分間処理でほぼ安定で、５０
℃、３０分間処理で酵素の約６０％が失活し、７０℃、
３０分間処理により完全に失活した。 作用ｐＨ範囲および最適ｐＨ：ｐＨ３〜１０の範囲に
おいて作用し、その最適ｐＨは５である。
【００２３】
【効果】本発明のアルスロバクタ−(Arthrobacter)属.A
1,A2,A3 株は、高活性のキトサナ−ゼを多量生産しうる
新規なアルスロバクタ−属に属する細菌である。この細
菌から得られるキトサナ−ゼはキトサンを高効率で低分
子化、又はキトサンオリゴ糖に分解することが出来る。
この低分子キトサン、キトサンオリゴ糖は種々の生理作
用を有し、水溶性を示すことから、取扱い易く、様々な
物に有用である。
1,A2,A3 株は、高活性のキトサナ−ゼを多量生産しうる
新規なアルスロバクタ−属に属する細菌である。この細
菌から得られるキトサナ−ゼはキトサンを高効率で低分
子化、又はキトサンオリゴ糖に分解することが出来る。
この低分子キトサン、キトサンオリゴ糖は種々の生理作
用を有し、水溶性を示すことから、取扱い易く、様々な
物に有用である。
【００２４】
【実施例】本発明を更に実施例に基づいて詳細に説明す
るが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるも
のではない。先ず、トリプティケ−ス・ソイ・ブロ−ス
（ＢＢＬ）３％、酵母エキス０．５％の培地を調整し、
その５mlを中型試験管に分注し、滅菌した。次に保存培
地からアルスロバクタ−属、A1株(FERM P-16197)を一白
金耳接種し、２７℃で２４時間振とう培養した。本培養
は上記培地と同様のものを１００mlづつ３００ml三角フ
ラスコに分注し滅菌後、前培養液５mlを接種し、２７℃
で１〜２日間振とう培養した。尚、この際ジャ−ファ−
メンタ−などを用いて、大量調製しても良い。培養終了
後、遠心分離し、上清を０．４５μm メンブレンフィル
タ−でろ過して、凍結乾燥後、粗キトサナ−ゼとした。
るが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるも
のではない。先ず、トリプティケ−ス・ソイ・ブロ−ス
（ＢＢＬ）３％、酵母エキス０．５％の培地を調整し、
その５mlを中型試験管に分注し、滅菌した。次に保存培
地からアルスロバクタ−属、A1株(FERM P-16197)を一白
金耳接種し、２７℃で２４時間振とう培養した。本培養
は上記培地と同様のものを１００mlづつ３００ml三角フ
ラスコに分注し滅菌後、前培養液５mlを接種し、２７℃
で１〜２日間振とう培養した。尚、この際ジャ−ファ−
メンタ−などを用いて、大量調製しても良い。培養終了
後、遠心分離し、上清を０．４５μm メンブレンフィル
タ−でろ過して、凍結乾燥後、粗キトサナ−ゼとした。
【００２５】＜活性測定法＞当該粗キトサナ−ゼを適当
倍に希釈し、希釈液０．５mlに対し０．５％キトサン溶
液１．５mlを加え、３７℃で３０分間反応させた。な
お、キトサン溶液は、０．１Ｍ酢酸ナトリウムバッファ
−にキトサンを溶かしたものである。反応終了後、沸と
う水に５分浸して反応を停止させ、反応液のキトサナ−
ゼ活性を測定した。
倍に希釈し、希釈液０．５mlに対し０．５％キトサン溶
液１．５mlを加え、３７℃で３０分間反応させた。な
お、キトサン溶液は、０．１Ｍ酢酸ナトリウムバッファ
−にキトサンを溶かしたものである。反応終了後、沸と
う水に５分浸して反応を停止させ、反応液のキトサナ−
ゼ活性を測定した。
【００２６】キトサナ−ゼ活性は、試料０．５mlをガラ
ス栓付試験管にとり、アセチルアセトン試薬（アセチル
アセトン１．５mlを１．２５Ｎ炭酸ソ−ダで５０mlとす
る。）１．０mlを加えて９０℃で１時間加熱する。水冷
し、９６％エタノ−ル１０mlを静かに加え、ついでEhrl
ich試薬（９−ジメチルアミノベンズアルデヒド１．６
ｇを３０mlの濃塩酸と３０mlの９６％のエタノ−ルにと
かす。）１．０mlを加えてから撹拌混合する。混和後１
時間室温に放置し、５３０nmにおける吸光度を測定し
た。
ス栓付試験管にとり、アセチルアセトン試薬（アセチル
アセトン１．５mlを１．２５Ｎ炭酸ソ−ダで５０mlとす
る。）１．０mlを加えて９０℃で１時間加熱する。水冷
し、９６％エタノ−ル１０mlを静かに加え、ついでEhrl
ich試薬（９−ジメチルアミノベンズアルデヒド１．６
ｇを３０mlの濃塩酸と３０mlの９６％のエタノ−ルにと
かす。）１．０mlを加えてから撹拌混合する。混和後１
時間室温に放置し、５３０nmにおける吸光度を測定し
た。
【００２７】また還元糖量はグルコサミンを標準物質を
して作成した検量線から求めた。この条件において、１
μモルのグルコサミンに相当する還元糖を遊離させる酵
素量を、１単位(unit)のキトサナ−ゼ活性とする。
して作成した検量線から求めた。この条件において、１
μモルのグルコサミンに相当する還元糖を遊離させる酵
素量を、１単位(unit)のキトサナ−ゼ活性とする。
【００２８】＜酵素活性＞実施例の通りに培養後、キト
サナ−ゼ活性を測定したところ、４２．７５Ｕ／ｌであ
った。更に、上記の培地にフレ−クキトサン１％、また
は溶解キトサン０．７５％を添加し、１日間培養すると
キトサナ−ゼ活性が著しく（前者で約５０倍、後者で約
７０倍）上昇した。
サナ−ゼ活性を測定したところ、４２．７５Ｕ／ｌであ
った。更に、上記の培地にフレ−クキトサン１％、また
は溶解キトサン０．７５％を添加し、１日間培養すると
キトサナ−ゼ活性が著しく（前者で約５０倍、後者で約
７０倍）上昇した。
【００２９】本発明により、短時間で高活性のキトサナ
−ゼが得られ、３糖以上のキトサンオリゴ糖が高収率で
得られることが出来る。キトサン製造中に床などに落下
し、食品へ添加出来なくなったキトサンの有効利用とし
て、培地に添加することができ、更に、それによって高
収率のキトサナ−ゼが得られる。このことにより、キト
サン及びキトサナ−ゼ生産全体のコスト低下が出来る。
−ゼが得られ、３糖以上のキトサンオリゴ糖が高収率で
得られることが出来る。キトサン製造中に床などに落下
し、食品へ添加出来なくなったキトサンの有効利用とし
て、培地に添加することができ、更に、それによって高
収率のキトサナ−ゼが得られる。このことにより、キト
サン及びキトサナ−ゼ生産全体のコスト低下が出来る。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【書類名】 受託番号変更届
【提出日】 平成９年９月３０日
【寄託機関の名称】 工業技術院生命工学工業技術
研究所
研究所
【受託番号】 ＦＥＲＭ Ｐ−１６１９７
【受託番号】 ＦＥＲＭ Ｐ−１６１９８
【受託番号】 ＦＥＲＭ Ｐ−１６１９９
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 今村 敬 神奈川県横須賀市久里浜７丁目36番５号 株式会社ニチロ中央研究所内 (72)発明者 谷村 忠雄 神奈川県横須賀市久里浜７丁目36番５号 株式会社ニチロ中央研究所内
Claims (4)
- 【請求項１】 アルスロバクタ−（Arthrobacter）属に
属するキトサナ−ゼ生産菌Ａ１株（微工研菌寄第16197
号）。 - 【請求項２】 アルスロバクタ−（Arthrobacter）属に
属するキトサナ−ゼ生産菌Ａ２株（微工研菌寄第16198
号）。 - 【請求項３】 アルスロバクタ−（Arthrobacter）属に
属するキトサナ−ゼ生産菌Ａ３株（微工研菌寄第16199
号）。 - 【請求項４】 アルスロバクタ−（Arthrobacter）属に
属するキトサナ−ゼ生産菌Ａ１株（微工研菌寄第16197
号）、キトサナ−ゼ生産菌Ａ２株（微工研菌寄第16198
号）、キトサナ−ゼ生産菌Ａ３株（微工研菌寄第16199
号）の少なくとも１種を培養し、その培養物からキトサ
ナ−ゼを分離採取することを特徴とするキトサナ−ゼの
製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23836397A JPH1175827A (ja) | 1997-09-03 | 1997-09-03 | 新規なキトサナーゼ生産菌とキトサナーゼの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23836397A JPH1175827A (ja) | 1997-09-03 | 1997-09-03 | 新規なキトサナーゼ生産菌とキトサナーゼの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1175827A true JPH1175827A (ja) | 1999-03-23 |
Family
ID=17029084
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23836397A Pending JPH1175827A (ja) | 1997-09-03 | 1997-09-03 | 新規なキトサナーゼ生産菌とキトサナーゼの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1175827A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108728370A (zh) * | 2017-04-14 | 2018-11-02 | 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 | 一株高效产壳聚糖酶的鲑亚科肾杆菌菌株qd-01及其发酵方法和应用 |
-
1997
- 1997-09-03 JP JP23836397A patent/JPH1175827A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108728370A (zh) * | 2017-04-14 | 2018-11-02 | 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 | 一株高效产壳聚糖酶的鲑亚科肾杆菌菌株qd-01及其发酵方法和应用 |
| CN108728370B (zh) * | 2017-04-14 | 2022-05-13 | 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 | 一株高效产壳聚糖酶的鲑亚科肾杆菌菌株qd-01及其发酵方法和应用 |
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|---|---|---|---|
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20040902 |
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| A521 | Written amendment |
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| A131 | Notification of reasons for refusal |
Effective date: 20070123 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 |
|
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20070703 |