JPH11507402A

JPH11507402A - 分子的にインプリントされた粒状ポリマー及び同ポリマーのペルフロオロカーボン液中における安定化懸濁重合

Info

Publication number: JPH11507402A
Application number: JP8535755A
Authority: JP
Inventors: モスバッシュ，クラウス; メイズ，アンドリュー・ジー
Original assignee: アイジェン・インコーポレーテッド; モスバッシュ，クラウス; メイズ，アンドリュー・ジー
Priority date: 1995-05-26
Filing date: 1996-05-24
Publication date: 1999-06-29
Also published as: EP0828767A1; AU5859796A; WO1996037527A1; US5821311A; EP0828767B1; US5959050A; US5872198A; DE69629291T2; ATE246212T1; DE69629291D1

Abstract

(57)【要約】分散相として、分子インプリントの際の認識過程に必要とされる官能性モノマーとプリント分子との間の相互作用を妨げることのない、しかも粒子サイズを約5 μm未満から約 100 μmの範囲内で調製可能な、ペルフルオロカーボン液を用いることをベースとする、分子インプリントのための懸濁重合法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】分子的にインプリントされた粒状ポリマー及び同ポリマーのペルフロオロカーボン液中における安定化懸濁重合発明の分野本発明は、分子的にインプリントされた(molecularly imprinted)ポリマー支持体、及びこれら支持体の製法に関する。さらに詳述するならば本発明は、次式を有する安定化コポリマー使って行う懸濁重合法を用い、プリント分子(print m olecule)の回りに重合可能な官能性モノマーを配列させることを含む。式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1、Ｃ_nＦ_2n+1(ＣＨ₂)_rＯ-、Ｃ_nＦ_2n+1Ｏ- またはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂ Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-Ｏであり；Ｙは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-Ｏまたは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂ Ｏ)_m-で、Ｚはプリント分子であり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であってもよく；ｐは少なくとも 1 であり；ｑは 0 または正数であってもよく；ｒは 1-20、好ましくは 1 または 2 であり；ｓは 0 または 1 であり；及びｔは 0 または 1 である。本発明のポリマー支持体は、粒状形が好ましく、これはアミノ酸、アミノ酸誘導体、医薬化合物及び多糖の分離または分割を可能にする。発明の背景型取り(templating)とも呼ばれる分子インプリント(molecular imprinting)は、キラル分離に用いられており、これにはプリント分子の回りに重合可能な官能性モノマーを配列することが含まれる。これは、プリント分子と官能性モノマーとの間の水素結合、イオン対相互作用等のような非共有相互作用を利用して行うか（非共有インプリント）、またはその可逆共有相互作用によって行う（共有インプリント）。得られた錯体をさらに重合によって添合し、高度に架橋した多孔性ポリマーマトリックスとする。プリント分子を抽出すると、ポリマー内には特殊な形の部位と、原型のプリント分子に対応する官能基が残る。Ｍosbach,Ｋ.,Ｔr ends，Ｂiochemical Ｓciences，7，92-96(1994)；Ｗulff,Ｇ.,Ｔrends，Ｂiote chnology，11，85-87(1993)；及びＡndersson 等，Ｂioseparations(Ｎgo.Ｔ.Ｔ .編)，pp.383-394 のＭolecular Ｉnteractions．種々のラセミ化合物は、分子インプリントすることによって分割される。Ａnd ersson 等，Ｂioseparations(Ｎgo.Ｔ.Ｔ.編)，Ｐlenum Ｐress，pp.383-394(19 93)のＭolecular Ｉnteractions における“アミノ酸誘導体”；Ｆischer等，Ｊ．Ａm.Ｃhem.Ｓoc.，113，9358-9360(1991)における“薬剤”；Ｋempe 等，Ｊ. Ｃhromatogr.，664，276-279(1994)；Ｗulff 等，Ｊ.Ｏrg.Ｃhem.，56，395-400 (1991)における“糖類”；及びＭayes 等，Ａnal.Ｂiochem.，222，483-488(199 4)を参照。多くの場合、バセリン分割(Ｂaseline resolution)が行われている。他のキラルな固定相とは対照的に、分子的にインプリントされたポリマーの利点は、エナンチオマーの溶出順が予測可能なことである。インプリント可能な支持体はバルク重合法により製造されるが、ここでは多孔性ポリマーのブロックを製造するため、ポロジェニック(porogenic)な溶媒が用いられる。しかしバルク重合支持体は、分離カラム及び分析プロトコルに用いる際には、潰して粉砕し、篩分けして適当な粒子サイズにしなければならない。例えば、クロマトグラフィーによる測定の場合、通常 25 μm未満のポリマー粒子を用いる。しかし、バルク重合法でこのように小さな粒子を供給するためには粉砕法を用いることになり、これは満足すべきものではない。粉砕法では、不揃いな形の粒子と、過剰で望ましからざる量の“細粒”とが得られる。通常粉砕したポリマーのうち、使用可能な粒子として回収されるのは 50 パーセント(50％)未満である。一般に、不揃な粒子ではクロマトグラフィー用のカラム充填は効率よく行えず、スケールアップの段階でしばしば困難に直面することが分かっている。しかし、形の揃った粒子、例えば粒状ポリマーならば、ほとんどの場合に好ましいと言えよう。また粉砕法は、細粒を除去するための処理ステップ、すなわち沈降ステップをさらに必要とする。これは経費もかかるし、時間も浪費する。バルク重合とそれに必要な粉砕法とが、この従来法の労力を厳しく、浪費的で受け入れがたいものにしている。インプリント分子を含有しうるアクリルモノマーからビーズ(beads)を製造するため、懸濁及び分散重合法を用いようとする試みがなされてきた。理論上、これら懸濁及び分散重合法は、バルク重合に代わり得るものとされてよいはずである。しかしながら、現存の懸濁及び分散法は、比較的疎水性の高いモノマーを用いるため、連続相として水または極性の高い有機溶媒（例えば、アルコール）を用いることから、満足すべきものとは言えない。これらの溶媒は、プリント分子と特定な相互作用を持つことから、溶媒と官能性モノマーとの競合のため、ほとんどの共有及び非共有インプリント混合物とは非相溶性である。懸濁重合法では、溶媒をかなりモル過剰で用いるため、その溶媒がモノマー相を飽和させ、官能性モノマーとプリント分子との相互作用の数及び強さを著しく減少させる。さらに、酸性のモノマーは水に溶解性が高いため、恐らくモノマーのランダムな共重合及び架橋は起こらない。また水溶性のプリント分子は、水相中に分配されてしまうために失われてしまう。予想できないことではなかったが、水中で懸濁重合することにより、分子的にインプリントされたポリマービーズを製造しようとする試みは、非常にお粗末な結果しか得られなかった。Ｄamen 等，Ｊ.Ａm.Ｃhem. Ｓoc.，102，3265-3267(1980)；Ｂraun 等，Ｃhemiker-Ｚeitung，108，255-257 (1984) 官能性モノマーとプリント分子との間に安定な共有または金属キレート結合がある場合には、水性条件での使用が可能となるであろう。また完成した粒状シリカの細孔網状組織(pore network)中でインプリントすることにより、複合ビード粒子(composite beaded particles)を製造しようとする試みもなされてきた。Ｎorrlow 等，Ｊ.Ｃhromatogr.，299，29-41(1984)；Ｗul ff 等，Ｒeactive Ｐolymers，3，261-2757(1985)またはＴＲＩＭ．しかしながらこの方法は、注意深く操作することが必要とされ、さらに単位カラムにつきインプリントされたポリマーの量は、ビーズそれ自身によって必然的に減少する。Ｓellergren,Ｂ.，Ｊ.Ｃhromatogr.，673，133-141(1994)及びＳellergren，Ｂ.，Ａnal.Ｃhem.，66，1578-1582(1994)には、分子インプリントに極性溶媒混合物中での分散重合を用いたことが報告されている。この方法では、通常のビーズというよりもむしろランダムな沈降物が得られる。評価し得る結果は、高度に装填された(charged)プリント分子が得られたということのみで、これは恐らく競合する溶媒効果があったためであろう。従って、簡単で再現性があり、得られるインプリントの質に妥協することなく、さらに粉砕及び篩分け装置を必要としない分子インプリントを含む、粒状ポリマーの製法が必要とされている。また分子インプリントされたポリマーが均一であることも求められている。発明の概要本発明は、分子インプリントされたポリマー支持体、及び懸濁重合によるそれらの製造に関する。本発明による懸濁法は、分散相としてポリオキシエチレンエステル基を含むペルフルオロカーボン液を用いることによる分子インプリント法を提供する。ペルフルオロカーボン-ポリオキシエチレンエステルを含む類の化合物は、分子インプリントする時の認識過程（recognition process）で必要とされる官能性モノマーとプリント分子との相互作用を妨げない。“支持体”の粒子サイズは、安定化ポリマーの量、または撹拌の方法を変えることにより、約 2 μmから約 100 μmまでが調節が可能である。従って本発明の目的は、インプリントされたポリマーを、粒状で、しかも使用可能な物質のほぼ定量的な収率で簡単に製造しうる方法を提供することにある。本発明のもう一つの目的は、懸濁重合の過程で、官能性モノマーとプリント分子との相互作用を妨げることなく、エマルションを安定化させるフルオロカーボンコポリマーを提供することにある。さらなる目的は、官能性モノマー、架橋剤、プリント分子、開始剤及びポロジェニック溶媒のエマルションを安定化させることである。本発明のもう一つの目的は、サイズが約 2 μmから約 100 μmの分子的にインプリントされたポリマービーズを、高収率で提供することにある。本発明のさらなる目的は、低い背圧、高速拡散、さらに高い流速での優れた分離をもたらす、約 2-5 μmの小さなビーズ充填を提供することにある。これら及び他の目的及び利点は、以下の説明及び添付の図を見ることで、より明らかになるであろう。図の簡単な説明図１は、20 mlのＰＭＣ中に、1.84 gのＥＤＭＡ、0.16 gのＭＡＡ、4.2 gのクロロホルム、及び 20 mgのＡＩＢＮを乳化させて含む“標準的重合”のために加えたＰＦＰＳの量に対して、ビーズの直径をグラフに示したものである。図２ａ-２ｅは、本発明に従ってＰＭＣ中での懸濁重合により製造したビーズの走査電子顕微鏡写真である。ここではビーズをアルミニウムのペグ(pegs)上に置き、ポーラロン(polaron)Ｅ5150コーターを用いて 15 mmの金でスパッターコートした。映像はＩＳＩ 100ＡＳＥＭを用いて 25 kＶで撮った。倍率は 500× である。２(a)ＰＦ2；２(b)ＰＦ10；２(c)ＰＦ13；２(d)ＰＦ14；２(e)ＰＦ15．図３は、実施例ＰＦII の 25 cmカラムで、Ｂoc-Ｄ,Ｌ-Ｐheを分離した際のＨＰＬＣの痕跡を示したものである。条件：カラムはクロロホルム（ＣＨＣl₃）＋ 0.1％酢酸（ＡＡ）で平衡状態にした；20 μgのＢoc-Ｄ,Ｌ-Ｐheを注入し、同溶媒を用い、流速 0.5 ml/分で溶出した。クロマトグラムは 254 nmで記録した。図４ａ-４ｅは、実施例ＰＦ15（5 μmのＴＲＩＭビーズ）の 25 cmカラムで、Ｂoc-Ｄ,Ｌ-Ｐheを分離した際のＨＰＬＣの痕跡を示したものである。条件：カラムはクロロホルム＋0.25％酢酸で平衡状態にした；20 μlの移動相中の 1 mg のＢoc-Ｄ,Ｌ-Ｐheを注入し、同溶媒を用い、流速を４(a)0.5 ml/分；４(b)1 ml /分；４(c)2 ml/分；４(d)3 ml/分；４(e)5 ml/分で溶出した。0.5 ml/分の時、 f/g＝0.89、Ｒs＝1.36 及びα＝1.52 で、f/g 値は、0.5、1、2、3 及び 5 ml/ 分の時、それぞれ 0.89、0.89、0.85、0.76 及び 0.61 であった。発明の詳細な説明本発明により、ポリオキシエチレンエステル基を含む液体のペルフルオロカーボン中で形成される、非共有インプリント混合物のエマルションをベースとした懸濁重合法が提供される。従来の懸濁及び分散法は、そのほとんどが、比較的疎水性のモノマーのための移動相として水または極性の高い有機溶媒（例えばアルコール）を用いており、この点で十分に満足すべきものではない。従って、別なアプローチが求められている。本発明は、この“別なアプローチ”を提供するものである。さらに従来法の問題点、例えば、プリント分子と特定な相互作用を持つことから、溶媒と官能性モノマーとの競合のため、ほとんどの共有及び非共有インプリント混合物とは非相溶性の溶媒は、回避される。本発明では、プリント分子と官能性モノマーとの間の認識に必要とされる相互作用を妨げる分散剤を使わずに済む。本発明では、モノマー、架橋剤、プリント分子、ポロジェニック溶媒、及びフッ素化界面活性剤を含む、適正に安定なエマルション液体粒子(dropl ets)を造るため、ポリオキシエチレンエステル基をも含めたペルフルオロカーボンポリマーを用いる。その際、表面をインプリントするためのプリント分子は一緒の場合もあるし、そうでない場合もある。本発明の安定/分散剤は、一般的に次式：により定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1、Ｃ_nＦ_2n+1(ＣＨ₂)_rＯ-、Ｃ_nＦ_2n+1Ｏ- またはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂ Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-Ｏであり；Ｙは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-Ｏまたは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂ Ｏ)_m-で、Ｚはプリント分子であり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であってもよく；ｐは少なくとも 1 であり；ｑは 0 または正数であってもよく；ｒは 1-20、好ましくは 1 または 2 であり；ｓは 0 または 1 であり；及びｔは 0 または 1 である。Ｃ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-ＯＨ及び(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂ -ＯＨのモノマーから形成される、ブロック、トリブロック及びマルチブロックコポリマーも本発明の範疇に含まれる。本発明の好ましい安定/分散剤は、式：Ｃ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーＡと、式：ＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーＢとを含むコポリマーで、式中ｎは 1 から 20 で、ｍは 0 から 500 である。好ましくは、ｎが 7.5で、ｍは約 43である。もっとも好ましい安定/分散剤は、次式：で定義され、これは懸濁重合法により、球状のビーズを高収率で製造することができる。式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-Ｏであり；ＹはＺ_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-Ｏで、Ｚはプリント分子であり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であってもよく；ｐは少なくとも 1 であり；ｑは 0 または正数であってもよく；ｓは 0 または 1 であり；及びｔは 0 または 1 である。好ましくは、ｍ=約 7.5、ｎ=約 43、ｐ=約 19、及びｑ=約 1 である。ｍ、ｎ、ｐ及びｑの値は、必ずしも整数でなくてもよい。本発明の安定剤を用いることにより、プリント分子と官能性モノマーとの間の、水素結合、イオン対相互作用等のような非共有相互作用を利用しても（非共有インプリント）、または可逆共有相互作用によっても（共有インプリント）、ビーズの物理的性質の目的は達成される。形成された錯体をさらに重合によって添合し、異種のアクリルモノマーの共重合から得られる高度に架橋した多孔性ポリマーマトリックスとする。プリント分子を抽出すると、ポリマー内部には特殊な形の部位と、原型のプリント分子に対応する官能基が残る。本発明で使用可能なプリント分子には以下のものが含まれるが、これらに限定されるものではない。１．Ｄ-及びＬ-Ｂoc トリプトファン２．Ｄ-及びＬ-Ｂoc フェニルアラニン３．Ｄ-及びＬ-フェニルアラニン４．Ｄ-及びＬ-Ｂoc-プロリン-Ｎ-ヒドロキシ琥珀酸イミドエステル５．Ｄ-及びＬ-Ｃbz-トリプトファン６．Ｄ-及びＬ-Ｃbz-アスパラギン酸７．Ｄ-及びＬ-Ｃbz-グルタミン酸８．Ｄ-及びＬ-Ｃbz-トリプトファンメチルエステル９．ニトロフェニルα及びβ，Ｄ-，Ｌ-ガラクトシド 10．(Ｓ)-(-)-チモロール 11．Ｄ-フルクトース 12．Ｄ-ガラクトース 13．フェニルα-Ｄ-マンノピラノシド 14．アクリルα及びβ-グルコシド 15．(Ｒ)-フェニル琥珀酸 16．Ａc-Ｌ-Ｔrp-ＯＥz 17．Ｌ-ＰheβＮＡ 18．Ｌ-ＬeuＡn 19．Ｌ-ＰheＡn 20．Ｌ-ＰheＧlyＡn 21．Ｌ-ＭenＰheＡn 22．Ｌ-ＰyＭeＰheＡn 23．Ｌ-ＰＬＰheＡn 24．Ｎ-Ａc-Ｌ-Ｐhe-Ｌ-Ｔrp-ＯＭe 25．ジアゼパム 26．プロプラノロール 27．エフェドリンただし、以下の非限定実施例中では、Ｂoc-Ｄ-及びＬ-Ｐhe、及びＬ-Ｐheを用いた。試薬の調製モノマージメタクリル酸エチレングリコール（ＥＤＭＡ）及びメタクリル酸（ＭＡＡ）（Ｍerck、ドイツ、Ｄarnstadt）は使用前に減圧蒸留した。トリメタクリル酸トリメチロールプロパン（ＴＲＩＭ）（Ａldrich Ｃhemie、ドイツ、Ｓteinheim）、スチレン（Ａldrich）、メタクリル酸メチル（ＭＭＡ）（Ａldrich）及びメタクリル酸ベンジル（ＢＭＡ）（Ｐolysciences、マサチューセッツ州、Ｗarringt on）は、そのまま使用した。2,2′-アゾビス(2-メチルプロピオニトリル)（ＡＩＢＮ）は、ベルギー、Ｇoel のＪanssen Ｃhimica から入手した。 2-(Ｎ-エチルペルフルオロアルキルスルフォンアミド)エタノール（ＰＦＡ-1 ）（Ｆluorochem、英国、Ｏld Ｇlossop）、ＰＥＧ2000 モノメチエルエーテル（ＭＭＥ）（Ｆluka Ｃhemic Ａ.Ｇ.、スイス、Ｂuchs）及びＰＥＧ350ＭＭＥ（Ｓigma、ミズーリ州、Ｓt.Ｌouis）は、ジクロロメタン中、塩化アクリロイル及びトリエチルアミンとの反応によってそれらのアクリレートとしたが、これらは購入も可能である（それぞれＦluorochem 及びＰolysciences から）。ペルフルオロ(メチルシクロヘキサン)（ＰＭＣ）及びフルオラド(Ｆluorad)ＦＣ430 も、Ｆluorochem から入手した。インプリント分子Ｂoc-Ｄ-Ｐhe、Ｂoc-Ｌ-Ｐhe 及びＢoc-Ｄ，Ｌ-Ｐhe は、Ｂachem Ａ.Ｇ．（スイス、Ｂubendorf）から入手した（Ｂoc＝ｔ-ブトキシカルボニル；Ｐhe＝フェニルアラニン）。ポロジェニック溶媒クロロホルム（ＣＨＣl₃）（ＨＰＬＣ用）は、インプリントの際にポロジェニック溶媒として用いるため、塩基性のアルミナカラムを通してエタノールを除去し、モレキュラーシーブを入れて保存した。ＨＰＬＣ用にはそのまま用いた。トルエンはナトリウムで、アセトンはモレキュラーシーブで使用前に乾燥した。他の溶媒は、分析用以上の級のものをそのまま使用した。安定剤の調製本発明によるエマルションの安定/分散ポリマー（ＰＦＰＳ）は、そのほとんどが式：で定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-Ｏであり；ＹはＺ_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-Ｏで、Ｚはプリント分子であり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であってもよく；ｐは少なくとも 1 であり；ｑは 0 または正数であってもよく；及びｔは 0 または 1 であり、特に、ｎは約 7.5、ｍは約 43、ｐは約 19、及びｑは約 1 である。実施例１ 4 g（7.2ミリモル）のアクリロイルＰＦＡ-1 Ｃ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ と、0.76 g（0.36ミリモル）の式：ＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるアクリロイルＰＥＧ2000ＭＭＥとを 10 mlのクロロホルムに溶かした。上記式中、ｎは約 7.5、ｍは約 43 である。24 mg（76 μモル）のＡＩＢＮを加え、窒素を 5 分間流すことにより溶解した酸素を除去した。さらにこの管をシールし、震盪水浴中、60℃で 48 時間、内容物を重合させた。得られた溶液は若干濁っていたが、これは冷やすと一層濁った。溶媒は減圧下、30℃でゆっくりと留去し（発泡を避けるために）、さらに減圧下、60℃で留去するとほとんど除去された。得られたポリマーは粘着性のある淡黄色のペーストで、これはそれ以上処理することなく用いた。他のポリマー安定剤は、モノマーと１モル％のＡＴＲＮとを適当な比で用い、同様な方法で合成した。全てはクリームから琥珀色のポリマーとして得られ、それらはその組成によってガラス状から柔らかいペーストまで様々であった。懸濁重合 20 mlのＰＭＣをちょうど飽和させるのに必要なポロジェニック溶媒の量を決定した。50 mlの珪ホウ酸ガラス管中で、必要量のＰＦＰＳを同量のポロジェニック溶媒に溶かし、そこへ 20 mlのＰＭＣを加えて乳光エマルションとなるよう、均一な白色になるまで震盪させた。5 mlの“インプリント混合物”（表１）を加え、2000 rpmで 5 分間撹拌しながら乳化させた。＊本発明に従って製造したビーズは、表の第１欄にＰＦコード番号で記載されており、これは比較実施例においても同様である。本発明の全ての重合において用いられた重合装置には、50 mlの珪ホウ酸ガラス管が含まれるが、この管にはスクリューの蓋が付いており、中央にはステンレス鋼の平刃撹拌機(flat blade stirrer)の回転軸を通すための穴が開けられている。この平刃撹拌機は、管の長さの約 1.5 倍である。この穴を通しての蒸発を抑えるため、ゴムのシールを用いた。蓋にはもう一つ小さな穴があり、注射針を使って管の中に窒素気流を送り込めるようになっている。管をレトルトスタンド (retort stand)中に垂直に立て、頭上(overhead)撹拌機で撹拌した。管から約 5 cm離れたところにＵＶランプを置き、反射光を最大にするため、そのランプと管とをアルミ箔で包んだ。上記表１でＰＦ1−ＰＦ16 としたエマルションを調製して、窒素で 5 分間パージした反応器の中に入れ、さらにそのエマルションを、室温で緩やかな窒素気流下 500 rpmで撹拌しながら、366 nmのＵＶを照射して重合させた。重合は 3 時間続けた。得られたポリマー粒子（ビーズ）をガラス濾過器で濾過し、ＰＭＣを回収した。このビーズをアセトンで十分に洗浄し、遊離した粒子の固まりを超音波処理して粉砕した（大きな固まりはスパチュラで静かに潰して粉砕した）後、これを乾燥及び貯蔵した。重合の際に用いるＰＦＰＳの量を変えることによって、ビーズのサイズを調節し、この関係を図１に示した。図１は、異なる量のＰＦＰＳを用い、本発明に従って製造したビーズの平均値と標準偏差とのグラフである。標準物は総量 5 ml 中にモノマーを 2 g用いて製造した（表１を参照）。安定なエマルションを形成可能なＰＦＰＳの最低量は 10 mgであるが、このサンプルには固まりも非常に多く入っていた。ＰＦＰＳを 150 mg以上用いると、1-2 μmの極小さく不揃いな粒子のみが得られた。これらのサンプルにビーズは見当たらなかった。比較例二種の市販のフッ素化界面活性剤（ポリフルオロアルコール(ＰＦＡ-1)及びフルオラド430）、アクリロイルＰＦＡ-1 のホモポリマー、アクリロイルＰＦＡ-1 とスチレンとの一連のランダムコポリマー、メタクリル酸メチルまたはメタクリル酸ベンジル、及びペルフルオロエステル基とＰＥＧ基の付いたアクリレートの主鎖を含むグラフトコポリマーも、安定剤として評価した。しかしながら、これらのほとんどは有効ではないことが判明した。エマルションを迅速に“クリーミング”することにより、発生した高密度の分散剤により反応は妨げられ、従って、分散した液滴は融合した。ポリアクリロイルＰＦＡ-1 を単独で評価したところ、これは懸濁重合するのに十分な安定性を持ったエマルションを与え、良質のビーズを与えた。残念なことにその溶解性が低いため、重合後、極めて疎水性の高い表面にできたビーズの表面からこの界面活性剤を取り除くことは非常に困難であった。アクリロイル-ＰＦＡ-1 とアクリロイル-ＰＥＧ2000ＭＭＥとのコポリマー（モル比 20：1 後者がＰＦＰＳ）を用いると、最も有効なエマルションが得られた。分子的にインプリントされたビーズの性質サイズ乳化の種類は、その重合法及び得られる分子的にインプリントされたビーズに影響を与える。好ましい方法には、約 2000 rpmsで約 5 分間撹拌することが含まれており、この方法によれば、サイズが 2 から 25 μmのビーズが優れた均一性及び再現性で得られた。乳化剤としてＰＦＰＳ 25 mgを用い、五回の別な重合を異なる日に行ったところ、平均のビーズサイズは 19.7 μm、標準誤差は 0.6 μmであった。超音波浴中で 5 分間乳化させると、かなりの量の小さな粒子を含め、サイズの分布は非常に広範囲に渡った。もしも大きめなビーズ、すなわち 40 μmから 100 μmのビーズを望むのであれば、管の中で 3-4 回普通に震盪させると良い結果が得られた。重合温度も重合法及び得られるビーズに影響を与えた。開始剤としてＡＢＤＶを用い、45℃で熱による開始を試みたところ、小さくて不揃いなかけらのみが得られた。4℃でＵＶにより重合を開始させると、非常に大量の固まりができてしまった。ＵＶランプに近接しているため、重合中にいくらか温度が上昇したが、ほとんどの重合は周囲温度（約 20℃）、すなわち約 18℃以上で行った。非常に暖かい気候、すなわち周囲温度が 30℃に達するような時に行った重合では、若干小さなビーズが得られており、このことは、再現性のある結果を与える一方で、重合温度もまたビーズのサイズに影響を及ぼしうることを示唆している。また重合は、分子インプリントで通常用いられる範囲の溶媒、例えばクロロホルム、トルエン、アセトニトリル及びアセトン中でも行った。本重合法では、これら全ての溶媒が使用可能であり、よってインプリントするほとんどの場合において、本法は適切と言えよう。ただし、好ましい溶媒はクロロホルム、トルエン及びアセトンである。得られたビーズのサイズ及び表面構造は、用いるポロジェニック溶媒にも依る。“標準的”重合においては、25 mgのＰＦＰＳを用いた場合、トルエン（26 μm±12 μm−平均値±ＳＤ）もアセトン（52 μm±15 μm）も、クロロホルム（18 pm±8pm）よりも大きなビーズを与えた。ビーズサイズの分布アセトン中にビーズを懸濁させたものを顕微鏡のスライド上で乾燥させ、光学顕微鏡の基準計数線を用い、約 150個のビーズをランダムに測定した。倍率は、粒子サイズによって 100×または 400×のいずれかを用いた。いくつかのサンプルはＳＥＭによって映像にもした。これらの映像から得た測定値は、光学的測定から得た結果と十分に合致した。ＳＥＭポリマービーズをアルミニウムペグの上に置き、ポーラロンＥ5150 ゴールドコーターを用いて 15 nmの金でスパッターコートした。さらに、異なる条件下で製造されたビーズのサイズ、表面及び孔の構造を比較するため、ＩＳＩ 100ＡＳＥＭを用い、25 kＶで映像を得た。いくつかの粒状ポリマー製造物の走査電子顕微鏡写真を、図２ａ-２ｅに示す。本発明の方法は、様々なポロジェニック溶媒を用いることによって、実質的に球状のビーズ、すなわちＥＤＭＡ（２ａ-２ｄ）及びＴＲＩＭ（２ｅ）をベースとするポリマーを与える。表面のくぼみまたは小さな穴のような欠陥の発生率は、水中で水をベースとした懸濁重合をした際に通常観察される発生率よりもいくらか高い。そのビーズの形態は、懸濁重合によって造られたビーズに象徴されるように、僅かではあるがより稠密でより滑らかな表層が、内部のより多孔性な構造を覆っている。ポロジェニック溶媒としてアセトンを用いて製造したビーズ（図２ｄ）は、他のものとは異なっていた。それらは、クロロホルムまたはトルエンを用いて製造したものより大きくて表面の形態は非常に粗く、さらにそれらの表面にはより多くの“屑(debris)”が付いていた。ポロジェニック溶媒としてトルエンを用いて製造したビーズは、クロロホルムで製造したそれよりも表面外殻の稠密性が低く、内部構造はいくらか多孔性であった。図２ｂはポリマーＰＦ９のビーズを示しているが、これは図２ａのビーズ（ポリマーＰＦ２）よりも架橋の割合が低い。図２ｂのビーズははるかに不揃いで歪んでおり、これはそれらの粒子が重合の間もずっと柔らかく、変形し易い状態にあり、そのため、剪断または衝突によって歪み易い傾向があることを示唆している。これらビーズの内部形態が、ポリマーＰＦ２のビーズよりも開放的(open)で、多孔性であることも明らかである。このことが、後者のより高いＨＰＬＣ性能の一因となっているのかもしれない。図２ (ｃ)のビーズはＰＦ13 のビーズを、さらに図２(ｅ)のビーズはＰＦ15 のビーズを示している。ＨＰＬＣ本発明に従って製造されたポリマービーズが分子的にインプリントされており、さらにその認識部位の性質が、少なくとも従来のバルク重合により得られたビーズと同程度に優れていることを確かめるため、Ｂoc-Ｐheを用いてインプリントした一連のポリマーをＨＰＬＣで評価した。このシステムは、Ｂoc-Ｐheでインプリントとされた従来の粉砕バルクポリマーの性質に関する情報が、非常に多く得られることから選ばれた。ビーズを超音波処理によってクロロホルム-アセトン混合物（17：3）中に懸濁させ、そのスラリーを 10 cm×0.46 cmまたは 25 cm×0.46 cm のステンレス鋼のカラム中に、空気駆動液体ポンプ(air driven fluid pump)を用い、溶媒をアセトンとして、300 バールで充填した。このカラムを 250 mlのメタノール：酢酸（9：1）で洗浄し、さらに酢酸を 0.1％または 0.25％含むクロロホルムで平衡状態にした。溶媒 20 μl中の 10 μgのＢoc-ＤまたはＬ-Ｐhe、または 20 μ gのラセミ体を注入し、そのクロマトグラムを流速 0.5 ml/分、254 nmで記録した。またいくつかの分離は、より高い流速で、さらに充填化合物をより多量に用いて行った。クロマトグラフィーのパラメーターは、標準的理論を用いて計算した。六種のポリマーのＨＰＬＣ評価に関する結果を表２に要約する。プリント分子に対するＭＡＡの比が大きくなると、非特定な相互作用が増えるために保持時間が長くなり、さらにそれによって容量のファクター(capacity fact ors)が増大する。しかし、α値は約 1.8 でほとんど一定である。この値は、粉砕して篩分けしたバルクＢoc-Ｐheポリマーに関して同条件下で得られた値（1.7 7 から 2.17 の範囲）と非常に近い。分割は、ＭＡＡ：Ｂoc-Ｐheの比が 12：1 の時に最も良く、10 cm カラムに関しては 0.83 であることが分かった。ポリマーＰＦ11 のより長いカラム（25 cm）を用いると、バルクポリマーに関して以前に報告されていたエナンチオマーのバセリン分割に近い結果が得られた。この分離のクロマトグラムを図３に示す。架橋が僅か 62.5％のポリマーＰＦ９は、プリント分子：ＭＡＡの比は同じであるが、架橋が 75％のポリマーＰＦ11 よりも良い結果を得た。以前、この範囲内で架橋度が増すと、分離が向上することを示してきたが、これらの実施例においては、このことは観察されなかった。これらのパラメーターを独立して変えることは不可能であり、結合部位の数を多くしたり、架橋を少なくすることでポリマーの形態を変化させても、分離が向上するか否かは不明であることから、用いるプリント分子の量を減らしてＰＦ11 を製造した（表１を参照）。このような観察結果から、分離の向上は、多くの組成及び作業変数を慎重に最も良いものとすることによって達成され得ることが分かる。ビーズ重合法を簡潔にし、その速度を高めれば、さらに優れたものになり得る。三官能価架橋剤であるＴＲＩＭをベースとするポリマーは、一連のジ及びトリペプチドに関して、ＥＤＭＡをベースとするポリマーよりも分割能及び耐容量が遥かに優れていることが既に報告されている。本発明による懸濁重合法をさらに評価するため、Ｂoc-Ｌ-ＰheのインプリントをＴＲＩＭをベースとするポリマー中で製造した。100 mgのＰＦＰＳ（ＰＦ15）を用いて製造したビーズは、平均直径が 5.7 μmで、25 mgのＰＦＰＳ（ＰＦ16）を用いて製造したビーズは、平均直径が 18.8 μmであり、これは同量の安定化ポリマーを用い、ＥＤＭＡをベースとするポリマーに関して得られると予想される値と非常に近い。このように、ビーズサイズの予測に関しては、ＴＲＩＭとＥＤＭＡとは非常に似通った性質を示すと考えられる。ＰＦ15 のビーズのＳＥＭ映像を図２ｅに示す。これらのビーズをＨＰＬＣで試験すると、粉砕して篩分けしたブロックポリマーに関する記載のような、卓越した分割が可能であった。この充填カラムは、背圧が極めて低く、流速をかなり高めても高度な分割が達成できた。図４ａ-４ｅは、流速が 0.5-5 ml/分、すなわち 0.5 ml/分、1 ml/分、2 ml/分、3 ml/分及び5 ml/分の時の一連のクロマトグラムを示したものである。0.5 ml/分と 2 ml/分との間にはほとんど差異は観察されず、このことは、これら小さなビーズの拡散速度が高いことを示唆している。背圧は極めて低く、分割能は卓越していた（0.5、1 及び 2 ml /分の時、それぞれ f/g＝0.89、0.89 及び 0.85 であった）。5 ml/分（背圧91. 4 kg/cm²、1300 psi)でも、理に適った分割能（f/g＝0.61）が得られた。粉砕して篩分けされたランダムな 25 μm未満の粒子は、通常 1 ml/分を越える流速では十分な結果を与えなかった。サイズが 5 μmの粉砕したバルクポリマーを用いて作業するのは困難である。ＨＰＬＣカラムにおいて、高い背圧を回避するには様々な限定が必要とされるが、10 μm未満の篩分けは不可能であることから、これに代わるサイズの分別法が必要になる。この結果は、インプリントされた本粒状ポリマーが、カラムを準備する際にも、さらにできたカラムの性能に関しても、“従来の”粉砕して篩分けしたブロックポリマーを凌ぐ有意な利点を有していることを示唆している。また本発明の安定剤は、基本的には化学的に不活性なため、水に敏感なモノマーユニット、例えば酸塩化物または酸無水物を含有する粒状ポリマーの製造に、分散剤として用いることも可能であると考えられる。前述の発明は、これを理解し易くするため、図及び実施例を用いて詳細に記載してきたが、技術熟練者には、本明細書に記載され、添付の請求項において定義されているような本発明の理念及び範囲から外れることなく、いくつかの変化及び改良が可能なことは明らかであろう。

【手続補正書】【提出日】１９９８年１月２３日【補正内容】全文訂正明細書分子的にインプリントされた粒状ポリマー及び同ポリマーのペルフロオロカーボン液中における安定化懸濁重合発明の分野本発明は、分子的にインプリントされた(molecularly imprinted)ポリマー支持体、及びこれら支持体の製法に関する。さらに詳述するならば本発明は、次式を有する安定化コポリマー使って行う懸濁重合法を用い、プリント分子(print m olecule)の回りに重合可能な官能性モノマーを配列させることを含む。式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1、Ｃ_nＦ_2n+1(ＣＨ₂)_rＯ-、Ｃ_nＦ_2n+1Ｏ- またはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂ Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏであり；Ｙは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏまたは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂ Ｏ)_m-で、Ｚはプリント分子であり；ｎは１から２０であり；ｍは０から約５００であってもよく；ｐは少なくとも１であり；ｑは０または正数であってもよく；ｒは１−２０、好ましくは１または２であり；ｓは０または１であり；及びｔは０または１である。本発明のポリマー支持体は、粒状形が好ましく、これはアミノ酸、アミノ酸誘導体、医薬化合物及び多糖の分離または分割を可能にする。発明の背景型取り(templating)とも呼ばれる分子インプリント(molecular imprinting)は、キラル分離に用いられており、これにはプリント分子の回りに重合可能な官能性モノマーを配列することが含まれる。これは、プリント分子と官能性モノマーとの間の水素結合、イオン対相互作用等のような非共有相互作用を利用して行うか（非共有インプリント）、またはその可逆共有相互作用によって行う（共有インプリント）。得られた錯体をさらに重合によって添合し、高度に架橋した多孔性ポリマーマトリックスとする。プリント分子を抽出すると、ポリマー内には特殊な形の部位と、原型のプリント分子に対応する官能基が残る。Ｍosbach,Ｋ.,Ｔr ends，Ｂiochemical Ｓciences，7，92-96(1994)；Ｗulff,Ｇ.,Ｔrends，Ｂiote chnology，11，85-87(1993)；及びＡndersson 等，Ｂioseparations(Ｎgo.Ｔ.Ｔ .編)，pp.383-394 のＭolecular Ｉnteractions．種々のラセミ化合物は、分子インプリントすることによって分割される。Ａnd ersson 等，Ｂioseparations(Ｎgo.Ｔ.Ｔ.編)，Ｐlenum Ｐress，pp.383-394(19 93)のＭolecular Ｉnteractions における“アミノ酸誘導体”；Ｆischer等，Ｊ .Ａm.Ｃhem.Ｓoc.，113，9358-9360(1991)における“薬剤”；Ｋempe 等，Ｊ.Ｃ hromatogr.，664，276-279(1994)；Ｗulff 等，Ｊ.Ｏrg.Ｃhem.，56，395-400(1 991)における“糖類”；及びＭayes 等，Ａnal.Ｂiochem.，222，483-488(1994) を参照。多くの場合、バセリン分割(Ｂaseline resolution)が行われている。他のキラルな固定相とは対照的に、分子的にインプリントされたポリマーの利点は、エナンチオマーの溶出順が予測可能なことである。インプリント可能な支持体はバルク重合法により製造されるが、ここでは多孔性ポリマーのブロックを製造するため、ポロジェニック(porogenic)な溶媒が用いられる。しかしバルク重合支持体は、分離カラム及び分析プロトコルに用いる際には、潰して粉砕し、篩分けして適当な粒子サイズにしなければならない。例えば、クロマトグラフィーによる測定の場合、通常２５μm未満のポリマー粒子を用いる。しかし、バルク重合法でこのように小さな粒子を供給するためには粉砕法を用いることになり、これは満足すべきものではない。粉砕法では、不揃いな形の粒子と、過剰で望ましからざる量の“細粒”とが得られる。通常粉砕したポリマーのうち、使用可能な粒子として回収されるのは５０パーセント(50％)未満である。一般に、不揃な粒子ではクロマトグラフィー用のカラム充填は効率よく行えず、スケールアップの段階でしばしば困難に直面することが分かっている。しかし、形の揃った粒子、例えば粒状ポリマーならば、ほとんどの場合に好ましいと言えよう。また粉砕法は、細粒を除去するための処理ステップ、すなわち沈降ステップをさらに必要とする。これは経費もかかるし、時間も浪費する。バルク重合とそれに必要な粉砕法とが、この従来法の労力を厳しく、浪費的で受け入れがたいものにしている。インプリント分子を含有しうるアクリルモノマーからビーズ(beads)を製造するため、懸濁及び分散重合法を用いようとする試みがなされてきた。理論上、これら懸濁及び分散重合法は、バルク重合に代わり得るものとされてよいはずである。しかしながら、現存の懸濁及び分散法は、比較的疎水性の高いモノマーを用いるため、連続相として水または極性の高い有機溶媒（例えば、アルコール）を用いることから、満足すべきものとは言えない。これらの溶媒は、プリント分子と特定な相互作用を持つことから、溶媒と官能性モノマーとの競合のため、ほとんどの共有及び非共有インプリント混合物とは非相溶性である。懸濁重合法では、溶媒をかなりモル過剰で用いるため、その溶媒がモノマー相を飽和させ、官能性モノマーとプリント分子との相互作用の数及び強さを著しく減少させる。さらに、酸性のモノマーは水に溶解性が高いため、恐らくモノマーのランダムな共重合及び架橋は起こらない。また水溶性のプリント分子は、水相中に分配されてしまうために失われてしまう。予想できないことではなかったが、水中で懸濁重合することにより、分子的にインプリントされたポリマービーズを製造しようとする試みは、非常にお粗末な結果しか得られなかった。Ｄamen 等，Ｊ.Ａm.Ｃhem. Ｓoc.，102，3265-3267(1980)；Ｂraun 等，Ｃhemiker-Ｚeitung，108，255-257 (1984) 官能性モノマーとプリント分子との間に安定な共有または金属キレート結合がある場合には、水性条件での使用が可能となるであろう。また完成した粒状シリカの細孔網状組織(pore network)中でインプリントすることにより、複合ビード粒子(composite beaded particles)を製造しようとする試みもなされてきた。Ｎorrlow 等，Ｊ.Ｃhromatogr.，299，29-41(1984)；Ｗul ff 等，Ｒeactive Ｐolymers，3，261-2757(1985)またはＴＲＩＭ．しかしながらこの方法は、注意深く操作することが必要とされ、さらに単位カラムにつきインプリントされたポリマーの量は、ビーズそれ自身によって必然的に減少する。Ｓellergren,Ｂ.，Ｊ.Ｃhromatogr.，673，133-141(1994)及びＳellergren，Ｂ.，Ａnal.Ｃhem.，66，1578-1582(1994)には、分子インプリントに極性溶媒混合物中での分散重合を用いたことが報告されている。この方法では、通常のビーズというよりもむしろランダムな沈降物が得られる。評価し得る結果は、高度に装填された(charged)プリント分子が得られたということのみで、これは恐らく競合する溶媒効果があったためであろう。従って、簡単で再現性があり、得られるインプリントの質に妥協することなく、さらに粉砕及び篩分け装置を必要としない分子インプリントを含む、粒状ポリマーの製法が必要とされている。また分子インプリントされたポリマーが均一であることも求められている。発明の概要本発明は、分子インプリントされたポリマー支持体、及び懸濁重合によるそれらの製造に関する。本発明による懸濁法は、分散相としてポリオキシエチレンエステル基を含むペルフルオロカーボン液を用いることによる分子インプリント法を提供する。ペルフルオロカーボン-ポリオキシエチレンエステルを含む類の化合物は、分子インプリントする時の認識過程（recognition process）で必要とされる官能性モノマーとプリント分子との相互作用を妨げない。“支持体”の粒子サイズは、安定化ポリマーの量、または撹拌の方法を変えることにより、約２ μmから約１００μmまでが調節が可能である。従って本発明の目的は、インプリントされたポリマーを、粒状で、しかも使用可能な物質のほぼ定量的な収率で簡単に製造しうる方法を提供することにある。本発明のもう一つの目的は、懸濁重合の過程で、官能性モノマーとプリント分子との相互作用を妨げることなく、エマルションを安定化させるフルオロカーボンコポリマーを提供することにある。さらなる目的は、官能性モノマー、架橋剤、プリント分子、開始剤及びポロジェニック溶媒のエマルションを安定化させることである。本発明のもう一つの目的は、サイズが約２μmから約１００μmの分子的にインプリントされたポリマービーズを、高収率で提供することにある。本発明のさらなる目的は、低い背圧、高速拡散、さらに高い流速での優れた分離をもたらす、約２−５μmの小さなビーズ充填を提供することにある。これら及び他の目的及び利点は、以下の説明及び添付の図を見ることで、より明らかになるであろう。図の簡単な説明図１は、20mlのＰＭＣ中に、1.84gのＥＤＭＡ、0.16 gのＭＡＡ、4.2 gのクロロホルム、及び20mgのＡＩＢＮを乳化させて含む“標準的重合”のために加えたＰＦＰＳの量に対して、ビーズの直径をグラフに示したものである。図２ａ-２ｅは、本発明に従ってＰＭＣ中での懸濁重合により製造したビーズの走査電子顕微鏡写真である。ここではビーズをアルミニウムのペグ(pegs)上に置き、ポーラロン(polaron)Ｅ5150コーターを用いて 15 mmの金でスパッターコートした。映像はＩＳＩ 100ＡＳＥＭを用いて 25 kＶで撮った。倍率は 500× である。２(a)ＰＦ2；２(b)ＰＦ10；２(c)ＰＦ13；２(d)ＰＦ14；２(e)ＰＦ15．図３ａ-３ｅは、実施例ＰＦ15（5 μmのＴＲＩＭビーズ）の 25 cmカラムで、Ｂoc-Ｄ,Ｌ-Ｐheを分離した際のＨＰＬＣの痕跡を示したものである。条件：カラムはクロロホルム＋0.25％酢酸で平衡状態にした；20 μlの移動相中の 1 mg のＢoc-Ｄ,Ｌ-Ｐheを注入し、同溶媒を用い、流速を３(a)0.5 ml/分；３(b)1 ml /分；３(c)2 ml/分；３(d)3 ml/分；３(e) 5 ml/分で溶出した。0.5 ml/分の時、f/g＝0.89、Ｒs＝1.36 及びα＝1.52 で、f/g 値は、0.5、1、2、3 及び 5 ml /分の時、それぞれ0.89、0.89、0.85、0.76 及び 0.61 であった。発明の詳細な説明本発明により、ポリオキシエチレンエステル基を含む液体のペルフルオロカーボン中で形成される、非共有インプリント混合物のエマルションをベースとした懸濁重合法が提供される。従来の懸濁及び分散法は、そのほとんどが、比較的疎水性のモノマーのための移動相として水または極性の高い有機溶媒（例えばアルコール）を用いており、この点で十分に満足すべきものではない。従って、別なアプローチが求められている。本発明は、この“別なアプローチ”を提供するものである。さらに従来法の問題点、例えば、プリント分子と特定な相互作用を持つことから、溶媒と官能性モノマーとの競合のため、ほとんどの共有及び非共有インプリント混合物とは非相溶性の溶媒は、回避される。本発明では、プリント分子と官能性モノマーとの間の認識に必要とされる相互作用を妨げる分散剤を使わずに済む。本発明では、モノマー、架橋剤、プリント分子、ポロジェニック溶媒、及びフッ素化界面活性剤を含む、適正に安定なエマルション液体粒子(dropl ets)を造るため、ポリオキシエチレンエステル基をも含めたペルフルオロカーボンポリマーを用いる。その際、表面をインプリントするためのプリント分子は一緒の場合もあるし、そうでない場合もある。本発明の安定/分散剤は、一般的に次式：により定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1、Ｃ_nＦ_2n+1(ＣＨ₂)_rＯ-、Ｃ_nＦ_2n+1Ｏ- またはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂ Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏであり；Ｙは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏまたは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂ Ｏ)_m-で、Ｚはプリント分子であり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であってもよく；ｐは少なくとも 1 であり；ｑは 0 または正数であってもよく；ｒは 1-20、好ましくは 1 または 2 であり；ｓは 0 または 1 であり；及びｔは 0 または 1 である。Ｃ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-ＯＨ及び(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄ -ＯＨのアクリル化モノマーから形成される、ブロック、トリブロック及びマルチブロックコポリマーも本発明の範疇に含まれる。本発明の好ましい安定/分散剤は、式：Ｃ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーＡと、式：ＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーＢとを含むコポリマーで、式中ｎは 1 から 20 で、ｍは 0 から 500 である。好ましくは、ｎが 7.5で、ｍは約 43である。もっとも好ましい安定/分散剤は、次式：で定義され、これは懸濁重合法により、球状のビーズを高収率で製造することができる。式中、ＸはＣ_nＦ_2n+IＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏであり；ＹはＺ_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏで、Ｚはプリント分子であり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であってもよく；ｐは少なくとも 1 であり；ｑは 0 または正数であってもよく；ｓは 0 または 1 であり；及びｔは 0 または 1 である。好ましくは、ｍ=約 7.5、ｎ=約 43、ｐ=約 19、及びｑ=約 1 である。ｍ、ｎ、ｐ及びｑの値は、必ずしも整数でなくてもよい。本発明の安定剤を用いることにより、プリント分子と官能性モノマーとの間の、水素結合、イオン対相互作用等のような非共有相互作用を利用しても（非共有インプリント）、または可逆共有相互作用によっても（共有インプリント）、ビーズの物理的性質の目的は達成される。形成された錯体をさらに重合によって添合し、異種のアクリルモノマーの共重合から得られる高度に架橋した多孔性ポリマーマトリックスとする。プリント分子を抽出すると、ポリマー内部には特殊な形の部位と、原型のプリント分子に対応する官能基が残る。本発明で使用可能なプリント分子には以下のものが含まれるが、これらに限定されるものではない。１．Ｄ-及びＬ-Ｂoc トリプトファン２．Ｄ-及びＬ-Ｂoc フェニルアラニン３．Ｄ-及びＬ-フェニルアラニン４．Ｄ-及びＬ-Ｂoc-プロリン-Ｎ-ヒドロキシ琥珀酸イミドエステル５．Ｄ-及びＬ-Ｃbz-トリプトファン６．Ｄ-及びＬ-Ｃbz-アスパラギン酸７．Ｄ-及びＬ-Ｃbz-グルタミン酸８．Ｄ-及びＬ-Ｃbz-トリプトファンメチルエステル９．ニトロフェニルα及びβ，Ｄ-，Ｌ-ガラクトシド 10．(Ｓ)-(-)-チモロール 11．Ｄ-フルクトース 12．Ｄ-ガラクトース 13．フェニルα-Ｄ-マンノピラノシド 14．アクリルα及びβ-グルコシド 15．(Ｒ)-フェニル琥珀酸 16．Ａc-Ｌ-Ｔrp-ＯＥz 17．Ｌ-ＰheβＮＡ 18．Ｌ-ＬeuＡn 19．Ｌ-ＰheＡn 20．Ｌ-ＰheＧlyＡn 21．Ｌ-ＭenＰheＡn 22．Ｌ-ＰyＭeＰheＡn 23．Ｌ-ＰＬＰheＡn 24．Ｎ-Ａc-Ｌ-Ｐhe-Ｌ-Ｔrp-ＯＭe 25．ジアゼパム 26．プロプラノロール 27．エフェドリンただし、以下の非限定実施例中では、Ｂoc-Ｄ-及びＬ-Ｐhe、及びＬ-Ｐheを用いた。試薬の調製モノマージメタクリル酸エチレングリコール（ＥＤＭＡ）及びメタクリル酸（ＭＡＡ）（Ｍerck、ドイツ、Ｄarnstadt）は使用前に減圧蒸留した。トリメタクリル酸トリメチロールプロパン（ＴＲＩＭ）（Ａldrich Ｃhemie、ドイツ、Ｓteinheim）、スチレン（Ａldrich）、メタクリル酸メチル（ＭＭＡ）（Ａldrich）及びメタクリル酸ベンジル（ＢＭＡ）（Ｐolysciences、マサチューセッツ州、Ｗarringt on）は、そのまま使用した。2,2′-アゾビス(2-メチルプロピオニトリル）（ＡＩＢＮ）は、ベルギー、Ｇoel のＪanssen Ｃhimica から入手した。 2-(Ｎ-エチルペルフルオロアルキルスルフォンアミド)エタノール（ＰＦＡ-1 ）（Ｆluorochem、英国、Ｏld Ｇlossop）、ＰＥＧ2000 モノメチエルエーテル（ＭＭＥ）（Ｆluka Ｃhemic Ａ.Ｇ.、スイス、Ｂuchs）及びＰＥＧ350ＭＭＥ（Ｓigma、ミズーリ州、Ｓt.Ｌouis）は、ジクロロメタン中、塩化アクリロイル及びトリエチルアミンとの反応によってそれらのアクリレートとしたが、これらは購入も可能である（それぞれＦluorochem 及びＰolysciences から）。ペルフルオロ(メチルシクロヘキサン)（ＰＭＣ）及びフルオラド(Ｆluorad)ＦＣ430 も、Ｆluorochem から入手した。インプリント分子Ｂoc-Ｄ-Ｐhe、Ｂoc-Ｌ-Ｐhe 及びＢoc-Ｄ，Ｌ-Ｐheは、Ｂachem Ａ.Ｇ．（スイス、Ｂubendorf）から入手した（Ｂoc＝ｔ-ブトキシカルボニル；Ｐhe＝フェニルアラニン）。ポロジェニック溶媒クロロホルム（ＣＨＣl₃）（ＨＰＬＣ用）は、インプリントの際にポロジェニック溶媒として用いるため、塩基性のアルミナカラムを通してエタノールを除去し、モレキュラーシーブを入れて保存した。ＨＰＬＣ用にはそのまま用いた。トルエンはナトリウムで、アセトンはモレキュラーシーブで使用前に乾燥した。他の溶媒は、分析用以上の級のものをそのまま使用した。安定剤の調製本発明によるエマルションの安定/分散ポリマー（ＰＦＰＳ）は、そのほとんどが式：で定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏであり；ＹはＺ_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏで、Ｚはプリント分子であり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であってもよく；ｐは少なくとも 1 であり；ｑは 0 または正数であってもよく；及びｔは 0 または 1 であり、特に、ｎは約 7.5、ｍは約 43、ｐは約 19、及びｑは約 1 である。実施例 1 4 g（7.2ミリモル）のアクリロイルＰＦＡ-1 Ｃ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ と、0.76 g（0.36ミリモル）の式：ＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるアクリロイルＰＥＧ2000ＭＭＥとを 10 mlのクロロホルムに溶かした。上記式中、ｎは約 7.5、ｍは約 43 である。24 mg（76 μモル）のＡＩＢＮを加え、窒素を 5 分間流すことにより溶解した酸素を除去した。さらにこの管をシールし、震盪水浴中、60℃で 48 時間、内容物を重合させた。得られた溶液は若干濁っていたが、これは冷やすと一層濁った。溶媒は減圧下、30℃でゆっくりと留去し（発泡を避けるために）、さらに減圧下、60℃で留去するとほとんど除去された。得られたポリマーは粘着性のある淡黄色のペーストで、これはそれ以上処理することなく用いた。他のポリマー安定剤は、モノマーと１モル％のＡＩＢＮとを適当な比で用い、同様な方法で合成した。全てはクリームから琥珀色のポリマーとして得られ、それらはその組成によってガラス状から柔らかいペーストまで様々であった。懸濁重合 20 mlのＰＭＣをちょうど飽和させるのに必要なポロジェニック溶媒の量を決定した。50 mlの珪ホウ酸ガラス管中で、必要量のＰＦＰＳを同量のポロジェニック溶媒に溶かし、そこへ 20 mlのＰＭＣを加えて乳光エマルションとなるよう、均一な白色になるまで震盪させた。5 mlの“インプリント混合物”（表１）を加え、2000 rpmで 5 分間撹拌しながら乳化させた。＊本発明に従って製造したビーズは、表の第１欄にＰＦコード番号で記載されており、これは比較実施例においても同様である。本発明の全ての重合において用いられた重合装置には、50 mlの珪ホウ酸ガラス管が含まれるが、この管にはスクリューの蓋が付いており、中央にはステンレス鋼の平刃撹拌機(flat blade stirrer)の回転軸を通すための穴が開けられている。この平刃撹拌機は、管の長さの約 1.5 倍である。この穴を通しての蒸発を抑えるため、ゴムのシールを用いた。蓋にはもう一つ小さな穴があり、注射針を使って管の中に窒素気流を送り込めるようになっている。管をレトルトスタンド (retort stand)中に垂直に立て、頭上(overhead)撹拌機で撹拌した。管から約 5 cm離れたところにＵＶランプを置き、反射光を最大にするため、そのランプと管とをアルミ箔で包んだ。上記表１でＰＦ１−ＰＦ16 としたエマルションを調製して、窒素で 5 分間パージした反応器の中に入れ、さらにそのエマルションを、室温で緩やかな窒素気流下 500 rpmで撹拌しながら、366 nmのＵＶを照射して重合させた。重合は 3 時間続けた。得られたポリマー粒子（ビーズ）をガラス濾過器で濾過し、ＰＭＣを回収した。このビーズをアセトンで十分に洗浄し、遊離した粒子の固まりを超音波処理して粉砕した（大きな固まりはスパチュラで静かに潰して粉砕した）後、これを乾燥及び貯蔵した。重合の際に用いるＰＦＰＳの量を変えることによって、ビーズのサイズを調節し、この関係を図１に示した。図１は、異なる量のＰＦＰＳを用い、本発明に従って製造したビーズの平均値と標準偏差とのグラフである。標準物は総量 5 ml 中にモノマーを 2 g用いて製造した（表１を参照）。安定なエマルションを形成可能なＰＦＰＳの最低量は 10 mgであるが、このサンプルには固まりも非常に多く入っていた。ＰＦＰＳを 150 mg以上用いると、1-2 μmの極小さく不揃いな粒子のみが得られた。これらのサンプルにビーズは見当たらなかった。比較例二種の市販のフッ素化界面活性剤（ポリフルオロアルコール(ＰＦＡ-1)及びフルオラド430）、アクリロイルＰＦＡ-1 のホモポリマー、アクリロイルＰＦＡ-1 とスチレンとの一連のランダムコポリマー、メタクリル酸メチルまたはメタクリル酸ベンジル、及びペルフルオロエステル基とＰＥＧ基の付いたアクリレートの主鎖を含むグラフトコポリマーも、安定剤として評価した。しかしながら、これらのほとんどは有効ではないことが判明した。エマルションを迅速に“クリーミング”することにより、発生した高密度の分散剤により反応は妨げられ、従って、分散した液滴は融合した。ポリアクリロイルＰＦＡ-1 を単独で評価したところ、これは懸濁重合するのに十分な安定性を持ったエマルションを与え、良質のビーズを与えた。残念なことにその溶解性が低いため、重合後、極めて疎水性の高い表面にできたビーズの表面からこの界面活性剤を取り除くことは非常に困難であった。アクリロイル-ＰＦＡ-1 とアクリロイル-ＰＥＧ2000ＭＭＥとのコポリマー（モル比 20：1 後者がＰＦＰＳ）を用いると、最も有効なエマルションが得られた。分子的にインプリントされたビーズの性質サイズ乳化の種類は、その重合法及び得られる分子的にインプリントされたビーズに影響を与える。好ましい方法には、約 2000 rpmsで約 5 分間撹拌することが含まれており、この方法によれば、サイズが 2 から 25 μmのビーズが優れた均一性及び再現性で得られた。乳化剤としてＰＦＰＳ 25 mgを用い、五回の別な重合を異なる日に行ったところ、平均のビーズサイズは 19.7 μm、標準誤差は 0.6 μmであった。超音波浴中で 5 分間乳化させると、かなりの量の小さな粒子を含め、サイズの分布は非常に広範囲に渡った。もしも大きめなビーズ、すなわち 40 μmから 100 μmのビーズを望むのであれば、管の中で 3-4 回普通に震盪させると良い結果が得られた。重合温度も重合法及び得られるビーズに影響を与えた。開始剤としてＡＢＤＶを用い、45℃で熱による開始を試みたところ、小さくて不揃いなかけらのみが得られた。4℃でＵＶにより重合を開始させると、非常に大量の固まりができてしまった。ＵＶランプに近接しているため、重合中にいくらか温度が上昇したが、ほとんどの重合は周囲温度（約 20℃）、すなわち約 18℃以上で行った。非常に暖かい気候、すなわち周囲温度が 30℃に達するような時に行った重合では、若干小さなビーズが得られており、このことは、再現性のある結果を与える一方で、重合温度もまたビーズのサイズに影響を及ぼしうることを示唆している。また重合は、分子インプリントで通常用いられる範囲の溶媒、例えばクロロホルム、トルエン、アセトニトリル及びアセトン中でも行った。本重合法では、これら全ての溶媒が使用可能であり、よってインプリントするほとんどの場合において、本法は適切と言えよう。ただし、好ましい溶媒はクロロホルム、トルエン及びアセトンである。得られたビーズのサイズ及び表面構造は、用いるポロジェニック溶媒にも依る。“標準的”重合においては、25 mgのＰＦＰＳを用いた場合、トルエン（26 μm±12 μm−平均値±ＳＤ）もアセトン（52 μm±15 μm) も、クロロホルム（18 pm±8pm）よりも大きなビーズを与えた。ビーズサイズの分布アセトン中にビーズを懸濁させたものを顕微鏡のスライド上で乾燥させ、光学顕微鏡の基準計数線を用い、約 150個のビーズをランダムに測定した。倍率は、粒子サイズによって 100×または 400×のいずれかを用いた。いくつかのサンプルはＳＥＭによって映像にもした。これらの映像から得た測定値は、光学的測定から得た結果と十分に合致した。ＳＥＭポリマービーズをアルミニウムペグの上に置き、ポーラロンＥ5150 ゴールドコーターを用いて 15 nmの金でスパッターコートした。さらに、異なる条件下で製造されたビーズのサイズ、表面及び孔の構造を比較するため、ＩＳＩ 100ＡＳＥＭを用い、25 kVで映像を得た。いくつかの粒状ポリマー製造物の走査電子顕微鏡写真を、図２ａ-２ｅに示す。本発明の方法は、様々なポロジェニック溶媒を用いることによって、実質的に球状のビーズ、すなわちＥＤＭＡ（２ａ-２ｄ）及びＴＲＩＭ（２ｅ）をベースとするポリマーを与える。表面のくぼみまたは小さな穴のような欠陥の発生率は、水中で水をベースとした懸濁重合をした際に通常観察される発生率よりもいくらか高い。そのビーズの形態は、懸濁重合によって造られたビーズに象徴されるように、僅かではあるがより稠密でより滑らかな表層が、内部のより多孔性な構造を覆っている。ポロジェニック溶媒としてアセトンを用いて製造したビーズ（図２ｄ）は、他のものとは異なっていた。それらは、クロロホルムまたはトルエンを用いて製造したものより大きくて表面の形態は非常に粗く、さらにそれらの表面にはより多くの“屑(debris)”が付いていた。ポロジェニック溶媒としてトルエンを用いて製造したビーズは、クロロホルムで製造したそれよりも表面外殻の稠密性が低く、内部構造はいくらか多孔性であった。図２ｂはポリマーＰＦ9 のビーズを示しているが、これは図２ａのビーズ（ポリマーＰＦ2）よりも架橋の割合が低い。図２ｂのビーズははるかに不揃いで歪んでおり、これはそれらの粒子が重合の間もずっと柔らかく、変形し易い状態にあり、そのため、剪断または衝突によって歪み易い傾向があることを示唆している。これらビーズの内部形態が、ポリマーＰＦ2 のビーズよりも開放的(open)で、多孔性であることも明らかである。このことが、後者のより高いＨＰＬＣ性能の一因となっているのかもしれない。図２ (ｃ)のビーズはＰＦ13 のビーズを、さらに図２(ｅ)のビーズはＰＦ15 のビーズを示している。ＨＰＬＣ本発明に従って製造されたポリマービーズが分子的にインプリントされており、さらにその認識部位の性質が、少なくとも従来のバルク重合により得られたビーズと同程度に優れていることを確かめるため、Ｂoc-Ｐheを用いてインプリントした一連のポリマーをＨＰＬＣで評価した。このシステムは、Ｂoc-Ｐheでインプリントとされた従来の粉砕バルクポリマーの性質に関する情報が、非常に多く得られることから選ばれた。ビーズを超音波処理によってクロロホルム-アセトン混合物（17：3）中に懸濁させ、そのスラリーを 10 cm×0.46 cmまたは 25 cm×0.46 cm のステンレス鋼のカラム中に、空気駆動液体ポンプ(air driven fluid pump)を用い、溶媒をアセトンとして、300 バールで充填した。このカラムを 250 mlのメタノール：酢酸（9：1）で洗浄し、さらに酢酸を 0.1％または 0.25％含むクロロホルムで平衡状態にした。溶媒 20μl中の 10 μgのＢoc-ＤまたはＬ-Ｐhe、または 20 μg のラセミ体を注入し、そのクロマトグラムを流速 0.5 ml/分、254 nmで記録した。またいくつかの分離は、より高い流速で、さらに充填化合物をより多量に用いて行った。クロマトグラフィーのパラメーターは、標準的理論を用いて計算した。六種のポリマーのＨＰＬＣ評価に関する結果を表２に要約する。プリント分子に対するＭＡＡの比が大きくなると、非特定な相互作用が増えるために保持時間が長くなり、さらにそれによって容量のファクター(capacity fact ors)が増大する。しかし、α値は約 1.8 でほとんど一定である。この値は、粉砕して篩分けしたバルクＢoc-Ｐheポリマーに関して同条件下で得られた値（1. 77 から 2.17 の範囲）と非常に近い。分割は、ＭＡＡ：Ｂoc-Ｐheの比が 12：1 の時に最も良く、10 cmカラムに関しては 0.83 であることが分かった。ポリマーＰＦ11 のより長いカラム（25 cm）を用いると、バルクポリマー（クロマトグラムは示されていない）に関して以前に報告されていたエナンチオマーのバセリン分割に近い結果が得られた。架橋が僅か 62.5％のポリマーＰＦ9 は、プリント分子：ＭＡＡの比は同じであるが、架橋が 75％のポリマーＰＦ11 よりも良い結果を得た。以前、この範囲内で架橋度が増すと、分離が向上することを示してきたが、これらの実施例においては、このことは観察されなかった。これらのパラメーターを独立して変えることは不可能であり、結合部位の数を多くしたり、架橋を少なくすることでポリマーの形態を変化させても、分離が向上するか否かは不明であることから、用いるプリント分子の量を減らしてＰＦ11 を製造した（表１を参照）。このような観察結果から、分離の向上は、多くの組成及び作業変数を慎重に最も良いものとすることによって達成され得ることが分かる。ビーズ重合法を簡潔にし、その速度を高めれば、さらに優れたものになり得る。三官能価架橋剤であるＴＲＩＭをベースとするポリマーは、一連のジ及びトリペプチドに関して、ＥＤＭＡをベースとするポリマーよりも分割能及び耐容量が遥かに優れていることが既に報告されている。本発明による懸濁重合法をさらに評価するため、Ｂoc-Ｌ-ＰheのインプリントをＴＲＩＭをベースとするポリマー中で製造した。100 mgのＰＦＰＳ（ＰＦ15）を用いて製造したビーズは、平均直径が 5.7 μmで、25 mgのＰＦＰＳ（ＰＦ16）を用いて製造したビーズは、平均直径が 18.8 μmであり、これは同量の安定化ポリマーを用い、ＥＤＭＡをベースとするポリマーに関して得られると予想される値と非常に近い。このように、ビーズサイズの予測に関しては、ＴＲＩＭとＥＤＭＡとは非常に似通った性質を示すと考えられる。ＰＦ15 のビーズのＳＥＭ映像を図２ｅに示す。これらのビーズをＨＰＬＣで試験すると、粉砕して篩分けしたブロックポリマーに関する記載のような、卓越した分割が可能であった。この充填カラムは、背圧が極めて低く、流速をかなり高めても高度な分割が達成できた。図３ａ-３ｅは、流速が 0.5-5 ml/分、すなわち 0.5 ml/分、1 ml/分、2 ml/分、3 ml/分及び 5 ml/分の時の一連のクロマトグラムを示したものである。0.5 ml/分と 2 ml/分との間にはほとんど差異は観察されず、このことは、これら小さなビーズの拡散速度が高いことを示唆している。背圧は極めて低く、分割能は卓越していた（0.5、1 及び 2 ml /分の時、それぞれ f/g＝0.89、0.89 及び 0.85 であった）。5 ml/分(背圧 91. 4 kg/cm²、1300 psi)でも、理に適った分割能（f/g＝0.61）が得られた。粉砕して篩分けされたランダムな 25 μm未満の粒子は、通常 1 ml/分を越える流速では十分な結果を与えなかった。サイズが 5 μmの粉砕したバルクポリマーを用いて作業するのは困難である。ＨＰＬＣカラムにおいて、高い背圧を回避するには様々な限定が必要とされるが、10 μm未満の篩分けは不可能であることから、これに代わるサイズの分別法が必要になる。この結果は、インプリントされた本粒状ポリマーが、カラムを準備する際にも、さらにできたカラムの性能に関しても、“従来の”粉砕して篩分けしたブロックポリマーを凌ぐ有意な利点を有していることを示唆している。また本発明の安定剤は、基本的には化学的に不活性なため、水に敏感なモノマーユニット、例えば酸塩化物または酸無水物を含有する粒状ポリマーの製造に、分散剤として用いることも可能であると考えられる。前述の発明は、これを理解し易くするため、図及び実施例を用いて詳細に記載してきたが、技術熟練者には、本明細書に記載され、添付の請求項において定義されているような本発明の理念及び範囲から外れることなく、いくつかの変化及び改良が可能なことは明らかであろう。請求の範囲１．式：Ｃ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーユニットＡ、及び式：ＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーユニットＢを含有するコポリマーを含み、式中ｎが１から２０で、ｍが０から約５００であり得る懸濁重合安定剤。２．ｎが約７．５で、ｍが約４３である請求項１に記載の安定剤。３．式：で定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1、Ｃ_nＦ_2n+1(ＣＨ₂)_rＯ-、Ｃ_nＦ_2n+1Ｏ- またはＣ_nＦ_2n+1 ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏであり；Ｙは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏまたは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_m-で、Ｚはプリント分子であり；ｎは１から２０であり；ｍは０から約５００であってもよく；ｐは少なくとも１であり；ｑは 0 または正数であってもよく；ｒは１−２０、好ましくは１または２であり；ｓは０または１であり；及びｔは０または１であるポリマー。４．式：で定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏであり；ＹはＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏであり；ｎは１から２０であり；ｍは０から約５００であり；ｐは少なくとも１であり；及びｑは０または正数であるポリマー。５．ポリオキシエチレンエステル基を含有する液体ペルフルオロカーボン中に、インプリント分子を乳化させたエマルションを含む、安定エマルション。６．前記液体フルオロカーボンがコポリマーである請求項５に記載のエマルション。７．前記コポリマーが、式：Ｃ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーＡ、及び式：ＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーＢの重合によって形成され、式中のｎが１から２０で、ｍが０から約５００である請求項６に記載のエマルション。８．インプリント分子、及び式：で定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1、Ｃ_nＦ_2n+1(ＣＨ₂)_rＯ-、Ｃ_nＦ_2n+1Ｏ- またはＣ_nＦ_2n+1 ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏ-であり；Ｙは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏ-または(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ ＣＨ₂Ｏ)_m-で、Ｚはプリント分子であり；ｎは１から２０であり；ｍは０から約５００であってもよく；ｐは少なくとも１であり；ｑは０または正数であってもよく；ｒは１−２０、好ましくは１または２であり；ｓは０または１であり；及びｔは０または１であるポリマーを含むエマルション。９．インプリント分子、及び式：で定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏであり；ＹはＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏであり；ｎは１から２０であり；ｍは０から約５００であり；ｐは少なくとも１であり；及びｑは０または正数であるポリマーを含むエマルション。１０．ａ）1)異なるアクリルモノマーの混合物； 2)少なくとも一種の架橋剤； 3)少なくとも一種の開始剤； 4)少なくとも一種の分子的インプリント分子；及び 5)少なくとも一種のポロジェニック溶媒を含む反応混合物を形成すること；及びｂ）分子的にインプリントされたポリマー粒子を形成するため、ペルフルオロカーボン及びポリオキシエチレンエステル基を含有する安定剤の存在下、前記反応混合物を重合することを含む懸濁重合方法。１１．前記安定剤が化学的に不活性である請求項１０に記載の方法。１２．前記アクリルモノマーがメタクリル酸及びジメタクリル酸エチレングリコールである請求項１０に記載の方法。１３．前記安定剤が、式：で定義されるポリマーで、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1、Ｃ_nＦ_2n+1(ＣＨ₂)_rＯ-、Ｃ_nＦ_2n+1Ｏ- またはＣ_nＦ_2n+1 ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏ-であり；Ｙは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏ-または(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ ＣＨ₂Ｏ)_m-で、Ｚはプリント分子であり；ｎは１から２０であり；ｍは０から約５００であってもよく；ｐは少なくとも１であり；ｑは０または正数であってもよく；ｒは１−２０、好ましくは１または２であり；ｓは０または１であり；及びｔは０または１である、請求項１０に記載の方法。１４．前記安定剤が、式：で定義されるポリマーで、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₄-Ｏであり；ＹはＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₄-Ｏであり；ｎは１から２０であり；ｍは０から約５００であり；ｐは少なくとも１であり；及びｑは０または正数である請求項１０に記載の方法。１５．重合前に、成分 1-5 と前記安定剤とからエマルションが形成される請求項１０に記載の方法。１６．前記エマルションを形成するため、前記反応混合物を約２０００ rpms で約５分間混合する請求項１５に記載の方法。１７．約 20℃未満から約 30℃の温度で重合を行う請求項１５に記載の方法。１８．前記重合が紫外線照射によって開始される請求項１０に記載の方法。１９．前記ポリマー粒子がビーズである請求項１０、１３または１４に記載の方法。２０．前記ポリマー粒子が、再現性のある表面の提示のため、均一な表面を提供している請求項１１に記載の方法。２１．前記ビーズが球形である請求項１６に記載の方法。２２．前記ビーズの直径が約２から１００ミクロンである請求項１９に記載の方法。２３．前記ビーズの直径が２から５０ミクロンである請求項１９に記載の方法。２４．前記ビーズの直径が約５から２５ミクロンである請求項１９に記載の方法。２５．前記ポロジェニック溶媒が、アセトン、クロロホルム及びトルエンより選択される請求項１０に記載の方法。２６．前記分子的インプリント分子が、アミノ酸、アミノ酸誘導体、医薬化合物及び多糖を分離または分割することができる、請求項１０、１３または１４に記載の方法。２７．前記分子的インプリント分子が、Ｄ-及びＬ-Ｂocアミノ酸、及びそれらの誘導体から選択される、請求項１０、１３または１４に記載の方法。２８．再現性のある表面を提示するための均一な表面を持つビーズを形成するため、少なくとも二種の異なるアクリルモノマーと、少なくとも一種のインプリント分子とから形成した分子的にインプリントされた支持体。２９．前記ビーズが球形である請求項２８に記載の粒子。３０．前記ビーズの直径が約２から１００ミクロンである請求項２９に記載の粒子。３１．前記ビーズの直径が２から５０ミクロンである請求項３０に記載の粒子。３２．前記ビーズの直径が約５から２５ミクロンである請求項３１に記載の粒子。３３．前記アクリルモノマーがメタクリル酸及びジメタクリル酸エチレングリコールである請求項２８に記載の粒子。３４．前記分子的インプリント分子が、アミノ酸、アミノ酸誘導体、医薬化合物及び多糖を分離または分割することができる、請求項２８に記載の粒子。３５．前記分子的インプリント分子が、Ｄ-及びＬ-Ｂocアミノ酸、及びそれらの誘導体から選択される請求項３４に記載の粒子。３６．ｓが０である請求項１３または１４に記載の方法。３７．ｓが１である請求項１３に記載の方法。３８．ｔが１である請求項１３に記載の方法。３９．前記プリント分子が、Ｄ-及びＬ-Ｂocトリプトファン、Ｄ-及びＬ-Ｂoc フェニルアラニン、Ｄ-及びＬ-フェニルアラニン、Ｄ-及びＬ-Ｂoc-プロリン-Ｎ -ヒドロキシ琥珀酸イミドエステル、Ｄ-及びＬ-Ｃbz-トリプトファン、Ｄ-及びＬ-Ｃbz-アスパラギン酸、Ｄ-及びＬ-Ｃbz-グルタミン酸、Ｄ-及びＬ-Ｃbz-トリプトファンメチルエステル、ニトロフェニルα及びβ，Ｄ-，Ｌ-ガラクトシド、 (Ｓ)-(-)-チモロール、Ｄ-フルクトース、Ｄ-ガラクトース、フェニルα-Ｄ-マンノピラノシド、アクリルα及びβ-グルコシド、(Ｒ)-フェニル琥珀酸、Ａc-Ｌ -Ｔrp-ＯＥz、Ｌ-ＰheβＮＡ、Ｌ-ＬeuＡn、Ｌ-ＰheＡn、Ｌ-ＰheＧlyＡn、Ｌ- ＭenＰheＡn、Ｌ-ＰyＭeＰheＡn、Ｌ-ＰＬＰheＡn、Ｎ-Ａc-Ｌ-Ｐhe-Ｌ-Ｔrp-ＯＭe、ジアゼパム、プロプラノロール及びエフェドリンから選択される請求項１３に記載の方法。【図１】【図２】【図２】【図２】【図３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩ // Ｃ０７Ｂ 57/00 ３１０Ｃ０７Ｂ 57/00 ３１０ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者モスバッシュ，クラウススウェーデン王国エス−244 02 フェールリューンド，ラーカランガ 31 (72)発明者メイズ，アンドリュー・ジーイギリス国ケンブリッジシャーピーイー 19・２ティーエイ，セント・ネオツ，アインスバリー，セント・マリーズ・ストリート 22

Claims

【特許請求の範囲】１．式：Ｃ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーユニットＡ、及び式：ＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂Ｏ-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーユニットＢを含有するコポリマーを含み、式中ｎが 1 乃至 20 で、ｍが 10 乃至 70 乃至約 500 である懸濁重合安定剤。２．ｎが約 7.5 で、ｍが約 43 である請求項 1 に記載の安定剤。３．式：で定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1、Ｃ_nＦ_2n+1(ＣＨ₂)_rＯ-、Ｃ_nＦ_2n+1Ｏ- またはＣ_nＦ_2n+1 ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-Ｏであり；Ｙは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-Ｏまたは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_m-で、Ｚはプリント分子であり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であってもよく；ｐは少なくとも 1 であり；ｑは 0 または正数であってもよく；ｒは 1-20、好ましくは 1 または 2 であり；ｓは 0 または 1 であり；及びｔは 0 または 1 であるポリマー。４．式：で定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-Ｏであり；ＹはＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-Ｏであり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であり；ｐは少なくとも 1 であり；及びｑは 0 または正数であるポリマー。５．ｎが約 7.5 で、ｍが約 43 である請求項 1 に記載の安定剤。６．ポリオキシエチレンエステル基を含有する液体ペルフルオロカーボン中に、インプリント分子を乳化させたエマルションを含む、安定エマルション。７．前記液体フルオロカーボンがコポリマーである請求項６に記載のエマルション。８．前記コポリマーが、式：Ｃ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーＡ、及び式：ＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-ＣＯ-ＣＨ=ＣＨ₂ で定義されるモノマーＢの重合によって形成され、式中のｎが 1 から 20 で、ｍが 0 から約 500 である請求項 7 に記載のエマルション。９．インプリント分子、及び式：で定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1、Ｃ_nＦ_2n+1(ＣＨ₂)_rＯ-、Ｃ_nＦ₂₊₁Ｏ- またはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-Ｏ-であり；Ｙは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-Ｏ-または(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ ＣＨ₂Ｏ)_m-で、Ｚはプリント分子であり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であってもよく；ｐは少なくとも 1 であり：ｑは 0 または正数であってもよく；ｒは 1-20、好ましくは 1 または 2 であり；ｓは 0 または 1 であり；及びｔは 0 または 1 であるポリマーを含むエマルション。 10．インプリント分子、及び式：で定義され、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-Ｏであり；ＹはＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-Ｏであり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であり；ｐは少なくとも 1 であり；及びｑは 0 または正数であるポリマーを含むエマルション。 11．ａ）1)異なるアクリルモノマーの混合物； 2)少なくとも一種の架橋剤； 3)少なくとも一種の開始剤； 4)少なくとも一種の分子的インプリント分子；及び 5)少なくとも一種のポロジェニック溶媒を含む反応混合物を形成すること；及びｂ）分子的にインプリントされたポリマー粒子を形成するため、ペルフルオロカーボン及びポリオキシエチレンエステル基を含有する安定剤の存在下、前記反応混合物を重合することを含む懸濁重合方法。 12．前記安定剤が化学的に不活性である請求項 11 に記載の方法。 13．前記アクリルモノマーがメタクリル酸及びジメタクリル酸エチレングリコールである請求項 11 に記載の方法。 14．前記安定剤が、式：で定義されるポリマーで、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1、Ｃ_nＦ_2n+1(ＣＨ₂)_rＯ-、Ｃ_nＦ_2n+1Ｏ- またはＣ_nＦ_2n+1 ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-Ｏ-であり；Ｙは(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-Ｏ-または(Ｚ)_tＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ ＣＨ₂Ｏ)_m-で、Ｚはプリント分子であり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であってもよく；ｐは少なくとも 1 であり；ｑは 0 または正数であってもよく；ｒは 1-20、好ましくは 1 または 2 であり；ｓは 0 または 1 であり；及びｔは 0 または 1 である、請求項 11 に記載の方法。 15．前記安定剤が、式：で定義されるポリマーで、式中、ＸはＣ_nＦ_2n+1ＳＯ₂Ｎ(Ｃ₂Ｈ₅)Ｃ₂Ｈ₂-Ｏであり；ＹはＣＨ₃Ｏ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_mＣ₂Ｈ₂-Ｏであり；ｎは 1 から 20 であり；ｍは 0 から約 500 であり；ｐは少なくとも 1 であり；及びｑは 0 または正数である請求項 11 に記載の方法。 16．重合前に、成分 1-5 と前記安定剤とからエマルションが形成される請求項 11 に記載の方法。 17．前記エマルションを形成するため、前記反応混合物を約 2000 rpmsで約 5 分間混合する請求項 16 に記載の方法。 18．約 20℃未満から約 30℃の温度で重合を行う請求項 16 に記載の方法。 19．前記重合が紫外線照射によって開始される請求項 11 に記載の方法。 20．前記ポリマー粒子がビーズである請求項 11、14 または 15 に記載の方法。 21．前記ポリマー粒子が、再現性のある表面の提示のため、均一な表面を提供している請求項 12 に記載の方法。 22．前記ビーズが球形である請求項 17 に記載の方法。 23．前記ビーズの直径が約 2 から 100ミクロンである請求項 20 に記載の方法。 24．前記ビーズの直径が 2 から 50ミクロンである請求項 20 に記載の方法。 25．前記ビーズの直径が約 5 から 25ミクロンである請求項 20 に記載の方法。 26．前記ポロジェニック溶媒が、アセトン、クロロホルム及びトルエンより選択される請求項 11 に記載の方法。 27．前記分子的インプリント分子が、アミノ酸、アミノ酸誘導体、医薬化合物及び多糖を分離または分割することができる、請求項 11、14 または 15 に記載の方法。 28．前記分子的インプリント分子が、Ｄ-及びＬ-Ｂocアミノ酸、及びそれらの誘導体から選択される、請求項 11、14 または 15 に記載の方法。 29．再現性のある表面を提示するための均一な表面を持つビーズを形成するため、少なくとも二種の異なるアクリルモノマーと、少なくとも一種のインプリント分子とから形成した分子的にインプリントされた支持体。 30．前記ビーズが球形である請求項 29 に記載の粒子。 31．前記ビーズの直径が約 2 から 100ミクロンである請求項 30 に記載の粒子。 32．前記ビーズの直径が 2 から 50ミクロンである請求項 31 に記載の粒子。 33．前記ビーズの直径が約 5 から 25ミクロンである請求項 32 に記載の粒子。 34．前記アクリルモノマーがメタクリル酸及びジメタクリル酸エチレングリコールである請求項 29 に記載の粒子。 35．前記分子的インプリント分子が、アミノ酸、アミノ酸誘導体、医薬化合物及び多糖を分離または分割することができる、請求項 29 に記載の粒子。 36．前記分子的インプリント分子が、Ｄ-及びＬ-Ｂocアミノ酸、及びそれらの誘導体から選択される請求項 35 に記載の粒子。 37．ｓが 0 である請求項 14 または 15 に記載の方法。 38．ｓが 1 である請求項 14 に記載の方法。 39．ｔが 1 である請求項 14 に記載の方法。 40．前記プリント分子が、Ｄ-及びＬ-Ｂocトリプトファン、Ｄ-及びＬ-Ｂocフェニルアラニン、Ｄ-及びＬ-フェニルアラニン、Ｄ-及びＬ-Ｂoc-プロリン-Ｎ- ヒドロキシ琥珀酸イミドエステル、Ｄ-及びＬ-Ｃbz-トリプトファン、Ｄ-及びＬ -Ｃbz-アスパラギン酸、Ｄ-及びＬ-Ｃbz-グルタミン酸、Ｄ-及びＬ-Ｃbz-トリプトファンメチルエステル、ニトロフェニルα及びβ，Ｄ-，Ｌ-ガラクトシド、( Ｓ)-(-)-チモロール、Ｄ-フルクトース、Ｄ-ガラクトース、フェニルα-Ｄ-マンノピラノシド、アクリルα及びβ-グルコシド、(Ｒ)-フェニル琥珀酸、Ａc-Ｌ- Ｔrp-ＯＥz、Ｌ-ＰheβＮＡ、Ｌ-ＬeuＡn、Ｌ-ＰheＡn、Ｌ-ＰheＧlyＡn、Ｌ-Ｍ enＰheＡn、Ｌ-ＰyＭeＰheＡn、Ｌ-ＰＬＰheＡn、Ｎ-Ａc-Ｌ-Ｐhe-Ｌ-Ｔrp-ＯＭ e、ジアゼパム、プロプラノロール及びエフェドリンから選択される請求項 14 に記載の方法。