JPH11290072A - 植物細胞への遺伝子導入方法 - Google Patents
植物細胞への遺伝子導入方法Info
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- JPH11290072A JPH11290072A JP10096084A JP9608498A JPH11290072A JP H11290072 A JPH11290072 A JP H11290072A JP 10096084 A JP10096084 A JP 10096084A JP 9608498 A JP9608498 A JP 9608498A JP H11290072 A JPH11290072 A JP H11290072A
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- plant cells
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- gene dna
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- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 安全、簡便かつ高効率で植物細胞に遺伝子Ｄ
ＮＡを導入する方法を提供する。 【解決手段】 ホウ酸アルミニウムウィスカーと遺伝子
ＤＮＡを含む溶液中に植物細胞を懸濁し、静置し、これ
に振動を与えることにより植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導
入する。
ＮＡを導入する方法を提供する。 【解決手段】 ホウ酸アルミニウムウィスカーと遺伝子
ＤＮＡを含む溶液中に植物細胞を懸濁し、静置し、これ
に振動を与えることにより植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導
入する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、植物細胞への遺伝
子導入手法に関し、本発明の方法は遺伝子組換えによる
形質転換植物の作出・高機能植物の育成に利用される。
子導入手法に関し、本発明の方法は遺伝子組換えによる
形質転換植物の作出・高機能植物の育成に利用される。
【０００２】
【従来の技術】従来、植物細胞に遺伝子を導入する方法
としては、アグロバクテリウムを利用した方法や高電圧
を利用したエレクトロポレーション法、マイクロインジ
ェクション法、さらには、核酸をまぶした金属粒子を高
速で植物細胞に打ち込む遺伝子銃法等の方法が開発・利
用されている。
としては、アグロバクテリウムを利用した方法や高電圧
を利用したエレクトロポレーション法、マイクロインジ
ェクション法、さらには、核酸をまぶした金属粒子を高
速で植物細胞に打ち込む遺伝子銃法等の方法が開発・利
用されている。
【０００３】近年、簡便な遺伝子導入方法として、髭状
或いは針状の結晶であるウィスカーを利用し、植物細胞
に核酸を導入する方法が開発された（米国特許第０５３
０２５２３号公報）。この方法は、ウィスカーの一種で
あるシリコンカーバイドウィスカーを用い、植物細胞を
懸濁した液体培地に、この結晶と核酸を添加・混和する
ことで、植物細胞内に針状構造を利用して、核酸を導入
する方法である。その際、使用されるシリコンカーバイ
ドウィスカーは直径０．３〜１．０μｍ、長さ５０〜２
００μｍの針状結晶構造を有する。この方法は、該ウイ
スカーが振動により植物細胞に穴を開け、その穴から核
酸を細胞内に導入するという原理に基づいている。
或いは針状の結晶であるウィスカーを利用し、植物細胞
に核酸を導入する方法が開発された（米国特許第０５３
０２５２３号公報）。この方法は、ウィスカーの一種で
あるシリコンカーバイドウィスカーを用い、植物細胞を
懸濁した液体培地に、この結晶と核酸を添加・混和する
ことで、植物細胞内に針状構造を利用して、核酸を導入
する方法である。その際、使用されるシリコンカーバイ
ドウィスカーは直径０．３〜１．０μｍ、長さ５０〜２
００μｍの針状結晶構造を有する。この方法は、該ウイ
スカーが振動により植物細胞に穴を開け、その穴から核
酸を細胞内に導入するという原理に基づいている。
【０００４】しかしながら、この方法で採用されるシリ
コンカーバイドウィスカーは生体に対する毒性・変異源
性があり、シリコンカーバイドウィスカーを用いて遺伝
子導入する作業者にとって安全ではなく、強い悪影響が
懸念される。
コンカーバイドウィスカーは生体に対する毒性・変異源
性があり、シリコンカーバイドウィスカーを用いて遺伝
子導入する作業者にとって安全ではなく、強い悪影響が
懸念される。
【０００５】また、米国特許第０５３０２５２３号公報
には使用されるウィスカーとして金属もしくはセラミッ
クウィスカーとのみ示されており、シリコンカーバイド
ウィスカーを除いては全く具体的な物質が示されてはい
ない。そのため、すべての金属もしくはセラミックウィ
スカーが、遺伝子ＤＮＡの導入にとって有効であるか否
かは、針状構造を有するウィスカーが遺伝子の導入に効
果があるとは言われているが、如何なる構造・物性を有
する物質が植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導入するのに効果
があるかは全く不明であった。
には使用されるウィスカーとして金属もしくはセラミッ
クウィスカーとのみ示されており、シリコンカーバイド
ウィスカーを除いては全く具体的な物質が示されてはい
ない。そのため、すべての金属もしくはセラミックウィ
スカーが、遺伝子ＤＮＡの導入にとって有効であるか否
かは、針状構造を有するウィスカーが遺伝子の導入に効
果があるとは言われているが、如何なる構造・物性を有
する物質が植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導入するのに効果
があるかは全く不明であった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】明細書の実施例に示し
たとおり、本発明者らはいくつかのウィスカーについて
植物細胞への遺伝子ＤＮＡの導入効果を試験した。その
結果、金属もしくはセラミックウィスカーであっても遺
伝子の導入に効果を示さないものがあることがわかっ
た。
たとおり、本発明者らはいくつかのウィスカーについて
植物細胞への遺伝子ＤＮＡの導入効果を試験した。その
結果、金属もしくはセラミックウィスカーであっても遺
伝子の導入に効果を示さないものがあることがわかっ
た。
【０００７】本発明の課題は、安全、簡便かつ高効率に
植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導入する方法を提供すること
にあり、本発明の目的はホウ酸アルミニウムウィスカー
を利用した植物細胞への遺伝子ＤＮＡの導入方法を提供
すること、さらには、該方法を用いた形質転換植物の作
出方法を提供することにある。
植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導入する方法を提供すること
にあり、本発明の目的はホウ酸アルミニウムウィスカー
を利用した植物細胞への遺伝子ＤＮＡの導入方法を提供
すること、さらには、該方法を用いた形質転換植物の作
出方法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、針状構造
を有する物質、その他の結晶構造を有する様々な物質を
用いて、植物細胞への遺伝子ＤＮＡの導入効果を鋭意検
討した結果、針状構造を有する物質の全てが植物細胞へ
の遺伝子ＤＮＡを導入する効果を有するわけではないこ
と、人体には無害であるホウ酸アルミニウムウィスカー
が植物細胞に著しく高い効率で遺伝子ＤＮＡを導入しう
ることを見出し、本発明を完成するに至った。
を有する物質、その他の結晶構造を有する様々な物質を
用いて、植物細胞への遺伝子ＤＮＡの導入効果を鋭意検
討した結果、針状構造を有する物質の全てが植物細胞へ
の遺伝子ＤＮＡを導入する効果を有するわけではないこ
と、人体には無害であるホウ酸アルミニウムウィスカー
が植物細胞に著しく高い効率で遺伝子ＤＮＡを導入しう
ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】すなわち、本発明は、少なくともホウ酸ア
ルミニウムウィスカーと遺伝子ＤＮＡを含む液体中に植
物細胞を懸濁して細胞懸濁液を調製し、静置後、該細胞
懸濁液に振動を与えることにより、植物細胞に遺伝子Ｄ
ＮＡを導入する方法、導入され遺伝子ＤＮＡが核ゲノム
に組み込まれた形質転換植物の作出方法を提供するもの
である。
ルミニウムウィスカーと遺伝子ＤＮＡを含む液体中に植
物細胞を懸濁して細胞懸濁液を調製し、静置後、該細胞
懸濁液に振動を与えることにより、植物細胞に遺伝子Ｄ
ＮＡを導入する方法、導入され遺伝子ＤＮＡが核ゲノム
に組み込まれた形質転換植物の作出方法を提供するもの
である。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明に於いて、ウイスカーと
は、適当な条件下で起こる溶液からの析出や化合物の分
解の際などに成長する針状又は髭状の形状を有する結晶
のことであり、太さは０．１μｍから１０ｍｍ程度のも
のを言う。ホウ酸アルミニウムウィスカーとは、 ホウ
酸アルミニウムが針状又は髭状に結晶成長した物質を指
す。そのようなものは通常白色針状の単結晶である。ホ
ウ酸アルミニウムとは、化学式ｎＡｌ2Ｏ3・ｍＢ2Ｏ3の
で表される化合物であり、 Ａｌ2Ｏ3とＢ2Ｏ3が化合し
た複合酸化物である。本発明に使用されるホウ酸アルミ
ニウムウィスカーは、ウィスカーの成長によって特性は
変化するが、その繊維径が０．１〜２．０μｍ、好まし
くは０．５μｍから１．０μｍ、繊維長が１０〜２００
μｍ、好ましくは１０〜５０、より好ましくは１０から
３０μｍの結晶構造を有している。
は、適当な条件下で起こる溶液からの析出や化合物の分
解の際などに成長する針状又は髭状の形状を有する結晶
のことであり、太さは０．１μｍから１０ｍｍ程度のも
のを言う。ホウ酸アルミニウムウィスカーとは、 ホウ
酸アルミニウムが針状又は髭状に結晶成長した物質を指
す。そのようなものは通常白色針状の単結晶である。ホ
ウ酸アルミニウムとは、化学式ｎＡｌ2Ｏ3・ｍＢ2Ｏ3の
で表される化合物であり、 Ａｌ2Ｏ3とＢ2Ｏ3が化合し
た複合酸化物である。本発明に使用されるホウ酸アルミ
ニウムウィスカーは、ウィスカーの成長によって特性は
変化するが、その繊維径が０．１〜２．０μｍ、好まし
くは０．５μｍから１．０μｍ、繊維長が１０〜２００
μｍ、好ましくは１０〜５０、より好ましくは１０から
３０μｍの結晶構造を有している。
【００１１】次に、ホウ酸アルミニウムウイスカーを用
いた、植物細胞への遺伝子導入方法について説明する。
先ず、植物の細胞を適当な液体培地中に懸濁する。この
とき、植物細胞としては如何なる種類ものでも、また、
植物の種類としても如何なる種類の物でも用いることが
できる。植物細胞として適当な条件を与えることによっ
て植物体を再生しうる細胞を用いた場合には、遺伝子Ｄ
ＮＡが導入された形質転換植物を得ることが出来る。こ
の様な特徴を有する植物細胞としては、例えば、カルス
・胚様体・胚軸組織・子葉切片などが挙げられる。ま
た、植物細胞を懸濁する液体培地としては、植物組織培
養に用いられる一般的培地を用いることが出来、さら
に、添加物を加えたものも用いることが出来る。次に、
細胞を懸濁した液体培地中にホウ酸アルミニウムウィス
カーと遺伝子ＤＮＡを添加する。添加するホウ酸アルミ
ニウムウィスカーの量は植物細胞を懸濁する液体培地に
対して１％以上であれば効果があるが、ホウ酸アルミニ
ウムウィスカーの濃度を高めることによって遺伝子導入
効果は著しく向上する。その場合、ホウ酸アルミニウム
ウィスカーの濃度が５％以上で高い導入効果が得られ、
さらに、好ましくは１０％以上の濃度で添加する事で、
さらに高い導入効果が得られる。ホウ酸アルミニウムウ
ィスカーの濃度は通常５０％以下好ましくは３０％以下
である。
いた、植物細胞への遺伝子導入方法について説明する。
先ず、植物の細胞を適当な液体培地中に懸濁する。この
とき、植物細胞としては如何なる種類ものでも、また、
植物の種類としても如何なる種類の物でも用いることが
できる。植物細胞として適当な条件を与えることによっ
て植物体を再生しうる細胞を用いた場合には、遺伝子Ｄ
ＮＡが導入された形質転換植物を得ることが出来る。こ
の様な特徴を有する植物細胞としては、例えば、カルス
・胚様体・胚軸組織・子葉切片などが挙げられる。ま
た、植物細胞を懸濁する液体培地としては、植物組織培
養に用いられる一般的培地を用いることが出来、さら
に、添加物を加えたものも用いることが出来る。次に、
細胞を懸濁した液体培地中にホウ酸アルミニウムウィス
カーと遺伝子ＤＮＡを添加する。添加するホウ酸アルミ
ニウムウィスカーの量は植物細胞を懸濁する液体培地に
対して１％以上であれば効果があるが、ホウ酸アルミニ
ウムウィスカーの濃度を高めることによって遺伝子導入
効果は著しく向上する。その場合、ホウ酸アルミニウム
ウィスカーの濃度が５％以上で高い導入効果が得られ、
さらに、好ましくは１０％以上の濃度で添加する事で、
さらに高い導入効果が得られる。ホウ酸アルミニウムウ
ィスカーの濃度は通常５０％以下好ましくは３０％以下
である。
【００１２】また、ホウ酸アルミニウムウィスカーで植
物細胞に導入できる物質としては、例えば、ＤＮＡ、Ｒ
ＮＡ等の核酸の他、タンパク質、その他の高分子物質等
も導入することができる。核酸であればほとんどのもの
が導入できるが、遺伝子機能の解析・特定、遺伝子組換
植物の作出のためには、特に植物体内で機能しうる構造
を有する遺伝子、すなわち、本発明に言う遺伝子ＤＮＡ
であることが好ましい。遺伝子ＤＮＡとは植物体内で遺
伝子を発現させうるプロモーターとその下流に植物体内
で発現させる遺伝子を連結し、さらにその下流にターミ
ネーターを連結したものを指す。また、発現させる遺伝
子はセンス・アンチセンスの何れの方向に連結した物で
もかまわない。
物細胞に導入できる物質としては、例えば、ＤＮＡ、Ｒ
ＮＡ等の核酸の他、タンパク質、その他の高分子物質等
も導入することができる。核酸であればほとんどのもの
が導入できるが、遺伝子機能の解析・特定、遺伝子組換
植物の作出のためには、特に植物体内で機能しうる構造
を有する遺伝子、すなわち、本発明に言う遺伝子ＤＮＡ
であることが好ましい。遺伝子ＤＮＡとは植物体内で遺
伝子を発現させうるプロモーターとその下流に植物体内
で発現させる遺伝子を連結し、さらにその下流にターミ
ネーターを連結したものを指す。また、発現させる遺伝
子はセンス・アンチセンスの何れの方向に連結した物で
もかまわない。
【００１３】上記の植物細胞、遺伝子ＤＮＡ、ホウ酸ア
ルミニウムウィスカーを懸濁・静置後、適当な時間、振
動を与える。振動を与える方法としては、例えば、ボル
テックスミキサー等を使用することが出来る。静置する
時間や振動を与える時間には、特に制限は無く、実験に
よって適当な時間を用いることが出来る。
ルミニウムウィスカーを懸濁・静置後、適当な時間、振
動を与える。振動を与える方法としては、例えば、ボル
テックスミキサー等を使用することが出来る。静置する
時間や振動を与える時間には、特に制限は無く、実験に
よって適当な時間を用いることが出来る。
【００１４】処理後の植物細胞は、そのまま、機能解析
に利用することが出来る。また、処理後の細胞を適当な
植物組織培養用の培地に移植することによって、遺伝子
ＤＮＡを取り込んだ植物細胞を増殖させることが出来、
また、遺伝子ＤＮＡが組み込まれた形質転換植物を再生
させることが出来る。
に利用することが出来る。また、処理後の細胞を適当な
植物組織培養用の培地に移植することによって、遺伝子
ＤＮＡを取り込んだ植物細胞を増殖させることが出来、
また、遺伝子ＤＮＡが組み込まれた形質転換植物を再生
させることが出来る。
【００１５】
【実施例】以下に本発明を実施例に基づき詳細に説明す
る。 ［実施例１］各種ウイスカーの物質特性と遺伝子導入効
果との関連を調べた。剥皮したイネ品種'能登ひかり'の
完熟種子を５％次亜塩素酸ソーダに１５分間浸漬して、
殺菌処理を行った。殺菌後、２、４−Ｄを２ｐｐｍ含む
ＬＳ液体培地に移植し、７日間培養した。誘導されたイ
ネの胚盤由来カルス２５０ｍｇを、０．２５Ｍマンニト
ールと０．２５Ｍソルビトールを含むＬＳ液体培地２９
０μｌを分注した１．５ｍｌエッペンドルフチューブに
入れた。ホウ酸アルミニウムウィスカーを含む数種類の
結晶構造の異なる化合物を液体培地に該培地に対して５
％の濃度になるように添加し、このカルスと種々の化合
物を分注したエッペンドルチューブに、ＧＵＳレポータ
ー遺伝子を含むプラスミド（ｐＢＩ１２２、ＴＯＹＯＢ
Ｏ）を２５μｇ加え、室温で３０分間静置した。その
後、ボルテックスミキサーを用いて、３０分間振動させ
た。処理後、ＬＳ液体培地を用いてカルスを洗浄し、ウ
ィスカーを除去した。洗浄したカルスは、２、４−Ｄを
２ｐｐｍ、ゲランガムを０．２５％含むＬＳ培地上に置
床し、２日間培養した。遺伝子導入効果は、レポーター
遺伝子であるＧＵＳの活性をＸ−ｇｌｃを用いて調べ
た。すなわち、カルスをＸ−ｇｌｃを含む緩衝液に懸濁
し、３７℃で１日反応させた後に、形成されたブルース
ポットの数を計測した。結果を表１（表１）に示す。そ
の結果、六角柱状や粒状の結晶構造を有するヒドロキシ
アパタイトやニッケル粉末では遺伝子導入効果がなかっ
た。また、針状結晶構造を有する化合物の全てが遺伝子
導入効果を示さなかった。すなわち、ホウ酸アルミニウ
ムウィスカーが最も遺伝子導入効果が高く、ついでシリ
コンカーバイドウィスカーが遺伝子導入効果を示し、こ
れらとほぼ同等の物性を持つチタン酸カリウムは遺伝子
導入効果を示さなかった。
る。 ［実施例１］各種ウイスカーの物質特性と遺伝子導入効
果との関連を調べた。剥皮したイネ品種'能登ひかり'の
完熟種子を５％次亜塩素酸ソーダに１５分間浸漬して、
殺菌処理を行った。殺菌後、２、４−Ｄを２ｐｐｍ含む
ＬＳ液体培地に移植し、７日間培養した。誘導されたイ
ネの胚盤由来カルス２５０ｍｇを、０．２５Ｍマンニト
ールと０．２５Ｍソルビトールを含むＬＳ液体培地２９
０μｌを分注した１．５ｍｌエッペンドルフチューブに
入れた。ホウ酸アルミニウムウィスカーを含む数種類の
結晶構造の異なる化合物を液体培地に該培地に対して５
％の濃度になるように添加し、このカルスと種々の化合
物を分注したエッペンドルチューブに、ＧＵＳレポータ
ー遺伝子を含むプラスミド（ｐＢＩ１２２、ＴＯＹＯＢ
Ｏ）を２５μｇ加え、室温で３０分間静置した。その
後、ボルテックスミキサーを用いて、３０分間振動させ
た。処理後、ＬＳ液体培地を用いてカルスを洗浄し、ウ
ィスカーを除去した。洗浄したカルスは、２、４−Ｄを
２ｐｐｍ、ゲランガムを０．２５％含むＬＳ培地上に置
床し、２日間培養した。遺伝子導入効果は、レポーター
遺伝子であるＧＵＳの活性をＸ−ｇｌｃを用いて調べ
た。すなわち、カルスをＸ−ｇｌｃを含む緩衝液に懸濁
し、３７℃で１日反応させた後に、形成されたブルース
ポットの数を計測した。結果を表１（表１）に示す。そ
の結果、六角柱状や粒状の結晶構造を有するヒドロキシ
アパタイトやニッケル粉末では遺伝子導入効果がなかっ
た。また、針状結晶構造を有する化合物の全てが遺伝子
導入効果を示さなかった。すなわち、ホウ酸アルミニウ
ムウィスカーが最も遺伝子導入効果が高く、ついでシリ
コンカーバイドウィスカーが遺伝子導入効果を示し、こ
れらとほぼ同等の物性を持つチタン酸カリウムは遺伝子
導入効果を示さなかった。
【００１６】
【表１】 表１．物質特性と遺伝子導入効率（ブルースポットの数） ──────────────────────────────────── 結晶 硬度 直径 長さ 弾性率 密度 スホ゜ット数 構造 (短径) (長径) 物質名 (tonf (mg (数 (モース) (μm) (μm) /mm2) /cm3) /20カルス) ────────────────────────────────────シリコンカーハ゛イト゛ 針状 9 0.5-1.0 50-200 49 3.19 48 ウィスカーホウ 酸アルミニウム 針状 7 0.5-1.0 10-30 40 3.0 58ウィスカーチタン 酸カリウム 針状 4 0.2-0.5 10-20 28 3.3 0ヒト゛ロキシアハ゜タイト 六角柱状 5 0.3-0.5 2-3 - 2.7 0ニッケル 粉末 粒状 - 3-7 - - - 0 ────────────────────────────────────
【００１７】［実施例２］実施例１に記載のイネ胚盤由
来カルス２５０ｍｇを、１．５ｍｌエッペンドルフチュ
ーブに入れた。これに、種々の濃度でホウ酸アルミニウ
ムウィスカーを溶解した、０．２５Ｍマンニトールと
０．２５Ｍソルビトールを含むＬＳ液体培地２９０μｌ
を分注した。実施例１に記載の方法によって、各濃度で
のホウ酸アルミニウムウィスカーの遺伝子導入効果を解
析した。結果は図１（図１）に示した。レポーター遺伝
子が導入されたことによって生じるブルースポットは添
加するホウ酸アルミニウムウィスカーの濃度に依存し、
濃度を高めることで著しく増加した。
来カルス２５０ｍｇを、１．５ｍｌエッペンドルフチュ
ーブに入れた。これに、種々の濃度でホウ酸アルミニウ
ムウィスカーを溶解した、０．２５Ｍマンニトールと
０．２５Ｍソルビトールを含むＬＳ液体培地２９０μｌ
を分注した。実施例１に記載の方法によって、各濃度で
のホウ酸アルミニウムウィスカーの遺伝子導入効果を解
析した。結果は図１（図１）に示した。レポーター遺伝
子が導入されたことによって生じるブルースポットは添
加するホウ酸アルミニウムウィスカーの濃度に依存し、
濃度を高めることで著しく増加した。
【００１８】［実施例３］実施例１で得られたイネカル
ス２５０ｍｇを、２０％ホウ酸アルミニウムウィスカー
および０．２５Ｍマンニトール、０．２５Ｍソルビトー
ルを含むＬＳ液体培地２９０μｌに懸濁した。これに、
カナマイシン耐性遺伝子ＮＰＴＩＩを含むプラスミドｐ
ＢＩ１２１（ＴＯＹＯＢＯ社製）２５μｇを添加し、実
施例１に記載の方法に従って、イネカルスに遺伝子を導
入した。導入処理を行った後、２、４−Ｄを２ｐｐｍ、
ゲランガムを０．２５％含むＬＳ培地上に置床し培養し
た。培地にはジェネテシン５０ｍｇ／ｍｌを添加した。
２週間後、同一組成の培地にカルスを移植した。さら
に、２週間培養し、ＮＡＡを０．１ｐｐｍ，カイネチン
を２ｐｐｍ、ショ糖を３％、寒天を１．２％、ジェネテ
シン５０ｍｇ／ｍｌを含むＮ６培地に移植した。３週間
後、増殖したジェネテシン耐性カルスからｐＢＩ１２１
が組み込まれた形質転換植物体が再生した。
ス２５０ｍｇを、２０％ホウ酸アルミニウムウィスカー
および０．２５Ｍマンニトール、０．２５Ｍソルビトー
ルを含むＬＳ液体培地２９０μｌに懸濁した。これに、
カナマイシン耐性遺伝子ＮＰＴＩＩを含むプラスミドｐ
ＢＩ１２１（ＴＯＹＯＢＯ社製）２５μｇを添加し、実
施例１に記載の方法に従って、イネカルスに遺伝子を導
入した。導入処理を行った後、２、４−Ｄを２ｐｐｍ、
ゲランガムを０．２５％含むＬＳ培地上に置床し培養し
た。培地にはジェネテシン５０ｍｇ／ｍｌを添加した。
２週間後、同一組成の培地にカルスを移植した。さら
に、２週間培養し、ＮＡＡを０．１ｐｐｍ，カイネチン
を２ｐｐｍ、ショ糖を３％、寒天を１．２％、ジェネテ
シン５０ｍｇ／ｍｌを含むＮ６培地に移植した。３週間
後、増殖したジェネテシン耐性カルスからｐＢＩ１２１
が組み込まれた形質転換植物体が再生した。
【００１９】
【発明の効果】本発明により、植物細胞に遺伝子を導入
するのに効果的な化合物としてホウ酸アルミニウムウィ
スカーが提供され、このホウ酸アルミニウムウィスカー
を用いた簡便な植物細胞への遺伝子ＤＮＡの導入、遺伝
子組換え植物の作出が可能となった。
するのに効果的な化合物としてホウ酸アルミニウムウィ
スカーが提供され、このホウ酸アルミニウムウィスカー
を用いた簡便な植物細胞への遺伝子ＤＮＡの導入、遺伝
子組換え植物の作出が可能となった。
【手続補正書】
【提出日】平成１０年７月２７日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】追加
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】 ホウ酸アルミニウムウィスカーの遺伝子導入
効率を示す図である。横軸はホウ酸アルミニウムウィス
カーの濃度を、縦軸はレポーター遺伝子が導入されたこ
とにより生じるブルースポットの数を表している。
効率を示す図である。横軸はホウ酸アルミニウムウィス
カーの濃度を、縦軸はレポーター遺伝子が導入されたこ
とにより生じるブルースポットの数を表している。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 田中 修 兵庫県神戸市東灘区岡本８−９−１ 甲南 大学理学部生物学科内 (72)発明者 本田 秀夫 千葉県茂原市東郷1144番地 三井化学株式 会社内
Claims (6)
- 【請求項１】 少なくともホウ酸アルミニウムウィスカ
ーと遺伝子ＤＮＡを含む液体中に植物細胞を懸濁して細
胞懸濁液を調製し、静置後、該細胞懸濁液に振動を与え
ることにより、植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導入する方
法。 - 【請求項２】 ホウ酸アルミニウムウィスカーが化学式
９Ａｌ2Ｏ3・２Ｂ2Ｏ3で表されるものであることを特徴
とする請求項１に記載の植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導入
する方法。 - 【請求項３】 遺伝子ＤＮＡが、植物細胞で転写され、
植物細胞で機能しうる構造を有することを特徴とする請
求項１に記載の植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導入する方
法。 - 【請求項４】 植物細胞が完全な植物体を再生しうる能
力を有するものであることを特徴とする請求項１に記載
の植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導入する方法。 - 【請求項５】 植物細胞がイネの細胞であることを特徴
とする請求項４に記載の植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導入
する方法。 - 【請求項６】 少なくともホウ酸アルミニウムウィスカ
ーと遺伝子ＤＮＡを含む液体中に植物細胞を懸濁して細
胞懸濁液を調製し、静置後、該細胞懸濁液に振動を与え
ることにより、植物細胞に遺伝子ＤＮＡを導入し、導入
された遺伝子ＤＮＡが核ゲノムに組み込まれた形質転換
植物を作出する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10096084A JPH11290072A (ja) | 1998-04-08 | 1998-04-08 | 植物細胞への遺伝子導入方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10096084A JPH11290072A (ja) | 1998-04-08 | 1998-04-08 | 植物細胞への遺伝子導入方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11290072A true JPH11290072A (ja) | 1999-10-26 |
Family
ID=14155543
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10096084A Pending JPH11290072A (ja) | 1998-04-08 | 1998-04-08 | 植物細胞への遺伝子導入方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11290072A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007069301A1 (ja) * | 2005-12-13 | 2007-06-21 | Japan Tobacco Inc. | 粉体を用いて形質転換効率を向上させる方法 |
-
1998
- 1998-04-08 JP JP10096084A patent/JPH11290072A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007069301A1 (ja) * | 2005-12-13 | 2007-06-21 | Japan Tobacco Inc. | 粉体を用いて形質転換効率を向上させる方法 |
| WO2007069643A1 (ja) * | 2005-12-13 | 2007-06-21 | Japan Tobacco Inc. | 粉体を用いて形質転換効率を向上させる方法 |
| US8324456B2 (en) | 2005-12-13 | 2012-12-04 | Japan Tobacco Inc. | Method for improving transformation efficiency using powder |
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