JPS61265022A - イネプロトプラストからの植物体の再生方法 - Google Patents
イネプロトプラストからの植物体の再生方法Info
- Publication number
- JPS61265022A JPS61265022A JP60106887A JP10688785A JPS61265022A JP S61265022 A JPS61265022 A JP S61265022A JP 60106887 A JP60106887 A JP 60106887A JP 10688785 A JP10688785 A JP 10688785A JP S61265022 A JPS61265022 A JP S61265022A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- protoplasts
- callus
- culture
- plant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
この発明はイネのプロトプラストからのカルスを経た植
物体の再生に関する技術である。
物体の再生に関する技術である。
この発明は植物細胞についての遺伝子組み換え、細胞融
合などのバイオテクノロジーを応用した新品種の開発に
利用される。
合などのバイオテクノロジーを応用した新品種の開発に
利用される。
（従来の技術）
プロトプラストからの植物体再生の技術は、タバコ等の
多くの双子葉植物では完成しているが、主要穀物である
、イネ、コムギ、トウモロコシ等の属するイネ科植物で
は、僅かに牧草やトウモロコシでの例が見られるものの
特にイネについては断片的な例が見られるに過ぎない。
多くの双子葉植物では完成しているが、主要穀物である
、イネ、コムギ、トウモロコシ等の属するイネ科植物で
は、僅かに牧草やトウモロコシでの例が見られるものの
特にイネについては断片的な例が見られるに過ぎない。
従来報告された、イネプロトプラストの培養例において
は、硝酸還元酵素を欠く、細胞より得られたプロトプラ
ストが***してカルスを形成したこと（Ｗａｋａｓａら
（１９８４） Ｊ、Ｐｔａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ。
は、硝酸還元酵素を欠く、細胞より得られたプロトプラ
ストが***してカルスを形成したこと（Ｗａｋａｓａら
（１９８４） Ｊ、Ｐｔａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ。
月７ ： ２２３−２３１ ） 、花粉由来のカルスか
らのプロトプラストからカルスを形成し、芽を形成した
こと（大野ら（１９８５）育種学雑誌３５（別１）：５
４−５５）が報告されている。後者の例では芽は生長せ
ず、完全な植物体を得るに至っていない。
らのプロトプラストからカルスを形成し、芽を形成した
こと（大野ら（１９８５）育種学雑誌３５（別１）：５
４−５５）が報告されている。後者の例では芽は生長せ
ず、完全な植物体を得るに至っていない。
一方でイネの培養細胞から植物体を再生させることはす
でに多くの研究者から報告されているところではあるが
（Ｎｉｓｈｉら（１９６８）Ｎａｔｕｒｅ ２１９ 。
でに多くの研究者から報告されているところではあるが
（Ｎｉｓｈｉら（１９６８）Ｎａｔｕｒｅ ２１９ 。
５０Ｂ−５０９＞ 、そのような植物体に再生しやすい
細胞材料はプロトプラスト化しにくく、また培養も困難
であった。
細胞材料はプロトプラスト化しにくく、また培養も困難
であった。
プロトプラストの培養法については溶解した寒天培地に
流し込む方法や、液体培地に懸濁する方法、フィーダー
セルを使用して培養する方法等いろいろ工夫がこらされ
てきている。しかしこれら従来技術は、すべてのプロト
プラストに広く一般的に応用できるものは少なく、適当
と思われる条件にプロトプラストとその培地を置いても
必ずしも望み通りにプロトプラストが***し、増殖して
、カルスを形成するとは限らず、プロトプラストの***
停止又は死滅を来してしまうことがあった。
流し込む方法や、液体培地に懸濁する方法、フィーダー
セルを使用して培養する方法等いろいろ工夫がこらされ
てきている。しかしこれら従来技術は、すべてのプロト
プラストに広く一般的に応用できるものは少なく、適当
と思われる条件にプロトプラストとその培地を置いても
必ずしも望み通りにプロトプラストが***し、増殖して
、カルスを形成するとは限らず、プロトプラストの***
停止又は死滅を来してしまうことがあった。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明はプロトプラスト化が困難な、高い分化 能を保
有した細胞を、一定条件で培養することにより、分化能
を低下させることなく、プロトプラスト分離を容易なら
しめ、その得られたプロトプラストを特殊な条件下で培
養する事によって、分化能を低下させることなく、***
増殖せしめ、植物体に、再分化させるものである。
有した細胞を、一定条件で培養することにより、分化能
を低下させることなく、プロトプラスト分離を容易なら
しめ、その得られたプロトプラストを特殊な条件下で培
養する事によって、分化能を低下させることなく、***
増殖せしめ、植物体に、再分化させるものである。
（問題点を解決する為の手段）
１ず第一段階として、分化能の高いカルスを誘導しその
カルスを継代培養する必要がある。この手段として、イ
ネの種子、胚（未熟胚を含む）、幼根より、イーストエ
キストラクト、モルトエキストラクトカゼイン加水分解
物をｏ、ｏ ｉ〜１係もしくは、ポテトエクストラクト
を５〜２０％含有し、植物ホルモンである、２．４−Ｄ
０．１〜１０．０７１１９／ｌとベンジルアデニン
（ＢＡ）もしくはカイネチンＯ〜５．０ ｍ９／ ｔの
範囲で含有するＭＳ （Ｍｕｒａｓｈ ｉ −ｇｅ ＆
Ｓｋｏｏｇ（１９６，２） Ｐｈｙｓｉｏｌ、Ｐｌａ
ｎｔ、１５．４７３−４７９ ）、Ｂ５ （Ｇａｍｂｏ
ｒｇら（１９６Ｂ） Ｅｘｐ、Ｇｅ１ｌＲｅｓ、５０．
１５１−１５８）、〜６ （Ｃｈｕら（１９７５） ５
ｃｉｅ−ｎｔｉａ ５ｃｉｎｉｃａ １８．６５９−６
６５）、葦たはＲ２（Ｏｈ−ｉｒａら（１９７３） Ｐ
ｌａｎｔ Ｃｅ１ｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ、１４゜１１１３
−１１２１）の培地でカルスを誘導し誘導と同一条件で
４週間に一度継代培養を行なう、このようにして得られ
たカルスから直接プロトプラストを分離するのは困難な
為に、とのカルスを液体培地で培養するにあたり、留意
する点はなるべく微細な細胞の塊りで培養が行なえかつ
分化能を低下させない条件を確立するという事である。
カルスを継代培養する必要がある。この手段として、イ
ネの種子、胚（未熟胚を含む）、幼根より、イーストエ
キストラクト、モルトエキストラクトカゼイン加水分解
物をｏ、ｏ ｉ〜１係もしくは、ポテトエクストラクト
を５〜２０％含有し、植物ホルモンである、２．４−Ｄ
０．１〜１０．０７１１９／ｌとベンジルアデニン
（ＢＡ）もしくはカイネチンＯ〜５．０ ｍ９／ ｔの
範囲で含有するＭＳ （Ｍｕｒａｓｈ ｉ −ｇｅ ＆
Ｓｋｏｏｇ（１９６，２） Ｐｈｙｓｉｏｌ、Ｐｌａ
ｎｔ、１５．４７３−４７９ ）、Ｂ５ （Ｇａｍｂｏ
ｒｇら（１９６Ｂ） Ｅｘｐ、Ｇｅ１ｌＲｅｓ、５０．
１５１−１５８）、〜６ （Ｃｈｕら（１９７５） ５
ｃｉｅ−ｎｔｉａ ５ｃｉｎｉｃａ １８．６５９−６
６５）、葦たはＲ２（Ｏｈ−ｉｒａら（１９７３） Ｐ
ｌａｎｔ Ｃｅ１ｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ、１４゜１１１３
−１１２１）の培地でカルスを誘導し誘導と同一条件で
４週間に一度継代培養を行なう、このようにして得られ
たカルスから直接プロトプラストを分離するのは困難な
為に、とのカルスを液体培地で培養するにあたり、留意
する点はなるべく微細な細胞の塊りで培養が行なえかつ
分化能を低下させない条件を確立するという事である。
これらの問題点を解決する方法とし、Ｒ２、〜６又はＭ
ｅの各培地にイーストエキストラクト、モルトエキスト
ラクト、カゼイン加水分解物のいずれかを０１〜１．０
％又はポテトエキストラクトを５〜２゜多含有し、かツ
２．４−Ｄを０１〜１０ｍ９／ｌおよびＢＡもしくはカ
イネチンを０〜５Ｔｎ９／ｌ含有する液体培地で、当液
体培地１に対しｏ、ｏｏｍ〜０．０３の重量の細胞を添
加し１週問おきに継代培養を行う。
ｅの各培地にイーストエキストラクト、モルトエキスト
ラクト、カゼイン加水分解物のいずれかを０１〜１．０
％又はポテトエキストラクトを５〜２゜多含有し、かツ
２．４−Ｄを０１〜１０ｍ９／ｌおよびＢＡもしくはカ
イネチンを０〜５Ｔｎ９／ｌ含有する液体培地で、当液
体培地１に対しｏ、ｏｏｍ〜０．０３の重量の細胞を添
加し１週問おきに継代培養を行う。
このようにして培養された細胞は直径１〜６闘の微少な
塊りで、かつ分化培地に置床した場合分化する能力を示
した。これらの細胞からプロトプラストを遊離させた。
塊りで、かつ分化培地に置床した場合分化する能力を示
した。これらの細胞からプロトプラストを遊離させた。
プロトプラストを遊離させる酵素液の処方を種々検討し
たところ、最も効率良くプロトプラストを遊離させ、か
つプロトプラストの生存率も高いものとして次の酵素液
の処方を得り。すなわち、酵素液としてセルラーゼオノ
ズカＲＳ ４．０％、マセロザイムＲ−１０１，０％、
塩化カルシウム０５％、デキストラン硫酸カリウム塩０
５％および浸透圧調節剤としてマニトール０．４Ｍを含
むものを用い、ｐＨは５５に調整された。
たところ、最も効率良くプロトプラストを遊離させ、か
つプロトプラストの生存率も高いものとして次の酵素液
の処方を得り。すなわち、酵素液としてセルラーゼオノ
ズカＲＳ ４．０％、マセロザイムＲ−１０１，０％、
塩化カルシウム０５％、デキストラン硫酸カリウム塩０
５％および浸透圧調節剤としてマニトール０．４Ｍを含
むものを用い、ｐＨは５５に調整された。
この酵素液中で細胞は４ないし８時間振とぅ培養され多
量のプロトプラストを分離する。プロトプラストを含む
酵素液はナイロン篩でろ過し、未消化の細胞塊を除き、
ろ液は５０７で５分間遠心しプロトプラストを沈澱させ
た。この分離されたプロトプラストを培養するにあたり
従来から行われている培養法を種々試みたがうまくゆか
ず、プロトプラストの安定した***を得る手段として以
下の手段を用いる事°によりこの問題の解決に成功した
。プロトプラストを培養する容器を５０〜２００ミクロ
ンの厚みの所定の浸透圧調節剤を含有する寒天培地でコ
ーティングした後、プロトプラストを含有する培養液を
添加し培養する。これによって培養液の厚さは２００〜
６００ミクロンの厚さとなり、プロトプラストは好気的
条件におかれる。
量のプロトプラストを分離する。プロトプラストを含む
酵素液はナイロン篩でろ過し、未消化の細胞塊を除き、
ろ液は５０７で５分間遠心しプロトプラストを沈澱させ
た。この分離されたプロトプラストを培養するにあたり
従来から行われている培養法を種々試みたがうまくゆか
ず、プロトプラストの安定した***を得る手段として以
下の手段を用いる事°によりこの問題の解決に成功した
。プロトプラストを培養する容器を５０〜２００ミクロ
ンの厚みの所定の浸透圧調節剤を含有する寒天培地でコ
ーティングした後、プロトプラストを含有する培養液を
添加し培養する。これによって培養液の厚さは２００〜
６００ミクロンの厚さとなり、プロトプラストは好気的
条件におかれる。
寒天のコーティングを行わない場合は、培養液はその表
面張力のために球状となり空気との接触面積は減少し、
プロトプラストは比較的嫌気的条件で培養されることに
なる。この違いがプロトプラストの培養に大きな影響を
与えていることが明らかとなった。プロトプラスト培養
のもう一つの問題はどのような培地を使用するかである
が、我々はｐＨを５２９、下に調製したコンディション
培地を使用し、浸透圧調節剤としてイネに従来使用さレ
テいるマニトール、マニトールとシュークロースの混合
物の代わりにシュークロース単独を使用することにより
、プロトプラストの***頻度の向上をはかる事に成功し
た。この培養液は経時的に浸透圧調節剤を含まない培地
で希釈され、ある一定の大きさに成長したカルスは分化
培地に移される前に一度増殖培地に移す。イネのカルス
培養のとき、一般的にカルスを継代するにつれそのカル
スの分化能は極端に低下することが知られており、小さ
なカルスを一定の大きさのカルスに増殖させる間にもそ
の分化能の低下はその後の分化にとって大きな問題とな
る。分化能力を低下させない培地の選定がＭ要な因子と
なり、我々はイーストエキストラクト、モルトエキスト
ラクト、カゼイン加水分解物のいずれかを０１〜１０％
、又はポテトエキストラクトを５〜２０係含有し、かつ
２，４−Ｄ Ｏ，１〜１０ｍ９／ｌ、 ＢＡ又はカ
イネチンＯ〜５ ｍｔｉ ／ ７の範囲で含有するＮ６
、Ｂ５もしくはＦ２の培地でカルスを増殖させる事によ
り問題の解決をはかった。最後にこのカルスから植物体
を分化させるにあたり、イーストエキストラクト、モル
トエキストラクト、カゼイン加水分解物のいずれかを０
１〜１０％、又はポテトエキストラクトを５〜２０チ含
有し、かつＢＡ又はカイネチンをＯ〜１０■／を含有す
るＭＳ培地を採用する事によりその目的を達成できた。
面張力のために球状となり空気との接触面積は減少し、
プロトプラストは比較的嫌気的条件で培養されることに
なる。この違いがプロトプラストの培養に大きな影響を
与えていることが明らかとなった。プロトプラスト培養
のもう一つの問題はどのような培地を使用するかである
が、我々はｐＨを５２９、下に調製したコンディション
培地を使用し、浸透圧調節剤としてイネに従来使用さレ
テいるマニトール、マニトールとシュークロースの混合
物の代わりにシュークロース単独を使用することにより
、プロトプラストの***頻度の向上をはかる事に成功し
た。この培養液は経時的に浸透圧調節剤を含まない培地
で希釈され、ある一定の大きさに成長したカルスは分化
培地に移される前に一度増殖培地に移す。イネのカルス
培養のとき、一般的にカルスを継代するにつれそのカル
スの分化能は極端に低下することが知られており、小さ
なカルスを一定の大きさのカルスに増殖させる間にもそ
の分化能の低下はその後の分化にとって大きな問題とな
る。分化能力を低下させない培地の選定がＭ要な因子と
なり、我々はイーストエキストラクト、モルトエキスト
ラクト、カゼイン加水分解物のいずれかを０１〜１０％
、又はポテトエキストラクトを５〜２０係含有し、かつ
２，４−Ｄ Ｏ，１〜１０ｍ９／ｌ、 ＢＡ又はカ
イネチンＯ〜５ ｍｔｉ ／ ７の範囲で含有するＮ６
、Ｂ５もしくはＦ２の培地でカルスを増殖させる事によ
り問題の解決をはかった。最後にこのカルスから植物体
を分化させるにあたり、イーストエキストラクト、モル
トエキストラクト、カゼイン加水分解物のいずれかを０
１〜１０％、又はポテトエキストラクトを５〜２０チ含
有し、かつＢＡ又はカイネチンをＯ〜１０■／を含有す
るＭＳ培地を採用する事によりその目的を達成できた。
以下にその実施例を示す。
実施例
１−１．植物体を再生しゃすいカルスの誘導およびその
継代培養 イネ（品種二日本晴）の種子を７０％アルコールに１分
間、次亜塩素酸ナトリウム液（塩素濃度５％）ｌ／１１
ｍ１５分間浸し、滅菌類溜水で６回洗った後、寒天培地
上に植えこんだ。培地はＮ６の基本培地と、２．４−Ｄ
２ ｐｐｍ、 ＢＡ Ｌｐｐｍ、カゼイン加水
分解物０６係からなっている。２６℃３週間培養すると
胚盤からカルスが形成した。このカルスは同一培養条件
下で４週問おきに継代培養した。
継代培養 イネ（品種二日本晴）の種子を７０％アルコールに１分
間、次亜塩素酸ナトリウム液（塩素濃度５％）ｌ／１１
ｍ１５分間浸し、滅菌類溜水で６回洗った後、寒天培地
上に植えこんだ。培地はＮ６の基本培地と、２．４−Ｄ
２ ｐｐｍ、 ＢＡ Ｌｐｐｍ、カゼイン加水
分解物０６係からなっている。２６℃３週間培養すると
胚盤からカルスが形成した。このカルスは同一培養条件
下で４週問おきに継代培養した。
７０係アルコールで１分間滅菌後、滅菌水で洗った後、
未熟な肝をとり出し、寒天培地に植えこんだ。培地は、
２．４−Ｄ ２ｆ）ｐｍｓイーストエクストラクト０３
係およびＭＥＴの培地成分からなっている。
未熟な肝をとり出し、寒天培地に植えこんだ。培地は、
２．４−Ｄ ２ｆ）ｐｍｓイーストエクストラクト０３
係およびＭＥＴの培地成分からなっている。
２６℃で３週間培養するとカルスが形成した。このカル
スは同一培養条件下で４週問おきに継代培養された。
スは同一培養条件下で４週問おきに継代培養された。
１−■、植物体を再生しゃすいカルスの誘導およびその
継代培養 滅菌したイネ種子（品種コシヒカリ）を寒天のみを含む
培地上に植えこんだ。１週間後、生長した幼根を切り取
り、新な寒天培地上に植えこんだ、この培地は、２．４
−Ｄ ２ｐｐｍおよびＢ５の培地成分からなっている。
継代培養 滅菌したイネ種子（品種コシヒカリ）を寒天のみを含む
培地上に植えこんだ。１週間後、生長した幼根を切り取
り、新な寒天培地上に植えこんだ、この培地は、２．４
−Ｄ ２ｐｐｍおよびＢ５の培地成分からなっている。
カルスの形成には、２６℃で、６週間必要であった。誘
導されたカルスは同−条件下で継代培養された。
導されたカルスは同−条件下で継代培養された。
２、誘導されたカルスの液体培養
１−１．■および■の条件の寒天培地で継代培養された
カルスは第１表からなる液体培地中で継代培養した。細
胞は１００ｍＪフラスコ中の３０ｍ／の液体培地中で、
１分間当り７０回の割合で回転する回転培養器上で培養
した。植え継ぎは１週間に１度おこなった。
カルスは第１表からなる液体培地中で継代培養した。細
胞は１００ｍＪフラスコ中の３０ｍ／の液体培地中で、
１分間当り７０回の割合で回転する回転培養器上で培養
した。植え継ぎは１週間に１度おこなった。
第１表、液体培地の処方
液体培地中で培養された、継代培養後７日目の細胞を材
料とした。プロトプラストを単離するための酵素液は、
セルラーゼオノズ力ＲＳ ４． ｏ ％、マセロザイム
１０％、塩化カルシウム０５チ、デキストラン硫酸カリ
ウム塩０５チ、マニトール０．４Ｍからなり、ｐＨを５
５に合せた。
料とした。プロトプラストを単離するための酵素液は、
セルラーゼオノズ力ＲＳ ４． ｏ ％、マセロザイム
１０％、塩化カルシウム０５チ、デキストラン硫酸カリ
ウム塩０５チ、マニトール０．４Ｍからなり、ｐＨを５
５に合せた。
この酵素液中で２７℃で６時間振とうし、プロトプラス
トを得た。プロトプラストを含む酵素液はナイロン篩で
口過し、未消化の細胞塊を除き、通過した液体を５０７
５分間遠心し、プロトプラストを沈澱させた。沈澱した
プロトプラストを０．４Ｍブドウ糖溶液で６回洗い、培
養に供した。
トを得た。プロトプラストを含む酵素液はナイロン篩で
口過し、未消化の細胞塊を除き、通過した液体を５０７
５分間遠心し、プロトプラストを沈澱させた。沈澱した
プロトプラストを０．４Ｍブドウ糖溶液で６回洗い、培
養に供した。
５、プロトプラストの培養培地の調整（コンディション
培地）この実験例で液体培養されている継代培養後、４
ないし７１目の細胞懸濁液を口過し培養液を得、この培
養口液１０ｍ１に２．４−Ｄ １００ ｐｐｍ液を５０
μｔ１ およびしよ糖を加えた後ｐＨを４．５になる
ように０．１Ｎ Ｈ’ｃｔで調整した。この培地に新
しく作製された同一組成の培地、すなわちＲ２培地で液
体培養されている場合、Ｒ２培地を前記の４に対して１
の量添加する。この際、新しく作製され１ま た培地には０．４ Ｍのしよ糖が含有されている。
培地）この実験例で液体培養されている継代培養後、４
ないし７１目の細胞懸濁液を口過し培養液を得、この培
養口液１０ｍ１に２．４−Ｄ １００ ｐｐｍ液を５０
μｔ１ およびしよ糖を加えた後ｐＨを４．５になる
ように０．１Ｎ Ｈ’ｃｔで調整した。この培地に新
しく作製された同一組成の培地、すなわちＲ２培地で液
体培養されている場合、Ｒ２培地を前記の４に対して１
の量添加する。この際、新しく作製され１ま た培地には０．４ Ｍのしよ糖が含有されている。
６ブロトプラストの培養
寒天で底面を薄くコーティングされた直径６５ｍｍのプ
ラスティック製シャーレに２００μｔの培地を入れ、さ
らに３０μＬのプロトプラスト懸濁液を加え均一に広げ
た。シャーレはシールした後、暗所２７℃で培養した。
ラスティック製シャーレに２００μｔの培地を入れ、さ
らに３０μＬのプロトプラスト懸濁液を加え均一に広げ
た。シャーレはシールした後、暗所２７℃で培養した。
約１週間で最初の***が観察され、約１カ月で大きさ約
１００μｍの小細胞塊を形成した。（第２表）この時点
でシャーレに２００μｔの同一組成でショ糖濃度を３％
に減じた培地を加えた。さらに２週間後に同様の操作を
行った。
１００μｍの小細胞塊を形成した。（第２表）この時点
でシャーレに２００μｔの同一組成でショ糖濃度を３％
に減じた培地を加えた。さらに２週間後に同様の操作を
行った。
培養開始後約２カ月で、直径１關程度の小カルスに葦で
成長した。
成長した。
第２表、培養１週間後の１シャーレ当りの小細胞塊≠Ｃ
Ｈ：カゼイン加水分解物 ＹＥ：イーストエキストラクト ＭＥ：モルトエキストラクト ＰＥ：ポテトエキストラクト ７カルスの増殖 プロトプラスト培養容器中で形成したカルスをカルス増
殖培地に移し、カルスを増殖させた。
Ｈ：カゼイン加水分解物 ＹＥ：イーストエキストラクト ＭＥ：モルトエキストラクト ＰＥ：ポテトエキストラクト ７カルスの増殖 プロトプラスト培養容器中で形成したカルスをカルス増
殖培地に移し、カルスを増殖させた。
用いた増殖培地およびカルスの増殖速度は第６表に示し
た。
た。
第５表 使用した増殖培地とその増殖速度土二あまり成
長しない ８、植物体の再分化 カルス増殖用培地上で増殖したカルスを、第４表の培地
で植物体の再生を誘導した。
長しない ８、植物体の再分化 カルス増殖用培地上で増殖したカルスを、第４表の培地
で植物体の再生を誘導した。
移殖後約１週間で緑色のスポットの形成がみられ、約１
カ月で小植物体へと分化した。この小植物体を寒天培地
を含む大型試験管（４Ｑｍｍφ×３０Ｃ１ｌＪへ移殖し
たところ、中型の健全な植物体へと成長した。
カ月で小植物体へと分化した。この小植物体を寒天培地
を含む大型試験管（４Ｑｍｍφ×３０Ｃ１ｌＪへ移殖し
たところ、中型の健全な植物体へと成長した。
第４表 植物体再生培地及び植物体再生ＸＣＨ：カゼイ
ン加水分解物 ＹＥ：イーストエキストラクト ＭＥ：モルトエキストラクト ＰＥ：ポテトエキストラクト ウ 第６表の培地番号参照 ※ ◎：比較的良く再生 ○：再再生みられた ×：再生がみられなかった
ン加水分解物 ＹＥ：イーストエキストラクト ＭＥ：モルトエキストラクト ＰＥ：ポテトエキストラクト ウ 第６表の培地番号参照 ※ ◎：比較的良く再生 ○：再再生みられた ×：再生がみられなかった
Claims (1)
- イネ種子の胚、胚盤又は幼根から誘導したカルスを液体
培養し、その懸濁細胞からプロトプラストを単離し、培
養し、再び形成させたカルスを分化培地上に移植するこ
とによりイネ植物体を再生させる方法
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60106887A JPS61265022A (ja) | 1985-05-21 | 1985-05-21 | イネプロトプラストからの植物体の再生方法 |
| CA000509543A CA1288713C (en) | 1985-05-21 | 1986-05-20 | Method of regenerating rice plant from protoplasts |
| KR1019860003908A KR890004024B1 (ko) | 1985-05-21 | 1986-05-20 | 원형질체로 부터 벼 식물체의 재생방법 |
| EP86106889A EP0202667A3 (en) | 1985-05-21 | 1986-05-21 | Method of regenerating rice plant from protoplasts |
| CN86103448A CN86103448B (zh) | 1985-05-21 | 1986-05-21 | 由原生质体再生稻株的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60106887A JPS61265022A (ja) | 1985-05-21 | 1985-05-21 | イネプロトプラストからの植物体の再生方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61265022A true JPS61265022A (ja) | 1986-11-22 |
| JPH0459855B2 JPH0459855B2 (ja) | 1992-09-24 |
Family
ID=14445001
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60106887A Granted JPS61265022A (ja) | 1985-05-21 | 1985-05-21 | イネプロトプラストからの植物体の再生方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0202667A3 (ja) |
| JP (1) | JPS61265022A (ja) |
| KR (1) | KR890004024B1 (ja) |
| CN (1) | CN86103448B (ja) |
| CA (1) | CA1288713C (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6265680A (ja) * | 1985-09-19 | 1987-03-24 | Norin Suisansyo Nogyo Seibutsu Shigen Kenkyusho | プロトプラスト培養によるイネ科穀物の育種方法 |
| JPH01196239A (ja) * | 1988-02-02 | 1989-08-08 | Mitsui Toatsu Chem Inc | イネのサイブリッド植物の作出方法 |
| JPH03119938A (ja) * | 1989-09-30 | 1991-05-22 | Naasarii Technol:Kk | イネカルスからの植物体の再分化方法 |
| JP2011172562A (ja) * | 2010-02-01 | 2011-09-08 | Kanazawa Univ | 赤かび病抵抗性植物の作製方法およびその利用 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61265086A (ja) * | 1985-05-21 | 1986-11-22 | Mitsui Toatsu Chem Inc | プロトプラストの培養法 |
| JPS61265087A (ja) * | 1985-05-21 | 1986-11-22 | Mitsui Toatsu Chem Inc | プロトプラストの培養方法 |
| US5250433A (en) * | 1986-09-20 | 1993-10-05 | Mitsubishi Kasei Corporation | Gramineous hybrid plants and process for preparing them |
| US5360725A (en) * | 1988-02-02 | 1994-11-01 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Method of producing rice cybrid cells |
| WO1990004027A1 (en) * | 1988-10-07 | 1990-04-19 | Dna Plant Technology Corporation | Regeneration of indica-type rice |
| JPH03247273A (ja) * | 1990-01-17 | 1991-11-05 | Shiseido Co Ltd | イリス属植物のプロトプラストならびにその単離および培養方法 |
| JP2019129705A (ja) * | 2016-03-31 | 2019-08-08 | 日本たばこ産業株式会社 | 植物に物質を導入する方法 |
| CN110169357A (zh) * | 2019-06-18 | 2019-08-27 | 天津市农作物研究所(天津市水稻研究所) | 一种水稻种子的生产方法 |
| CN112106661A (zh) * | 2020-10-10 | 2020-12-22 | 上海市农业生物基因中心 | 颗粒野生稻愈伤组织的超低温保存方法 |
| KR102662243B1 (ko) * | 2020-12-22 | 2024-04-30 | 대한민국 | 감귤 배 유도용 배지 조성물 및 이의 용도 |
-
1985
- 1985-05-21 JP JP60106887A patent/JPS61265022A/ja active Granted
-
1986
- 1986-05-20 KR KR1019860003908A patent/KR890004024B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1986-05-20 CA CA000509543A patent/CA1288713C/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-05-21 EP EP86106889A patent/EP0202667A3/en not_active Withdrawn
- 1986-05-21 CN CN86103448A patent/CN86103448B/zh not_active Expired
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6265680A (ja) * | 1985-09-19 | 1987-03-24 | Norin Suisansyo Nogyo Seibutsu Shigen Kenkyusho | プロトプラスト培養によるイネ科穀物の育種方法 |
| JPH01196239A (ja) * | 1988-02-02 | 1989-08-08 | Mitsui Toatsu Chem Inc | イネのサイブリッド植物の作出方法 |
| JPH03119938A (ja) * | 1989-09-30 | 1991-05-22 | Naasarii Technol:Kk | イネカルスからの植物体の再分化方法 |
| JPH0462694B2 (ja) * | 1989-09-30 | 1992-10-07 | Naasarii Tekunorojii Kk | |
| JP2011172562A (ja) * | 2010-02-01 | 2011-09-08 | Kanazawa Univ | 赤かび病抵抗性植物の作製方法およびその利用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0202667A2 (en) | 1986-11-26 |
| EP0202667A3 (en) | 1988-08-03 |
| CN86103448A (zh) | 1987-01-21 |
| CA1288713C (en) | 1991-09-10 |
| KR860009122A (ko) | 1986-12-20 |
| JPH0459855B2 (ja) | 1992-09-24 |
| KR890004024B1 (ko) | 1989-10-16 |
| CN86103448B (zh) | 1988-06-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ghosh et al. | Plant regeneration from alginate encapsulated somatic embryos of Asparagus cooperi Baker | |
| US5272072A (en) | Method for preparing transformed plant | |
| Ohyama et al. | Flowering haploid plants obtained from protoplasts of tobacco leaves | |
| JPS61265022A (ja) | イネプロトプラストからの植物体の再生方法 | |
| Stamp et al. | Secondary somatic embryogenesis and plant regeneration in cassava | |
| KR890004025B1 (ko) | 원형질체의 배양방법 | |
| JP3673276B2 (ja) | 植物の組織培養および再生方法 | |
| Wernicke et al. | Plant regeneration from leaf protoplasts of haploid Hyoscyamus muticus L. produced via anther culture | |
| Kunitake et al. | Somatic embryogenesis and plant regeneration from protoplasts of asparagus (Asparagus officinalis L.) | |
| Bhojwani et al. | Somatic embryogenesis | |
| Pan et al. | Plant regeneration from mesophyll protoplasts of Echinacea purpurea | |
| Badr-Elden et al. | Isolation and fusion of protoplasts in sugar beet (Beta vulgaris L.) | |
| Nobre et al. | Morphogenesis and regeneration from stomatal guard cell complexes of cotton (Gossypium hirsutum L.) | |
| Giri et al. | Plant biotechnology: practical manual | |
| Pindel | Optimization of isolation conditions of Cymbidium protoplasts | |
| JPH01165316A (ja) | 培養細胞からのワタの再生方法 | |
| Nirmal Babu et al. | Protocols for improvement of black pepper (Piper nigrum L.) utilizing biotechnological tools | |
| Shizukawa et al. | A simple and efficient plant regeneration system for leaf protoplasts of Nierembergia repens by inducing single shoots on the microcolonies | |
| JP2773062B2 (ja) | ミカン科植物の大量急速増殖法 | |
| US4880744A (en) | Method of culturing protoplasts | |
| JP3069694B1 (ja) | 針葉樹不定胚の培養方法 | |
| JP2931675B2 (ja) | シクラメンの不定芽の増殖用培地および増殖方法 | |
| JP3080784B2 (ja) | フウロソウの大量増殖方法 | |
| Gupta | Regeneration of plants from mesophyll protoplasts of ground-cherry (Physalis minimal L.) | |
| JPH0585135B2 (ja) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |