JPH11240842A

JPH11240842A - プロテアーゼ阻害剤

Info

Publication number: JPH11240842A
Application number: JP10058905A
Authority: JP
Inventors: Akira Ito; 明伊藤; Yuzo Yoshida; 雄三吉田
Original assignee: Shiseido Co Ltd
Current assignee: Shiseido Co Ltd
Priority date: 1998-02-24
Filing date: 1998-02-24
Publication date: 1999-09-07

Abstract

(57)【要約】【課題】プラスミンの活性変化が認められる接触性皮
膚炎、乾癬、尋常性天疱瘡、先天性水疱瘡等や肌荒れを
伴う種々の皮膚疾患の他、健常人の肌荒れ、荒れ性等の
改善・予防に優れた効果を有するプロテアーゼ阻害剤を
提供する。【解決手段】ブドウ科（Vitaceae）ブドウ属（Viti
s）に属する植物、特にブドウ葉の溶媒抽出物を有効成
分とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はプロテアーゼ阻害剤
に関し、さらに詳しくは、患部においてセリンプロテア
ーゼ、特にプラスミンの活性変化が認められる接触性皮
膚炎、乾癬、尋常性天疱瘡、先天性水疱瘡等の種々の皮
膚疾患の他、乾燥や洗浄剤等によって惹起される肌荒
れ、荒れ性に対して改善、予防効果を有し、また止血剤
としても利用可能なプロテアーゼ阻害剤に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】従来
より、皮膚疾患や肌荒れに対して改善・予防効果を有す
るものとして種々の治療薬、皮膚外用剤、化粧料等が知
られている。これら従来の薬剤や化粧料等における有効
成分としては、抗炎症作用を有する、あるいは保湿効果
の高いアミノ酸や多糖、脂質、抽出エキス等が、皮膚の
炎症や角質層の水分の消失を防ぐ能力に優れているため
に用いられてきた。しかしながらいずれにおいてもその
肌荒れ改善・予防効果は必ずしもすべての事例において
十分であるとはいえず、疾患の原因に応じてより優れた
薬効剤の開発が期待されていた。

【０００３】一方、近年種々の皮膚疾患の病像形成には
プラスミンが関与していることが明らかにされつつあ
る。例えば炎症性異常角化性疾患の代表である乾癬で
は、その患部表皮において高いプラスミノーゲンアクチ
ベーター（Plasminogen activator: ＰＡ）活性が認め
られている。ＰＡはプラスミノーゲンに特異的に働いて
それを活性なプラスミンに変換する因子で、この因子の
代表例の１つにセリンプロテアーゼ等のプロテアーゼが
挙げられる。このＰＡ活性と皮膚疾患との関係について
は、例えば、乾癬表皮の特に錯角化部位に強いＰＡ活性
が存在することの報告（Haustein:Arch.Klin.Exp.Derma
tol;234,1969）や、乾癬鱗屑から高濃度の塩溶液を用い
てＰＡを抽出したという報告(Fraki, Hopsu-Havu:Arch.
Dermatol.Res;256,1976)がなされている。また、尋常性
天疱瘡においては表皮細胞内で多量に合成されたＰＡ
が、細胞外に存在するプラスミノーゲンをプラスミンに
転換し、これが細胞間結合物質を消化することにより細
胞間に組織液が貯留して表皮内水疱が形成されること
が、in vitroの実験系において明らかにされている(Mor
iokaS.:J.Invest.Dermatol;76,1981)。

【０００４】またプラスミンは、角質層形成など表皮の
正常な角化過程においても重要な役割を果たしていると
考えられており(Ogawa H.,Yoshiike T.:Int.J.Dermato
l;23,1984) 、肌改善あるいは皮膚疾患の治療薬とし
て、抗プラスミン剤を用いる試みがなされるようになっ
てきている。

【０００５】

【課題を解決するための手段】上述のような現況に鑑
み、本発明者らはプラスミン活性阻害物質が種々の皮膚
疾患、肌荒れ、荒れ性等の改善に有効であると考え、広
く種々の物質について抗プラスミン活性を調べた結果、
ブドウ科ブドウ属に属する植物の抽出物が優れた抗プラ
スミン活性を有していることを見い出し、これに基づき
本発明を完成するに至った。

【０００６】すなわち本発明は、ブドウ科（Vitaceae）
ブドウ属（Vitis）に属する植物の溶媒抽出物を有効成
分とすることを特徴とするプロテアーゼ阻害剤、および
ブドウ科（Vitaceae）ブドウ属（Vitis）に属する植物
の溶媒抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗プラ
スミン剤である。

【０００７】ブドウ科ブドウ属に属する植物またはその
抽出物に関しては、乳化剤、顔料、色素分散剤、毛髪処
理剤、あるいは抗菌性組成物として化粧品原料に用いる
ことは知られているが（特開昭６０−２４６３０５号公
報、特開平２−２８６６０９号公報）、皮膚疾患の病像
形成とプラスミン活性の変化に着目した当該植物抽出物
のプロテアーゼ阻害活性についての報告は、本発明者ら
が知る限りにおいてこれまでにない。

【０００８】以下、本発明について詳述する。本発明に
用いられるブドウ科(Vitaceae)ブドウ属(Vitis) の植物
は、木本性のつる植物で、暖温帯から温帯にかけて約７
０種が知られており、例えば、V.labrusca L. （和名：
アメリカブドウ）、V.vinifera L. （和名：ヨーロッパ
ブドウ）、V.coignetiae P. （和名：ヤマブドウ）、V.
amurensis R.（和名：チョウセンヤマブドウ）等があ
る。

【０００９】本発明に用いられる植物抽出物は、上記植
物の根、葉、樹皮、茎、果実、植物全草等を抽出溶媒と
共に浸漬または加熱還流した後、濾過し、濃縮して得ら
れるが、特にブドウの葉の抽出物が好ましい。抽出溶媒
としては、通常抽出に用いられる溶媒であれば任意に用
いることができ、例えば、メタノール、エタノール等の
アルコール類、含水アルコール、アセトン、酢酸エチル
エステル等の有機溶媒を、単独あるいは組み合わせて用
いることができる。また、抽出物を上記の溶媒を用い、
分配あるいはクロマトグラフィーのごとき精製等の処理
を加えて、得られたものを用いることもできる。

【００１０】本発明のプロテアーゼ阻害剤は主として外
用剤として用いられ、その場合の配合量は、外用剤全量
中、乾燥物として０．００５〜２０．０重量％、好まし
くは０．０１〜１０．０重量％である。０．００５重量
％未満であると、本発明でいう効果が十分に発揮され
ず、２０．０重量％を超えると製剤化が難しいので好ま
しくない。また、１０．０重量％以上配合してもさほど
大きな効果の向上はみられない。

【００１１】本発明のプロテアーゼ阻害剤には、上記必
須成分以外に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用
いられる成分、例えば、美白剤、保湿剤、酸化防止剤、
油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコ
ール類、粉末成分、色材、水性成分、水、各種皮膚栄養
剤等を必要に応じて適宜配合することができる。

【００１２】その他、エデト酸二ナトリウム、エデト酸
三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリ
ウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖
剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム
酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、火棘
の果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、
グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬
剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、
アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の
美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ
糖、トレハロース等の糖類なども適宜配合することがで
きる。

【００１３】本発明のプロテアーゼ阻害剤とは、例えば
軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤
等、従来皮膚外用剤に用いるものであればいずれでもよ
く、剤型は特に問わない。

【００１４】

【実施例】以下に実施例によって本発明をさらに詳細に
説明する。なお、本発明はこれにより限定されるもので
はない。配合量は重量％である。実施例に先立ち、本発
明の植物抽出物の抗プラスミン活性および肌改善効果に
関する試験方法及びその評価基準について説明する。

【００１５】１．抗プラスミン試験（１）試料の調製 V.labrusca L.（和名：アメリカブドウ）の葉５０ｇ
（乾燥重量）を室温で１週間、５倍量のエタノールに浸
漬し、抽出液を濃縮乾固した。この固形物をジメチルス
ルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、３％溶液を作成し
た。これを用いて以下の実験を行った。

【００１６】（２）抗プラスミン活性の測定フィブリン平板法にて阻害率（％）を求めた。すなわち
１．０％のプラスミノーゲン除去フィブリノーゲンを含
むベロナール緩衝液（０．１２５Ｍ−ＮａＯＨを含む２
５ｍＭバルビタール酸ナトリウム水溶液，ｐＨ７．４）
６ｍｌを９ｃｍφシャーレに注ぎ、そこに１．０Ｍ−Ｃ
ａＣｌ₂を０．２ｍｌと２５Ｕ／ｍｌのトロンビン０．
１ｍｌを加えて静かに混和し、１時間放置した。フィブ
リノーゲンがフィブリンに変化することによって形成さ
れた平板上に、５Ｕ／ｍｌのプラスミンと被験物質を２
９：１の割合で混合した混合物を、３７℃で１０分間保
温した後２０μｌ添加し、さらに３７℃で１８時間放置
した。対照として被験試料の替わりにＤＭＳＯを用いて
同様の操作を行い、その後、フィブリンが溶解して形成
された溶解円の面積を測定し、下記の数式１：

【００１７】

【数１】阻害率（％）＝１−（被験試料の溶解円面積／
対照の溶解円面積）

【００１８】によりプラスミン阻害率を求めた。結果を
表１に示す。

【００１９】また、参考例として、抗プラスミン作用を
有するとされ、すでに肌荒れに対する適用が知られてい
る植物であるオオバク（Phellodendron amurense Rupre
cht）のエタノール抽出物についても上記と同様の試験
を行った。その結果を併せて表１に示す。

【００２０】

【表１】 ────────────────────────── 試料添加濃度阻害率（％） ────────────────────────── アメリカブドウ葉抽出物 0.1 ％ 67.2 0.01％ 33.7 オオバク抽出物 0.1 ％ 16.2 0.01％ 8.5 ──────────────────────────

【００２１】表１から分かるように、アメリカブドウ葉
抽出物は、オオバク抽出物に比べ、格段に優れた抗プラ
スミン活性を有することがわかる。

【００２２】２．実使用試験（１）カミソリ負けに対する改善効果試験本発明に係わるプロテアーゼ阻害剤の外皮適用による効
果を、カミソリ負けに対する改善率、ならびに皮膚刺激
性から評価した。

【００２３】なお試料としては、表２に示すように、本
発明品としてヨーロッパブドウ(V.vinifera L.) の葉の
５０％エタノール抽出物の濃度を変えたローションを２
種、比較品として、すでに肌荒れに対する適用が知られ
ているオオバクの５０％エタノール抽出物を配合したロ
ーションと、ヨーロッパブドウ葉抽出物およびオオバク
抽出物を除いたローションを用いた。結果を併せて表２
に示す。

【００２４】［カミソリ負けに対する改善率］カミソリ
負けする男性パネル４０名を１０名ずつ４群に分け、ひ
げ剃り直後に表２に示す本発明品もしくは比較品を塗布
し、カミソリ負けに対する効果を判定した。判定基準及
び評価は以下の通りとした。

【００２５】＜カミソリ負けに対する改善効果の判定基
準＞著効：カミソリ負けの消失したもの。有効：カミソリ負けの弱くなったもの。やや有効：カミソリ負けがやや弱くなったもの。無効：カミソリ負けに変化を認めないもの。

【００２６】＜カミソリ負けに対する改善効果の評価＞ ◎：被験者が著効、有効及びやや有効を示す割合（有効
率）が８０％以上。 ○：被験者が著効、有効及びやや有効を示す割合（有効
率）が５０％以上，８０％未満。 △：被験者が著効、有効及びやや有効を示す割合（有効
率）が３０％以上，５０％未満。 ×：被験者が著効、有効及びやや有効を示す割合（有効
率）が３０％未満。

【００２７】［皮膚刺激性］上記のカミソリ負けに対す
る改善率の判定に際し、本発明品と比較品の皮膚刺激性
について判定、評価した。評価基準は以下の通りとし
た。＜皮膚刺激性の評価＞ ◎：肌にヒリヒリ感を認めた被験者の割合が０％ ○：肌にヒリヒリ感を認めた被験者の割合が５％未満 △：肌にヒリヒリ感を認めた被験者の割合が１０％未満 ×：肌にヒリヒリ感を認めた被験者の割合が１０％以上

【００２８】

【表２】 ────────────────────────────────── 本発明品比較品 ────── ─────── 試料１２１２ ────────────────────────────────── ヨーロッパブドウ葉50％エタノール抽出物 3.0 1.0 − − オオバク50％エタノール抽出物 − − 3.0 − グリセリン 1.0 1.0 1.0 1.0 １，３−ブチレングリコール 4.0 4.0 4.0 4.0 エタノール 7.0 7.0 7.0 7.0 ポリオキシエチレン（２０モル）オレイルアルコール 0.5 0.5 0.5 0.5 精製水残余残余残余残余 ────────────────────────────────── カミソリ負け防止効果 ○ ○ △ × 皮膚刺激性 ◎ ◎ ◎ ◎ ──────────────────────────────────

【００２９】表２から明らかなように、ヨーロッパブド
ウ葉抽出物を１．０重量％以上配合した本発明品のロー
ションは、比較品のローションよりもカミソリ負けに対
して優れた改善効果を示し、さらに皮膚刺激性も認めら
れなかった。

【００３０】（２）レプリカ法による実使用試験本発明品１，２と比較品１，２のローションを用いて、
人体パネルで肌荒れ改善効果試験を行った。即ち、女性
健常人（顔面）の皮膚表面形態をミリスン樹脂によるレ
プリカ法を用いて肌のレプリカを取り、顕微鏡（１７
倍）にて観察した。皮紋の状態及び角層の剥離状態から
以下に示す判定基準に基づいて肌荒れ評価１、２と判断
されたもの（肌荒れパネル）２０名を用い、顔面左右半
々に、本発明品１，２と比較品１，２のローションを１
日１回、２週間塗布した。２週間後、再び上述のレプリ
カ法にしたがって肌の状態を観察し、判定基準にしたが
って評価した。その結果を表３に示す。

【００３１】＜レプリカ判定基準＞１：皮溝、皮丘の消失、広範囲の角層のめくれが認め
られる。２：皮溝、皮丘が不鮮明、角層のめくれが認められ
る。３：皮溝、皮丘は認められるが、平坦。４：皮溝、皮丘が鮮明。５：皮溝、皮丘が鮮明で整っている。

【００３２】

【表３】 ──────────────────────────────── レプリカ評価本発明品１本発明品２比較品１比較品２ ──────────────────────────────── １０００３２１３５７３６７８８４８８６２５５２１０ ─────────────────────────────────

【００３３】表３から判るように、本発明品のローショ
ンは比較品のローションと比較し、顕著な肌荒れ改善効
果が認められた。

【００３４】以下に、種々の剤型の本発明によるプロテ
アーゼ阻害剤の配合例を実施例として説明する。

【００３５】実施例１クリーム（処方）重量％ステアリン酸５．０ステアリルアルコール４．０イソプロピルミリステート１８．０グリセリンモノステアリン酸エステル３．０プロピレングリコール１０．０ヤマブドウ葉エタノール抽出物０．０５苛性カリ０．２亜硫酸水素ナトリウム０．０１防腐剤適量香料適量イオン交換水残余（製法）イオン交換水にプロピレングリコールとヤマブ
ドウ葉エタノール抽出物と苛性カリを加え溶解し、加熱
して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解
して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を徐々に加え、
全部加え終わってからしばらくその温度に保ち反応を起
こさせる。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よく
かきまぜながら３０℃まで冷却する。

【００３６】実施例２クリーム（処方）重量％ステアリン酸２．０ステアリルアルコール７．０水添ラノリン２．０スクワラン５．０２−オクチルドデシルアルコール６．０ポリオキシエチレン（２５モル）セチルアルコールエーテル３．０グリセリンモノステアリン酸エステル２．０プロピレングリコール５．０チョウセンヤマブドウ葉メタノール抽出物０．１トラネキサム酸０．２亜硫酸水素ナトリウム０．０３エチルパラベン０．３香料適量イオン交換水残余（製法）イオン交換水にプロピレングリコールを加え、
加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱
融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備
乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくか
きまぜながら３０℃まで冷却する。

【００３７】実施例３クリーム（処方）重量％固形パラフィン５．０ミツロウ１０．０ワセリン１５．０流動パラフィン４１．０グリセリンモノステアリン酸エステル２．０ポリオキシエチレン（２０モル）ソルビタンモノラウリル酸エステル２．０石けん粉末０．１硼砂０．２アメリカブドウ葉７０％メタノール抽出物０．３亜硫酸水素ナトリウム０．０３エチルパラベン０．３香料適量イオン交換水残余（製法）イオン交換水に石けん粉末と硼砂を加え、加熱
して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解
して７０℃に保つ（油相）。水相に油相をかきまぜなが
ら徐々に加え反応を行なう。その後、ホモミキサーで均
一に乳化し、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。

【００３８】実施例４乳液（処方）重量％ステアリン酸２．５セチルアルコール１．５ワセリン５．０流動パラフィン１０．０ポリオキシエチレン（１０モル）モノオレイン酸エステル２．０ポリエチレングリコール１５００３．０トリエタノールアミン１．０カルボキシビニルポリマー０．０５（商品名：カーボポール941,B.F.Goodrich Chemical company ）ヨーロッパブドウ葉酢酸エチル抽出物０．０２亜硫酸水素ナトリウム０．０１エチルパラベン０．３香料適量イオン交換水残余（製法）少量のイオン交換水にカルボキシビニルポリマ
ーを溶解する（Ａ相）。残りのイオン交換水にポリエチ
レングリコール１５００とトリエタノールアミンを加
え、加熱溶解した７０℃に保つ（水相）。他の成分を混
合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を
加え予備乳化を行い、Ａ相を加えホモミキサーで均一に
乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却す
る。

【００３９】実施例５乳液（処方）重量％マイクロクリスタリンワックス１．０ミツロウ２．０ラノリン２０．０流動パラフィン１０．０スクワラン５．０ソルビタンセスキオレイン酸エステル４．０ポリオキシエチレン（２０モル）ソルビタンモノオレイン酸エステル１．０プロピレングリコール７．０ヤマブドウ葉３０％ブタノール抽出物２．０トラネキサム酸１．０亜硫酸水素ナトリウム０．０１エチルパラベン０．３香料適量イオン交換水残余（製法）イオン交換水にプロピレングリコールを加え、
加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱
融解して７０℃に保つ（油相）。油相をかきまぜながら
水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化した後、
よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。

【００４０】実施例６ゼリー（処方）重量％９５％エチルアルコール１０．０ジプロピレングリコール１５．０ポリオキシエチレン（５０モル）オレイルアルコールエーテル２．０カルボキシビニルポリマー０．０５（商品名：カーボポール940,B.F.Goodrich Chemical company ）苛性ソーダ０．１５Ｌ−アルギニン０．１アメリカブドウ葉３０％エタノール抽出物１．０亜硫酸水素ナトリウム０．０１エチルパラベン０．３香料適量イオン交換水残余（製法）イオン交換水にカーボポール９４０を均一に溶
解し、一方、９５％エタノールにアメリカブドウ葉抽出
物、ポリオキシエチレン（５０モル）オレイルアルコー
ルエーテルを溶解し、水相に添加する。次いで、その他
の成分を加えた後苛性ソーダ、Ｌ−アルギニンで中和さ
せ増粘する。

【００４１】実施例７パック（処方）重量％（Ａ相）ジプロピレングリコール５．０ポリオキシエチレン（６０モル）硬化ヒマシ油５．０（Ｂ相）オリーブ油５．０酢酸トコフェロール０．２エチルパラベン０．２香料０．２（Ｃ相）亜硫酸水素ナトリウム０．０３ポリビニルアルコール（けん化度90、重合度2,000）１３．０エチルアルコール７．０ヤマブドウ葉50％ 1,3-ブチレングリコール抽出物１０．０精製水残余（製法）Ａ相、Ｂ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ
相を加えて可溶化する。次いでブドウ葉抽出物を分散さ
せたＣ相をこれに加えた後充填を行なう。

【００４２】

【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
プラスミンの活性変化が認められる接触性皮膚炎、乾
癬、尋常性天疱瘡、先天性水疱瘡等や肌荒れを伴う種々
の皮膚疾患の他、健常人の肌荒れ、荒れ性等の改善・予
防に優れた効果を有するプロテアーゼ阻害剤を提供する
ことができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 7/48 Ａ６１Ｋ 7/48

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ブドウ科（Vitaceae）ブドウ属（Viti
s）に属する植物の溶媒抽出物を有効成分とすることを
特徴とするプロテアーゼ阻害剤。
【請求項２】ブドウ科（Vitaceae）ブドウ属（Viti
s）に属する植物の葉の溶媒抽出物である請求項１記載
のプロテアーゼ阻害剤。
【請求項３】ブドウ属に属する植物の溶媒抽出物の配
合量が０．００５〜２０．０重量％である請求項１また
は２記載のプロテアーゼ阻害剤。
【請求項４】ブドウ科（Vitaceae）ブドウ属（Viti
s）に属する植物の溶媒抽出物を有効成分とすることを
特徴とする抗プラスミン剤。