JPH10510250A

JPH10510250A - Ｎｉｒ光を利用したイン・ビボ診断のための方法

Info

Publication number: JPH10510250A
Application number: JP8517228A
Authority: JP
Inventors: リーヒャ，カイ; リーフケ，ブヨム; ゼンムラー，ヴォルフハルト; シュペック，ウルリッヒ; ヒルゲル，クリストフ−シュテファン
Priority date: 1994-12-07
Filing date: 1995-10-10
Publication date: 1998-10-06
Also published as: DE59510658D1; US20030026763A1; ATE238071T1; IL141384A0; NO20053239L; DE59510982D1; AU3740995A; US6083485A; CA2205906C; DE4445065A1; JP3836687B2; US20050169844A1; CA2205906A1; NO972509L; US7025949B2; US20100129293A1; NO972509D0; CN1089008C; US20030170179A1; JP2010065036A

Abstract

(57)【要約】本発明は、近赤外線の範囲における蛍光診断および徹照診断における造影剤、新染色剤およびこれらを含有する薬剤として、特定の光物理学的および薬物化学的性質を有する水溶性染色剤およびその生体分子加成体の使用下において近赤外線（ＮＩＲ光）を利用したイン・ビボ（生体内）診断のための方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】ＮＩＲ光を利用したイン・ビボ診断のための方法本発明は、近赤外線の範囲における蛍光診断および徹照診断における造影剤、新染色剤およびこれらを含有する薬剤として、特定の光物理学的および薬物化学的性質を有する水溶性染色剤およびその生体分子加成体の使用下において近赤外線（ＮＩＲ光）を利用したイン・ビボ（生体内）診断のための方法に関する。疾病の識別は、その本質的な部分において、第一に達することができないより深い組織層の構造とその変化に関する情報の獲得にどの程度成功するか、に依存している。これは、触診、切開または穿刺のほかに、レントゲンのような最新の画像提供方法、磁気共鳴断層撮影法または超音波診断法によりおこなうことができる。生物組織は、波長６５０−１０００ｎｍの範囲の長波光に対し、比較的高い透過性を有するので、これにより診断医には画像による組織表示のために全く別の方法が提供される。近赤外線光が組織に数センチメートルまで透過できるという事実は、徹照法の画像提供に使用される。この技術は、これまで副鼻腔および上顎洞の炎症の診断または表皮近傍の組織部位における体液の蓄積または血液の検出を可能にする（Beuthan J.、Mueller G．；Infrarotdiaphanostopie、Med．Tech ．1（1992）13-17 頁）。肺腫瘍を識別するための実験は、これまで満足のいく結果が得られていない（Na varro、G．A；Profico、A．E：Contrast in diaphanography of the breast；Me d.Phys．150（1988）181-187頁；Aspegren、K．；Light Scanning Versus Mammo graphy for the Detection of Breast Cancer in Screening and Clinical Prac tice、Cancer 65（1990）1671-77頁）。しかし、最新の装置技術の開発に基づいて、より優れた成果が約束されている（Klingenbeck、J．；Laser-Mammography with NIR-Light、Gynaekol.-Geburtsh.-Rundsch．33 Suppl.１（1993）299-300 頁）；Benaron D．A；Optical Imaging reborn with technical advances、Diag nostic Imaging（1994）69-76 頁）。吸収されない照射を検出するほかに、近赤外線光を照射した後に放出された蛍光線は、組織固有の情報を提供することができる。このいわゆる自家蛍光は、通常の組織からアテローム硬化症の組織を区別するために利用される（Henry、P．D et.al．。Laser-Induced Autofluorescence of Human Arteries、Circ．Res．63 （1988）1053-59頁）。近赤外線を利用するときの本質的な問題は、光線が極めて激しく散乱することにあり、この結果、光物理学的性質が異なる場合でさえ、厳密に分画された対象が、その周囲から不鮮明に浮き上がるだけである。この問題は、表面からの距離が増すにつれて増大し、かつ、徹照法の場合でも、蛍光線の検出の場合でも、主たる制限要因と見なすことができる。通常の組織と疾病組織との間の差を改善するために、疾病組織（特に腫瘍）において富化され、かつ、特殊の吸収および放射特性を有する、適切な蛍光染色剤が寄与することができる。染色剤の吸収により生ずる（散乱した）照射光または励起放射により誘発された蛍光が検出され、かつ、本来の組織固有の情報を提供する。人間の場合のイン・ビボ診断のための染色剤の適用例は、分散空間、出血または物質代謝および***機能を識別するための光度計測法による血中での追跡と、眼の透視構造の可視化である（眼科学）。この適用のための好ましい染色剤は、インドシアニングリーンと蛍光染色剤である（Googe、J．M．et.al．：Intraopera tive Fluorescein Angiography；Ophtalmology、100、（1993）1167-70頁）。インドシアニングリーン（カルジオグリーン）は、肝機能、心拍および鼓動数の測定ならびに臓器とその周辺の血液供給の測定に使用され（I．Med．24（1993） 10-27 頁）、かつ、腫瘍検出のための造影剤として試されている。インドシアニングリーンは、アルブミンに１００％結合し、肝臓内で遊離される。水溶性の環境における蛍光量子収率は、わずかである。半数致死線量ＬＤ₅₀（０．８４ｍｍｏｌ／ｋｇ）は十分に高いが、強度の過敏性反応を引き起こす可能性がある。インドシアニングリーンは、溶液中で不安定であり、かつ、沈殿反応をおこすので、含塩溶媒中に加えることはできない。腫瘍の位置の特定と写像のために、これまで光力学的治療（ＰＤＴ）に適用するために考案された光増感剤系（特に、ヘマトポルフィリン誘導体、フォトフィリンＩＩ、ベンゾポルフィリン、テトラフェニルポルフィリン、クロリン、フタロシアニン）が使用された（Bonnett R．：New photosensitizers for the photod ynamic therapy of tumours、SPIE 2078 巻（1994））。上述の化合物は、波長６５０−１２００ｎｍの範囲において、これらの吸収があまり良くない、という共通の欠点をもっている。ＰＤＴのために必要な光毒性は、純粋の診断目的にとっては妨げとなる。この主題に関するその他の文献：米国特許第４９４５２３９号明細書、国際公開番号ＷＯ８４／０４６６５、同ＷＯ９０／１０２１９、ドイツ連邦共和国特許第４１３６７６９号公報、ドイツ連邦共和国特許第２９１０７６０号明細書。米国特許第４９４５２３９号明細書において、徹照法を利用して肺癌を検出するための多数の装置配列が記述されており、かつ、造影を高める吸収染色剤として、公知の蛍光染色剤、フルオレスカミン、およびリボフラビンが挙げられている。これらの染色剤は、組織の光透過率が非常に少ない、波長４００−６００ｎｍの可視領域で吸収するという、共通の欠点をもっている。ドイツ連邦共和国特許第４１３６７６９号公報には、蛍光物質によって富化された組織範囲の蛍光検出のための装置が記述されている。これらの物質は、バクテリオクロロフィルおよびその誘導体、ならびにナフタロシアニン系である。これらの構造は、最大７００００ｌｍｏｌ^-1ｃｍ^-1までの吸光係数を有する７００− ８００ｎｍの範囲における吸収を特徴とする。ここに記述された化合物は、蛍光性質のほかに、照射により単線酸素を発生し、かつ、これにより細胞毒を生ずる能力がある（光力学治療のための光増感剤系）。これらの光増感剤系の作用は、純粋の、作用のない診断にとって絶対に望ましいものではない。さらに、バクテリオクロロフィル化合物の合成は、出発物質として天産物を必要とするので、特に時間がかかり、かつ、高価である。ナフタロシアニン系は、光安定性がしばしば極めて悪いことを特徴とする。これらの種類の公知の化合物は、水溶性が悪く、まとまりのある親水性の誘導体の合成には時間がかかる。国際公開番号ＷＯ８４／０４６６５は、ヘマトポルフィリンおよびその誘導体（ＨｐおよびＨｐＤ）、ウロ−およびコプロ−およびプロトポルフィリンおよび多数のメソ置換ポルフィリン類の光増感剤系、ならびにリボフラビン、蛍光染色剤、アクリジン−オレンジ、硫化ベルベリンおよびテトラシクリン類の染色剤の使用下で、腫瘍を蛍光検出するためのイン・ビボ法を記述している。上述の光物理学的および薬物化学的な要件は、前述の物質によっては満たされない。Ｆｏｌｌｉｅｔ．ａｌ．は、ＣａｎｓｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ５４、２６４３−２６４９頁（１９９４）に、皮下に種植した腫瘍を検出するために使用された、シアニン染色剤と結合したモノクロナール抗体を記述している。ただし、より深層に存在する病理学的進行を検出するためには、別の改質された染色剤を使用する必要がある。さらに、多量の染色剤の配量では、予想し得る副作用のために、担体としての抗体の使用が不適切であると見なされている。シアニン染色剤およびこれと同系のポリメチン染色剤は、断層写真の成分としても使用される。これらの染色剤は、発光する性質を必要としない。発光（蛍光）性質を有するシアニン染色剤は、蛍光顕微鏡検査法および貫流血球計算法に使用するために合成され、かつ、生体分子に共役されている。たとえば、蛋白類の硫水化物基のための特殊マーカーとしてのヨードアセチル基を有する化合物（Wagg oner、A.S．et.al．：Cyanine dyeLabeling Reagents for Sulfhydryl Groups、 Cytometry 10（1989）3-10頁）。この方法に基づき、蛋白類がマーキングされ、かつ、単離される。その他の文献例：Cytometry 12（1990）723-30頁；Anal．Le tt．25（1992）415-28 頁；Bioconjugate Chem．4（1993）105-11 頁。ドイツ連邦共和国特許第３９１２０４６号公報には、Ｗａｇｇｏｎｅｒ、Ａ．Ｓにより、少なくとも１つのエステル−またはスルホン酸基を含有する、メロシアニン−およびスチリル染色剤のような、シアニン−およびその同系物を有する生体分子をマーキングするための方法が記述されている。前述の文献は、蛋白類またはその他の生体分子類において、染色剤とアミン−、ヒドロキシ−、アルデヒド−またはスルフヒドリル基との間で共有結合反応を引き起こす、水溶性溶媒中の１工程ならびに２工程のマーキング方法に関する。ドイツ連邦共和国特許第３８２８３６０号公報は、眼科学の目的のための蛍光染色剤およびインドシアニングリーンによる、抗腫瘍抗体、特に黒色腫−および結腸癌に固有の抗体のマーキング方法に関する。生体分子へのインドシアニングリーンの結合は、共有結合ではない（染色剤−抗体組合せ、混合）。この結果、先行技術から知られているＮＩＲ光を利用したイン・ビボ診断のための方法は、広範囲の医学診断でこれらの方法の適用で従来不可能であった、一連の欠点を有する。可視光線またはＮＩＲ光の直接の使用は、表皮近傍の身体部位に限定され、これは照射する光線の大幅な散乱を生じさせる。ところが、造影と解像能を改善するための染色剤の添加は、一連の別の問題を引き起こす。すなわち、これらの染色剤には、一般に診断に適用される規範が課されている。たとえば、このような染色剤は、ほとんどの場合、多量に配量され長期の診断期間にわたって投与されるので、極くわずかな毒性のみが認められる。さらに、これらの診断に適した染色剤は、水溶性が良好であり、かつ、十分に、すなわち少なくとも診断期間中は、化学的および光物理学的に安定していなければならない。また、生体内での物質代謝に対する安定性も目的とする必要がある。現在まで、上述のような性質を有する染色剤も、ＮＩＲ光を利用したイン・ビボ診断に適した方法も、提供されていない。したがって、本発明の課題は、先行技術の欠点を克服する、イン・ビボ診断のための方法を構築することである。この課題は、本発明に基づき、一般化学式ＩＢ₁−（Ｆ−Ｗ_n）_m（Ｉ）［式中、１は数字０−６を表し、ｎは数字０−１０を表し、かつ、ｍは数字１− １００を表し、Ｂは特定の細胞群または特にレセプターに結合し、または組織中または腫瘍中に富化され、または主として血中に残留し、または特に結合しない巨大分子である分子量３００００までを有する生物学的識別単位であり、Ｆは、６５０〜１２００ｎｍまでの範囲で最大の吸収を示す染色剤を表し、Ｗは、式Ｉの化合物のｎ−オクタノール−水−分配係数が、１＝０を条件として、２．０より小さくまたは等しい、水溶性を改善する親水基を表す］の化合物ならびにその生理学的に融和性のある塩類が使用される、ＮＩＲ光を利用したイン・ビボ診断のための方法を提供することにより解決される。本発明に基づく方法に特に適した一般式Ｉの化合物は、たとえばＢが、アミノ酸、ペプチド、ＣＤＲ（complementarity determining regions ＝相補性決定部位）、抗原、ハプテン、酵素基質、酵素補助因子、ビオチン、カロチノイド、ホルモン、神経ホルモン、神経伝達物質、成長因子、リンフォカイン、レクチン、トキシン、炭水化物、オリゴ糖類、多糖類、デキストラン、オリゴヌクレオチドまたはレセプター結合薬剤の化合物である。さらに本発明に基づく方法に特に適した一般式Ｉの化合物は、たとえばＦが、一般式ＩＩａのシアニン染色剤を表し、［式中、ｒは、ｒ＝２の場合にその都度２倍存在するフラグメントＬ⁶およびＬ⁷ が等しくもしくは異なることができる条件つきで、数字０，１または２を表し、Ｌ¹ないしＬ⁷が等しくまたは異なり、かつ、互いに独立したフラグメントＣＨまたはＣＲを表し、式中、Ｒはハロゲン原子、ヒドロキシ−、カルボキシ−、アセトキシ−、アミノ −、ニトロ−、シアノ−またはスルホン酸基またはアルキル−、アルケニル−、ヒドロキシアルキル−、カルボキシアルキル−、アルコキシ−、アルコキシカルボニル−、スルホアルキル−、アルキルアミノ−、ジアルキルアミノ−、または６個までの炭素原子を有するハロゲンアルキル残基、アリール−、アルキルアリール−、ヒドロキシアリール−、カルボキシアリール−、スルホアリール−、アリールアミノ−、ジアリールアミノ−、ニトロアリール−または９個までの炭素原子を有するハロゲンアリール残基であり、または式中、Ｒが、もう１つ別の残基Ｒと結合し、かつ、その中間に存在する残基Ｌ¹−Ｌ⁷とともに４員環ないし６員環を形成する化合物を表し、または式中、Ｒはフラグメント−ＣＯ−を介して結合する２種類の配位においてその都度１つの化合物を表し、Ｒ³ないしＲ¹²が等しくまたは異なり、かつ、互いに独立して、１個の水素原子、上述の意味を有する残基ＢまたはＷ、またはアルキル残基または６個までの炭素原子を有するアルケニル残基またはアリール−または９個までの炭素原子を有するアラルキル残基であり、その際、アルキル−、アルケニル−、アリール−またはアラルキル残基が場合により上述の意味を有する１つの残基Ｗで置換され、または式中、その都度２つの互いに隣接する残基Ｒ³ないしＲ¹⁰が、飽和、不飽和または芳香族であり、かつ、場合により上述の意味を有する１つの残基Ｒを有する中間に存在する炭素原子を考慮して、５員環ないし６員環の環状組織であり、ＸおよびＹが等しくまたは異なり、かつ、互いに独立してＯ、Ｓ、ＳｅまたはＴｅを表し、またはフラグメント−Ｃ（ＣＨ₃）₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＲ¹³Ｒ¹⁴−を表し、式中、Ｒ¹³およびＲ¹⁴が互いに独立して、１個の水素原子、上述の意味を有する残基ＢまたはＷまたはアルキル残基または６個までの炭素原子を有するアルケニル残基またはアリール−または９個までの炭素原子を有するアラルキル残基であり、その際、アルキル−、アルケニル−、アリール−またはアラルキル残基が場合により上述の意味を有する１つの残基Ｗで置換され］、一般式ＩＩｂのスクアレン（Squarain）染色剤を表し、［式中、ｓおよびｔが互いに独立して、ｓおよびｔが同時に１を表さないことを条件として、数字０または１を表し、Ｒ³ないしＲ¹²、ｘおよびｙが上述の意味を有し］、一般式ＩＩｃのスチリル染色剤を表し、［式中、ｒ、Ｌ¹ないしＬ⁶、Ｒ³ないしＲ¹¹およびｘが上述の意味を有し］、または一般式ＩＩｄのメロシアニン染色剤を表し、［式中、ｒ、Ｌ¹ないしＬ⁶、Ｒ³ないしＲ⁸、Ｒ⁸、およびＸが上述の意味を有し、かつ、Ｇが酸素原子または硫黄原子を表す］、化合物である。本発明に基づく方法に特に適した一般式Ｉの化合物は、Ｗが、カルボキシ−またはスルホン酸基またはカルボキシアルキル基またはアルコキシカルボニル基または１２個までの炭素原子を有するアルコキシオキソアルキル基であり、一般式ＩＩＩ −（ＣＨ₂）_a−Ｏ−Ｚまたは（−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｏ）_a−Ｚ（ＩＩＩ）の残基を表し、［式中、ａが数字０ないし６を表し、Ｚが１個の水素原子または２ないしｎ−１のヒドロキシ基を有する、３ないし６個の炭素原子を有するアルキル残基を表し、その際、ｎが炭素原子の数であり、または２ないし４のヒドロキシ基で置換されたアリール−または６ないし１０個の炭素原子を有するアラルキル残基または１ないし３カルボキシ基で置換された１ないし６個の炭素原子を有するアルキル残基または１ないし３のカルボキシ基で置換された６ないし９個の炭素原子を有するアリール残基または１ないし３のカルボキシ基で置換されたアラルキル残基または６ないし１５個の炭素原子を有するニトロアリールもしくはニトロアラルキル残基または２ないし４個の炭素原子を有するスルホアルキル残基を表し］、一般式ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの残基を表し、または一般式ＩＩＩｃ −（ＣＨ₂）_o−（ＣＯ）_p−ＮＲ¹−（ＣＨ₂）_s−（ＮＨ−ＣＯ）_q−Ｒ² （ＩＩＩｃ）の残基を表し、［式中、ｏおよびｓが互いに独立した数字０、１、２、３、４、５または６を表し、ｐおよびｑが互いに独立した０または１を表し、Ｒ¹およびＲ²が互いに独立した、一般式ＩＩＩａおよびＩＩＩｂの置換基を除く上述の意味を有する残基Ｚを表し、または互いに独立した一般式ＩＩＩｄまたはＩＩＩｅの残基を表し、ｐおよびｑ＝１であることを条件とし、または上述の意味を有する一般式ＩＩＩｃ残基である］、化合物である。本発明に基づく方法に使用された化合物は、この化合物が波長６５０〜１２００ｎｍの範囲で吸収かつ蛍光し、吸収係数が約１０００００ｌｍｏｌ^-1ｃｍ^-1およびそれ以上であり、かつ、蛍光が望ましい場合において、５％以上の蛍光量子収率と、十分な水溶性と、適合性と、イン・ビトロおよびイン・ビボならびに光安定性とを有することを特徴とする。この方法は、可能な限り短時間のうちに、可能な限り完全に、再び***される。本発明に基づいて使用された化合物は、合成が容易であり、かつ、価格的に好ましく、可能な限り少ない反応工程で市販で得られる出発物質から入手できる。本発明に基づき、イン・ビボ診断のための方法を実施する際、組織には１つまたはそれ以上の物質が一般式Ｉにしたがって、たとえば静脈内注射により投与され、かつ、波長６５０〜１２００ｎｍの範囲の可視光線ないし近赤外線が照射される。吸収されない照射線および蛍光線は、単独でまたは両者同時にまたは両者互いに時間をずらして記録される。得られたデータから合成像が作られる。蛍光像の撮影は、種々の方法でおこなうことができる。好ましくは、組織が広く照射され、かつ、蛍光情報がＣＣＤカメラによる撮影により局部的に解像されて表示され、または撮像される組織部位が光学式の光導波管に収束した光線で走査され、かつ、得られた信号がコンピュータで１つの画像に変換される方法である。光線は、狭帯域の、本発明に基づく化合物の最大吸収率もしくは蛍光励起波長の範囲で照射される。同様に、吸収されない照射線は上述の方法で検出され、かつ、得られた信号を処理することができる。照射角度および観察角度は、解剖学上の条件と最適のコントラストにしたがってケース・バイ・ケースで選択することができる。染色剤を投与する前後の画像の減法により、この方法の感度がさらに改善される。染色剤に制約された変化の時間経過を評価することにより、診断に役立つ追加情報を得ることができる。測定技術上の方法は、専門家に良く知られている。さらに専門家には、本発明に基づいて使用された一般式Ｉの染色剤の所定の吸収もしくは蛍光波長において、最適の撮像および評価条件を達成するために、どのような装置パラメータを選択すべきか、が知られている。本発明に基づく方法に使用された一般式Ｉの化合物は、染色剤系Ｆの可変構造上の性質に基づき、幅広い励起および放出波長範囲を覆う。特別の励起源、たとえばダイオードレーザに対応し、かつそれにより、所定の測定装置もしくは装置技術上の構成要素に適合する励起波長を有する製品を得ることができる。上述の技術を利用して、数ｍｍ³の体積を有する小対象物でさえ、組織の深断層または不透明の体液中で、その位置を特定することができる。光の散乱と、それに伴って制限された解像度により、対象物の正確な形状と大きさを決定することは困難であるが、これは幾つかの重要な診断上の問題設定にとっても不要である。驚くべきことに、シアニン染色剤の投与後に実施された、ＣＣＤカメラによるヌードマウスの蛍光光線撮影は、これに対応して配量されたポルフィリンの場合より、約千倍高い蛍光強度が得られた。本発明に基づく化合物を使用した上述の方法は、特に病理学的に変化しない組織、組織系統の疾病、腫瘍、血管、アテローム硬化症プラークおよび灌注および拡散の画像表示に適している。本発明に基づいて使用された化合物は、種々の方法で組織内に投入される。特に好ましいのは、染色剤の静脈内投与である。配量は、適用目的に応じて大きく異なることができる。目標は、多くの場合、組織内または体液中の濃度１−１００μｇ／ｍｌで十分な、診断のための組織部位において識別可能の染色剤濃度である。この目標は、小体腔内または小血管またはリンパ管内に直接注入する際、一般に該染色剤０．１−１００ｍｇを担体液０．１〜１０ｍｌ中に含有して投与することにより達成される。この場合には、染色剤１〜１０ｍｇが好ましい。静脈内注入後に血管の染色または特殊組織または構造を識別するために、多くの場合、これより多い配量（１００ｍｇ以上）が必要である。配量の上限は、それぞれの物質および調製の適合性によってのみ与えられる。したがって、本発明は、タイプＢ₁−（Ｆ−Ｗ_n）_m、［式中Ｆがポリメチン染色剤、特にシアニン染色剤の種類から成る染色剤を表す］、の化合物の使用に関する。しかしまた、メロシアニン−、スチリル−、オキソノール染色剤およびスクエリリウム染色剤も使用することができる。Ｗは、全分子の親水性に決定的に寄与する構造要素を表す。特に好ましいのは、ｌが数字０を表し、かつ、該化合物のｎ−オクタノール／水−分配係数が２より小さい化合物である（ｐＨ７．４に調製された、０．９％食塩を有するｎ−オクタノール／０．０１ＭＴＲＩＳ− 緩衝剤。両相が互いに飽和）。生物学的識別単位Ｂは、たとえばアミノ酸、ペプチド、ＣＤＲ（相補性決定部位）、抗原、ハプテン、酵素基質、酵素補助因子、ビオチン、カルボチノイド、ホルモン、神経ホルモン、神経伝達物質、成長因子、リンフォカイン、レクチン、トキシン、炭化水素、オリゴ糖類、多糖類、デキストラン、ヌクレアーゼに対して安定性のあるオリゴヌクレオチドまたはレセプター結合薬剤である。上述の群からの化合物は、たとえばオキシトシン、バソプレシン、アンギオテンシン、メラノシテン置換ホルモン、ソマトスタチン、チロトロピン単離ホルモン、ゴナドトロピン単離ホルモン、テストステロン、エストラジオール、プロゲステロン、コルチソール、アルドステロン、ビタミンＤ、ガストリン、セクレチン、ソマトロピン、インシュリン、グルカゴン、カルシトニン、成長ホルモン単離ホルモンプロラクチン、エンケファリン、ドーパミン、ノレピンフィリン、セロトニン、エピネフリン、インターロイキン、アンギオゲニン、チモポイエチン、エリトロポイエチン、フィブリノーゲン、アンギオテンシノーゲン、メカミラミン、ラニチジン、シメチジン、ロバスタチン、イソプロテレノール誘導体またはトランスフェリンの各類とすることができる。生物学的識別単位を選ぶことにより、上述の物質が種々の機構に基づいて身体内の特定部位に富化させることが可能である。これらの機構は、細胞外の構造への結合、種々の生物学的輸送系による富化、細胞表面の識別または細胞内成分の識別を有する。さらに、本発明に基づき使用される化合物は、Ｂが特に結合しない、たとえばポリリシン、ポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、デキストラン、カルボキシデキストランまたはカスケードポリマー状の構造のような巨大分子であり、Ｆに共有結合する化合物である。本発明に基づき使用された一般式Ｉの化合物では、アルキル−、アリール−、またはヒドロキシ基、たとえば２−ヒドロキシエチル−、２−ヒドロキシプロピル −、３−ヒドロキシプロピル−、４−ヒドロキシブチル−、２，３−ジヒドロキシプロピル−、１，３−ジヒドロキシプロプ−２−イル−、トリス−（ヒドロキシメチル）−メチル−、１，３，４−トリヒドロキシブチ−２−イル−グルコシル−、４−（１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル−または２，４−、２，５ −、３，５−または３，４−ジヒドロキシフェニル−残基を有するアラルキル残基を表す。アルキル−、アリール−または１−３カルボキシ基を有するアラルキル残基は、たとえばカルボキシメチル−、カルボキシエチル−、カルボキシプロピル−、カルボキシブチル−、１，２−ジカルボキシエチル−、１，３−ジカルボキシプロピル−、３，５−ジカルボキシフェニル−、３，４−ジカルボキシフェニル−、２，４−ジカルボキシフェニルまたは４−（１，２−ジカルボキシエチル）−フェニル−残基とすることができる。スルホアルキル残基の中では、２−スルホエチル−、３−スルホプロピル−および４−スルホブチル残基が好ましいとみなされる。特に好ましいのは、Ｗが、Ｒ⁴もしくはＲ⁸、Ｒ⁶もしくはＲ¹⁰ならびにＲ¹¹またはＲ¹²の配位を占め、さらに二重にＲ³／Ｒ⁵もしくはＲ⁷／Ｒ⁹の配位にも存在している化合物である。本発明に基づいて使用された染色剤は、スペクトル６５０〜１２００ｎｍまでの範囲を吸収する。化合物の吸収係数は、染色剤分子に対して約１０００００ｌｍｏｌ^-1ｃｍ^-1およびそれ以上である。蛍光量子収率は、蛍光像を提供するために使用される染色剤の場合より５％以上多い。本発明のもう１つ別の目的は、一般式Ｖのシアニン染色剤である。［式中、Ｑはフラグメントであり、［式中、Ｒ³⁰は１個の水素原子、ヒドロキシ基、カルボキシ基、１ないし４個の炭素原子を有するアルコキシ残基、または塩素原子を表し、ｂは整数２または３を表し、Ｒ³¹は１個の水素原子または１ないし４個の炭素原子を有するアルキル残基を表し、ＸおよびＹは互いに独立したフラグメント−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｃ（ＣＨ₂Ｒ³²）（ＣＨ₂Ｒ³³）−を表し、Ｒ²⁰ないしＲ²⁹、Ｒ³²およびＲ³³は、互いに独立した１個の水素原子、ヒドロキシ基、カルボキシ−、スルホン酸−残基またはカルボキシアルキル−、アルコキシカルボニルまたは１０個までの炭素原子を有するアルコキシオキソアルキル− 残基または４個までの炭素原子を有するスルホアルキル残基を表し、または特定の結合をしない巨大分子または一般式ＶＩの残基を表し、ＸおよびＹの意味において、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｃ（ＣＨ₃）₂−が等しく少なくとも１つの残基Ｒ²⁰ないしＲ²⁹が特定の結合をしない巨大分子または一般式ＶＩに相当することを条件とし、式中、ＯおよびＳが０に等しく、または互いに独立して整数１ないし６を表し、ｑおよびｖが互いに独立して０または１を表し、Ｒ³⁴が１個の水素原子またはメチル残基を表し、Ｒ³⁵が２ないしｎ−１のヒドロキシ残基を有する３ないし６個の炭素原子を有するアルキル残基であり、その際、ｎは炭素原子の数であり、または１ないし３カルボキシ基で置換された１ないし６個の炭素原子を有するアルキル残基、６ないし９個の炭素原子を有するアリール残基または７ないし１５個の炭素原子を有するアリールアルキル残基、または一般式ＩＩＩｄまたはＩＩＩｅの残基であり、ｑが１を表すことを条件とし、または特定の結合をしない巨大分子を表し、Ｒ²⁰およびＲ²¹、Ｒ²¹およびＲ²²、Ｒ²²およびＲ²³、Ｒ²⁴およびＲ²⁵、Ｒ²⁵およびＲ²⁶、Ｒ²⁶およびＲ²⁷が、それらの中間に存在する炭素原子と共に５員または６員の芳香族または飽和環状結合環を形成し］、ならびにその生理学的に適合する塩を形成する。本発明に基づく一般式Ｖの化合物では、アルキル−、アリール−、またはヒドロキシ−またはカルボキシ基を有するアラルキル残基が、あらかじめ好ましいものとして述べた意味を有する。特に好ましいシアニン染色剤は、５−［２−［（１，２−ジカルボキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル］− ２−［７−［５−［２−（１，２−ジカルボキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル］−１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）− ２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３ −ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、分子内塩、モノカリウム塩、２−［７−［５−［２−［（１１−カルボキシ−２−オキソ−１，４，７，１０ −テトラアザ−４，７，１０−トリ（カルボキシメチル）−１−ウンデシル）アミノ］−２−オキソエチル］−１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−エチル−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム）、分子内塩、２−［７−［１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−５−［２−［（メトキシポリオキシエチレン）−アミノ］−２−オキソエチル］−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−５−［２−［（メトキシポリオキシエチレン）アミノ］−２− オキソエチル］−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、２−［７−［１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル） −２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−５−（メトキシポリオキシエチレン）アミノカルボニル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、３−（３−カルボキシプロピル）−２−［７−［３−（３−カルボキシプロピル）−１，３−ジヒドロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、２−［［３−［［３−（３−カルボキシプロピル）−１，３−ジヒドロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）２Ｈ−インドール−２−イリデン］メチル］２ −ヒドロキシ−４−オキソ−２−シクロブテン−１−イリデン］メチル］−１，１−ジメチル−３−エチル−１Ｈ−ベンゾ（ｅ）インドリウム、分子内塩、２−［７−［１，３−ジヒドロ−５−［２−［（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ］−２−オキソエチル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−５ −［２−［（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ］−２−オキソエチル］− ３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、である。本発明に基づく化合物と、本発明に基づいて使用された化合物の本質的な性質は、これらの化合物が２．０未満のｎ−オクタノール／水−分配係数を特徴とする親水性を有することである（ｐＨ７．４に調製された、０．９％食塩を有する分配係数ｎ−オクタノール／０．０１ＭＴＲＩＳ−緩衝剤、両相とも互いに飽和）。これらの化合物は、顕著な、純粋の疾病識別特性にとっては望ましくない光増感性もしくは光毒性の性質をもたない。さらに、該化合物は良好な適合性があり、かつ、***される。上述の性質に基づき、これらの化合物は、これまでに知られていた、イン・ビボ診断のために提案または使用されている染色剤から区別される。特にシアニン染色剤の場合、水溶性溶媒中で凝集することにより急激に低下する蛍光量子収率は、水溶性の増加と親水基の空間要求により凝集およびミセル形成が抑制されるので、無極の溶剤で測定したものと比較することができる。好ましい化合物の１つの基の蛋白親和性はわずかであり、薬物動態学的挙動は、たとえばインシュリンまたはサッカロースの挙動にほぼ相当する。驚くべきことに、これらの化合物の場合でも、分子構造が簡単であるにも拘わらず、生体内、たとえば腫瘍内の特定の構造で診断に十分な富化がおこなわれ、かつ、生体内で染色剤が均一に分布した後、腫瘍部位からの除去が周辺組織に比べて遅れておこなわれることが明らかになった。これらの物質の適合性は非常に高い。特に好ましいのは、個々の染色剤分子に対して体重１ｋｇあたり０．５ｍｍｏｌ以上の半数致死線量ＬＤ⁵⁰の値を有する物質である。本発明に基づくおよび本発明に基づいて使用された化合物は、優れたイン・ビトロ安定性とイン・ビボ安定性ならびに光安定性とを特徴とする。日光が照射する室内に水性溶剤を放置する場合、特に好ましい化合物では、２日後でも９８％、および１２日後でも７０％変化しない。本発明に基づくおよび本発明に基づいて使用された化合物の上述の光物理学的および薬物動態学的性質は、患者への適用が唯一許可されているシアニン染色剤、インドシアニングリーン（カルジオグリーン）の化合物から区別される。本発明のその他の目的は、Ｂのｌ値が１より大きくまたは１に等しく、好ましくは１または２である、一般式Ｉの化合物である。高い吸光係数を有する波長６５０〜１２００ｎｍで吸収し、かつ、高効率で蛍光する、シアニン染色剤の合成が可能である。本発明に基づくおよび本発明に基づいて使用されたシアニン染色剤の合成は、主として文献公知の方法、たとえばF. M.Hamer：The Cyanine Dyes and Related Compounds，John Wiley and Sons，Ne w York，1964；Cytometry 10 巻（1989）3-10頁；同11巻（1990）418-430 頁；同12巻（1990）723-30頁；Bioconjugate Chem．4巻（1993）105-11頁、Anal.Bio chem 217 巻（1994）197-204 頁、Tetrahedron 45巻（1989）4845-66 頁、欧州特許明細書第０５９１８２０Ａ１号に準じておこなわれる。本発明に基づいて使用された一般式Ｉの染色剤生体分子加成体の表示は、公知の、上述の方法にしたがって表した、生物学的識別単位Ｂを有する化合物Ｆ−Ｗ_n の置換によりおこなわれる。このために、化合物Ｆ−Ｗ_nは、少なくとも１つの、好ましくは正確に１つの群を含まなければならない。前記群は、アミン−、ヒドロキシ−、アルデヒド−またはスルフヒドリル基に対し生物学的識別単位において共有結合の反応性がある。前述の群は、文献に知られており、かつ、特にドイツ連邦共和国特許第３９１２０４６号公報に記載されている。特に好ましいのは、アミノ官能基に対して反応性があり、かつ、チオ尿素−、尿素およびアミド橋状結合を形成するイソチオシアネート、イソシアネートおよびヒドロキシスクシンイミドエステルもしくはヒドロキシスルホスクシンイミドエステルの群、ならびにスルフヒドリル基に対して反応性があり、かつ、チオエーテル橋状結合を形成するハロゲンアセチルおよびこはく酸イミドの群である。さらに、アルコール官能基を有するカルボキシ基は、適切な活性反応剤（たとえばＤＣＣ）を使用して、エステル結合またはエステル構造を形成し、ならびにヒドラジン類を有するアルデヒド官能基を導くことができる。上述の反応性群は、本発明に基づくまたは本発明に基づき使用された一般式Ｉの染色剤またはその合成前駆体に添加し、または存在する官能基性が反応性群の中に移される。反応性群は、直接染色剤系に、またはいわゆるリンカー構造（たとえばアルキル鎖、アラルキル構造）を介して結合することができる。生物学的識別単位ＢによるＦ−Ｗ_nの置換は、好ましくは、ｐＨ値７．４から１０までのＤＭＦ中または水性溶媒またはＤＭＦ／水混合液中でおこなわれる。染色剤と生体分子との間の分子比（負荷率）は、吸収分光学的に決定される。結合していない成分は、クロマトグラフィーまたはろ過により分離される。同様の方法で、適切な官能基性を有する巨大分子は、染色剤に結合することができる。これらの物質は極めて異なる性質を有することができる。分子量は、数１００〜１０万以上の範囲にすることができる。これらの物質は、中性または帯電することができる。好ましくは、ナトリウム、メチルグルタミン、リジンのような生理学的に適合性のある塩基を有する酸性染色剤の塩または陰イオンとしてリチウム、カルシウム、マグネシウム、ガドリニウムを有する塩である。得られた染色剤−生体分子加成体は、上述の光物理学的、毒物学的、化学的および経済的な要件を優れた方法で満たしている。本発明のもう１つ別の目的は、一般式Ｉに基づく化合物の使用に対応する、ＮＩＲ光を利用したイン・ビボ診断のための一般式Ｖのシアニン染色剤の使用である。さらにまた本発明の目的は、一般式ＶまたはＩの化合物を有する診断剤である。これらの製剤は、専門家に良く知られている方法にしたがって製造され、場合により、通常の助剤および／または担体物質ならびに稀釈剤等の使用下でおこなわれる。これらに含まれるものは、生理学的に適合性のある電解質、緩衝剤、洗浄剤および浸透性の適合ならびに安定性と溶融性を改善するための、たとえばシクロデキストリンのような物質である。調剤学で一般におこなわれる処置により、製造時と、特に投与前の調製の無菌性に配慮する。以下に実施例に基づき本発明を説明する。実施例１５−［２−［（１，２−ジカルボキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル］− ２−［７−［５−［２−（１，２−ジカルボキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル］−１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）− ２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３ −ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、分子内塩、モノカリウム塩、の調製５−カルボキシメチル−２−［７−［５−カルボキシメチル−１，３−ジヒドロ −３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、分子内塩、モノカリウム塩から、ジ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド−エステルの公知の方法にしたがって調製される（Cyto metry 11巻（1990）418-430 頁）。ＤＭＦ５ｍｌのジスクシンイミジルエステル０．５ｇ（０．５１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ１ｍｌのアスパラギン酸０．１６ｇ（１．２２ｍｍｏｌ）が加えられる。反応混合液は４８時間室温で攪拌され、生成物がエーテルの添加により沈殿する。ＲＰ−１８（ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ、１５−２５μ、Ｈ₂Ｏ：ＭｅＯＨ９９：１〜１：１）で洗浄し、次に凍結乾燥し、ならびに２４時間５０℃／０．０１ｍｂａｒで乾燥し、生成物０．２７ｇ（５１％）が得られる。分析計算値：Ｃ５４．４３Ｈ５．５４Ｎ５．４０Ｏ２４．６８Ｓ６．１８Ｋ３．７７測定値：Ｃ５４．０４Ｈ５．８１Ｎ５．２２Ｓ６．１３Ｋ３．８５実施例２２−［７−［５−［２−［（１１−カルボキシ−２−オキソ−１，４，７，１０ −テトラアザ−４，７，１０−トリ（カルボキシメチル）−１−ウンデシル）アミノ］−２−オキソエチル］−１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−エチル−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、分子内塩、の調製メタノール５ｍｌの２−［７−［５−（カルボキシメチル）−１，３−ジヒドロ −３，３−ジメチル−１−エチル-２Ｈ−インドール-２−イリデン］−１，３，５−ヘプタ−トリエニル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム−Ｎ−スクシンイミジルエステル、分子内塩０．５ｇ（０．７３ｍｍｏｌ）の溶液（Cytometry 11巻（1990）418-430 頁）に、メタノール１ｍｌの８５％水化ヒドラジン４３ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）がゆっくり−１０℃で液下され、この温度で２時間攪拌される。反応溶液は、真空で約３ｍｌに蒸発され、イソプロパノール１ｍｌで希釈され、一晩−２０℃で保管される。沈殿した結晶が吸引され、オイルポンプで乾燥される。これにより（６１％）トリカルボシアニンカルボン酸ヒドラジド０．２７ｇが得られる。ＤＭＦ２０ｍｌとトリエチルアミン０．２ｍｌにジエチレントリアミン五酢酸モノエチルエステルモノアンヒドリド０．２１ｇ（０．５１ｍｍｏｌ）の溶液に、攪拌しながらヒドラジド０．２７ｇ（０．４５ｍｍｏｌ）が加えられ、この混合液が４８時間室温で攪拌される。ろ過後にこの溶剤は０．２ｍｂａｒで蒸発され、残渣がＣＨ₂Ｃｌ₂と混合され、ろ過され、かつ、高真空で乾燥される。得られた生成物は、３Ｍ水性ＮａＯＨ５ｍｌ中で４時間室温で攪拌され、次いで半分に濃縮される。ＨＣｌは、ｐＨ２．０に調製され、イソプロパノール１ｍｌが添加され、４℃で１８時間停止させた後に得られた結晶が吸引され、高真空で２４時間６０℃で乾燥される。収量０．２３ｇ（５２％）の暗赤色微光の顆粒。分析：計算値：Ｃ５９．３２Ｈ６．６０Ｎ９．８８Ｏ２０．９６Ｓ３．２３測定値：Ｃ５４．１５Ｈ６．７０Ｎ９．５０Ｓ３．１９実施例３２−［７−［１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−５−［２−［（メトキシポリオキシエチレン）−アミノ］−２−オキソエチル］−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−５−［２−［（メトキシポリオキシエチレン）アミノ］−２− オキソエチル］１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、の調製ＣＨ₂Ｃｌ₂ １０ｍｌのメトキシポリオキシエチレンアミン８００ｍｇ（約０．１６ｍｍｏｌ、平均分子量約５０００）の溶液に、ＤＭＦ１ｍｌの実施例１から得たＮ，Ｎ−ジスクシンイミジルエステル０．０８ｍｍｏｌの溶液が加えられ、２４時間室温で攪拌される。エーテルの添加後に沈殿した固形物がろ過され、クロマトグラフィーで浄化される（セファデックスＧ５０溶媒、溶離液としてＨ₂ Ｏ）。収量は約５８％、凍結乾燥およびＰ₂Ｏ₅を介して乾燥後、緑青色の粉末として。平均分子量計算値：１０７７１、測定値：１０８２０実施例４２−［７−［１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル） −２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−５−（メトキシポリオキシエチレン）アミノカルボニル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩２−［７−［１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル− １−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５− ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−５−カルボキシ−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム−Ｎ−スクシンイミジルエステル、ナトリウム塩０．４１ｇ（０．５ｍｍｏｌ）を、メトキシポリオキシエチレンアミン２．３ｇ（０．４６ｍｍｏｌ、平均分子量５０００）と共に、１８時間ＣＨ₂Ｃｌ₂ ７０ｍｌ中アルゴン存在下に室温で攪拌し、溶剤を真空中で半分に濃縮し、生成物を実施例３に記述したように単離する。これにより生成物２．１ｇが緑青色の粉末として得られる。平均分子量計算値：５７０１、測定値：５７９５実施例５３−（３−カルボキシプロピル）−２−［７−［３−（３−カルボキシプロピル）−１，３−ジヒドロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、の調製フェニルヒドラジン６．５ｇ（５０ｍｍｏｌ）と、５−メチル−６−オキソヘプタン酸８．７ｇ（５５ｍｍｏｌ）が、５０ｍｌ濃縮酢酸で１時間室温でおよび５時間１２０℃で攪拌される。濃縮後、残渣が水２０ｍｌで混ぜられ、生じた結晶がろ過され、オイルポンプで乾燥される。これにより褐色の結晶９．６ｇ（８３％）が得られ、この結晶がジクロロベンゾール６０ｍｌ中に乳化され、１，４−ブタンスルトン１１．６ｇ（８５ｍｍｏｌ）を添加後８時間１５０℃で加熱される。室温に冷却後、アセトン２００ｍｌが添加され、発生した沈殿物がろ過される。この沈殿物はエーテルで乳化され、１８時間攪拌された後、新たにろ過され、オイルポンプで乾燥される。これにより３−（３−カルボキシプロピル）−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドレニン１０．７ｇ（７０％）が得られ、これがクロマトグラフィーで浄化される（ＲＰ−１８、ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ、１５−２５μ、溶離液としてＭｅＯＨ：Ｈ₂Ｏ）。インドトリカルボシアニン染色剤の調製は、無水酢酸１００ｍｌに濃縮酢酸２５ｍｌと、無水ナトリウムアセテート２．３ｇ（２７．６ｍｍｏｌ）とを、１２０ ℃で添加しながらインドレニン５．０ｇ（１３．６ｍｍｏｌ）と、グルタコンアルデヒドジアニルヒドロクロリド１．９ｇ（６．８ｍｍｏｌ）を、３０分加熱しておこなわれる。エーテル５００ｍｌを添加後に得られる沈殿物がクロマトグラフィーで浄化される（１．０ｇ部中、ＲＰ−１８、ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ、１５ −２５μ、溶離液としてＭｅＯＨ：Ｈ₂Ｏ）、次いで最後に凍結乾燥される。これにより生成物２．５ｇ（４５％）が得られる。分析：計算値：Ｃ６０．１３Ｈ６．２８Ｎ３．４２Ｏ１９．５４Ｓ７．８３Ｎａ２．８１測定値：Ｃ５９．９０Ｈ６．３４Ｎ３．３９Ｓ７．７２Ｎａ２．７８実施例６２−［［３−［［３−（３−カルボキシプロピル）−１，３−ジヒドロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）２Ｈ−インドール−２−イリデン］メチル］２ −ヒドロキシ−４−オキソ−２−シクロブテン−１−イリデン］メチル］−１，１−ジメチル-３−エチル−１Ｈ−ベンゾ（ｅ）インドリウム、分子内塩、の調製エタノール１２ｍｌ中７０℃に加熱したカドラト酸ジエチルエステル１．３６ｇ（８．０ｍｍｏｌ）と、トリエチルアミン１．６ｍｌの溶液に、３−エチル−１，１，２−トリメチル−１Ｈ−ベンゾ（ｅ）インドリウムイオディド３．６５ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）が加えられる。８０℃で１０分撹拌後、０℃に冷却され、沈殿した赤色結晶がろ過され、エーテルで洗浄され、真空中で乾燥される。シリカゲル（ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＡｃＯＨ９：１〜７：３）でクロマトグラフィーの浄化により、２−エトキシ−１−［（３−エチル−１，１−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ（ｅ）インドール−２−イリデン）メチル］−シクロブテン−３，４−ジオン１．３３ｇ（４６％）が生ずる。これは沸騰エタノール１５ｍｌ中に乳化され、攪拌しながら４０％ＮａＯＨ０．５ｍｌで希釈される。得られた溶液は、５分間８０℃で攪拌され、室温で冷却後、２ＮＨＣｌ５ｍｌで希釈される。濃縮後に沈殿する１−［（３−エチル−１，１−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ（ｅ）インドール− ２−イリデン）−メチル］−２−ヒドロキシシクロブテン−３，４−ジオン（１．３０ｇ）がろ過され、乾燥され、ただちに次の合成工程の浄化が開始される。スクアレン染色剤の調製は、３−（３−カルボキシプロピル）−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドレニン１．４３ｇ（３．９ｍｍｏｌ）を含有する１．３０ｇ（３．９ｍｍｏｌ）得られたカドラト酸誘導体の置換によりおこなわれる。これらの成分は、トルエン８０ｍｌと、１−ブタノール８０ｍｌ中で１８時間水滴分離器で加熱され、次いで、真空中で溶剤から遊離される。この残渣はエーテルで希釈され、生じた結晶が１６時間室温で攪拌後、ろ過され、クロマトグラフィーで浄化される（ＲＰ−１８、ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ、１５−２５μ、溶離液としてＭｅＯＨ：Ｈ₂Ｏ）、収量０．９５ｇ（３６％）。分析：計算値：Ｃ６８．６０Ｈ６．２０Ｎ４．１０Ｏ１６．４０Ｓ４．７０測定値：Ｃ６８．２５Ｈ６．３５Ｎ４．０４Ｓ４．５９実施例７２−［７−［１，３−ジヒドロ−５−［２−［（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ］−２−オキソエチル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−５ −［２−［（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ］−２−オキソエチル］− ３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、の調製２，３，３−トリメチル−３Ｈ−インドール−５−イル酢酸スクシンイミジル− エステル２．０ｇ（６．４ｍｍｏｌ）は、ＣＨ₂Ｃｌ₂ ５０ｍｌ中４−アミノメチル−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン０．８４ｇ（６．４ｍｍｏｌ）で希釈される。室温で５時間攪拌した後、水１００ｍｌが注入され、ＣＨ₂Ｃｌ₂ で抽出され、有機相が濃縮される。クロマトグラフィーによる浄化後（シリカゲルＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ９８：２）、アミド１．８６ｇ（８８％）が得られ、これが１，４−ブタンスルトン１．３６ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）を含有するジクロロベンゾール２０ｍｌ中１００℃で７時間、室温で１２時間攪拌される。アセトン５０ｍｌと混合した後に生じた顆粒がろ過され、クロマトグラフィーで浄化される（ＲＰ−１８、ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ、１５−２５μ、溶離液としてＭｅＯＨ：Ｈ₂Ｏ）。これにより５−［２−［（２，２−ジメチル−１，３−ジオキサ−４−シクロペンチル）メチル］アミノ−２−オキソエチル］−２，３，３− トリメチル−１−（４−スルホブチル−３Ｈ−インドレニン０．８５ｇ（出発化合物に対して２８％）が得られる。染色剤への置換は、１２０℃で１０分加熱しながら、実施例４に準じておこなわれる。原生成物は、ＭｅＯＨ５ｍｌ中トルエンスルホン酸１００ｍｇを添加しながら室温で１６時間攪拌され、不溶成分が除去され、次いで、ろ過物がイソプロパノール３ｍｌを添加した後−２０℃で保管される。沈殿した粉末はクロマトグラフィーで浄化される（ＲＰ−１８、ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ、１５−２５μ、溶離液としてＭｅＯＨ：Ｈ₂Ｏ）、凍結乾燥され、２４時間５０℃／０．０１ｍｂａｒで乾燥される。収量０．３２ｇ（３７％）。分析：計算値：Ｃ５６．７０Ｈ６．４５Ｎ５．８８Ｏ２０．１４Ｓ６．７３Ｋ４．１０測定値：Ｃ５６．３９Ｈ６．８８Ｎ５．６７Ｓ６．５８Ｋ３．９３実施例８麻酔をかけられた、腫瘍を有するヌードマウス（スイス−ヌード、腫瘍ＬＳ１７４Ｔ右側後側腹部）に、２−［７−［１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−５ −（メトキシカルボニル）−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２ −イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−５−（メトキシカルボニル）−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩が、体重１ｋｇあたり３．８μｍｏｌの配量で静脈内に投与された。レーザー誘導による蛍光撮影は、物質投与前および投与後の異なる時間に蛍光イメージャ（連邦物理技術施設、ベルリンシャルロッテンブルク）で実施された。励起は、光導波管システムを介した照射線を連結して７４０ｎｍの単色レーザー光でおこなわれた。７４０ｎｍ以下の励起線は、カットオフ・フィルタで除去され、７４０ｎｍ以上のレーザー誘導による蛍光光線は、ＣＣＤカメラ（電荷結合素子）で撮影され、このデータは黒白画像として記憶された。図１の連続撮影は、明らかに物質投与後の蛍光強度が一般に増加することを示している（図Ａ、Ｂ）。３０秒後、肝臓−肺の部位において増加した値を有する均等に分布した強度と腫瘍が観察できる（Ｂ）。さらに最大１時間までの時間経過（Ｃ、Ｄ、Ｅ）の中で、この物質はますます動物体内に分散している。１８時間後、腫瘍（右後側腹部）の中には、残りの体内に比べて明らかに蛍光強度の増大が観察される。図１は、２−［７−［１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−５−（メトキシカルボニル）−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］− １，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−５−（メトキシカルボニル）−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩を、体重１ｋｇあたり３．８μｍｏｌ静脈内に投与した後、異なる時点でのヌードマウス（スイス−ヌード）の蛍光光線撮像（黒色像）を示す。Ａ−Ｅ：右側部撮影Ｆ：後部撮影Ａ：投与前Ｂ：３０秒Ｃ：１分Ｄ：１０分Ｅ：投与後１時間Ｆ：投与後１８時間

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９６年１１月８日【補正内容】得られた染色剤−生体分子加成体は、上述の光物理学的、毒物学的、化学的および経済的な要件を優れた方法で満たしている。本発明のもう１つ別の目的は、一般式Ｉに基づく化合物の使用に対応する、ＮＩＲ光を利用したイン・ビボ診断のための一般式Ｖのシアニン染色剤の使用である。さらにまた本発明の目的は、一般式ＶまたはＩの化合物を有する診断剤である。これらの製剤は、専門家に良く知られている方法にしたがって製造され、場合により、通常の助剤および／または担体物質ならびに稀釈剤等の使用下でおこなわれる。これらに含まれるものは、生理学的に適合性のある電解質、緩衝剤、洗浄剤および浸透性の適合ならびに安定性と溶融性を改善するための、たとえばシクロデキストリンのような物質である。調剤学で一般におこなわれる処置により、製造時と、特に投与前の調製の無菌性に配慮する。以下に実施例に基づき本発明を説明する。実施例１５−［２−［（１，２−ジカルボキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル］− ２−［７−［５−［２−［（１，２−ジカルボキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル］−１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル） −２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、分子内塩、モノカリウム塩、の調製５−カルボキシメチル−２−［７−［５−カルボキシメチル−１，３−ジヒドロ −３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、分子内塩、モノカリウム塩から、ジ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド−エステルの公知の方法にしたがって調製される（Cyto metry 11巻（1990）418-430 頁）。ＤＭＦ５ｍｌのジスクシンイミジルエステル０．５ｇ（０．５１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ１ｍｌのアスパラギン酸０．１６ｇ（１．２２ｍｍｏｌ）が加えられる。反応混合液は４８時間室温で攪拌され、生成物がエーテルの添加により沈殿する。ＲＰ−１８（ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ、１５−２５μ、Ｈ₂Ｏ：ＭｅＯＨ９９：１〜１：１）で洗浄し、次に凍結乾燥ならびにそれらの生理学的に適合する塩を形成するシアニン染色剤。６．請求項５に記載のシアニン染色剤、すなわち、５−［２−［（１，２−ジカルボキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル］− ２−［７−［５−［２−［（１，２−ジカルボキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル］−１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル） −２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、分子内塩、モノカリウム塩、２−［７−［５−［２−［（１１−カルボキシ−２−オキソ−１，４，７，１０ −テトラアザ−４，７，１０−トリ（カルボキシメチル）−１−ウンデシル）アミノ］−２−オキソエチル］−１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−エチル−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム）、分子内塩、２−［７−［１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−５−［２−［（メトキシポリオキシエチレン）−アミノ］−２−オキソエチル］−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−５−［２−［（メトキシポリオキシエチレン）アミノ］−２− オキソエチル］−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、２−［７−［１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル） −２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−５−（メトキシポリオキシエチレン）アミノカルボニル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、３−（３−カルボキシプロピル）−２−［７−［３−（３−カルボキシプロピル）−１，３−ジヒドロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インド

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者リーフケ，ブヨムドイツ連邦共和国デー−13595 ベルリン，ヴェーファーシュトラーセ 51 (72)発明者ゼンムラー，ヴォルフハルトドイツ連邦共和国デー−16548 グリーニッケ，ローザ−ルクセンブルク−シュトラーセ 16 (72)発明者シュペック，ウルリッヒドイツ連邦共和国デー−13465 ベルリン，フュルシュテンダム 20 (72)発明者ヒルゲル，クリストフ−シュテファンドイツ連邦共和国デー−13353 ベルリン，オステンデル・シュトラーセ３アー

Claims

【特許請求の範囲】１．一般式ＩＢ₁−（Ｆ−Ｗ_n）_m（Ｉ）［式中、１は数字０−６を表し、ｎは数字０−１０を表し、かつ、ｍは数字１− １００を表し、Ｂは特定の細胞群または特にレセプターに結合し、または組織中または腫瘍中に富化され、または主として血中に残留し、または特定の結合をしない巨大分子である分子量３００００までを有する生物学的識別単位であり、Ｆは、６５０〜１２００ｎｍまでの範囲内で最大の吸収を示す染色剤を表し、Ｗは、式Ｉの化合物のｎ−オクタノール−水−分配係数が、１＝０を条件として、２．０より小さくまたは等しい、水溶性を改善する親水基を表す］、の化合物ならびにその生理学的に融和性のある塩類が使用される、ＮＩＲ光を利用したイン・ビボ診断のための方法。２．一般式ＩにおいてＢが、アミノ酸、ペプチド、ＣＤＲ（complementarity de termining regions ＝相補性決定部位）、抗原、ハプテン、酵素基質、酵素補助因子、ビオチン、カロチノイド、ホルモン、神経ホルモン、神経伝達物質、成長因子、リンフォカイン、レクチン、トキシン、炭水化物、オリゴ糖類、多糖類、デキストラン、オリゴヌクレオチドまたはレセプター結合薬剤であることを特徴とする請求項１に記載の方法。３．一般式ＩにおいてＦが、一般式ＩＩａのシアニン染色剤を表し、［式中、ｒは、ｒ＝２の場合にその都度２倍存在するフラグメントＬ⁶およびＬ⁷ が等しくもしくは異なることができる条件つきで、数字０，１または２を表し、Ｌ¹ないしＬ⁷が等しくまたは異なり、かつ、互いに独立したフラグメントＣＨまたはＣＲを表し、式中、Ｒはハロゲン原子、ヒドロキシ−、カルボキシ−、アセトキシ−、アミノ −、ニトロ−、シアノ−またはスルホン酸基またはアルキル−、アルケニル−、ヒドロキシアルキル−、カルボキシアルキル−、アルコキシ−、アルコキシカルボニル−、スルホアルキル−、アルキルアミノ−、ジアルキルアミノ−、または６個までの炭素原子を有するハロゲンアルキル残基、アリール−、アルキルアリール−、ヒドロキシアリール−、カルボキシアリール−、スルホアリール−、アリールアミノ−、ジアリールアミノ−、ニトロアリール−または９個までの炭素原子を有するハロゲンアリール残基であり、または式中、Ｒが、もう１つ別の残基Ｒと結合し、かつ、その中間に存在する残基Ｌ¹−Ｌ⁷ とともに４員環ないし６員環を形成する化合物を表し、または式中、Ｒはフラグメント−ＣＯ−を介して結合する２種類の配位においてその都度１つの化合物を表し、Ｒ³ないしＲ¹²が等しくまたは異なり、かつ、互いに独立して、１個の水素原子、上述の意味を有する残基ＢまたはＷ、またはアルキル残基または６個までの炭素原子を有するアルケニル残基またはアリール−または９個までの炭素原子を有するアラルキル残基であり、その際、アルキル−、アルケニル−、アリール−またはアラルキル残基が、場合により上述の意味を有する１つの残基Ｗで置換され、または式中、その都度２つの互いに隣接する残基Ｒ³ないしＲ¹⁰が、飽和、不飽和または芳香族であり、かつ、場合により上述の意味を有する１つの残基Ｒを有する中間に存在する炭素原子を考慮して、５員環ないし６員環の環状組織であり、ＸおよびＹが等しくまたは異なり、かつ、互いに独立してＯ、Ｓ、ＳｅまたはＴｅを表し、またはフラグメント−Ｃ（ＣＨ₃）₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−または− ＣＲ¹³Ｒ¹⁴−を表し、式中、Ｒ¹³およびＲ¹⁴が互いに独立して、１個の水素原子、上述の意味を有する残基ＢまたはＷまたはアルキル残基または６個までの炭素原子を有するアルケニル残基またはアリール−または９個までの炭素原子を有するアラルキル残基であり、その際、アルキル−、アルケニル−、アリール−またはアラルキル残基が、場合により上述の意味を有する１つの残基Ｗで置換され］、一般式ＩＩｂのスクアレン（Squarain）染色剤を表し、［式中、ｓおよびｔが互いに独立して、ｓおよびｔが同時に１を表さないことを条件として、数字０または１を表し、Ｒ³ないしＲ¹²、ｘおよびｙが上述の意味を有し］、一般式ＩＩｃのスチリル染色剤を表し、［式中、ｒ、Ｌ¹ないしＬ⁶、Ｒ³ないしＲ¹¹およびＸが上述の意味を有し］、または一般式ＩＩｄのメロシアニン染色剤を表し、［式中、ｒ、Ｌ¹ないしＬ⁶、Ｒ³ないしＲ⁸、Ｒ¹¹およびＸが上述の意味を有し、かつ、Ｇが酸素原子または硫黄原子を表す］、ことを特徴とする上記請求項の少なくとも１項に記載の方法。４．一般式Ｉにおいて、Ｗがカルボキシ−またはスルホン酸基またはカルボキシアルキル基またはアルコキシカルボニル−または１２個までの炭素原子を有するアルコキシオキソアルキル基であり、一般式ＩＩＩ −（ＣＨ₂）_a−Ｏ−Ｚまたは（−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｏ）_a−Ｚ（ＩＩＩ）の残基を表し、［式中、ａが数字０ないし６を表し、Ｚが１個の水素原子または、２ないしｎ−１のヒドロキシ基を有する、３ないし６個の炭素原子を有するアルキル残基を表し、その際、ｎが炭素原子の数であり、または、２ないし４のヒドロキシ基で置換されたアリール−または６ないし１０個の炭素原子を有するアラルキル残基または１ないし３カルボキシ基で置換された１ないし６個の炭素原子を有するアルキル残基または１ないし３のカルボキシ基で置換された６ないし９個の炭素原子を有するアリール残基または１ないし３のカルボキシ基で置換されたアリールアルキル残基または６ないし１５個の炭素原子を有するニトロアリールもしくはニトロアラルキル残基または２ないし４個の炭素原子を有するスルホアルキル残基を表し］、または一般式ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの残基を表し、または一般式ＩＩＩｃ −（ＣＨ₂）_o−（ＣＯ）_p−ＮＲ¹−（ＣＨ₂）_s−（ＮＨ−ＣＯ）_q−Ｒ² （ＩＩＩｃ）の残基を表し、［式中、ｏおよびｓが互いに独立した数字０、１、２、３、４、５または６を表し、ｐおよびｑが互いに独立した０または１を表し、Ｒ¹およびＲ²が互いに独立した、一般式ＩＩＩａおよびＩＩＩｂの置換基を除く上述の意味を有する残基Ｚを表し、または互いに独立した一般式ＩＩＩｄまたはＩＩＩｅの残基を表し、ｐおよびｑ＝１であることを条件とし、または上述の意味を有する一般式ＩＩＩｃの残基である］、ことを特徴とする上記請求項の少なくとも１項に記載の方法。５．一般式Ｖのシアニン染色剤であり、［式中、Ｑはフラグメントであり、式中、Ｒ³⁰は１個の水素原子、ヒドロキシ基、カルボキシ基、１ないし４個の炭素原子を有するアルコキシ残基、または塩素原子を表し、ｂは整数２または３を表し、Ｒ³¹は１個の水素原子または１ないし４個の炭素原子を有するアルキル残基を表し、ＸおよびＹは互いに独立したフラグメント−Ｏ-、−Ｓ−、−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｃ（ＣＨ₂Ｒ³²）（ＣＨ₂Ｒ³³）−を表し、Ｒ²⁰ないしＲ²⁹、Ｒ³²およびＲ³³は、互いに独立した１個の水素原子、ヒドロキシ基、カルボキシ−、スルホン酸−残基またはカルボキシアルキル−、アルコキシカルボニルまたは１０個までの炭素原子を有するアルコキシオキソアルキル− 残基または４個までの炭素原子を有するスルホアルキル残基を表し、または特定の結合をしない巨大分子または一般式ＶＩの残基を表し、ＸおよびＹの意味において、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｃ（ＣＨ₃）₂−が等しく、少なくとも１つの残基Ｒ²⁰ないしＲ²⁹が特定の結合をしない巨大分子または一般式ＶＩに相当することを条件とし、式中、ＯおよびＳが０に等しく、または互いに独立して整数１ないし６を表し、ｑおよびｖが互いに独立して０または１を表し、Ｒ³⁴が１個の水素原子またはメチル残基を表し、Ｒ³⁵が２ないしｎ−１のヒドロキシ残基を有する３ないし６個の炭素原子を有するアルキル残基であり、その際、ｎは炭素原子の数であり、または１ないし３カルボキシ基で置換された１ないし６個の炭素原子を有するアルキル残基、６ないし９個の炭素原子を有するアリール残基または７ないし１５個の炭素原子を有するアリールアルキル残基、または一般式ＩＩＩｄまたはＩＩＩｅの残基であり、ｑが１を表すことを条件とし、または特定の結合をしない巨大分子を表し、Ｒ²⁰およびＲ²¹、Ｒ²¹およびＲ²²、Ｒ²²およびＲ²³、Ｒ²⁴およびＲ²⁵、Ｒ²⁵およびＲ²⁶、Ｒ²⁶およびＲ²⁷が、それらの中間に存在する炭素原子と共に５員または６員の芳香族または飽和環状結合環を形成し］、ならびにそれらの生理学的に適合する塩を形成するシアニン染色剤。６．請求項５に記載のシアニン染色剤、すなわち、５−［２−［（１，２−ジカルボキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル］− ２−［７−［５−［２−（１，２−ジカルボキシエチル）アミノ］−２−オキソエチル］−１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）− ２Ｈ−インドール-２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３ −ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、分子内塩、モノカリウム塩、２−［７−［５−［２−［（１１−カルボキシ−２−オキソ−１，４，７，１０ −テトラアザ−４，７，１０−トリ（カルボキシメチル）−１−ウンデシル）アミノ］−２−オキソエチル］−１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−エチル−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム）、分子内塩、２−［７−［１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−５−［２−［（メトキシポリオキシエチレン）−アミノ］−２−オキソエチル］−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−５−［２−［（メトキシポリオキシエチレン）アミノ］−２− オキソエチル］−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、２−［７−［１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル） −２Ｈ−インドール-２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３，３−ジメチル−５−（メトキシポリオキシエチレン）アミノカルボニル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、３−（３−カルボキシプロピル）−２−［７−［３−（３−カルボキシプロピル）−１，３−ジヒドロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール-２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩、２−［［３−［［３−（３−カルボキシプロピル）−１，３−ジヒドロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）２Ｈ−インドール−２−イリデン］メチル］２ −ヒドロキシ−４−オキソ−２−シクロブテン−１−イリデン］メチル］−１，１−ジメチル−３−エチル−１Ｈ−ベンゾ（ｅ）インドリウム、分子内塩、２−［７−［１，３−ジヒドロ−５−［２−［（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ］−２−オキソエチル］−３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−２−イリデン］−１，３，５−ヘプタトリエニル］−５ −［２−［（２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ］−２−オキソエチル］− ３，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム、ナトリウム塩７．ＮＩＲ光を利用したイン・ビボ診断のための請求項５または６に記載のシアニン染色剤の使用。８．請求項５または請求項６に記載のシアニン染色剤の少なくとも１つが、通常の助剤および担体物質ならびに稀釈剤とともに含有されていることを特徴とするイン・ビボ診断のための手段。