JPH10509048A

JPH10509048A - ポリヌクレオチド組成物

Info

Publication number: JPH10509048A
Application number: JP8516861A
Authority: JP
Inventors: ヴィクトルヴィッチカバノフ，アレクサンダー; ユーリーヴィッチアラクホフ，バレリー; ヴィヴィノグラードフ，セルゲイ
Original assignee: スプラテックファーマ，インコーポレイテッド
Priority date: 1994-11-18
Filing date: 1995-11-17
Publication date: 1998-09-08
Also published as: WO1996015778A1; CN1173128A; CA2205486A1; RU2175337C2; EP0789564A4; ES2260765T3; ATE321133T1; EP0789564A1; DE69534895D1; AU716453B2; NZ297164A; AU4196596A; BR9509730A; DE69534895T2; US5656611A; EP0789564B1

Abstract

(57)【要約】本発明は、ポリ核酸を安定化しかつポリ核酸が細胞膜を通過し細胞の内部で作用できる能力を向上させるための組成物を提供する。一概念によると、本発明は、ポリヌクレオチドおよび特定のポリエーテルブロック共重合体とのポリヌクレオチド複合体を提供する。好ましくは、ポリヌクレオチド複合体はさらにポリカチオン性重合体を含む。他の概念によると、本発明は、ポリヌレオチドおよびポリエーテルブロック及びポリカチオンブロックからなるブロック共重合体とのポリヌクレオチド複合体を提供する。さらなる概念によると、本発明は、ポリエーテル重合体セグメントに結合するようにその５´または３´末端が共有結合修飾されたポリヌクレオチドを提供する。さらなる他の概念によると、ある好ましいポリカチオン性重合体を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】ポリヌクレオチド組成物本発明は、「ポリヌクレオチド組成物」の名称で１９９４年１１月１８日に特許出願された米国特許出願０８／３４２，２０９号の一部継続出願であり、かつここに関連して含まれるものである。本発明は、アルキルエーテル類のブロック共重合体と共有的あるいは非共有的に会合されるポリカチオン類あるいはＲＮＡやＤＮＡのごときポリ核酸重合体類の組成物に関するものである。好ましい実施態様において、該ポリ核酸は、複合体により安定化され、かつ該複合体において細胞膜に通じての大きな透過性を有している。したがって、これらの複合体類は、核酸を細胞内に伝達するベヒクルとしての用途に好適である。遺伝性疾患、細胞変異（癌由来あるいは癌増進変異を含む）およびウィルス性疾患を治療するための「アンチセンス（antisense）」ポリ核酸の使用は、広範囲で注目を集めている。この治療のツールは、ある面では、治療されるべき疾患の状態に起因するものを含むと信じられるたんぱく質をエンコードするｍＲＮＡの有効鎖を結合することにより作用し、これにより望ましくないたんぱく質へのｍＲＮＡの翻訳を停止または抑制する。他の面では、ゲノムＤＮＡは、例えばアンチセンスポリヌクレオチド（三重らせんを形成）による結合をターゲットとして転写を抑制する（Helene,Anti-Cancer Drug Design,65:69（1991）参照）。結合されるべきことが求められているｍＲＮＡの配列が知られていれば、アンチセンス分子は、ワトソン−クリック型塩基対法則により有効鎖を結合してＤＮＡの二重らせんと同様な二重構造を形成する［Gene Regulation:Biology of Antisen se RNA and DNA,Erikson and lxzant,eds.， Raven Press,New York,1991;Helene,Anti-Cancer Drug Design,6:569（1991）;C rooke,Anti-Cancer Drug Design,6:609（1991）］。この技術の完全な開拓に対する重大な障害は、細胞に充分な数のアンチセンス分子を効果的に導入してターゲットとするｍＲＮＡやＤＮＡの機能を翻訳することを有効に抵触する問題である。この問題を解決するのに用いられてきた一つの方法は、アンチセンスポリ核酸分子の５´または３´末端を疎水性置換基で共有的に変性することである。これらの変性核酸は、通常、より大きな効果で細胞を劣化させることである（例えば、Kabanovら，FEBS Lett.,259:327（1990）；Boutorinら，FEBS Lett.,23:1382- 1390,1989;Sheaら，Nucleic Acids Res.，18:3777-3783,1990参照）。さらに、アンチセンス分子のリン酸塩バックボーンは、負電荷を除去するために変性されてきた（例えば、Agrisら，Biochemistry,25:6268（1986）;Cazenave and Helen e in Antisense Nucleic Acids and Proteins:Fundamentals and Applications, Mol and Van der Krol,eds.,p47以下、Marcel Dekker,New York,1991;参照）またはプリンまたはピリミジン塩基が変性された（例えばAntisense Nucleic Acid s and Proteins:Fundamentals and Application,Mol and Van der krol,eds.,p. 47 et seq.,Milliganら、in Gene Therapy For Neoplastic Diseases,Huber and Laso,eds.,p228以下、New York Academy of Sciences,New York,1994参照）。細胞浸透障害を解決するための他の試みは、低いコピー数で細胞に挿入され得る発現ベクターへのアンチセンスポリ核酸配列を加えることを含むが、細胞内ではアンチセンスポリ核酸分子の実質的により多量を生成する細胞マシナリーを目差すものである（例えば、Farhoodら，Ann.N.Y．Acad.Sci.，716:23（1994）参照）。この方法は、アンチセンス配列が行なえる発現部位を有する組換えウィルス類の使用を含むものである（Boris-Lawrie and Temin ,Ann．N,Y．Acad．Sci.,716;59（1994）参照）。その他は、ポリカチオン類でアンチセンス分子または他の核酸分子の負電荷を中和することより膜浸透性を増大させることが試みられてきた（Kabanovら，Sov iet Scientifir Reviews，Vol,11,Part2,1992;Kabanovら、Bioconjugate Chemis try 4:448（1993）;Wu and Wu，Boichemistry，27:887-892,1988,Behrら，Proc. Natl．Acad Sci U.S.A.86:6982-6986,1989参照）。もちろん、アンチセンスポリ核酸分子は、細胞膜へのより大きな浸透を有効になし得るポリ核酸分子の唯一のタイプではない。組換えたんぱく質発現システムをなすために、発現指向核酸は、膜を通して所望のたんぱく質を産生する真核生物または原核生物細胞に移動されなければならない。遺伝子治療のためには、医学研究者は、単細胞または多細胞型の生物に、多量に発現される場合に細胞または生物に有用であるかあるいは細胞から失われたたんぱく質の産生を目差し得るＤＮＡベクターを誘導することを試みる。細胞にＤＮＡを導入して新たなたんぱく質、リボザイムまたは多量のたんぱく質またはリボザイムを産生することは「トランスフェクション法」と呼ばれている（Neoplastic Diseases，Huber and L azo,eds.，New York Academy of Science,New York,1994;Feigner，Adv．Drug． Deliv．Rev.,5:163（1990）;McLachlinら，Progr．Nucl．Acids Res.Mol Biol., 38:91（1990）；Karlsson,S.Blood,78:2481（1991）；Einerhand and Valerio， Curr．Top.Microbiol,Immunol.,177:217-235（1992）；Makdisiら，Prog．Liver Dis.,10:1（1992）;Litzinger and Huang,Biochim.Biophys．Acta,1113:201（1 992）；Morsyら，J.A.M.A.,270:2338（1993）;Dorudiら，British J.Surgery,80 :566（1993）参照）。アンチセンスポリ核酸による細胞浸透強化の多数の前記方法は、一般にポリ核酸を細胞に導入する適用可能な方法である。他の一般的方法は、ポリ核酸のリン酸カルシウム沈殿および目的細胞での培養（Graham and Van der Eb,Vi rology,52;456,1983），ポリ核酸、ＤＥＡＥ−デキストランおよび細胞の共培養（Sompayrac and Danna，Proc．Natl．Acad.Sci.,12;7575,1981），ポリ核酸の存在下での細胞のエレクトロポレーション（Potterら，Proc.Natl.Acad．Sci.,8 1:7161-7166,1984）、核酸をウィルス外殻に合体させることによるトランスフェクションベヒクル創生（Gitmanら，Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A.,82:7309-73 13,1985）およびポリ核酸で細胞を培養してリポソーム内への合体（Wang and Hu ang，Proc.Natl.acad.Sci.,84:7851-7855,1987）である。ポリ核酸を細胞に伝達する他の問題点はヌクレアーゼ活性に対するポリ核酸、特にリボ核酸の極度の感受性である。この問題は、抗感受性オリゴヌクレオチド類としてリボ核酸を使用する試みと密接な関係がある。したがって、ポリ核酸をヌクレアーゼ活性から保護する方法が望まれる。発明の概要本発明は、ハンシュおよびレオ（Hansh and Leo）により開発されたフラグメント定数（fragmental constants）を参照しながら以下説明する（Hansch and L eo，Substituent constants for Correlaion Analysis in Chemistry and Biolo gy，Wiley，New York，pp.320-325参照）。これらの定数は、オクタノール−水混合物により形成される相間の分配に対する分子の傾向に分子の一部が寄与する程度を見積るのに使用するために開発されたものである。これらの定数は、一般に、ハンシュ−レオフラグメント分配定数（Hansch-Leo fragmental partition constants）（以下、ハンシュ−レオフラグメント定数（Hanch-Leo fragmental constants）という）として利用されている。本発明の第１の実施態様は、（ａ）ポリヌクレオチドまたはその誘導体および（ｂ）Ａ−型セグメントおよびＢ−型セグメントよりなり、該Ａ−型セグメントは相対的に親水性の線状重合体セグメントであり、平均ハンシュ−レオセグメント定数に寄与する繰り返し単位は約−０．４以下でありかつ分子量寄与率は約３０〜約５００であり、またＢ−型セグメントは相対的に疎水性の線状重合体セグメントであり、平均ハンシュ−レオセグメント定数に寄与する繰り返し単位は約−０．４以上でありかつ分子量寄与率は約３０〜約５００であり、また重合体セグメントのそれぞれの繰り返し単位をつなぐ結合はエーテル結合よりなるものであるポリヌクレオチド組成物に関するものである。好ましい第１の実施態様において、ポリエーテルブロック共重合体は、Ａ−Ｂ−Ａ´ （Ｉ）、Ａ−Ｂ（II）、Ｂ−Ａ−Ｂ´ （III）、およびＬ（Ｒ¹）（Ｒ²）（Ｒ³）（Ｒ⁴）（IV）（ただし、式中、ＡおよびＡ´はＡ−型線状重合体セグメント、ＢおよびＢ´はＢ−型線状重合体セグメントであり、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は式（Ｉ）、（II ）または（III）のブロック共重合体または水素であり、かつＬは結合基であり、ただし、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴の２個以下は水素である。）よりなる群から選ばれる式で表わされるものである。本発明の他の好ましい第１の実施態様において、ポリヌクレオチドは、さらに複数のカチオン性繰り返し単位を有するポリカチオン性重合体よりなる。この組成物は、ポリヌクレオチドを細胞に導入するのに有効なベヒクルを提供するものである。したがって、本発明は、本発明の第１の実施態様のポリヌクレオチド組成物を利用して細胞内にポリ核酸を導入する方法にも関するものである。本発明の第２の実施態様は、（ａ）ポリヌクレオチドまたはその誘導体および（ｂ）ポリエーテルセグメントおよびポリカチオンセグメントを有するブロック共重合体よりなり、該ポリエーテルセグメントは少なくともＡ−型ブロックよりなり、また該ポリカチオンセグメントは複数のカチオン性繰り返し単位よりなるものであるポリヌクレオチド組成物に関するものである。好ましい実施態様において、該共重合体は、Ｂ−Ａ−Ｒ（Ｖ−ａ）、Ａ−Ｂ−Ｒ（Ｖ−ｂ）、Ａ−Ｒ（VI−ａ）、Ａ−Ｒ−Ｂ（VI−ｂ）、Ａ−Ｒ−Ａ´ （VII）、Ｒ−Ａ−Ｒ´ （VIII−ａ）、およびＲ−Ａ−Ｂ（VIII−ｂ）（ただし、式中、Ａ、Ａ´およびＢは前記のとおりであり、、またＲおよびＲ´ は複数のカチオン性繰り返し単位よりなる重合体セグメントであり、セグメント内の各繰り返し単位は該セグメント内の他の単位と同一であってもあるいは異なっていてもよい）よりなる群から選ばれる式で表わされる重合体である。本実施態様の重合体は、「ポリエーテル／ポリカチオン重合体」と名付けることができる。ＲおよびＲ´は「Ｒ−型重合体セグメントまたはブロック」と名付けることができる。第２の実施態様のポリヌクレオチド組成物は、細胞内にポリ核酸を導入するのに有効なベヒクルを提供するものである。したがって、本発明は、本発明の第２の実施態様の組成物を利用して細胞内にポリ核酸を導入する方法にも関するものである。本発明の第３の実施態様は、ポリヌクレオチドセグメントを含むポリヌクレオチド誘導体およびポリヌクレオチドの５´位または３´位末端の一方または両方に結合したポリエーテルセグメントよりなるものであり、該ポリエーテルはＡ− 型ポリエーテルセグメントよりなるものであるポリヌクレオチド組成物を提供するものである。第３の好ましい実施態様において、該誘導体は、（ただし、式中、ｐＮは５´〜３´配向を有するポリヌクレオチドであり、またＡ、Ａ´、ＢおよびＢ´は上記のポリエーテルセグメントである。）よりなる群から選ばれた式で表わされるブロック共重合体よりなるものである、他の好ましい第３の実施態様において、該ポリヌクレオチド複合体はポリカチオン性重合体よりなるものである。式（Ｉ）、（II）、（III）または（IV）の重合体は、互いに混合されていてもよく、また式（Ｖ−ａまたはｂ）、（VI−ａまたはｂ）、（VII−ａまたはｂ）および（VIII−ａまたはｂ）の重合体および／または式（IX−ａ，ｂ，ｃまたはｄ）（ＸＩ）、（ＸII）または（ＸIII）のポリヌクレオチドの１種または２種以上と付加的にあるいは全面的に混合して細胞内部にポリ核酸を導入するための有効なベヒクルとしてもよい。第３の実施態様のポリヌクレオチド組成物は、細胞内にポリヌクレオチドを導入するための有効なベヒクルを提供するものである。したがって、本発明は、本発明の第３の実施態様の組成物を利用した細胞内へのポリ核酸の導入方法にも関するものである。第３の好ましい実施態様において、本発明は、ポリヌクレオチドセグメント、Ｒ−型セグメントおよび少なくとも１種のＡ−型セグメントまたはＢ−型セグメントよりなるポリヌクレオチド誘導体を提供するものである。本発明の第４の実施態様は、重合体、ポリエーテルセグメントおよび式−ＮＨ −Ｒ⁰（ただし、Ｒ⁰は置換されていてもよい炭素原子数２〜６の直鎖脂肪族基である。）の複数の繰り返し単位よりなるポリカチオン性セグメントよりなり、該ポリエーテルセグメントは少なくとも１種のＡ型セグメントまたはＢ−型セグメントよりなるものであるポリエーテル−ポリカチオン共重合体に関するものである。好ましい第４の実施態様において、該ポリカチオン重合体は、Ｂ−Ａ−Ｒ（Ｖ）、Ａ−Ｒ（VI）、Ａ−Ｒ−Ａ´ （VII）、およびＲ−Ａ−Ｒ´ （VIII）（ただし、式中、Ａ、Ａ´およびＢは前記のとおりであり、またＲおよびＲ´は式−ＮＨ−Ｒ⁰（ただし、Ｒ⁰は置換されていてもよい炭素原子数２〜６の直鎖脂肪族基である。）の複数のカチオン性繰り返し単位よりなる重合体セグメントである。）よりなる群から選ばれる重合体よりなるものである。Ｒ−型セグメントにおける各−ＮＨ−Ｒ⁰繰り返し単位は、該セグメントにおいて他の−ＮＨ−Ｒ⁰ 繰り返し単位と同一であってもまた異なっていてもよい。好ましい第４の実施態様は、さらにポリヌクレオチドまたはその誘導体を有している。本発明の第５の実施態様は、下記式［ただし、式中、Ｒ⁸は、（１）−（ＣＨ₂）_n−ＣＨ（Ｒ¹³）−（ただし、式中、ｎは０〜約５の整数であり、またはＲ¹³は水素、炭素原子数３〜８のシクロアルキル、炭素原子数１〜６のアルキルまたは（ＣＨ₂）_mＲ¹⁴（ただし、ｍは０〜約１２の整数であり、またＲ¹⁴は炭素原子数６〜２０の親油性置換基である。））、（２）基が炭素原子数３〜８のカルボサイクリック基（ただし、該基は、例えば炭素原子数１〜６のアルキルを含んでいてもよいシクロアルキル基または芳香族基、炭素原子数１〜６のアルコキシ基、炭素原子数１〜６のアルキルアミノ基、各アルキルが独立して炭素原子数１〜６を有するジアルキルアミノ基、アミノ基、スルホン基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、フッ素または塩基置換基であってもよい環炭素原子が３〜８のカルボキシル基、または（３）ヘテロシクロアルキルを含んでいてもよい環原子数３〜８の複素環基、酸素、窒素、硫黄およびそれらの混合物よりなる群から選ばれた１〜４個のヘテロ原子を含んでいてもよくかつ炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数１〜６のアルコキシ、炭素原子数１〜６のアルキルアミノ、各アルキルが独立に炭素原子数１〜６のアルキルであるジアルキルアミノ、アミノ、スルホニル、ヒドロキシル、カルボキシル、フッ素または塩素置換基を含んでいてもよい３〜８環原子の被素環基であり、Ｒ⁹は、炭素原子数１〜１２の直鎖脂肪基であり、またＲ¹⁰、Ｒ¹¹およびＲ¹²は独立して水素または炭素原子数１〜４のアルキル基である。］の複数の繰り返し単位よりなるポリカチオン性重合体である。Ｒ⁹は、好ましくは２〜１０個、より好ましくは３〜８個の炭素原子を含む。Ｒ¹⁴は、好ましくはアクリジン基または臭化物基である挿入基を含んでいる。該重合体におけるこのような繰り返し単位の数は、好ましくは約３〜約５０、より好ましくは約５〜約２０である。この重合体の構造は、Ｒ−型セグメントまたはポリカチオン性重合体のごとき本発明の他の実施態様に配合してもよい。該重合体の端部は、脂質置換体で変性されてもよい。該実施態様の重合体を合成するのに使用される単量体は、下記のごときＤＮＡ合成体（synthesizer）に供給される単量体が好適である。かくして、該重合体は、極めて特殊に合成され得る。さらに、ポリヌクレオチド配列、ポリエーテルブロックおよび親油性置換体の追加配合は、ポリヌクレオチド合成用に開発された最新オートメーション技術を用いて行なうことができる。この第５の実施態様も、ポリカチオン性重合体の合成方法を含むものである。詳細な説明平行して出願された本出願の親出願は、１９９４年１１月１８日に「重合体結合生物剤」の名称で出願番号０８／３４２，０７９号としてアレクサンダービクトロビッチカバノフおよびバレリーユーリビッチアラクホフにより出願された出願である。また、平行して出願されたこの出願は、整理番号３１３２５７−１０１Ａで出願番号０８／３４２，０７９号の一部継続出願である。０８／３４２，０７９号出願の全開示およびその一部継続出願整理番号３１３２５７− １０１Ａは、ここに含まれている。式（Ｉ）〜（ＸIII）の親水性（Ａ−型）ブロックまたは親水性（Ｂ−型）ブロックの重合度は、好ましくは約５〜約４００である。より好ましくは重合度は約５〜約２００であり、さらに好ましくは約５〜約８０である。Ｒ−型ポリカチオンブロックの重合度は、好ましくは約２〜約３００である。より好ましくは、重合度は約５〜約１８０であり、さらに好ましくは約５〜約６０である。ポリカチオン性重合体の重合度は、好ましくは約１０〜約１０，０００である。より好ましくは、重合度は約１０〜約１，０００であり、さらに好ましくは約１０〜約１００である。Ａ−型、Ｂ−型およびＲ−型ブロックのためのブロックよりなる繰り返し単位は、通常、約３０〜約５００、好ましくは約３０〜約１００、より好ましくは約３０〜約６０の分子量を有している。通常、Ａ−型およびＢ−型ブロックのそれぞれには、繰り返し単位の少なくとも約８０％、好ましくは少なくとも約９０％、さらに好ましくは少なくとも約９５％のエーテル鎖である。本発明の目的のためには、エーテル結合は、グリコシド鎖（すなわち糖鎖）を含むものである。しかしながら、一面からは、単純な鎖が好ましい。好ましくは、Ａ−型ブロックを含む全ての繰り返し単位は、約−０．４未満、好ましくは約−０．５未満、より好ましくは約−０．７未満のハンシュ−レオフラグメント定数を有している。好ましくはＢ−型ブロックを含むすべての繰り返し単位は、約−０．３以上、好ましくは約−０．２以上のハンシュ−レオフラグメント定数を有している。式（IX）〜（ＸIII）のポリヌクレオチド成分（ｐＮ）は、好ましくは約５〜約１，０００，０００の塩基、より好ましくは約５〜約１００，０００の塩基、さらに好ましくは約１０〜約１０，０００の塩基を含むものである。該ポリカチオン性重合体およびＲ−型ブロックは数個の陽イオン化し得る基および正味の正電荷を生理学的ｐＨにおいて有する。式（Ｖ）〜（VIII）のポリエーテル／ポリカチオン重合体は、ポリカチオン性重合体としても使用できる。好ましくは、該ポリカチオン性およびＲ−型ブロックは生理学的ｐＨにおいて、少なくとも約３の正電荷、好ましくは、少なくとも約６の正電荷、さらに好ましくは少なくとも約１２の正電荷を有している。また、好ましくは生理学的ｐＨにおいて、該重合体およびブロックは、約３Å〜約１０Åの電荷の間のスペースを有する正電荷を有する。アミノプロピレン繰り返し単位またはアミノプロピレンおよびアミノブチレン繰り返し単位により形成されるスペーシングが最も好ましい。従って、たとえば、（ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂）繰り返し単位または（ＮＨＣＨ₂ ＣＨ₂ＣＨ₂）および（ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂）繰り返し単位の混合物を利用するポリカチオン性セグメントが好ましい。ＮＨ−Ｒ⁰繰り返し単位を含む式（Ｖ）〜（VIII）のポリエーテル／ポリカチオン重合体も好ましい。Ｒ⁰は、好ましくはエチレン、プロピレン、ブチレン、またはペンチレンであり、変性され得る。好ましい実施態様において、少なくとも１個の繰り返し単位において、Ｒ⁰はエチジウムブロマイド基のごときＤＮＡ挿入基を含んでいる。このような挿入基は、核酸に対する重合体の親和性を増大させ得る。Ｒ⁰における好ましい置換基は、炭素原子数1〜６のアルキル基、ヒドロキシル基、アルキル基の炭素原子数が１〜６のヒドロキシアルキル基、炭素原子数１〜６のアルコキシ基、炭素原子数２〜７のアルキルカルボニル基、アルキル基の炭素原子数が１〜６のアルコキシカルボニル基、アルコキシおよびアルキルの炭素原子数がそれぞれ１〜６のアルコキシアルボニルアルキル基、アルキル基の炭素原子数がそれぞれ１〜６のアルキルカルボキシルアルキル基、アルキル基の炭素原子数が１〜６のアミノアルキル基、アルキル基の炭素原子数がそれぞれ１〜６のアルキルアミノ基またはジアルキルアミノ基、アルキル基の炭素原子数がそれぞれ１〜６のモノまたはジアルキルアミノアルキル基、シアノ基、アルキル基の炭素原子数が１〜６のシアノアルキル基またはカルボキシル基である。より好ましくはＲ⁰はプロピレンまたはブチレンである。本発明の第１の実施態様による重合体は、次式を有するブロック共重合体により例示できる。または、または、または、（ただし、式中、ｘ，ｙ，ｚ，ｉおよびｊは、約５〜約４００、好ましくは約５〜約２００、より好ましくは約５〜約８０の値であり、Ｒ¹，Ｒ²対については、一方は水素であり、他方はメチル基である。式（ＸIV）〜（ＸVI）は、実際、Ｂブロック内のイソプロピレン基の配向はランダムであるが非常に簡略化されている。このランダム配向は、より完全に式（ＸVII）に示されている。このようなポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）化合物は、Santon,Am,Perf umer Cosmet.72(4):54-58(1958)；Schmolka,Loc．cit.82(7)；25-30(1967;Non-i onic Surfactants,Schick,ed.(Dekker,NY,1967)、pp300-371に記載されている。多数のこのような化合物は、「ポロキサマーズ（poloxamers）」、「プルロニックス（pluronics）」および「シンペロニックス（synperonics）」の一般商品名で市販されている。Ｂ−Ａ−式内のプルロニック重合体は、「逆プルロニックス」、「プルロニックＲ」または「メロキサポール（meroxapol）」としてしばしば引用される。式（ＸVII）の「ポリオキサミン（polyoxamine）」重合体は、テトロニック^TMの商品名でＢＡＳＦ社（Wyandotte,ＭＩ）より市販されている。式（ＸVII）に示されているポリオキシエチレンおよびポリプロピレンブロックの順序は、テトロニック^TM を創生して逆転でき、同様にＢＡＳＦ社から市販されている（Schmolka，j.Am .Oil.Soc.,59:110（1979）参照）。ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンブロック共重合体もエチレンオキサイドとプロピレンオキサイド繰り返し単位のランダム混合物よりなる親水性ブロックにより設計できる。同様に、疎水性ブロックは、エチレンオキサイドとプロピレンオキサイド繰り返し単位の混合物であってもよい。このようなブロック共重合体は、プルラドッド（Pluradot^TM）の商品名でＢＡＳＦ社より入手できる。式（ＸVII）のジアミン結合プルロニックは、次式のジアミン結合ポリオキシメチレン−ポリオキシプロピレン重合体のファミリーのメンバーでもある。（ただし、式中、破線は、第２の窒素に延長するポリエーテルの対称コピーを表わし、Ｒ¹は、炭素原子数２〜６のアルキレン、炭素原子数５〜８のシクロアルキレンまたはフェニレンであり、またＲ¹およびＲ²については（ａ）両方が水素であるかあるいは（ｂ）一方が水素で、他方がメチルであり、Ｒ³およびＲ⁴については（ａ）両方が水素であるか、あるいは（ｂ）一方が水素で他方がメチルであり、Ｒ³およびＲ⁴の両方が水素である場合にはＲ⁵およびＲ⁶の一方が水素で他方がメチルであり、Ｒ³およびＲ⁴の一方がメチルの場合は、Ｒ⁵およびＲ⁶の両方が水素である。当業者は、この議論を通じて、ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）化合物の例示であることが容易に理解できよう。最も重要な特徴はＡ−型ブロック中の単量体の平均ハンシュ−レオフラグメント定数が約−０．４以下であるということである。したがって、第１のブロックを形成する単位は、エチレンオキサイド単独でなる必要はない。同様に、すべてのＢ−型ブロックはプロピレンオキサイド単位でなる必要はない。その代りに、該ブロックは第１の実施態様のパラメータが保たれる限りは、式（ＸIV〜ＸVII）で規定された以外の単量体を配合することは可能である。かくして、最も簡単な例としては、ブロックＡにおける少なくとも１種の単量体が前記側鎖基の一つで置換されることである。他の面からは、本発明は少なくとも一つの式（Ｉ〜ＸIII）のブロック共重合体によるものであり、ここにＡ−型ブロックおよびＢ−型のブロックは実質的に式−ＯＲ⁵の繰り返し単位より実質的に形成されたポリヌクレオチド複合体に関するものである。なお、ここにＲ⁵は、（１）−（ＣＨ₂）_n−ＣＨ（Ｒ⁶）−（ただし、式中、ｎは０〜約５の整数であり、またＲ⁶は、水素、炭素原子数３〜８のシクロアルキル基、炭素原子数１〜６のアルキル基、フェニル基、アルキル基の炭素原子数が１〜６のアルキルフェニル基、ヒドロキシル基、アルキル基の炭素原子数が１〜６のヒドロキシアルキル基、炭素原子数１〜６のアルコキシ基、炭素原子数２〜７のアルキルカルボニル基、アルコキシ基の炭素原子数が１〜６のアルコキシカルボニル基、アルコキシ基およびアルキル基の炭素原子数がそれぞれ独立に１〜６のアルキルカルボキシルアルキル基、アルキル基の炭素原子数がそれぞれ独立に１〜６であるアルキルアミン基またはジアルキルアミノ基、アルキル基の炭素原子数がそれぞれ独立に１〜６であるモノまたはジアルキルアミノアルキル基、塩素、アルキル基の炭素原子数が１〜６のクロロアルキル基、フッ素、アルキル基の炭素原子数が１〜６のフルオロアルキル基、シアノ基またはアルキル基の炭素原子数が１〜６のシアノアルキル基またはカルボキシル基である。）か、（２）環炭素原子数が３〜８のカルボサイクリック基であり、該基は、例えばシクロアルキル基または芳香族基であり、これは炭素原子数１〜６のアルキル基、炭素原子数１〜６のアルコキシ基、炭素原子数１〜６のアルキルアミノ基、アルキル基の炭素原子数がそれぞれ独立に１〜６であるジアルキルアミノ基、アミノ基、スルホニル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、フッ素または塩素置換基を含んでいてもよいか、（３）ヘテロシクロアルキル基またはヘテロ芳香族基を含んでいてもよい環原子３〜８の複素環基であり、これは酸素、窒素、硫黄およびこれらの混合物よりなる群れから選ばれた１〜４個のヘテロ原子を含んでいてもよく、炭素原子数１〜６のアルキル基、炭素原子数１〜６のアルコキシ基、炭素原子数１〜６アルキルアミノ基、アルキル基、炭素原子数がそれぞれ独立に１〜６であるジアルキルアミノ基、アミノ基、スルホニル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、フッ素、または塩素置換基を含んでいてもよい。好ましくはｎは１〜３の整数である。Ｒ⁵を含有するカルボサイクリック基または複素環基は、好ましくは４〜７の環原子、より好ましくは５〜６の環原子を有している。複素環は好ましくは１〜２を含み、より好ましくは該複素環は一種のヘテロ原子を有している。好ましくは該複素環は炭水化物またはその類縁体である。当業者は、これらの重合体を生成するのに必要な単量体は合成により得られることを認識するであろう。ある場合には単量体の重合には、当業者が認識しているように、適当な保護基を使用することが要求されるであろう。通常、Ａ−型およびＢ−型ブロックは、少なくとも約８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の−ＯＲ⁵繰り返し単位を含む。他方、本発明は、Ａ−型ブロックおよびＢ−型ブロックが式−Ｏ−Ｒ⁷−（ただし、Ｒ⁷は、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキル基である。）の繰り返し単位より実質的になる式（Ｉ〜ＸIII）の一つで表わされるブロック共重合体ポリヌクレオチド複合体に関するものである。有機分子に対するオクタノール−水分配係数（Ｐ）のハンシュ−レオ概算は、つぎの式により計算される。（ただし、式中、ｆ_n値は分子内の異なる基に対するフラグメント定数であり、ａｍ値は分子内の他のいかなる基の数であり、ｆｍ値は一重結合または二重結合のごときある分子の特徴に対するファクターであり、またｂｍ値はこのような分子のいかなる特徴の数である。）。例えば、エチレンオキサイド繰り返し単位（ −ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ−）に対するハンシューレオフラグメント定数はである。また、プロピレンオキサイド（−ＣＨ₂ＣＨ₂（ＣＨ₃）Ｏ−）繰り返し単位に対するハンシューレオフラグメント定数は、である。当業者は、ハンシューレオフラグメント定数の適用が試みらている分配係数を概算するためのハンシューレオ近似が、正確に実験分配定数を生ずるものでないことは認識している（Hansch and Leo.Substituent Constants for Correlation s Analysis in Chemistry and Biology.Wiley,NerYork,1979;Jame,Solubility a nd Pelated properties,Marcel Dekker,New York,1986,pp320-325参照）。しかしながら、この近似はデリバリーヘヒクル重合体の疎水性を定義するには充分正確である。ポリ核酸分子の大幅な変化は該組成物のポリ核酸成分による。これらは、（親油性基、増感架橋基、アルキル化基、有機金属基、挿入基、親油基、ビチオン、蛍光および放射性基およびリン酸塩骨格を変性する基を含む基を導入するために共有結合により、変性される天然、または合成ＤＮＡまたはＲＮＡの分子を含む。他のもののなかで、このような核酸分子は、アンチセンス核酸分子、遺伝子− エンコーディングＤＮＡ（通常、適当なプロモータ配列を含む）、リボザイムオリゴヌクレオチドσ−アノマー、エチルホスフォトリエステル類縁体、アルキルホスフォメート、ホスフォロチオネート（phosphorothionate）およびホスフォロジチオネート（phosphorodithionate）オリゴヌクレオチド等である。事実、該核酸成分は、大きな効力を持って細胞内に移転されるか、分解工程から安定な、あるいは動物に投与後の生物分布が改良されたいかなる核酸であってもよい。式（Ｉ）〜（VIII）による有用な重合体の例としては、次式のポリ（オキシエチレン）−ポリ−Ｌ−リシン）ジブロック共重合体（ただし、式中、ｉは約５〜約１００の整数であり、またｊは約４〜約１００の整数である。）である。第２の例は、次式のポリ（オキシエチレン）−ポリ（Ｌ −アラニン−Ｌ−リシン）ジブロック共重合体である。（ただし、式中、ｉは約５〜約１００の整数であり、またｊは約４〜約１００の整数である。）である。第３の例は、次式のポリ（オキシエチレン）−ポリ（プロピレンイミン／ブチレンイミン）ジブロック共重合体である。（ただし、式中、ｉは約５〜約２００の整数であり、またｊは約１〜約１０の整数である。）である。第４の例は、次式のポリ（オキシエチレン）−ポリ（Ｎ− エチル−４−ビニルピリジニウムブロマイド）（「ｐＯＥ−ｐＥＶＰ−Ｂｒ」）（ただし、式中、ｉは約５〜約１００の整数であり、またｊは約１０〜約１００の整数である。）である。さらに他の例は、次式の重合体（ただし、式中、ｉは約１０〜約２００の整数であり、ｊは約１〜約８の整数であり、またｋは約１０〜約２００の整数である。）である。さらに他の例は、次式の重合体（ただし、Ｇは−（ＮＨ（ＣＨ₂）₃）₃−ＣＨ₂よりなり、ｉおよびｊは式（ＸVI II）の定義と同じであり、またｍは約１〜約８の整数である。本発明で使用されるブロック共重合体は、具体的には、ある情報下で直径約１０ｎｍ〜約１００ｎｍのミセルを形成する。ミセルは、両親媒性の非極性部分のミクロ相分離に基づいて水溶液中で形成するある種の両親媒性分子の超分子複合体である。所定の温度で両親媒性の濃度が、両親媒性の特徴である臨界ミセル濃度（「ＣＭＣ」）に達するとき形成される。このようなミセルは、−般に約１０〜約３００個のブロック共重合体を含んでいる。該ブロック共重合体の親水性および疎水性部分のサイズを変えることにより、生理学条件下におけるミセルを形成する共重合体の傾向を変えることができる。該ミセルは、Ｂブロックの水不溶性の繰り返し単位および電荷中和核酸により形成される高密度コアおよびＡブロックにより形成される親水性シェルを有している。該ミセルは、溶液中で翻訳ならびに回転自由度を有しており、該ミセルを含有する溶液は水に対してより低い密度を有している。ミセルの形成は、具体的には約０．００１〜５％（ｗ／ｖ）の共重合体濃度で起こる。一般に、ポリカチオン性重合体およびポリ核酸の濃度は、ポリヌクレオチド組成物中で、少なくとも約１０倍以下、好ましくは少なくとも約５０倍よりも低い濃度である。高い濃度では、本発明で使用されるブロック共重合体のあるものはゲルを形成する。これらのゲルは粘性であり、共重合体分子の翻訳ならびに回転自由度は、共重合体分子の間で相互作用の連続ネットワークにより非常に強制される。ゲル内で、Ｂブロック繰り返し単位のミクロ分離が起こっても起こらなくてもよい。ゲルの生成を避けるためには、（ブロック共重合体およびポリエーテル／ポリカチオン重合体の両方のために）重合体濃度は、好ましくは約１５％（ｗ／ｖ）以下、より好ましくは約１０％以下、さらに好ましくは５％以下である。本発明の第１の実施態様では、ゲルの生成を避けることがより好ましい。ポリヌクレオチド組成物がカチオン性成分を含有する場合には、カチオン類は、ポリヌクレオチドのリン酸塩基と会合し、リン酸塩基上の電荷を中和しかつポリヌクレオチド成分をより疎水性にする。中和は、Ｒ−型セグメント重合体またはポリカチオン性重合体上にカチオンにより供給することが好ましい。しかしながら、リン酸塩電荷は、化学的変性またはＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）−Ｎ，Ｎ´−３−メチルアンモニウムクロライド］のごとき疎水性カチオンとの会合によっても中和され得る。水溶液中では、電荷を中和されたポリヌクレオチドは、「ポリヌクレオチド複合体」と命名され得る超分子のミセル状粒子を形成するものと思われる。疎水性のコアないし複合体は、電荷を中和されたポリヌクレオチドおよびＢ−型共重合体ブロックを含んでいる。親水性シェルは、Ａ −型共重合体ブロックよりなる。該複合体のサイズは、約１０ｎｍ〜約１００ｎｍの粒系の範囲で変えられる。ある場合には、未配合成分から複合体を分離するのが実用的である。例えば、これはゲルフィルトレーションクロマトグラフィにより行なうことができる。該ポリヌクレオチド組成物の成分比は、該組成物中のポリヌクレオチドの有効なトランスメンブラン透過性を最適化するのに重要なファクターである。この比は、生理学的ｐＨとして組成物中に負に帯電した基に対する正に帯電した基の比率であるφ比により同定され得る。φ＜１の場合、該複合体は、ポリヌクレオチドから非中和リン酸塩を含む。非中和電荷に隣接したポリヌクレオチドの部分は、ポリヌクレオチド複合体のシェルの一部分であると思われる。これに対応して、φ＞１の場合、ポリカチオン性またはＲ−型セグメントは、非中和電荷を有し、またこの非中和部分は、複合体のシェルの部分を形成するようになる。一般に、φは、約０（カチオン性基なし）から約１００の間で変り、好ましくはφは、約０．０１〜約５０、より好ましくは約０．１〜２０の間である。φは、トランスメンブラン輸送を増大させるために、また組成物がポリヌクレオチドを含む場合には、複合体の安定性を増大させるために変えられる。φの変更は、また動物に投与後の複合体の生物分布に影響する。最適のφは、他の事柄のうちで、（１）ポリヌクレオチド組成物が使用される情況、（２）使用される特定の重合体およびオリゴヌクレオチド、（３）ターゲットとする細胞または組織および（４）投与のモードに左右される。ある好ましい実施態様において、ミセルを形成する共役（conjugate）の能力は、溶解性がトランスメンブラン輸送を促進する水性または非水性媒体中に溶解する能力のようなある望ましい性質と関連するものと思われる。ブロック共重合体のミセル形成能力は、疎水性ならびに親水性重合体ブロックの存在と関連するものと思われる。疎水性ブロックは、ポリカチオン性重合体、Ｒ−型ブロックまたはある種の疎水性非重合体カチオンで電荷を中和されるポリヌクレオチドセグメントおよびＢ−型ブロックにより得られる。親水性ブロックは、Ａ−型ブロックおよびある程度までは、疎水性を付与するイオン性種により不完全に中和されたポリヌクレオチドセグメントにより得られる。本発明のブロック共重合体は、好ましくは溶解度を増大させかつターゲットとしない分子および細胞による相互作用を減少させるＡ−型ブロックを含む。ある場合には、非共役会合によりターゲットとする分子に配合することが望ましい（例えばKabanovら、J.Controlled Release,22;141）（1992）参照）。該組成物と会合し得るターゲットとする分子は、具体的には、細胞部位および疎水性基に対する親和性を有するターゲット基を有する。ターゲットとする分子は、ポリヌクレオチド複合体と自然に会合し、かつ疎水性基を通して定着する。これらのターゲット付加物は具体的には、組成物中に約１０％以下の共重合体を有している。ターゲットされる分子において、疎水性基は、他のもの中で、脂肪族アシル基のような親油性基である、別法としては、ブロック共重合体あるいは他の天然または合成重合体である。ターゲットとする分子のターゲット基は、しばしば抗体、具体的にはある細胞の表面抗原用の特異性との抗体を含んでいる。また、例えば、細胞表面レセプタとの特異な相互作用を有するホルモンや細胞表面レセプターを有する医薬がある。例えば、糖脂質は、多糖類レセプターをターゲットとし得る。ターゲットされる分子は、Ｒ−型ブロック重合体を含むものと同等の重合体ブロックやポリカチオン性重合体に付着し得ることに注目すべきである。例えば、ターゲット分子は、式ＸVIII、IX、ＸＸおよびＸＸＩの重合体の−０Ｈ末端基、式ＸVIII（好ましくは末端リシル残基のε−アミノ基）、ＸＸまたはＸＸII Iの重合体の末端基、あるいは式ＸVIIIおよびＸIXの重合体の−ＣＯＯＨ末端基に共有結合している。ターゲット分子は、ポリヌクレオチド組成物の相互輸送、例えば核への輸送、例えばSoukchareunら、Bioconjug ate chem.6,43,1995またはArarら、Bioconjugate Chem.6,43,1995に記載されているフュソジェニックペプチド（fusogenic peptide）、核型ペプチドまたは細胞中に部位−目的輸送（特にエンドソームコンパートメントからチトプラズムへの出口または核へのデリバリー）を与える他の生体特異性基をターゲット分子として使用することにより促進される。本発明の組成物のポリヌクレオチド成分は、いかなるポリヌクレオチドでもよいが、好ましくは少なくとも約３個の塩基、好ましくは少なくとも５個の塩基を有するポリヌクレオチドである。これらのうち、好適なポリヌクレオチドは、ウィルス性ゲノムおよびウィルス（脂質またはたんぱく質ウィルスコートを含む）である。ウィルスは、本発明の第１、第３または第５の実施態様とともに使用することが特に好ましい。「ポリ核酸」および「ポリヌクレオチド」という用語は、相互に使用できる。オリゴヌクレオチドは、ポリヌクレオチドである。ＤＮＡおよびＲＮＡもポリヌクレオチドである。ポリヌクレオチド誘導体は（ｉ）成分が開裂し、不活性化されあるいは転位され、その結果、生成物がポリヌクレオチドとしての機能である１個以上の成分または（ｉｉ）成分がポリヌクレオチドとしての機能からの誘導体を抑制されない１個以上の成分を有するポリヌクレオチドである。ポリヌクレオチドの機能は、つぎのうち一つまたはそれ以上を含む。すなわちトランスフェクトされるべき他のポリヌクレオチドを結合するか、リプレスするか、たんぱく質の合成を指示するか、ＲＮＡまたはＤＮＡまたはゲノムを導入するか、あるいはリポザイム等として作用する。ポリエチレンオキサイド−ポリプロピレンオキシド共重合体のためには、親水性／疎水性の性質およびブロック共重合体のミセル形成性は、ある程度までｎ比の値に関連している。このｎ比は、（ただし、式中、｜Ｂ｜および｜Ａ｜は、共重合体の疎水性および親水性ブロック中の繰り返し単位の数であり、またｂおよびａは、相当する繰り返し単位の分子量である。）で定義される。ｎの値は、具体的には約０．２〜約９．０、好ましくは約０．２〜約１．５である。ブロック共重合体の混合物である場合には、ｎはｎが分布共重合体の平均分子量であり、平均分子量は成分共重合体の重量比に基づく。ポリエチレンオキサイド−ポリプロピレンオキサイド共重合体以外の共重合体が使用される場合には、同様な試みが、重合体の一つのメンバーのクラスの他のメンバーのクラスに対する疎水性／親水性の性質に関して開発され得る。本発明のポリヌクレオチド組成物は、経口的に、局所的に、経腟的に、エアゾルの使用による経肺的にあるいは非経口的に、すなわち経筋肉的に、経皮膚的に、経腹腔内的にあるいは経静脈的に投与することができる。該ポリヌクレオチド組成物は単独で投与することもできるが、あるいは医薬的に受容し得る担体または標準的な医薬治療による賦形剤と混合して投与することもできる。投与の経口モードのためには、ポリヌクレオチド組成物は、タブレット、カプセル、舐剤、トローチ、粉末、シロップ、エリキシル剤、水溶液、水懸濁液等の形で使用できる。タブレットの場合には、担体としては、ラクトース、クエン酸ナトリウムおよびリン酸の塩がある。澱粉のごとき種々の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクのごとき滑剤が通常タブレット中で使用される。カプセル形の経口投与には、有用な希釈剤としては、ラクトースおよび高分子量のポリエチレングリコールがある。経口投与に水懸濁液が必要な場合には、ポリヌクレオチド組成物は、乳化剤や懸濁剤の配合が必要となる。必要によりある種々の甘味剤および／またはフレーバ剤が添加される。非経口的投与には、コンジュゲートの滅菌溶液が通常製造され、該溶液のｐＨは適当に調整され緩衝化される。経静脈的な利用には、溶質の全濃度は製剤が等張になるように調節する必要がある。経眼投与には、軟膏剤または滴下し得る液体は、アプリケータまたは眼滴下具のような公知の眼投与システムにより投与される。このような組成物には、ハイアロニック酸、コンドロイチンサルフェート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはポリ（ビニルアルコール）のごとき粘膜模倣品（ｍｕｃｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）、ソルビン酸、ＥＤＴＡまたはベンジルクロニウムクロライドのごとき保存剤および通常の量の希釈剤および／または担体が含まれている。経肺動脈投与には、希釈剤および／または担体がエアロゾルの形成を許すよう適当に選ばれる。実施例１−トランスフェクション効率−第一の実施態様による複合体本実験は、マウスの乳腺(mamory)腫瘍細胞系である、ＮＩＨ３Ｔ３細胞中にプラスミドｐβ−Ｇａｌを導入しようとするものである。プラスミドｐβ−Ｇａｌは、予め真核細胞の転写単位及び大腸菌(E．coli)のβ−ガラクトシダーゼのハイブリッドが導入されたｐＵＣ１９（ジーンバイオロジー(Gene Biology)、ラシアンアカデミーオブサイエンセス(Russian Academy of Sciences)により市販）からなるものである。このプラスミドを用いて、細胞吸収効率を、処理細胞から抽出されるβ−ガラクトシダーゼ活性を測定することにより測定した。使用される共重合体は、ｘ＋ｚが５１であり、ｙが３９である式（ＸＩＶ）のトリブロック共重合体（以下、「プルロニックＡ(Pluronic A)」と称する）であった。使用されるポリカチオンは、ポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロミド）［poly(N-ethyl-4-vinylpyridinium bromide)］（「ｐＥＶＰ−Ｂｒ」）であった。１０μｇ／ｍｌのｐβ−Ｇａｌ（主に高次コイル）溶液を１０ｍｇ／ｍｌのプルロニックＡ(Pluronic A)及び４５μｇ／ｍｌのｐＥＶＰ−Ｂｒを含むＰＢＳ溶液中に調製した。これらの量は、プラスミドのリン酸基に対するポリカチオンの塩基性基の割合が約１０になるように算出された。ＤＮＡに対するプルロニックＡの割合は約１０⁴であった。このストック調製物を瀘過滅菌し、一部を、ｐβ−Ｇａｌの濃度が１μｇ／ｍｌになるように、ダルベッコの改変イーグル培地(Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium)（「ＤＭＥＭ」）で１０倍希釈した。この溶液を「プルロニックＡトランスフェクション培地(Pluronic A tr ansfecting medium)」とした。ＮＩＨ３Ｔ３細胞を、２ｍＭのグルタミン及び１０％胎児ウシ血清（「ＦＣＳ」）を含むＤＭＥＭ培地を用いて、５％ＣＯ₂下で３７℃で単層培養で生育させた。単層培養で生育させた細胞を掻き取り、新鮮な培地で３回洗浄することによりトランスフェクション工程用に調製した。本発明の方法により形質転換される予定の洗浄細胞のアリコートを１０⁶細胞／ｍｌプルロニックＡトランスフェクション培地の濃度で懸濁した。懸濁した細胞を５％ＣＯ₂下で３７℃で２時間インキュベートした。次に、この細胞を新鮮な培地で洗浄し、再播種した。リン酸カルシウム沈殿によりトランスフェクションされる予定の細胞のアリコートは、原稿プロフェクションマンマリアントランスフェクションシステムズ(Profection of Mammalian Transfection Systems)、テクニカルマニュアル(Technical Manual)（１９９０年）における、プロメガオブマデイソン(P romega of Madison)、ウィスコンシン(Wisconsin)によって推奨されるのと同様にしてトランスフェクションされた。詳しくは、ｐβ−Ｇａｌを０．２５ＭＣａＣｌ₂と混合した。この混合物を等容の２×ＨＢＳ（ハンクス緩衝液、ギブコ(GIBCO)、グランドアイランド(Gr and Island)、ニューヨークより市販）と混合して、１μｇ／ｍｌのｐβ−Ｇａｌを含む混合物を得た。この不透明な混合物を１０分間室温でインキュベートした後、細胞に使用した。懸濁細胞を５％ＣＯ₂下で３７℃で２時間インキュベートした。次に、この細胞を新鮮な培地で洗浄し、再播種した。再播種された細胞を１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ培地中で４８時間インキュベートした。インキュベーション中、培地を１６時間後新鮮な培地で置換した。４８時間のインキュベーション後、各インキュベーションの細胞を掻き集めて、ＰＢＳで洗浄し、１００μｌの０．２Ｍトリス−塩酸（ｐＨ７．４）中に再懸濁した。この細胞を数回凍結融解サイクルにより溶解し、６，０００×ｇ超で遠心した。５０μｌの上清を各溶解産物チューブから除去し、０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）における０．１ｍＭ４−メチル−ウムベリフェリル−β− Ｄ−ガラクトピラニシド（4-methyl-umbelliferril-β-D-galactopiraniside）（基質）溶液５０μｌと混合した。各混合物を３７℃で２０分間インキュベートして存在するβ−ガラクトシダーゼを基質上で作用させた。５０μｌの０．４Ｍグリシン（ｐＨ１０．５）を加えて、β−ガラクトシダーゼの反応を終了させた。β−ガラクトシダーゼ活性を、蛍光分光（λ_ex＝３６５ｎｍ、λ＝４５０ｎｍ）により測定できる、メチルベリフェロン(methylbelliferon)の存在によって示した。結果を以下に示す。実施例２−トランスフェクション効率−第一実施態様のによる複合体本実験において、ＭＤＣＫ細胞（イヌの腎臓由来）を用いたトランスフェクション効率を試験した。再度繰り返すが、ｐβ−Ｇａｌは指示薬としてのポリヌクレオチドであった。ポリヌクレオチドのポリカチオン成分は、Ｎ−エチル−４− ビニルピリジニウムブロミド[N-ethyl-4-vinylpyridinium bromide]及びＮ−セチル−４−ビニルピリジニウムブロミド[N-cetyl-4-vinylpyridinium bromide] の共重合体からなり、この際の導入される単量体のモル比は９７：３であった（以降、「ｐＥＶＰ−ｃｏ−ｐＣＶＰ−Ｂｒ」と称する）。このブロック共重合体は、ｘ＋ｚが１８であり、ｙが２３である式（ＸＩＶ）のトリブロック共重合体からなった（以下、「プルロニックＢ(Pluronic B)」と称する）。１μｇ／ｍｌｐβ−Ｇａｌ、３μｇ／ｍｌｐＥＶＰ−ｃｏ−ｐＣＶＰ−Ｂｒ及び１％（ｗ／ｖ）プルロニックＢ(Pluronic B)からなるプルロニックＢトランスフェクション溶液(Pluronic B transfecting medium)を実施例１と同様にして調製した。ヌクレオチドのリン酸基に対するポリカチオンの塩基性基の割合は約７であった。ｐβ−Ｇａｌに対するプルロニックＢの重量比は約５×１０³であった。ＭＤＣＫ細胞を９０ｍｍプレート上に１枚のプレート当たり８×１０⁵細胞で播き、血清含有成長培地で一晩インキュベートした。次に、この血清含有培地を血清を含まない培地に置き換え、細胞を２４時間５％ＣＯ₂下で３７℃でインキュベートした。次に、ポリヌクレオチド複合体で処理しようとする細胞に関しては、培地を５ｍｌのプルロニックＢトランスフェクション溶液(Pluronic B transfecting medium)で置換した。この細胞を、５％ＣＯ₂下で３７℃で、緩やかに振盪させながら、インキュベートした。コントロール実験では、細胞をポリヌクレオチド複合体でトランスフェクションした後、培地を５ｍｌのプルロニックＢトランスフェクション溶液で置換した。この細胞を、２時間、５％ＣＯ₂下で３７℃で、緩やかに振盪させながら、インキュベートした。コントロール実験では、細胞を、（懸濁細胞ではなく、播種された細胞をトランスフェクションする以外は）上記したのと同様にしてリン酸カルシウム法を用いてトランスフェクションした。プルロニックＢトランスフェクション溶液またはリン酸カルシウムで処理した後、細胞を新鮮な培地で５〜６回洗浄した。次に、この細胞を５％ＣＯ₂下で３７℃で４８時間１０％ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ中でインキュベートした。上記インキュベーションの始めの１６時間たった後、培地を置換した。インキュベーション後、細胞をＰＢＳで洗浄し、トリプシン処理により細胞から離脱させ、ＰＢＳで再洗浄した。β−ガラクトシダーゼを実施例１と同様にして測定した。結果を以下に示す。実施例３−トランスフェクション効率−第一の実施態様による複合体本実験において、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を用いたトランスフェクション効率を試験した。ポリヌクレオチド複合体のポリヌクレオチド成分はｐβ−Ｇａｌであった。ポリカチオン成分はｐＥＶＰ−Ｂｒからなった。ブロック共重合体は、ｉは１０であり、ｊは１２である式（ＸＶＩＩ）のオクタブロック共重合体（以下、ＢＡＳＦから市販の「プルロニックＣ(Pluronic C)」と称する）からなった。１μｇ／ｍｌｐβ−Ｇａｌ、４μｇ／ｍｌｐＥＶＰ−Ｂｒ及び１％（ｗ／ｖ）プルロニックＣ(Pluronic C) からなるプルロニックＣトランスフェクション溶液(Pluronic B transfecting m edium)を実施例１と同様にして調製した。ヌクレオチドのリン酸基に対する塩基性基の割合は１０であった。ｐβ−Ｇａｌに対するプルロニックＣの重量比は１０³であった。トランスフェクションプロトコルは実施例２で使用したのと同様であった。結果を以下に示す。実施例４−細菌の形質転換−第二の実施態様による複合体本実験において、バチルスサブチリス(Bacillus subtilis)のＭＣ５菌株を用いた形質転換効率を試験した。ポリヌクレオチド複合体のポリヌクレオチド成分は、テトラサイクリン耐性をコード化するプラスミドである、プラスミドｐＢＣ１６であった。式（ＶＩ）によるブロック共重合体を使用した。特に、ブロック共重合体は、ｉは４４であり、ｊは２０である、式（ＸＸＩ）のポリ（オキシエチレン）−ポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロミド）［poly(oxy ethylene)-poly（N-ethyl-4-vinylpyridinium bromide)］であった。第二の実施態様によるポリヌクレオチド複合体のストック溶液は、上記したトランスフェクション溶液によるのと同様にした調製した。溶液におけるＤＮＡリン酸基に対する共重合体の塩基性基の割合は０．２であった。細菌を、形質転換培地としての、スピジゼンＩＩ（Spizizen II）（スピジゼン(Spizizen)、エフエヌエーエス、ユーエスエー(F.N.A.S.，U.S.A.)、４４：１０７２（１９５８年）参照）中に懸濁し、細胞のアリコートを様々な濃度のポリヌクレオチド複合体または遊離(free)ｐＢＣ１６でインキュベートした。細胞を３７℃で１時間、複合体または遊離ＤＮＡ(free DNA)と共にインキュベートした。インキュベーション後、細胞を１０ｍｇ／ｍｌテトラサイクリンを含む寒天培地上に播種した。結果は、各実験条件下で産生したテトラサイクリン耐性コロニーの数で測定されたが、以下に示す。実施例５−ヌクレアーゼからの保護本実験では、プラスミドｐＴＺ１９及び式（ＸＸＩ）［ｉは４４であり、ｊは２０である、ポリ（オキシエチレン）−ポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロミド[poly(oxyethylene)-poly(N-ethyl-4-vinylpyridinium bromide)] ］のジブロック共重合体の複合体を形成した。ＰＢＳ中に溶解されたポリヌクレオチド複合体の溶液は、約４μｇ／ｍｌのプラスミド及び２０μｇ／ｍｌのジブロック共重合体を含んだ。これらの量は、ＤＮＡのリン酸基に対するポリカチオンブロックにおける塩基性基の割合が５になるような量であった。コントロールのインキュベーションでは、等量の遊離プラスミドを緩衝液に溶かした。ＰＶＵＩＩヌクレアーゼを遊離ＤＮＡまたはポリヌクレオチド複合体を含む溶液サンプルに添加し、様々な消化時間後の、未消化の環状プラスミドＤＮＡの量を、ポリアクリルアミドゲルの電気泳動によって測定した。カバノフ(Kabanov)ら、バイオポリマーズ(Biopolymers)、３１：１４３７〜１４４３（１９９１年）を参照。結果は以下のとおりであった。実施例６−オリゴヌクレオチドの安定化本実施例では、ＨＩＶ−１のｔａｔ遺伝子の転写開始部位と相補性を有するオリゴヌクレオチド（ＧＧＣＴＣＣＡＴＴＴＣＴＴＧＣＴＣからなる、「アンチ− ｔａｔ」）を含む複合体を、式（ＸＩＸ）（ｉは４４であり、ｊは８である、（ポリオキシエチレン−ポリ（Ｌ−アラニン−Ｌ−リシン））のジブロック共重合体を用いて調製した。このオリゴヌクレオチド複合体は、０．７５ＯＤ₂₆₀／μ ｌオリゴヌクレオチドの濃度でＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０）中で調製した。ポリヌクレオチドのリン酸基に対するポリカチオンのイミノ及びアミノ基の割合は約５０であった。この混合物を室温で１時間インキュベートして、複合体を形成させた。次に、この複合体を０．０５ＭＮａＣｌを溶出液として使用して、セファデックスＧ−２５のゲル瀘過クロマトグラフィーによって精製した。得られた複合体溶液は、０．１１ＯＤ₂₆₀／μｌオリゴヌクレオチドの濃度であった。非複合体オリゴヌクレオチドの対照溶液を調製した。マウスの血漿のアリコート（１０μｌ）を等容のオリゴヌクレオチド複合体溶液または遊離オリゴヌクレオチド溶液と混合した。サンプルを様々な時間、３７℃でインキュベートした。血漿中の酵素とのオリゴヌクレオチドの反応を終了させるために、サンプルを水で希釈して、フェノール：クロロホルム（１：１）の水飽和混合液で抽出した。抽出液の水相を分離し、その中のオリゴヌクレオチドを３％過塩素酸リチウムで沈殿させた。沈殿物をアセトンで洗浄した後、１００μｌの水に溶解した。非分解オリゴヌクレオチドの存在を、Ｃ₁₈−シラソルブカラム（C₁₈-Silasorb column）（４×９０ｍｍ、ギルソン(Gilson)、フランス）及び溶出液として０．０５Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム(trlethylammonium acetate)（ｐＨ７．０）におけるアセトニトリルの濃度勾配を用いた高速液体クロマトグラフィーで決定した。結果は以下のとおりである。実施例７−オリゴヌクレオチドの安定化本実施例は、式（ＸＸ）（ｉが４４であり、ｊが４〜８である、ポリオキシエチレン−ポリプロピレンイミン／ブチレンイミン(polyoxyethylene-pol ypropyleneimine/butyleneimine)）のジブロック共重合体と複合体を形成した際の、実施例６において記載されたオリゴヌクレオチドの安定性を試験したものである。オリゴヌクレオチド濃度が約０．１３ＯＤ₂₆₀／μｌである以外は、実施例６で使用したのと同様の方法を本実施例に適用した。結果を以下に示す。実施例８−アンチセンス細胞導入効率本実験は、ＳＫＶＬＢ細胞の逆多薬剤耐性(reversing multi-drug resistance )における、ＭＤＲ１遺伝子産物をコード化するｍＲＮＡの４２２〜４３８番目の位置と相補性を有する配列ＣＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＣＡＴＣＣＣの１７鎖のオリゴヌクレオチドからなるアンチセンス分である、「アンチ−ＭＤＲ」の有効性を試験するものであった。ＳＫＶＬＢ細胞は、卵巣癌細胞系由来の多薬剤耐性細胞である。ＭＤＲ１遺伝子は、ＳＫＶＬＢ細胞における多薬剤耐性に応答するものとして同定された（エンディコット(Endicott)及びリング(Ling)、アンレブビオケム(Ann．Rev．Biochem.)、５８：１３７（１９８９年））。特に、本発明のポリヌクレオチド複合体における及び遊離の状態でのアンチ−ＭＤＲオリゴヌクレオチドの効率を比較した。コントロールとしては、上記遊離の及び複合体の形態のアンチ−ｔａｔオリゴヌクレオチドもまた使用した。ポリヌクレオチド複合体は、式（ＸＸ）（ｉが４４であり、ｊが９〜１０である、ポリオキシエチレン−ポリプロピレンイミン／ブチレンイミン(p olyoxyethylene-polypropyleneimine/butyleneimine)）のジブロック共重合体を用いて形成した。複合体は、実施例６に記載された方法と同様の操作によって調製した。複合体におけるまたは遊離状態におけるオリゴヌクレオチド濃度は０．１７ＯＤ₂₆₀／μｌであった。共重合体は、オリゴヌクレオチドのリン酸基に対するポリカチオンのブロックのイミノ及びアミノ基の割合を１０とするのに十分な濃度で存在した。ＳＫＶＬＢ細胞を遊離または複合体のオリゴヌクレオチド（オリゴヌクレオチド含量に対して２０μＭの濃度で）の存在下で５％ＣＯ₂下で３７℃で３日間インキュベートした。遊離または複合体のオリゴヌクレオチドを含む新鮮な培地を１２時間毎に添加した。上記したように処理された細胞に関するダウノマイシンの細胞毒性（ＩＣ₅₀）を、アレイ(Alley)ら、カンサーレス(Cancer Res.)、４８：５８９〜６０１の方法を用いて測定した。結果は以下の通りである。実施例９−ヘルペスウィルスを阻害するように設計されるアンチセンスオリゴヌクレオチド予めウンデシルホスフェート置換基(undecylphosphate substituent)で５’末端が及びアクリジン基で３’末端が共有結合修飾された、１２鎖のオリゴヌクレオチドを用いた実験を使用した。このオリゴヌクレオチドの修飾は、チョーチュング(Cho-Chung)ら、バイオケミストリーイント(Biochemistry Int.)２５：７６７〜７７３（１９９１年）によって報告された。使用したオリゴヌクレオチド配列、ＣＧＴＴＣＣＴＣＣＴＧＵは、ヘルペスシンプレックスウィルス１（「ＨＳＶ−１」）の９８３〜９９４番目でのスプライシング部位と相補性を有する。コントロールとしては、インフルエンザウィルスによって産生されるＲＮＡと相補性を有する等価に修飾される配列（ＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＧ）を使用した。オリゴヌクレオチドを複合体のまたは遊離の状態でＨＳＶ−１感染細胞に適用した。複合体を使用する際には、複合体は、式（ＸＩＸ）（ｉは４４であり、ｊは８であるポリオキシエチレン−ポリ（Ｌ−アラニン−Ｌ−リシン））のジブロック共重合体を用いて形成した。オリゴヌクレオチド複合体は実施例６と同様にして形成した。アフリカのマルモセットの腎臓細胞（「Ｖｅｒｏ」細胞）に、ヴィノグラドフ (Vinogradov)ら、ビービーアールシー(BBRC)、２０３：９５９（１９９４年）によって記載されるのと同様にして、ＨＳＶ−１ウィルス（ザミュージアムオブウィルスストレインズ(the Museum of Virus Strains)、ディアイイワノフスキー、インストオブヴィロル(D.I．Ivanovskii，Inst．of Virol.)、ロシア国(Russian Federation)から得た、株Ｌ２）を感染させた。感染細胞をＰＢＳで洗浄した。洗浄後、１０％胎児ウシ血清及び遊離または複合体オリゴヌクレオチドを含む新鮮なＲＰＭＩ−１６４０培地を細胞に添加した。次に、細胞を２４時間、５％ＣＯ₂下で３７℃でインキュベートした。さらに、細胞培養液のＨＳＶ−１感染率を、ヴィロロジー(Virology)、アプラティカルアプローチ(A Pratical Approach)、マーイ(Mahy)著、アイアールエルプレス(IRL Press)、ワシントン、ＤＣ、１９８５年に記載されたパッチ生産方法を用いて測定した。様々な濃度のオリゴヌクレオチドを用いた、結果は、以下のとおりである。実施例１０−ヘルペスウィルスを阻害するように設計されるアンチセンスオリゴヌクレオチド特記しない限り、本実施例は、実施例９で使用したのと同様の方法を用いた。使用した細胞は、チャイニーズハムスター腎臓細胞系である、ＢＨＫ細胞であった。複合体の形態を有するオリゴヌクレオチドを使用する際には、複合体は、式（ＸＶＩＩ）（ｉは４４であり、ｊは３０であるポリオキシエチレン−ポリ−Ｌ −リシン）のジブロック共重合体を用いて形成した。複合体のストック溶液の濃度は０．０９ＯＤ₂₆₀／μｌであった。オリゴヌクレオチドのリン酸基に対するポリカチオンブロックのイミノ及びアミノ基の割合は１０であった。複合体のまたは遊離した形態の、オリゴヌクレオチドを３．０μＭの濃度で細胞に適用した。結果を以下に示す。実施例１１−ＨＳＶのインビボにおける阻害式（ＸＶＩＩ）（ｉは４４であり、ｊは３０であるポリオキシエチレン−ポリ −Ｌ−リシン）のブロック共重合体およびアンチ−ＨＳＶ及びアンチ−インフルエンザオリゴヌクレオチドとのポリヌクレオチド複合体を実施例９に記載された方法を用いて形成した。複合体のストック溶液の濃度は、０．９ＯＤ₂₆₀／μｌであった。オリゴヌクレオチドのリン酸基に対するポリカチオンブロックのイミノ及びアミノ基の割合は１０であった。近交系ホワイトマウス(white mouse)（体重：６から７ｇ）に、３０μｌのウィルス懸濁液（力価：１０^-7ＬＤ₅₀／ｍｌ）を腹腔内注射することによりＨＳＶ −１（ベロラシアンレスインストオブエピデミオルアンドミクロバイオル(Belorussian Res．Inst．of Epidemiol．& Microbiol.)、ミンスク(Mins k)のＣ１株）を感染させた。アンチ−ＨＳＶ複合体、アンチ−インフルエンザ複合体、遊離アンチ−ＨＳＶ、または遊離アンチ−インフルエンザを、感染後２、１２、２４、４８または７２時間後にそれぞれ所定のマウスの尾静脈に注射した（１０μｌ）。実施例１２−ポリヌクレオチド複合体のプラズマ寿命(plasma life) ＨＩＶ−１のｔａｔ遺伝子の転写開始部位と相補性を有する³²Ｐ−標識された１７マー（ＧＧＣＴＣＣＡＴＴＴＣＴＴＧＣＴＣ）を本実施例で使用した。このオリゴヌクレオチドを、ブートリン(Boutorin)ら、バイオコンジュゲートケミストリー(Bioconjugate Chemistry)、２：３５０〜３５６（１９９０年）に記載されるのと同様にして、コレステロールで５’−末端を修飾した。オリゴヌクレオチドのポリヌクレオチド結合体(conjugate)を式（ＸＸ）（ｉが４４であり、ｊが９〜１０である、ポリオキシエチレン−ポリ（プロピレンイミン／ブチレンイミン(polyoxyethylene-poly(propyleneimine/butyleneimine))）のブロック共重合体を用いて形成した。複合体のストック溶液（ＰＢＳに溶解）の濃度は、０．１８ＯＤ₂₆₀／μｌであった。オリゴヌクレオチドのリン酸基に対するポリカチオンブロックのイミノ及びアミノ基の割合は５０であった。雄のＣ５７／Ｂ１／６マウス（体重：２０〜２４ｇ；ラシアンリサーチセンターオブモレキュラーダイアグノスティックスアンドテラピー(Rus sian Research Center of Molecular Diagnostics and Therapy)、モスクワから得た）に、ＰＢＳに溶解した０．１８ＯＤ₂₆₀ ／μｌで、アンチ−ＨＩＶ結合体または遊離アンチ−ＨＩＶ５０μｌを静脈内注射した。注射してから所定の時間後、血液サンプルを尾静脈から採取し、動物を殺した。血液または組織サンプル中の放射性物質の量を（適当に可溶化した後）液体シンチレーション計測によって測定した。結果は以下のとおりである。実施例１３−カチオン性ブロック共重合体の合成１，４−ジブロモブタン（５．４ｇ、２５ミリモル、アルドリッヒコーポレイション(Aldrich Co.)製、ミルウォーキー、ダブリューアイ(Milwaukee，WI)）を、１００ｍｌの１，４−ジオキサンに溶かしたＮ−（３−アミノプロピル）− １，３−プロパンジアミン（６．５５ｇ、５０ミリモル、アルドリッヒコーポレイション(Aldrich Co.)製）の溶液に添加した。この反応混合物を１６時間２０℃で撹拌した。この反応生成物は、自然に、臭化水素酸塩として溶液から沈殿する。この沈殿した第一の中間体を集めて、メタノールにおける１０％トリエチルアミンの溶液からロータリーエバポレーションによって２回乾燥した。上記蒸発工程は、実質的な量の臭化物塩を除去するのに有効であった。第一の中間体を５０ｍｌの１，４−ジオキサンに溶解して、２．７ｇ（１２．５ミリモル）の１，４−ジブロモブタンと反応させた。再度繰り返すが、反応は、２０ ℃で１６時間行い、得られた第二の中間体を回収し、上記したのと同様にして乾燥した。第二の中間体をｐＨ７〜８に酢酸で中和し、水性溶出液を用いて、セファデックスＧ−２５のゲル瀘過によって精製した。それぞれ、１０６０、７００及び５００の見かけの分子量を有する、３つの主要なポリイミン画分が得られた。ポリ（オキシエチレングリコール）（１．５ｇ、分子量１５００、フルカ(Flu ka)製）を８ｍｌの１，４−ジオキサンに溶解して、０．１７ｇ（１ミリモル）のＮ，Ｎ’−カルボニルイミダゾール（アルドリッヒコーポレイション(Aldri ch Co.)製）と２０℃で３時間反応させた。この反応混合物を２つに分けた。各部分を分子量が１０６０または７００のポリイミン画分の１０％（ｗ／ｖ）溶液４ｍｌと混合し、さらに０．０１ＮＮａＯＨを含ませた。この混合物を２０℃ で１６時間撹拌した。この混合物から、式（ＸＸ）の及び様々な分子量の範囲を有するブロック共重合体をゲル瀘過によって単離した。実施例１４−カチオン性ブロック共重合体の合成０．５ｇのメトキシ−ＰＥＧのスクシンイミジルカルボネート(succinimidyl carbonate)（分子量５０００、シェアウォーターポリマーズ、インコーポレイテッド(Shearwater Polymers，Inc.)、アメリカ合衆国）を１，４−ジオキサンに溶解した。このジオキサン溶液を０．２ｇの上記分子量が１０６０のポリイミン重合体を含む水溶液に添加し、この水溶液にさらに０．０１ＮＮａＯＨを含ませた。この反応混合物を２０℃で１６時間撹拌した。式（ＸＸＩＩ）の重合体をゲル瀘過によって反応物から単離した。実施例１５−カチオン性ブロック共重合体の合成１．５ｇのポリ（オキシエチレングリコール）（分子量８０００、フルカ(Flu ka)製）を８ｍｌの１，４−ジオキサンに溶解した。０．３４ｇ（２ミリモル）のＮ，Ｎ’−カルボニルイミダゾール（アルドリッヒコーポレイション(Aldri ch Co.)製）を溶液に加えて、２０℃で３時間反応させた。次に、０．０１ＮＮａＯＨ及び１５％（ｗ／ｖ）の実施例１３に記載された分子量５００のポリイミン重合体を含む水溶液８ｍｌを第一の反応混合物に添加した。このようにして得られた混合物を、撹拌しながら、２０℃で１６時間反応させた。式（ＸＸＩＩＩ）の重合体をゲル瀘過によって第二の反応混合物から単離した。実施例１６−オリゴヌクレオチドを有する結合体の合成タイプ１のヘルペスシンプレックスウィルス（「ＨＳＶ−Ｕ）の初期ｍＲＮＡのスプライシング部位（ウィルスゲノムの９８３〜９９４番目の位置）と相補性を有する１２マーのオリゴヌクレオチド、５’−ＣＧＴＴＣＣＴＣＣＴＧＵ（「オリゴＡ」）を、３８０Ｂ−０２ＤＮＡ−合成器(380B-02 DNA-synthesizer) （アプライドバイオシステムズ(Applied Biosystems)製、シーエー）を用いて合成した。この合成器はホスホルアミド化学及び８分間の合成サイクルを用いた。１回の条件及び未精製産物の調製をアプライドバイオシステムズ(Applied B iosystems)によって推奨されるようにして行った。合成により得られた未精製オリゴＡをアセトン（２ｍｌ）で１ＭＬｉＣｌ溶液（０．５ｍｌ）から沈殿させた。沈殿物を酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液に溶かして、２０ｍＭＴＥＡＡ緩衝液（ｐＨ８．５）におけるアセトニトリルの濃度勾配によるシラソルブＣ１８カラム(Silasorb C18 column)（９×２５０ｍｍ、ギルソン(Gilson)、フランス）の逆相高速液体クロマトグラフィーによって精製した。精製したオリゴＡの３’−末端を過ヨウ素酸塩で酸化してアルデヒドを形成し、ヘキサメチレンジアミンリンカーと還元アルキル化(reductive alkyl ation)により結合させ、アミン誘導体を得た。チェーチュング(Che-Chung)ら、バイオケムインターナショ(Biochem．Internat.)２５：７６７（１９９１年）；ヴィノグラドフ(Vinogradov)ら、ビービーアールシー(BBRC)、２０３：９５９（１９９４年）を参照。「プルロニックＡ」、式（ＸＩＶ）（ｘ＝２５、ｙ＝３８、ｚ＝２５）のブロック共重合体を同様にして酸化し、末端にアルデヒドを形成した。アミン誘導体（１ｍｇ）を１００μｌの０．１Ｍホウ酸塩緩衝液（ｐＨ９．０）に溶解し、２ｍｇのプルロニックＡ誘導体と混合した。１．５ｍｇのソディウムシアノボロヒドライド(sodium cyanoborohydride)を混合物に加えて、アミン及びアルデヒド基の間に形成されるシッフ塩基を還元した。この反応を４ ℃で１２時間行った。この反応の重合体産物を、溶出液として９０％イソプロパノール水溶液を用いたセファデックスＬＨ−２０のゲル瀘過クロマトグラフィーによって単離した。このようにして得られた結合体を、以降、「オリゴＡ結合体」と称する。実施例１７−ウィルスによる産生に関するオリゴＡ結合体の効果オリゴＡ及びオリゴＡ結合体を、別々に、最終濃度が０．２ｍＭ（オリゴヌクレオチドの吸光度を基礎として）になるようにＲＰＭＩ１６４０培養液（アイシーエヌバイオメディカルズインコーポレイテッド(ICN Biomedicals Inc.) 、コスタメサ(Costa Mesa)、シーエー(CA)）に溶かした。次に、これらのストック溶液を０．２２μｍのフィルターで濾過し、細菌や真菌の混入物を除去した。Ｖｅｒｏ細胞の単層を、様々な濃度のオリゴＡまたはオリゴＡ結合体と共に血清を含まないＲＰＭＩ１６４０中で３７℃で１時間インキュベートした。次に、単層を、オリゴヌクレオチドに接触させたまま、ＨＳＶ−１の１培養細胞、Ｌ２株（ザミュージアムオブウィルスストレインズオブザディアイイワノフスキーインスティテュートオブヴィロロジー(the Museum of Virus Strainsof the D.I.Ivanovskii Instit ute of Virology)、ラシアンアカデミーオブサイセンセス(Russian Acade my of Sciences)、ロシア国から得た）当たり１プラーク形成単位で感染させた。この感染法は、ヴィノグラドフ(Vinogradov)ら、ビービーアールシー(BBRC)、２０３：９５９（１９９４年）によって記載された。ウィルス及びオリゴヌクレオチドに接触させてから８時間後に、細胞の培地を１０％ＦＣＳを含む新鮮な培地と置換した。細胞から培地を感染インキュベーションしてから２２及び３９時間で収集し、集めた培地中のウィルスの力価を、ヴィロロジー(V1rology)、アプラティカルアプローチ(A Pratical Approach)、マーイ(Mahy)著、アイアールエルプレス(IRL Press)、ワシントン、ＤＣ、１９８５年に記載されるのと同様にして測定した。結果は以下の通りである。実施例１８−ホスホネートモノマー(phosphonate monomer)の合成５０ｍｌの無水ピリジン（アルドリッヒ(Aldrich)製）に溶解した４０ミリモルのブタンジオール−１，３（メルク(Merck)製）を、２０℃で１．５時間、２０ミリモルの４，４’−ジメトキシトリチルクロライド（シグマ(Sigma)製）と反応させた。反応を、クロロホルム：メタノール（９５：５）で発色させたシリカゲルプレート（メルク(Merck)製）の薄層クロマトグラフィーを用いてモニターした。生成物のＲｆは０．６であった。反応混合物を２００ｍｌの重炭酸ナトリウムの８％水溶液に加え、生成物をクロロホルムで抽出した。クロロホルム抽出物を真空で蒸発させ、得られた油状の第一の中間体を次の合成段階に使用した。１２ミリモルの第一の中間体を、３．１４ｍｌ（１８ミリモル）のジイソプロピルエチルアミン（アルドリッヒ(Aldrich)製）を含む、３０ｍｌの無水１，４ −ジオキサンに溶かした。１０ｍｌの無水１、４−ジオキサンに溶解した１８ミリモルのサリチルクロロホスファイト(salicylchlorophosphite)（シグマ(Sigma )製）を、不活性アルゴン雰囲気下で小部分においてジイソプロピルエチルアミン溶液に添加した。反応混合物を２０℃で１時間インキュベートした。反応は、上記したのと同様にして薄層クロマトグラフィーによってモニターした。生成物のＲｆは０．０５であった。１０ｍｌの水を反応混合物に加えた。３０分後、溶剤を蒸発させた。生成物を１００ｍｌのクロロホルムに溶解して、得られた溶液を、（１）１００ｍｌの重炭酸ナトリウムの８％水溶液、（２）１００ｍｌの０．２Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム溶液（ｐＨ７．２）、及び（３）１００ｍｌの水で段階的に洗浄した。有機溶剤を蒸発させて、ホスホネート単量体を含む、油状の残渣を、（１）クロロホルム、（２）クロロホルムにおける３％メタノール及び（３）クロロホルムにおける６％メタノールの段階的な濃度勾配を用いて、シリカゲルカラムのクロマトグラフィーによって精製した。単量体の収率は４．１ｇ（＝７．３ミリモル、６３％）であった。生成物は下記構造を有する：ただし、ＤＭＴはジメトキシトリチル基を表し、「ホスホネートモノマーＡ」と称される。実施例１９−ポリカチオンＢＤＰの合成無水ピリジン：アセトニトリル混合液（１：１）におけるホスホネートモノマーＡの０．０５Ｍ溶液をＤＮＡ−合成器（モデル３８０−Ｂ０２、アプライドバイオシステムズ(Applied Biosystems)製、シーエー）の６番目の位置(positio n 6)に置いた。アセトニトリル：ピリジン（９５：５）の混合液におけるアダマントイルクロライド(adamantoilchloride)（シグマ(Sigma)製）の２％溶液を着色剤として使用した。合成をＨ−ホスホネートサイクル（シンハ(Sinha)及びストリーペク(Striepeke)：オリゴヌクレオチズアンドアナログス(Oligonucle otids and Analogues)：アプラティカルアプローチ(A Pratical Approach) 、エクスタイン(Eckstein)著、アイアールエルプレス(IRL Press)、オックスフォード、ニューヨーク−東京、頁１８５、１９９１年において）で修飾されるプログラムを用いて行い、ＤＭＴ−基を合成終了後に保存した。標準的なＣＰＧ −５００の固体支持体上に固定されたアデノシン（４μモル）を重合体の合成中第一の単位として使用した（ヴィノグラドフ(Vinogradov)ら、ビービーアールシー(BBRC)、２０３：９５９（１９９４年））。合成器を、アデノシンモノマーに１５ホスホネートモノマーＡ繰り返し単位を加えるようにプログラムした。すべての合成段階後、基質上に固定されたＨ−ホスホネート基を、０．６ｍｌの無水ピリジン：ＣＣｌ₄（５：１）混合液における１０４ｍｇのヘキサメチレンジアミン（シグマ(Sigma)製）の溶液を２０℃で１５分間適用することにより酸化した後、担体をピリジン：アセトニトリル混合液（１：１）で洗浄した。デブロッキング(deblocking)及びキャップの除去をアンモノリシス(ammonolysis)によって行った（オリゴヌクレオチズアンドアナログス(Oligonucleotids and Ana logues)：アプラティカルアプローチ(A Pratical Approach)、エクスタイン(E ckstein)著、アイアールエルプレス(IRL Press)、オックスフォード、ニューヨーク−東京、頁１８５、１９９１年）。生成物を、アセトニトリルの濃度勾配（０〜８０％）におけるシラソルブＣ１６カラム(Silasorb C16 column) （９×２５０ｍｍ、ギルソン(Gilson)、フランス）を用いたＨＰＬＣによって精製した。ジメトキシトリチル化産物を含むピークを集め、溶剤を蒸発させ、残渣を８０％酢酸で処理した（２０分間）。酢酸を蒸発させ、ポリカチオンを再度ＨＰＬＣによって精製した。１５マー（ホスホネートモノマーＡの観点で計測）の収率は５０％（２．２μモル）であった。これにより、式Ａによる重合体が得られた。この重合体を、以降、「ＢＤＰ」と称する。実施例２０−ジブロック共重合体ポリオキシエチレン−ＢＤＰの固相合成ジメトキシトリチル−ポリエチレンオキシド−Ｈ−ホスホネートを、ブタンジオール−１，３の代わりにポリエチレングリコール（フルカ(Fluka)製の分子量１５００）を用いる以外は、実施例１８と同様にして合成した。このＢＤＰポリカチオンを、鎖の成長の最終段階において、ジメトキシトリチル−ポリエチレンオキシド−Ｈ−ホスホネートを最終構築ブロックとして導入する以外は、実施例１９と同様にして合成した。ブロック共重合体のＨ−ホスホネート基を、ヘキサメチレンジアミンの代わりにテトラメチレンジアミン（シグマ(Sigma)製）を用いる以外は実施例１９と同様にして酸化し、これにより、ジアミン及び幹のホスフェートとの間にホスホアミド結合が形成された。実施例２１−オリゴヌクレオチド−ＢＤＰジブロック共重合体の固相合成１２マーのオリゴヌクレオチド、５’−ＧＧＴＴＣＣＴＣＣＴＧＵ（オリゴＡ、タイプ１のヘルペスシンプレックスウィルス（ＨＳＶ−１）の初期ｍＲＮＡのスプライシング部位と相補性を有する、ヴィノグラドフ(Vinogradov)ら、ビービーアールシー(BBRC)、２０３：９５９（１９９４年））及びＢＤＰ重合体からなるジブロック共重合体をＤＮＡ合成器で合成した。まず、ＢＤＰ重合体を、支持体から除去しない以外は、実施例１９と同様にして合成した。次に、オリゴヌクレオチド鎖を、ヴィノグラドフ(Vinogradov)ら、ビービーアールシー(BBRC)、２０３：９５９（１９９４年）によって記載されるのと同様にして、標準的なホスホルアミダイト化学を用いて固体の支持体に連結されたＢＤＰポリカチオン性重合体上で段階的に合成した。ジブロック共重合体のＨ−ホスホネート基を、ヘキサメチレンジアミンの代わりにテトラメチレンジアミン（シグマ(Sigma)製）を用いる以外は実施例１９と同様にして酸化した。実施例２２−ウィルスの成長に関するオリゴヌクレオチド−ＢＤＰジブロック共重合体の効果本実験を、（１）実施例２１のオリゴヌクレオチド−ＢＤＰ共重合体を使用し、および（２）単一の濃度のオリゴヌクレオチド−ＢＤＰ共重合体（結合体）を使用した（４μＭ）以外は、実施例１７と全く同様にして、行った。実施例２３−ＨＳＶ感染の促進単層のＶｅｒｏ細胞を、実施例９で記載したの同様にしてウィルスで０．１ＰＦＵ／細胞の多重度で感染させた。様々な濃度のポリカチオンのＢＤＰ（実施例１９と同様にして合成）を感染前にウィルスに添加した。ウィルスの感染力価（ＰＦＵ／ｍｌ）を、単層のＶｅｒｏ細胞（実施例９）に感染させてから２４時間後に測定した。すべての実験は３連で行った。測定された感染力価の偏差は２５％未満であった。実験結果を以下に示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者アラクホフ，バレリーユーリーヴィッチカナダ国，ケベック州エッチ９エックス３ブイ４，ドウルフェ，デイビッドケネディバイエ 48 (72)発明者ヴィノグラードフ，セルゲイヴィロシア国，モスコウスヤカ 13525，ウルスムスカヤ 12／17−181

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）ポリヌクレオチドまたはその誘導体および（ｂ）Ａ−型セグメントおよびＢ−型セグメントよりなり、該Ａ−型セグメントは相対的に親水性の線状重合体セグメントであり、平均ハンシュ−レオセグメント定数に寄与する繰り返し単位は約−０．４以下でありかつ分子量寄与率は約３０〜約５００であり、またＢ−型セグメントは相対的に疎水性の線状重合体セグメントであり、平均ハンシュ−レオセグメント定数に寄与する繰り返し単位は約−０．４以上でありかつ分子量寄与率は約３０〜約５００であり、また重合体セグメントのそれぞれの繰り返し単位をつなぐ結合はエーテル結合よりなるものであるポリヌクレオチド組成物。２．該ブロック共重合体が、Ａ−Ｂ−Ａ´ （Ｉ）、Ａ−Ｂ（II）、Ｂ−Ａ−Ｂ´ （III）、およびＬ（Ｒ¹）（Ｒ²）（Ｒ³）（Ｒ⁴）（IV）（ただし、式中、ＡおよびＡ´はＡ−型線状重合体セグメント、ＢおよびＢ´はＢ−型線状重合体セグメントであり、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は式（Ｉ）、（II ）または（III）のブロック共重合体または水素であり、かつＬは結合基であり、ただし、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴の２個以下は水素である。）よりなる群から選ばれる式で表わされるものである請求の範囲第１項に記載のポリヌクレオチド組成物。３．該セグメント重合体の繰り返し単位に結合する９０％の結合がエーテル結合である請求の範囲第１項に記載のポリヌクレオチド組成物。４．該セグメント重合体の繰り返し単位が約３０〜約１００の分子量を有するものである請求の範囲第１項に記載のポリヌクレオチド組成物。５．該セグメント重合体の繰り返し単位に結合する９０％の結合がエーテル結合である請求の範囲第４項に記載のポリヌクレオチド組成物。６．該セグメント重合体の繰り返し単位に結合する９５％の結合がエーテル結合である請求の範囲第５項に記載のポリヌクレオチド組成物。７．ＢブロックまたはＢ´ブロックよりなる全ての繰り返し単位が約−０．３０以上のハンシュ−レオフラグメント定数を有してなる請求の範囲第６項に記載のポリヌクレオチド組成物。８．ＡブロックまたはＡ´ブロックよりなる全ての繰り返し単位が約−０．４以下のハンシュ−レオフラグメント定数を有してなる請求の範囲第７項に記載のポリヌクレオチド組成物。９．該セグメント重合体の繰り返し単位が実質的に式 −Ｏ−Ｒ⁵ （ただし、式中、Ｒ⁵は（１）−（ＣＨ₂）_n−ＣＨ（Ｒ⁶）−（ただし、式中、ｎは０〜約５の整数であり、またＲ⁶は、水素、炭素原子数３〜８のシクロアルキル基、炭素原子数１〜６のアルキル基、フェニル基、アルキル基の炭素原子数が１〜６のアルキルフェニル基、ヒドロキシル基、アルキル基の炭素原子数が１〜６のヒドロキシアルキル基、炭素原子数１〜６のアルコキシ基、炭素原子数２〜７のアルキルカルボニル基、アルコキシ基の炭素原子数が１〜６のアルコキシカルボニル基、アルコキシ基およびアルキル基の炭素原子数がそれぞれ独立に１〜６のアルキルカルボキシルアルキル基、アルキル基の炭素原子数がそれぞれ独立に１〜６であるアルキルアミン基またはジアルキルアミノ基、アルキル基の炭素原子数がそれぞれ独立に１〜６であるモノまたはジアルキルアミノアルキル基、塩素、アルキル基の炭素原子数が１〜６のクロロアルキル基、フッ素、アルキル基の炭素原子数が１〜６のフルオロアルキル基、シアノ基またはアルキル基の炭素原子数が１〜６のシアノアルキル基またはカルボキシル基である。）か、（２）環炭素原子数が３〜８のカルボサイクリック基であり、該基は、例えばシクロアルキル基または芳香族基であり、これは炭素原子数１〜６のアルキル基、炭素原子数１〜６のアルコキシ基、炭素原子数１〜６のアルキルアミノ基、アルキル基の炭素原子数がそれぞれ独立に１〜６であるジアルキルアミノ基、アミノ基、スルホニル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、フッ素または塩素置換基を含んでいてもよいか、（３）ヘテロシクロアルキル基またはヘテロ芳香族基を含んでいてもよい環原子３〜８の複素環基であり、これは酸素、窒素、硫黄およびこれらの混合物よりなる群れから選ばれた１〜４個のヘテロ原子を含んでいてもよく、炭素原子数１〜６のアルキル基、炭素原子数１〜６のアルコキシ基、炭素原子数１〜６アルキルアミノ基、アルキル基、炭素原子数がそれぞれ独立に１〜６であるジアルキルアミノ基、アミノ基、スルホニル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、フッ素、または塩素置換基を含んでいてもよい。）である請求の範囲第１項に記載のヌクレオチド組成物。１０．ＢブロックまたはＢ´ブロックよりなる全ての繰り返し単位が約−０．３０以上のハンシュ−レオフラグメント定数を有してなる請求の範囲第９項に記載のポリヌクレオチド組成物。１１．ＡブロックまたはＡ´ブロックよりなる全ての繰り返し単位が約−０．４以下のハンシュ−レオフラグメント定数を有してなる請求の範囲第１０項に記載のポリヌクレオチド組成物。１２．（ａ）ポリヌクレオチドまたはその誘導体および（ｂ）ポリエーテルセグメントおよびポリカチオンセグメントよりなり、該ポリエーテルセグメントは、繰り返し単位が平均ハンシュ−レオフラグメント定数が約−０．４以下である線状セグメント重合体よりなりかつ分子量が約３０〜約５００であり、該ポリエーテルセグメントの繰り返し単位に結合した少なくとも約８０％の結合はエーテル結合よりなり、ポリカチオンセグメントは複数のカチオン性繰り返し単位よりなるものであるポリヌクレオチド組成物。１３．該共重合がＢ−Ａ−Ｒ（Ｖ）、Ａ−Ｒ（VI）、Ａ−Ｒ−Ａ´ （VII）、およびＲ−Ａ−Ｒ´ （VIII）（ただし、式中、ＡおよびＡ´はＡ−型線状重合体セグメントであり、ＢおよびＢ´は線状重合体セグメントであり、その単量体は平均ハンシュ−レオフラグメント定数が約３０〜約５００であり、該セグメント重合体の相互単量体結合の少なくとも８０％はエーテル結合であり、またＲおよびＲ´は複数のカチオン性繰り返し単位を有するセグメント重合体である。）の式の重合体よりなるものである請求の範囲第１２項に記載のポリヌクレオチド組成物。１４．ＲおよびＲ´が生理学的ｐＨにおいて少なくとも３個の帯電基を有してなる請求の範囲第１３項に記載のポリヌクレオチド組成物。１５．ＲおよびＲ´が生理学的ｐＨにおいて少なくとも１２個の正帯電基を有してなる請求の範囲第１４項に記載のポリヌクレオチド組成物。１６．ＲおよびＲ´が生理学的ｐＨにおいて約３Å〜約１２Åにより分離された正帯電基を有してなる請求の範囲第１５項に記載のポリヌクレオチド組成物。１７．式−ＮＨ−Ｒ⁰（ただしＲ⁰は炭素原子数２〜６で置換可能な直鎖脂肪族基である。）の複数のカチオン性繰り返し単位を有してなる請求の範囲第１６項に記載のポリヌクレオチド組成物。１８．ヌクレオチドセグメントおよびポリエーテルセグメントよりなり該ポリエーテルセグメントは線状セグメント重合体よりなるＡ−型セグメント重合体を含み、かつその繰り返し単位は平均ハンシュ−レオフラグメント定数が約−０．４以下であり分子量は約３０〜５００であり、該ポリエーテルセグメントの繰り返し単位に結合する少なくとも約８０％の結合はエーテル結合である線状重合体よりなるポリヌクレオチド誘導体よりなるポリヌクレオチド組成物。１９．該ヌクレオチド誘導体は式（ただし、式中、ｐＮは５´〜３´配向を有するポリヌクレオチドであり、ＡおよびＡ´はＡ−型線状セグメント重合体であり、、ＢおよびＢ´はＢ−型線状セグメント重合体であり、その繰り返し単位は平均ハンシュ−レオフラグメント定数が約−０．４以上であり、約３０〜約５００の分子量分布を有し、該ポリエーテルセグメントの繰り返し単位に結合する少なくとも約８０％の結合はエーテル結合であり、かつＲおよびＲ´は複数のカチオン性繰り返し単位よりなるセグメント重合体である。）の重合体よりなるものである請求の範囲第１８項に記載のポリヌクレオチド組成物。２０．該ポリヌクレオチド組成物は、少なくとも第２のポリエチレンセグメントよりなり、該セグメントは線状セグメント重合体よりなるＡ−型ポリエーテルセグメントおよびＢ−型ポリエーテルセグメントよりなり、その繰り返し単位は平均ハンシュ−レオフラグメント定数が約−０．４以上であり、約３０〜約５００の分子量分布を有し、Ｂ−型ポリエーテルセグメントの繰り返し単位に結合する少なくとも約８０％の結合はエーテル結合である請求の範囲第１８項に記載のポリヌクレオチド組成物。２１．ポリエーテルセグメントおよびポリカチオンセグメントよりなり、該ポリエーテルセグメントは（ａ）線状セグメント重合体よりなり、その平均ハンシュ−レオフラグメント定数が約−０．４以下でありかつ約３０〜約５００の分子量分布を有するＡ−型セグメント重合体あるいは（２）線状セグメント重合体よりなり、その平均ハンシュ−レオフラグメント定数が約−０．４以上でありかつ約３０〜約５００の分子量分布を有するＡ−型セグメント重合体の少なくとも１種および（ｂ）複数の式−ＮＨ−Ｒ⁰（ただし、Ｒ⁰は炭素原子数２〜６の置換可能な直鎖脂肪族基である）のカチオン性繰り返し単位よりなるポリカチオン性セグメントよりなるブロック共重合体よりなるポリカチオン性重合体。２２．式Ｂ−Ａ−Ｒ（Ｖ）、Ａ−Ｒ（VI）、Ａ−Ｒ−Ａ´ （VII）、またはＲ−Ａ−Ｒ´ （VIII）（ただし、式中、ＡおよびＡ´はＡ−型線状重合体セグメント、ＢはＢ−型線状重合体セグメントであり、またＲおよびＲ´は式−ＮＨ−Ｒ⁰（ただし、Ｒ⁰は炭素原子数２〜６の置換されてもよい直鎖脂肪族基である。）の複数のカチオン性基よりなるポリカチオン性セグメントである。）によるブロック共重合体よりなる請求の範囲第２１項のブロック共重合体よりなるポリカチオン性重合体。２３．式［ただし、式中，Ｒ⁸は、（１）−（ＣＨ₂）_n−ＣＨ（Ｒ¹³）−（ただし、式中、ｎは０〜約５の整数であり、またＲ¹³は水素、炭素原子数３〜８のシクロアルキル、炭素原子数１〜６のアルキルまたは（ＣＨ₂）ｍＲ¹⁴（ただし、ｍは０〜約１２の整数であり、またＲ¹⁴は炭素原子数６〜２０の親油性置換基である。））。（２）基が炭素原子数３〜８のカルボサイクリック基（ただし、該基は、炭素原子数１〜６のアルキルを含んでいてもよいシクロアルキル基または芳香族基、炭素原子数１〜６のアルコキシ基、炭素原子数１〜６を有するジアルキルアミノ基、アミノ基、スルホニル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、フッ素または塩素置換基であってもよい、環炭素原子が３〜８のカルボキシル基、または（３）ヘテロシクロアルキルを含んでいてもよい、環原子数３〜８の複素環基、酸素、窒素、硫黄およびこれらの混合物よりなる群から選ばれた１〜４個のヘテロ原子を含んでいてもよくかつ炭素原子数１〜６のアルキル、炭素原子数１〜６のアルコキシ、炭素原子数１〜６のアルキルアミノ、各アルキルが独立に炭素原子数１〜６のアルキルであるジアルキルアミノ、アミノ、スルホニル、ヒドロキシル、カルボキシル、フッ素または塩素置換基を含んでいてもよい３〜８環原子の複素環基であり、Ｒ⁹は、炭素原子数１〜１２の直鎖脂肪族基であり、またＲ¹⁰、Ｒ¹¹およびＲ¹ ² は独立して水素または炭素原子数１〜４のアルキル基である。］の複数の繰り返し単位よりなるポリカチオン性重合体。