JPH0954091A - 抗赤血球抗体の測定法 - Google Patents
抗赤血球抗体の測定法Info
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- JPH0954091A JPH0954091A JP7225784A JP22578495A JPH0954091A JP H0954091 A JPH0954091 A JP H0954091A JP 7225784 A JP7225784 A JP 7225784A JP 22578495 A JP22578495 A JP 22578495A JP H0954091 A JPH0954091 A JP H0954091A
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- erythrocyte
- cell membrane
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】実用的で且つ定量性に優れた新規な抗赤血球抗
体の酵素免疫測定法並びに該測定法で用いる有用な抗原
を提供する。 【解決手段】本発明は赤血球の膜断片よりなる酵素免疫
測定用抗原及び該抗原を用いた抗赤血球抗体の酵素免疫
測定法である。 【効果】本発明抗原は簡便な操作で調製可能であるた
め、大量の固相化用抗原を容易に得ることができる。本
発明抗原を利用した測定法は、従来技術と比べて免疫学
的により正確な抗体量を測定でき、高感度で定量性に優
れた抗赤血球抗体の酵素免疫測定法である。
体の酵素免疫測定法並びに該測定法で用いる有用な抗原
を提供する。 【解決手段】本発明は赤血球の膜断片よりなる酵素免疫
測定用抗原及び該抗原を用いた抗赤血球抗体の酵素免疫
測定法である。 【効果】本発明抗原は簡便な操作で調製可能であるた
め、大量の固相化用抗原を容易に得ることができる。本
発明抗原を利用した測定法は、従来技術と比べて免疫学
的により正確な抗体量を測定でき、高感度で定量性に優
れた抗赤血球抗体の酵素免疫測定法である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、赤血球の膜断片よ
りなる酵素免疫測定用抗原及び該抗原を利用した新規な
抗赤血球抗体の酵素免疫測定法に関する。
りなる酵素免疫測定用抗原及び該抗原を利用した新規な
抗赤血球抗体の酵素免疫測定法に関する。
【０００２】
【従来の技術】免疫抑制剤や免疫賦活剤等の免疫系を調
整する薬剤の開発や免疫系の変動を調べるための試験系
の一つとして、動物の抗体産生を指標とする試験方法が
しばしば用いられている。抗体産生を誘導するための抗
原として赤血球を用いる方法があり、大量に入手可能で
あるためウマやヒツジの赤血球が試薬として販売されて
いる。特にヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）は保存が容易で取
り扱いやすいことから、抗原赤血球として最もよく用い
られている。生化学辞典（第２版、東京化学同人社発
行）においてＳＲＢＣが「ヒツジ赤血球」という項目で
単独に説明されていることからも、その汎用性は明らか
である。
整する薬剤の開発や免疫系の変動を調べるための試験系
の一つとして、動物の抗体産生を指標とする試験方法が
しばしば用いられている。抗体産生を誘導するための抗
原として赤血球を用いる方法があり、大量に入手可能で
あるためウマやヒツジの赤血球が試薬として販売されて
いる。特にヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）は保存が容易で取
り扱いやすいことから、抗原赤血球として最もよく用い
られている。生化学辞典（第２版、東京化学同人社発
行）においてＳＲＢＣが「ヒツジ赤血球」という項目で
単独に説明されていることからも、その汎用性は明らか
である。
【０００３】抗原としてのＳＲＢＣはアジュバント（免
疫増強物質）との混和なしに、単独投与で容易に抗体産
生や細胞性免疫を誘導することができることから、免疫
薬理学的研究及び免疫毒性学的研究等に広く用いられて
いる。血中の抗ＳＲＢＣ抗体を測定する方法としては、
古典的な凝集反応を利用する方法が主として実用的な測
定法として利用されているが、不連続的であり細かな定
量性に欠けるという問題点を有しており、また凝集反応
の確認を肉眼によって行うので客観性に欠けるという問
題点をも有している。従って客観的でより定量的な測定
法、即ち酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によって抗ＳＲ
ＢＣ抗体を測定する方法について種々の試みがなされて
きたが、これまでの方法には何らかの解消すべき課題が
残されており、正確かつ簡便な測定法とは言い難いもの
であった。
疫増強物質）との混和なしに、単独投与で容易に抗体産
生や細胞性免疫を誘導することができることから、免疫
薬理学的研究及び免疫毒性学的研究等に広く用いられて
いる。血中の抗ＳＲＢＣ抗体を測定する方法としては、
古典的な凝集反応を利用する方法が主として実用的な測
定法として利用されているが、不連続的であり細かな定
量性に欠けるという問題点を有しており、また凝集反応
の確認を肉眼によって行うので客観性に欠けるという問
題点をも有している。従って客観的でより定量的な測定
法、即ち酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によって抗ＳＲ
ＢＣ抗体を測定する方法について種々の試みがなされて
きたが、これまでの方法には何らかの解消すべき課題が
残されており、正確かつ簡便な測定法とは言い難いもの
であった。
【０００４】たとえば、Ｍｏｒｉらの方法〔Int. J. Im
munopharmac., Vol.11, 597-606 (1989)〕はＳＲＢＣを
そのまま顆粒抗原として特殊な方法を用いてプレートに
直接固相化する方法であるが、濁度が不良でかつ固相化
抗原に赤血球の赤色が残存することになるので、標識酵
素による反応生成物を吸光度的に測定するＥＬＩＳＡに
は不適切であり、また再現性にも問題があった。
munopharmac., Vol.11, 597-606 (1989)〕はＳＲＢＣを
そのまま顆粒抗原として特殊な方法を用いてプレートに
直接固相化する方法であるが、濁度が不良でかつ固相化
抗原に赤血球の赤色が残存することになるので、標識酵
素による反応生成物を吸光度的に測定するＥＬＩＳＡに
は不適切であり、また再現性にも問題があった。
【０００５】また、Ｔｅｍｐｌｅらの方法〔Fundam. Ap
pl. Toxicol., Vol.21, 412-419 (1993)〕及びＶａｎ
Ｌｏｖｅｒｅｎらの方法〔Int. J. Immunopharmac., Vo
l.13, 689-695 (1991)〕のように、ＳＲＢＣの膜タンパ
ク質をある特定条件で可溶化させ、この可溶化タンパク
質を固相化抗原として用いる方法も報告されている。Ｔ
ｅｍｐｌｅらの方法は界面活性剤によって膜タンパク質
を可溶化させ固相化抗原として用いる方法であり、Ｖａ
ｎ Ｌｏｖｅｒｅｎらの方法は高濃度の塩化カリウム処
理によって膜タンパク質を可溶化させる方法であるが、
これらの方法において用いられているのは可溶化した一
部の膜タンパク質であると考えられ、それら一部の膜タ
ンパク質と本来のＳＲＢＣとの間の抗原性の差異に関し
て問題が残っており、またその可溶化及び分離操作は時
間と手間を要するものであった。このように、これまで
に報告された方法では適切な固相化抗原が用いられてお
らず、実用化のためには種々の問題点が残されていた。
pl. Toxicol., Vol.21, 412-419 (1993)〕及びＶａｎ
Ｌｏｖｅｒｅｎらの方法〔Int. J. Immunopharmac., Vo
l.13, 689-695 (1991)〕のように、ＳＲＢＣの膜タンパ
ク質をある特定条件で可溶化させ、この可溶化タンパク
質を固相化抗原として用いる方法も報告されている。Ｔ
ｅｍｐｌｅらの方法は界面活性剤によって膜タンパク質
を可溶化させ固相化抗原として用いる方法であり、Ｖａ
ｎ Ｌｏｖｅｒｅｎらの方法は高濃度の塩化カリウム処
理によって膜タンパク質を可溶化させる方法であるが、
これらの方法において用いられているのは可溶化した一
部の膜タンパク質であると考えられ、それら一部の膜タ
ンパク質と本来のＳＲＢＣとの間の抗原性の差異に関し
て問題が残っており、またその可溶化及び分離操作は時
間と手間を要するものであった。このように、これまで
に報告された方法では適切な固相化抗原が用いられてお
らず、実用化のためには種々の問題点が残されていた。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上述
した従来法の問題点を解消すべく、実用的で且つ定量性
に優れた新規な抗赤血球抗体の酵素免疫測定法並びに該
測定法で用いる有用な抗原を提供することにある。
した従来法の問題点を解消すべく、実用的で且つ定量性
に優れた新規な抗赤血球抗体の酵素免疫測定法並びに該
測定法で用いる有用な抗原を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は赤血球の膜断片
よりなる酵素免疫測定用抗原及び該抗原を用いた抗赤血
球抗体の酵素免疫測定法である。さらに詳しくは、ヘモ
グロビン等の可溶性の細胞質タンパク質を含まないよう
に赤血球を破壊して得られる細胞膜断片よりなる酵素免
疫測定用抗原及び該抗原を用いることを特徴とする新規
な抗赤血球抗体の酵素免疫測定法である。
よりなる酵素免疫測定用抗原及び該抗原を用いた抗赤血
球抗体の酵素免疫測定法である。さらに詳しくは、ヘモ
グロビン等の可溶性の細胞質タンパク質を含まないよう
に赤血球を破壊して得られる細胞膜断片よりなる酵素免
疫測定用抗原及び該抗原を用いることを特徴とする新規
な抗赤血球抗体の酵素免疫測定法である。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明の特徴は、赤血球の細胞膜
断片を固相化抗原として用いる点であるが、この赤血球
の細胞膜断片とはＥＬＩＳＡの吸光度分析を妨害するヘ
モグロビン等の可溶性の細胞質タンパク質を除去した残
りの膜画分である。ヘモグロビン等の細胞質タンパク質
を除いた赤血球の細胞膜断片は、赤血球を破壊した後に
可溶性の細胞質タンパク質と膜成分を分画処理すること
によって得ることができる。赤血球の破壊は、溶血破
壊、凍結融解、超音波処理等の公知の手段が利用可能で
あり、例えば溶血破壊は、赤血球を水等の低張液にさら
すだけの簡単な処理によって容易に行うことができ利用
しやすい。
断片を固相化抗原として用いる点であるが、この赤血球
の細胞膜断片とはＥＬＩＳＡの吸光度分析を妨害するヘ
モグロビン等の可溶性の細胞質タンパク質を除去した残
りの膜画分である。ヘモグロビン等の細胞質タンパク質
を除いた赤血球の細胞膜断片は、赤血球を破壊した後に
可溶性の細胞質タンパク質と膜成分を分画処理すること
によって得ることができる。赤血球の破壊は、溶血破
壊、凍結融解、超音波処理等の公知の手段が利用可能で
あり、例えば溶血破壊は、赤血球を水等の低張液にさら
すだけの簡単な処理によって容易に行うことができ利用
しやすい。
【０００９】次に可溶性のヘモグロビン等の細胞質タン
パク質と細胞膜断片を分離する方法としては、例えばゲ
ル濾過、限外濾過、遠心分離等の公知の手段が利用可能
である。例えばゲル濾過法の場合、分子量の大きい細胞
膜断片とその他の低分子量の可溶性細胞質タンパク質の
二つの画分に大別すれば充分であり、分画範囲の適当な
担体を用いればボイドボリューム部分に細胞膜断片のみ
を溶出でき、遅れて溶出される低分子量の可溶性細胞質
タンパク質画分と容易に分離でき、簡単な操作によって
本発明抗原を得ることができる。
パク質と細胞膜断片を分離する方法としては、例えばゲ
ル濾過、限外濾過、遠心分離等の公知の手段が利用可能
である。例えばゲル濾過法の場合、分子量の大きい細胞
膜断片とその他の低分子量の可溶性細胞質タンパク質の
二つの画分に大別すれば充分であり、分画範囲の適当な
担体を用いればボイドボリューム部分に細胞膜断片のみ
を溶出でき、遅れて溶出される低分子量の可溶性細胞質
タンパク質画分と容易に分離でき、簡単な操作によって
本発明抗原を得ることができる。
【００１０】上述の如く赤血球の可溶性細胞質タンパク
質画分と分離して得られた本発明抗原（赤血球の細胞膜
断片）を酵素免疫測定用プレートに固相化して通常のＥ
ＬＩＳＡを実施できる。ＥＬＩＳＡに関する技術、即ち
抗原の固相化法、ブロッキング法、酵素標識の種類、酵
素反応の基質や条件設定、最終的な測定方法等について
は通常の公知技術を利用すればよく、例えば「酵素免疫
測定法・第３版」（石川・河合・宮井共編、医学書院発
行）など多くの文献に詳細に記載されている。
質画分と分離して得られた本発明抗原（赤血球の細胞膜
断片）を酵素免疫測定用プレートに固相化して通常のＥ
ＬＩＳＡを実施できる。ＥＬＩＳＡに関する技術、即ち
抗原の固相化法、ブロッキング法、酵素標識の種類、酵
素反応の基質や条件設定、最終的な測定方法等について
は通常の公知技術を利用すればよく、例えば「酵素免疫
測定法・第３版」（石川・河合・宮井共編、医学書院発
行）など多くの文献に詳細に記載されている。
【００１１】本発明抗原を得るための赤血球は如何なる
動物のものでも適用可能であり、入手の容易性、抗原性
の強さ、抗体産生実験等に使用する動物種などに従って
適宜選択すればよいが、通常当該分野で汎用されている
ＳＲＢＣが利用しやすい。以下に、実施例及び参考例を
挙げて本発明の一例を示す。
動物のものでも適用可能であり、入手の容易性、抗原性
の強さ、抗体産生実験等に使用する動物種などに従って
適宜選択すればよいが、通常当該分野で汎用されている
ＳＲＢＣが利用しやすい。以下に、実施例及び参考例を
挙げて本発明の一例を示す。
【００１２】
参考例１．陽性対照血清及び陰性対照血清の調製 生理食塩水で５×１０9 個／ｍｌに調製したＳＲＢＣ
（０．２ｍｌ）をＢＡＬＢ／ｃマウス腹腔内に投与し、
５及び６日目の血清をプールしたものを陽性対照血清と
し、また正常ＢＡＬＢ／ｃマウスの血清をプールしたも
のを陰性対照血清として用いた。
（０．２ｍｌ）をＢＡＬＢ／ｃマウス腹腔内に投与し、
５及び６日目の血清をプールしたものを陽性対照血清と
し、また正常ＢＡＬＢ／ｃマウスの血清をプールしたも
のを陰性対照血清として用いた。
【００１３】実施例１．ゲル濾過によるＳＲＢＣ膜断片
の分画 ＳＲＢＣのペレット１．０ｍｌに等量の蒸留水１．０ｍ
ｌを加え溶血させ、その一部を０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐ
Ｈ９．５）で平衡化したセファロースＣＬ−６Ｂカラム
（ファルマシア社製、２５ｍｍ×６９ｍｍ）にアプライ
し、４℃で３．０ｍｌ／本の分取条件でゲル濾過を行っ
た。溶出フラクションを２８０ｎｍの吸光度で測定した
結果、ボイドボリュームに相当する部分の小さなピーク
（フラクション２８〜３１）とヘモグロビンのピークに
一致する可溶性細胞質タンパク質を包含すると思われる
ピーク（フラクション５６〜６７）の二つのピークに分
かれた。そこでボイドボリューム部分のピークを細胞膜
断片画分とし、またその後に溶出されたピークを細胞質
タンパク質画分として各々プールし、ＥＬＩＳＡにおけ
る固相化抗原として用いた。
の分画 ＳＲＢＣのペレット１．０ｍｌに等量の蒸留水１．０ｍ
ｌを加え溶血させ、その一部を０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐ
Ｈ９．５）で平衡化したセファロースＣＬ−６Ｂカラム
（ファルマシア社製、２５ｍｍ×６９ｍｍ）にアプライ
し、４℃で３．０ｍｌ／本の分取条件でゲル濾過を行っ
た。溶出フラクションを２８０ｎｍの吸光度で測定した
結果、ボイドボリュームに相当する部分の小さなピーク
（フラクション２８〜３１）とヘモグロビンのピークに
一致する可溶性細胞質タンパク質を包含すると思われる
ピーク（フラクション５６〜６７）の二つのピークに分
かれた。そこでボイドボリューム部分のピークを細胞膜
断片画分とし、またその後に溶出されたピークを細胞質
タンパク質画分として各々プールし、ＥＬＩＳＡにおけ
る固相化抗原として用いた。
【００１４】実施例２．ＥＬＩＳＡによる抗ＳＲＢＣ抗
体の測定 実施例１で得られた両画分を０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ
９．５）で希釈し、タンパク質として３〜１００μｇ／
ｍｌ（２８０ｎｍの吸光度換算）の濃度に調製した。各
分画溶液１００μｌを９６ウェルＥＬＩＳＡ用プレート
の各ウェルに加え、４℃で一晩固相化した。次に、０．
１％ゼラチンを含むリン酸緩衝溶液（Ｇ−ＰＢＳ）２０
０μｌを加え、室温で１時間ブロッキングを行った。
０．０５％トゥイーン２０を含むリン酸緩衝溶液（Ｔ−
ＰＢＳ）で３回洗浄後、Ｇ−ＰＢＳで希釈した陽性対照
血清又は陰性対照血清を各ウェルに１００μｌ加え室温
で２時間反応させた。Ｔ−ＰＢＳで３回洗浄した後、Ｇ
−ＰＢＳで５００倍希釈した西洋ワサビペルオキシター
ゼ標識抗マウスＩｇＧを１００μｌ加え、室温で２時間
反応させた。再びＴ−ＰＢＳで３回洗浄後、１０ｍｌの
クエン酸緩衝液（ｐＨ４．５）に１０ｍｇのｏ−フェニ
レンジアミンジヒドロクロライドと１０μｌの３３％過
酸化水素を加えて調製した発色液１００μｌを加え、室
温で５〜１０分間反応させた。１００μｌの１Ｎ塩酸で
反応停止後、４９２ｎｍで吸光度を測定した。細胞膜断
片画分を固相化抗原として用いてＥＬＩＳＡを行った結
果の一例を図１に示した。これに対して細胞質タンパク
質画分を固相化抗原とした場合の結果を図２に示した。
体の測定 実施例１で得られた両画分を０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ
９．５）で希釈し、タンパク質として３〜１００μｇ／
ｍｌ（２８０ｎｍの吸光度換算）の濃度に調製した。各
分画溶液１００μｌを９６ウェルＥＬＩＳＡ用プレート
の各ウェルに加え、４℃で一晩固相化した。次に、０．
１％ゼラチンを含むリン酸緩衝溶液（Ｇ−ＰＢＳ）２０
０μｌを加え、室温で１時間ブロッキングを行った。
０．０５％トゥイーン２０を含むリン酸緩衝溶液（Ｔ−
ＰＢＳ）で３回洗浄後、Ｇ−ＰＢＳで希釈した陽性対照
血清又は陰性対照血清を各ウェルに１００μｌ加え室温
で２時間反応させた。Ｔ−ＰＢＳで３回洗浄した後、Ｇ
−ＰＢＳで５００倍希釈した西洋ワサビペルオキシター
ゼ標識抗マウスＩｇＧを１００μｌ加え、室温で２時間
反応させた。再びＴ−ＰＢＳで３回洗浄後、１０ｍｌの
クエン酸緩衝液（ｐＨ４．５）に１０ｍｇのｏ−フェニ
レンジアミンジヒドロクロライドと１０μｌの３３％過
酸化水素を加えて調製した発色液１００μｌを加え、室
温で５〜１０分間反応させた。１００μｌの１Ｎ塩酸で
反応停止後、４９２ｎｍで吸光度を測定した。細胞膜断
片画分を固相化抗原として用いてＥＬＩＳＡを行った結
果の一例を図１に示した。これに対して細胞質タンパク
質画分を固相化抗原とした場合の結果を図２に示した。
【００１５】
【発明の効果】図１及び図２に示したとおり、抗体産生
を誘導させた陽性対照血清中の抗ＳＲＢＣ−ＩｇＧ抗体
を測定した場合、赤血球の細胞膜断片画分をＥＬＩＳＡ
の固相化抗原として用いた本発明測定系では抗原濃度に
依存して吸光度は上昇したが、細胞質タンパク質画分を
固相化抗原として用いた系では全く濃度依存性は認めら
れず、抗ＳＲＢＣ−ＩｇＧ抗体は定量的に測定されなか
った。当然のことながら、正常マウスの血清である陰性
対照血清では血清中に抗体は測定されなかった。
を誘導させた陽性対照血清中の抗ＳＲＢＣ−ＩｇＧ抗体
を測定した場合、赤血球の細胞膜断片画分をＥＬＩＳＡ
の固相化抗原として用いた本発明測定系では抗原濃度に
依存して吸光度は上昇したが、細胞質タンパク質画分を
固相化抗原として用いた系では全く濃度依存性は認めら
れず、抗ＳＲＢＣ−ＩｇＧ抗体は定量的に測定されなか
った。当然のことながら、正常マウスの血清である陰性
対照血清では血清中に抗体は測定されなかった。
【００１６】実施例１のゲル濾過分画においてセファロ
ースＣＬ−６Ｂという担体を用いたが、このゲル濾過担
体は球状タンパク質で１万〜４００万の分子量を分画範
囲とするものである。従って赤血球を破壊して得た膜断
片の分子量は４００万以上と推測されるが、原理的には
赤血球膜断片と細胞質タンパク質を分離すればどのよう
な種類の担体でも、或いは限外濾過や遠心分離等のその
他の如何なる方法でも利用することが可能である。
ースＣＬ−６Ｂという担体を用いたが、このゲル濾過担
体は球状タンパク質で１万〜４００万の分子量を分画範
囲とするものである。従って赤血球を破壊して得た膜断
片の分子量は４００万以上と推測されるが、原理的には
赤血球膜断片と細胞質タンパク質を分離すればどのよう
な種類の担体でも、或いは限外濾過や遠心分離等のその
他の如何なる方法でも利用することが可能である。
【００１７】ＥＬＩＳＡでは固相化抗原の濁度及び着色
度が測定の正確性に多大な影響を与える。本発明抗原で
ある赤血球の細胞膜断片を含む溶液はほとんど透明に近
いものであり、ＥＬＩＳＡ用の固相化抗原として非常に
有用である。本発明抗原は上述したとおり非常に簡便な
操作で調製可能であるため、一度に大量の固相化用抗原
を得ることができる。また得られた赤血球の膜断片より
なる本発明抗原はリン酸緩衝溶液に調製して冷暗所（例
えば４℃）にて保存可能であり、例えば１０ヶ月保存し
たものであっても調製時と同様に測定可能であったこと
から、この赤血球膜断片よりなる本発明抗原及びこれを
利用した測定法は極めて実用的な方法であるといえる。
度が測定の正確性に多大な影響を与える。本発明抗原で
ある赤血球の細胞膜断片を含む溶液はほとんど透明に近
いものであり、ＥＬＩＳＡ用の固相化抗原として非常に
有用である。本発明抗原は上述したとおり非常に簡便な
操作で調製可能であるため、一度に大量の固相化用抗原
を得ることができる。また得られた赤血球の膜断片より
なる本発明抗原はリン酸緩衝溶液に調製して冷暗所（例
えば４℃）にて保存可能であり、例えば１０ヶ月保存し
たものであっても調製時と同様に測定可能であったこと
から、この赤血球膜断片よりなる本発明抗原及びこれを
利用した測定法は極めて実用的な方法であるといえる。
【００１８】さらに従来技術で示した赤血球の一部の可
溶化膜タンパク質を用いる方法と比べて、細胞膜断片は
もとの赤血球と極めて類似する抗原性を有すると考えら
れるため、本発明抗原を利用した測定法は免疫学的にも
より正確な抗体量を測定できるものである。上述したと
おり、本発明は操作も簡便で時間や経費を費やすことな
く実施可能であり、正確且つ高感度で定量性に優れた抗
赤血球抗体の酵素免疫測定法を行うことができる。
溶化膜タンパク質を用いる方法と比べて、細胞膜断片は
もとの赤血球と極めて類似する抗原性を有すると考えら
れるため、本発明抗原を利用した測定法は免疫学的にも
より正確な抗体量を測定できるものである。上述したと
おり、本発明は操作も簡便で時間や経費を費やすことな
く実施可能であり、正確且つ高感度で定量性に優れた抗
赤血球抗体の酵素免疫測定法を行うことができる。
赤血球の細胞膜断片よりなる本発明抗原を用いて行った
ＥＬＩＳＡの結果の一例を図１に、また赤血球の細胞質
タンパク質画分を固相化抗原とした場合の結果を図２に
示した。
ＥＬＩＳＡの結果の一例を図１に、また赤血球の細胞質
タンパク質画分を固相化抗原とした場合の結果を図２に
示した。
Claims (2)
- 【請求項１】 赤血球の膜断片よりなる酵素免疫測定用
抗原。 - 【請求項２】 抗赤血球抗体の酵素免疫測定法におい
て、赤血球の細胞膜断片を抗原として用いることを特徴
とする測定法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7225784A JPH0954091A (ja) | 1995-08-09 | 1995-08-09 | 抗赤血球抗体の測定法 |
| US08/687,778 US5856113A (en) | 1995-08-09 | 1996-07-31 | Antigen and method for measuring anti-erythrocyte antibody |
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