JPH09500125A - タンパク質チロシンキナーゼインヒビターのプロドラッグ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 保護基と連結したタンパク質チロシンキナーゼインヒビター（ＰＴＫｉ）のプロドラッグを含む化合物、該保護基は該化合物から開裂されることができてタンパク質チロシンキナーゼインヒビターを放出する。タンパク質チロシンキナーゼインヒビターにはチルホスチン、好ましくは式（Ｉ）で示されるもののようなものを含み、式中、Ｘは、炭素、窒素または基Ｎ→Ｏを示し、ｎは１〜３の整数であり；基Ｒ¹のそれぞれは、同一または異なるものであって良く、水素、ヒドロキシ、メルカプト、カルボキシ、ホルミル、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4アルキルチオ、カルボキシ、Ｃ_1-4アルキル、カルボキシＣ_2-4アルケニル、Ｃ_1-4アルキルスルホキシ、ハロ（即ち、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード）、ニトロ、アミノ、またはＣ_1-4アルキルアミノ、Ｃ_1-4ジアルキルアミノであり、あるいはｎが２または３のとき、２つのＲ¹基は、共にメチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成しても良い；Ｒ²は、水素、ヒドロキシ、Ｃ_1-4アルキルまたは基Ｒ¹（１個または複数）が結合している(attached)環の２位と共に５または６員の脂肪族または複素環式の環を形成し、該５または６員環は、必要に応じてケトン基を含み；およびＲ³はシアノ、カルボキシ、カルバモイル、チオカルバモイル、基Ｃ（Ｏ）ＨＮＣＨ₂ＣＮ、基Ｃ（ＮＨ₂）＝Ｃ（ＣＮ）₂、アルファケト基Ｃ（Ｏ）Ｒ⁴［式中、Ｒ⁴は、３，４−ジヒドロキシフェニルまたは２−チオフェン］またはアルファアミド基Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ⁵［式中、Ｒ⁵は、ベンジル、フェニルまたは２，４−ジメトキシフェニル］である；但し、基Ｒ¹およびＲ²の少なくとも１つがメルカプト、ヒドロキシまたはアミノである。

Description

【発明の詳細な説明】 タンパク質チロシンキナーゼインヒビター のプロドラッグ 本発明は、プロドラッグおよび腫瘍治療におけるその使用に関する。 プロドラッグの使用は、癌治療において臨床的に非常に重要な概念の代表例で ある。なぜなら、腫瘍関連抗原に結合するモノクローナル抗体に連結し得る(lin kable)酵素の影響下に、該プロドラッグが抗腫瘍剤に転換される場合は特に、そ のようなプロドラッグとそのような酵素・モノクローナル／抗体複合体との組み 合わせが非常に強力な臨床的薬剤となるからである。癌治療へのこのアプローチ は、しばしば「抗体指向性酵素／プロドラッグ療法(antibody directed enzyme/ prodrug therapy)」（ＡＤＥＰＴ）と称され、ＷＯ８８／０７３７８に開示され ている。 より最近、類似のアプローチ（”ＶＤＥＰＴ”）が提案されたが、そこでは、 腫瘍細胞は、抗体／酵素複合体の代わりに、プロドラッグを活性化し得る酵素を コードする遺伝子を含む(carrying)ウィルスベクターによって標的化される。該 遺伝子は、腫瘍特異的なプロモーターまたはエンハンサー配列により、転写的に 調節され得 る。ウィルスベクターは、腫瘍細胞に入り、酵素を発現し、この結果、プロドラ ッグは、腫瘍細胞の近辺のみで活性な薬剤に転換される（ヒューバー(Huber)ら 、（プロシーディングズ・オブ・ナショナルアカデミー・オブ・サイエンスイズ (Proc．Natl．Acad．Sci.)USA（1991）88、8039）。あるいは、遺伝子の運搬(de livery)のために、非ウィルス的方法が使用された。そのような方法には、リン 酸カルシウム共沈殿法、マイクロインジェクション、リポソーム、直接的ＤＮＡ 取り込み、およびレセプター介在性ＤＮＡ転移(receptor-mediated DNA transfe r)が含まれる。これらは、モーガン・アンド・フレンチ・アンダーソン(Morgan & French Anderson)，アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー(Annu ．Rev．Biochem.)，1993，62;191に概説されている。用語「ＧＤＥＰＴ」（遺伝 子指向性酵素プロドラッグ療法(gene-directed enzyme prodrug sysyem)）は、 ウィルスおよび非ウィルスの両方の運搬システム(delivery system)を包含する ために使用される。 ＧＤＥＰＴおよびＡＤＥＰＴシステムは、腫瘍の部位に運搬される抗腫瘍剤の 濃度を増大させるが、薬剤運搬の特異性をさらに増大させる必要がある。両方の システムとも、活性薬剤は、正常細胞の環境に放出されること があり得、損傷を与える。ＡＤＥＰＴの場合、これは、腫瘍部位への局在化を果 たせなかった、複合体によるプロドラッグの活性化が原因であり得る。ＧＤＥＰ Ｔの場合、正常組織の形質転換は、腫瘍から離れた酵素発現を残余レベルに導く かもしれないし、または活性薬剤は、腫瘍細胞から放出されるかもしれない。Ａ ＤＥＰＴシステムの特異性を増大する方法は、ＷＯ８９／１０１４０に開示され ているが、ＡＤＥＰＴおよびＧＤＥＰＴの特異性のレベルを向上させる継続的な 必要性が存在する。 本発明は、新規なクラスのプロドラッグを使用することにより、そのような問 題を扱い、それは、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）インヒビターのプロ ドラッグである。幾つかのＰＴＫｓは、例えば、乳癌および子宮癌のような幾つ かのタイプの腫瘍により過剰発現されることが知られており、そこでは、ｃＥｒ ｂＢ２遺伝子が過剰発現されている。ある種の化合物は、ＰＴＫｓに選択的であ ることが見い出され、従って、ＰＴＫｓを過剰発現しない細胞に比較的非毒性で ある。 ＡＤＥＰＴまたはＧＤＥＰＴにおけるそのような化合物の使用は、従って、腫 瘍細胞の治療のための、増強されたレベルの特異性を与える。ＰＴＫ−インヒビ ターに基づくプロドラッグは、主として腫瘍部位でＰＴＫイン ヒビターに転換されるが、同時に、他の部位での、または腫瘍からのＰＴＫ−イ ンヒビターの放出は、非特異的細胞毒性薬剤の放出に匹敵する細胞毒性は生じな い。 １つの局面において、本発明は、少なくとも１個の保護基に連結した(linked) タンパク質チロシンキナーゼインヒビター（ＰＴＫｉ）のプロドラッグを含む化 合物を提供し、該基は、該化合物から開裂されて、タンパク質チロシンキナーゼ インヒビターまたは該プロドラッグの生理学的に許容される誘導体を放出するこ とが可能である。 該プロドラッグは、下記の一般式で示されるものである： ＰＴＫｉ−ＰＲＴ 式中、ＰＴＫｉ化合物は、ＰＴＫ阻害活性を有する化合物であり、ＰＲＴは、酵 素の作用によってＰＴＫインヒビターから開裂され得る少なくとも１個の保護基 である。 適切なＰＴＫｓには、チルホスチン(tyrphostin)が含まれる。チルホスチンは 、タンパク質チロシンキナーゼ・ドメインのサブサイトに結合可能である、タン パク質チロシンキナーゼの低分子量（例えば、２，０００未満）のスチリル含有 インヒビターである。適切なチルホスチンには、ガジット(Gazit)ら、(ガジット ら、ジャーナル ・オブ・メディシナル・ケミストリー(J．Med．Chem.)（1989）32，2344)および ガジットら、(ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（1991）43，189 6-1907)に記載されたものが含まれ、特に、一般式（Ｉ）のチルホスチンが含ま れる 式中、Ｘは、炭素、窒素または基Ｎ→Ｏを示し、 ｎは１〜３の整数であり； 基Ｒ¹のそれぞれは、同一または異なるものであって良く、水素、ヒドロキシ、 メルカプト、カルボキシ、ホルミル、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_1-4 アルコキシ、Ｃ_1-4アルキルチオ、カルボキシＣ_1-4アルキル、カルボキシＣ_2-4 アルケニル、Ｃ_1-4アルキルスルホキシ、ハロ（即ち、フルオロ、クロロ、ブロ モまたはヨード）、トロ、アミノ、Ｃ_1-4アルキルアミノ、またはＣ_1-4ジアルキ ルアミノであり、あるいはｎが２または３のとき、２つのＲ¹基は、共にメチレ ンジオキシまたはエチレンジ オキシ基を形成しても良い； Ｒ²は、水素、ヒドロキシ、Ｃ_1-4アルキルまたは基Ｒ¹（１個または複数）が結 合している(attached)環の２位と共に５または６員の脂肪族または複素環式の環 を形成し、該５または６員環は、必要に応じてケトン基を含み；および Ｒ³はシアノ、カルボキシ、カルバモイル、チオカルバモイル、基Ｃ（Ｏ）ＨＮ ＣＨ₂ＣＮ、 基Ｃ（ＮＨ₂）＝Ｃ（ＣＮ）₂、 アルファケト基Ｃ（Ｏ）Ｒ⁴［式中、Ｒ⁴は、３，４−ジヒドロキシフェニルまた は２−チオフェニルである］またはアルファアミド基Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ⁵［式中、 Ｒ⁵は、ベンジル、フェニルまたは２，４−ジメトキシフェニルである］である ； 但し、基Ｒ¹およびＲ²の少なくとも１つがメルカプト、ヒドロキシまたはアミノ である。 好ましい実施態様では、ＸはＣであり；ｎは１〜３の整数であり；基Ｒ¹のそ れぞれは、同一または異なっても良く、水素、ヒドロキシ、カルボキシ、ホルミ ル、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_1-4アルコキシ、カルボキシＣ_1-4アル キル、カルボキシＣ_2-4アルケニル、ハロ（即ち、フルオロ、クロロ、ブロモま たはヨード）、 ニトロ、アミノ、Ｃ_1-4アルキルアミノまたはＣ_1-4ジアルキルアミノであり、あ るいはｎが２または３のとき、２つのＲ¹基は、共にメチレンジオキシまたはエ チレンジオキシ基を形成しても良い；Ｒ²は、水素、ヒドロキシまたはＣ_1-4アル キルであり；およびＲ³はシアノ、カルボキシ、カルバモイル、チオカルバモイ ル、 基Ｃ（Ｏ）ＨＮＣＨ₂ＣＮまたは 基Ｃ（ＮＨ₂）＝Ｃ（ＣＮ）₂である。 最も好ましくは、Ｘは、炭素を示し、ｎは１〜３の整数であり；基Ｒ¹のそれ ぞれは、同一または異なっても良く、水素、ヒドロキシまたはアミノであり；Ｒ² は、水素またはヒドロキシであり；およびＲ³はシアノ、 基Ｃ（Ｏ）ＨＮＣＨ₂ＣＮ、 基Ｃ（ＮＨ₂）＝Ｃ（ＣＮ）₂、 アルファケト基Ｃ（Ｏ）Ｒ⁴［式中、Ｒ⁴は、３，４−ジヒドロキシフェニルであ る］またはアルファアミド基Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ⁵［式中、Ｒ⁵は、ベンジルである］ である；但し、基Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³の少なくとも１つがヒドロキシまたはアミ ノである。 好ましくは、Ｒ¹は、ヒドロキシまたはアミノである。 Ｒ²が、Ｒ¹とともに５または６員環を形成するとき、好ましい環には、１個の 窒素原子および４または５個の 炭素原子を含む複素環が含まれる。原子の全体数には、基Ｒ¹（１個または複数 ）が結合している環の２炭素原子が含まれる。 上述のような適切なチルホスチンは、上記のガジットら、1989および1991開示 されている方法により、またはそれらに類似したものにより得られることができ 、それらは本明細書に引用により組み込まれる。 他のＰＴＫインヒビターには、フラボノイド、エルブスタチン(erbstatin)、 ベンゾキノイド(benzoquinoid)アンサマイシン抗生物質ならびに種々のペプチド およびヌクレオチド類似体が含まれる。ＰＴＫｉの正確な特質（nature)は、関 与する特定のＰＴＫの特質を考慮しながら、ＰＴＫｉが使用される特定の標的腫 瘍に依存する。これは、当業者により、例えば、候補となる範囲のＰＴＫｓの存 在下に、腫瘍の生検サンプルの培養により確認されることができる。適切なＰＴ Ｋｓは、ワークマン(Workman)ら、セミナーズ・イン・キャンサーバイオロジー( Seminars in Cancer Biology)、第３巻(1992)、369-381に見出され得る。 ＰＴＫインヒビターは、酵素によって除去可能である、あらゆる適切な保護基 と連結され(linked)ても良い。そのような基の例には、ＷＯ８８／０７３７８ま たはＷＯ ９３／０８２８８に見出されるものを含む。例えば、ＷＯ９３／０８２８８は、 ニトロレダクターゼ(nitroreductase)酵素の作用により活性化されることができ る「自己破壊性の(self immolative)」プロドラッグを記載している。これらの プロドラッグは、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル化合物の誘導体である。 保護基の正確な構造は、チルホスチン・プロドラッグがそれと共に使用される 、ＡＤＥＰＴまたはＧＤＥＰＴシステムの特質に依存する。それは、酵素により 除去されるか、または基が不安定で「自己破壊(self immolation)」を受けて活 性なＰＴＫを提供する様式で、酵素により修飾されることができる、あらゆる適 切な基であって良い。 各ＰＴＫｉに結合している保護基の数は、インヒビター化合物の正確な構造に 一部分依存する。追加的な保護基がプロドラッグの効力の低下を生み出す場合、 これがＰＴＫｉのＰＴＫｉ−ＰＲＴに対する活性の比率を増大させる故に、異な る数の保護基が付加されるときには、それは、保護されていないＰＴＫｉのＰＴ Ｋｉに対する相対的活性にも依存する。 ＰＴＫｉが、３、４または５を連結させる構造である場合には、より多くの、 例えば、３、４または５個の基 が付加されても良いが、望ましくは、１個または２個の保護基が各ＰＴＫｉ分子 に結合して、本発明の化合物を与える。 従って、本発明によるプロドラッグは、式（II）の保護基を有する化合物を含 む： 式中、Ｘは、ＮＨ、ＯまたはＳであり、ｍは、１〜５（例えば、１、２または３ ）の整数であり、Ｐｈは、必要に応じて置換されたフェニレン環であり、ＰＴＫ は、ＰＴＫ−（ＸＨ）_mがｍ個の−ＸＨ基を含むＰＴＫｉであるような基である 。ニトロ基は、Ｐｈ環に対して、２位にあって良いが、望ましくは、環の４位に ある。 ｍが２〜５である、式（II）の各化合物において、基ＸおよびＰｈのそれぞれ は、同一または異なるものであっても良い。好ましくは、それらは、同一である 。 式（II）のＰＴＫインヒビターには、基Ｒ¹およびＲ²の少なくとも１つがヒド ロキシ、メルカプトまたはアミノ基である上記式（Ｉ）のものを含むチルホスチ ンが含まれる。 フェニレン環の好適な置換基には、同一または異なっても良い１〜４個の基が 含まれ、フッ素、塩素、臭素、 ヨウ素、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、ニトロ、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4ハロ アルキル、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4ハロアルコキシ、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_2-4ア ルキニル、およびＣ_2-4ハロアルケニルから選択される。好ましくは、置換基は 、環の２、３、５および６位で、１〜４個のフッ素である。 本発明による好ましいプロドラッグは、式（III）で示されるものである： 式中、ｍおよびＰｈは、上記で定義したものであり、ＰＴＫは、ＰＴＫ−（ＯＨ ）_mがｍ個のヒドロキシル基を含むＰＴＫｉ化合物であるような基である。その ようなプロドラッグには、Ｒ¹、Ｒ²またはＲ³基の少なくとも１つがヒドロキシ ル基である、上記の式（Ｉ）のそれらチルホスチンが含まれる。ニトロ基は、Ｐ ｈ環に対して、望ましくは、環の４位であるが、２位にあっても良い。 式（II）および（III）の化合物は、ＡＤＥＰＴまたはＧＤＥＰＴシステム中 で、ＷＯ９３／０８２８８に記載された大腸菌のニトロレダクターゼを含むニト ロレダクターゼ酵素と組み合わせて、プロドラッグとして使用しても良い。本発 明は、その定義に関して、式IIまたはIII の化合物に対するニトロレダクターゼ作用の厳密な様式には依存しないが、必要 に応じて置換されたｐ−ニトロフェニル−ベンジルオキシ−カルボニル残基のニ トロ基が、対応するアミノまたはヒドロキシルアミノ基に転換されること、およ び、得られる必要に応じて置換されたｐ−アミノベンジルオキシ−カルボニルま たは必要に応じて置換されたｐ−ヒドロキシル−アミノベンジルオキシカルボニ ル化合物が、酵素的還元に使用される反応条件下で自動的に分解して、細胞毒性 化合物を放出し、下記の反応スキームに従って、副産物として、必要に応じて置 換されたｐ−アミノベンジルアルコールまたは必要に応じて置換されたｐ−ヒド ロキシルアミノベンジルアルコールおよび二酸化炭素を形成する： 本発明の必要に応じて置換されたｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル化合物 は、それ自体が公知の化学的合成の方法により都合よく調製される。例えば、ア ミノま たはヒドロキシＰＴＫｉ化合物は、塩化水素の受容体、特にトリエチルアミンの ようなアルキルアミンの存在下に、無水条件下で、必要に応じて置換された４− ニトロベンジルクロロホルメートと反応されることができる。この反応は、ＴＨ Ｆまたはクロロホルムのような乾燥非プロトン性有機溶媒の中で行われ、得られ る本発明の式IIまたは式III合物は、クロマトグラフィーまたは再結晶のような 慣用されている方法により、有機溶媒から精製される。ＡＤＥＰＴで使用するた めには、該プロドラッグは、細胞に入ることができないか、または限られた能力 を有するべきであり、逆に、ＧＤＥＰＴで使用するためには、該プロドラッグは 、細胞に入るべきである。従って、該プロドラッグをより多くまたは、より少な く親油性にするために、プロドラッグ中の、例えばベンゼン環に修飾がなされて も良い。 カルボキシペプチダーゼＧ２（ＣＰＧ２）のようなカルボキシペプチダーゼ酵 素によって活性化されることができる類似のプロドラッグは、式（IV）のベンジ ルハロホルメート誘導体（ハロは、フルオロ、クロロまたはブロモ、好ましくは クロロである）を用いて作製されることができる： 式中、Ｑは、水素またはフルオロ、クロロまたはブロモであり、Ｐｈは、上記の ように定義され、Ｚは、−Ｏ．ＣＯ−または−ＮＨ．ＣＯ−であり、ｇｌｕは、 グルタミン酸残基、即ち、下記基であり： またはそれらのジ−Ｃ_1-6アルキルエステル（例えば、エチルまたはｔ−ブチル エステル）であり、その目的は、式（Ｖ） および式（VI） のプロドラッグを提供することであり、 式中、ＰＴＫは、ＰＴＫ−（ＸＨ）_mおよびＰＴＫ−（ＯＨ）_mが上記のように定 義され、ならびにｍ、Ｐｈ、Ｚおよびｇｌｕもまた上記のように定義されるよう なＰＴＫｉ化合物の残基である。式（II）および式（III）のプロドラッグに関 連して上述したように、ＡＤＥＰＴのためには、プロドラッグは、細胞に入る限 られた能力を有するべきであり、他方、ＧＤＥＰＴのためには、プロドラ ッグは、それが細胞に入るために、より親油性にする必要性がある場合には、修 飾されても良い。グルタミン酸のガンマ・カルボキシル基は、より親油性である 化合物にするために、例えば芳香族または複素環式アミドで改変されても良い。 ｍが、２〜５である式（Ｖ）の各化合物において、基ＸおよびＰｈのそれぞれ は、同一または異なるものであっても良い。好ましくは、それらは、同一である 。 式（IV）、（Ｖ）および（VI）の化合物では、基−Ｚ−は、置換基を含むＰＴ Ｋに対して、環の４位にある。 ＰＴＫがチルホスチン、特に式 （Ｉ）のチルホスチンである、式（Ｖ）およ び（VI）の化合物が好ましい。 Ｚが−ＮＨ．ＣＯ−である式（IV）のベンジルクロロホルメート誘導体は、グ ルタミン酸または例えば、グルタミン酸残基の両方のカルボキシ基が、エチルま たはｔ−ブチル基のようなＣ_1-6アルキルで保護されたその保護化誘導体の反応 により、４−（クロロメチル）フェニルイソシアネートから作製されても良い。 適切には、反応は、ＣＨ₂Ｃｌ₂のような溶媒中で、室温付近で行われる。得られ る中間体、４−（クロロメチル）フェニル−ウレイドグルタメート−ジ−ｔｅｒ ｔ−ブチルエステルは、含水エタノールの中で還流しながら処理されて、対応す る４−ヒドロキシメチル化合物を与え、これは、不活性溶媒、例えばＴＨＦ中で 、室温で、トリホスゲン(triphosgene)（(ＣＣｌ₃Ｏ)₂ＣＯ）と反応して、式（I V）の必要に応じて保護された化合物を与える。保護されているときの該化合物 は、トリフルオロ酢酸またはギ酸での処理により脱保護化されても良い。 Ｚが−Ｏ．ＣＯ−である式（IV）のベンジルクロロホルメート誘導体は、４− ヒドロキシベンズアルデヒドから出発して作製されても良い。簡単に言うと、ア ルデヒドは、ボラントリフルオロエーテラート(borane trifluoroetherate)プラ スＣＨ₂Ｃｌ₂中、１，２−エタンジチオールで、２５℃で約１２時間処理して、 １，３ジチオラン中間体を形成し、これは、上述のようにトリホスゲンと処理し て４［１，３ジチオラン］フェニルクロロホルメートを形成する。これは、ジｔ ｅｒｔブチル−グルタメート塩酸塩と、乾燥ＴＨＦ中で、トリエチルアミンの存 在下、室温で、約５時間カップリングされて、４［１，３ジチオシラン］フェニ ルカルバメート−グルタメート−ジ−ｔブチルを与える。ジチオランは、メタノ ールまたはＴＨＦおよびクロロホルム中の過塩素酸水銀(mercuric perchlorate) で、約２５℃で約５分間、脱保護される。アルデヒドは、室温でエーテル中、水 素化ホ ウ素ナトリウムまたは他の穏和な還元剤による穏和な還元により、対応するベン ジルアルコールに変換され、次に、上述のようにトリホスゲンにより、対応する クロロホルメートに変換される。 式（Ｖ）および（VI）の化合物は、式（II）および（III）の化合物製造のた めの、上記の方法に類似した手順により、アミノまたはヒドロキシ基を含むＰＴ Ｋインヒビターから、作製されても良い。 式（Ｖ）または（VI）のＰＴＫプロドラッグは、ＣＰＧ２のようなカルボキシ ペプチダーゼにより、その酵素の作用によって活性化されて、グルタミン酸残基 を除去し、続いて、ニトロレダクターゼに関連して上述されたものに類似の様式 で、残りのプロドラッグの「自己破壊(self immolation)」を起こす。 Ｚが−ＮＨ．ＣＯ−である式（Ｖ）のプロドラッグもまた、式（VII）の新規 なリンカー(linker)を用いて作製されることができ： 式中、Ｐｈおよびｇｌｕは、上記のように定義される。必要に応じて置換された フェニル基は、ヒドロキシメチル基に対して４位で、ｇｌｕを含む部分(moiety) により 置換される。 従って、他の局面においては、本発明は、式（VII）の新規なリンカーを与え る。これらリンカーもまた、遊離のヒドロキシ、アミノまたはメルカプト基を含 む他の薬学的化合物に連結され、新規なプロドラッグを与えても良く、そのよう なプロドラッグは本発明のさらなる局面を形成する。新規なプロドラッグは、薬 学的組成物として調製されても良く、本明細書に記載されているように、ＡＤＥ ＰＴまたはＧＤＥＰＴを使用する患者の治療において使用されても良い。 式（VII）の新規なリンカーは、必要に応じた置換基が上記の基−Ｐｈ−に関 して定義されたものである、必要に応じて置換された４−ニトロベンジルアルコ ールから作製されても良い。４−ニトロベンジルアルコールのヒドロキシル基は 、例えば、ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−クロロシランとの、室温での有機溶 媒中での反応により保護され、必要に応じて置換された（４−ニトロ−ベンジル ）ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−フェニル−シリルエーテルを与える。４−ニトロ基は 、次に、例えば、アルコール例えばメタノールまたはエタノールのようなプロト ン性溶媒中、Ｐｄ／Ｃのような触媒の存在下、ギ酸アンモニウムを用いた、接触 水素化または触媒による水素 移動により、アミン基に還元される。 アミン基は、次に、例えば、トリエチルアミンのような第３級有機アミンおよ びトルエンのような沸点が５０℃以上である非プロトン性有機溶媒の存在下に、 ホスゲン、ジホスゲンまたはトリホスゲンと反応することにより、イソシアネー ト基に転換されても良い。イソシアネート化合物は、次に、ジ−Ｃ_1-6アルキル −グルタミン酸またはその誘導体、例えば、ジ−Ｃ_1-6アルキルグルタメート塩 酸塩と反応される。これは、室温で、トルエン、ＴＨＦまたはジクロロメタンの ような非プロトン性有機溶媒中、トリエチルアミンの存在下に、行われても良い 。 あるいは、アミン化合物は、ＴＨＦまたはジクロロメタンのような非プロトン 性溶媒中、トリホスゲンおよびトリエチルアミンの存在下に、ジ−Ｃ_1-6アルキ ル−グルタミン酸またはその誘導体と、直接的にワンポット合成(one-pot synth esis)で反応されても良い。 いずれの場合にも、得られる化合物は、例えば、室温で、ＴＨＦ中フッ化テト ラブチルアンモニウムの使用により、処理されて、ヒドロキシ保護基を除去する 。 得られる、ｇｌｕがジ−Ｃ_1-6アルキルエステルの形態である式（VII）の化合 物は、例えば、ギ酸またはトリフルオロ酢酸のような酸の使用により、脱保護さ れて、エ ステル基を除去しても良い。あるいは、ジクロロメタンおよび／またはＴＨＦの ような非プロトン性溶媒中、トリエチルアミンのような第３級有機塩基の存在下 に、ＰＴＫｉまたはその活性化された誘導体と室温で反応させ、基−ＯＨ、−Ｎ Ｈ₂または−ＳＨを含むＰＴＫｉと連結させて、式（Ｖ）の化合物を与えること ができる。化合物のジ−Ｃ_1-6アルキルエステル基は、もし存在するならば、上 述のように除去されても良い。 基−ＸＨを有するＰＴＫｉを、式（VII）の新規なリンカーに連結するために 、基−ＸＨは、テトラブチルアンモニウム硫酸水素塩のような相間移動触媒の存 在下、ホスゲン、ジホスゲンまたはトリホスゲンの使用により、反応性クロロホ ルミル、クロロチオホルミルまたはイソシアネート誘導体に転換されても良い。 反応は、トルエン、ＴＨＦまたはジクロロメタンのような有機溶媒中、ＮａＯＨ のような塩基の存在下に、行われても良い。 本発明のさらなる局面においては、Ｚが−Ｏ．ＣＯ−である式（Ｖ）のプロド ラッグは、式（VIII）の新規なリンカーを用いて、作製されても良い： 式中、Ｐｈおよびｇｌｕは、上記のように定義される。 必要に応じて置換されたフェニレン基は、ｇｌｕを含む部分(moiety)により、ヒ ドロキシメチル基に対して４位で置換される。 従って、さらなる局面では、本発明は、式（VIII）の新規なリンカーを与える 。該リンカーもまた、遊離のヒドロキシ、アミノまたはメルカプト基を含む他の 薬学的化合物に連結されて、新規なプロドラッグを与え、そのようなプロドラッ グは、本発明の追加的な局面を形成する。新規なプロドラッグは、薬学的組成物 として調製されても良く、本明細書に記載のようにＡＤＥＰＴまたはＧＤＥＰＴ を用いて、患者の治療に使用されても良い。 式（VIII）の化合物を製造するために、必要に応じて置換された４−ヒドロキ シベンズアルデヒドは、ＣＨ₂Ｃｌ₂のような非プロトン性溶媒中、ＢＦ₃．Ｅｔ₂ Ｏの存在下、１，３−プロパンジチオールまたは１，２−エタンジチオールとの 室温での反応により、１，３−ジチアンまたはジチオラネイン(dithiolanein)と して保護され、対応する４（１’，３’−ジチアニル）フェノールまたは４（１ ’，３’−ジチダニル(dithidanyl)）フェノールを与える。この化合物は、トル エンのような非プロトン性溶媒中、トリエチルアミンのような第３級有機アミン の存在下に、ジ−Ｃ_1-6アルキル −グルタミルイソシアネートとカップリングされ、対応するＯ［４（１’，３’ −ジチアニル）−フェニル］Ｎ（ジ−Ｃ_1-6アルキル−グルタミル）カルバメー トになる。該カルバメートの、対応するアルデヒドへの脱保護は、ＴＨＦまたは ジクロロメタン中、Ｈｇ（ＣｌＯ₄）₂またはＴｌ（ＮＯ₃）₃を用いて、室温で行 われても良い。アルデヒドの還元により、所望のＯ（４−ベンジル−オキシ）Ｎ （ジ−Ｃ_1-6アルキル−グルタミル）カルバメートを与える。これは、トリフル オロ酢酸またはギ酸のような酸で処理されることにより脱保護され、アルキルエ ステル保護基を除去して、式（Ｖ）のプロドラッグを与えても良い。 式（VIII）の新規なリンカーは、式（VII）のリンカーに関して上述したと同 じ方法で、遊離のヒドロキシ、アミノまたはメルカプト基を含むＰＴＫｉ化合物 または他の薬学的化合物に結合(attached)されても良い。従って、本発明はさら に、活性な薬剤のプロドラッグである化合物を提供し、該活性な薬剤は少なくと も１種の遊離のアミノ、ヒドロキシルまたはメルカプト基を有し、該基は、式（ VII）または（VIII）の、１種以上（例えば、１〜５、例えば、１、２または３ ）のリンカーと連結し、該リンカーは同一または異なっていても良い。 他の好適なＰＴＫｉプロドラッグ（式（Ｉ）のもののようなチルホスチンを含 む）には、糖またはβ−ラクタム誘導体で誘導体化されたものが含まれる。例え ば、上述のＰＴＫ−ＮＨ₂またはＰＴＫ−ＯＨまたはＰＴＫ−ＳＨタイプのＰＴ Ｋインヒビターに結合しても良い好適なリンカーは、下記のものである： 式中、Ｒは、水素またはアセチルであり、Ｙは、フェニル、ベンジルまたはトル リル(tolulyl)のようなアリールであり、およびこれらは、上述した他のプロド ラッグに類似した方法で作製されても良い。 ＰＴＫｉのあらゆるヒドロキシ、アミノまたはメルカ プト基は、上記の方法で連結され、本発明のプロドラッグを与える。所望される ならば、１を超えるそのような基は、誘導体化されて、プロドラッグを作製して も良い。しかしながら、ヒドロキシ、メルカプトまたはアミノ基の１つのみが反 応されてプロドラッグを作製する場合は、ＰＴＫのあらゆる残りの基が、例えば （ヒドロキシルの場合には）、ｔブチルまたはアダマンチル基で、あるいは、ア ミノの場合にはブチルオキシカルボニル基で、保護されても良い。そのような保 護基は、当分野で公知の化学的プロセスを用いて、結合(attached)することがで きる。リンカーと反応されるＰＴＫｉの基は、対応するハロホルメートまたはイ ソシアネートに誘導体化され、次に、式（VII）または（VIII）のもののような リンカーとカップリングされても良い。ＰＴＫｉプロドラッグが作製された後、 保護基は、慣用されている手段、例えば、トリフルオロ酢酸で処理して、除去さ れても良い。 該プロドラッグの生理学的に許容される誘導体には、塩、アミド、エステルお よびエステルの塩が含まれる。エステルには、エステル原子団の非カルボニル部 分(moiety)が、直鎖状または分岐鎖状のＣ_1-6アルキル、（メチル、ｎ−プロピ ル、、ｎ−ブチルまたはｔ−ブチル）；またはＣ_3-6環状アルキル（例えば、シ クロヘキシル）か ら選択されるカルボン酸エステルが挙げられる。塩には、生理学的に許容される 塩基塩、例えば、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）、アルカリ土類金属（例 えば、マグネシウム）塩、アンモニウムおよびＮＲ₄（式中、Ｒは、Ｃ_1-4アルキ ルである）塩のような適切な塩基から誘導されたものが含まれる。他の塩には、 塩酸塩および酢酸塩を含む、酸付加塩が含まれる。アミドには、非置換ならびに モノ−およびジ−置換誘導体が含まれる。 本発明は、さらに、薬学的製剤(pharmaceutical form ulations)を提供する。 そのような製剤は、本発明の化合物を、１種以上の薬学的に許容される担体また は希釈剤とともに含む。 薬学的に許容される担体または希釈剤には、経口的または非経口的（例えば、 筋肉内または経静脈的）投与に適した製剤中で使用されるものが含まれる。該製 剤は、好都合には、一回投与量形態(unit dosage form)で提供され、および薬学 の分野で周知のあらゆる方法により調製されても良い。そのような方法は、活性 成分(active ingredient)を、１種以上の補助的成分(accesory ingredients)を 構成する担体と混合(association)する工程を含む。一般に、該製剤は、活性成 分を、液性担体もしくは細かく粉砕された固形担体またはその両方と、均一に および完全に(intimately)混合させることにより調製され、続いて、必要ならば 、生成物を造形(shaping)する。 例えば、非経口的投与に適した製剤には、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤(bacte riostats)および予定されたレシピエントの血液と等張な製剤にさせる溶質を含 んでも良い水性および非水性の滅菌注射液；ならびに懸濁化剤および濃化剤を含 んでも良い水性および非水性の滅菌懸濁液、およびポリペプチドを血液成分(com ponent)または１種以上の器官に標的化するように設計されているリポソームま たは他の微粒子システムが含まれる。 適切なリポソームは、例えば、正に荷電した脂質（Ｎ［１−（２，３−ジオレ イルオキシ(dioleyloxy)）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニウム（ ＤＯＴＭＡ）を含むもの、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（Ｄ ＯＰＥ）を含むもの、３β［Ｎ−（ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カル バモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）を含むものを包含する。 本発明のＰＴＫｉプロドラッグおよびＡＤＥＰＴに関する抗体／酵素複合体は 、同時に投与されることができるが、臨床のプラクティスにおいては、酵素／薬 剤複合体が腫瘍標的領域に局在化する機会を与えるために、プロドラッグよりも 先に、例えば、７２時間までか、ある いは１週間も前に、酵素／薬剤複合体を投与することが好ましいと、しばしば見 受けられる。プロドラッグが投与されるときは、こうした方法で操作すれば、プ ロドラッグの細胞毒性物質への転換は、酵素／薬剤複合体が局在化される領域、 即ち、標的腫瘍の領域に限定されやすく、ＰＴＫｉ薬剤の時期尚早な放出が最小 限になる。 ＶＤＥＰＴでは、プロドラッグは通常、酵素をコードする修飾されたウィルス の投与の後に、投与される。代表的には、ウィルスは患者に投与されて、その後 、感染細胞によるウィルスの取り込みを、例えば、標的組織の生検サンプルの回 収および分析により、モニターする。同様に、ＧＤＥＰＴでは、プロドラッグは 通常、酵素をコードする遺伝子を含む運搬システム(delivery system)の投与の 後に、投与される。 ＡＤＥＰＴでは、酵素／薬剤複合体の局在化の度合い（自由循環に対する局在 化した活性複合体の比率に換算して）は、ＷＯ８９／１０１４０に記載されてい るクリアランスおよび／または不活性化システムを用いて、さらに増強されるこ とができる。これは、酵素を不活性化する、および／または血液からの複合体の クリアランスを促進するために、通常、複合体の投与の後およびプロドラッグの 投与の前に、複合体のそのような部分に結合 できる成分(component)（「第２成分」）の投与を必要とする。そのような成分 は、該システムの酵素成分に対する抗体で、該酵素を不活性化できる抗体を含ん でも良い。 該第２成分は、デキストラン、リポソーム、アルブミン、マクログロブリンま たは血液型Ｏの赤血球のような巨大分子に連結されて、第２成分が、血管コンパ ートメントを離れる(leaving)のを制限しても良い。加えて、またはそれに代わ るものとして、該第２成分には、十分な数の共有結合したガラクトース残基、ま たはラクトースもしくはマンノースのような他の糖の残基が含まれても良く、血 漿中で複合体と結合するが、肝臓中のガラクトースまたは他の糖に対する受容体 により、血漿から複合体とともに除去されることができる。該第２成分は、測定 可能な程度まで、それが腫瘍の血管外区域(extravascular space）（ここは、プ ロドラッグの投与前および投与中に、局在化された複合体を不活性化し得る）に 入らないように投与され、使用するために計画されるべきである。 ＧＤＥＰＴおよびＡＤＥＰＴの両方に関する、厳密な投与計画は、無論、個々 の臨床医により、個々の患者に対して決定されるべきであり、これは、引き続い て、プロドラッグの厳密な特質およびプロドラッグから放出さ れる細胞毒性物質によりコントロールされるが、幾つかの一般的指針は示される ことができる。このタイプの化学療法は、通常、プロドラッグと、酵素／薬剤複 合体または修飾されたウィルスの両方の非経口的投与を必要とし、経静脈的経路 による投与がしばしば、最も実際的であると見い出されている。ＡＤＥＰＴシス テムでは、プロドラッグと複合体の投与量は、最終的には、医師の自由裁量にあ り、医師は、患者の年齢、体重および健康状態などの要因を考慮に入れる。プロ ドラッグおよび複合体の適切な投与量は、バグショウ(Bagshawe)らに示されてい る。抗体、免疫複合体、および放射性医薬品(Antibody，Immunoconjugates，and Radiopharmaceuticals)、(1991)、4、915-922。複合体の適切な投与量は、５０ ０〜２００，０００酵素単位／ｍ²（例えば、２０，０００酵素単位／ｍ²）であ って良く、プロドラッグの適切な投与量は、５〜２０００ｍｇ／ｍ²（例えば、 ２００ｍｇ／ｍ²）であって良い。 所望の治療の部位での、複合体の最大濃度を確実にするために、通常、２つの 成分(component)の投与は、少なくとも４時間、間隔をあけることが望ましい。 厳密な投与計画は、標的化される腫瘍の特質およびプロドラッグの特質を含む種 々の要因に影響されるが、通常は、４８ 時間以内に所望の治療部位での複合体の適切な濃度がある。 ＧＤＥＰＴシステムでは、運搬される(delivered)ウィルスまたは他のベクタ ーの量は、上記のＡＤＥＰＴシステムにおいてと同様の、酵素の細胞内濃度を与 えるものである。これは、患者に、ある範囲の試験投与量を投与すること、およ び、標的細胞または腫瘍の感染もしくはトランスフェクションの程度を測定する ことを包含する、臨床試験により決定される。必要とされるプロドラッグの量は 、ＡＤＥＰＴシステムに関してのものと同様か、またはそれよりも多い。 本発明はさらに、ヒトまたは動物の被験体における新形成(neoplasia)をコン トロールするのに使用されるシステムを提供し、該システムは、ＰＴＫｉプロド ラッグを活性なＰＴＫｉに転換し得る酵素を、好ましくは腫瘍関連抗原と結合す るモノクローナル抗体のような標的化物質と複合体化し、上記のようにプロドラ ッグと混合して含む。酵素がニトロレダクターゼである場合、該システムはまた 、好ましくは、該酵素に関する適切な補助因子を含む。適切な補助因子には、ニ コチン酸またはニコチンアミドのリボシドまたはリボチドが含まれる。 本発明は、新形成を治療する方法であって、そのよう な治療を必要としているヒトまたは動物の被験体の治療方法に及び、該治療方法 は、宿主に有効量の、本発明のＰＴＫｉプロドラッグおよび酵素を、好ましくは 腫瘍関連抗原と結合するモノクローナル抗体のような標的化物質と複合体化して 、投与することを包含する。 本発明はまた、ヒトまたは動物の被験体における新形成のコントロールに使用 されるシステムを提供し、該システムは、該被験体中の腫瘍細胞に選択的に感染 し得る修飾されたウィルスまたは他の運搬システムを、酵素の作用によりＰＴＫ ｉに転換され得るＰＴＫｉプロドラッグと混合して含み、該ウィルスは、酵素を コードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列を含む(carry)。 本発明は、新形成を治療する方法であって、そのような治療を必要としている ヒトまたは動物の被験体の治療方法に及び、該治療方法は、宿主に有効量の、本 発明のＰＴＫｉプロドラッグおよび修飾されたウィルスを投与することを包含し 、該修飾されたウィルスは、該被験体中の腫瘍細胞に選択的に感染することがで き、該ウィルスは、該ＰＴＫｉプロドラッグを活性なＰＴＫｉに転換し得る酵素 をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列を含む。 本発明はまた、新形成を治療する方法であって、そのような治療を必要として いるヒトまたは動物の被験体の 治療方法にも及び、該治療方法は、宿主に有効量の、本発明のＰＴＫｉプロドラ ッグおよび非ウィルスベクターシステムを投与することを包含し、該非ウィルス ベクターシステムは、該被験体中の腫瘍細胞に選択的に導入されることができ、 該ベクターシステムは、該ＰＴＫｉプロドラッグを活性なＰＴＫｉに転換し得る 酵素をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列を、該細胞中で該酵素を発現するのに 有効なプロモーターと、作動可能に(operably)連結して含む。 上述されたようなＡＤＥＰＴによる、新形成の治療に使用される種々のシステ ムは、前記のクリアランスを促進させるための「第２成分」を、必要に応じて含 む。同様に、上記の新形成の治療方法は、必要に応じて、自由循環に対する局在 化酵素の比率を増大させるために、その方法の一部分として酵素の投与後に投与 される、有効量の第２成分の使用を含む。第２成分のさらなる特定の詳細に関し て、ＷＯ８９／１０１４０が参照され、そのような詳細は、本発明の使用に組み 込まれる。 腫瘍細胞に選択的に感染し得る修飾されたウィルスは、当分野で公知である。 「選択的に感染する」とは、ウィルスが、主として腫瘍細胞に感染すること、お よび、この疾病の特質が治療されると仮定した場合、感染された 非腫瘍細胞の比率が、ＰＴＫｉプロドラッグ投与による非腫瘍細胞への損傷が容 認されるほどに低いものである、ことを意味する。最終的には、これは、医師に より判断される。 ウィルスにより運ばれる(carried)、酵素をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配 列は、該酵素の発現が標的腫瘍細胞の中で起こるように、適切な発現制御シグナ ルに連結される、ことも理解される。 非ウィルスベクターシステムは、上述したもののような方法、例えば、リン酸 カルシウム共沈殿法、マイクロインジェクション、リポソーム、直接的ＤＮＡ取 り込み、およびレセプター介在性ＤＮＡ転移を活用して、腫瘍細胞中に選択的に 導入されることができる（モーガン・アンド・フレンチ・アンダーソン（Morgan & French Anderson)、アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー(Annu ．Rev．Biochem.)、1993、62；191）。 本発明に使用されるための適切なモノクローナル抗体には、ｃｅｒｂＢ２に対 する抗体、例えばＩＣＲ１２（バキール，エムエー(Bakir，M A)ら、ジャーナル ・オブ・ヌクリアーメディシン(J．Nucl．Med)(1992) 33；2154-2160）および表 皮増殖因子レセプターに対する抗体、例えばＩＣＲ１６（ディーン，シージェイ (Dean， CJ)ら、インターナショナル・ジャーナル・オブ・キャンサー・サプリメント(In t．J．Cancer Suppl.) 8 (1994)、103）が含まれる。 本明細書で使用されるように、用語「モノクローナル抗体」は、単に伝統的な ハイブリドーマ技法により製造される抗体を指すのみでなく、組換え的手段で製 造される抗体およびその変異種(variants)もまた包含すると、当業者に理解され る。これらには、例えば、ヒト抗体からの定常領域を非ヒト抗体の可変領域に移 植したもののようなヒト化抗体（例えば、ＥＰ−Ａ−０ １２０ ６９４を参照 ）、非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲｓ）をヒト可変領域のフレームワークに移植 したもののようなキメラ抗体（例えば、ＥＰ−Ａ−０ ２３９ ４００を参照） およびシングルチェイン抗体(single chain antibody)が含まれる。それらの標 的結合活性を保持している、そのようなモノクローナル抗体のフラグメントも、 一般的用語「モノクローナル抗体」に包含される。これは、Ｆｖ、Ｆａｂ’およ びＦ（ａｂ’）₂フラグメントを含む。それはまた、そのような抗体のＣＤＲｓ に基づく組換えまたは合成タンパク質、例えば、アブザイム(abzymes)（抗体様 結合活性と酵素活性の両方を有するポリペプチド）およびジアボディ(diabodies )も含む。 本発明のプロドラッグはまた、ＡＤＥＰＴまたはＧＤＥＰＴシステムに組み込 まれても良い、候補となる酵素または抗体の活性をテストするための、インビト ロシステム中での試薬として使用されても良い。 例えば、抗体が指向する(directed)マーカーを含む(carrying)腫瘍細胞系を、 インビトロで増殖させて、その後、抗体−酵素複合体を培養物に加えても良い。 酵素は、本発明のプロドラッグを活性な薬剤に転換し得る、またはそのように推 測される、ものである。続いて、プロドラッグを培養物に加えて、細胞殺滅また は細胞増殖阻害の量を測定する（例えば、生存細胞の数を記録するために生体染 色剤(vital strain)を使用するか、生存細胞の数をカウントするために培養物サ ンプルを再プレートすることによって）。実施例 以下の実施例は、本発明を説明するものである。これに続く反応スキームは、 更にこれら実施例を説明するものである。 特に断らない限り、全ての出発物質、試薬および無水溶媒（窒素気流下のＴＨ Ｆ）を、アルドリッチ（Aldrich）から購入した。ジ−ｔｅｒｔ−ブチルグルタ メートは、シグマ（Sigma）から市販されている。キーゼルゲル ６ ０（Kiselgel 60）（０．０４３−０．０６０）を重力カラム（アート ９３８ ５および１５１１１，メルク）（gravity columns(Art 9385 and 15111，Merck) ）に用いた。キーゼルゲル ６０ Ｆ₂₅₄（アート ５７３５，メルク）であら かじめコートされた薄板上でＴＬＣを行った。電子衝撃スペクトルを、直接導入 法、７０ｅＶのイオン化エネルギー、１００ｍＡの捕捉電流（trap current）お よび１８０−２００℃のイオン源温度を用いたＶＧ ７０７０Ｈ質量分析計およ びＶＧ ２２３５データシステムにより測定した。高速電子衝突質量スペクトル （FAB mass spectra）を、キセノンガスを用いて測定した。高分解精密質量スペ クトル（high resolution accurate mass spectra）を同一のシステムで測定し た。特に断らない限り、報告されたスペクトルはＦＡＢによるものである。特に 断らない限り、ＮＭＲスペクトルは、ブルッカー ＡＣ２５０分光分析計（２５ ０ＭＨｚ）を用いて、Ｍｅ₂ＳＯ−ｄ₆中３０℃（３０３Ｋ）で測定した。Ｉ．Ｒ ．スペクトル（フィルム）は、パーキン エルマー（Perkin Elmer）１７２０Ｘ ＦＴ−Ｉ．Ｒ．分光分析計で記録した。実施例１ 概要 ＣＰＧ２酵素で開裂可能なチルホスチンプロドラッグ、Ｎ¹（４−ヒドロキシ ベンジル）Ｎ³（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル）ウレア，８（スキーム１ 参照）を製造した。この化合物は、チルホスチン化合物（tyrphostin compounds ）のヒドロキシ、メルカプトまたはアミノ官能基と結合（couple）するようにデ ザインされている。該中間体Ｎ¹（４−ヒドロキシベンジル）Ｎ³（ジ−ｔｅｒｔ −ブチル−グルタミル）ウレア８を、スキーム１にしたがいチルホスチン薬剤と 結合させるために合成した。出発物質である４−ニトロベンジルアルコール（4- nitrobenzylic alcohol），１，を、室温にてＤＭＦ（あるいはＴＨＦ）中でｔ ｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−クロロシランおよびイミダゾールと反応させるこ とにより、ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−フェニル−シリルエーテル，２，として保護 した。該保護されたニトロ誘導体，２，を、ギ酸アンモニウムを用いた水素転移 により還元した（ＥｔＯＨ中Ｐｄ／Ｃ１０％）。このようにして形成したアミン ，３，を、７０℃にて、トルエン中でトリホスゲン（triphosgene）と反応させ て対応するイソシアネート４を生成させた。保護されたリンカー（linker），７ ，を、室温にてＮＥｔ₃の存在下、ＴＨＦ中でジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタメ ートとイソシアネート４をカップリング させることにより得た。７へのもうひとつの経路は、上述の条件と同じ条件下で 、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル イソシアネート６とアミン３を直接カッ プリングさせる方法であり、該ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル イソシアネ ート６，は、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタメートを−７８℃にてトルエン中、 トリホスゲンおよびＮＥｔ₃で処理することにより得られた。この経路を用いる ことにより、アミン３およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタメートのワンポット 合成（one-pot synthesis）から化合物７が良好な収率で得られた。 化合物７を、室温でＴＨＦ中Ｂｕ₄ＮＦにより脱保護し、そしてリンカーのジ −ｔｅｒｔ−ブチル エステル，８，をカラムクロマトグラフィーで精製した。 エステル８を４−クロロホルミル−ベンジリデン−マロノニトリル１０と反応さ せることにより、チルホスチン１１のジ−ｔｅｒｔ−ブチル エステル リンカ ーを得た。選択の通常の手順であろう４−ヒドロキシ−ベンジリデン−マロノニ トリル（4-hydroxy-benzilydene-malononitrile），９，のホスゲン化が対応す るカーボネートを生じさせただけなので、相間移動触媒作用システム（phase tr ansfer catalysis system）を用いた。該相間移動法は、触媒としてテトラブチ ルアンモニウム硫酸水素塩を用い、目 的化合物の高収率化を導いた。化合物１２への最終的な脱保護を、４℃でギ酸を 用いて行った。 実験（４−ニトロ−ベンジル）ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−フェニル−シリル エーテル （２） ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−クロロシラン（１．９８ｇ，７．２０ｍｍｏ ｌ）を、４−ニトロベンジルアルコール，１，（１．００ｇ，６．５０ｍｍｏｌ ）およびイミダゾール（０．９７ｇ，１４．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０．０ｍ Ｌ）中に溶解させた攪拌溶液に室温、窒素気流下で１０分間を要して加えた。反 応混合物をさらに５時間攪拌し、Ｅｔ₂Ｏ（７５ｍＬ）で希釈し、Ｈ₂Ｏ（５×１ ５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、真空下で蒸発乾固した。放置により 結晶化するオイルを得、ＥｔＯＨ（７０％）で固体へと再結晶化した；収量：２ ．３６ｇ（９３．％）。Ｖmax／cm^-1（フィルム）：２９３１，２８５７（ＣＨ₂ ，ａｓｙｍ．，ｓｙｍ．），１５２１，１３４５（ＮＯ₂）；¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H： １．０６（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），４．９２（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂），７．４２−７ ．４６（５Ｈ，ｍ，Ｐｈ），７．６３−７．６５（７Ｈ，ｍ，Ｐｈ＋Ｈ_arom2+6 ），８．２３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２３，Ｈ_arom3+5）；ＭＳ，（ＥＩ），（３ ９１．５４）；ｍ／ｚ：３３４（Ｍ−ｔ-Ｂｕ，１００），２８８（Ｍ−ｔ-Ｂｕ −ＮＯ₂，１０），２５６（Ｍ−ｔ-Ｂｕ−Ｐｈ，２０），１９９（Ｐｈ₂ＳｉＯ Ｈ⁺，１００）；Ｃ₂₃Ｈ₂₅ＮＯ₃Ｓｉ。（４−アミノ−ベンジル）ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−フェニル−シリル エーテル （３） エタノール（１００ｍＬ）に２（５．００ｇ，１２．７７ｍｍｏｌ）を溶解さ せた攪拌溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０％，１．５０ｇ）およびギ酸アンモニウム（４ ．６０ｇ）を、室温で加えた。１．５時間後、濾過により触媒を除き、濾液を真 空下で濃縮乾固し、残渣をＥｔＯＡｃ：Ｈ₂Ｏの間で分配した。有機層を乾燥し （ＭｇＳＯ₄）、真空下で濃縮し、オイルとして３を得た。；収量：４．２４ｇ （９２％）；Ｖmax／cm^-1（フィルム）：３４３３，３３７８（ＮＨ₂），２９３ １，２８５７（ＣＨ₂，ａｓｙｍ．，ｓｙｍ．）：¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：１．００（ ９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），４．５７（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂），４．９８（２Ｈ，ｓ ｂ ｒｏａｄ，ＮＨ₂），６．５２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２５，Ｈ_arom3+5），６．９ ６（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6），７．４２−７．４６（５Ｈ，ｍ，Ｐｈ），７．６ ２−７．６５（５Ｈ，ｍ，Ｐｈ）；ＭＳ，（ＥＩ），（３６１．５６）；ｍ／ｚ ：３６１（Ｍ⁺，８），３０４ （Ｍ−ｔ-Ｂｕ，１００），１９９（Ｐｈ₂ＳｉＯＨ⁺，１００）；Ｃ₂₃Ｈ₂₇ＮＯ Ｓｉ。（４−イソシアネート−ベンジル）ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−フェニル−シリル エーテル（４） ３（０．６３ｇ，１．７０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．１６ｇ， ０．６０ｍｍｏｌ）をトルエン（１０ｍＬ）に溶解させた７０℃の攪拌溶液に、 トリホスゲン（０．１８ｇ，１．７ｍｍｏｌ）を加えた。５時間後、反応混合物 を濾過し、濾液をオイルになるまで真空下で蒸留した；収量：０．６５ｇ（９９ ％）これをさらに精製せずに用いた。；Ｖmax／cm^-1（フィルム）：２９３１， ２８５７（ＣＨ₂，ａｓｙｍ．，ｓｙｍ．），２２７５（ＮＣＯ）；¹Ｈ-ＮＭＲ ，ｄ_H：１．０３（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），４．７６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂），７． ２３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３８，Ｈ_arom3+5），７．３５（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6 ），７．３７−７．４８（５Ｈ，ｍ，Ｐｈ），７．６２−７．７１（５Ｈ，ｍ， Ｐｈ）；ＭＳ，（ＥＩ），（３８７．５５）；ｍ／ｚ：３３０（Ｍ−ｔ-Ｂｕ， ５２），２８６（Ｍ−ｔ-Ｂｕ，Ｍ−ｔ-Ｂｕ−ＮＣＯ，４８），１９９（Ｐｈ₂ ＳｉＯＨ⁺，１００）；Ｃ₂₄Ｈ₂₅ＮＯ₂Ｓｉ。Ｎ¹（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−フェニル−シリル−Ｏ −ベンジル）Ｎ³（ジ−ｔ−ブチル−グルタミル）ウレア（７） 方法 Ａ ： ＴＨＦ（７ｍＬ）中にジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタメートハイド ロクロリド（０．４６ｇ，１．５５ｍｍｏｌ）を溶解させた溶液に、トリエチル アミン（０．３１ｇ ３．１０ｍｍｏｌ）を加えた。イソシアネート，４，（０ ．６０ｇ，１．５５ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（３ｍＬ）溶液を、室温でグルタメ ートエステルに加えた。２時間後、反応混合物を濾過し、真空下で蒸発乾固した 。生成物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：シクロヘキサン ２：１） により精製し、オイル，７を得た；収量 ０．５３ｇ（５３％）。Ｖmax／ｃm^-1 （フィルム）：３３５９（ＮＨ），２９３２，２８５７（ＣＨ₂，ａｓｙｍ．， ｓｙｍ．），１７２９（Ｃ＝Ｏ，エステル），１６７０（Ｃ＝Ｏ，ウレア），１ １５４（Ｃ−Ｏ，ｓｔｒ．）；¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：１．０３（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ ），１．４０（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ−ｇｌｕ），１．４３（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ− ｇｌｕ），１．６８−２．００（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ ₂），２．１８ −２．３２（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ ₂ＣＯ₂−ｔ-Ｂｕ），４．０８−４．１２（１Ｈ ，ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ₂），４．６８（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂），６．３８（１Ｈ， ｄ，Ｊ ＝８．１２，ＮＨ−ｇｌｕ），７．１９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４１，Ｈ_arom3+5 ），７．３２−７．４７（７Ｈ，ｍ，Ｐｈ＋Ｈ_arom2+6），７．６２−７．７０ （５Ｈ，ｍ，Ｐｈ），８．５４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−Ｐｈ）；ＭＳ，（ＥＩ），（ ６４６．９０）；ｍ／ｚ：５４０（Ｍ−ｔ-Ｂｕ＋１，２），５３４（Ｍ−２ｔ −Ｂｕ＋２，５），４７８（Ｍ−３ｔ-Ｂｕ＋３，１００），１９９（Ｐｈ₂Ｓｉ ＯＨ⁺，１００）；Ｃ₃₇Ｈ₅₀Ｎ₂Ｏ₆Ｓｉ。方法 Ｂ ：（化合物７のワンポット合成） −７８℃のジ−ｔｅｒｔ−ブチル− グルタメート ハイドロクロリド（４．１４ｇ，１４．０ｍｍｏｌ）およびトリ ホスゲン（１．３９ｇ，４．６７ｍｍｏｌ）のトルエン溶液へ、トリエチルアミ ン（２．８３ｇ，２８．０ｍｍｏｌ）のトルエン（１０ｍＬ）溶液を３０分を要 して滴下した。反応を室温まで温めた。５０分後、（４−アミノ−ベンジル）ｔ ｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シリル エーテル，３（５．００ｇ，１３．８ｍ ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．９５ｍＬ，１４．０ｍｍｏｌ）を含む溶 液を、５−１０分を要して加えた。２０時間後、反応混合物を濾過し、Ｈ₂Ｏ（ ２００ｍＬ）、ａｑ ＨＣｌ（１％，２００ｍＬ）、ａｑ Ｎａ₂ＣＯ₃（１％， ２００ｍＬ）、Ｈ₂Ｏ（２×２００ｍＬ）で順次洗浄し、乾燥 し（Ｍｇ₂ＳＯ₄）、真空下でオイルにまで蒸発させた；収量：９．９０ｇ。この 生成物をさらに精製することなく脱保護した。Ｎ¹（４−ヒドロキシベンジル）Ｎ³（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル）ウレ ア（８） 方法Ａから− ７（０．５３ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶 液へ、室温でテトラ−ブチルアンモニウム フルオリド（２．５ｍＬ，２．５ｍ ｍｏｌ １Ｍ溶液）のＴＨＦ溶液を加えた。３時間後、反応混合物を真空下で蒸 発乾固した。生成物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解し、Ｈ₂Ｏ（２×１０ｍＬ ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、オイルにまで蒸発させた；収量：０．４０ ｇ。 脱保護された化合物，８（０．３８ｇ）をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯ Ａｃ：シクロヘキサン ３：１）を用いて精製すると、放置により結晶化するオ イルになった；収量０．０９３ｇ（２９．％）。Ｖmax／cm^-1（フィルム）：３ ３７０（ｂｒｏａｄ ＮＨ＋ＯＨ），２９６７（ＣＨ₃），２９３０，２８５７ （ＣＨ₂，ａｓｙｍ．，ｓｙｍ．），１７１６（Ｃ＝Ｏ，エステル），１６７８ （Ｃ＝Ｏ，ウレア），１１５３（Ｃ−Ｏ，ｓｔｒ．）；¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：１． ４０（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），１． ４２（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），１．７２−２．００（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ ₂ ），２．２０−２．３１（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ ₂ＣＯ₂−ｔ-Ｂｕ），４．１０ −４．１８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ₂），４．３９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５． ３６，ＣＨ₂），４．９９（１Ｈ，ｔ，ＣＨ₂ＯＨ），６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝ ８．１１，ＮＨ−ｇｌｕ），７．１６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３５，Ｈ_arom3+5） ，７．３１（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6），８．５０（１Ｈ，Ｓ，ＮＨ−Ｐｈ）；Ｍ Ｓ，（ＥＩ），（４０８．９４）；ｍ／ｚ：４０８（Ｍ⁺，１０），３５２（Ｍ −ｔ-Ｂｕ＋１，４），２９６（Ｍ−２ｔ-Ｂｕ＋２，１４）；Ｃ₂₁Ｈ₃₂Ｎ₂Ｏ₆。 方法Ｂから− ワンポット操作で８が生成し、該生成物をカラムクロマトグラ フィーを用いて精製した；収量２．５７ｇ（３段階で４６％）。ａｑ ＭｅＯＨ （６０％）から再結晶した。（４−クロロホルミル−ベンジリデン）マロノニトリル（１０） ４−クロロホルミル−ベンジリデンマロノニトリル，９のナトリウム塩（０． ３４ｇ，２．０ｍｍｏｌ）をａｑ ＮａＯＨ（１０ｍＬ，０．１０ｇ，２．５ｍ ｍｏｌ）中で製造した。この溶液に、相間移動触媒、テトラ−ブ チルアンモニウム硫酸水素塩（０．０７０ｇ，０．２ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（ ８ｍＬ）溶液を、激しい攪拌下で加えた。これに、室温でホスゲン（２０％，０ ．４０ｇ，４．０ｍｍｏｌ）のトルエン溶液を加えた。３０分後、有機層を分離 し、Ｈ₂Ｏで洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ₄)、真空下で固体にまで蒸発させた；収量 ：０．３９ｇ（８４％）。Ｖmax／cm_-1（フィルム）：２２３０（ＣＮ），１７ ８４（Ｃ＝Ｏ，クロロホルメート（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔｅ）），１１９９ ，１１６６（Ｃ−Ｏ，ｓｔｒ．）；¹Ｈ-ＮＭＲ，（ＣＤＣｌ₃），ｄ_H：７．５０ （２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８１，Ｈ_arom3+5），７，７９（１Ｈ，ｓ，Ｈ_vinyl），８ ．０２（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6）；ＭＳ，（ＥＩ），（２３２．６３）；ｍ／ｚ ：２３２（Ｍ⁺，１００）；Ｃ₁₁Ｈ₅Ｎ₂Ｏ₂Ｃｌ。Ｎ¹［（４−ベンジリデン−マロノニトリル−オキシ−カルボニル）−４−オキ シベンジル）］Ｎ³（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル）ウレア（１１） １０（１．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させた溶液に、 Ｎ¹（４−ヒドロキシベンジル）Ｎ³（ジ−ｔ−ブチル−グルタミル）ウレア，８ （０．４１ｇ，１．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１２．５ｍＬ）溶液およびトリ エチルアミン（０．２５ｍＬ，１．６５ｍ ｍｏｌ）を、窒素気流下、室温で加えた。２２時間後、反応混合物を、体積５ｍ Ｌにまで蒸発させ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解させ、Ｈ₂Ｏ（２×２０ｍＬ ）、ａｑ ＮａＯＨ（１％、２０ｍＬ）、Ｈ₂Ｏ（２×２０ｍＬ）で順次洗浄し、 乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、オイルにまで真空下で蒸発させ、これをカラムクロマト グラフィー（ＥｔＯＡｃ：シクロヘキサン ３：１）により精製すると固体が得 られた；収量０．２８ｇ（６５％）（０．１２ｇの出発物質８が回収された）。 Ｖmax／cm^ー1（フィルム）：３３６９（ＮＨ），２９２４，２８５７（ＣＨ₂，ａ ｓｙｍ．，ｓｙｍ．），１７６５（Ｃ＝Ｏ，カーボネート），１７２８（Ｃ＝Ｏ ，エステル），１６５８（Ｃ＝Ｏ，ウレア），１２１６，１１５３（Ｃ−Ｏ，ｓ ｔｒ．）；¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：１．４０（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），１．４３（９Ｈ ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），１．８０−２．００（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ ₂），２ ．２２−２．３５（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ ₂ＣＯ₂−ｔ-Ｂｕ），４．１０−４．２０ （１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ₂），５．２１（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂），６．４６（ １Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１０，ＮＨ−ｇｌｕ），７．３３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４８ ，Ｈ_arom3+5−ｃｍｐｄ ８），７．４２（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6−ｃｍｐｄ ８） ，７．５３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６７，Ｈ_{aro m3+5} −ｃｍｐｄ ９），８．０２（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6−ｃｍｐｄ ９），８． ５４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−Ｐｈ），８．６８（１ｈ，ｓ，Ｈ_vinyl）；ＭＳ，（６ ０４．５９）；ｍ／ｚ：３９１（Ｍ−１６９−ＣＯ₂，２），２７９（Ｍ−１６ ９−ＣＯ₂−２ｔ-Ｂｕ＋２，３０）（１６９＝ｃｍｐｄ ９−１）；Ｃ₃₂Ｈ₃₆Ｎ₄ Ｏ₈。Ｎ¹［（４−ベンジリデン−マロノニトリル−オキシ−カルボニル）−４−オキ シベンジル）］Ｎ³グルタミル ウレア（１２） 化合物１１（０．０５ｇ，０．０８ｍｍｏｌ）を、４℃、窒素気流下において ギ酸（９５％，６．０ｍＬ）に溶解させた。２２時間後、溶媒を、真空下（ポン プ（ｐｕｍｐ））で蒸発させて、固体を得た；収量：０．０３７ｇ（９１％）。 Ｖmax／cm^ー1（フィルム）：３３７０（ｖ．ｂｒｏａｄ，ＮＨ＋ＯＨ），２９３ ０，２８５７（ＣＨ₂，ａｓｙｍ．，ｓｙｍ．），１７１９（Ｃ＝Ｏ，エステル ），１６８１（Ｃ＝Ｏ，ウレア），１２２１，１１７６（Ｃ−Ｏ，ｓｔｒ．）；¹ Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：１．８０−２．１０（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ ₂），２ ．２０−２．３５（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ ₂ＣＯ₂Ｈ），４．２０−４．３０（１Ｈ， ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ₂），５．０７（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂），６．４７（１Ｈ，ｄ ，Ｊ＝７． ８６，ＮＨ−ｇｌｕ），６．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７６，Ｈ_arom3+5−ｃｍ ｐｄ ９），７．２５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３９，Ｈ_arom3+5−ｃｍｐｄ ８）， ７．３９（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6−ｃｍｐｄ ８），７．８９（２Ｈ，ｄ，Ｈ_{arom 2+6} −ｃｍｐｄ ９），８．２９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−Ｐｈ），８．６９（１ｈ，ｓ ，Ｈ_vinyl）；ＭＳ，（４９２．４４）；ｍ／ｚ：３２３（Ｍ−１６９，１８） ，２７７（Ｍ−１６９−ＣＯ₂，１８）（１６９＝ｃｍｐｄ ９−１）；Ｃ₂₄Ｈ₂₀ Ｎ₄Ｏ₈。実施例２ 概要 酵素ニトロレダクターゼにより活性化されるであろう２つのチルホスチンプロ ドラッグを、デザインした。これらは、４（４−ニトロ−フェニル−オキシ−カ ルボニル）オキシ−ベンジリデン−マロノニトリル，１５ａ，および３，４−ジ （４−ニトロ−フェニル−オキシ−カルボニル）オキシ−ベンジリデン−マロノ ニトリル，１５ｂ，である（スキーム２参照）。これらの合成のため、４−ヒド ロキシ−ベンジリデン−マロノニトリル，１３ａ，および３，４−ジヒドロキシ −ベンジリデン−マロノニトリル，１３ｂを、４−ニトロベンジル−クロロホル メート １４，とカップリングし、目的とするプロドラ ッグである１５ａおよび１５ｂにそれぞれ導いた。 実験４（４−ニトロ−フェニル−オキシ−カルボニル）オキシ−ベンジリデン−マロ ノニトリル（１５ａ） ４−ヒドロキシ−ベンジリデン−マロノニトリル，１３ａ（０．５０ｇ，２． ９３ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解させた溶液に、４−ニトロベン ジル−クロロホルメート，１４（０．６３ｇ，２．９２ｍｍｏｌ）およびトリエ チルアミン（０．３０ｇ，３．０ｍｍｏｌ）を４℃の初期温度で加えた。２．５ 時間後、反応混合物を濾過し、濾液を真空下で蒸発乾固した。こうして得られた 残渣を、ＥｔＯＡｃ：Ｈ₂Ｏ（１：１，２５ｍＬ）で分配し、有機層を、ａｑ Ｎ ａＯＨ（２％，２５ｍＬ）、ａｑ ＨＣｌ（２％，２５ｍＬ）およびＨ₂Ｏ（２× ２５ｍＬ）で順次洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、真空下で固体にまで蒸発させ た；収量：０．５５ｇ（５４．％）。エタノールから再結晶させた。Ｖmax／cm^{- 1} （フィルム）：２２３０（ＣＮ），１７６７（Ｃ＝Ｏ，カーボネート），１５ ２２，１３４９（ＮＯ₂），１２２１（Ｃ−Ｏ，ｓｔｒ．）；¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H： ５．４６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂），７．５５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７７，Ｈ_arom3+5 ），７．７３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７０， Ｈ_arom2+6−ＰｈＮＯ₂），８．０３（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6），８．２７（２Ｈ ，ｄ，Ｈ_arom3+5−ＰｈＮＯ₂），８．５５（１Ｈ，ｓ，Ｈ_vinyl）；ＭＳ，（Ｅ Ｉ），（３４９．３０）；ｍ／ｚ：３４９（Ｍ⁺，３），３０５（Ｍ−ＣＯ₂，６ ０）；Ｃ₁₈Ｈ₁₁Ｎ₃Ｏ₅。３，４−ジ（４−ニトロ−フェニル−オキシ−カルボニル）オキシ−ベンジリデ ン−マロノニトリル（１５ｂ） 同様な操作を、３，４−ジ−ヒドロキシ−ベンジリデン−マロノニトリル，１３ ｂ（０．５０ｇ，２．７０ｍｍｏｌ）について行い、固体を得た；収量：０．８ ６ｇ，（５９．％）。エタノールから再結晶させた。Ｖmax／ｃm^ー1（フィルム） ：２２３２（ＣＮ），１７７６（Ｃ＝Ｏ，カーボネート），１５２３，１３５０ （ＮＯ₂），１２４７（Ｃ−Ｏ，ｓｔｒ．）；¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：５．４４（４Ｈ ，ｓ，ＣＨ₂），７．６６（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６５，Ｈ_arom2+6−２ＰｈＮＯ₂ ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４０，Ｈ_arom5），７．９９（１Ｈ，ｑ，Ｈ_{a rom6} ），８．０１（１Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2），８．１８（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom3+5−Ｐ ｈＮＯ₂’），８．１９（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom3+5−ＰｈＮＯ₂’’），８．５６（ １Ｈ，ｓ，Ｈ_vinyl）。実施例３ 概要および実験 Ｏ（４−ヒドロキシベンジル）Ｎ（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル）カル バメート，２０（スキーム３参照）、即ちもう一つの自己破壊性（self-immolat ive）のリンカーを調製した。化合物１６、即ち４−ヒドロキシ−ベンズアルデ ヒドを、室温にて、ＢＦ₃.Ｅｔ₂Ｏの存在下、ジクロロメタン中で１，３−プロ パン−ジチオールで保護し、４（１’，３’−ジチアニル）フェノール（4(1',3 '-dithianyl)phenol），１７を良好な収率で得た。Ｅｔ₃Ｎの存在下、トルエン 中で、１７とジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル イソシアネート，６，とをカ ップリングさせることにより、Ｏ［４（１’，３’−ジチアニル）−フェニル］ Ｎ（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル）カルバメート（0[4(1',3'-dithianyl) -phenyl]N(di-tert-butyl-glutamyl)carbamate），１８が得られた。カルバメー ト，１８，から対応するアルデヒド，１９，への脱保護を、室温にて、ＴＨＦ中 でＨｇ（ＣｌＯ₄）₂を用いて行った。１９の還元により、目的のＯ（４−ベンジ ル−オキシ）Ｎ（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル）カルバメート，２０が生 成した。これを、実施例１中に記載されたように１０のチルホスチンとカップリ ングさせ、エステル保護基を除く。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 35/76 7431−4Ｃ Ａ６１Ｋ 35/76 38/00 8314−4Ｃ 48/00 38/46 9152−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 9/99 48/00 9455−4Ｃ Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｎ 9/99 9455−4Ｃ 37/54 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＨＵ，ＪＰ，Ｋ Ｒ，ＮＺ，ＵＳ (72)発明者 マライス リチャード イギリス国 エスダブリュ３ ６ジェイビ ー ロンドン フルハム ロード 237 ザ インスティテュート オブ キャンサ ー リサーチ チェスター ビーティ ラ ボラトリーズ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 少なくとも１個の保護基と連結したタンパク質チロシンキナーゼインヒビ ター（ＰＴＫｉ）のプロドラッグを含む化合物であって、該保護基は該化合物か ら開裂されタンパク質チロシンキナーゼインヒビターを放出することができる化 合物または該プロドラッグの生理学的に許容される誘導体。 ２． 前記ＰＴＫｉがチルホスチン、フラボノイド、エルブスタチン(erbstatin )、ベンゾキノイド(benzoquinoid)アンサマイシン抗生物質、ペプチドもしくは その類似体、またはヌクレオチドもしくはその類似体である請求項１に記載の化 合物。 ３． チルホスチンが式（Ｉ）で示される請求項２に記載の化合物 式中、Ｘは、炭素、窒素または基Ｎ→Ｏを示し、 ｎは１〜３の整数であり； 基Ｒ¹のそれぞれは、同一または異なるものであって良く、水素、ヒドロキシ、 メルカプト、カルボキシ、ホルミル、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_1-4 アルコキシ、Ｃ_1-4アルキルチオ、カルボキシＣ_1-4アルキル、カルボキシＣ_2-4 アルケニル、Ｃ_1-4アルキルスルホキシ、ハロ（即ち、フルオロ、クロロ、ブロ モまたはヨード）、ニトロ、アミノ、Ｃ_1-4アルキルアミノ、またはＣ_1-4ジアル キルアミノであり、あるいはｎが２または３のとき、２つのＲ¹基は、共にメチ レンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成しても良い； Ｒ²は、水素、ヒドロキシ、Ｃ_1-4アルキル或いは基Ｒ¹（１個または複数）が結 合している(attached)環の２位と共に５または６員の脂肪族または複素環式の環 を形成し、該５または６員環は、必要に応じてケトン基を含み；および Ｒ³はシアノ、カルボキシ、カルバモイル、チオカルバモイル、基Ｃ（Ｏ）ＨＮ ＣＨ₂ＣＮ、 基Ｃ（ＮＨ₂）＝Ｃ（ＣＮ）₂、 アルファケト基Ｃ（Ｏ）Ｒ⁴［式中、Ｒ⁴は、３，４−ジヒドロキシフェニルまた は２−チオフェニルである］またはアルファアミド基Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ⁵［式中、 Ｒ⁵は、ベンジル、フェニルまたは２，４−ジメトキシフェニル である］である； 但し、基Ｒ¹およびＲ²の少なくとも１つがメルカプト、ヒドロキシまたはアミノ である。 ４． 式（II）を有する請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物： 式中、Ｘは同一または異なってＮＨ、ＯまたはＳであり、ｍは１〜５の整数であ り、Ｐｈは、ｍが２〜５のとき同一または異なって必要に応じて置換されたフェ ニレン環であり、ＰＴＫは、ＰＴＫ−（ＸＨ）_mがｍ個の−ＸＨ基を含むＰＴＫ ｉであるような基であり、ニトロ基はＰｈ環に対して２位または４位にある。 ５． 式（III）を有する請求項４に記載の化合物： 式中、ｍは１〜５の整数であり、Ｐｈは、ｍが２から５であるとき同一または異 なって必要に応じて置換されたフェニレン環であり、ＰＴＫは、ＰＴＫ−（ＯＨ ）_mがｍ個のヒドロキシル基を含むＰＴＫｉ化合物であり、ニトロ基はＰｈ環に 対して２位または４位にある。 ６． 式（Ｖ）で示される請求項１〜３のいずれか１つ に記載の化合物： 式中、Ｘは同一または異なってＮＨ、ＯまたはＳであり、ｍは１〜５の整数であ り、ＰＴＫはＰＴＫ−（ＸＨ）_mがｍ個の−ＸＨ基を含むＰＴＫｉ化合物である ようなＰＴＫｉ化合物の残基であり、Ｐｈはｍが２〜５であるとき同一または異 なって必要に応じて置換されたフェニル基であり、Ｚは−Ｏ．ＣＯ−または−Ｎ Ｈ．ＣＯ−であり、ｇｌｕは下記式： で示されるグルタミン酸の残基またはそれらのジ−Ｃ_1-6アルキルエステル（例 えば、エチルまたはｔ−ブチルエステル）である。 ７． 式（VI）で示される請求項６に記載の化合物： 式中、ｍは１〜５の整数であり、ＰＴＫはＰＴＫ−（ＯＨ）_mがｍ個のヒドロキ シ基を含むＰＴＫｉであるようなＰＴＫｉ化合物の残基であり、Ｐｈはｍが２〜 ５であるとき同一または異なって必要に応じて置換 されたフェニル基であり、Ｚは−Ｏ．ＣＯ−または−ＮＨ．ＣＯ−であり、ｇｌ ｕは下記式： で示されるグルタミン酸の残基またはそれらのジ−Ｃ_1-6アルキルエステル（例 えば、エチルまたはｔ−ブチルエステル）である。 ８． 式（VII）で示される化合物： 式中、Ｐｈは必要に応じて置換されたフェニル基であり、ｇｌｕは下記式： で示されるグルタミン酸の残基またはそれらのジ−Ｃ_1-6アルキルエステルであ り、および必要に応じて置換されたフェニレン基はヒドロキシメチル基に対して ｇｌｕを含む部分(moiety)により４位で置換されている。 ９． 式（VIII）で示される化合物： 式中、Ｐｈは必要に応じて置換されたフェニル基であり、 ｇｌｕは下記式： で示されるグルタミン酸の残基またはそれらのジ−Ｃ_1-6アルキルエステルであ り、および必要に応じて置換されたフェニレン基はヒドロキシメチル基に対して ｇｌｕを含む部分(moiety)により４位で置換されている。 １０． 前記フェニレン環（Ｐｈ）がフッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ 、メルカプト、アミノ、ニトロ、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4ハロアルキル、Ｃ_1-4ア ルコキシ、Ｃ_1-4ハロアルコキシ、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_2-4アルキニル、および Ｃ_2-4ハロアルケニルから選択される同一または異なっても良い１〜４個の基で 置換されている請求項４〜９のいずれか１つに記載の化合物。 １１． 前記環が１個以上の２−、３−、５−および／または６−位でフッ素に より置換されている請求項１０に記載の化合物。 １２． Ｎ¹［（４−ベンジリデン−マロノニトリル−オキシ−カルボニル）− ４−オキシベンジル］Ｎ³（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル）ウレア； Ｎ¹［（４−ベンジリデン−マロノニトリル−オキシ−カルボニル）−４−オキ シベンジル）］Ｎ³グルタミル ウ レア； ４（４−ニトロ−フェニル−オキシ−カルボニル）オキシ−ベンジリデン−マロ ノニトリル；および ３，４−ジ（４−ニトロ−フェニル−オキシ−カルボニル）オキシ−ベンジリデ ン−マロノニトリル； またはそれらの塩もしくはエステル。 １３． Ｎ¹（４−ヒドロキシベンジル）Ｎ³（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミ ル）ウレア；およびＯ（４−ベンジルオキシ）Ｎ（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グル タミル）カルバメートからなる群から選択される化合物。 １４． 請求項１〜１３のいずれか１つに記載の化合物を１種以上の薬学的に許 容される担体または希釈剤と共に含む組成物。 １５． （ｉ）腫瘍関連抗原と結合し得る標的化物質と複合体化した、請求項１ 〜７または１２のいずれか１つに記載の化合物を活性な薬剤に転換し得る酵素； および （ｉｉ）請求項１〜９または１４のいずれか１つに記載の化合物 を含むヒトまたは動物の被験体における新形成のコントロールに使用されるシ ステム。 １６． （ｉ）被験体中の腫瘍細胞に選択的に感染し得る修飾されたウィルス、 該ウィルスは酵素をコードする ＤＮＡまたはＲＮＡ配列を含む；および （ｉｉ）該酵素の作用により活性な薬剤に転換され得る請求項１〜７または１２ のいずれか１つに記載の化合物、 を含むヒトまたは動物の被験体における新形成のコントロールに使用されるシ ステム。 １７． 前記酵素が細菌のニトロレダクターゼまたはカルボキシペプチダーゼで ある請求項１５または１６に記載のシステム。 １８． １個以上の保護基と連結した活性な薬剤のプロドラッグを含む化合物で あって、該基は該化合物から開裂されて活性な薬剤を放出することができ、ここ で活性な薬剤は少なくとも１種の遊離のアミノ、ヒドロキシルまたはメルカプト 基を有し、およびそれぞれの保護基は： （ｉ）下記式： 式中、Ｐｈは同一または異なっても良い必要に応じて置換されたフェニル基であ り、ｇｌｕは下記式： で示されるグルタミン酸の残基またはそのジ−Ｃ_1-6アル キルエステルであり、必要に応じて置換されたフェニレン基はオキシカルボニル 基に対してｇｌｕを含む部分(moiety)により４位で置換されている；または 下記式（ｉｉ）： 式中、Ｐｈおよびｇｌｕは上記のように定義され、必要に応じて置換されたフェ ニレン基はオキシカルボニル基に対してｇｌｕを含む部分(moiety)により４位で 置換されている で示されるプロドラッグ；あるいは該プロドラッグの生理学的に許容される誘 導体を含む化合物。 １９． 式ＰＴＫｉ−（ＰＲＴ）_mで示される化合物の製造方法であって、ＰＴ Ｋｉは式（Ｉ）のチルホスチンであり： 式中、Ｘは、炭素、窒素または基Ｎ→Ｏを示し、 ｎは１〜３の整数であり； 基Ｒ¹のそれぞれは、同一または異なるものであって良く、水素、ヒドロキシ、 メルカプト、カルボキシ、ホルミル、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_1-4 アルコキシ、Ｃ_1-4アルキルチオ、カルボキシＣ_1-4アルキル、カルボキシＣ_2-4 アルケニル、Ｃ_1-4アルキルスルホキシ、ハロ（即ち、フルオロ、クロロ、ブロ モまたはヨード）、ニトロ、アミノ、Ｃ_1-4アルキルアミノ、またはＣ_1-4ジアル キルアミノであり、あるいはｎが２または３のとき、２つのＲ¹基は、共にメチ レンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成しても良い： Ｒ²は、水素、ヒドロキシ、Ｃ_1-4アルキル或いは基Ｒ¹（１個または複数）が結 合している(attached)環の２位と共に５または６員の脂肪族または複素環式の環 を形成し、該５または６員環は、必要に応じてケトン基を含み；および Ｒ³はシアノ、カルボキシ、カルバモイル、チオカルバモイル、基Ｃ（Ｏ）ＨＮ ＣＨ₂ＣＮ、 基Ｃ（ＮＨ₂）＝Ｃ（ＣＮ）₂、 アルファケト基Ｃ（Ｏ）Ｒ⁴［式中、Ｒ⁴は、３，４−ジヒドロキシフェニルまた は２−チオフェニルである］またはアルファアミド基Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ⁵［式中、 Ｒ⁵は、ベンジル、フェニルまたは２，４−ジメトキシフェニル である］である 但し、基Ｒ¹およびＲ²の少なくとも１つがメルカプト、ヒドロキシまたはアミノ である； ｍは１〜５の整数であり； およびＰＲＴは、ｍが２〜５の整数であるとき同一または異なって良く酵素の作 用によりチルホスチンから開裂され得る保護基であり； ここでチルホスチンは少なくとも１個のメルカプト、ヒドロキシまたはアミノ基 を介して該基ＰＲＴに連結されており； 該方法は、該保護基またはその前駆体を式ＰＴＫｉ−（ＰＲＴ）_mの化合物を製 造する条件下で式（Ｉ）のチルホスチンと反応させることを包含する。 ２０． 前記保護基が以下のものである請求項１９に記載の方法： （ｉ）下記式： 式中、Ｐｈは必要に応じて置換されたフェニル基であり、ｇｌｕは下記式： で示されるグルタミン酸の残基またはそれらのジ−Ｃ_1-6アルキルエステルであ り、および必要に応じて置換されたフェニレン基はオキシカルボニル基に対して ｇｌｕを含む部分(moiety)により４位で置換されている；または （ｉｉ）下記式： 式中、Ｐｈおよびｇｌｕは上記のように定義され、必要に応じて置換されたフェ ニレン基はオキシカルボニル基に対してｇｌｕを含む部分(moiety)により４位で 置換されている。 ２１． 前記製造された化合物が請求項１〜７または１２のいずれか１つに記載 のものである請求項２０に記載の方法。