JPH09311132A

JPH09311132A - ＩｇＡ腎症の診断法

Info

Publication number: JPH09311132A
Application number: JP14971096A
Authority: JP
Inventors: Takayuki Hiki; 能之比企; Atsushi Tanaka; 淳志田中; Joji Nishikido; 條二錦戸
Original assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1996-05-22
Filing date: 1996-05-22
Publication date: 1997-12-02

Abstract

(57)【要約】【解決手段】ヒト血清の又はそれから分離したＩ
ｇＡ１の、ＩｇＡ１分子間の結合能の差を検出する、Ｉ
ｇＡ腎症の診断法。ヒト血清から分離調製した標識
ＩｇＡ１を用いること。ＩｇＡ１分子のヒンジ部を
介したＩｇＡ１分子間の結合能の差を検出すること。【効果】受診者に与える精神的苦痛、腎周囲出血等の
危険性および経済的負担が少ない、ＩｇＡ腎症の迅速・
簡便な新規な診断法を提供するものである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ＩｇＡ腎症の新規
な診断法に関するものである。より詳細に、本発明は、
ヒト血清ＩｇＡ１分子間の結合能の差を検出することに
基づいて、受診者に与える精神的苦痛、腎周囲出血等の
危険性および経済的負担が少ない、ＩｇＡ腎症の迅速・
簡便な新規な診断法を提供するものである。

【０００２】

【従来の技術】ＩｇＡ（イムノグロブリンＡ）腎症は、
１９６８年Ｂｅｒｇｅｒらにより提唱された疾患概念
で、臨床的には持続的蛋白尿、血尿以外に臨床症状に乏
しく、組織学的には糸球体メサンギウム領域にＩｇＡを
主体とする沈着物が認められる原発性糸球体腎炎であ
る。わが国でのＩｇＡ腎症の頻度は高く、慢性腎炎の約
３０％を占める。近年その長期予後は必ずしも良好では
なく、１０年の経過で１０〜１５％、２０年の経過で約
３０％の患者が末期腎不全に陥ることが明らかになって
きた。このため、ＩｇＡ腎症は末期腎不全に至る原因疾
患として特に注目されてきている。

【０００３】現在のところ、ＩｇＡ腎症の診断法として
は、腎生検による方法しかない。この診断法は、受診者
に大きな精神的苦痛を与える他、検査後に腎周囲出血等
が起こる危険性がある。さらに、腎生検検査後は２４時
間以上の絶対安静が必要で、受診者に数日間の入院を強
いることになり、受診者の経済的負担も大きいのが現状
である。また、この診断法には多くの設備が必要で、診
断に長時間要するという欠点がある。従って、より簡便
な操作で、短時間に実施できるＩｇＡ腎症の診断法が望
まれている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、Ｉｇ
Ａ腎症の診断法として、これまで必須とされてきた腎生
検によらない、より簡便な診断法を提供することにあ
る。

【０００５】

【課題を解決するための手段】図１は、ＩｇＡ１分子の
構造の概略を示す模式図である。ＩｇＡ腎症の成因に関
与すると考えられるＩｇＡとは免疫グロブリンの一種で
ある。このＩｇＡ分子は、２本の重鎖と２本の軽鎖から
成り、重鎖構造の違いからＩｇＡ１とＩｇＡ２の２つの
サブタイプに分類される。Ｂａｅｎｚｉｇｅｒらは、図
１に示されるように、このＩｇＡ１分子のヒンジ部と呼
ばれる領域に、５本のＯ結合型糖鎖（１本がＮ−アセチ
ルガラクトサミンで、他の４本が２−アセトアミド−２
−デオキシ−３−Ｏ−β−ガラクトピラノシル−ガラク
トピラノース）が結合していると報告している（ジャー
ナルオブバイオロジカルケミストリー、第２４９巻、７
２７０−７２８１ページ、１９７４年）。これに対し
て、ＩｇＡ２分子のヒンジ部にはＯ結合型糖鎖は結合し
ていない。

【０００６】ＩｇＡ腎症において、糸球体内に沈着する
ＩｇＡはＩｇＡ１サブタイプが主体であることから考え
て、ＩｇＡ腎症患者と健常者等の非ＩｇＡ腎症患者の血
清ＩｇＡ１の性質に差があることを想定し、本発明者ら
は種々検討した。その結果、ＩｇＡ腎症患者の血清Ｉｇ
Ａ１は、健常者等の非ＩｇＡ腎症患者の血清ＩｇＡ１よ
りも、ＩｇＡ１分子間の結合能が有意に増加しているこ
とを見出し、この知見はＩｇＡ腎症の診断に利用するこ
とが可能であると考え、本発明を完成するに達した。

【０００７】即ち、被検者の血清、望ましくは血清から
分離したＩｇＡ１について、ＩｇＡ１分子間の結合能を
測定することにより、ＩｇＡ腎症の迅速な診断が可能で
ある。即ち、本発明は：ヒト血清ＩｇＡ１の、ＩｇＡ１分子間の結合能の差
を検出する、ＩｇＡ腎症の診断法を提供する。また、ヒト血清から分離したＩｇＡ１の、ＩｇＡ１分子間
の結合能の差を検出する、ＩｇＡ腎症の診断法を提供す
る。また、ヒト血清から分離調製した標識ＩｇＡ１を用いた、
ＩｇＡ１分子間の結合能の差を検出する、ＩｇＡ腎症の
診断法を提供する。また、ＩｇＡ１分子のヒンジ部を介したＩｇＡ１分子間の
結合能の差を検出する点にも特徴を有する。

【０００８】以下、本発明を詳細に説明する。本発明に
おいて、ＩｇＡ１分子間の結合能を調べる時に、被験者
の血清をそのまま用いることもできるが、結合能を精度
良く調べるには、血清からＩｇＡ１を分離することが望
ましい。血清からＩｇＡ１を分離する方法としては、レ
クチンの１種であるジャカリンを用いる方法、抗ヒトＩ
ｇＡ１を用いる方法等が知られている。

【０００９】本発明において、ＩｇＡ１ヒンジ部は、Ｉ
ｇＡ１重鎖のどこからどこまでのアミノ酸配列部分であ
ると明確には定義されない。図１に示されるように、Ｉ
ｇＡ１ヒンジ部とは、ＩｇＡ１分子を構成する重鎖中
で、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間にある領域
を指す。この領域は、重鎖間のジスルフィド結合部分を
含み、プロリン含量が高い。なお、前述のようにＢａｅ
ｎｚｉｇｅｒらは、このＩｇＡ１ヒンジ部にはＯ結合型
糖鎖が結合しているとを報告している。このＩｇＡ１ヒ
ンジ部の５ケ所のセリン残基にはＯ結合型糖鎖が結合し
ており、その糖鎖構造は、１ケ所がＮ−アセチルグルコ
サミンで、他の４ケ所が２−アセトアミド−２−デオキ
シ−３−Ｏ−β−ガラクトピラノシル−ガラクトピラノ
ースであると報告している（ジャーナル・オブ・バイオ
ロジカルケミストリー、第２４９巻、７２７０〜７２８
１頁、１９７４年）。

【００１０】本発明において、ＩｇＡ１分子を標識する
ことが、より高感度にＩｇＡ１分子間の結合能を調べる
のに望ましい。例えば、ＥＬＩＳＡ法を用いてＩｇＡ１
分子間の結合能を調べる場合に、ビオチン、パーオキシ
ダーゼ、アルカリフォスターゼ等による標識が好まし
く、また蛍光偏向法を用いる場合に、フルオレセイン等
による標識が一般的に用いられる。

【００１１】更に、本発明において、ＩｇＡ１分子間の
結合能の差は、非ＩｇＡ腎症患者の血清ＩｇＡ１分子間
の結合能を基準とすると、ＩｇＡ腎症患者の血清ＩｇＡ
１分子間の結合能は高い値を示す。被験者の血清ＩｇＡ
１分子間の結合能を調べ、非ＩｇＡ腎症患者群の血清Ｉ
ｇＡ１分子間の結合能（基準値）と比較し、この結合能
の差〔＝被験者の血清ＩｇＡ１分子間の結合能の値−非
ＩｇＡ腎症患者の血清ＩｇＡ１分子間の結合能の値（基
準値）〕に統計上有意義な差があれば陽性（ＩｇＡ１腎
症）と判定し、また統計上有意義な差がなければ（殆ど
０に近い）陰性（ＩｇＡ１腎症でない）と判定する。

【００１２】次に、本発明においるＩｇＡ１分子間の結
合能を測定する手段としては、一般的に広く用いられて
いる酵素免疫測定（ＥＬＩＳＡ）法の他、蛍光偏向法、
表面プラズモン共鳴法等を利用することができる。１）ＥＬＩＳＡ法を用いた場合の概略はつぎのようであ
る。Ｒｏｑｕｅ−Ｂａｒｒｅｉｒａらのジャカリンを用
いる方法（ジャーナルオブイムノロジー、第１３４、１
７４０−１７４３ページ、１９８５年）で血清からＩｇ
Ａ１を分離し、これをプラスチック製の９６穴のマイク
ロタイタープレートにコーティング（固定化）する。

【００１３】適当な緩衝液で洗浄した後、結合能を高感
度に検出するのに一般的に用いられているビオチン標識
処理を行った血清、望ましくは血清から分離したＩｇＡ
１をビオチン標識したものを、ＩｇＡ１をコーティング
したマイクロタイタープレートに加え反応させる。適当
な緩衝液で洗浄した後、結合したビオチン標識ＩｇＡ１
のビオチンと特異的に結合する蛋白質のアビジンと酵素
である西洋ワサビペルオキシダーゼとの複合体を添加す
る。これに西洋ペルオキシダーゼによる反応を利用して
発色を生じさせるための発色剤を加え反応し、４９０ｎ
ｍの吸光度を測定する。この吸光度の値は、ＩｇＡ１分
子間の結合能が強い程、高い値となる。

【００１４】例えば、非ＩｇＡ腎症患者群２０例の吸光
度の平均値＋２×標準偏差値を越える場合を陽性、越え
ない場合を陰性とする判定基準を用いて、被検者の吸光
度の値からＩｇＡ腎症かどうかの診断を行うことが可能
である。ＥＬＩＳＡ法に限らず、上記のようにＩｇＡ１
分子間の結合能が測定できる方法は、すべてこの診断法
に用いることが可能である。

【００１５】２）蛍光偏向法とは、蛍光標識した分子に
別の分子が結合し分子の大きさが変化すると蛍光偏向度
の値が変化することを測定原理とする方法である。これ
によると、ＩｇＡ１分子間の結合能が測定できるのであ
り、この診断法に用いることができる。３）表面プラズモン共鳴法とは、金属表面に接触してい
る溶液の濃度変化を光の反射角度の変化として検出する
現象を利用する方法でも、ＩｇＡ１分子間の結合能が測
定可能であり、この診断法に用いることができる。

【００１６】

【作用】以上の通り、本発明者らは、ＩｇＡ腎症患者の
血清ＩｇＡ１は、健常者等の非ＩｇＡ腎症患者の血清Ｉ
ｇＡ１よりも、ＩｇＡ１分子間の結合能が有意に増加し
ていることを見出した。更に、この結合がＩｇＡ１分子
のどの部位で起こっているのか特定する実験を行った。
参考例１に示したように、このＩｇＡ１分子間の結合
は、ＩｇＡ１だけでなく、ＩｇＡ１から分離したヒンジ
糖ペプチド、ヒンジ部を構成するアミノ酸２０残基のペ
プチド断片および糖鎖でも阻害を受けることが分かっ
た。

【００１７】この結果から、ＩｇＡ１分子間の結合はＩ
ｇＡ１分子のヒンジ部を介した結合であることを明らか
にすることができた。つまり、ＩｇＡ腎症患者の血清Ｉ
ｇＡ１は、健常者等の非ＩｇＡ腎症患者の血清ＩｇＡ１
よりも、ＩｇＡ１分子ヒンジ部を介したＩｇＡ１分子間
の結合能が有意に増加していることが明らかとなった。

【００１８】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態を詳細
に説明するが、これらは本発明の範囲を制限するもので
ない。（実施例１）（ビオチン標識に用いたＩｇＡ１の分離）血清５ｍｌ
を、０．１５ＭＮａＣｌ含有の０．０１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ７．５、以下ＰＢＳと略す）で平衡化したジャカ
リンアガロース（Ｖｅｃｔｏｒ社）を充填したカラム
（１×１５ｃｍ）に注入し、７０ｍｌのＰＢＳおよび７
０ｍｌの０．８Ｍグルコース含有ＰＢＳでジャカリンに
非吸着な成分を洗った後、７０ｍｌの０．１Ｍメリビオ
ース含有ＰＢＳで、ジャカリン吸着成分を回収した。こ
の液を透析膜（Ｖｉｓｋａｓｅｓｅａｌｓ社製、ｓｉ
ｚｅ２０／３２）を用いて、ＰＢＳに対して４℃で１晩
透析した後、凍結乾燥し、ＩｇＡ１試料とした。

【００１９】（プレートのコーティングに用いるＩｇＡ
１の分離）非ＩｇＡ腎症患者血清４５ｍｌに、５０％飽
和濃度になるように硫酸アンモニウムを添加し、生成す
る不溶物を遠心分離で集めた。これをＰＢＳに溶解し、
抗ヒトＩｇＡアフィニティーカラム（Ｏｒｇａｎｏｎ
Ｔｅｃｋｎｉｋａ社から購入したα鎖に特異性を有する
抗ヒトＩｇＡ抗体を、ファルマシア社のセファロース４
Ｂに固定化したゲルを充填したカラム）に注入し、充分
量のＰＢＳで洗浄した後、０．１Ｍグリシン−塩酸緩衝
液（ｐＨ２．５）で吸着成分を溶出させた。この液をＰ
ＢＳに対して透析した後、上記のビオチン標識に用いた
ＩｇＡ１の分離と同様に、ジャカリンアガロースカラム
に注入し、ＰＢＳで洗浄後、０．１Ｍメリビオース含有
ＰＢＳで溶出する成分を、透析後凍結乾燥し、プレート
のコーティングに用いるＩｇＡ１の分離を行った。

【００２０】（血清ＩｇＡ１のビオチン標識）血清から
分離したＩｇＡ１のビオチン標識は以下に示す方法で行
った。血清から分離した２０例のＩｇＡ腎症患者のＩｇ
Ａ１（ＩｇＡ腎症患者群）と、２０例の健常者および他
の腎疾患患者の非ＩｇＡ腎症患者のＩｇＡ１（非ＩｇＡ
腎症患者群）各１００μｇを、ＡｍｅｒｉｃａｎＱｕ
ａｌｅｘ社のビオチン標識試薬キット（コードＮｏ．Ｋ
８０００）を用いてその添付されている方法に従い、Ｉ
ｇＡ１をビオチン標識する反応を行った。その後、透析
膜（Ｖｉｓｋａｓｅｓｅａｌｓ社製、ｓｉｚｅ２０／
３２）を用いて、ＰＢＳに対して、４℃で１晩透析し
た。この液を、凍結乾燥し、ビオチン標識ＩｇＡ１とし
た。

【００２１】（ビオチン標識ＩｇＡ１−ＩｇＡ１間の結
合能の解析）ビオチン標識ＩｇＡ１−ＩｇＡ１間の結合
能をＥＬＩＳＡ法で測定した結果を以下に示す。非Ｉｇ
Ａ腎症患者の血清から分離したＩｇＡ１を、０．０１５
Ｍの炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）に５０μｇ／ｍｌの濃度
になるように溶解し、９６穴マイクロタイタープレート
（ＡＦｌｏｗＧｅｎｅｒａｌＣｏｍｐａｎｙ社製
Ｌｉｎｂｒｏ／ＴｉｔｅｒｔｅｋＥＩＡＭｉｃｒ
ｏｔｉｔｒａｔｉｏｎｐｌａｔｅ、ｃａｔｎｏ．７
６−３８１−０４）の各ウェルに１００μｌづつ加え、
４℃で１晩、インキュベーション（静置）した。

【００２２】各ウェルを２００μｌの０．１％ウシ血清
アルブミンおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有のＰＢ
Ｓ（以下ＰＳ／ＢＳＡ／Ｔｗｅｅｎと略す）で３回洗浄
を行った後、各ウェルに、１％ウシ血清アルブミン（ｆ
ｒａｃｔｉｏｎＶ、Ｓｉｇｍａ社）含有ＰＢＳを２０
０μｌづつ加え、４℃で１晩、インキュベーションし
た。各ウェルに、ＩｇＡ腎症患者群および非ＩｇＡ腎症
患者群のビオチン標識ＩｇＡ１を濃度が１００μｇ／ｍ
ｌ−ＰＢＳになるように調製した溶液を、１００μｌづ
つ加え、４℃で１晩、インキュベーションした。各ウェ
ルを２００μｌのＰＢＳ／ＢＳＡ／Ｔｗｅｅｎで１２回
洗浄を行った後、ＰＢＳで５００倍に希釈したＡｍｅｒ
ｓｈａｍ社製のＡＢＣ（Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎｂ
ｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅ
ｒｏｘｉｄａｓｅｃｏｍｐｌｅｘ、コードＮｏ．ＲＰ
Ｎ１０５１）試薬を、各ウェルに１００μｌづつ加え、
室温で１時間、インキュベーションした。

【００２３】各ウェルを２００μｌのＰＢＳ／ＢＳＡ／
Ｔｗｅｅｎで６回洗浄を行った後、発色剤（オルトフェ
ニレンジアミン２０ｍｇ、リン酸水素二ナトリウム１２
水１．７９５ｇ、クエン酸０．５２５ｇ、過酸化水素１
５μｌを、水５０ｍｌに溶解したもの）を、各ウェルに
１００μｌづつ加え、室温で１時間、インキュベーショ
ンした。ＢｉｏＲａｄ社製のマイクロプレートリーダー
（ＭｉｃｒｏｐｌａｔｅｒｅａｄｅｒＭｏｄｅｌ４
５０）を用いて、ＯＤ４９０ｎｍの吸光度を測定した。

【００２４】図２は、ＩｇＡ腎症患者群および非ＩｇＡ
患者群各２０例のＯＤ４９０ｎｍの吸光度を測定し、そ
の値をプロットしたグラフである。その場合、非ＩｇＡ
腎症患者群２０例の平均値（０．２８）＋２×標準偏差
値＝０．６４以上の吸光度のものを陽性とした。実験の
結果、非ＩｇＡ腎症患者群では、２０例すべてが陰性で
あるのに対して、ＩｇＡ腎症患者群では２０例中、５例
が陽性となり、両２群間で、陽性率に統計学的な有意差
が確認された。

【００２５】（参考例１）（ＩｇＡ１ヒンジ糖ペプチドの分離）健常者血清から、
上記のビオチン標識に用いたＩｇＡ１の分離と同じ操作
で分離したＩｇＡ１を、通常の方法でＳ−カルボキシメ
チル化した。このＳ−カルボキシメチル化ＩｇＡ１３０
ｍｇをトリプシン（Ｓｉｇｍａ社）濃度が１ｍｇ／ｍｌ
の０．１Ｍ重炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ８．０）３
ｍｌに溶解し、３７℃で一晩インキュベーションした。

【００２６】このトリプシン消化液を、０．１７５Ｍト
リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）で平衡化したジャカリ
ンアガロース（Ｖｅｃｔｏｒ社）を充填したカラム（１
０ｍｌ）に注入し、６０ｍｌの０．１７５Ｍトリス−塩
酸緩衝液（ｐＨ７．５）および６０ｍｌの０．８Ｍグル
コース含有の同緩衝液でジャカリンに非吸着な成分を洗
った後、６０ｍｌの０．８Ｍガラクトース含有の同緩衝
液で、ジャカリン吸着成分を回収した。この液を濃縮し
た後、１．０Ｍ酢酸で平衡化したゲルろ過カラム（Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘＧ−５０、１．５×６８ｃｍ）に注入
し、１．０Ｍ酢酸で溶出する液を１．２ｍｌづつ分画し
た。各分画の一部をフェノール硫酸法に供し、発色する
糖ペプチドを含む分画（未切断のＩｇＡ１および単糖を
含む分画を除く）を集め、凍結乾燥し、ＩｇＡ１ヒンジ
糖ペプチド試料とした。

【００２７】（参考例２）（ＩｇＡ１分子間結合の阻害実験）実施例１で示したＩ
ｇＡ１分子間の結合に、ＩｇＡ１分子のどの部位が関与
しているのか調べるため、下記のものについて、ＩｇＡ
１分子間の結合を阻害する作用があるかどうか調べた。
阻害作用を調べたものは、上記のＩｇＡ１ヒンジ糖ペプ
チド、ＩｇＡ１（ＩｇＡ腎症患者血清から上記方法で分
離したもの）、ＩｇＡ２（Ａｔｈｅｎｓｒｅｓｅａｒ
ｃｈａｎｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入したも
の。モノクロナール）、ＩｇＧ（Ａｔｈｅｎｓｒｅｓ
ｅａｒｃｈａｎｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から購入
したもの。ポリクロナール）、ガラクトース（Ｇａｌ、
シグマ社から購入）、

【００２８】Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡ
ｃ、シグマ社から購入）、Ｎ−アセチルノイラミン酸
（ＮＡＮＡ、シグマ社から購入）、２−アセトアミド−
２−デオキシ−３−Ｏ−β−ガラクトピラノシル−ガラ
クトピラノース（Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｔｒｏ
ｎｔｏＲｅｓｅａｒｃｈＣｈｅｍｉｃａｌｓ社から
購入）、合成ヒンジペプチド（ＰＶＰＳＴＰＰＴＰＳＰ
ＳＴＰＰＴＰＳＰＳ、Ｂｉｏ−Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ社か
ら購入）およびテトラペプチド（ＰＴＰＳ、Ｔｒｏｎｔ
ｏＲｅｓｅａｒｃｈＣｈｅｍｉｃａｌｓ社から購
入）である。

【００２９】この阻害実験に用いたビオチン化ＩｇＡ１
は、実施例１で陽性と判定されたＩｇＡ腎症患者由来の
ものを用いた。実施例１のビオチン化ＩｇＡ１１００μ
ｌに代えて２００μｇ／ｍｌ−ＰＢＳのビオチン化Ｉｇ
Ａ１５０μｌと０．００６μＭ、０．０６μＭ、０．６
μＭ、６μＭのＩｇＡ１ヒンジ糖ペプチド、ＩｇＡ１、
ＩｇＡ２、ＩｇＧのＰＢＳ溶液および０．００２ｍＭ、
０．０２ｍＭ、０．２ｍＭ、２ｍＭのＧａｌ、ＧａｌＮ
Ａｃ、ＮＡＮＡ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、合成ヒ
ンジペプチド、テトラペプチドのＰＢＳ溶液５０μｌを
用い、その他の操作は実施例１と同様に、ＥＬＩＳＡ実
験を行った。

【００３０】各阻害物質の、ＩｇＡ１−ＩｇＡ１分子間
結合に対する阻害率を次式を用いて計算した。阻害率（％）＝（阻害物質無添加でのＯＤ４９０ｎｍ値
−各阻害物質添加時のＯＤ４９０ｎｍ値）／（阻害物質
無添加でのＯＤ４９０ｎｍ値）×１００。図３は、各阻害物質のＩｇＡ１分子間結合に対する阻害
率を棒グラフで示した図である。図３に示されるよう
に、阻害物質濃度３μＭ時のそれぞれの阻害率は、Ｉｇ
Ａ１ヒンジ糖ペプチド＝６６．１％、ＩｇＡ１＝６０．
５％、ＩｇＡ２＝２０．３％、ＩｇＧ＝１．０％であっ
た。

【００３１】図３によると、ＩｇＡ１分子間結合に対す
る阻害作用は、ＩｇＡ１ヒンジ糖ペプチドとＩｇＡ１で
認められが、ＩｇＡ２の阻害作用は弱く、ＩｇＧについ
ては阻害作用が認められないことが分かった。なお、図
３中の誤差バーは３回行った実験の平均値＋２×標準偏
差値の誤差範囲を示す。

【００３２】図４は、図３と別の各阻害物質のＩｇＡ１
分子間結合に対する阻害率を棒グラフで示した図であ
る。図４に示されるように、阻害物質濃度１ｍＭ時のそ
れぞれの阻害率は、合成ヒンジペプチド＝６９．３％、
Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ＝２９．４％、Ｇａｌ＝１
２．９％、ＧａｌＮＡｃ＝１４．６％、ＮＡＮＡ＝０
％、テトラペプチド＝５．９％であった。図４による
と、ＩｇＡ１分子間結合に対する阻害作用は、合成ヒン
ジペプチドとＧａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃで認められ
が、その他のものには認められないことが分かった。な
お、図中の誤差バーは３回行った実験の平均値＋２×標
準偏差値の誤差範囲を示す。

【００３３】以上の結果から、ＩｇＡ１分子間の結合
は、ＩｇＡ１の他に、ＩｇＡ１分子のヒンジ部に関連す
る、ＩｇＡ１ヒンジ糖ペプチド、アミノ酸２０残基の合
成ヒンジペプチドおよびヒンジ部に結合する糖鎖Ｇａｌ
β１−３ＧａｌＮＡｃで阻害を受けることから、ＩｇＡ
１のヒンジ部を介した結合であることが分かった。

【００３４】

【発明の効果】本発明の診断法は、これまでの腎生検に
よる診断法と比較して、受診者に与える精神的苦痛、腎
周囲出血等の危険性および経済的負担が少なく、より簡
単な操作で、短時間に診断が実施可能となるため、Ｉｇ
Ａ腎症の迅速・簡便な診断法として適している。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＩｇＡ１分子の構造の概略を示す模式図であ
る。

【図２】ＩｇＡ腎症患者群および非ＩｇＡ患者群各２０
例のＯＤ４９０ｎｍの吸光度を測定した値をプロットし
たグラフである。

【図３】各阻害物質の、ＩｇＡ１分子間結合に対する阻
害率を棒グラフで示した図である。

【図４】図３とは別の各阻害物質のＩｇＡ１分子間結合
に対する阻害率を棒グラフで示した図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒト血清ＩｇＡ１の、ＩｇＡ１分子間の
結合能の差を検出することからなるを特徴とする、Ｉｇ
Ａ腎症の診断法。
【請求項２】ヒト血清から分離したＩｇＡ１の、Ｉｇ
Ａ１分子間の結合能の差を検出することからなるを特徴
とする、ＩｇＡ腎症の診断法。
【請求項３】ヒト血清から分離調製した標識ＩｇＡ１
を用いた、ＩｇＡ１分子間の結合能の差を検出すること
からなるを特徴とする、ＩｇＡ腎症の診断法。
【請求項４】ＩｇＡ１分子のヒンジ部を介したＩｇＡ
１分子間の結合能の差を検出することからなるを特徴と
する、請求項１〜３のいずれかに記載のＩｇＡ腎症の診
断法。