JPH09201581A - Method and apparatus for decomposing organic compound, isolation method of microorganism and new microorganism - Google Patents
Method and apparatus for decomposing organic compound, isolation method of microorganism and new microorganismInfo
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- JPH09201581A JPH09201581A JP8309719A JP30971996A JPH09201581A JP H09201581 A JPH09201581 A JP H09201581A JP 8309719 A JP8309719 A JP 8309719A JP 30971996 A JP30971996 A JP 30971996A JP H09201581 A JPH09201581 A JP H09201581A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、有機化合物分解能
を有する微生物を用いた有機化合物の分解方法、有機化
合物分解能を有する微生物を用いた有機化合物の分解装
置、有機化合物分解能を有する微生物の単離方法および
有機化合物分解能を有する新規微生物に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for decomposing an organic compound using a microorganism capable of decomposing an organic compound, an apparatus for decomposing an organic compound using a microorganism capable of decomposing an organic compound, and isolation of a microorganism capable of decomposing an organic compound. The present invention relates to a method and a novel microorganism having an ability to decompose organic compounds.
【０００２】[0002]
【従来の技術】近年、各種の工場で洗浄剤等として使用
されてきたトリクロロエチレン、ジクロロエチレン、フ
ッ化ビニル、3,3,3-トリフルオロ-2- プロペン、2,3-ジ
クロロヘキサフルオロ -2-ブテン、臭化ビニル等のハロ
ゲン化炭化水素やトルエン、フェノール、1-ブロモナフ
タレン、ブロモベンゼンあるいはクレゾール等の芳香族
系炭化水素等の有機化合物の環境への漏出が大きく問題
視されている。上述したような有機化合物は、その使用
規制を強化する方向で進んでいるが、現在までに有機化
合物で汚染された環境、例えば汚染土壌や汚染地下水の
問題は依然として残っている。2. Description of the Related Art In recent years, trichloroethylene, dichloroethylene, vinyl fluoride, 3,3,3-trifluoro-2-propene, 2,3-dichlorohexafluoro-2-, which have been used as cleaning agents in various plants. The leakage of organic compounds such as halogenated hydrocarbons such as butene and vinyl bromide and aromatic hydrocarbons such as toluene, phenol, 1-bromonaphthalene, bromobenzene and cresol into the environment is a serious problem. Although the above-mentioned organic compounds are being advanced in the direction of tightening the regulation of their use, the problem of the environment contaminated with organic compounds, such as contaminated soil and contaminated groundwater, still remains.
【０００３】そこで、有機化合物で汚染された土壌や地
下水等の環境を浄化することが検討されている。例え
ば、真空抽気や燃焼等の物理的な方法で汚染環境を浄化
することも提案されているが、より低コストで環境負荷
の少ない手法として、微生物を利用して汚染環境中の有
機化合物を分解する方法が注目されている。また、有機
化合物の直接的な分解処理技術として、熱・光による分
解法等も知られているが、同様にコストや操作性の面か
ら微生物を用いた有機化合物の分解方法が注目されてい
る。Therefore, purification of the environment such as soil or groundwater contaminated with organic compounds has been studied. For example, it has been proposed to purify the polluted environment by a physical method such as vacuum extraction or combustion, but as a method with lower cost and less environmental load, microorganisms are used to decompose organic compounds in the polluted environment. The method to do is attracting attention. Also, as a direct decomposition treatment technology for organic compounds, decomposition methods using heat and light are also known, but similarly, decomposition methods of organic compounds using microorganisms are drawing attention from the aspects of cost and operability. .
【０００４】例えば、上述した微生物を用いた有機化合
物の生物分解法としては、メタンの添加を必要とするメ
タン資化性菌を利用する方法（特開平 2-92274号公報参
照）や、フェノール、トルエン、クレゾール等の芳香族
化合物による誘導を必要とする菌を利用する方法（特開
平 8-66182号公報参照）、または、変異菌種を用いる方
法（特開平8-228767号公報参照）等が提案されている。For example, as a biodegradation method of an organic compound using the above-mentioned microorganism, a method of utilizing a methane-utilizing bacterium which requires the addition of methane (see Japanese Patent Laid-Open No. 2-92274), phenol, Toluene, a method of using a bacterium that requires induction with an aromatic compound such as cresol (see JP-A-8-66182), or a method of using a mutant strain (see JP-A-8-228767), etc. Proposed.
【０００５】しかしながら、上述した従来の有機化合物
の分解方法は、添加物や誘導物質が必要であったり、変
異菌種を用いるため、有機化合物の分解効率（処理効
率）等を維持することが難しく、さらに汚染環境の浄化
等に適用することを考えた場合、添加物や誘導物質を含
めて新たな物質や変異菌種を環境に加えることは、別の
汚染（２次汚染）を引き起こすおそれがあり、真の環境
浄化にはならないという問題を有している。特に、環境
に有害なフェノール、トルエン、クレゾール等の芳香族
化合物による誘導を必要とする菌を使用する方法は、新
たな環境汚染を引き起こすおそれが大きい。また、変異
菌種を環境中に散布することは、安全性の面で問題を有
している。However, it is difficult to maintain the decomposition efficiency (processing efficiency) of the organic compound in the above-mentioned conventional methods for decomposing organic compounds, because additives or inducers are required and mutant fungal species are used. In addition, when considering application to the purification of contaminated environment, etc., adding new substances and mutant strains including additives and inducers to the environment may cause other pollution (secondary pollution). However, it has a problem that it does not become a real environmental purification. In particular, the method of using a bacterium that requires induction with an aromatic compound such as phenol, toluene, or cresol, which is harmful to the environment, is likely to cause new environmental pollution. Further, spraying the mutant strain into the environment has a problem in terms of safety.
【０００６】[0006]
【発明が解決しようとする課題】上述したように、従来
の微生物を用いた有機化合物の分解方法では、有機化合
物を分解するに必要な酵素を誘導する物質や変異菌種等
を環境中に散布することが必要である。特に、誘導物質
として、環境に有害な化学物質等を必要とする場合、あ
るいは変異菌種を環境中に散布した場合には、２次汚染
を引き起こす可能性があり、環境を浄化する方法として
は必ずしも満足のいくものではなかった。また、従来の
微生物を用いた有機化合物の方法では、添加物や誘導物
質を必要とするため、分解操作や分解効率等を維持する
ことが難しいという問題を有している。As described above, in the conventional method for degrading an organic compound using a microorganism, a substance that induces an enzyme necessary for degrading the organic compound, a mutant bacterial species, or the like is dispersed in the environment. It is necessary to. In particular, when a chemical substance that is harmful to the environment is required as an inducer, or when a mutant strain is sprayed into the environment, it may cause secondary pollution. It was not always satisfactory. Further, the conventional method for organic compounds using microorganisms has a problem that it is difficult to maintain the decomposition operation and the decomposition efficiency because additives and inducers are required.
【０００７】このようなことから、汚染環境に、添加物
や誘導物質等の新たな物質や変異菌種を添加することな
く、例えば汚染環境中の有機化合物を有効に分解するこ
とができ、さらには有機化合物の分解操作や分解効率等
を容易に維持することが可能な有機化合物の分解方法が
強く求められている。From the above, for example, organic compounds in a polluted environment can be effectively decomposed without adding new substances such as additives and inducers or mutant bacterial species to the polluted environment. There is a strong demand for a method for decomposing an organic compound, which can easily maintain the decomposition operation and the decomposition efficiency of the organic compound.
【０００８】本発明はこのような課題に対処するために
なされたもので、添加物、誘導物質あるいは変異菌種を
必要とせずに、有機化合物を有効に分解することがで
き、また例えば汚染環境の浄化に適用した場合には環境
負荷を極力低減することができる有機化合物の分解方
法、該有機化合物の分解方法を適用した有機化合物の分
解装置、有機化合物の生物分解に有効な微生物を効率よ
く単離することを可能とした微生物の単離方法、さらに
は添加物や誘導物質を必要とせずに、有機化合物を効率
よく分解し得る新規微生物を提供することを目的として
いる。The present invention has been made to address such a problem, and can effectively decompose organic compounds without the need for additives, inducers or mutant strains. When applied to the purification of, the method for decomposing an organic compound that can reduce the environmental load as much as possible, the decomposing device for an organic compound to which the method for decomposing the organic compound is applied, and the microorganisms effective for biodegrading the organic compound are efficiently It is an object of the present invention to provide a method for isolating a microorganism that enables isolation, and further to provide a novel microorganism capable of efficiently decomposing organic compounds without the need for additives and inducers.
【０００９】[0009]
【課題を解決するための手段】本発明の有機化合物の分
解方法は、第１の有機化合物に汚染された環境または前
記環境と接触した試料に由来し有機化合物分解能を有す
る微生物と前記第１または第２の有機化合物とを接触す
る工程と、前記微生物により前記第１または前記第２の
有機化合物を分解する工程とを具備したことを特徴とし
ている。The method for decomposing an organic compound according to the present invention comprises a microorganism having an organic compound degrading ability derived from an environment contaminated with a first organic compound or a sample in contact with the environment, and the first or The method is characterized by comprising a step of contacting with a second organic compound and a step of decomposing the first or second organic compound by the microorganism.
【００１０】また、本発明の有機化合物の分解方法は、
第１の有機化合物に汚染された環境または前記環境と接
触した試料から微生物を採取する工程と、前記採取した
微生物を有機化合物耐性が指標となるように培養する工
程と、前記培養した微生物を分離する工程と、前記分離
された微生物を有機化合物分解能を指標として選択する
工程と、前記選択された微生物と前記第１または第２の
有機化合物とを接触する工程と、前記微生物により前記
第１または前記第２の有機化合物を分解する工程とを具
備したことを特徴としている。The method for decomposing an organic compound of the present invention is
A step of collecting a microorganism from an environment contaminated with the first organic compound or a sample in contact with the environment, a step of culturing the collected microorganism so that the resistance to the organic compound is an index, and separating the cultured microorganism And a step of selecting the separated microorganisms using an organic compound decomposing ability as an index, a step of contacting the selected microorganisms with the first or second organic compound, and the first or second by the microorganisms. And a step of decomposing the second organic compound.
【００１１】さらに、本発明の有機化合物の分解方法
は、第１の有機化合物に汚染された環境または前記環境
と接触した試料から微生物を採取する工程と、前記第１
の有機化合物の存在様態が前記環境または前記環境と接
触した試料と同一の条件下で前記採取した微生物を培養
する工程と、前記培養した微生物を分離する工程と、前
記分離された微生物を有機化合物分解能を指標として選
択する工程と、前記選択された微生物と前記第１または
第２の有機化合物とを接触する工程と、前記微生物によ
り前記第１または前記第２の有機化合物を分解する工程
とを具備したことを特徴としている。Further, the method for decomposing an organic compound according to the present invention comprises a step of collecting microorganisms from an environment contaminated with the first organic compound or a sample in contact with the environment, and
Culturing the collected microorganisms under the same conditions as the presence of the organic compound in the environment or the sample in contact with the environment, separating the cultured microorganisms, and separating the separated microorganisms into organic compounds. A step of selecting the resolution as an index, a step of contacting the selected microorganism with the first or second organic compound, and a step of decomposing the first or second organic compound by the microorganism. It is characterized by having.
【００１２】また、本発明の有機化合物の分解装置は、
第１の有機化合物に汚染された環境または前記環境と接
触した試料に由来し有機化合物分解能を有する微生物を
保持する保持手段と、前記保持手段に保持された微生物
と前記第１または第２の有機化合物とを接触させる接触
手段とを具備したことを特徴としている。Further, the apparatus for decomposing organic compounds of the present invention is
Retaining means for retaining a microorganism having an organic compound decomposing ability derived from an environment contaminated with a first organic compound or a sample in contact with the environment, the microorganism retained in the retaining means, and the first or second organic compound And a contact means for contacting the compound.
【００１３】さらに、本発明の第１の微生物の単離方法
は、有機化合物に汚染された環境または前記環境と接触
した試料から微生物を採取する工程と、前記採取した微
生物を有機化合物耐性が指標となるように培養する工程
と、前記培養した微生物を分離する工程と、前記分離さ
れた微生物を有機化合物分解能を指標として選択する工
程とを具備したことを特徴としている。Further, the first method for isolating microorganisms of the present invention comprises a step of collecting microorganisms from an environment contaminated with an organic compound or a sample in contact with the environment, and the resistance of the collected microorganisms to organic compound is an index. And a step of separating the cultured microorganisms, and a step of selecting the separated microorganisms by using an organic compound degrading ability as an index.
【００１４】また、本発明の第２の微生物の単離方法
は、有機化合物に汚染された環境または前記環境と接触
した試料から微生物を採取する工程と、前記有機化合物
の存在様態が前記環境または前記環境と接触した試料と
同一の条件下で前記採取した微生物を培養する工程と、
前記培養した微生物を分離する工程と、前記分離された
微生物を有機化合物分解能を指標として選択する工程と
を具備したことを特徴としている。The second method for isolating microorganisms according to the present invention is the step of collecting microorganisms from an environment contaminated with an organic compound or a sample in contact with the environment, and the presence state of the organic compound is the environment or Culturing the collected microorganism under the same conditions as the sample in contact with the environment,
The method is characterized by comprising a step of separating the cultured microorganisms and a step of selecting the separated microorganisms using an organic compound degrading ability as an index.
【００１５】さらに、本発明の新規微生物は、有機化合
物耐性を有し、かつ有機化合物分解能を有するコマガテ
ラ・ブレビス（Komagatella brevis）であることを特徴
としている。Furthermore, the novel microorganism of the present invention is characterized by being Komagatella brevis, which is resistant to organic compounds and has the ability to decompose organic compounds.
【００１６】また、本発明の新規微生物は、コマガテラ
属、アルスロバクター属、ブレビバクテリウム属、クラ
ビバクター属、ミコバクテリウム属、テラバクター属ま
たはレニバクテリウム属に属し、有機化合物耐性を有
し、かつ有機化合物分解能を有することを特徴としてい
る。Furthermore, the novel microorganism of the present invention belongs to the genus Comagatera, the genus Arthrobacter, the genus Brevibacterium, the genus Claviobacter, the genus Mycobacterium, the genus Terabacteria or the genus Renibacterium and has resistance to organic compounds. And is capable of decomposing organic compounds.
【００１７】本発明の第１の有機化合物の分解方法にお
いては、有機化合物の分解に汚染環境由来の有機化合物
分解能を有する微生物を用いている。In the first method for decomposing an organic compound of the present invention, a microorganism having a decomposing ability to decompose an organic compound is used for decomposing the organic compound.
【００１８】また、本発明の第２の有機化合物の分解方
法においては、有機化合物分解能を有する微生物を、有
機化合物耐性および有機化合物分解能を指標として、有
機化合物に汚染された環境または前記環境と接触した試
料より単離し、単離された微生物を用いて有機化合物を
分解している。In the second method for decomposing an organic compound according to the present invention, a microorganism having an ability to decompose an organic compound is brought into contact with an environment contaminated with an organic compound or the environment, using the resistance to the organic compound and the ability to decompose the organic compound as an index. The organic compound was decomposed using the isolated microorganisms.
【００１９】さらに、本発明の第３の有機化合物の分解
方法においては、有機化合物の存在様態が、環境中また
は該環境と接触した試料中に存在する有機化合物の存在
様態と全く同じとなるように微生物の培養条件を設定し
て、微生物を分離する。そして、分離した微生物の中か
ら有機化合物分解能を有する微生物を単離し、単離され
た微生物を用いて有機化合物を分解している。ここで、
有機化合物の存在様態とは、有機化合物の種類、量、存
在比、存在形態（気体、液体、固体等）等の全ての状態
を同時に表す概念である。Furthermore, in the third method for decomposing an organic compound according to the present invention, the state of existence of the organic compound is exactly the same as the state of existence of the organic compound present in the environment or in the sample in contact with the environment. Isolate the microorganisms by setting the culture conditions for the microorganisms. Then, from the separated microorganisms, microorganisms capable of decomposing organic compounds are isolated, and the isolated microorganisms are used to decompose organic compounds. here,
The existing state of an organic compound is a concept that simultaneously represents all states such as the type, amount, abundance ratio, existing form (gas, liquid, solid, etc.) of the organic compound.
【００２０】本発明の第１、第２および第３の有機化合
物の分解方法に用いる微生物は、有機化合物耐性を有し
ており、有機化合物を炭素源として生育可能であるた
め、添加物や誘導物質等を必要とせずに、有機化合物を
有効に分解処理することができる。さらに、本発明の第
１、第２および第３の有機化合物の分解方法を適用した
有機化合物の分解装置によれば、有機化合物の分解能の
維持や分解効率の安定化等を簡便に行うことが可能とな
る。従って、本発明の有機化合物の分解方法を汚染環境
の浄化に適用した場合、添加物や誘導物質等を必要とし
ないことに加えて、微生物自体も汚染環境に由来するた
め、環境負荷が極めて少なく、２次汚染等を引き起こす
おそれがない。The microorganisms used in the first, second and third methods for decomposing organic compounds of the present invention are resistant to organic compounds and can grow using organic compounds as carbon sources. An organic compound can be effectively decomposed without the need for a substance or the like. Further, according to the organic compound decomposing apparatus to which the first, second and third methods for decomposing an organic compound of the present invention are applied, it is possible to easily maintain the decomposition ability of the organic compound and stabilize the decomposition efficiency. It will be possible. Therefore, when the method for decomposing an organic compound of the present invention is applied to the purification of a polluted environment, in addition to the fact that no additives or inducers are required, the microorganism itself is also derived from the polluted environment, so the environmental load is extremely small. There is no risk of causing secondary pollution.
【００２１】本願において、有機化合物とは、トリクロ
ロエチレン、シス−ジクロロエチレン、トランス−ジク
ロロエチレン、1,1-ジクロロエチレン、テトラクロロエ
チレン、ジクロロエタン、トリクロロエタン、テトラク
ロロエタン、塩化ビニル、四塩化炭素、フッ化ビニル、
3,3,3-トリフルオロ-2- プロペン、2,3-ジクロロヘキサ
フルオロ -2-ブテン、臭化ビニル等のハロゲン化炭化水
素およびトルエン、フェノール、クレゾール、1-ブロモ
ナフタレン、ブロモベンゼン、ジクロロベンゼン、トリ
クロロベンゼンおよびポリ塩化ビフェニル類等の芳香族
系炭化水素に代表される、各種の有機化合物の総称であ
る。また、本願において、微生物とは、各種の細菌、放
線菌、糸状菌、酵母、変形菌、藻類あるいは原生動物等
を包括する概念である。In the present application, the organic compound means trichloroethylene, cis-dichloroethylene, trans-dichloroethylene, 1,1-dichloroethylene, tetrachloroethylene, dichloroethane, trichloroethane, tetrachloroethane, vinyl chloride, carbon tetrachloride, vinyl fluoride,
Halogenated hydrocarbons such as 3,3,3-trifluoro-2-propene, 2,3-dichlorohexafluoro-2-butene, vinyl bromide, etc. and toluene, phenol, cresol, 1-bromonaphthalene, bromobenzene, dibenzene It is a general term for various organic compounds represented by aromatic hydrocarbons such as chlorobenzene, trichlorobenzene, and polychlorinated biphenyls. Further, in the present application, the term "microorganism" is a concept that includes various bacteria, actinomycetes, filamentous fungi, yeasts, morphogenes, algae, protozoa, and the like.
【００２２】また、有機化合物の分解に用いる汚染環境
由来の細菌等の微生物は、有機化合物耐性を有すること
から汚染環境中でコロニーを形成することが通常可能で
あり、この場合には、大気（気相）中に揮発して存在す
る有機化合物とコロニーとが大気（気相）中で直接接触
する可能性が大きい。このとき、有機化合物の分解に用
いる汚染環境由来の微生物が、有機化合物を大気（気
相）中から直接取り込んで炭素源として利用することが
可能な微生物であるならば、液体中に存在する有機化合
物だけでなく、大気（気相）中に揮発して存在する有機
化合物をも生物分解することができるので好ましい。こ
のような特性を示す微生物は、多種類存在することが推
測され、例えば、コマガテラ属、アルスロバクター属、
ブレビバクテリウム属、クラビバクター属、ミコバクテ
リウム属、テラバクター属またはレニバクテリウム属に
属する細菌等を本発明の有機化合物の分解方法および分
解装置に適用した場合には、これらの細菌は揮発した有
機化合物を大気（気相）中から直接取り込んで炭素源と
して利用することができるため、大気（気相）中に揮発
した形態の有機化合物を生物分解することが可能とな
る。しかしながら、微生物として、後述するコマガテラ
属に属する新規微生物、特に、コマガテラ・ブレビス
（Komagatella brevis）を本発明の有機化合物の分解方
法および分解装置に適用した場合には、コマガテラ・ブ
レビスは揮発した有機化合物を大気（気相）中から直接
取り込んで炭素源として利用する能力に優れているた
め、大気（気相）中に揮発した形態の有機化合物を効果
的に生物分解することが可能となる。Further, since microorganisms such as bacteria derived from the polluted environment used for decomposing organic compounds have resistance to organic compounds, it is usually possible to form colonies in the polluted environment. There is a high possibility that the organic compound that has been volatilized in the gas phase) and the colony will come into direct contact with each other in the air (gas phase). At this time, if the microorganism derived from the polluted environment used for decomposing the organic compound is a microorganism that can directly take in the organic compound from the air (gas phase) and use it as a carbon source, the organic compound present in the liquid Not only the compound but also an organic compound existing in the atmosphere (vapor phase) by volatilization can be biodegraded, which is preferable. Microorganisms exhibiting such characteristics are presumed to exist in many types, for example, genus Comagatera, genus Arthrobacter,
When bacteria belonging to the genus Brevibacterium, the genus Claviobacter, the genus Mycobacterium, the genus Terabacteria or the genus Renibacterium are applied to the method and apparatus for decomposing an organic compound of the present invention, these bacteria are volatilized. Since the organic compound can be directly taken in from the air (gas phase) and used as a carbon source, it is possible to biodegrade the organic compound in the form of volatilized in the air (gas phase). However, as a microorganism, a novel microorganism belonging to the genus Komagatella described later, particularly when Komagatella brevis is applied to the method for decomposing an organic compound and the decomposing apparatus of the present invention, the comagatera brevis is a volatilized organic compound. Since it has an excellent ability to be directly taken in from the atmosphere (gas phase) and used as a carbon source, it becomes possible to effectively biodegrade organic compounds in the form of volatilization in the atmosphere (gas phase).
【００２３】また、本発明の第１および第２の微生物の
単離方法においては、汚染環境から採取した試料中の微
生物を、まず高濃度に有機化合物が存在する条件下で培
養しているため、高度の有機化合物耐性を有する微生物
を効率よく分離することができる。そして、このような
有機化合物耐性のみを指標として選別した微生物の中か
ら、有機化合物分解能を有する微生物を選択しているた
め、有機化合物の分解性および有機化合物の分解装置の
維持性に優れた微生物を効率よく得ることができる。な
お、微生物の種によって生理的要求が異なるのが通例で
あるので、微生物を培養する際に、１種の培地に限るこ
となく適宜培地の組成および形態を変更し、温度等の条
件も適宜設定することにより、多様な微生物を分離する
ことができる。また、第１の微生物の単離方法の場合に
は、任意に設定された培養条件下で微生物を培養するこ
とにより、特定の性質を有する微生物を容易に分離する
ことが可能である。さらに、第２の微生物の単離方法の
場合には、有機化合物の存在様態を、微生物が採取され
た環境中と同一にして微生物を培養することにより、有
機化合物耐性を有する微生物を確実に分離することがで
き、有機化合物分解能を有する微生物を効率的に単離す
ることが可能となる。Further, in the first and second methods for isolating microorganisms of the present invention, the microorganisms in the sample collected from the contaminated environment are first cultivated under the condition that an organic compound is present in high concentration. , Microorganisms having high resistance to organic compounds can be efficiently separated. Then, since microorganisms capable of degrading organic compounds are selected from the microorganisms selected by using only such organic compound resistance as an index, microorganisms excellent in degradability of organic compounds and maintainability of a degrading device for organic compounds. Can be obtained efficiently. In addition, since it is customary that physiological requirements differ depending on the species of the microorganism, when culturing the microorganism, the composition and morphology of the medium are appropriately changed without being limited to one type of medium, and conditions such as temperature are appropriately set. By doing so, various microorganisms can be separated. Further, in the case of the first method for isolating a microorganism, it is possible to easily separate the microorganism having a specific property by culturing the microorganism under an arbitrarily set culture condition. Furthermore, in the case of the second method for isolating microorganisms, the microorganisms having organic compound resistance can be reliably separated by culturing the microorganisms with the presence state of the organic compounds being the same as in the environment in which the microorganisms were collected. Therefore, it becomes possible to efficiently isolate a microorganism having an ability to decompose an organic compound.
【００２４】また、本発明の有機化合物の分解装置にお
いては、第１の有機化合物に汚染された環境あるいは該
汚染環境から採取した試料中より単離され、高度の有機
化合物耐性と有機化合物分解能を有する微生物を保持
し、保持した微生物と第１あるいは第２の有機化合物と
を接触させているので、有機化合物の分解能の維持や分
解効率の安定化等を簡便に行うことが可能となる。な
お、第１および第２の有機化合物としては、前述した各
種の有機化合物を挙げることができる。In the apparatus for decomposing an organic compound of the present invention, the organic compound is isolated from an environment contaminated with the first organic compound or a sample collected from the contaminated environment, and has a high organic compound resistance and a high organic compound decomposing ability. Since the microorganisms contained therein are retained and the retained microorganisms are brought into contact with the first or second organic compound, it is possible to easily maintain the decomposition ability of the organic compound and stabilize the decomposition efficiency. In addition, as the first and second organic compounds, the various organic compounds described above can be exemplified.
【００２５】本発明の有機化合物の分解装置において、
該分解装置の形態としては、特に限されず、例えば、バ
イオリボン浄化法、バイオリアクタ処理法、バイオフィ
ルタ浄化法、注入浄化法およびバイオカラム処理法を適
用した有機化合物の分解装置を挙げることができる。In the organic compound decomposition apparatus of the present invention,
The form of the decomposition apparatus is not particularly limited, and examples thereof include an apparatus for decomposing an organic compound to which a bioribbon purification method, a bioreactor treatment method, a biofilter purification method, an injection purification method and a biocolumn treatment method are applied. it can.
【００２６】バイオリボン浄化法を適用した有機化合物
の分解装置は、有機化合物分解能を有する微生物、特
に、本発明の新規微生物を疎水性多孔質膜の内部に担持
し、微生物が担持された疎水性多孔質膜を土壌中に埋設
することにより、疎水性多孔質膜に対する有機化合物の
吸着や有機化合物の蒸発力等を駆動力として土壌中の有
機化合物を疎水性多孔質膜の内部に導入し、疎水性多孔
質膜の内部で微生物により有機化合物を分解する。バイ
オリボン浄化法を適用した有機化合物の分解装置におい
て、疎水性多孔質膜は、微生物を保持する保持手段と該
保持手段に保持された微生物および有機化合物を接触さ
せる接触手段とを兼ねている。The apparatus for decomposing organic compounds to which the bioribbon purification method is applied is a hydrophobic substance carrying microorganisms capable of decomposing organic compounds, particularly the novel microorganism of the present invention, which is carried inside a hydrophobic porous membrane. By embedding the porous membrane in the soil, the organic compound in the soil is introduced into the hydrophobic porous membrane by using the adsorption force of the organic compound to the hydrophobic porous membrane or the evaporation force of the organic compound as the driving force. Inside the hydrophobic porous membrane, microorganisms decompose organic compounds. In the apparatus for decomposing an organic compound to which the bioribbon purification method is applied, the hydrophobic porous membrane also serves as a holding means for holding the microorganism and a contact means for bringing the microorganism and the organic compound held by the holding means into contact with each other.
【００２７】疎水性多孔質膜としては、テフロン等で疎
水性を付与する処理を施した多孔質体やテフロン等の疎
水性材料を含有する多孔質体を用いることが好ましい。
そして、疎水性多孔質膜の疎水性を調節することによ
り、疎水性多孔質膜の内部に有機化合物を導入する際の
駆動力として、地下水の蒸発力を効率的に利用すること
ができる。As the hydrophobic porous membrane, it is preferable to use a porous body that has been treated to impart hydrophobicity with Teflon or the like, or a porous body containing a hydrophobic material such as Teflon.
By adjusting the hydrophobicity of the hydrophobic porous membrane, it is possible to efficiently use the evaporation force of groundwater as a driving force when introducing the organic compound into the hydrophobic porous membrane.
【００２８】また、バイオリボン浄化法を適用した有機
化合物の分解装置によれば、該分解装置を土壌中に埋設
した後は、特に、メンテナンスやエネルギーを必要とす
ることなく、有機化合物を効率的に分解することができ
る。Further, according to the organic compound decomposing device to which the bioribbon purification method is applied, the organic compound can be efficiently removed after the decomposing device is buried in soil without requiring maintenance or energy. Can be decomposed into
【００２９】なお、土壌とは、地表以下の環境の全てを
含む概念であり、土壌、土壌水、地下水およびそれらを
含むものすべてを指している。The term "soil" is a concept that includes all of the environment below the surface of the earth, and refers to soil, soil water, groundwater, and all that include them.
【００３０】また、バイオリアクタ処理法を適用した有
機化合物の分解装置は、揚水した地下水、真空抽出した
気体あるいは掘削した土壌を、バイオリアクタ内に保持
された有機化合物分解能を有する微生物、特に、本発明
の新規微生物と接触させることにより、バイオリアクタ
内部で有機化合物を分解する。バイオリアクタ処理法を
適用した有機化合物の分解装置において、微生物を保持
する保持手段としては、通常、外部から閉鎖された反応
槽等が該当し、また、該保持手段に保持された微生物お
よび有機化合物を接触させる接触手段としては、地下
水、真空抽出した気体あるいは掘削した土壌をバイオリ
アクタの反応槽に導入するためのポンプや導入管等が該
当する。Further, the apparatus for decomposing organic compounds to which the bioreactor treatment method is applied is a microorganism having an ability of decomposing organic compounds, which is retained in the bioreactor of pumped groundwater, vacuum-extracted gas or excavated soil. The organic compound is decomposed inside the bioreactor by contacting with the novel microorganism of the invention. In the organic compound decomposing apparatus to which the bioreactor treatment method is applied, the holding means for holding the microorganisms is usually a reaction tank closed from the outside, and the microorganisms and the organic compounds held by the holding means are also applicable. As the contact means for contacting with each other, a pump, an introduction pipe, or the like for introducing ground water, vacuum-extracted gas or excavated soil into the reaction tank of the bioreactor is applicable.
【００３１】バイオリアクタにおいて、外部から閉鎖さ
れた反応槽等に微生物を保持し、また微生物と有機化合
物とを接触させる場合には、該反応槽等の内部環境、例
えば、ｐＨ、温度および溶存酸素濃度等を、反応槽等に
保持した微生物の生理的要求にしたがって最適な条件に
維持すると、微生物による有機化合物の分解効率が高ま
ると共に、長期にわたり微生物による有機化合物の分解
反応を維持することができる。すなわち、バイオリアク
タ内における環境は、微生物による有機化合物の分解反
応が最も高くなる状態に維持されることが望ましい。有
機化合物の分解反応が最も高くなる状態は、微生物の種
によって異なるので、バイオリアクタ内における環境
は、反応槽等に保持した微生物の種の要求にしたがって
適宜変更する。したがって、バイオリアクタ処理法を適
用した有機化合物の分解装置においては、自然環境中で
は有機化合物の分解活性を維持不能な微生物をも有機化
合物の分解に適用することが可能となる。また、揚水し
た地下水、真空抽出した気体あるいは掘削した土壌は、
反応槽等の内部における有機化合物の分解活性が最も高
くなるように導入量等が調節されて、微生物を保持した
反応槽等に導入される。In the bioreactor, when the microorganisms are held in a reaction vessel closed from the outside and the microorganisms are brought into contact with an organic compound, the internal environment of the reaction vessel or the like, such as pH, temperature and dissolved oxygen If the concentration and the like are maintained under optimal conditions according to the physiological requirements of the microorganisms retained in the reaction tank, etc., the decomposition efficiency of the organic compounds by the microorganisms can be increased and the decomposition reaction of the organic compounds by the microorganisms can be maintained for a long period of time. . That is, it is desirable that the environment in the bioreactor is maintained in a state where the decomposition reaction of the organic compound by the microorganism is the highest. Since the state in which the decomposition reaction of the organic compound is highest depends on the species of the microorganism, the environment in the bioreactor is appropriately changed according to the requirement of the species of the microorganism retained in the reaction tank or the like. Therefore, in the organic compound decomposing device to which the bioreactor treatment method is applied, it becomes possible to apply even microorganisms that cannot maintain the degrading activity of the organic compound in the natural environment to decomposing the organic compound. In addition, pumped groundwater, vacuum extracted gas or excavated soil,
The introduction amount and the like are adjusted so that the decomposition activity of the organic compound inside the reaction tank or the like becomes the highest, and the organic compound is introduced into the reaction tank or the like holding the microorganism.
【００３２】さらに、バイオリアクタの反応槽等に微生
物を保持する場合には、微生物を培養液等に浮遊させた
遊離状態で保持することが可能であるが、微生物を適当
な担体に担持させておくことが好ましい。微生物を担体
に担持することで、微生物を高密度に維持することが可
能となり、有機化合物の分解をさらに効率的に行うこと
ができる。このような担体は、微生物種によって適宜変
更可能であるが、微生物を担持可能な多孔質体を含むも
のが好ましい。このような多孔質体としては、例えば、
微生物のマイクロハビタットを形成できるものが好まし
い。マイクロハビタットとは、数μｍ程度の孔隙中にお
ける微生物の微小な住居のことである。多孔質体は粒状
あるいは層状等、様々な形態を選択することができ、例
えば、セラミックス、ガラス、ケイ酸カルシウム、シリ
カ、アルミナおよび鹿沼土のような団粒構造を持つ土壌
粒子等の無機材料や活性炭、ウレタンフォーム、光硬化
樹脂、アニオン交換樹脂、セルロース、リグニン、キチ
ンおよびキトサン等の有機材料からなる多孔質体の１種
または２種以上を組み合わせて用いることができる。こ
れらの多孔質体としては、安価なものが望ましい。さら
に、微生物の保持や生育に適した構造を有したものが望
ましく、例えば、数μｍ〜数十μｍの孔隙を持つ多孔質
体が望ましい。または、アルギン酸カルシウムゲル、ア
ガロースゲル、カラギーナンゲル等による包括固定担体
も好ましい。さらに、多孔質体と親水性ゲルの複合担体
に利用可能である。Further, when the microorganisms are held in the reaction tank of the bioreactor or the like, it is possible to hold the microorganisms in a free state in which the microorganisms are suspended in a culture solution or the like. It is preferable to set. By supporting the microorganisms on the carrier, the microorganisms can be maintained at a high density and the organic compounds can be decomposed more efficiently. Such a carrier can be appropriately changed depending on the microorganism species, but a carrier containing a porous material capable of supporting the microorganism is preferable. As such a porous body, for example,
Those capable of forming a micro-habitat of microorganisms are preferable. A micro habitat is a minute residence of a microorganism in a pore of about several μm. Various forms such as granular or layered can be selected for the porous body. For example, inorganic materials such as ceramics, glass, calcium silicate, silica, alumina and soil particles having an aggregated structure such as Kanuma soil, It is possible to use one kind or a combination of two or more kinds of porous bodies made of organic materials such as activated carbon, urethane foam, photocurable resin, anion exchange resin, cellulose, lignin, chitin and chitosan. As these porous bodies, inexpensive ones are desirable. Further, a material having a structure suitable for holding and growing microorganisms is desirable, and for example, a porous body having pores of several μm to several tens of μm is desirable. Alternatively, entrapping immobilization carriers such as calcium alginate gel, agarose gel and carrageenan gel are also preferable. Further, it can be used as a composite carrier of a porous body and a hydrophilic gel.
【００３３】さらに、バイオフィルタ処理法を適用した
有機化合物の分解装置は、真空抽出した気体あるいは有
機化合物を含有する気体等を、フィルタケース内のフィ
ルタに担持された有機化合物分解能を有する微生物、特
に、本発明の新規微生物と接触させることにより、フィ
ルタケース内で有機化合物を分解する。バイオフィルタ
処理法を適用した有機化合物の分解装置において、微生
物を保持する保持手段としては、通常、外部から閉鎖さ
れたフィルタケース等が該当し、また、該保持手段に保
持された微生物および有機化合物を接触させる接触手段
としては、真空抽出した気体をフィルタケース内のフィ
ルタに導入するためのポンプや導入管等が該当する。Further, the apparatus for decomposing organic compounds to which the biofiltering method is applied is a microorganism having an ability of decomposing organic compounds, in which a gas in a vacuum extracted or a gas containing an organic compound is carried by a filter in a filter case, particularly , The organic compound is decomposed in the filter case by contacting with the novel microorganism of the present invention. In the organic compound decomposing device to which the biofiltering method is applied, the holding means for holding microorganisms is usually a filter case closed from the outside, and the microorganisms and organic compounds held by the holding means are also applicable. The contact means for contacting with each other corresponds to a pump or an introduction pipe for introducing the vacuum-extracted gas into the filter in the filter case.
【００３４】バイオフィルタ処理法を適用した有機化合
物の分解装置において、外部から閉鎖されたフィルタケ
ースに微生物を保持し、また微生物と有機化合物とを接
触させる場合には、該フィルタケース等の内部環境、例
えば、温度および溶存酸素濃度等を、フィルタケース等
に保持した微生物の生理的要求にしたがって最適な条件
に維持すると、微生物による有機化合物の分解効率が高
まると共に、長期にわたり微生物による有機化合物の分
解反応を維持することができる。すなわち、フィルタケ
ース内における環境は、微生物による有機化合物の分解
反応が最も高くなる状態に維持されることが望ましい。
有機化合物の分解反応が最も高くなる状態は、微生物の
種によって異なるので、フィルタケース内における環境
は、反応槽等に保持した微生物の種の要求にしたがって
適宜変更する。したがって、バイオフィルタ処理法を適
用した有機化合物の分解装置においては、自然環境中で
は有機化合物の分解活性を維持不能な微生物をも有機化
合物の分解に適用することが可能となる。また、真空抽
出した気体等は、フィルタケース等の内部における有機
化合物の分解活性が最も高くなるように導入量等が調節
されて、微生物を保持したフィルタケース等に導入され
る。In an apparatus for decomposing an organic compound to which a biofiltering method is applied, when a microorganism is retained in a filter case closed from the outside and the microorganism and the organic compound are brought into contact with each other, the internal environment of the filter case or the like is used. , For example, if the temperature and dissolved oxygen concentration are maintained under optimal conditions according to the physiological requirements of the microorganisms retained in the filter case, etc., the efficiency of decomposition of organic compounds by microorganisms is increased, and the decomposition of organic compounds by microorganisms is prolonged. The reaction can be maintained. That is, it is desirable that the environment in the filter case is maintained in a state where the decomposition reaction of the organic compound by the microorganism becomes the highest.
Since the state in which the decomposition reaction of the organic compound is highest depends on the species of the microorganism, the environment in the filter case is appropriately changed according to the requirement of the species of the microorganism retained in the reaction tank or the like. Therefore, in the organic compound decomposing device to which the biofiltering method is applied, it becomes possible to apply even microorganisms, which cannot maintain the decomposition activity of the organic compound in the natural environment, to the decomposition of the organic compound. Further, the introduction amount and the like of the vacuum-extracted gas and the like are adjusted so that the decomposition activity of the organic compound inside the filter case and the like becomes the highest, and then introduced into the filter case and the like holding the microorganisms.
【００３５】さらに、フィルタケースに微生物を保持す
る場合には、微生物を適当なフィルタに担持させておく
が、フィルタの構成部材には、濾紙、各種の天然繊維や
プラスチック繊維の不織布、織布、プラスチックの発泡
体等を用いることができる。また、前述した各種の担体
を適用することも可能である。なお、フィルタの構成部
材は、有機化合物により溶解しないものが選ばれる。Further, in the case of holding microorganisms in the filter case, the microorganisms are carried on an appropriate filter. The constituent members of the filter include filter paper, various natural fibers and non-woven fabrics of plastic fibers, woven fabrics, A plastic foam or the like can be used. Moreover, it is also possible to apply the various carriers mentioned above. The constituent members of the filter are selected so as not to be dissolved by the organic compound.
【００３６】バイオフィルタ処理法を適用した有機化合
物の分解装置によれば、特に、抽出気体中の有機化合物
を効率的に分解可能であり、土壌の不飽和帯に存在する
有機化合物の分解に多用される。According to the organic compound decomposing device to which the biofiltering method is applied, in particular, the organic compound in the extracted gas can be efficiently decomposed, and it is often used for decomposing the organic compound existing in the unsaturated zone of soil. To be done.
【００３７】また、注入浄化法を適用した有機化合物の
分解装置は、有機化合物分解能を有する微生物、特に、
本発明の新規微生物を土壌中に投入することにより、自
然環境中で土壌中に投入した微生物により有機化合物を
分解する。注入浄化法を適用した有機化合物の分解装置
において、微生物を保持する保持手段は該微生物を土壌
等の環境中に投入する形態で保持する培養タンク等であ
り、該保持手段に保持された微生物と有機化合物とを接
触させる接触手段は、環境中に該保持手段より微生物を
投入する輸送ポンプおよび供給配管等である。Further, the apparatus for decomposing organic compounds to which the injection purification method is applied is a microorganism capable of decomposing organic compounds, particularly,
By introducing the novel microorganism of the present invention into soil, organic compounds are decomposed by the microorganism introduced into soil in a natural environment. In the apparatus for decomposing organic compounds to which the injection purification method is applied, the holding means for holding the microorganism is a culture tank or the like for holding the microorganism in the form of being introduced into the environment such as soil, and the microorganism held in the holding means. The contact means for contacting with the organic compound is a transportation pump, a supply pipe or the like for introducing microorganisms from the holding means into the environment.
【００３８】環境中で微生物と有機化合物とを直接接触
させる方法を用いる場合には、環境中の有機化合物を分
解することが知られている微生物、例えば、本発明によ
る新規微生物を予め適量に至まで培養しておき、土壌等
の環境中に培養した微生物を投入するようにすることが
望ましい。また、環境中に微生物を投入する場合には、
微生物の活動を活発にし、環境中において微生物による
有機化合物の分解反応の速度を高くするために、微生物
の生存環境を整備する目的から、例えば、グルコース等
の物質や酸素等の適量を環境中に適宜投入することが望
ましい。なお、グルコース等の物質は、固体の状態で環
境中に投入するよりも、微生物が容易に利用でき、ま
た、撹拌作業等による時間およびエネルギーのロスを最
小限に抑えることができるので、水溶液の形態で環境中
に投入することが望ましい。When a method of directly contacting a microorganism with an organic compound in the environment is used, a microorganism known to decompose the organic compound in the environment, for example, the novel microorganism according to the present invention is brought to an appropriate amount in advance. It is desirable that the cultured microorganisms be put into the environment, such as soil, and then the cultured microorganisms be added. Also, when introducing microorganisms into the environment,
In order to activate the activity of microorganisms and increase the rate of decomposition reaction of organic compounds by microorganisms in the environment, for the purpose of maintaining the survival environment of microorganisms, for example, substances such as glucose and appropriate amounts of oxygen and the like are added to the environment. It is desirable to add it appropriately. It should be noted that substances such as glucose are more easily utilized by microorganisms than being put into the environment in a solid state, and the loss of time and energy due to stirring work can be minimized. It is desirable to put it into the environment in the form.
【００３９】さらに、微生物以外に、環境中にグルコー
ス等の物質あるいは酸素等の適量を投入する場合には、
微生物、グルコース等の物質あるいは酸素等を別個に環
境中へ投入してもよいが、環境中へ投入する以前に微生
物を最適な状態としておくために、それぞれを予め混合
した後に環境中へ投入することが望ましい。In addition to microorganisms, when a suitable amount of substances such as glucose or oxygen is added to the environment,
Microorganisms, substances such as glucose or oxygen, etc. may be separately introduced into the environment, but in order to keep the microorganisms in an optimum state before being introduced into the environment, they are mixed beforehand and then introduced into the environment. Is desirable.
【００４０】また、環境中で微生物と有機化合物とを直
接接触させる方法を用いた場合には、微生物を担体に担
持させておくことが好ましい。微生物を担体に担持する
ことで、微生物を高密度に維持することが可能となり、
他の生物との生存競争から微生物を保護することができ
るので、有機化合物の分解を効率的に行うことができ
る。このような担体は、微生物種によって適宜変更可能
ではあるが、通常、上述したような多孔質体が用いられ
る。このような多孔質体では、微生物のマイクロハビタ
ットが形成されるものが望ましく、マイクロハビタット
は微生物を過酷な環境から保護する働きを有する。例え
ば、外部環境が微生物の生存に影響を与えるような乾燥
状態になったとしても、マイクロハビタットの中には毛
管水が保持されているために、微生物への水分の供給は
保たれる。また、マイクロハビタット中の微生物は、土
壌等の環境中において、原生動物等の捕食から保護され
る。そのため、多孔質体を含む担体により、人工的にマ
イクロハビタットを形成することにより、微生物の生残
性を向上することが可能となる。When the method of directly contacting the microorganism with the organic compound in the environment is used, it is preferable to support the microorganism on the carrier. By supporting the microorganisms on the carrier, it becomes possible to maintain the microorganisms at a high density,
Since the microorganism can be protected from the competition for survival with other organisms, the organic compound can be decomposed efficiently. Such a carrier can be appropriately changed depending on the microorganism species, but the porous body as described above is usually used. In such a porous body, it is desirable that a micro-habitat of microorganisms is formed, and the micro-habitat has a function of protecting the microorganism from a harsh environment. For example, even if the external environment becomes dry so as to affect the survival of the microorganisms, the supply of water to the microorganisms is maintained because the capillary water is retained in the microhabitat. Microorganisms in the microhabitat are protected from predation of protozoa and the like in the environment such as soil. Therefore, it is possible to improve the survival of microorganisms by artificially forming microhabitat with a carrier containing a porous body.
【００４１】多孔質体は、安価なものが望ましい。ま
た、土壌等の環境中へ投入して用いるという使用環境を
考慮して、土壌等の環境中における分散性、移動性等を
損なわないものが望ましく、例えば、粒径が１μｍ〜１
０ｍｍ程度の粒子状のものが好ましい。さらに、微生物
の保持や生育に適した構造を有したものが望ましく、例
えば、１００ｎｍ〜１００μｍの孔隙を持つ多孔質体が
望ましい。The porous material is preferably inexpensive. Further, in consideration of the use environment in which it is used by throwing it into the environment such as soil, it is desirable that the dispersibility and mobility in the environment such as soil are not impaired. For example, the particle size is 1 μm to 1
Particles of about 0 mm are preferable. Further, a material having a structure suitable for retaining and growing microorganisms is desirable, and for example, a porous body having a pore size of 100 nm to 100 μm is desirable.
【００４２】さらに、バイオカラム処理法を適用した有
機化合物の分解装置は、有機化合物分解能を有する微生
物、特に、本発明の新規微生物あるいは該微生物を担持
した担体を透水性物質で構成された筒状体等に充填し、
該筒状体等を土壌中に埋設することにより、筒状体等を
透過した透過水と筒状体等の内部に保持された微生物と
が接触し、筒状体等の内部で微生物により有機化合物を
分解する。バイオカラム浄化法を適用した有機化合物の
分解装置において、筒状体等は、微生物を保持する保持
手段として機能するだけでなく、土壌中で移動する地下
水を筒状体等の内部に透過させる接触手段としても機能
する。Further, an apparatus for decomposing an organic compound to which a biocolumn treatment method is applied is a cylindrical structure in which a microorganism capable of decomposing an organic compound, particularly a novel microorganism of the present invention or a carrier carrying the microorganism is composed of a water-permeable substance. Fill the body etc.,
By embedding the tubular body or the like in soil, the permeated water that has permeated the tubular body or the like and the microorganisms retained inside the tubular body or the like come into contact with each other, and the microorganisms inside the tubular body or the like become organic. Decomposes compounds. In the organic compound decomposing device to which the biocolumn purification method is applied, the tubular body not only functions as a holding means for holding microorganisms, but also makes contact with the groundwater moving in the soil to penetrate into the tubular body. It also functions as a means.
【００４３】筒状体等を構成する透水性物質としては、
多孔質構造を有する金属やセラミックス等を用いること
ができる。そして、筒状体等における透水性を調節する
ことにより、適当量の透過水と筒状体等の内部に充填さ
れた微生物とを接触させ、微生物により有機化合物を分
解することができる。微生物を担持させる担体として
は、上記した各種の担体を用いることができる。As the water-permeable substance that constitutes the tubular body, etc.,
A metal or ceramic having a porous structure can be used. Then, by adjusting the water permeability of the tubular body or the like, an appropriate amount of permeated water can be brought into contact with the microorganisms filled inside the tubular body or the like, and the organic compound can be decomposed by the microorganisms. As the carrier for supporting the microorganism, the above-mentioned various carriers can be used.
【００４４】バイオカラム処理法を適用した有機化合物
の分解装置は、主に、地下水中に含まれる有機化合物の
分解に好適に用いることができる。また、バイオカラム
処理法を適用した有機化合物の分解装置によれば、該分
解装置を土壌中に埋設した後は、メンテナンスやエネル
ギーを必要とすることなく、有機化合物を経済的かつ効
率的に分解することができる。The apparatus for decomposing organic compounds to which the biocolumn treatment method is applied can be suitably used mainly for decomposing organic compounds contained in groundwater. Further, according to the organic compound decomposing device to which the biocolumn treatment method is applied, after the decomposing device is buried in the soil, the organic compound is economically and efficiently decomposed without requiring maintenance or energy. can do.
【００４５】本発明による有機化合物分解能を有する新
規微生物は、上述した本発明の微生物の単離方法により
得られ、有機化合物を分解するコマガテラ属、アルスロ
バクター属、ブレビバクテリウム属、クラビバクター
属、ミコバクテリウム属、テラバクター属またはレニバ
クテリウム属に属する細菌である。The novel microorganism capable of degrading an organic compound according to the present invention is obtained by the above-described method for isolating a microorganism of the present invention, and decomposes an organic compound such as Comagatera, Arthrobacter, Brevibacterium, and Claviobacter. , Mycobacterium, Terrabactor, or Renibacterium.
【００４６】また、本発明による有機化合物分解能を有
する新規微生物は、上述した本発明の微生物の単離方法
により得られ、有機化合物を分解するコマガテラ属に属
する細菌であり、分類学的には、後述するように、コマ
ガテラ・ブレビスとして分類される細菌である。コマガ
テラ・ブレビスとして分類される細菌には、後に詳述す
るＹＭＣＴ−００１株が挙げられるが、ＹＭＣＴ−００
１株はコマガテラ・ブレビスとして分類される細菌のひ
とつであって、ＹＭＣＴ−００１株のみがコマガテラ・
ブレビスとして分類される細菌であるとは限らない。換
言すれば、コマガテラ・ブレビスとして分類される細菌
は、ＹＭＣＴ−００１株以外の株をも含む種である。Further, the novel microorganism capable of degrading organic compounds according to the present invention is a bacterium belonging to the genus Comagaterra, which is obtained by the above-mentioned method for isolating microorganisms of the present invention and decomposes organic compounds. As described below, it is a bacterium classified as Comagatera brevis. Bacteria classified as Comagatera brevis include YMCT-001 strain, which will be described in detail later.
One strain is one of the bacteria classified as Komagatella brevis, and only YMCT-001 strain
Not necessarily a bacterium classified as Brevis. In other words, the bacteria classified as Comagatera brevis are species that also include strains other than the YMCT-001 strain.
【００４７】コマガテラ属、アルスロバクター属、ブレ
ビバクテリウム属、クラビバクター属、ミコバクテリウ
ム属、テラバクター属またはレニバクテリウム属に属す
る細菌は、まず高濃度の有機化合物に対する耐性のみを
指標に微生物を選別する、あるいは有機化合物の存在様
態を微生物を採取した環境と同一として選別し、その中
から有機化合物分解能を有する細菌として単離されたも
のであり、有機化合物を唯一の炭素源として成育するこ
とが可能である。Bacteria belonging to the genus Comagatera, the genus Arthrobacter, the genus Brevibacterium, the genus Clavibacter, the genus Mycobacterium, the genus Terrabacter or the genus Renibacterium are microorganisms whose primary index is resistance to high-concentration organic compounds. , Or the presence of organic compounds is the same as the environment in which the microorganisms were collected, and was isolated as a bacterium capable of degrading organic compounds, and grows with organic compounds as the sole carbon source. It is possible.
【００４８】なかでも、コマガテラ属に属する細菌、特
に、コマガテラ・ブレビスは、添加物や誘導物質を必要
とせずに、例えばトリクロロエチレン（以下、ＴＣＥと
記す）、シス−ジクロロエチレン（以下、cis-ＤＣＥと
記す）、トランス−ジクロロエチレン（以下、trans-Ｄ
ＣＥと記す）、1,1-ジクロロエチレン（以下、1,1-ＤＣ
Ｅと記す）、テトラクロロエチレン、ジクロロエタン、
トリクロロエタン、テトラクロロエタン、塩化ビニル、
四塩化炭素、フッ化ビニル、3,3,3-トリフルオロ-2- プ
ロペン、2,3-ジクロロヘキサフルオロ -2-ブテン、臭化
ビニル等のハロゲン化炭化水素やトルエン、フェノー
ル、クレゾール、ジクロロベンゼン、トリクロロベンゼ
ン、1-ブロモナフタレン、ブロモベンゼン、ポリ塩化ビ
フェニル類等の芳香族系炭化水素に代表される各種有機
化合物に対して高分解能を示す。コマガテラ・ブレビス
は、生存環境中において、周囲の有機化合物の濃度がお
よそ500 ppm に達するまでは有機化合物に対する耐性を
示すとともに、周囲の有機化合物を分解して成育する。
また、一般に、微生物を用いて有機化合物等の有害物質
の分解を行う場合には、微生物を貧栄養下におき、微生
物が有害物質を基質として利用せざるをえない条件とす
る。これは、有害物質とともに、微生物が有害物質より
基質として利用しやすい物質が共存した場合には、微生
物は有害物質より基質として利用しやすい物質を優先し
て利用してしまうためである。しかしながら、コマガテ
ラ・ブレビスは、生存環境中において、自らが基質とし
うる炭素源、例えば、グルコースと有機化合物とが共存
していたとしても、グルコースのみを分解することな
く、有機化合物の分解を同時に行うことができる。この
とき、有機化合物以外の炭素源、例えばグルコースが、
コマガテラ・ブレビスの生存環境中に、10000 mg/L以下
の範囲で有機化合物とともに存在していたとしても、コ
マガテラ・ブレビスは有機化合物の分解活性を維持する
ことができる。さらに、グルコースが1800mg/L以下の範
囲では、コマガテラ・ブレビスはグルコースが存在しな
い場合と同様、あるいはそれ以上の有機化合物の分解活
性を維持することができる。従って、コマガテラ・ブレ
ビスは、汚染環境の浄化等に対する有効性および実用性
に優れ、また利用範囲が非常に広いものである。さら
に、有機化合物の分解速度は、有機化合物の分解を開始
した時点でのコマガテラ・ブレビスの菌数に比例して増
大するので、有機化合物の濃度に応じて、有機化合物と
接触するコマガテラ・ブレビスの菌数を調節することに
より、有機化合物の分解速度を調節することが可能であ
る。また、有機化合物の分解に際し、コマガテラ・ブレ
ビスと有機化合物とを接触させるには、有機化合物を含
有する試料中にコマガテラ・ブレビスを直接投入する手
法等があげられるが、コマガテラ・ブレビスを各種の担
体に担持して固定化した後、有機化合物と接触させる
と、多数の菌体を有機化合物と接触させることが可能と
なり、有機化合物の分解速度をさらに高めることができ
る。Among them, bacteria belonging to the genus Comagatera, particularly Comagatera brevis, are known to require, for example, trichlorethylene (hereinafter referred to as TCE), cis-dichloroethylene (hereinafter referred to as cis-DCE) without the need for additives or inducers. Note), trans-dichloroethylene (hereinafter, trans-D
CE), 1,1-dichloroethylene (hereinafter 1,1-DC
E), tetrachloroethylene, dichloroethane,
Trichloroethane, tetrachloroethane, vinyl chloride,
Halogenated hydrocarbons such as carbon tetrachloride, vinyl fluoride, 3,3,3-trifluoro-2-propene, 2,3-dichlorohexafluoro-2-butene and vinyl bromide, toluene, phenol, cresol and dihydrochloride. High resolution for various organic compounds represented by aromatic hydrocarbons such as chlorobenzene, trichlorobenzene, 1-bromonaphthalene, bromobenzene, and polychlorinated biphenyls. Komagatella brevis is resistant to organic compounds in the living environment until it reaches a concentration of approximately 500 ppm, and it decomposes and grows in the surrounding organic compounds.
In general, when using a microorganism to decompose a harmful substance such as an organic compound, the microorganism is placed under oligotrophic conditions under which the microorganism must use the harmful substance as a substrate. This is because, when a substance that a microorganism easily uses as a substrate coexists with a harmful substance, the microorganism preferentially uses the substance easier to use as a substrate than the harmful substance. However, Comagatera brevis simultaneously decomposes organic compounds without decomposing only glucose, even if a carbon source that can be used as a substrate, for example, glucose and organic compounds coexist in a living environment. be able to. At this time, carbon sources other than organic compounds, such as glucose,
Even if it is present together with the organic compound in the living environment of Comagatera brevis in the range of 10000 mg / L or less, Comagatera brevis can maintain the decomposition activity of the organic compound. Furthermore, in the range of glucose of 1800 mg / L or less, Comagatera brevis can maintain the decomposition activity of organic compounds similar to or in the absence of glucose. Therefore, Comagatera brevis is excellent in effectiveness and practicality for purification of polluted environment and has a very wide range of use. Furthermore, since the decomposition rate of organic compounds increases in proportion to the number of bacteria of Comagatera brevis at the time when the decomposition of organic compounds is initiated, the rate of decomposition of Comagatera brevis in contact with an organic compound depends on the concentration of the organic compound. By controlling the number of bacteria, it is possible to control the decomposition rate of organic compounds. In addition, in order to bring Komagatella brevis into contact with the organic compound when decomposing the organic compound, there is a method of directly introducing the Komagatella brevis into the sample containing the organic compound. When it is supported on and immobilized on, and brought into contact with an organic compound, a large number of bacterial cells can be brought into contact with the organic compound, and the decomposition rate of the organic compound can be further increased.
【００４９】なお、上記した本発明によるコマガテラ属
に属する細菌、特に、コマガテラ・ブレビスとして分類
される細菌のひとつであるＹＭＣＴ−００１株は、工業
技術院生命工学工業技術研究所に「ＦＥＲＭ ＢＰ−５
２８２」として寄託されている。The above-mentioned bacteria belonging to the genus Comagatera according to the present invention, in particular YMCT-001 strain, which is one of the bacteria classified as Comagatera brevis, is available from the Institute of Biotechnology, Institute of Industrial Science, "FERM BP-". 5
282 ".
【００５０】[0050]
【発明の実施の形態】以下、本発明を実施するための形
態について説明する。Embodiments of the present invention will be described below.
【００５１】本発明の有機化合物の分解方法は、有機化
合物に汚染された環境、あるいはこの汚染環境と接触し
た試料由来の有機化合物分解能を有する微生物を用いる
ことを基本としている。以下に、本発明の有機化合物の
分解方法の一実施形態について、図１を参照して述べ
る。The method for decomposing an organic compound of the present invention is based on the use of an environment contaminated with an organic compound, or a microorganism having a decomposing ability for an organic compound derived from a sample in contact with the contaminated environment. One embodiment of the method for decomposing an organic compound of the present invention will be described below with reference to FIG.
【００５２】まず、有機化合物に汚染された環境から試
料（汚染環境）を採取する（図１-101）。ここで、試料
採取を行う汚染環境としては、有機化合物に汚染された
環境であれば特に限定されるものではなく、例えば汚染
土壌、汚染地下水、汚染河川水、汚染湖沼水等が挙げら
れる。汚染対象となる有機化合物についてもＴＣＥ、ci
s-ＤＣＥ、trans-ＤＣＥ、1,1-ＤＣＥ等、特に限定され
るものではない。First, a sample (contaminated environment) is taken from the environment contaminated with organic compounds (FIG. 1-101). Here, the polluted environment in which sampling is performed is not particularly limited as long as it is an environment polluted with an organic compound, and examples thereof include polluted soil, polluted groundwater, polluted river water, polluted lake water, and the like. Regarding the organic compounds to be polluted, TCE, ci
s-DCE, trans-DCE, 1,1-DCE, etc. are not particularly limited.
【００５３】次に、採取した汚染環境またはこの汚染環
境と接触した試料から、有機化合物分解能を有する微生
物を単離する（図１-102）。このように、採取した汚染
環境中で成育する微生物の中から、有機化合物分解能を
有する微生物を単離することによって、有機化合物に対
して耐性を有するとともに、有機化合物を炭素源として
成育可能な微生物を効率よく得ることができる。すなわ
ち、有機化合物耐性を有し、かつ有機化合物分解能を有
する微生物が効率よく得られる。このような微生物によ
れば、後述する有機化合物の生物分解工程において、添
加物や誘導物質等を用いることなく、安定した有機化合
物分解能が簡便に得られるため、有機化合物の安定かつ
効率的な分解性能を容易に維持することができる。Next, a microorganism having an organic compound degrading ability is isolated from the collected polluted environment or a sample that comes into contact with this polluted environment (FIG. 1-102). Thus, by isolating a microorganism capable of decomposing an organic compound from the collected microorganisms that grow in a polluted environment, a microorganism that is resistant to the organic compound and can grow using the organic compound as a carbon source. Can be obtained efficiently. That is, a microorganism having resistance to an organic compound and capable of decomposing an organic compound can be efficiently obtained. According to such a microorganism, a stable organic compound decomposing ability can be easily obtained in the biodegradation process of an organic compound described later without using additives or inducers, and thus stable and efficient decomposition of the organic compound can be achieved. Performance can be easily maintained.
【００５４】有機化合物分解能を有する微生物は、上記
した単離工程（後に詳述する）で得られるものであれば
よく、具体的な微生物として特に限定されるものではな
いが、例えばミクロコッカス属、ストマトコッカス属、
プラノコッカス属、スタフィロコッカス属、アクチノミ
セス属、アミコラータ属、アルスロバクター属、ブレビ
バクテリウム属、クラビバクター属、コリネバクテリウ
ム属、ゴルドナ属、コマガテラ属、ミコバクテリウム
属、ノカルディア属、ピメロバクター属、レニバクテリ
ウム属、ロドコッカス属およびテラバクター属に属する
細菌等が挙げられる。表１および表２に、上記した各属
の細菌の代表種（ Type Strain）を示す。これら細菌に
関しては、特開平 7-96289号公報にミクロコッカス属あ
るいはスタフィロコッカス属の細菌を利用することが記
載されているが、これらの属の細菌のうち全ての種が必
ずしも実際の汚染環境下で良好な有機化合物分解能を有
するわけではないことが明らかとなった。Microorganisms capable of decomposing organic compounds may be obtained by the above-mentioned isolation step (described in detail later) and are not particularly limited as specific microorganisms. For example, Micrococcus spp. Stomatococcus,
Planococcus, Staphylococcus, Actinomyces, Amycolata, Arthrobacter, Brevibacterium, Claviobacter, Corynebacterium, Gordona, Comagatera, Mycobacterium, Nocardia, Examples include bacteria belonging to the genus Pimelobacter, the genus Renibacterium, the genus Rhodococcus, and the genus Terabacteria. Tables 1 and 2 show representative strains (Type Strain) of the above-mentioned bacteria of each genus. Regarding these bacteria, JP-A-7-96289 describes that bacteria of the genus Micrococcus or Staphylococcus are used, but all species of bacteria of these genera are not necessarily the actual contaminated environment. It was revealed below that it does not have good organic compound decomposing ability.
【００５５】ここで、実際に浄化が必要な環境とは、一
般に、第１にpHが 4〜10、第１の条件に加えさらに第２
に温度が 277〜313K、第１および第２の条件に加えさら
に第３に有機化合物濃度が 30ppb〜500ppmの広い範囲に
わたっている。これらの環境で生存、増殖し分解能を長
時間維持し、より短時間で有機化合物を分解できなけれ
ば、汚染土壌や地下水中に放置、接触、散布、容器に入
れての埋設、担体に固定した後に散布等して使用するタ
イプの有機化合物を分解する微生物として利用すること
はできない。Here, the environment in which purification is actually required is generally such that firstly the pH is 4 to 10, the second condition is the second condition in addition to the first condition.
In addition to the temperatures of 277 to 313 K, the first and second conditions, and thirdly, the organic compound concentration is in the wide range of 30 ppb to 500 ppm. If it survives and proliferates in these environments and maintains the resolution for a long time and cannot decompose organic compounds in a shorter time, it is left in contaminated soil or groundwater, contacted, sprayed, buried in a container, fixed on a carrier. It cannot be used as a microorganism that decomposes an organic compound of a type that is used after being sprayed.
【００５６】本発明者らは、本発明の微生物の単離方法
における培養工程および有機化合物耐性を有する微生物
の選択工程を経て抽出した有機化合物耐性の微生物のう
ち、特に細菌について、上記汚染環境条件下での有機化
合物分解活性（具体的にはＴＣＥ分解能）を評価した。
その結果、第１と第２の条件において利用できるのは、
表１および表２に併記した有機化合物分解能が△、○、
◎の種であった。第３の条件まで満足させるためには、
○、◎で示した種でなければならない。◎で示した種
は、より短時間(5日間以内に 90%以上分解）で有機化合
物を分解することができることから最も好ましい。これ
らの細菌は何らかの酸化酵素（例えばメタンモノオキシ
ゲナーゼ、トルエンモノオキシゲナーゼ、アンモニア酸
化酵素等）を体内に有し、あるいは体外へ放出し、これ
らの酵素が有機化合物の分解に関わっているものと考え
られる。Among the microorganisms resistant to organic compounds, which have been extracted through the culturing step and the step of selecting microorganisms resistant to organic compounds in the method for isolating microorganisms of the present invention, the present inventors particularly describe the bacteria under the above-mentioned polluted environmental conditions. The organic compound decomposing activity (specifically, TCE decomposing ability) below was evaluated.
As a result, what can be used in the first and second conditions is
The resolution of organic compounds shown in Table 1 and Table 2 is Δ, ○,
It was a seed of ◎. To satisfy the third condition,
Must be the species indicated by ○ and ◎. The species indicated by ⊚ are most preferable because they can decompose organic compounds in a shorter time (90% or more decomposition within 5 days). It is considered that these bacteria have some oxidases (for example, methane monooxygenase, toluene monooxygenase, ammonia oxidase, etc.) in the body or release them outside the body, and these enzymes are involved in the decomposition of organic compounds. .
【００５７】[0057]
【表１】 [Table 1]
【表２】 次に、有機化合物分解能を有する微生物の単離工程につ
いて、上記した細菌を例として詳述する。[Table 2] Next, the step of isolating a microorganism capable of degrading organic compounds will be described in detail by taking the above-mentioned bacterium as an example.
【００５８】すなわち、まず採取した汚染環境に上述し
たような有機化合物を適量加えて培養し（図１-102-
1）、この培養物から高濃度の有機化合物に対して耐性
を有する微生物（耐性菌）を分離する（図１-102-2）。
なお、微生物の培養に際しては、有機化合物の存在様態
を、微生物を採取した環境と同一にすることもできる。
この耐性菌の分離例を以下に示す。なお、以下の例（後
述する実施例を含む）で用いた無機塩培地は以下の組成
を有するものである。なお、培地は、抽出する微生物の
生理的な要求により適宜変更されるものであり、以下の
無機塩培地に限定されるものではない。That is, first, an appropriate amount of the organic compound as described above was added to the collected polluted environment and cultured (Fig. 1-102-
1) Isolate microorganisms (resistant bacteria) resistant to high concentrations of organic compounds from this culture (Fig. 1-102-2).
When culturing the microorganism, the presence state of the organic compound can be made the same as the environment in which the microorganism is collected.
An example of isolation of this resistant bacterium is shown below. The inorganic salt medium used in the following examples (including the examples described below) has the following composition. The medium is appropriately changed depending on the physiological requirements of the microorganism to be extracted, and is not limited to the following inorganic salt medium.
【００５９】 ［無機塩培地組成（無機塩培地1L中）］ Ｎａ2 ＨＰＯ4 9.8g ＫＨ2 ＰＯ4 1.7g （ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 1.0g ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ 0.1g ＭｇＯ 10.75mg ＣａＣＯ3 2.0mg ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ 1.44mg ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ 0.95mg ＣｏＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ 0.28mg ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ 0.25mg Ｈ3 ＢＯ3 0.06mg 濃塩酸 51.3μL まず、例えば高濃度のＴＣＥで汚染された地下水や土壌
を採取し、地下水の場合にはそのまま、土壌の場合には
抽出液を、無機寒天培地上に接種、あるいは、0.1Mリン
酸ナトリウムバッファ 0.1mLおよびトップアガー 0.5mL
に加え、密閉可能な容器内に作製した無機塩寒天培地上
に重層する。なお、抽出液は、滅菌したバイアル瓶に土
壌1gと蒸留水9gとを導入して混合し、超音波処理あるい
は十分振盪した後に得られた水溶液である。トップアガ
ー重層時には、トップアガーを固化した後、例えばＴＣ
Ｅ−アセトニトリル溶液を添加して密閉し、298Kに設定
した恒温槽内で 5〜10日間程度培養する。この際、ＴＣ
Ｅ等の有機化合物は、例えば密閉容器内の有機化合物の
気相濃度が50〜10000ppmとなるように加える。この後、
無機寒天培地上、あるいは、トップアガーに出現したコ
ロニーを白金耳で分離して、有機化合物耐性菌を得る。[Inorganic salt medium composition (in 1 L of inorganic salt medium)] Na 2 HPO 4 9.8 g KH 2 PO 4 1.7 g (NH 4 ) 2 SO 4 1.0 g MgSO 4 .7H 2 O 0.1 g MgO 10.75 mg CaCO 3 2.0mg ZnSO 4 · 7H 2 O 1.44mg FeSO 4 · 7H 2 O 0.95mg CoSO 4 · 7H 2 O 0.28mg CuSO 4 · 5H 2 O 0.25mg H 3 BO 3 0.06mg concentrated hydrochloric 51.3μL first, for example, high concentrations of Collect groundwater or soil contaminated with TCE and inoculate the mineral agar medium with the extract as it is in the case of groundwater or in the case of soil, or 0.1 mL of 0.1 M sodium phosphate buffer and 0.5 mL of top agar.
In addition, overlay the inorganic salt agar medium prepared in a sealable container. The extract is an aqueous solution obtained by introducing 1 g of soil and 9 g of distilled water into a sterilized vial and mixing them, followed by ultrasonic treatment or sufficient shaking. When overlaying the top agar, after solidifying the top agar, for example, TC
E-acetonitrile solution is added and sealed, and the cells are cultured in a thermostat set at 298K for about 5 to 10 days. At this time, TC
The organic compound such as E is added so that the gas phase concentration of the organic compound in the closed container is 50 to 10,000 ppm, for example. After this,
Colonies appearing on the inorganic agar medium or on the top agar are separated with a platinum loop to obtain organic compound-resistant bacteria.
【００６０】次に、上述した有機化合物耐性菌の中から
有機化合物分解能を有する微生物（分解菌）を選択する
（図１-102-3）。この分解菌の選択例を以下に示す。Next, a microorganism (degrading bacterium) having the ability to decompose organic compounds is selected from the above-mentioned organic compound-resistant bacteria (FIG. 1-102-3). An example of selection of this degrading bacterium is shown below.
【００６１】まず、分離した耐性菌をそれぞれＬＢ液体
培地に接種し、例えば298K、100rpmで 1晩振盪培養して
菌の前培養を行い、菌懸濁液をそれぞれ得る。次いで、
バイアルビンに菌懸濁液 100μL 分の菌体（OD 660＝1.
0 ）と無機塩培地25mLとを入れ、有機化合物例えばＴＣ
Ｅおよびcis-ＤＣＥをそれぞれ1ppmになるように加え
る。バイアルビンをテフロンコートされたブチルゴムキ
ャップとアルミキャップシールで密封して、例えば298
K、100rpmで振盪培養し、有機化合物の分解を観察する
ことによって、有機化合物分解能を有する耐性菌を選択
する。すなわち、有機化合物耐性を有し、かつ有機化合
物分解能を有する細菌を単離する。有機化合物の濃度は
ガスクロマトグラフを用いてヘッドスペース法で測定
し、有機化合物の分解率を算出する。図２に耐性菌によ
る有機化合物の分解試験結果の一例を示す。First, each of the isolated resistant strains is inoculated into an LB liquid medium, and the strains are precultured by shaking culture at, for example, 298K and 100 rpm overnight to obtain bacterial suspensions. Then
100 μL of bacterial suspension (OD 660 = 1.
0) and 25 mL of an inorganic salt medium are added, and an organic compound such as TC is added.
Add E and cis-DCE to 1 ppm each. Seal the vial with a Teflon-coated butyl rubber cap and an aluminum cap seal, for example 298
By culturing with shaking at 100 rpm for K and observing the decomposition of the organic compound, a resistant bacterium capable of degrading the organic compound is selected. That is, a bacterium that is resistant to an organic compound and has a capability of degrading an organic compound is isolated. The concentration of the organic compound is measured by a headspace method using a gas chromatograph, and the decomposition rate of the organic compound is calculated. FIG. 2 shows an example of the result of a decomposition test of organic compounds by a resistant bacterium.
【００６２】上述した有機化合物分解能を有する微生物
の単離工程においては、汚染環境中の微生物、例えば、
細菌を一旦高濃度の有機化合物を含む雰囲気中で培養し
ているため、菌数を絞り込むことができ、これによって
有機化合物耐性菌を効率よく得ることが可能となる。こ
のとき、有機化合物として、各種の有機化合物を用いる
ことが可能であるが、微生物を採取した環境中に存在し
た有機化合物を用いると、該有機化合物に耐性を示す微
生物（例えば、細菌）を容易に単離することができる。
また、その際に気相濃度が50〜10000ppmの範囲となるよ
うにＴＣＥ等を加えた条件下で培養することで、より高
度の耐性を有し、ＴＣＥ等の有機化合物を唯一の炭素源
としても成育可能な微生物を効率よく得ることができ
る。ＴＣＥ等の気相濃度が50ppm 未満であると、培養後
の生存菌数が増加して耐性菌の分離効率が低下すると共
に、得られる耐性菌の有機化合物耐性が不十分となるお
それがある。一方、ＴＣＥ等の気相濃度が10000ppmを超
えても耐性菌の分離効率が低下する。また、ＴＣＥ等の
気相濃度が50〜100ppmの範囲では分解菌単離率は、出現
した全コロニーの1/38、 100〜 4000ppmの範囲では分解
菌単離率は出現した全コロニーの 1/4、4000〜 8000ppm
の範囲では分解菌単離率は出現した全コロニーの 1/1、
8000〜10000ppmの範囲では分解菌単離率は出現した全コ
ロニーの 1/2と、高い確率で分解菌を入手することがで
きる。このようなことから培養時のＴＣＥ等の気相濃度
は4000〜8000ppm の範囲とすることがより好ましい。In the above-mentioned step of isolating a microorganism capable of decomposing an organic compound, the microorganism in the polluted environment, for example,
Since the bacteria are once cultivated in an atmosphere containing a high concentration of organic compounds, the number of bacteria can be narrowed down, whereby organic compound-resistant bacteria can be efficiently obtained. At this time, various organic compounds can be used as the organic compound. However, when an organic compound existing in the environment in which the microorganism is collected is used, a microorganism (for example, a bacterium) resistant to the organic compound can be easily produced. Can be isolated.
Also, at that time, by culturing under the condition that TCE or the like is added so that the gas phase concentration is in the range of 50 to 10000 ppm, it has a higher tolerance, and organic compounds such as TCE are used as the sole carbon source. Also, a microorganism capable of growing can be efficiently obtained. If the gas phase concentration of TCE or the like is less than 50 ppm, the number of surviving bacteria after culturing increases, the separation efficiency of resistant strains decreases, and the resistance of the obtained resistant strains to organic compounds may become insufficient. On the other hand, even if the gas phase concentration of TCE or the like exceeds 10,000 ppm, the separation efficiency of resistant bacteria is lowered. Also, in the case where the gas phase concentration of TCE or the like is in the range of 50 to 100 ppm, the degrading bacterium isolation rate is 1/38 of all the appeared colonies, and in the range of 100 to 4000 ppm, the degrading bacterium isolation rate is 1 / of the whole colonies appearing. 4, 4000-8000ppm
In the range of, the degrading bacteria isolation rate is 1/1 of all the colonies that appeared,
In the range of 8,000 to 10,000 ppm, the rate of isolation of degrading bacteria is 1/2 of all colonies that appeared, and it is possible to obtain degrading bacteria with a high probability. From this, it is more preferable that the gas phase concentration of TCE or the like during culture is in the range of 4000 to 8000 ppm.
【００６３】また、有機化合物分解能を有する微生物の
単離工程において、汚染環境から採取した試料中の微生
物を高濃度に有機化合物が存在する条件下で培養する際
に、試料中の微生物を固体培地に白金耳等により適量接
種し、有機化合物の気相濃度が50〜10000ppmの範囲の条
件下で培養すると、有機化合物に耐性の微生物は、多く
の場合、固体培地上にコロニーを形成するので、微生物
のコロニーおよび有機化合物は大気（気相）中で直接接
触することとなる。微生物のコロニーおよび気相濃度が
50〜10000ppmの範囲の有機化合物を大気（気相）中で接
触させることにより、有機化合物分解能を有する可能性
のある微生物を効率的かつ容易に分離および選択するこ
とができ、必要に応じてコロニーを単離して容易に純粋
培養を行うことが可能となる。したがって、迅速かつ確
実に有機化合物耐性を示す微生物を得ることができる。
なお、汚染環境から採取した試料中の微生物を高濃度に
有機化合物が存在する条件下で培養する際、ｐＨ等の培
地の組成および培養温度は適宜変更することができ、微
生物に対して求める特性、例えば、成育条件に合わせて
ｐＨ等の培地の組成および培養温度を適宜変更すること
により、所望の特性（例えば、成育条件）を示す微生物
を容易に選択することが可能となる。また、微生物を培
養する培地としては、微生物がコロニーを形成すること
が可能である形態の培地、例えば、固体培地等を用いる
ことが望ましい。In the process of isolating microorganisms capable of degrading organic compounds, when the microorganisms in the sample collected from the contaminated environment are cultured under conditions where the organic compound is present at a high concentration, the microorganisms in the sample are solidified. Inoculate a suitable amount with a platinum loop or the like, and if the gas phase concentration of the organic compound is cultivated under the condition of 50 to 10,000 ppm, microorganisms resistant to the organic compound often form colonies on the solid medium, The microbial colony and the organic compound come into direct contact with each other in the air (gas phase). Microbial colonies and gas phase concentrations
By contacting organic compounds in the range of 50 to 10,000 ppm in the air (gas phase), microorganisms that may have the ability to decompose organic compounds can be efficiently and easily separated and selected, and colonies can be selected as needed. It becomes possible to easily carry out pure culture after isolation. Therefore, it is possible to rapidly and surely obtain a microorganism that is resistant to organic compounds.
When culturing a microorganism in a sample collected from a contaminated environment under conditions where a high concentration of organic compounds is present, the composition of the medium such as pH and the culturing temperature can be appropriately changed, and the characteristics required for the microorganism For example, by appropriately changing the composition of the medium such as pH and the culturing temperature according to the growth conditions, it becomes possible to easily select a microorganism exhibiting desired characteristics (eg, growth conditions). Further, as the medium for culturing the microorganism, it is desirable to use a medium in a form in which the microorganism can form a colony, for example, a solid medium.
【００６４】そして、上述した有機化合物耐性のみを指
標に選別した微生物（例えば、上記耐性菌）の中から、
有機化合物分解能を有する微生物（例えば、上記分解
菌）を選択することで、有機化合物を唯一の炭素源とし
て成育可能であるとともに、有機化合物の高分解能を有
する微生物を効率よく単離することができる。すなわ
ち、添加物や誘導物質を必要とせずに有機化合物を分解
し、かつ有機化合物の分解工程における安定性に優れた
微生物が効率よく得られる。また、有機化合物に耐性を
示す微生物の中から有機化合物を分解する微生物を選択
する際に、使用用途に応じて各種の有機化合物を用いて
選択工程を実施することによって、種々の有機化合物に
対して分解能を示す微生物、例えば細菌を容易に得るこ
とができる。なお、使用用途によっては、単一の有機化
合物に対して分解能を示す微生物であってもよいが、環
境浄化等に用いる場合には、種々の有機化合物に対して
分解能を示す微生物の方が実用性が高く好ましい。Then, among the microorganisms (for example, the above-mentioned resistant bacteria) selected using only the above-mentioned organic compound resistance as an index,
By selecting a microorganism capable of decomposing an organic compound (for example, the above-mentioned degrading bacterium), it is possible to grow using an organic compound as the sole carbon source, and a microorganism having a high ability to decompose an organic compound can be efficiently isolated. . That is, it is possible to efficiently obtain a microorganism that decomposes an organic compound without requiring additives and inducers and has excellent stability in the decomposition process of the organic compound. Further, when selecting a microorganism that decomposes an organic compound from microorganisms that are resistant to the organic compound, by performing a selection step using various organic compounds according to the intended use, Microorganisms exhibiting decomposing ability, such as bacteria, can be easily obtained. Depending on the intended use, a microorganism capable of degrading a single organic compound may be used, but when used for environmental purification, etc., a microorganism capable of degrading various organic compounds is more practical. Highly preferred and preferred.
【００６５】なお、以上の工程は微生物の単離方法に相
当するものである。また、本発明のコマガテラ属に属
し、有機化合物を分解する新規微生物、すなわち、有機
化合物分解能を有するコマガテラ・ブレビスの一種（工
業技術院生命工学工業技術研究所に「ＦＥＲＭ ＢＰ−
５２８２」として寄託）は、上述した有機化合物に耐性
を示す微生物の分離例および有機化合物を分解する微生
物の選択例に基く微生物の単離工程により得られた微生
物の一つである。コマガテラ・ブレビスについては後に
詳述する。The above steps correspond to the method for isolating microorganisms. In addition, a novel microorganism belonging to the genus Comagatera of the present invention, which decomposes organic compounds, that is, a kind of Comagatera brevis having an ability of decomposing organic compounds (“FERM BP-
5282 ") is one of the microorganisms obtained by the isolation process of microorganisms based on the isolation example of microorganisms resistant to organic compounds and the selection example of microorganisms degrading organic compounds. The Komagatella Brevis will be described in detail later.
【００６６】この後、上記有機化合物分解能を有する微
生物の単離工程で得た、有機化合物耐性を有し、かつ有
機化合物分解能を有する微生物、例えば細菌を、分解対
象の有機化合物に接触させ、対象有機化合物の生物分解
を行う（図１-103）。この生物分解工程は、例えば廃棄
物としての有機化合物（有機化合物を含む廃水や廃ガス
等を含む）を分解する際や、有機化合物で汚染された環
境の浄化等、種々の有機化合物の生物分解処理に適用す
ることができる。Thereafter, a microorganism, such as a bacterium, which is obtained in the above-mentioned isolation step of the microorganism capable of decomposing an organic compound and is resistant to the organic compound and capable of decomposing the organic compound, is brought into contact with the organic compound to be decomposed, Biodegrade organic compounds (Fig. 1-103). This biodegradation process involves the biodegradation of various organic compounds, for example, when decomposing organic compounds as waste (including wastewater containing organic compounds, waste gas, etc.) and purification of environments contaminated with organic compounds. It can be applied to processing.
【００６７】上述した有機化合物の生物分解工程は、添
加物や誘導物質等を必要とせずに有機化合物を有効に微
生物分解することができ、また用いる微生物（例えば細
菌）自体も汚染環境から単離したものであるため、環境
に有害な添加物や誘導物質等による二次汚染、さらには
微生物散布による二次汚染のおそれもない。また、添加
物や誘導物質等を必要としないことから、有機化合物の
生物分解処理を簡便に維持することができる。従って、
特に汚染環境の浄化に対して有効である。例えば、環境
浄化として有機化合物の生物分解を行う場合には、有機
化合物を含む汚染環境中で、分解対象の有機化合物を上
記微生物（例えば細菌）と接触させて分解すればよく、
これによって環境負荷を極力低減した上で、汚染された
環境を効率よく浄化することができる。浄化対象となる
汚染環境としては、前述した土壌、地下水、河川水等が
挙げられる。The above-described biodegradation process of organic compounds can effectively microbially decompose organic compounds without the need for additives and inducers, and the microorganisms (for example, bacteria) themselves used can also be isolated from the polluted environment. Therefore, there is no risk of secondary pollution due to environmentally harmful additives and inducers, and further secondary pollution due to microbial dispersion. Moreover, since no additives or inducers are required, the biodegradation treatment of the organic compound can be simply maintained. Therefore,
It is especially effective for cleaning polluted environments. For example, when performing biodegradation of an organic compound as environmental purification, in a polluted environment containing an organic compound, the organic compound to be degraded may be contacted with the microorganism (for example, a bacterium) to be degraded,
As a result, the environmental load can be reduced as much as possible and the polluted environment can be efficiently purified. Examples of the polluted environment to be purified include the above-mentioned soil, groundwater, river water and the like.
【００６８】分解対象となる有機化合物としては、上述
したように、ＴＣＥ、cis-ＤＣＥ、trans-ＤＣＥ、1,1-
ＤＣＥ、テトラクロロエチレン、ジクロロエタン、トリ
クロロエタン、テトラクロロエタン、塩化ビニル、四塩
化炭素、フッ化ビニル、3,3,3-トリフルオロ-2- プロペ
ン、2,3-ジクロロヘキサフルオロ -2-ブテン、臭化ビニ
ル、トルエン、フェノール、クレゾール、ジクロロベン
ゼン、1-ブロモナフタレン、ブロモベンゼンおよびポリ
塩化ビフェニル類等が挙げられ、分解対象に応じて分解
菌を選択すればよい。特に、本発明によるコマガテラ属
に属する細菌、特に、コマガテラ・ブレビスは、上記し
た各種の有機化合物のいずれに対しても分解能を示すた
め、利用範囲が広く実用性に優れるものである。As the organic compounds to be decomposed, as described above, TCE, cis-DCE, trans-DCE, 1,1-
DCE, tetrachloroethylene, dichloroethane, trichloroethane, tetrachloroethane, vinyl chloride, carbon tetrachloride, vinyl fluoride, 3,3,3-trifluoro-2-propene, 2,3-dichlorohexafluoro-2-butene, vinyl bromide , Toluene, phenol, cresol, dichlorobenzene, 1-bromonaphthalene, bromobenzene, polychlorinated biphenyls, and the like, and the degrading bacterium may be selected according to the subject to be degraded. In particular, the bacterium belonging to the genus Comagatera according to the present invention, in particular Comagatera brevis, exhibits a resolving power to any of the various organic compounds described above, and is therefore widely used and excellent in practicality.
【００６９】次に、上述した有機化合物に耐性を示す微
生物の単離例および有機化合物を分解する微生物の選択
例に基く微生物の単離工程例により得られた微生物の一
つであるコマガテラ属に属する細菌、特に、コマガテラ
・ブレビスを代表する株（以下、ＹＭＣＴ−００１株と
略記する）、すなわち本発明の新規微生物のひとつにつ
いて述べる。Next, the genus Comagatera, which is one of the microorganisms obtained by the above-mentioned example of isolation of microorganisms resistant to organic compounds and example of the isolation process of microorganisms based on the example of selection of microorganisms degrading organic compounds, A bacterium belonging to the present invention, particularly a strain representing Comagatera brevis (hereinafter abbreviated as YMCT-001 strain), that is, one of the novel microorganisms of the present invention will be described.
【００７０】ＹＭＣＴ−００１株の細菌学的性質は、以
下に示す通りである。The bacteriological properties of the YMCT-001 strain are as shown below.
【００７１】 （ａ）形態的性質等 (1) 細胞の形および大きさ 肉汁寒天培地：30℃、 6時間培養で 0.9〜 1.1× 1.5〜 1.8μｍの 短桿菌 ：30℃、24時間培養で 1.0〜 1.2× 1.2〜 1.3μｍの 球状短桿菌 肉汁液体培地：30℃、 6時間培養では成育を認めず ：30℃、24時間培養で 1.0〜 1.2× 1.1〜 1.3μｍの 球状短桿菌 (2) 多形性の有無 ：多形性を認める ：rod-coccus cycleを認める（ただし、顕著で はない） (3) 運動性 ：運動性を認めず (4) 胞子の有無 ：胞子の形成を認めず (5) 集落の周辺細胞の伸長：− （ｂ）培養的性質 (1) 肉汁寒天平板培養 ：集落は平滑、周縁は波状でわずかに光沢が 認められる ：特徴的集落色素、拡散性色素の生成は認め られない (2) 肉汁液体培養 ：培地全体の成育及び少量の沈殿が認められ るが、表面被膜の形成は認められない (3) 肉汁ゼラチン穿刺培養 ：培地の上部に成育が認められるが、液化は 認められない (4) リトマス・ミルク ：成育が認められない （ｃ）生理学的性質 (1) グラム染色性 ：＋ (2) 硝酸塩の還元 ：＋ (3) 亜硝酸塩の還元 ：− (4) 脱窒反応 ：− (5) ＭＲテスト ：− (6) ＶＰテスト ：− (7) インドールの生成 ：− (8) 硫化水素の生成 TSI寒天 ：− 酢酸鉛液体培地 ：− (9) デンプンの分解 ：− (10) クエン酸の利用 Koserの培地 ：微弱 Christensenの培地：＋ (11) 無機窒素源の利用 硝酸塩 ：− アンモニウム塩 ：＋ (12) 色素の生成 ：− (13) ウレアーゼ ：− (14) オキシターゼ ：− (15) カタラーゼ ：＋ (16) 成育の範囲 pH ： 6.0〜8.5 （ 7.0〜8.5 で良好） 温度 ： 4〜39℃ （20〜27℃で良好） (17) 酸素に対する態度 ：好気性 (18) Ｏ−Ｆテスト ：− (19) 酸の生成 L-アラビノース：− D-キシロース ：− D-グルコース ：− D-マンノース ：− D-フラクトース：− D-ガラクトース：− マルトース ：− シュークロース：− ラクトース ：− トレハロース ：− D-ソルビトール：− D-マンニトール：− イノシトール ：− グリセリン ：− デンプン ：− ラフィノース ：− サッカロース ：− セルビオース ：− マンニット ：− (20) ガスの生成 L-アラビノース：− D-キシロース ：− D-グルコース ：− D-マンノース ：− D-フラクトース：− D-ガラクトース：− マルトース ：− シュークロース：− ラクトース ：− トレハロース ：− D-ソルビトール：− D-マンニトール：− イノシトール ：− グリセリン ：− デンプン ：− （ｄ）他の生理学的性質 (1) アルギニンの加水分解：− (2) エスクリンの分解 ：− (3) Ｔｗｅｅｎ80の分解 ：＋ (4) ＤＮａｓｅの産出 ：− (5) ゼラチンの液化 ：− (6) 抗酸性 ：− （ｅ）化学分類学的性質 (1) DNAの塩基組成（GC含量） ：72（mol%） (2) 細胞壁のジアミノ酸 ： meso-ジアミノピメリン酸 (3) 細胞壁のアラビノ・ガラクタンポリマー：− (4) グリコリル試験 ：− (5) 菌体脂質の種類 ミコール酸 ：− キノン系 ：MK-8(H4 ) 上述した細菌学的性質をもとに、「バージェイズ マニ
ュアル オブ システマティック バクテリオロジー
ボリューム２，1986(Bergey's Manual of Systematic B
acteriology, Volume 2, 1986 ）」および「バージェイ
ズ マニュアルオブ デターミナティブ バクテリオロ
ジー 1994(Bergey's Manual of Determinative Bacter
iology, 1994）」に従って検索を行ったところ、ＹＭＣ
Ｔ−００１株は、胞子を形成せず、細胞の形態が多形性
を示すグラム陽性桿菌で、土壌等の自然環境に広く分布
しているコリネフォルム細菌と同定された。しかしなが
ら、ＹＭＣＴ−００１株は、上記文献に記載されている
いずれの菌種とも性状が異なり、ＹＭＣＴ−００１株の
分類学的な位置を確定するには至らなかった。(A) Morphological properties, etc. (1) Cell shape and size Meat broth agar medium: 0.9-1.1 x 1.5-1.8 μm short bacilli at 30 ° C for 6 hours culture: 1.0 at 30 ° C, 24-hour culture ~ 1.2 x 1.2 ~ 1.3 μm globular bacilli Bacterial broth: No growth observed at 30 ℃, 6 hours culture: 1.0 〜 1.2 x 1.1 ~ 1.3 um globular bacilli (2) Presence or absence of morphology: Polymorphism is recognized: Rod-coccus cycle is recognized (though not remarkable) (3) Motility: No motility is recognized (4) Spore presence / absence: Spore formation is not recognized ( 5) Elongation of peripheral cells of the colony :-( b) Culture properties (1) Meat broth agar plate culture: The colony is smooth, the periphery is wavy and slightly glossy: The characteristic colony pigment and diffusible pigment are formed. Not observed (2) Liquid culture of broth: Growth of the entire medium and a small amount of precipitation are observed, but no surface film is formed (3) Juice broth Stab culture: Growth is observed in the upper part of the medium, but no liquefaction is observed (4) Litmus milk: No growth is observed (c) Physiological properties (1) Gram stainability: + (2) Nitrate Reduction: + (3) Reduction of nitrite:-(4) Denitrification reaction:-(5) MR test:-(6) VP test:-(7) Indole formation:-(8) Hydrogen sulfide formation TSI Agar:-Lead acetate liquid medium:-(9) Starch decomposition:-(10) Use of citric acid Koser's medium: Weak Christensen's medium: + (11) Use of inorganic nitrogen source Nitrate:-Ammonium salt: + ( 12) Pigment formation:-(13) Urease:-(14) Oxidase:-(15) Catalase: + (16) Growth range pH: 6.0 ~ 8.5 (Good at 7.0 ~ 8.5) Temperature: 4 ~ 39 ℃ ( (Good at 20-27 ℃) (17) Attitude toward oxygen: Aerobic (18) OF test:-(19) Acid formation L-arabinose: -D- Xylose: -D-Glucose: -D-Mannose: -D-Fructose: -D-Galactose: -Maltose: -Sucrose: -Lactose: -Trehalose: -D-sorbitol: -D-mannitol: -Inositol: -Glycerin :-Starch:-Raffinose:-Saccharose:-Serubiose:-Mannitol:-(20) Production of gas L-arabinose:-D-xylose:-D-Glucose:-D-mannose:-D-fructose:-D -Galactose:-Maltose:-Sucrose:-Lactose:-Trehalose:-D-sorbitol:-D-mannitol:-Inositol:-Glycerin:-Starch:-(d) Other physiological properties (1) Hydrolysis of arginine Decomposition :-( 2) Esculin decomposition :-( 3) Tween80 decomposition: + (4) DNase production :-( 5) Gelatin liquefaction :-( 6) Anti-acidity :-( e) Chemo-taxonomic properties (1) DNA base composition (GC content): 72 (mol%) (2) ) Cell wall diamino acid: meso-diaminopimelic acid (3) Cell wall arabino-galactan polymer: − (4) Glycolyl test: − (5) Cell lipid type Mycolic acid: − Quinone system: MK-8 (H 4 ). Based on the above-mentioned bacteriological properties, "Berjays Manual of Systematic Bacteriology"
Volume 2, 1986 (Bergey's Manual of Systematic B
acteriology, Volume 2, 1986) "and"Bergey's Manual of Determinative Bacter
Biology, 1994) ”, YMC
The strain T-001 is a Gram-positive bacillus that does not form spores and has a polymorphic cell morphology, and was identified as a coryneform bacterium widely distributed in natural environments such as soil. However, the YMCT-001 strain has different properties from any of the bacterial species described in the above-mentioned documents, and the taxonomic position of the YMCT-001 strain could not be determined.
【００７２】そこで、遺伝的性質から分類を試みるため
に、ＹＭＣＴ−００１株の16S rRNAの塩基配列を決定
し、上記した細菌学的性質をも考慮して、ＹＭＣＴ−０
０１株の16S rRNAの塩基配列とＹＭＣＴ−００１株に近
縁と考えられる菌種の16S rRNAの塩基配列とを比較し、
Gene Works（帝人システムテクノロジー株式会社）を用
いて近隣結合法（NJ法： neighbor-joining method）に
より分子系統樹を作成した。図３に、得られた分子系統
樹を示す。Therefore, in order to attempt classification based on the genetic characteristics, the nucleotide sequence of the 16S rRNA of the YMCT-001 strain was determined, and the above-mentioned bacteriological characteristics were also taken into consideration.
The 16S rRNA nucleotide sequence of the 01 strain and the 16S rRNA nucleotide sequence of the bacterial species considered to be closely related to the YMCT-001 strain were compared,
A molecular phylogenetic tree was created by the neighbor-joining method (NJ method) using Gene Works (Teijin System Technology Co., Ltd.). The obtained molecular phylogenetic tree is shown in FIG.
【００７３】図３に示したように、遺伝子による解析に
よれば、ＹＭＣＴ−００１株はテラバクター属に属する
細菌と近縁関係にあり、進化距離から検討すると、ＹＭ
ＣＴ−００１株はテラバクター属と近縁関係にあるが、
異なる属に属する細菌である可能性が高いことが示唆さ
れた。なお、図３において、分子系統樹の枝の長さは推
定塩基置換数に比例し、バーのスケールは進化距離を示
している。次に、ＹＭＣＴ−００１株とテラバクター属
に属する細菌との細菌学的性質を考慮して検討したとこ
ろ、（ｅ）化学分類学的性質に記載したように、ＹＭＣ
Ｔ−００１株では、細胞壁のジアミノ酸が meso-ジアミ
ノピメリン酸であるのに対し、テラバクター属に属する
細菌は細胞壁のジアミノ酸が LL-ジアミノピメリン酸で
あり、細胞壁のジアミノ酸の型が異なるという結果を得
ることができた。一般に、細胞壁のジアミノ酸の型は、
分類学的に属を区別する一指標である。As shown in FIG. 3, according to gene analysis, the YMCT-001 strain is closely related to bacteria belonging to the genus Terrabactor, and when examined from the evolutionary distance, YMCT-001 strain is YMCT-001 strain.
The CT-001 strain is closely related to the genus Terrabactor,
It was suggested that the bacteria are likely to belong to different genera. In FIG. 3, the branch length of the molecular phylogenetic tree is proportional to the estimated number of base substitutions, and the bar scale indicates the evolution distance. Next, the YMCT-001 strain and a bacterium belonging to the genus Terrabacter were examined in consideration of the bacteriological properties. As a result, as described in (e) Chemotaxonomic properties, YMCT-001 strain
In the T-001 strain, the diamino acid of the cell wall is meso-diaminopimelic acid, whereas in the bacteria belonging to the genus Terrabactor, the diamino acid of the cell wall is LL-diaminopimelic acid, and the diamino acid type of the cell wall is different. I was able to get it. Generally, the types of diamino acids in the cell wall are
It is an index that taxonomically distinguishes genera.
【００７４】したがって、本発明者らは、ＹＭＣＴ−０
０１株のテラバクター属に対する進化距離およびＹＭＣ
Ｔ−００１株の細菌学的性質に鑑みて、ＹＭＣＴ−００
１株をテラバクター属と近縁関係にある新種と位置づけ
るのが最も妥当であるとの結論に達し、ＹＭＣＴ−００
１株を新しい属に属する新種の細菌と認め、コマガテラ
・ブレビス（Komagatella brevis）と命名した。Therefore, the present inventors have found that YMCT-0
Evolutionary distance and YMC of 01 strain to Terabacteria
In view of the bacteriological properties of the T-001 strain, YMCT-00
It was concluded that it was most appropriate to position one strain as a new species closely related to the genus Terrabactor, and YMCT-00
One strain was identified as a new species of bacterium belonging to a new genus and was named Komagatella brevis.
【００７５】そこで、コマガテラ・ブレビスを中心とす
る進化距離に着目して細菌学的性質を検討した。この進
化距離が比較的近いものについて、コマガテラ・ブレビ
スと同様の性質を示すか否かについて調べた結果が前述
した表１および表２である。その結果、これらの表から
明らかなように、アルスロバクター属、ブレビバクテリ
ウム属、クラビバクター属、ミコバクテリウム属、テラ
バクター属またはレニバクテリウム属がコマガテラ属と
同様の性質を示すことが分かった。前述した図３には、
これらの各属の、コマガテラ属からの進化距離を示して
いる。Therefore, the bacteriological properties were examined by focusing on the evolution distance centered on Comagatera brevis. Tables 1 and 2 described above show the results of examining whether or not the evolution distances are relatively close to each other, whether or not they exhibit the same properties as those of the Comagatera brevis. As a result, as is clear from these tables, Arthrobacter, Brevibacterium, Claviobacter, Mycobacterium, Terabacteria or Renibacterium have the same properties as Comagatera. It was In FIG. 3 described above,
The evolutionary distance of each of these genera from the genus Comagaterra is shown.
【００７６】ＹＭＣＴ−００１株の培養に関し、ＹＭＣ
Ｔ−００１株は277Kから313Kまでの温度範囲で成育可能
ではあるが、培養温度は 283〜303Kとすることが好まし
く、最も適する培養温度は 288〜298Kである。また、培
地のpHは 6.0〜 9.5、さらにpH6.5〜 8.5とすると好ま
しく、最も培養に適する培地のpHは 7.5〜 9.0である。
培地としては、一般細菌用のＬＢ培地、ＮＢ培地等、お
よび各種無機塩培地を用いて成育可能である。Regarding the culture of YMCT-001 strain, YMC
Although the T-001 strain can grow in the temperature range of 277K to 313K, the culture temperature is preferably 283 to 303K, and the most suitable culture temperature is 288 to 298K. The pH of the medium is preferably 6.0 to 9.5, more preferably 6.5 to 8.5, and the pH of the medium most suitable for culture is 7.5 to 9.0.
As the medium, LB medium for general bacteria, NB medium and the like, and various inorganic salt mediums can be used for growth.
【００７７】ＹＭＣＴ−００１株は、ＴＣＥ、cis-ＤＣ
Ｅ、trans-ＤＣＥ、1,1-ＤＣＥ等を唯一の炭素源として
成育可能であり、かつテトラクロロエチレン、ジクロロ
エタン、トリクロロエタン、テトラクロロエタン、塩化
ビニル、四塩化炭素、フッ化ビニル、3,3,3-トリフルオ
ロ-2- プロペン、2,3-ジクロロヘキサフルオロ -2-ブテ
ン、臭化ビニル、トルエン、フェノール、クレゾール、
ジクロロベンゼン、トリクロロベンゼン、1-ブロモナフ
タレン、ブロモベンゼンおよびポリ塩化ビフェニル類等
の種々の有機化合物に対して分解能を示す。従って、有
機化合物に汚染された環境の微生物による浄化・分解処
理等において、有効かつ幅広く利用することができ、実
用性に優れるものである。また、ＹＭＣＴ−００１株を
バイオリアクタに適用し、菌数を調整することによっ
て、より高濃度の有機化合物を効率よく分解することが
できる。なお、ＹＭＣＴ−００１株は、 pH6.0〜8.5 お
よび283〜303Kの温度範囲で有機化合物を良好に分解す
るので、ＹＭＣＴ−００１株をバイオリアクタに適用し
た場合には、バイオリアクタ内の菌床のpHを6.0 〜8.5
とし、かつ温度を 283〜303Kの範囲に制御することが望
ましい。YMCT-001 strain is TCE, cis-DC
E, trans-DCE, 1,1-DCE, etc. can be grown as the only carbon source, and tetrachloroethylene, dichloroethane, trichloroethane, tetrachloroethane, vinyl chloride, carbon tetrachloride, vinyl fluoride, 3,3,3- Trifluoro-2-propene, 2,3-dichlorohexafluoro-2-butene, vinyl bromide, toluene, phenol, cresol,
It shows the ability to decompose various organic compounds such as dichlorobenzene, trichlorobenzene, 1-bromonaphthalene, bromobenzene and polychlorinated biphenyls. Therefore, it can be effectively and widely used in purification / decomposition treatment by microorganisms in an environment contaminated with organic compounds, and is highly practical. Further, by applying the YMCT-001 strain to a bioreactor and adjusting the number of bacteria, it is possible to efficiently decompose higher-concentration organic compounds. In addition, since the YMCT-001 strain satisfactorily decomposes organic compounds in the temperature range of pH 6.0 to 8.5 and 283 to 303 K, when the YMCT-001 strain is applied to the bioreactor, the bacterial bed in the bioreactor is PH of 6.0-8.5
And it is desirable to control the temperature in the range of 283 ~ 303K.
【００７８】[0078]
【実施例】次に、本発明の具体的な実施例について説明
する。Next, specific examples of the present invention will be described.
【００７９】（実施例１）まず、バイアルビンに前述し
た無機塩培地25mLとＹＭＣＴ−００１株のＬＢ培地培養
液 100μL （OD 660=1.0）分の菌体とを入れ、これを複
数用意した。別々のバイアルビンに、ＴＣＥ、cis-ＤＣ
Ｅ、trans-ＤＣＥをそれぞれ1ppmの濃度になるように加
えた。これらを298K、100rpmで振盪培養しつつ、ガスク
ロマトグラフィを用いて各有機化合物の濃度の経時変化
を測定した。それらの結果を図４に示す。Example 1 First, 25 mL of the above-described inorganic salt medium and 100 μL (OD 660 = 1.0) of LB medium culture solution of YMCT-001 strain were placed in a vial, and a plurality of them were prepared. TCE, cis-DC in separate vials
E and trans-DCE were added to each to have a concentration of 1 ppm. While culturing these with shaking at 298 K and 100 rpm, changes with time of the concentration of each organic compound were measured using gas chromatography. The results are shown in FIG.
【００８０】図４から明らかなように、いずれの有機化
合物も10日以内で検出されなくなった。なお、これら以
外にも、四塩化炭素、ジクロロエタン、トリクロロエタ
ン、テトラクロロエタン、塩化ビニル、テトラクロロエ
チレン、ジクロロベンゼン、ポリ塩化ビフェニル（ＰＣ
Ｂ）類に対しても分解活性を示した。As is clear from FIG. 4, none of the organic compounds was detected within 10 days. In addition to these, carbon tetrachloride, dichloroethane, trichloroethane, tetrachloroethane, vinyl chloride, tetrachloroethylene, dichlorobenzene, polychlorinated biphenyl (PC
It also showed degrading activity against B).
【００８１】（実施例２）まず、バイアルビンに無機塩
培地25mLと共に、ＹＭＣＴ−００１株のＬＢ培養液 100
μL （OD 660=1.0）分の菌体を入れたもの（サンプル
A）、サンプル Aと比較して25倍の菌数となるように遠
心濃縮した菌液 100μL 分の菌体を入れたもの（サンプ
ル B）、サンプル Aと比較して 100倍の菌数となるよう
に遠心濃縮した菌液 100μL 分の菌体を入れたもの（サ
ンプル C）、およびサンプル Aに用いた培養液を 1/4稀
釈した菌液 100μL 分の菌体を入れたもの（サンプル
D）をそれぞれ用意した。(Example 2) First, 25 mL of an inorganic salt medium was placed in a vial bottle and 100 ml of an LB culture solution of YMCT-001 strain.
μL (OD 660 = 1.0) of cells (sample)
A), which contains 100 μL of bacterial cells concentrated by centrifugation so that the number of bacteria is 25 times that of sample A (Sample B), and the number of bacteria is 100 times that of sample A 100 μL of bacterial cells that had been centrifugally concentrated as described above (Sample C), and 1/4 dilution of the culture solution used in Sample A containing 100 μL of bacterial cells (Sample)
D) was prepared respectively.
【００８２】上述した各サンプルにＴＣＥをそれぞれ1p
pmの濃度になるように加え、298K、100rpmで振盪培養し
つつ、ＴＣＥ濃度の経時変化をそれぞれ測定した。それ
らの結果を図５に示す。図５から明らかなように、ＴＣ
Ｅの分解を開始する時点において、ＴＣＥと接触する菌
数を増やすことによって、ＴＣＥの完全分解に至る時間
を大幅に短縮できることが分かる。1 p of TCE was added to each sample described above.
The change in TCE concentration with time was measured while culturing with shaking at 298 K and 100 rpm in addition to the concentration of pm. The results are shown in FIG. As is clear from FIG.
It can be seen that by increasing the number of bacteria that come into contact with TCE at the time of starting the decomposition of E, the time required for complete decomposition of TCE can be significantly shortened.
【００８３】（実施例３）ＴＣＥ濃度を1ppm、2ppm、3p
pm、cis-ＤＣＥ濃度を1ppm、5ppm、8ppm、trans-ＤＣＥ
濃度を1ppm、2ppmと変化させると共に、25倍濃縮菌液 1
00μL 分の菌体を加える以外は、実施例２と同様にして
分解試験を行った。それらの結果を図６、図７および図
８にそれぞれ示す。これらの図から明らかなように、Ｙ
ＭＣＴ−００１株は高濃度の有機化合物の分解能力を有
することが分かる。(Example 3) The TCE concentration was set to 1 ppm, 2 ppm, 3 p
pm, cis-DCE concentration 1ppm, 5ppm, 8ppm, trans-DCE
The concentration was changed to 1ppm and 2ppm, and 25 times concentrated bacterial solution 1
A decomposition test was conducted in the same manner as in Example 2 except that 00 μL of cells were added. The results are shown in FIGS. 6, 7 and 8, respectively. As is clear from these figures, Y
It can be seen that the MCT-001 strain has the ability to decompose high-concentration organic compounds.
【００８４】（実施例４）まず、バイアルビンに無機塩
培地25mLと共に、ＹＭＣＴ−００１株のＬＢ培養液 100
μL （OD 660=1.0）分の菌体を入れ、グルコースを全有
機炭素（ TOC）として、0.18mg/L（サンプル E）、18mg
/L（サンプル F）、1800mg/L（サンプル G）、10000mg/
L （サンプル H）および無添加（対照区；サンプル I）
となるように調整した各サンプルをそれぞれ用意した。Example 4 First, 100 mL of LB culture solution of YMCT-001 strain was placed in a vial together with 25 mL of an inorganic salt medium.
Add μL (OD 660 = 1.0) of cells and use glucose as total organic carbon (TOC), 0.18mg / L (Sample E), 18mg
/ L (Sample F), 1800 mg / L (Sample G), 10000 mg /
L (sample H) and no addition (control section; sample I)
Each sample was prepared so that
【００８５】上述した各サンプルにＴＣＥをそれぞれ1p
pmの濃度になるように加え、298K、100rpmで振盪培養し
つつ、ＴＣＥ濃度の経時変化をそれぞれ測定した。それ
らの結果を図９に示す。1 p of TCE was added to each sample described above.
The change in TCE concentration with time was measured while culturing with shaking at 298 K and 100 rpm in addition to the concentration of pm. The results are shown in FIG.
【００８６】図９から明らかなように、ＹＭＣＴ−００
１株は、ＴＣＥおよびグルコースが共存していたとして
も、本実施例におけるグルコース濃度の範囲でＴＣＥ分
解活性を示した。また、図９から明らかなように、ＹＭ
ＣＴ−００１株は、グルコースが0.18mg/L〜1800mg/Lの
範囲では、グルコースが共存しない場合と同等、あるい
はそれ以上のＴＣＥ分解活性を示した。なお、ＴＣＥ以
外にも、四塩化炭素、ジクロロエタン、トリクロロエタ
ン、テトラクロロエタン、塩化ビニル、テトラクロロエ
チレン、ジクロロベンゼンおよびポリ塩化ビフェニル
（ＰＣＢ）類に対してほぼ同様の分解活性を示した。As is clear from FIG. 9, YMCT-00
One strain exhibited TCE-degrading activity in the glucose concentration range of this Example, even if TCE and glucose coexisted. In addition, as is clear from FIG.
The CT-001 strain showed TCE degrading activity equivalent to or higher than that in the absence of glucose in the range of glucose of 0.18 mg / L to 1800 mg / L. In addition to TCE, almost the same decomposition activity was exhibited for carbon tetrachloride, dichloroethane, trichloroethane, tetrachloroethane, vinyl chloride, tetrachloroethylene, dichlorobenzene and polychlorinated biphenyls (PCBs).
【００８７】（実施例５）まず、バイアルビンに、約10
0ppmのcis-ＤＣＥに汚染された体積25mlの褐色森林土
（cis-ＤＣＥ 100mg／kg土壌）と無機塩培地10mLとＹＭ
ＣＴ−００１株のＬＢ培養液 100μL （OD 660=1.0）分
の菌体とを加え（cis-ＤＣＥ液中濃度約4ppm）、それ以
外は実施例２と同様にして分解試験を行った。その結
果、土壌に含まれていたcis-ＤＣＥは 7日後に検出され
なくなった。Example 5 First, about 10
25ml brown forest soil contaminated with 0ppm cis-DCE
(Cis-DCE 100mg / kg soil) and inorganic salt medium 10mL and YM
100 μL (OD 660 = 1.0) of the LB culture solution of the CT-001 strain was added to the bacterial cells (concentration in cis-DCE solution was about 4 ppm), and the degradation test was conducted in the same manner as in Example 2. As a result, cis-DCE contained in the soil was not detected after 7 days.
【００８８】（実施例６）まず、バイアルビンに約2ppm
のcis-ＤＣＥと約1ppmのＴＣＥに汚染された地下水25mL
とＹＭＣＴ−００１株のＬＢ培養液 100μL （OD 660=
1.0）分の菌体とを加え、それ以外は実施例２と同様に
して分解試験を行った。その結果、cis-ＤＣＥおよびＴ
ＣＥ共に14日以内に検出されなくなった。Example 6 First, about 2 ppm was added to a vial bottle.
25 mL of groundwater contaminated with cis-DCE and TCE of about 1 ppm
And YMCT-001 strain LB culture solution 100 μL (OD 660 =
The decomposition test was conducted in the same manner as in Example 2 except that 1.0) of bacterial cells was added. As a result, cis-DCE and T
No CE was detected within 14 days.
【００８９】（実施例７）ＹＭＣＴ−００１株を各種の
担体に保持して固定化し、 10ppmのＴＣＥの分解試験を
行った。担体としては、以下の表３に示すものをそれぞ
れ用いた。図１０に固定化菌による分解試験結果の一例
（担体：アルギン酸カルシウムゲル）を示す。図１０か
ら明らかなように、遊離状態の細菌と比較して、多量の
細菌を分解対象物と接触させることができる固定化菌体
を用いることによって、より高濃度の有機化合物を短時
間で分解することができた。Example 7 The YMCT-001 strain was held on various carriers and immobilized, and a 10 ppm TCE degradation test was conducted. As carriers, those shown in Table 3 below were used. FIG. 10 shows an example of the result of a decomposition test using immobilized bacteria (carrier: calcium alginate gel). As is clear from FIG. 10, compared with free bacteria, by using immobilized cells that can bring a large amount of bacteria into contact with the decomposition target, a higher concentration of organic compounds can be decomposed in a short time. We were able to.
【００９０】[0090]
【表３】 （実施例８）テフロン製濾紙をＹＭＣＴ−００１株の懸
濁液（OD 660=1.0）に浸漬し、２５℃の下で１８時間振
盪培養を行った後、減圧処理を行って、濾紙の内部にＹ
ＭＣＴ−００１株を担持した。なお、ＹＭＣＴ−００１
株を担持直後は、水が濾紙の内部に浸潤しているため、
発水性を回復するまで乾燥させた。このようにしてＹＭ
ＣΤ−００１株を担持したテフロン製濾紙１１１を準備
した。[Table 3] (Example 8) A Teflon-made filter paper was immersed in a suspension of YMCT-001 strain (OD 660 = 1.0), shake-cultured at 25 ° C for 18 hours, and then subjected to a reduced pressure treatment to remove the inside of the filter paper To Y
The MCT-001 strain was carried. Note that YMCT-001
Immediately after supporting the strain, water infiltrates inside the filter paper,
Dried until water regained. In this way YM
A Teflon filter paper 111 carrying the C-001 strain was prepared.
【００９１】一方、 400cm× 400cm× 800cmのコンクリ
ート性ライシメータに、各種の有機化合物で汚染された
土壌を詰めた。このとき、図１１に示すように、アクリ
ル製容器に詰めた土壌には、環境中の土壌と同様に、不
飽和帯１１２と、透水層１１３および難透水層１１４か
らなる飽和帯１１５とが構成されている。On the other hand, a concrete lysimeter of 400 cm × 400 cm × 800 cm was filled with soil contaminated with various organic compounds. At this time, as shown in FIG. 11, in the soil filled in the acrylic container, an unsaturated zone 112 and a saturated zone 115 composed of a water permeable layer 113 and a water impermeable layer 114 are formed as in the soil in the environment. Has been done.
【００９２】そして、この土壌中に、ＹＭＣＴ−００１
株を担持した上記テフロン製濾紙１１１を難透水層１１
４まで達するように埋め込んだ。この様子を、図１１に
示す。なお、土壌中における有機化合物の濃度は、ΤＣ
Ｅの濃度が５ｐｐｍ、トルエンの濃度が１００ｐｐｍ、
フェノールの濃度が１００ｐｐｍ、フッ化ビニルの濃度
が５ｐｐｍとなっている。Then, in this soil, YMCT-001
The above-mentioned Teflon-made filter paper 111 carrying the strain is used as the impermeable layer 11
I embedded it to reach 4. This state is shown in FIG. The concentration of organic compounds in soil is
The concentration of E is 5ppm, the concentration of toluene is 100ppm,
The concentration of phenol is 100 ppm and the concentration of vinyl fluoride is 5 ppm.
【００９３】そして、ＹＭＣΤ−００１株を担持したテ
フロン製濾紙１１１を土壌中に埋め込んだ後、ライシメ
ータの上部に蓋をして樹脂で密封し、土壌を経時的にサ
ンプリングして、土壌中に含まれる各有機化合物の濃度
を測定した。その結果を図１２に示す。なお、土壌の温
度は１５℃に維持されていた。Then, after the Teflon filter paper 111 carrying the YMCT-001 strain was embedded in the soil, the lysimeter was covered with a lid and sealed with resin, and the soil was sampled with time and contained in the soil. The concentration of each organic compound was measured. FIG. 12 shows the result. The soil temperature was maintained at 15 ° C.
【００９４】図１２から明らかなように、本実施例によ
れば、各種の有機化合物が土壌中に含まれていたにもか
かわらず、全ての有機化合物を確実に分解することがで
きた。（実施例９）図１３に示すバイオリアクタシステ
ム１１６のタンク１１７内にＹＭＣＴ−００１株を投入
した。そして、給水管１１８より各種有機化合物で汚染
された地下水をタンク１１７内に導入し、ＹＭＣＴ−０
０１株による有機化合物の分解を行った。なお、地下水
中における有機化合物の初期濃度は、ΤＣＥの濃度が５
ｐｐｍ、トルエンの濃度が１００ｐｐｍ、フェノールの
濃度が１００ｐｐｍ、フッ化ビニルの濃度が１ｐｐｍで
あった。また、タンク１１７の容量は2000Ｌ、タンク１
１７内の温度は２５℃に維持されており、有機化合物が
分解処理された地下水は排出管１１９より外部へ排出さ
れるようになっている。そして、バイオリアクタシステ
ム１１６ヘ導入前後の各有機化合物の濃度を測定した。
その結果を図１４に示す。As is apparent from FIG. 12, according to this example, all organic compounds could be surely decomposed, even though various organic compounds were contained in the soil. (Example 9) YMCT-001 strain was put into the tank 117 of the bioreactor system 116 shown in FIG. Then, groundwater contaminated with various organic compounds is introduced into the tank 117 through the water supply pipe 118, and the YMCT-0
Organic compounds were decomposed by strain 01. Note that the initial concentration of organic compounds in groundwater was 5 CE.
ppm, the concentration of toluene was 100 ppm, the concentration of phenol was 100 ppm, and the concentration of vinyl fluoride was 1 ppm. In addition, the capacity of the tank 117 is 2000L, the tank 1
The temperature inside 17 is maintained at 25 ° C., and the ground water in which the organic compound is decomposed is discharged to the outside through the discharge pipe 119. Then, the concentration of each organic compound before and after introduction into the bioreactor system 116 was measured.
The result is shown in FIG.
【００９５】図１４から明らかなように、本実施例によ
れば、各種の有機化合物が地下中に含まれていたにもか
かわらず、全ての有機化合物を確実にかつ安定に分解す
ることができた。得に、ΤＣＥ、トルエンおよびフェノ
ールの分解効率は、極めて良好であった。As is clear from FIG. 14, according to the present embodiment, all organic compounds can be surely and stably decomposed even though various organic compounds were contained underground. It was In particular, the decomposition efficiency of TCE, toluene and phenol was extremely good.
【００９６】（実施例１０）粒径が 5mm程度の活性炭に
ＹＭＣＴ−００１株を担持した後、ＹＭＣＴ−００１株
を担持した活性炭を内容積1000ｍｌのドラム缶に詰めて
バイオフィルタ１２０を作成した。そして、図１５に示
すように、土壌１２４中より、挿入管１２１、ブロア１
２２および供給管１２３を介して、バイオフィルタ１２
０に、cis-ＤＣＥおよびＣＦＣ−１１３を約１．２ g/m
3 の濃度で含有する気体を導入した。そして、バイオフ
ィルタへ導入前後の各有機化合物の濃度を測定した。な
お、バイオフィルタ１２０内の温度は２５℃に維持され
ており、有機化合物が分解処理された気体は排出管１２
５より外部へ排出されるようになっている。その結果を
図１６に示す。Example 10 YMCT-001 strain was carried on activated carbon having a particle size of about 5 mm, and then activated carbon carrying the YMCT-001 strain was packed in a drum having an internal volume of 1000 ml to prepare a biofilter 120. Then, as shown in FIG. 15, from the soil 124, the insertion tube 121, the blower 1
22 through the supply pipe 123 and the biofilter 12
To about 1.2 g / m of cis-DCE and CFC-113
A gas containing at a concentration of 3 was introduced. Then, the concentration of each organic compound before and after introduction into the biofilter was measured. The temperature inside the biofilter 120 is maintained at 25 ° C., and the gas obtained by decomposing the organic compound is exhaust pipe 12
5 is discharged to the outside. FIG. 16 shows the result.
【００９７】図１６から明らかなように、本実施例によ
れば、各種の有機化合物が気体中に含まれていたにもか
かわらず、全ての有機化合物を確実にかつ安定に分解す
ることができた。As is clear from FIG. 16, according to the present embodiment, all organic compounds can be surely and stably decomposed even though various organic compounds were contained in the gas. It was
【００９８】また、活性炭にＹＭＣＴ−００１株を担持
した上記実施例の場合には、活性炭の破かに要する期間
は８８日であったが、活性炭にＹＭＣＴ−００１株を担
持しなかった場合には、活性炭の破かに要する期間は２
８日であった。したがって、本実施例においては、長期
にわたり安定かつ確実な有機化合物の分解を行うことが
できた。Further, in the case of the above example in which the activated carbon carried the YMCT-001 strain, the period required for the activated carbon to break was 88 days, but when the activated carbon did not carry the YMCT-001 strain. Is the time required to break activated carbon is 2
8 days. Therefore, in this example, stable and reliable decomposition of the organic compound could be performed for a long period of time.
【００９９】（実施例１１）400ｃｍ× 400ｃｍ× 800
ｃｍのライシメータに、各種有機化合物で汚染された土
壌を詰め、図１７に示す揚水循環システム１２６を構築
した。ライシメータに詰めた土壌には、環境中の土壌と
同様に、不飽和帯１１２と、透水層１１３および難透水
層１１４からなる飽和帯１１５とが構成されている。ま
た、土壌中における有機化合物の初期濃度は、ΤＣＥの
濃度が５ｐｐｍ、トルエンの濃度が１００ｐｐｍ、フェ
ノールの濃度が１００ｐｐｍ、フッ化ビニルの濃度が１
ｐｐｍであり、１ｍ／日の割合で揚水循環を行った。な
お、ライシメータの上部に蓋をして密封した。そして、
この土壌中に、土壌中の菌体濃度が土壌１mlあたり10 8
cfuとなるように、微生物供給装置１２７から供給管１
２８を通してＹＭＣＴ−００１株を注入した。なお、地
下水は、ポンプ１２９の駆動により給水管１３０より揚
水され、揚水循環システム１２６内を流通するが、本実
施例では活性炭吸着塔１３１に活性炭は充填されておら
ず、また、供給装置１３２よりグルコース等の物質の添
加は行われなかった。さらに、土壌の温度は、１５℃に
維持されていた。そして、土壌中を流通した地下水に含
まれる各種有機化合物の濃度を測定した。その結果を図
１８に示す。Example 11 400 cm × 400 cm × 800
A cm lysimeter was filled with soil polluted with various organic compounds to construct a pumping circulation system 126 shown in FIG. Like the soil in the environment, the soil filled in the lysimeter has an unsaturated zone 112 and a saturated zone 115 composed of a water permeable layer 113 and a hardly water permeable layer 114. The initial concentrations of organic compounds in the soil were as follows: TCE concentration was 5 ppm, toluene concentration was 100 ppm, phenol concentration was 100 ppm, and vinyl fluoride concentration was 1 ppm.
It was ppm, and pumped water circulation was performed at a rate of 1 m / day. The lysimeter was covered with a lid and sealed. And
In this soil, the bacterial cell concentration in the soil is 10 8 per 1 ml of soil.
From the microorganism supply device 127 to the supply pipe 1 so that it becomes cfu.
YMCT-001 strain was injected through 28. The groundwater is pumped from the water supply pipe 130 by driving the pump 129 and circulates in the pumping circulation system 126. However, in this embodiment, the activated carbon adsorption tower 131 is not filled with activated carbon, and the groundwater is supplied from the supply device 132. No substances such as glucose were added. Further, the temperature of the soil was maintained at 15 ° C. Then, the concentrations of various organic compounds contained in groundwater flowing through the soil were measured. FIG. 18 shows the result.
【０１００】図１８から明らかなように、本実施例によ
れば、各種の有機化合物が地下中に含まれていたにもか
かわらず、全ての有機化合物を確実にかつ安定に分解す
ることができた。As is clear from FIG. 18, according to the present embodiment, all organic compounds can be reliably and stably decomposed even though various organic compounds were contained underground. It was
【０１０１】（実施例１２）400ｃｍ× 400ｃｍ× 800
ｃｍのライシメータに、各種有機化合物で汚染された土
壌を詰め、0.01ｍ／日の割合で清浄な地下水を揚水循環
した。なお、ライシメータに詰めた土壌には、環境中の
土壌と同様に、不飽和帯１１２と、透水層１１３および
難透水層１１４からなる飽和帯１１５とが構成されてい
る。また、土壌中における有機化合物の初期濃度は、Τ
ＣＥの濃度を５ｐｐｍ、トルエンの濃度を１００ｐｐ
ｍ、フェノールの濃度を１００ｐｐｍ、フッ化ビニルの
濃度を１ｐｐｍとした。なお、ライシメータの上部に蓋
をして樹脂で密封した。Example 12 400 cm × 400 cm × 800
A cm lysimeter was filled with soil contaminated with various organic compounds, and clean groundwater was pumped and circulated at a rate of 0.01 m / day. The soil filled in the lysimeter has an unsaturated zone 112 and a saturated zone 115 composed of a water permeable layer 113 and a water impermeable layer 114, as in the soil in the environment. The initial concentration of organic compounds in soil is Τ
Concentration of CE is 5ppm, concentration of toluene is 100pp
m, the concentration of phenol was 100 ppm, and the concentration of vinyl fluoride was 1 ppm. The lysimeter was covered with a lid and sealed with resin.
【０１０２】そして、この土壌中に、粒径が約 5mmでＹ
ＭＣＴ−００１株を担持したセラミックス多孔質体を充
填した筒状体１３３を埋設した。この様子を、図１９に
示す。そして、土壌中を流通した地下水に含まれる各種
有機化合物の濃度を測定した。その結果を図２０に示
す。なお、土壌の温度は、１５℃に維持されていた。Then, in this soil, a particle size of about 5 mm and Y
A cylindrical body 133 filled with a ceramic porous body carrying the MCT-001 strain was embedded. This is shown in FIG. Then, the concentrations of various organic compounds contained in groundwater flowing through the soil were measured. FIG. 20 shows the result. The soil temperature was maintained at 15 ° C.
【０１０３】図２０から明らかなように、本実施例によ
れば、各種の有機化合物が地下中に含まれていたにもか
かわらず、全ての有機化合物を確実にかつ安定に分解す
ることができた。As is apparent from FIG. 20, according to this example, all organic compounds can be reliably and stably decomposed even though various organic compounds were contained underground. It was
【０１０４】（実施例１３）400ｃｍ× 400ｃｍ× 800
ｃｍのライシメータに、各種有機化合物で汚染された土
壌を詰め、図２１に示す浄化システム１３４を構築し
た。土壌中における有機化合物の初期濃度は、ΤＣＥの
濃度が５ｐｐｍ、トルエンの濃度が１００ｐｐｍ、フェ
ノールの濃度が１００ｐｐｍ、フッ化ビニルの濃度が１
ｐｐｍであった。そして、この土壌１２４中に、土壌中
の菌体濃度が土壌１mlあたり10 8 cfuとなるように、微
生物供給装置１３５から供給管１３６および挿入管１３
７を通してＹＭＣＴ−００１株を注入した。なお、供給
装置１３８よりグルコース等の物質の添加は行われなか
った。Example 13 400 cm × 400 cm × 800
A lysimeter of cm was filled with soil contaminated with various organic compounds to construct a purification system 134 shown in FIG. The initial concentrations of organic compounds in the soil were: TCE concentration of 5 ppm, toluene concentration of 100 ppm, phenol concentration of 100 ppm, vinyl fluoride concentration of 1
ppm. Then, in the soil 124, the supply pipe 136 and the insertion pipe 13 are fed from the microorganism supply device 135 so that the bacterial cell concentration in the soil is 10 8 cfu per 1 ml of soil.
Strain 7 was injected with YMCT-001 strain. Note that no substance such as glucose was added from the supply device 138.
【０１０５】そして、土壌中にＹＭＣＴ−００１株を注
入した後、ライシメータの上部に蓋をして樹脂で密封
し、土壌を経時的にサンプリングして、土壌中に含まれ
る各有機化合物の濃度を測定した。その結果を図２２に
示す。なお、土壌の温度は１５℃に維持されていた。After injecting the YMCT-001 strain into the soil, the lysimeter was covered with a lid and sealed with resin, and the soil was sampled with time to determine the concentration of each organic compound contained in the soil. It was measured. The result is shown in FIG. The soil temperature was maintained at 15 ° C.
【０１０６】図２２から明らかなように、本実施例によ
れば、各種の有機化合物が土壌中に含まれていたにもか
かわらず、全ての有機化合物を確実に分解することがで
きた。As is clear from FIG. 22, according to this example, all organic compounds could be surely decomposed even though various organic compounds were contained in the soil.
【０１０７】[0107]
【発明の効果】以上説明したように、本発明の有機化合
物の分解方法によれば、汚染環境から有機化合物耐性が
指標となるように単離した有機化合物分解能を有する微
生物を用いているため、環境に有害な添加物や誘導物
質、あるいは変異菌種等を必要とせずに、有機化合物を
安全かつ有効に分解することができる。従って、汚染土
壌や汚染地下水等の原位置修復を２次汚染を招くことな
く実施することが可能となる。また、微生物自体も汚染
環境に由来するものであるため、微生物による２次汚染
のおそれもない。As described above, according to the method for decomposing an organic compound of the present invention, since a microorganism having an ability to decompose an organic compound isolated from a polluted environment so that the resistance of the organic compound serves as an index is used, Organic compounds can be safely and effectively decomposed without the need for additives or inducers harmful to the environment, or mutant strains. Therefore, in-situ restoration of contaminated soil, contaminated groundwater, etc. can be carried out without causing secondary pollution. Moreover, since the microorganisms themselves are also derived from the contaminated environment, there is no risk of secondary contamination by the microorganisms.
【０１０８】また、本発明の有機化合物の分解装置によ
れば、汚染環境から有機化合物耐性が指標となるように
単離した有機化合物分解能を有する微生物により有機化
合物を分解する構成となっているため、環境に有害な添
加物や誘導物質、あるいは変異菌種等を用いることな
く、有機化合物を安全かつ有効に分解することができ
る。従って、汚染土壌や汚染地下水等の原位置修復を２
次汚染を招くことなく実施することが可能となる。ま
た、微生物自体も汚染環境に由来するものであるため、
微生物による２次汚染のおそれもない。Further, according to the apparatus for decomposing organic compounds of the present invention, the organic compounds are decomposed by microorganisms isolated from the polluted environment so that the resistance of the organic compounds can be used as an index to decompose the organic compounds. The organic compounds can be safely and effectively decomposed without using additives or inducers harmful to the environment, or mutant bacterial species. Therefore, in-situ restoration of contaminated soil and contaminated groundwater
It becomes possible to carry out without causing the next pollution. Also, since the microorganisms themselves are derived from the polluted environment,
There is no risk of secondary contamination by microorganisms.
【０１０９】さらに、本発明の微生物の単離方法によれ
ば、有機化合物の生物分解に有効な微生物を効率よく単
離することが可能となる。Furthermore, according to the method for isolating a microorganism of the present invention, it becomes possible to efficiently isolate a microorganism effective for biodegrading an organic compound.
【０１１０】また、本発明の有機化合物分解能を有する
新規微生物は、環境に有害な添加物や誘導物質等を必要
とせず、各種の有機化合物を効率よく分解する。従っ
て、例えば実用的な環境修復技術を提供することが可能
となる。Further, the novel microorganism capable of degrading organic compounds of the present invention does not require additives or inducers harmful to the environment and efficiently decomposes various organic compounds. Therefore, for example, it becomes possible to provide a practical environment restoration technique.
【図１】 本発明の有機化合物の生物分解法の一工程例
を、本発明の有機化合物分解用微生物の製造工程例と共
に示す図である。FIG. 1 is a diagram showing an example of one step of a method for biodegrading an organic compound of the present invention, together with an example of a step of producing a microorganism for degrading an organic compound of the present invention.
【図２】 図１に示す有機化合物分解用微生物の製造工
程例の分解菌選択工程における分解試験結果の一例を示
す図である。FIG. 2 is a diagram showing an example of a decomposition test result in a degrading bacterium selecting step of the example of the manufacturing process of the organic compound degrading microorganism shown in FIG.
【図３】 近隣結合法（NJ法： neighbor-joining meth
od）により得られた分子系統樹を示す図である。[Fig. 3] Neighbor-joining method (NJ method: neighbor-joining meth)
It is a figure which shows the molecular phylogenetic tree obtained by od).
【図４】 実施例１におけるＹＭＣＴ−００１株を用い
た各種有機化合物の分解試験結果を示す図である。FIG. 4 is a diagram showing the results of decomposition tests of various organic compounds using the YMCT-001 strain in Example 1.
【図５】 実施例２におけるＹＭＣＴ−００１株の菌数
とＴＣＥ分解率との関係を示す図である。FIG. 5 is a diagram showing the relationship between the number of YMCT-001 strains and the TCE degradation rate in Example 2.
【図６】 実施例３におけるＴＣＥ濃度を変化させた場
合のＹＭＣＴ−００１株によるＴＣＥの分解率を示す図
である。FIG. 6 is a diagram showing the degradation rate of TCE by the YMCT-001 strain when the TCE concentration was changed in Example 3.
【図７】 実施例３におけるcis-ＤＣＥ濃度を変化させ
た場合のＹＭＣＴ−００１株によるcis-ＤＣＥの分解率
を示す図である。FIG. 7 is a diagram showing the degradation rate of cis-DCE by the YMCT-001 strain when the cis-DCE concentration was changed in Example 3.
【図８】 実施例３におけるtrans-ＤＣＥ濃度を変化さ
せた場合のＹＭＣＴ−００１株によるtrans-ＤＣＥの分
解率を示す図である。FIG. 8 is a diagram showing the degradation rate of trans-DCE by the YMCT-001 strain when the trans-DCE concentration was changed in Example 3.
【図９】 実施例４におけるグルコース存在下でのＹＭ
ＣＴ−００１株によるＴＣＥ分解試験結果を示す図であ
る。FIG. 9: YM in the presence of glucose in Example 4
It is a figure which shows the TCE degradation test result by CT-001 strain.
【図１０】 実施例７における固定化菌および遊離菌を
用いた場合のＴＣＥ分解試験結果を比較して示す図であ
る。FIG. 10 is a diagram showing a comparison of the results of TCE decomposition test in the case of using immobilized bacteria and free bacteria in Example 7.
【図１１】 実施例８における有機化合物の分解を実施
した状況を示す図である。FIG. 11 is a diagram showing a situation in which decomposition of an organic compound in Example 8 was carried out.
【図１２】 実施例８におけるＹＭＣＴ−００１株を用
いた各種有機化合物の分解試験結果を示す図である。FIG. 12 is a diagram showing the results of a decomposition test of various organic compounds using the YMCT-001 strain in Example 8.
【図１３】 実施例９における有機化合物の分解を実施
した状況を示す図である。FIG. 13 is a diagram showing a situation in which decomposition of an organic compound was carried out in Example 9.
【図１４】 実施例９におけるＹＭＣＴ−００１株を用
いた各種有機化合物の分解試験結果を示す図である。FIG. 14 is a view showing the results of decomposition tests of various organic compounds using the YMCT-001 strain in Example 9.
【図１５】 実施例１０における有機化合物の分解を実
施した状況を示す図である。FIG. 15 is a diagram showing a situation in which decomposition of an organic compound was carried out in Example 10.
【図１６】 実施例１０におけるＹＭＣＴ−００１株を
用いた各種有機化合物の分解試験結果を示す図である。FIG. 16 is a diagram showing the results of a decomposition test of various organic compounds using YMCT-001 strain in Example 10.
【図１７】 実施例１１における有機化合物の分解を実
施した状況を示す図である。FIG. 17 is a diagram showing a situation in which decomposition of an organic compound was carried out in Example 11.
【図１８】 実施例１１におけるＹＭＣＴ−００１株を
用いた各種有機化合物の分解試験結果を示す図である。FIG. 18 is a diagram showing the results of a decomposition test of various organic compounds using the YMCT-001 strain in Example 11.
【図１９】 実施例１２における有機化合物の分解を実
施した状況を示す図である。FIG. 19 is a diagram showing a situation in which decomposition of an organic compound in Example 12 was carried out.
【図２０】 実施例１２におけるＹＭＣＴ−００１株を
用いた各種有機化合物の分解試験結果を示す図である。FIG. 20 is a diagram showing the results of decomposition tests of various organic compounds using the YMCT-001 strain in Example 12.
【図２１】 実施例１３における有機化合物の分解を実
施した状況を示す図である。FIG. 21 is a diagram showing a situation where decomposition of an organic compound in Example 13 was carried out.
【図２２】 実施例１３におけるＹＭＣＴ−００１株を
用いた各種有機化合物の分解試験結果を示す図である。22 is a diagram showing the results of a decomposition test of various organic compounds using the YMCT-001 strain in Example 13. FIG.
１０１……汚染環境採取工程 １０２……有機化合物分解能を有する微生物の抽出工程 １０２(1) ……有機化合物中での培養工程 １０２(2) ……耐性菌の単離工程 １０２(1) ……分解菌の選択工程 １０３……有機化合物の生物分解工程 １１１……テフロン製濾紙 １１２……不飽和帯
１１３……透水層 １１４……難透水層 １１５……飽和帯 １１６……バイオリアクタシステム １１７……タン
ク １１８……給水管 １１９……排出管 １２０……
バイオフィルタ １２１……挿入管 １２２……ブロア １２３……
供給管 １２４……土壌 １２５……排出管 １２６……揚水循環システム １２７……微生物供給
装置 １２８……供給管 １２９……ポンプ １３０……
給水管 １３１……活性炭吸着塔 １３２……供給装置 １
３３……筒状体 １３４……浄化システム １３５……微生物供給装置 １３６……供給管 １３７……挿入管 １３８……
供給装置101 ... Contaminated environment collection step 102 ... Extraction step of microorganisms capable of decomposing organic compounds 102 (1) ...... Culturing step in organic compound 102 (2) ...... Resistant cell isolation step 102 (1) ...... Decomposing bacterium selection process 103 …… Biodegradation process of organic compounds 111 …… Teflon filter paper 112 …… Unsaturated band
113 ... Permeable layer 114 ... Hardly permeable layer 115 ... Saturation zone 116 ... Bioreactor system 117 ... Tank 118 ... Water supply pipe 119 ... Discharge pipe 120 ...
Biofilter 121 …… Insertion tube 122 …… Blower 123 ……
Supply pipe 124 …… Soil 125 …… Discharge pipe 126 …… Pump water circulation system 127 …… Microbial supply device 128 …… Supply pipe 129 …… Pump 130 ……
Water supply pipe 131 …… Activated carbon adsorption tower 132 …… Supply device 1
33 ... Cylindrical body 134 ... Purification system 135 ... Microorganism supply device 136 ... Supply pipe 137 ... Insertion pipe 138 ...
Supply device
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 平川 千香子 神奈川県川崎市幸区小向東芝町１番地 株 式会社東芝研究開発センター内─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 6 Identification number Internal reference number FI Technical indication C12R 1:01) (72) Inventor Chikako Hirakawa 1 Komukai Toshiba-cho, Kawasaki City, Kanagawa Prefecture Inside the Toshiba Research and Development Center
Claims (8)
は前記環境と接触した試料に由来し有機化合物分解能を
有する微生物と前記第１または第２の有機化合物とを接
触する工程と、 前記微生物により前記第１または前記第２の有機化合物
を分解する工程とを具備したことを特徴とする有機化合
物の分解方法。1. A step of contacting a microorganism having an organic compound degrading ability derived from an environment contaminated with a first organic compound or a sample in contact with the environment with the first or second organic compound; And a step of decomposing the first organic compound or the second organic compound.
は前記環境と接触した試料から微生物を採取する工程
と、 前記採取した微生物を有機化合物耐性が指標となるよう
に培養する工程と、 前記培養した微生物を分離する工程と、 前記分離された微生物を有機化合物分解能を指標として
選択する工程と、 前記選択された微生物と前記第１または第２の有機化合
物とを接触する工程と、 前記微生物により前記第１ま
たは前記第２の有機化合物を分解する工程とを具備した
ことを特徴とする有機化合物の分解方法。2. A step of collecting a microorganism from an environment contaminated with a first organic compound or a sample in contact with the environment, a step of culturing the collected microorganism so that resistance to an organic compound serves as an index, Separating the cultivated microorganisms, selecting the separated microorganisms using an organic compound decomposing ability as an index, contacting the selected microorganisms with the first or second organic compound, and the microorganisms And a step of decomposing the first organic compound or the second organic compound.
は前記環境と接触した試料から微生物を採取する工程
と、 前記第１の有機化合物の存在条件下で前記採取した微生
物を培養する工程と、 前記培養した微生物を分離する工程と、 前記分離された微生物を有機化合物分解能を指標として
選択する工程と、 前記選択された微生物と第１または第２の有機化合物と
を接触する工程と、 前記微生物により前記第１または前記第２の有機化合物
を分解する工程とを具備したことを特徴とする有機化合
物の分解方法。3. A method of collecting a microorganism from an environment contaminated with a first organic compound or a sample in contact with the environment, and a step of culturing the collected microorganism under the presence condition of the first organic compound. A step of separating the cultivated microorganism, a step of selecting the separated microorganism using an organic compound decomposing ability as an index, a step of contacting the selected microorganism with a first or second organic compound, And a step of decomposing the first or the second organic compound with a microorganism.
は前記環境と接触した試料に由来し有機化合物分解能を
有する微生物を保持する保持手段と、 前記保持手段に保持された微生物と前記第１または第２
の有機化合物とを接触させる接触手段とを具備したこと
を特徴とする有機化合物の分解装置。4. A holding means for holding a microorganism having an organic compound decomposing ability derived from an environment contaminated with a first organic compound or a sample in contact with the environment, a microorganism held by the holding means and the first Or second
And a contact means for contacting the organic compound with.
環境と接触した試料から微生物を採取する工程と、 前記採取した微生物を有機化合物耐性が指標となるよう
に培養する工程と、 前記培養した微生物を分離する工程と、 前記分離された微生物を有機化合物分解能を指標として
選択する工程とを具備したことを特徴とする微生物の単
離方法。5. A step of collecting a microorganism from an environment contaminated with an organic compound or a sample in contact with the environment, a step of culturing the collected microorganism so that resistance to an organic compound is an index, and the cultured microorganism And a step of selecting the separated microorganisms using an organic compound decomposing ability as an index.
環境と接触した試料から微生物を採取する工程と、 前記有機化合物の存在条件下で前記採取した微生物を培
養する工程と、 前記培養した微生物を分離する工程と、 前記分離された微生物を有機化合物分解能を指標として
選択する工程とを具備したことを特徴とする微生物の単
離方法。6. A step of collecting a microorganism from an environment contaminated with an organic compound or a sample in contact with the environment; a step of culturing the collected microorganism in the presence condition of the organic compound; A method for isolating a microorganism, comprising a step of separating and a step of selecting the separated microorganism by using an organic compound decomposing ability as an index.
分解能を有するコマガテラ・ブレビス（Komagatella br
evis）である新規微生物。7. Komagatella bris, which is resistant to organic compounds and capable of degrading organic compounds.
evis) is a new microorganism.
レビバクテリウム属、クラビバクター属、ミコバクテリ
ウム属、テラバクター属またはレニバクテリウム属に属
し、有機化合物耐性を有し、かつ有機化合物分解能を有
する新規微生物。8. A member of the genus Comagatera, Arthrobacter, Brevibacterium, Claviobacter, Mycobacterium, Terrabacter or Renibacterium, which has resistance to organic compounds and has ability to decompose organic compounds. New microorganism.
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| JP30971996A JP3819090B2 (en) | 1995-11-20 | 1996-11-20 | Organic compound decomposition method, organic compound decomposition apparatus, microorganism isolation method, and novel microorganism |
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| JP7-301200 | 1995-11-20 | ||
| JP30971996A JP3819090B2 (en) | 1995-11-20 | 1996-11-20 | Organic compound decomposition method, organic compound decomposition apparatus, microorganism isolation method, and novel microorganism |
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|---|---|
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001299329A (en) * | 2000-04-17 | 2001-10-30 | Japan Science & Technology Corp | Method for purifying environmental pollution of organochlorine compound with microorganism |
| JP2003010833A (en) * | 2001-07-02 | 2003-01-14 | Railway Technical Res Inst | Method for decomposition of organochlorine compound contained in soil, gravel or sludge |
| JP2007160209A (en) * | 2005-12-13 | 2007-06-28 | Hiroshi Yokozawa | Water-quality improvement method |
-
1996
- 1996-11-20 JP JP30971996A patent/JP3819090B2/en not_active Expired - Fee Related
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| JP4591879B2 (en) * | 2000-04-17 | 2010-12-01 | 独立行政法人科学技術振興機構 | Purification method of organic chlorine compound pollution environment by microorganisms |
| JP2003010833A (en) * | 2001-07-02 | 2003-01-14 | Railway Technical Res Inst | Method for decomposition of organochlorine compound contained in soil, gravel or sludge |
| JP2007160209A (en) * | 2005-12-13 | 2007-06-28 | Hiroshi Yokozawa | Water-quality improvement method |
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