JPH0912629A - リポ蛋白質分離用樹脂 - Google Patents
リポ蛋白質分離用樹脂Info
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- JPH0912629A JPH0912629A JP7183268A JP18326895A JPH0912629A JP H0912629 A JPH0912629 A JP H0912629A JP 7183268 A JP7183268 A JP 7183268A JP 18326895 A JP18326895 A JP 18326895A JP H0912629 A JPH0912629 A JP H0912629A
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- JP
- Japan
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- resin
- separating
- particles
- lipoprotein
- anion exchange
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- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Polymerisation Methods In General (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 リポ蛋白質、特に高比重リポ蛋白質（ＨＤ
Ｌ）、低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）、超低比重リポ蛋白
質（ＶＬＤＬ）及び変性リポ蛋白質を短時間で高精度に
分離する分離用樹脂を提供する。 【構成】 水不溶性、親水性のマトリックスに陰イオン
交換基を導入した陰イオン交換体からなるリポ蛋白質分
離用樹脂で、該マトリックスはビニル単量体から誘導さ
れる単位の重量分率が０〜８０％、架橋性ビニル単量体
から誘導される単位の重量分率が２０〜１００％からな
り、且つ単量体の少なくとも１種が親水性基を有してい
る架橋共重合体であり、その陰イオン交換容量は乾燥樹
脂重量１ｇあたり０．２〜１．２ミリ当量である。
Ｌ）、低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）、超低比重リポ蛋白
質（ＶＬＤＬ）及び変性リポ蛋白質を短時間で高精度に
分離する分離用樹脂を提供する。 【構成】 水不溶性、親水性のマトリックスに陰イオン
交換基を導入した陰イオン交換体からなるリポ蛋白質分
離用樹脂で、該マトリックスはビニル単量体から誘導さ
れる単位の重量分率が０〜８０％、架橋性ビニル単量体
から誘導される単位の重量分率が２０〜１００％からな
り、且つ単量体の少なくとも１種が親水性基を有してい
る架橋共重合体であり、その陰イオン交換容量は乾燥樹
脂重量１ｇあたり０．２〜１．２ミリ当量である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、リポ蛋白質分離用樹脂
に関するものである。詳しくは、本発明は高比重リポ蛋
白質（ＨＤＬ）、低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）、超低比
重リポ蛋白質（ＶＬＤＬ）及び変性リポ蛋白質を高精度
で分離するのに有用な樹脂に関するものである。
に関するものである。詳しくは、本発明は高比重リポ蛋
白質（ＨＤＬ）、低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）、超低比
重リポ蛋白質（ＶＬＤＬ）及び変性リポ蛋白質を高精度
で分離するのに有用な樹脂に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】血漿や血清中にはコレステロール、リン
脂質、中性脂肪（トリグリセリド）が含まれているが、
これらの脂質の内、コレステロールの定量は動脈硬化、
肝疾患、糖尿病あるいは一時的な脂質代謝障害のスクリ
ーニング検査として利用されており、また、中性脂肪の
定量はコレステロールと共に脂質代謝異常の鑑別に不可
欠な検査となって来ている。リポ蛋白質の分画には超遠
心法が広く用いられているが、この方法では処理に長時
間を要するばかりでなく、リポ蛋白質の性状がヒトとは
異なるラットやマウスのような動物種においては、その
正確な分画が困難である。また、高速液体クロマトグラ
フィーにより分離する方法では、例えばJournal of Chr
omatography,570,382-389(1991)に記載されているよう
に、これまで一般的に分子サイズにより分画を行うゲル
ろ過法が用いられてきたが、精密な分離を行うには、長
時間を要し、その場合でも各リポ蛋白質分画の間に混合
が生じ、完全な分離は達成出来ないという問題があっ
た。
脂質、中性脂肪（トリグリセリド）が含まれているが、
これらの脂質の内、コレステロールの定量は動脈硬化、
肝疾患、糖尿病あるいは一時的な脂質代謝障害のスクリ
ーニング検査として利用されており、また、中性脂肪の
定量はコレステロールと共に脂質代謝異常の鑑別に不可
欠な検査となって来ている。リポ蛋白質の分画には超遠
心法が広く用いられているが、この方法では処理に長時
間を要するばかりでなく、リポ蛋白質の性状がヒトとは
異なるラットやマウスのような動物種においては、その
正確な分画が困難である。また、高速液体クロマトグラ
フィーにより分離する方法では、例えばJournal of Chr
omatography,570,382-389(1991)に記載されているよう
に、これまで一般的に分子サイズにより分画を行うゲル
ろ過法が用いられてきたが、精密な分離を行うには、長
時間を要し、その場合でも各リポ蛋白質分画の間に混合
が生じ、完全な分離は達成出来ないという問題があっ
た。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上述のごと
き問題点を有しないリポ蛋白質分離用樹脂を提供するこ
とを目的とし、特にリポ蛋白質、高比重リポ蛋白質（Ｈ
ＤＬ）、低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）、超低比重リポ蛋
白質（ＶＬＤＬ）及び変性リポ蛋白質を短時間で高精度
に分離する樹脂を提供することを目的とするものであ
る。
き問題点を有しないリポ蛋白質分離用樹脂を提供するこ
とを目的とし、特にリポ蛋白質、高比重リポ蛋白質（Ｈ
ＤＬ）、低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）、超低比重リポ蛋
白質（ＶＬＤＬ）及び変性リポ蛋白質を短時間で高精度
に分離する樹脂を提供することを目的とするものであ
る。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、有機重合
体粒子からなる種粒子に、シード重合法により親水基を
有するビニル単量体を含浸させて重合することにより得
られる、多孔質構造を有し、細孔表面を含めた粒子表面
が親水化されている多孔性均一粒径重合体粒子で、しか
もイオン交換基を有している粒子が、高精度でリポ蛋白
質を分離し得る事を見いだし本発明を達成した。すなわ
ち、本発明の要旨は、水不溶性、親水性のマトリックス
に陰イオン交換基が導入された陰イオン交換体からなる
リポ蛋白質分離用樹脂に存する。かかる水不溶性、親水
性のマトリックスはモノビニル単量体から誘導される単
位の重量分率が０〜８０％、架橋性ポリビニル単量体か
ら誘導される単位の重量分率が２０〜１００％、且つ単
量体の少なくとも１種が親水性基を有しているものから
構成される多孔性架橋重合体であり、平均細孔半径１０
〜２０００オングストローム、細孔容積０．２〜１．８
ｍｌ／ｇ、細孔表面積１〜１０００ｍ2／ｇの特性を有
するものである。また、陰イオン交換体の陰イオン交換
容量は乾燥樹脂重量１ｇあたり０．２〜１．２ミリ当量
である。
体粒子からなる種粒子に、シード重合法により親水基を
有するビニル単量体を含浸させて重合することにより得
られる、多孔質構造を有し、細孔表面を含めた粒子表面
が親水化されている多孔性均一粒径重合体粒子で、しか
もイオン交換基を有している粒子が、高精度でリポ蛋白
質を分離し得る事を見いだし本発明を達成した。すなわ
ち、本発明の要旨は、水不溶性、親水性のマトリックス
に陰イオン交換基が導入された陰イオン交換体からなる
リポ蛋白質分離用樹脂に存する。かかる水不溶性、親水
性のマトリックスはモノビニル単量体から誘導される単
位の重量分率が０〜８０％、架橋性ポリビニル単量体か
ら誘導される単位の重量分率が２０〜１００％、且つ単
量体の少なくとも１種が親水性基を有しているものから
構成される多孔性架橋重合体であり、平均細孔半径１０
〜２０００オングストローム、細孔容積０．２〜１．８
ｍｌ／ｇ、細孔表面積１〜１０００ｍ2／ｇの特性を有
するものである。また、陰イオン交換体の陰イオン交換
容量は乾燥樹脂重量１ｇあたり０．２〜１．２ミリ当量
である。
【０００５】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
リポ蛋白質分離用樹脂は、粒子分布の狭い（粒子径単分
散の）種粒子を用い、これに更に親水性基を有するビニ
ル単量体を含浸させて重合する、所謂シード重合法を利
用して製造することにより容易に得られる。また、シー
ド重合時に多孔質化剤を存在させることにより、更に優
れた性能を有する分離用樹脂が製造出来る。本発明のシ
ード重合において、種粒子として用いられる有機重合体
粒子は、乳化重合、ソープフリー乳化重合、分散重合、
懸濁重合等の一般に良く知られた造球重合により製造出
来る。中でも、乳化重合、ソープフリー乳化重合、分散
重合で得られる重合体粒子は、懸濁重合により製造され
たものに比較して、その粒子径分布が狭く種粒子として
好ましい。
リポ蛋白質分離用樹脂は、粒子分布の狭い（粒子径単分
散の）種粒子を用い、これに更に親水性基を有するビニ
ル単量体を含浸させて重合する、所謂シード重合法を利
用して製造することにより容易に得られる。また、シー
ド重合時に多孔質化剤を存在させることにより、更に優
れた性能を有する分離用樹脂が製造出来る。本発明のシ
ード重合において、種粒子として用いられる有機重合体
粒子は、乳化重合、ソープフリー乳化重合、分散重合、
懸濁重合等の一般に良く知られた造球重合により製造出
来る。中でも、乳化重合、ソープフリー乳化重合、分散
重合で得られる重合体粒子は、懸濁重合により製造され
たものに比較して、その粒子径分布が狭く種粒子として
好ましい。
【０００６】種粒子としての重合体粒子は、芳香族モノ
ビニル単量体及び／又は脂肪族モノビニル単量体からな
る重合体が好適である。これらは、単独重合体もしくは
２種以上の単量体の共重合体の何れでも良く、１重量％
以下の架橋性ポリビニル単量体との共重合体であっても
良い。代表的には、ポリスチレンもしくはポリメタクリ
ル酸エステルからなる粒子が好ましい。粒子の大きさ
は、０．１〜１０００μｍの範囲で、目的に応じ任意に
選ぶ事が出来る。
ビニル単量体及び／又は脂肪族モノビニル単量体からな
る重合体が好適である。これらは、単独重合体もしくは
２種以上の単量体の共重合体の何れでも良く、１重量％
以下の架橋性ポリビニル単量体との共重合体であっても
良い。代表的には、ポリスチレンもしくはポリメタクリ
ル酸エステルからなる粒子が好ましい。粒子の大きさ
は、０．１〜１０００μｍの範囲で、目的に応じ任意に
選ぶ事が出来る。
【０００７】本発明において、前述の如く製造された有
機重合体粒子からなる種粒子にモノビニル単量体０〜８
０重量％を含む架橋性ポリビニル単量体を含浸させる。
モノビニル単量体及び架橋性ポリビニル単量体の少なく
とも１種は親水性基、例えば水酸基を有しているもので
ある。該架橋性ポリビニル単量体としては、芳香族ポリ
ビニル単量体、脂肪族ポリビニル単量体が好適であり、
芳香族ポリビニル単量体としてはジビニルベンゼン、ビ
スビフェニルアルカンが、脂肪族ポリビニル単量体とし
ては多価アルコールのポリ（メタ）アクリレートやアル
キレンポリ（メタ）アクリルアミドが好ましい。具体的
には、例えばエチレングリコールジ（メタ）アクリレー
ト、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、
グリセリンジ（メタ）アクリレート、アリル（メタ）ア
クリレート、トリメチロールプロパントリ（メタ）アク
リレート、テトラヒドロキシブタンジ（メタ）アクリレ
ート、ペンタエリスリトールジ（メタ）アクリレート、
メチレンビスアクリルアミド、ピペラジンジアクリルア
ミド、ジアリル酒石酸ジアミド等が挙げられ、これらは
単独でも混合物としても用いられるが、特にグリセリン
ジ（メタ）アクリレートが好ましい。
機重合体粒子からなる種粒子にモノビニル単量体０〜８
０重量％を含む架橋性ポリビニル単量体を含浸させる。
モノビニル単量体及び架橋性ポリビニル単量体の少なく
とも１種は親水性基、例えば水酸基を有しているもので
ある。該架橋性ポリビニル単量体としては、芳香族ポリ
ビニル単量体、脂肪族ポリビニル単量体が好適であり、
芳香族ポリビニル単量体としてはジビニルベンゼン、ビ
スビフェニルアルカンが、脂肪族ポリビニル単量体とし
ては多価アルコールのポリ（メタ）アクリレートやアル
キレンポリ（メタ）アクリルアミドが好ましい。具体的
には、例えばエチレングリコールジ（メタ）アクリレー
ト、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、
グリセリンジ（メタ）アクリレート、アリル（メタ）ア
クリレート、トリメチロールプロパントリ（メタ）アク
リレート、テトラヒドロキシブタンジ（メタ）アクリレ
ート、ペンタエリスリトールジ（メタ）アクリレート、
メチレンビスアクリルアミド、ピペラジンジアクリルア
ミド、ジアリル酒石酸ジアミド等が挙げられ、これらは
単独でも混合物としても用いられるが、特にグリセリン
ジ（メタ）アクリレートが好ましい。
【０００８】架橋性ポリビニル単量体以外のビニル単量
体として、モノビニル単量体が使用される。該モノビニ
ル単量体としては、グリセリンモノ（メタ）アクリレー
ト、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート等の水
酸基を１個以上有する（メタ）アクリル酸の多価アルコ
ールエステル、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド等のＮ
−置換（メタ）アクリルアミド、アクリルアミド、メタ
アクリルアミド、グリシジル（メタ）アクリレートある
いはこれらの混合物等が挙げられる。特にシード重合時
に使用する多孔質化剤としての有機溶媒よりも水性媒体
の方に分配しやすい親水性ビニル単量体が好適であり、
グリセリンモノ（メタ）アクリレート、グリシジル（メ
タ）アクリレート或いはこれらの混合物が好ましい。
体として、モノビニル単量体が使用される。該モノビニ
ル単量体としては、グリセリンモノ（メタ）アクリレー
ト、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート等の水
酸基を１個以上有する（メタ）アクリル酸の多価アルコ
ールエステル、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド等のＮ
−置換（メタ）アクリルアミド、アクリルアミド、メタ
アクリルアミド、グリシジル（メタ）アクリレートある
いはこれらの混合物等が挙げられる。特にシード重合時
に使用する多孔質化剤としての有機溶媒よりも水性媒体
の方に分配しやすい親水性ビニル単量体が好適であり、
グリセリンモノ（メタ）アクリレート、グリシジル（メ
タ）アクリレート或いはこれらの混合物が好ましい。
【０００９】これらのモノビニル単量体及びポリビニル
単量体の種類及び量は、使用する種粒子の大きさと目的
とする粒子の大きさを考慮して適宜決定される。種粒子
に含浸させるビニル単量体中の架橋性ポリビニル単量体
の量は２０〜１００重量％であり、好ましくは３０〜１
００重量％である。更に、本発明では多孔性架橋重合体
粒子の特性を良好にするために、シード重合を多孔質化
剤の存在下実施することが望ましい。そのための多孔質
化剤、即ち種粒子に含浸させる多孔質化溶媒としては、
シード重合時に相分離剤として作用し、粒子の多孔質化
を促進する有機溶媒である脂肪族、芳香族炭化水素類、
エステル類、ケトン類、エーテル、アルコール類が挙げ
られる。このような溶媒としては、例えば、トルエン、
キシレン、シクロヘキサン、オクタン、酢酸ブチル、フ
タル酸ジブチル、メチルエチルケトン、ジブチルエーテ
ル、１−ヘキサノール、２−オクタノール、デカノー
ル、ラウリルアルコール、シクロヘキサノール等が挙げ
られ、これらは単独もしくは混合して使用することが出
来る。また、場合によっては多孔質化溶媒の種類の選
定、例えば芳香族炭化水素類であるか或いはアルコール
類であるかによっても架橋共重合体粒子に所望の特性を
付与することもできる。
単量体の種類及び量は、使用する種粒子の大きさと目的
とする粒子の大きさを考慮して適宜決定される。種粒子
に含浸させるビニル単量体中の架橋性ポリビニル単量体
の量は２０〜１００重量％であり、好ましくは３０〜１
００重量％である。更に、本発明では多孔性架橋重合体
粒子の特性を良好にするために、シード重合を多孔質化
剤の存在下実施することが望ましい。そのための多孔質
化剤、即ち種粒子に含浸させる多孔質化溶媒としては、
シード重合時に相分離剤として作用し、粒子の多孔質化
を促進する有機溶媒である脂肪族、芳香族炭化水素類、
エステル類、ケトン類、エーテル、アルコール類が挙げ
られる。このような溶媒としては、例えば、トルエン、
キシレン、シクロヘキサン、オクタン、酢酸ブチル、フ
タル酸ジブチル、メチルエチルケトン、ジブチルエーテ
ル、１−ヘキサノール、２−オクタノール、デカノー
ル、ラウリルアルコール、シクロヘキサノール等が挙げ
られ、これらは単独もしくは混合して使用することが出
来る。また、場合によっては多孔質化溶媒の種類の選
定、例えば芳香族炭化水素類であるか或いはアルコール
類であるかによっても架橋共重合体粒子に所望の特性を
付与することもできる。
【００１０】シード重合時のラジカル重合開始剤は、過
酸化ベンゾイル、ブチルパーオキシヘキサノエート等の
過酸化物系開始剤、アゾビスイソブチロニトリル、アゾ
ビスイソバレロニトリル等のアゾ系開始剤が好ましい。
これら重合開始剤は、ビニル単量体或いは多孔質化溶媒
に溶解し、ビニル単量体の含浸と同時にまたはその前後
に種粒子に含浸させる。また、これらビニル単量体、多
孔質化溶媒、ラジカル重合開始剤等を種粒子に含浸させ
る際に、場合により種粒子に対して親和性が高い溶媒で
希釈し、含浸させる事も出来る。このような溶媒として
は、アルコール、アセトン等の水混和性溶媒やジクロロ
エタン、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素等が挙げ
られる。これら含浸を促進する溶媒は、シード重合開始
のために、重合温度に昇温される前に減圧留去する事が
好ましい。
酸化ベンゾイル、ブチルパーオキシヘキサノエート等の
過酸化物系開始剤、アゾビスイソブチロニトリル、アゾ
ビスイソバレロニトリル等のアゾ系開始剤が好ましい。
これら重合開始剤は、ビニル単量体或いは多孔質化溶媒
に溶解し、ビニル単量体の含浸と同時にまたはその前後
に種粒子に含浸させる。また、これらビニル単量体、多
孔質化溶媒、ラジカル重合開始剤等を種粒子に含浸させ
る際に、場合により種粒子に対して親和性が高い溶媒で
希釈し、含浸させる事も出来る。このような溶媒として
は、アルコール、アセトン等の水混和性溶媒やジクロロ
エタン、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素等が挙げ
られる。これら含浸を促進する溶媒は、シード重合開始
のために、重合温度に昇温される前に減圧留去する事が
好ましい。
【００１１】本発明では、このようにビニル単量体、多
孔質化溶媒、重合開始剤を含浸させ、種粒子を肥大化し
た後、水性媒体中に懸濁して重合を行う。該水性媒体中
には、シード重合中に凝集、変形、融着する事を防止
し、その分散安定性を増すために、分散安定剤を含有さ
せることが好ましい。該分散安定剤としては、公知のア
ニオン系、ノニオン系の界面活性剤及びポリビニルピロ
リドン、ポリエチレンイミン、ビニルアルコール／酢酸
エチル共重合体等が好ましい。シード重合は、重合温度
に昇温される事によって開始される。この重合温度は使
用する重合開始剤の種類にもよるが、５０℃〜８０℃が
好ましい。また、シード重合の重合時間は、重合開始剤
の半減期前後、又はそれ以上が好ましく、例えば、３時
間〜４８時間が好ましい。
孔質化溶媒、重合開始剤を含浸させ、種粒子を肥大化し
た後、水性媒体中に懸濁して重合を行う。該水性媒体中
には、シード重合中に凝集、変形、融着する事を防止
し、その分散安定性を増すために、分散安定剤を含有さ
せることが好ましい。該分散安定剤としては、公知のア
ニオン系、ノニオン系の界面活性剤及びポリビニルピロ
リドン、ポリエチレンイミン、ビニルアルコール／酢酸
エチル共重合体等が好ましい。シード重合は、重合温度
に昇温される事によって開始される。この重合温度は使
用する重合開始剤の種類にもよるが、５０℃〜８０℃が
好ましい。また、シード重合の重合時間は、重合開始剤
の半減期前後、又はそれ以上が好ましく、例えば、３時
間〜４８時間が好ましい。
【００１２】本発明において、シード重合はそれ自体公
知の一般的な方法によって実施できる。乳化重合法また
はソープフリー乳化重合法で製造された０．１〜１．５
μｍの重合体を種粒子とする場合には、まずフタル酸ジ
メチル等の膨潤助剤による一次膨潤の後、シード重合す
ることにより、１００μｍ程度までの粒子径が均一な多
孔質粒子が製造出来る方法（J.Ugelstad et.al.Makromo
leculare Chemie,80,737(1979))が好適に用いられる。
また、分散重合により製造された１〜１０μｍの重合体
粒子を種粒子としてシード重合する方法（例えば特開昭
６４−２６６１７号公報）も好適に使用出来る。更に、
本発明においては、シード重合完結後、種粒子として用
いた有機重合体粒子の良溶媒を用いて、生成架橋重合体
粒子を洗浄する事により、種粒子由来の重合体の一部ま
たは全部を除去する事によっても、所望の多孔度の樹脂
を得ることが出来る。
知の一般的な方法によって実施できる。乳化重合法また
はソープフリー乳化重合法で製造された０．１〜１．５
μｍの重合体を種粒子とする場合には、まずフタル酸ジ
メチル等の膨潤助剤による一次膨潤の後、シード重合す
ることにより、１００μｍ程度までの粒子径が均一な多
孔質粒子が製造出来る方法（J.Ugelstad et.al.Makromo
leculare Chemie,80,737(1979))が好適に用いられる。
また、分散重合により製造された１〜１０μｍの重合体
粒子を種粒子としてシード重合する方法（例えば特開昭
６４−２６６１７号公報）も好適に使用出来る。更に、
本発明においては、シード重合完結後、種粒子として用
いた有機重合体粒子の良溶媒を用いて、生成架橋重合体
粒子を洗浄する事により、種粒子由来の重合体の一部ま
たは全部を除去する事によっても、所望の多孔度の樹脂
を得ることが出来る。
【００１３】本発明で得られる多孔性架橋重合体粒子の
ＢＥＴ法で測定した乾燥状態での好ましい細孔物性とし
ては、平均細孔半径として１０〜２０００オングストロ
ーム、好ましくは７５〜１５００オングストロームであ
り、細孔容積として０．２〜１．８ｍｌ／ｇ，好ましく
は０．４〜１．２ｍｌ／ｇであり、細孔表面積として１
〜１０００ｍ2／ｇ，好ましくは５〜５００ｍ2／ｇであ
る。
ＢＥＴ法で測定した乾燥状態での好ましい細孔物性とし
ては、平均細孔半径として１０〜２０００オングストロ
ーム、好ましくは７５〜１５００オングストロームであ
り、細孔容積として０．２〜１．８ｍｌ／ｇ，好ましく
は０．４〜１．２ｍｌ／ｇであり、細孔表面積として１
〜１０００ｍ2／ｇ，好ましくは５〜５００ｍ2／ｇであ
る。
【００１４】このようにして得られた多孔性重合体粒子
に陰イオン交換基を導入し、リポ蛋白質分離用樹脂とす
る。導入される陰イオン交換基としては、ジメチルアミ
ノエチル基、ジエチルアミノエチル基をはじめとする各
種アミノ基、各種４級アンモニウム基等が挙げられる。
多孔性重合体粒子に陰イオン交換基を導入する方法は、
公知の方法に従って行われる。例えばマトリックスを構
成するビニル単量体がエポキシ基を有する場合には、エ
ポキシ基を水、グリセリン、又はエチレングリコール等
により開環変性し、生成した水酸基に陰イオン交換基を
導入する方法、或いは該エポキシ基に直接陰イオン交換
基を結合させる方法等を挙げることが出来る。また、導
入される陰イオン交換基の量としては、乾燥樹脂重量１
ｇあたり０．１〜１．５ミリ当量、好ましくは０．２〜
１．２ミリ当量である。
に陰イオン交換基を導入し、リポ蛋白質分離用樹脂とす
る。導入される陰イオン交換基としては、ジメチルアミ
ノエチル基、ジエチルアミノエチル基をはじめとする各
種アミノ基、各種４級アンモニウム基等が挙げられる。
多孔性重合体粒子に陰イオン交換基を導入する方法は、
公知の方法に従って行われる。例えばマトリックスを構
成するビニル単量体がエポキシ基を有する場合には、エ
ポキシ基を水、グリセリン、又はエチレングリコール等
により開環変性し、生成した水酸基に陰イオン交換基を
導入する方法、或いは該エポキシ基に直接陰イオン交換
基を結合させる方法等を挙げることが出来る。また、導
入される陰イオン交換基の量としては、乾燥樹脂重量１
ｇあたり０．１〜１．５ミリ当量、好ましくは０．２〜
１．２ミリ当量である。
【００１５】
【実施例】次に、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明するが、本発明はその要旨を越えない限り以下の実
施例に限定されるものではない。
説明するが、本発明はその要旨を越えない限り以下の実
施例に限定されるものではない。
【００１６】実施例 １ 粒子径１μｍ均一ポリスチレン種粒子の水懸濁液（９．
５×１０-2ｇ/ml）１．４ｍｌを、膨潤助剤であるフタ
ル酸ジブチルエステル０．９５ｍｌ、重合開始剤として
の過酸化ベンゾイル０．０８５ｇ，及びドデシル硫酸ナ
トリウム０．０４ｇを水１０ｍｌの中に分散させたマイ
クロエマルジョンと混合し、緩やかに室温で攪拌した。
この第一段階目の膨潤は、光学顕微鏡による観察におい
て加えたマイクロエマルジョン液滴が見られなくなるま
で行った。モノマーであるグリセリンジメタクリレート
５．０ｇ，グリセリンモノメタクリレート５．０ｇ，グ
リシジルメタクリレート５．０ｇおよび多孔質化溶媒で
あるシクロヘキサノール３０ｍｌを、懸濁安定剤として
４．８０ｇのポリビニルアルコール（重合度５００、ケ
ン化度８６．５−８９mol％）を含む水２２５ｍｌの中
に懸濁させた微分散液を、上記の一次膨潤後の懸濁液に
加え、室温で一晩緩やかに攪拌した（二次膨潤）。
５×１０-2ｇ/ml）１．４ｍｌを、膨潤助剤であるフタ
ル酸ジブチルエステル０．９５ｍｌ、重合開始剤として
の過酸化ベンゾイル０．０８５ｇ，及びドデシル硫酸ナ
トリウム０．０４ｇを水１０ｍｌの中に分散させたマイ
クロエマルジョンと混合し、緩やかに室温で攪拌した。
この第一段階目の膨潤は、光学顕微鏡による観察におい
て加えたマイクロエマルジョン液滴が見られなくなるま
で行った。モノマーであるグリセリンジメタクリレート
５．０ｇ，グリセリンモノメタクリレート５．０ｇ，グ
リシジルメタクリレート５．０ｇおよび多孔質化溶媒で
あるシクロヘキサノール３０ｍｌを、懸濁安定剤として
４．８０ｇのポリビニルアルコール（重合度５００、ケ
ン化度８６．５−８９mol％）を含む水２２５ｍｌの中
に懸濁させた微分散液を、上記の一次膨潤後の懸濁液に
加え、室温で一晩緩やかに攪拌した（二次膨潤）。
【００１７】二次膨潤の終了した懸濁液は、アルゴン雰
囲気下、水溶性重合抑制剤の存在下、７０℃で２４時間
重合を行った。重合の終了した懸濁液を水２５０ｍｌ中
にそそぎいれ、粒子の沈降後上澄み液を廃棄することで
懸濁安定剤を除去した。さらに粒子をメタノールに再分
散させ、粒子の沈降後に上澄み液を除く方法で洗浄し
た。この操作をメタノールでさらに一回、テトラヒドロ
フランで二回行った後、粒子をろ過し室温で乾燥させ
た。イオン交換基の導入は、上記で得られた粒子５．７
８ｇをジメチルホルムアミド５０ｍｌに分散させ、アル
ゴン雰囲気下にＮ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミン１０
ｍｌを加え、７０℃で６時間緩やかに攪拌しながら行っ
た。反応終了後、懸濁液を水中にそそぎいれ、粒子の沈
降後上澄み液を除去した。さらに粒子をメタノールに再
分散させ、粒子の沈降後に上澄み液を除く方法で洗浄し
た。この操作をメタノールで一回、アセトンで二回行っ
た後、粒子をろ過し、乾燥して粒状樹脂（分離剤）を得
た。この分離剤の元素分析の結果は、Ｃ＝５４．２２
％、Ｈ＝７．８９％、Ｎ＝２．２３％であった。元素分
析の結果に基づく計算により、イオン交換容量は０．８
ｍｅｑ／ｇ−重合体であった。
囲気下、水溶性重合抑制剤の存在下、７０℃で２４時間
重合を行った。重合の終了した懸濁液を水２５０ｍｌ中
にそそぎいれ、粒子の沈降後上澄み液を廃棄することで
懸濁安定剤を除去した。さらに粒子をメタノールに再分
散させ、粒子の沈降後に上澄み液を除く方法で洗浄し
た。この操作をメタノールでさらに一回、テトラヒドロ
フランで二回行った後、粒子をろ過し室温で乾燥させ
た。イオン交換基の導入は、上記で得られた粒子５．７
８ｇをジメチルホルムアミド５０ｍｌに分散させ、アル
ゴン雰囲気下にＮ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミン１０
ｍｌを加え、７０℃で６時間緩やかに攪拌しながら行っ
た。反応終了後、懸濁液を水中にそそぎいれ、粒子の沈
降後上澄み液を除去した。さらに粒子をメタノールに再
分散させ、粒子の沈降後に上澄み液を除く方法で洗浄し
た。この操作をメタノールで一回、アセトンで二回行っ
た後、粒子をろ過し、乾燥して粒状樹脂（分離剤）を得
た。この分離剤の元素分析の結果は、Ｃ＝５４．２２
％、Ｈ＝７．８９％、Ｎ＝２．２３％であった。元素分
析の結果に基づく計算により、イオン交換容量は０．８
ｍｅｑ／ｇ−重合体であった。
【００１８】実施例２ 多孔質化溶媒としてシクロヘキサノールの代わりにトル
エンを用いた他は、実施例１と同様にして粒状樹脂（分
離剤）を得た。元素分析の結果は、Ｃ＝５４．２７％、
Ｈ＝７．６４％、Ｎ＝１．８５％であった。元素分析の
結果より計算すると、イオン交換容量は０．７ｍｅｑ／
ｇ−重合体であった。
エンを用いた他は、実施例１と同様にして粒状樹脂（分
離剤）を得た。元素分析の結果は、Ｃ＝５４．２７％、
Ｈ＝７．６４％、Ｎ＝１．８５％であった。元素分析の
結果より計算すると、イオン交換容量は０．７ｍｅｑ／
ｇ−重合体であった。
【００１９】試験例１ 実施例１及び２で得られた粒状樹脂を用い、ＩＣＲマウ
ス血清を試料としてリポ蛋白質の分離を行った。 試験方法 図１に示すシステムに従い、試料を注入した分離カラム
に溶離液を流してリポ蛋白質を分離し、これに酵素溶液
を加え加熱反応させた後、検出器で検出する。
ス血清を試料としてリポ蛋白質の分離を行った。 試験方法 図１に示すシステムに従い、試料を注入した分離カラム
に溶離液を流してリポ蛋白質を分離し、これに酵素溶液
を加え加熱反応させた後、検出器で検出する。
【００２０】カラム： 粒状樹脂を湿式法によって内径
４．６ｍｍ，長さ１５０ｍｍのステンレススチール製カ
ラムに充填して用いた。 溶離液： 下記２種の緩衝液を用い、溶離液Ｂを図２に
従って溶離液Ａに加えたものを４５分間流した。 Ａ： ２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液＋１ｍＭエチレ
ンジアミン四酢酸（ｐＨ７．０） Ｂ： （溶離液Ａ）＋０．５Ｍ塩化ナトリウム 酵素試薬：コレステロールＣテストワコー（和光純薬
（株）製） カラム温度：２５℃ 検出 ： ５０５ｎｍ 試料 ： ＩＣＲマウス血清２５μｌ 結果 実施例１及び実施例２の粒状樹脂を用いた場合の
クロマトグラムを夫々図３及び図４に示した。
４．６ｍｍ，長さ１５０ｍｍのステンレススチール製カ
ラムに充填して用いた。 溶離液： 下記２種の緩衝液を用い、溶離液Ｂを図２に
従って溶離液Ａに加えたものを４５分間流した。 Ａ： ２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液＋１ｍＭエチレ
ンジアミン四酢酸（ｐＨ７．０） Ｂ： （溶離液Ａ）＋０．５Ｍ塩化ナトリウム 酵素試薬：コレステロールＣテストワコー（和光純薬
（株）製） カラム温度：２５℃ 検出 ： ５０５ｎｍ 試料 ： ＩＣＲマウス血清２５μｌ 結果 実施例１及び実施例２の粒状樹脂を用いた場合の
クロマトグラムを夫々図３及び図４に示した。
【００２１】
【発明の効果】本発明の樹脂を用いることにより、血漿
や血清中のコレステロール等のリポ蛋白質を極めて精度
良く分離することができる。
や血清中のコレステロール等のリポ蛋白質を極めて精度
良く分離することができる。
【図１】試験例１におけるリポ蛋白質分離試験法のシス
テムを示す概略図
テムを示す概略図
【図２】試験例１における溶離液中のグラジエントを示
す図
す図
【図３】実施例１の樹脂によるリポ蛋白質の分離結果を
示すクロマトグラム
示すクロマトグラム
【図４】実施例２の樹脂によるリポ蛋白質の分離結果を
示すクロマトグラム
示すクロマトグラム
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０８Ｆ 220/32 ＭＭＰ Ｃ０８Ｆ 220/32 ＭＭＰ 220/56 ＭＮＣ 220/56 ＭＮＣ Ｇ０１Ｎ 30/48 Ｇ０１Ｎ 30/48 Ｐ 30/88 30/88 Ｊ // Ｂ０１Ｄ 15/08 Ｂ０１Ｄ 15/08
Claims (5)
- 【請求項１】 水不溶性、親水性のマトリックスに陰イ
オン交換基が導入された陰イオン交換体からなるリポ蛋
白質分離用樹脂。 - 【請求項２】 水不溶性、親水性のマトリックスが、モ
ノビニル単量体から誘導される単位を重量分率で０〜８
０％、架橋性ポリビニル単量体から誘導される単位を重
量分率で２０〜１００％含有し、モノビニル単量体単位
または架橋性ポリビニル単量体単位の少なくとも一方は
親水性基を有しており、且つ陰イオン交換容量が乾燥樹
脂１ｇ当たり０．１〜１．５ミリ当量である陰イオン交
換体からなる請求項１記載のリポ蛋白質分離用樹脂。 - 【請求項３】 マトリックスが、平均細孔半径１０〜２
０００オングストローム、細孔容積０．２〜１．８ｍｌ
／ｇ、細孔表面積１〜１０００ｍ2／ｇの水不溶性、親
水性多孔性重合体粒子であることよりなる請求項１また
は２に記載のリポ蛋白質分離用樹脂。 - 【請求項４】 有機重合体粒子にモノビニル単量体０〜
８０重量％を含有する架橋性ポリビニル単量体、ラジカ
ル重合開始剤及び多孔質化溶媒を含浸させた後、該粒子
を水性媒体に懸濁し、該懸濁液を昇温して重合した後、
陰イオン交換基を導入してなる請求項１乃至３のいずれ
かに記載のリポ蛋白質分離用樹脂。 - 【請求項５】 陰イオン交換基は、置換アミノ基である
請求項１乃至４のいずれかに記載のリポ蛋白質分離用樹
脂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18326895A JP3645317B2 (ja) | 1995-06-28 | 1995-06-28 | リポ蛋白質分離用樹脂 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18326895A JP3645317B2 (ja) | 1995-06-28 | 1995-06-28 | リポ蛋白質分離用樹脂 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0912629A true JPH0912629A (ja) | 1997-01-14 |
| JP3645317B2 JP3645317B2 (ja) | 2005-05-11 |
Family
ID=16132697
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18326895A Expired - Fee Related JP3645317B2 (ja) | 1995-06-28 | 1995-06-28 | リポ蛋白質分離用樹脂 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3645317B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001343378A (ja) * | 2000-06-02 | 2001-12-14 | Showa Denko Kk | 固相抽出用充填剤及び固相抽出方法 |
| JP2006111717A (ja) * | 2004-10-14 | 2006-04-27 | Tosoh Corp | 架橋（メタ）アクリルアミド粒子及びその製造法及びその用途 |
| JP2019112558A (ja) * | 2017-12-25 | 2019-07-11 | Ｔｏｙｏ Ｔｉｒｅ株式会社 | ポリマー粒子の製造方法 |
| CN110028614A (zh) * | 2019-04-16 | 2019-07-19 | 东华大学 | 具有蛋白吸附功能的抗菌微纳米凝胶与纤维及其制备方法 |
-
1995
- 1995-06-28 JP JP18326895A patent/JP3645317B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| CN110028614A (zh) * | 2019-04-16 | 2019-07-19 | 东华大学 | 具有蛋白吸附功能的抗菌微纳米凝胶与纤维及其制备方法 |
| CN110028614B (zh) * | 2019-04-16 | 2021-05-11 | 东华大学 | 具有蛋白吸附功能的抗菌微纳米凝胶与纤维及其制备方法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3645317B2 (ja) | 2005-05-11 |
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