JPH08280395A - トレハロースの製造方法 - Google Patents
トレハロースの製造方法Info
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- JPH08280395A JPH08280395A JP7040690A JP4069095A JPH08280395A JP H08280395 A JPH08280395 A JP H08280395A JP 7040690 A JP7040690 A JP 7040690A JP 4069095 A JP4069095 A JP 4069095A JP H08280395 A JPH08280395 A JP H08280395A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 β-グルコース-１-リン酸とグルコースから
トレハロースを生成する能力、またはリン酸根の存在
下、マルトースからトレハロースを生成する能力を有す
る微生物の菌体または菌体処理物を、β-グルコース-１
-リン酸とグルコース、またはリン酸根の存在下、マル
トースに作用せしめ、トレハロースを採取することを特
徴とするトレハロースの製造方法。 【効果】 本発明によれば、トレハロースを安価かつ簡
便に製造することができる。
トレハロースを生成する能力、またはリン酸根の存在
下、マルトースからトレハロースを生成する能力を有す
る微生物の菌体または菌体処理物を、β-グルコース-１
-リン酸とグルコース、またはリン酸根の存在下、マル
トースに作用せしめ、トレハロースを採取することを特
徴とするトレハロースの製造方法。 【効果】 本発明によれば、トレハロースを安価かつ簡
便に製造することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はトレハロースの製造方法
に関する。トレハロースは甘味剤、増量剤、保湿剤、蛋
白等の乾燥保護剤として有用である。
に関する。トレハロースは甘味剤、増量剤、保湿剤、蛋
白等の乾燥保護剤として有用である。
【０００２】
【従来技術】トレハロースの製造方法としては、酵母、
カビなどからの抽出法、酵母、アースロバクター、ノカ
ルディア等を用いる微生物による発酵法等が知られてい
るが、これらの方法では、トレハロースの純度が低く、
操作が煩雑である。他の方法としては、マルトースにマ
ルトースホスホリラーゼ及びトレハロースホスホリラー
ゼを作用させる方法（特開昭５８−２１６６９５）や、
α-グルコース-１-リン酸及びグルコースにトレハロー
スホスホリラーゼを作用させる方法（特開平６−１８９
７７９）が知られているが、これらの方法に用いられる
トレハロースホスホリラーゼは緑藻やキノコ由来であ
り、緑藻やキノコは培養が容易ではなく、培養が容易な
細菌にはこの酵素は見いだされていない。
カビなどからの抽出法、酵母、アースロバクター、ノカ
ルディア等を用いる微生物による発酵法等が知られてい
るが、これらの方法では、トレハロースの純度が低く、
操作が煩雑である。他の方法としては、マルトースにマ
ルトースホスホリラーゼ及びトレハロースホスホリラー
ゼを作用させる方法（特開昭５８−２１６６９５）や、
α-グルコース-１-リン酸及びグルコースにトレハロー
スホスホリラーゼを作用させる方法（特開平６−１８９
７７９）が知られているが、これらの方法に用いられる
トレハロースホスホリラーゼは緑藻やキノコ由来であ
り、緑藻やキノコは培養が容易ではなく、培養が容易な
細菌にはこの酵素は見いだされていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、安価
かつ簡便にトレハロースを製造する方法を提供すること
にある。
かつ簡便にトレハロースを製造する方法を提供すること
にある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上述の事情
に鑑み検討を重ねた結果、アルスロバクター属、バチル
ス属、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属、
フラボバクテリウム属、マイクロコッカス属、セラチア
属、ストレプトマイセス属またはキサントモナス属に属
する微生物がβ-グルコース-１-リン酸とグルコースか
らトレハロースを生成することを見出し、さらに、これ
らの微生物が、マルトースホスホリラーゼをあわせも
ち、リン酸根の存在下、マルトースからトレハロースを
生成しうることを見出し本発明を完成するに至った。
に鑑み検討を重ねた結果、アルスロバクター属、バチル
ス属、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属、
フラボバクテリウム属、マイクロコッカス属、セラチア
属、ストレプトマイセス属またはキサントモナス属に属
する微生物がβ-グルコース-１-リン酸とグルコースか
らトレハロースを生成することを見出し、さらに、これ
らの微生物が、マルトースホスホリラーゼをあわせも
ち、リン酸根の存在下、マルトースからトレハロースを
生成しうることを見出し本発明を完成するに至った。
【０００５】すなわち本発明は、β-グルコース-１-リ
ン酸とグルコースからトレハロースを製造する方法とリ
ン酸根の存在下、マルトースからトレハロースを製造す
る方法を提供するものである。
ン酸とグルコースからトレハロースを製造する方法とリ
ン酸根の存在下、マルトースからトレハロースを製造す
る方法を提供するものである。
【０００６】本発明で使用する微生物は、β-グルコー
ス-１-リン酸とグルコースからトレハロースを生成する
能力またはリン酸根の存在下、マルトースからトレハロ
ースを生成する能力を有し、アルスロバクター属、バチ
ルス属、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム
属、フラボバクテリウム属、マイクロコッカス属、セラ
チア属、ストレプトマイセス属またはキサントモナス属
に属する微生物であればいずれを用いてもよいが、具体
的には以下のものを例示することができる。アルスロハ゛クター・シトレウス (Arthrobacter citreus) ATCC 11624ハ゛チルス・サーキュランス (Bacillus circulans) ATCC 9966フ゛レヒ゛ハ゛クテリウム・エスヒ゜ー (Brevibacterium sp.) AJ 3125(FER
M P-14784)コリネハ゛クテリウム・キシロシス (Corynebacterium xerosis) ATCC 373フラホ゛ハ゛クテリウム・エスヒ゜ー (Flavobacterium sp.) AJ 2469(FER
M P-14782)マイクロコッカス・ルテウス (Micrococcus luteus) ATCC 272セラチア・エスヒ゜ー (Serratia sp.) AJ 2478(FERM P-14783)ストレフ゜トマイセス・フラホ゛フ゛ィレンス (Streptomyces flavovirens) IF
O 3197キサントモナス・カンヘ゜ストリス (Xanthomonas campestris) AJ 2784(F
ERM P-14753)
ス-１-リン酸とグルコースからトレハロースを生成する
能力またはリン酸根の存在下、マルトースからトレハロ
ースを生成する能力を有し、アルスロバクター属、バチ
ルス属、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム
属、フラボバクテリウム属、マイクロコッカス属、セラ
チア属、ストレプトマイセス属またはキサントモナス属
に属する微生物であればいずれを用いてもよいが、具体
的には以下のものを例示することができる。アルスロハ゛クター・シトレウス (Arthrobacter citreus) ATCC 11624ハ゛チルス・サーキュランス (Bacillus circulans) ATCC 9966フ゛レヒ゛ハ゛クテリウム・エスヒ゜ー (Brevibacterium sp.) AJ 3125(FER
M P-14784)コリネハ゛クテリウム・キシロシス (Corynebacterium xerosis) ATCC 373フラホ゛ハ゛クテリウム・エスヒ゜ー (Flavobacterium sp.) AJ 2469(FER
M P-14782)マイクロコッカス・ルテウス (Micrococcus luteus) ATCC 272セラチア・エスヒ゜ー (Serratia sp.) AJ 2478(FERM P-14783)ストレフ゜トマイセス・フラホ゛フ゛ィレンス (Streptomyces flavovirens) IF
O 3197キサントモナス・カンヘ゜ストリス (Xanthomonas campestris) AJ 2784(F
ERM P-14753)
【０００７】本発明に使用される上記微生物の内、ブレ
ビバクテリウム・エスピーAJ 3125(FERM P-14784)菌、
フラボバクテリウム・エスピーAJ 2469(FERM P-14782)
菌、セラチア・エスピーAJ 2478(FERM P-14783)菌、キ
サントモナス・カンペストリスAJ 2784(FERM P-14753)
菌は本発明者らにより、新たに分離されたものであり、
その菌学的性質は以下の通りである。
ビバクテリウム・エスピーAJ 3125(FERM P-14784)菌、
フラボバクテリウム・エスピーAJ 2469(FERM P-14782)
菌、セラチア・エスピーAJ 2478(FERM P-14783)菌、キ
サントモナス・カンペストリスAJ 2784(FERM P-14753)
菌は本発明者らにより、新たに分離されたものであり、
その菌学的性質は以下の通りである。
【０００８】１．ブレビバクテリウム・エスピーAJ 312
5の菌学的性質 (a)形態 1) 細胞の形および大きさ：かん菌、0.6-1.2×1.5-6.0
μm 2) 細胞の多様性：有り 3) 運動性：なし 4) 胞子：形成しない 5) グラム染色性：陽性 (b)培地における生育状態 1) 肉汁寒天平板培養：生育は適度、表面は滑らか、黄
色 (c)生理学的性質 1) カタラーゼ：陽性 2) ゼラチンの加水分解：陽性 3) 生育温度：20-35度 4) 酸素に対する態度：絶対好気性 5) 糖類から酸の生成：なし
5の菌学的性質 (a)形態 1) 細胞の形および大きさ：かん菌、0.6-1.2×1.5-6.0
μm 2) 細胞の多様性：有り 3) 運動性：なし 4) 胞子：形成しない 5) グラム染色性：陽性 (b)培地における生育状態 1) 肉汁寒天平板培養：生育は適度、表面は滑らか、黄
色 (c)生理学的性質 1) カタラーゼ：陽性 2) ゼラチンの加水分解：陽性 3) 生育温度：20-35度 4) 酸素に対する態度：絶対好気性 5) 糖類から酸の生成：なし
【０００９】以上、AJ 3125菌の菌学的性質の特徴とし
て (1)かん菌 (2)グラム陽性 (3)絶対好気性 (4)カタラーゼ陽性 (5)糖類から酸を生成しない などがあげられる。
て (1)かん菌 (2)グラム陽性 (3)絶対好気性 (4)カタラーゼ陽性 (5)糖類から酸を生成しない などがあげられる。
【００１０】これらの特徴を基準としてBergey's Manua
l of Determinative Bacteriology第9版に基づき検索し
た結果、AJ 3125(FERM P-14784)菌はブレビバクテリウ
ム属細菌と一致した。
l of Determinative Bacteriology第9版に基づき検索し
た結果、AJ 3125(FERM P-14784)菌はブレビバクテリウ
ム属細菌と一致した。
【００１１】２．フラボバクテリウム・エスピーAJ 246
9(FERM P-14782)の菌学的性質 (a)形態 1) 細胞の形および大きさ：かん菌、0.5-1.0×3.0 μm 2) 細胞の多様性：なし 3) 運動性：なし 4) 胞子：形成しない 5) グラム染色性：陰性 (b)培地における生育状態 1) 肉汁寒天平板培養：生育は適度、表面は滑らか、黄
色 (c)生理学的性質 1) 硝酸塩の還元：還元しない 2) 脱窒反応：陰性 3) インドールの生成：陰性 4) オキシダーゼ：陽性 5) カタラーゼ：陽性 6) ホォスファターゼ：陽性 7) デンプンの加水分解：陰性 8) 生育温度：25-30度、42度以上では生育しない 9) 酸素に対する態度：好気性 10) 糖類から酸の生成：表１の通り
9(FERM P-14782)の菌学的性質 (a)形態 1) 細胞の形および大きさ：かん菌、0.5-1.0×3.0 μm 2) 細胞の多様性：なし 3) 運動性：なし 4) 胞子：形成しない 5) グラム染色性：陰性 (b)培地における生育状態 1) 肉汁寒天平板培養：生育は適度、表面は滑らか、黄
色 (c)生理学的性質 1) 硝酸塩の還元：還元しない 2) 脱窒反応：陰性 3) インドールの生成：陰性 4) オキシダーゼ：陽性 5) カタラーゼ：陽性 6) ホォスファターゼ：陽性 7) デンプンの加水分解：陰性 8) 生育温度：25-30度、42度以上では生育しない 9) 酸素に対する態度：好気性 10) 糖類から酸の生成：表１の通り
【００１２】
【表１】
【００１３】以上、AJ 2469菌の菌学的性質の特徴とし
て (1)かん菌 (2)非運動性 (3)グラム陰性 (4)好気性 (5)オキシダーゼ陽性 (6)カタラーゼ陽性 (7)ホォスファターゼ陽性 などがあげられる。
て (1)かん菌 (2)非運動性 (3)グラム陰性 (4)好気性 (5)オキシダーゼ陽性 (6)カタラーゼ陽性 (7)ホォスファターゼ陽性 などがあげられる。
【００１４】これらの特徴を基準としてBergey's Manua
l of Determinative Bacteriology第9版に基づき検索
した結果、AJ 2469(FERM P-14782)菌はフラボバクテリ
ウム属細菌と一致した。
l of Determinative Bacteriology第9版に基づき検索
した結果、AJ 2469(FERM P-14782)菌はフラボバクテリ
ウム属細菌と一致した。
【００１５】３．セラチア・エスピー AJ 2478(FERM P-
14783)の菌学的性質 (a)形態 1) 細胞の形および大きさ：かん菌、0.5-0.8×0.9-2.0
μm 2) 細胞の多様性：なし 3) 運動性：あり、周鞭毛 4) 胞子：形成しない 5) グラム染色性：陰性 (b)培地における生育状態 1) 肉汁寒天平板培養：生育は適度、表面は滑らか、褐
色 (c)生理学的性質 1) 硝酸塩の還元：還元する 2) Voges-Proskauer：陽性 3) 硫化水素の生成：陰性 4) インドールの生成：陰性 5) リジンデカルボキシラーゼ：陽性 6) アルギニンジヒドロラーゼ：陰性 7) オルニチンデカルボキシラーゼ：陽性 8) 尿素の加水分解：陰性 9) ゼラチンの加水分解：陽性 10) 生育温度：30-37度 11)酸素に対する態度：通性嫌気性 12)糖類から酸の生成： 表２の通り
14783)の菌学的性質 (a)形態 1) 細胞の形および大きさ：かん菌、0.5-0.8×0.9-2.0
μm 2) 細胞の多様性：なし 3) 運動性：あり、周鞭毛 4) 胞子：形成しない 5) グラム染色性：陰性 (b)培地における生育状態 1) 肉汁寒天平板培養：生育は適度、表面は滑らか、褐
色 (c)生理学的性質 1) 硝酸塩の還元：還元する 2) Voges-Proskauer：陽性 3) 硫化水素の生成：陰性 4) インドールの生成：陰性 5) リジンデカルボキシラーゼ：陽性 6) アルギニンジヒドロラーゼ：陰性 7) オルニチンデカルボキシラーゼ：陽性 8) 尿素の加水分解：陰性 9) ゼラチンの加水分解：陽性 10) 生育温度：30-37度 11)酸素に対する態度：通性嫌気性 12)糖類から酸の生成： 表２の通り
【００１６】
【表２】
【００１７】以上、AJ 2478菌の菌学的性質の特徴とし
て (1)かん菌 (2)運動性 (3)グラム陰性 (4)Voges-Proskauer 陽性 (5)リジンデカルボキシラーゼ陽性 (6)アルギニンジヒドロラーゼ陽性 (7)オルニチンデカルボキシラーゼ陽性 などがあげられる。
て (1)かん菌 (2)運動性 (3)グラム陰性 (4)Voges-Proskauer 陽性 (5)リジンデカルボキシラーゼ陽性 (6)アルギニンジヒドロラーゼ陽性 (7)オルニチンデカルボキシラーゼ陽性 などがあげられる。
【００１８】これらの特徴を基準としてBergey's Manua
l of Determinative Bacteriology第9版に基づき検索し
た結果、AJ 2478(FERM P-14783)菌はセラチア属細菌と
一致した。
l of Determinative Bacteriology第9版に基づき検索し
た結果、AJ 2478(FERM P-14783)菌はセラチア属細菌と
一致した。
【００１９】４．キサントモナス・カンペストリスAJ 2
784(FERM P-14753)の菌学的性質 (a)形態 1) 細胞の形および大きさ：かん菌、0.4-0.7×0.7-1.8
μm 2) 細胞の多様性：なし 3) 運動性：あり、極鞭毛 4) 胞子：形成しない 5) グラム染色性：陰性 (b)各培地における生育状態 1) 肉汁寒天平板培養：生育は適度、表面は滑らか、黄
色、粘性有り 2) リトマス・ミルク：リトマスを還元しない (c)生理学的性質 1) 硝酸塩の還元：還元しない 2) 脱窒反応：陰性 3) 硫化水素の生成：陽性 4) オキシダーゼ：弱陽性 5) カタラーゼ：陽性 6) デンプンの加水分解：弱陽性 7) 生育温度：25-30度、39度以上では生育しない 8) 酸素に対する態度：好気性 9) 糖類から酸の生成：表３の通り
784(FERM P-14753)の菌学的性質 (a)形態 1) 細胞の形および大きさ：かん菌、0.4-0.7×0.7-1.8
μm 2) 細胞の多様性：なし 3) 運動性：あり、極鞭毛 4) 胞子：形成しない 5) グラム染色性：陰性 (b)各培地における生育状態 1) 肉汁寒天平板培養：生育は適度、表面は滑らか、黄
色、粘性有り 2) リトマス・ミルク：リトマスを還元しない (c)生理学的性質 1) 硝酸塩の還元：還元しない 2) 脱窒反応：陰性 3) 硫化水素の生成：陽性 4) オキシダーゼ：弱陽性 5) カタラーゼ：陽性 6) デンプンの加水分解：弱陽性 7) 生育温度：25-30度、39度以上では生育しない 8) 酸素に対する態度：好気性 9) 糖類から酸の生成：表３の通り
【００２０】
【表３】
【００２１】以上、AJ 2784菌の菌学的性質の特徴とし
て (1)かん菌 (2)運動性 (3)グラム陰性 (4)集落は黄色 (5)オキシダーゼ弱陽性 (6)カタラーゼ陽性 (7)アラビノース、セロビオースから酸を生成する などがあげられる。
て (1)かん菌 (2)運動性 (3)グラム陰性 (4)集落は黄色 (5)オキシダーゼ弱陽性 (6)カタラーゼ陽性 (7)アラビノース、セロビオースから酸を生成する などがあげられる。
【００２２】これらの特徴を基準としてBergey's Manua
l of Determinative Bacteriology第9版に基づき検索し
た結果、AJ 2784(FERM P-14753)菌はキサントモナス・
カンペストリスと一致した。
l of Determinative Bacteriology第9版に基づき検索し
た結果、AJ 2784(FERM P-14753)菌はキサントモナス・
カンペストリスと一致した。
【００２３】本発明に用いられる微生物は、野生株また
は変異株のいずれでもよいし、細胞融合もしくは遺伝子
操作などの遺伝学的手法により誘導される組み替え株等
も用いることができる。
は変異株のいずれでもよいし、細胞融合もしくは遺伝子
操作などの遺伝学的手法により誘導される組み替え株等
も用いることができる。
【００２４】このような微生物の菌体を得るには、当該
微生物を適当な培地で培養増殖せしめるとよい。そのよ
うな培地には格別の制限はなく、通常の炭素源、窒素
源、無機イオン、更に必要に応じ有機栄養源を含む通常
の培地でよい。
微生物を適当な培地で培養増殖せしめるとよい。そのよ
うな培地には格別の制限はなく、通常の炭素源、窒素
源、無機イオン、更に必要に応じ有機栄養源を含む通常
の培地でよい。
【００２５】炭素源としては、上記微生物が利用可能で
あればいずれも使用でき、具体的には、グルコース、フ
ルクトース、シュークロース、マルトース、トレハロー
ス、アミロース等の糖類、ソルビトール、エタノール、
グリセロール等のアルコール類、フマール酸、クエン
酸、酢酸、プロピオン酸等の有機酸類及びこれらの塩
類、パラフィン等の炭化水素類あるいはこれらの混合物
を使用することができる。
あればいずれも使用でき、具体的には、グルコース、フ
ルクトース、シュークロース、マルトース、トレハロー
ス、アミロース等の糖類、ソルビトール、エタノール、
グリセロール等のアルコール類、フマール酸、クエン
酸、酢酸、プロピオン酸等の有機酸類及びこれらの塩
類、パラフィン等の炭化水素類あるいはこれらの混合物
を使用することができる。
【００２６】窒素源としては上記微生物の利用可能であ
ればいずれも使用でき、具体的には、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム等の無機塩のアンモニウム塩、フ
マル酸アンモニウム、クエン酸アンモニウム等の有機酸
のアンモニウム塩、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等の
硝酸塩、ペプトン、酵母エキス、肉エキス、コーンステ
ィープリカー等の有機窒素化合物、あるいはこれらの混
合物を使用することができる。
ればいずれも使用でき、具体的には、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム等の無機塩のアンモニウム塩、フ
マル酸アンモニウム、クエン酸アンモニウム等の有機酸
のアンモニウム塩、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等の
硝酸塩、ペプトン、酵母エキス、肉エキス、コーンステ
ィープリカー等の有機窒素化合物、あるいはこれらの混
合物を使用することができる。
【００２７】他に無機塩、微量金属塩、ビタミン類等、
通常の培養に用いられる栄養源を適宜、混合して用いる
ことができる。
通常の培養に用いられる栄養源を適宜、混合して用いる
ことができる。
【００２８】培養方法としては培地のpHは3.0〜9.0、好
ましくは、4.0〜8.0、培養温度は20〜45℃、好ましくは
25〜40℃で、その微生物の生育に適した条件下、5〜120
時間、好ましくは12〜72時間程度培養する。
ましくは、4.0〜8.0、培養温度は20〜45℃、好ましくは
25〜40℃で、その微生物の生育に適した条件下、5〜120
時間、好ましくは12〜72時間程度培養する。
【００２９】反応の方法としては、かくして得られる微
生物培養物にβ-グルコース-１-リン酸とグルコースを
添加して反応させる方法あるいはリン酸根の存在下、マ
ルトースを添加し反応させる方法、または、遠心分離等
により菌体を分離し、これをそのまま、あるいは洗浄し
た後、緩衝液、水等に再懸濁したものに、β-グルコー
ス-１-リン酸とグルコースを添加して反応させる方法あ
るいはリン酸根の存在下、マルトースを添加し反応させ
る方法等がある。酵素源としては、生菌体のままでも良
いし、菌体破砕物、アセトン処理、トルエン処理、凍結
乾燥等の処理をほどこしたものでも良い。また、これら
の菌体あるいは菌体処理物を、例えばポリアクリルアミ
ド法、カラギーナン法、アルギン酸法等の公知の方法で
固定化して用いることもできる。更に、菌体処理物か
ら、公知の方法を組み合わせて精製取得した酵素も使用
できる。
生物培養物にβ-グルコース-１-リン酸とグルコースを
添加して反応させる方法あるいはリン酸根の存在下、マ
ルトースを添加し反応させる方法、または、遠心分離等
により菌体を分離し、これをそのまま、あるいは洗浄し
た後、緩衝液、水等に再懸濁したものに、β-グルコー
ス-１-リン酸とグルコースを添加して反応させる方法あ
るいはリン酸根の存在下、マルトースを添加し反応させ
る方法等がある。酵素源としては、生菌体のままでも良
いし、菌体破砕物、アセトン処理、トルエン処理、凍結
乾燥等の処理をほどこしたものでも良い。また、これら
の菌体あるいは菌体処理物を、例えばポリアクリルアミ
ド法、カラギーナン法、アルギン酸法等の公知の方法で
固定化して用いることもできる。更に、菌体処理物か
ら、公知の方法を組み合わせて精製取得した酵素も使用
できる。
【００３０】菌体または菌体処理物の使用量は、所与の
反応の場合において目的とする効果を発揮する量（有効
量）であればよく、この有効量は当業者であれば簡単な
予備実験により容易に求められるが、例えば、洗浄湿潤
菌体の場合、反応１dl当たり１〜４０ｇである。
反応の場合において目的とする効果を発揮する量（有効
量）であればよく、この有効量は当業者であれば簡単な
予備実験により容易に求められるが、例えば、洗浄湿潤
菌体の場合、反応１dl当たり１〜４０ｇである。
【００３１】基質であるβ-グルコース-１-リン酸とグ
ルコースの添加方法またはマルトースの添加方法に関し
ては特に制限はないが、例えば、反応の始めから一括に
添加する方法あるいは反応の途中に分割して添加する方
法などが挙げられる。
ルコースの添加方法またはマルトースの添加方法に関し
ては特に制限はないが、例えば、反応の始めから一括に
添加する方法あるいは反応の途中に分割して添加する方
法などが挙げられる。
【００３２】反応pHはpH3〜9、好ましくはpH5〜8、反応
温度は10〜60℃好ましくは20〜40℃の範囲で、1〜120時
間程度、撹拌下あるいは静置下で反応を行う。基質の使
用濃度は特に制限されないが、1mM〜1M程度が好まし
い。
温度は10〜60℃好ましくは20〜40℃の範囲で、1〜120時
間程度、撹拌下あるいは静置下で反応を行う。基質の使
用濃度は特に制限されないが、1mM〜1M程度が好まし
い。
【００３３】反応によって生成蓄積したトレハロース
は、反応液から晶析する方法、反応液を活性炭吸着樹
脂、イオン交換樹脂等の樹脂を用いて精製した後晶析す
る方法等の通常の方法により、反応終了混合物より分離
採取することができる。
は、反応液から晶析する方法、反応液を活性炭吸着樹
脂、イオン交換樹脂等の樹脂を用いて精製した後晶析す
る方法等の通常の方法により、反応終了混合物より分離
採取することができる。
【００３４】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。なお、実施例におけるトレハロースの定量は、高速
液体クロマトグラフィー（カラム：HPIC AS6 (4mmφ×3
0cm) 2本連結 ダイオネックス社製、溶離液：0.1N NaO
H、流速：0.6ml/min、温度：40℃、検出：電気伝導検出
器）により行った。
る。なお、実施例におけるトレハロースの定量は、高速
液体クロマトグラフィー（カラム：HPIC AS6 (4mmφ×3
0cm) 2本連結 ダイオネックス社製、溶離液：0.1N NaO
H、流速：0.6ml/min、温度：40℃、検出：電気伝導検出
器）により行った。
【００３５】実施例１ フマール酸 0.5g、グリセロール 0.5g、酵母エキス 0.5
g、ポリペプトン 0.5g、(NH4)2SO4 0.15g、K2HPO4 0.15
g、KH2PO4 0.05g、MgSO4・7H20 0.025g、FeSO4・7H2O 0.5
mg、MnSO4・4H2O 0.5mg を含む50mlの培地(pH 7.0)を500
ml容振とうフラスコに入れ、120℃で15分間殺菌した。
g、ポリペプトン 0.5g、(NH4)2SO4 0.15g、K2HPO4 0.15
g、KH2PO4 0.05g、MgSO4・7H20 0.025g、FeSO4・7H2O 0.5
mg、MnSO4・4H2O 0.5mg を含む50mlの培地(pH 7.0)を500
ml容振とうフラスコに入れ、120℃で15分間殺菌した。
【００３６】これにあらかじめブイヨン寒天培地で30℃
にて24時間培養した表４に示した微生物の菌体を一白金
耳量接種し、30℃にて24時間振とう培養した。培養後、
培養物より菌体を遠心分離により集め、50mlの5mMリン
酸緩衝液(pH6.5)にて洗浄し、再び遠心分離により洗浄
菌体を調製した。この湿菌体0.25gを5mMのβ-グルコー
ス-１-リン酸と50mMのグルコースを含む5mMリン酸緩衝
液(pH6.5)に懸濁し5mlとし、30℃にて24時間反応を行な
った。コントロールとしては反応液から基質を除き、菌
体のみを添加したものを用いたが、いずれの菌株におい
てもトレハロースの生成は検出できなかった。結果を表
４に示した。
にて24時間培養した表４に示した微生物の菌体を一白金
耳量接種し、30℃にて24時間振とう培養した。培養後、
培養物より菌体を遠心分離により集め、50mlの5mMリン
酸緩衝液(pH6.5)にて洗浄し、再び遠心分離により洗浄
菌体を調製した。この湿菌体0.25gを5mMのβ-グルコー
ス-１-リン酸と50mMのグルコースを含む5mMリン酸緩衝
液(pH6.5)に懸濁し5mlとし、30℃にて24時間反応を行な
った。コントロールとしては反応液から基質を除き、菌
体のみを添加したものを用いたが、いずれの菌株におい
てもトレハロースの生成は検出できなかった。結果を表
４に示した。
【００３７】
【表４】
【００３８】実施例２ 実施例１と同様に表５に示す微生物の菌体を調製した。
この湿菌体0.25gを100mMのマルトースを含む5mMリン酸
緩衝液(pH6.0)に懸濁し5mlとし、30℃にて24時間反応を
行なった。コントロールとしては反応液から基質を除
き、菌体のみを添加したものを用いたが、いずれの菌株
においてもトレハロースの生成は検出できなかった。結
果を表５に示した。
この湿菌体0.25gを100mMのマルトースを含む5mMリン酸
緩衝液(pH6.0)に懸濁し5mlとし、30℃にて24時間反応を
行なった。コントロールとしては反応液から基質を除
き、菌体のみを添加したものを用いたが、いずれの菌株
においてもトレハロースの生成は検出できなかった。結
果を表５に示した。
【００３９】
【表５】
【００４０】
【発明の効果】本発明によれば、β-グルコース-１-リ
ン酸とグルコースから、トレハロースを安価かつ簡便に
製造することができる。また、本発明によれば、マルト
ースから、トレハロースを安価かつ簡便に製造すること
ができる。
ン酸とグルコースから、トレハロースを安価かつ簡便に
製造することができる。また、本発明によれば、マルト
ースから、トレハロースを安価かつ簡便に製造すること
ができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 19/12 Ｃ１２Ｒ 1:13） (Ｃ１２Ｐ 19/12 Ｃ１２Ｒ 1:15） (Ｃ１２Ｐ 19/12 Ｃ１２Ｒ 1:20） (Ｃ１２Ｐ 19/12 Ｃ１２Ｒ 1:265） (Ｃ１２Ｐ 19/12 Ｃ１２Ｒ 1:425） (Ｃ１２Ｐ 19/12 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 19/12 Ｃ１２Ｒ 1:64）
Claims (2)
- 【請求項１】β-グルコース-１-リン酸とグルコースか
らトレハロースを生成する能力を有し、アルスロバクタ
ー属、バチルス属、ブレビバクテリウム属、コリネバク
テリウム属、フラボバクテリウム属、マイクロコッカス
属、セラチア属、ストレプトマイセス属またはキサント
モナス属に属する微生物の培養物、該培養物より分離し
た微生物菌体または該微生物菌体の処理物をβ-グルコ
ース-１-リン酸とグルコースに作用せしめ、生成するト
レハロースを採取することを特徴とするトレハロースの
製造方法。 - 【請求項２】リン酸根の存在下、マルトースからトレハ
ロースを生成する能力を有し、アルスロバクター属、バ
チルス属、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム
属、フラボバクテリウム属、マイクロコッカス属、セラ
チア属、ストレプトマイセス属またはキサントモナス属
に属する微生物の培養物、該培養物より分離した微生物
菌体または該微生物菌体の処理物を、リン酸根の存在
下、マルトースに作用せしめ、生成するトレハロースを
採取することを特徴とするトレハロースの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7040690A JPH08280395A (ja) | 1995-02-13 | 1995-02-28 | トレハロースの製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7-24243 | 1995-02-13 | ||
| JP2424395 | 1995-02-13 | ||
| JP7040690A JPH08280395A (ja) | 1995-02-13 | 1995-02-28 | トレハロースの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08280395A true JPH08280395A (ja) | 1996-10-29 |
Family
ID=26361739
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7040690A Pending JPH08280395A (ja) | 1995-02-13 | 1995-02-28 | トレハロースの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08280395A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5776739A (en) * | 1919-06-10 | 1998-07-07 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing disaccharides and novel disaccharides |
-
1995
- 1995-02-28 JP JP7040690A patent/JPH08280395A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5776739A (en) * | 1919-06-10 | 1998-07-07 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing disaccharides and novel disaccharides |
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