JPH08217760A - 新規抗生物質ｂ−４６０７ａ - Google Patents
新規抗生物質ｂ−４６０７ａInfo
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- JPH08217760A JPH08217760A JP2240695A JP2240695A JPH08217760A JP H08217760 A JPH08217760 A JP H08217760A JP 2240695 A JP2240695 A JP 2240695A JP 2240695 A JP2240695 A JP 2240695A JP H08217760 A JPH08217760 A JP H08217760A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】本発明は、下記の構造を有するＢ−4607Ａ：
【化１】
等に関する。
【効果】本発明のＢ−4607Ａは、文献未載の新規化合物
であり、動物（例、ヒト、イヌ、ネコ、ウサギ等）にお
いて、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌に対し抗菌作用
を示すことから、各種細菌感染症を対象とする抗菌剤と
して有用である。
であり、動物（例、ヒト、イヌ、ネコ、ウサギ等）にお
いて、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌に対し抗菌作用
を示すことから、各種細菌感染症を対象とする抗菌剤と
して有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗菌作用を有する新規化
合物Ｂ−4607Ａ、その製法およびその生産菌株に関す
る。
合物Ｂ−4607Ａ、その製法およびその生産菌株に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】海水より分離したビブリオ(Vibrio)属に
属する微生物が、例えば抗菌活性を有するブロムジフェ
ニルエーテルを生産することが知られている(Experient
ia 47,632(1991))。しかし、ブロムジフェニルエーテル
はブロムベンゼン化合物である。また、海洋細菌のビブ
リオ ガゾゲネス(Vibrio gazogenes)が生産するマグネ
シジン(Magnesidin)が知られている(J.Antibiotics,47,
257(1994))。本化合物はマグネシウムとキレートするト
リケトン化合物である。
属する微生物が、例えば抗菌活性を有するブロムジフェ
ニルエーテルを生産することが知られている(Experient
ia 47,632(1991))。しかし、ブロムジフェニルエーテル
はブロムベンゼン化合物である。また、海洋細菌のビブ
リオ ガゾゲネス(Vibrio gazogenes)が生産するマグネ
シジン(Magnesidin)が知られている(J.Antibiotics,47,
257(1994))。本化合物はマグネシウムとキレートするト
リケトン化合物である。
【０００３】Ｂ−4607Ａが有するフェナジン骨格を母核
とする誘導体は合成品および天然物を含めて数多いが、
フェナジン−１−カルボン酸構造を有する天然物として
は、例えば、放線菌(Streptomyces griseoluteus) が生
産する抗生物質グリゼオルテイン(griseolutein)Ａおよ
びＢ[J.Antibiotics Ser.A,7,15 〜16(1954);J.Antibio
tics Ser.A,12,55(1959);Chem.Pharm.Bull.6,539〜543
(1958)]、放線菌(St.canarius) が生産する抗生物質サ
フェナマイシン(Saphenamycin)[J.Antibiotics 35,141
2,(1982)]およびシュードモナス属(Psendomonas sp.)
が生産し、抗菌活性、抗腫瘍活性を有するDC-86-M(J.An
tibiotics 39,624,(1986)]、およびDOB-41[J.Antibioti
cs,41,589(1988)]等が知られている。しかし、これらに
はＢ−4607Ａの特徴であるエステル結合したグリシンを
持つ化合物は存在しない。
とする誘導体は合成品および天然物を含めて数多いが、
フェナジン−１−カルボン酸構造を有する天然物として
は、例えば、放線菌(Streptomyces griseoluteus) が生
産する抗生物質グリゼオルテイン(griseolutein)Ａおよ
びＢ[J.Antibiotics Ser.A,7,15 〜16(1954);J.Antibio
tics Ser.A,12,55(1959);Chem.Pharm.Bull.6,539〜543
(1958)]、放線菌(St.canarius) が生産する抗生物質サ
フェナマイシン(Saphenamycin)[J.Antibiotics 35,141
2,(1982)]およびシュードモナス属(Psendomonas sp.)
が生産し、抗菌活性、抗腫瘍活性を有するDC-86-M(J.An
tibiotics 39,624,(1986)]、およびDOB-41[J.Antibioti
cs,41,589(1988)]等が知られている。しかし、これらに
はＢ−4607Ａの特徴であるエステル結合したグリシンを
持つ化合物は存在しない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ヤドカ
リより分離したビブリオ(Vibrio)属に属するSANK 73794
株の培養物から、抗菌作用を有する新規化合物Ｂ−4607
Ａが生産されることを見出し本発明を完成した。
リより分離したビブリオ(Vibrio)属に属するSANK 73794
株の培養物から、抗菌作用を有する新規化合物Ｂ−4607
Ａが生産されることを見出し本発明を完成した。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明のＢ−4607Ａは下
記の構造式及び理化学的性状を有する。
記の構造式及び理化学的性状を有する。
【０００６】
【化２】
【０００７】(1) 物質の性状：橙黄色粉末 (2) 分子式：Ｃ17Ｈ15Ｎ3 Ｏ5 (3) 分子量：３４１（FAB-MS法により測定） (4) 高分解能質量分析：Ｃ17Ｈ16Ｎ3 Ｏ5 ［(M+H+),FAB
-MS 法により測定］ 実測値＝342.1060 計算値＝342.1090 (5)元素分析（％）：（トリフルオロ酢酸塩２水和物（C
17H15N3O5・CF3COOH・2H2O)として） 実測値＝C:44.47,H:4.39,N:8.54,F:11.76 計算値＝C:44.97,H:3.97,N:8.28,F:11.23 (6) 赤外線吸収スペクトル：νmax cm-1 臭化カリウム(KBr) 錠剤法で測定した赤外線吸収スペク
トルは次に示す通りである。
-MS 法により測定］ 実測値＝342.1060 計算値＝342.1090 (5)元素分析（％）：（トリフルオロ酢酸塩２水和物（C
17H15N3O5・CF3COOH・2H2O)として） 実測値＝C:44.47,H:4.39,N:8.54,F:11.76 計算値＝C:44.97,H:3.97,N:8.28,F:11.23 (6) 赤外線吸収スペクトル：νmax cm-1 臭化カリウム(KBr) 錠剤法で測定した赤外線吸収スペク
トルは次に示す通りである。
【０００８】3306,2963,2647,1676,1603,1543,1460,144
0,1203,1135 (7) 紫外線吸収スペクトル：λmax nm （ε） 水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは次に示す通
りである。
0,1203,1135 (7) 紫外線吸収スペクトル：λmax nm （ε） 水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは次に示す通
りである。
【０００９】263(25200),350(sh),365(3900) (8) 高速液体クロマトグラフィー： 分離カラム：センシューパック，ODS,H-2151, （カラム
サイズφ６×１５０mm）センシュウ科学（株）製。
サイズφ６×１５０mm）センシュウ科学（株）製。
【００１０】溶媒：２５％CH3CN ／0.2 ％トリフルオロ
酢酸溶液 流速：1.5ml ／分 波長：２２０−４００nm（フォトダイオードアレイ検
出） 保持時間：7.95分 (9) 1H −核磁気共鳴スペクトル：（δ:ppm） 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル(400MHz)
は、次に示す通りである。
酢酸溶液 流速：1.5ml ／分 波長：２２０−４００nm（フォトダイオードアレイ検
出） 保持時間：7.95分 (9) 1H −核磁気共鳴スペクトル：（δ:ppm） 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル(400MHz)
は、次に示す通りである。
【００１１】8.71(1H,d,J=8.0),8.56(1H,d,J=9.2),8.20
(1H,dd,J=9.2,J=8.0),8.11(1H,d,J=8.0),7.49 (1H,d,J=
8.0),5.91 (2H,s),4.16(3H,s),3.91(2H,s) (10) 13C −核磁気共鳴スペクトル：（δ:ppm） 重水中、内部基準にジオキサン(67.0ppmとした時) を使
用して測定した核磁気共鳴スペクトル(90MHz) は、次に
示す通りである。
(1H,dd,J=9.2,J=8.0),8.11(1H,d,J=8.0),7.49 (1H,d,J=
8.0),5.91 (2H,s),4.16(3H,s),3.91(2H,s) (10) 13C −核磁気共鳴スペクトル：（δ:ppm） 重水中、内部基準にジオキサン(67.0ppmとした時) を使
用して測定した核磁気共鳴スペクトル(90MHz) は、次に
示す通りである。
【００１２】168.5(s),166.7(s),152.1(s),140.5(s),14
0.3(s),136.5(d),135.2(s),134.0(d),133.2(d),131.5
(d),129.6(s),123.2(s),121.1(s),109.0(d),63.0(t),5
6.0(q),40.0(t) 。
0.3(s),136.5(d),135.2(s),134.0(d),133.2(d),131.5
(d),129.6(s),123.2(s),121.1(s),109.0(d),63.0(t),5
6.0(q),40.0(t) 。
【００１３】(11)溶解性：水、メタノール、ジメチルス
ルホキシド、ジメチルホルムアミドに可溶、酢酸エチ
ル、クロロホルム、アセトン、エチルエーテル、ヘキサ
ン等に不溶 (12)呈色反応：ニンヒドリン反応に陽性 (13)薄層クロマトグラフィー： Rf値：0.17 吸着剤：シリカゲル（メルク社製、Art.5715） 展開溶剤：CHCl3 −MeOH（９：１） 本発明の、Ｂ−4607Ａを生産する上記SANK 73794株は北
海道網走市の海岸で採取したヤドカリから分離した海洋
細菌である。
ルホキシド、ジメチルホルムアミドに可溶、酢酸エチ
ル、クロロホルム、アセトン、エチルエーテル、ヘキサ
ン等に不溶 (12)呈色反応：ニンヒドリン反応に陽性 (13)薄層クロマトグラフィー： Rf値：0.17 吸着剤：シリカゲル（メルク社製、Art.5715） 展開溶剤：CHCl3 −MeOH（９：１） 本発明の、Ｂ−4607Ａを生産する上記SANK 73794株は北
海道網走市の海岸で採取したヤドカリから分離した海洋
細菌である。
【００１４】Ｂ−4607Ａの生産菌であるSANK 73794株の
菌学的性状は次の通りである。
菌学的性状は次の通りである。
【００１５】１．形態学的性状 マリンアガー(Difco社製) で２６℃、２４時間培養後の
観察では、細胞は直径0.5 〜0.6 μm 、長さ1.0 〜1.5
μm の桿状であり、単極毛を有し、運動する。胞子を形
成せず、グラム染色は陰性である。
観察では、細胞は直径0.5 〜0.6 μm 、長さ1.0 〜1.5
μm の桿状であり、単極毛を有し、運動する。胞子を形
成せず、グラム染色は陰性である。
【００１６】２．マリンアガー(Difco社製) での生育状
態 ２６℃で２４時間培養したコロニーはいくぶん褐色を帯
びた白色、不透明で円形、扁平状、全縁である。水溶性
の色素を生成しない。
態 ２６℃で２４時間培養したコロニーはいくぶん褐色を帯
びた白色、不透明で円形、扁平状、全縁である。水溶性
の色素を生成しない。
【００１７】３．生理学的性状 (1) NaClを含まない培地での生育：− (2) NaCl：0.5 ％含有培地での生育：＋ (3) NaCl：10.0％含有培地での生育：＋（微弱） (4)O-F（オキシダティブ−ファーメンタティブ）テスト
［ヒュー・レイフソン(Hugh・Leifson)法］、人工海水で
培地を調製した。好気的条件下および嫌気的条件下にお
いて、グルコースを分解した。
［ヒュー・レイフソン(Hugh・Leifson)法］、人工海水で
培地を調製した。好気的条件下および嫌気的条件下にお
いて、グルコースを分解した。
【００１８】(5) カタラーゼ：＋ (6) オキシターゼ：＋ (7) 硝酸塩の還元：＋ (8) デンプンの加水分解：＋ (9) ゼラチンの液化：＋ (10)DNase の産生：＋ (11)リパーゼの産生：− (12)生育温度：７℃では微弱に生育し、２３℃−４２℃
では良好な生育を示す。４５℃では微弱に生育するが５
０℃では生育しない。
では良好な生育を示す。４５℃では微弱に生育するが５
０℃では生育しない。
【００１９】(13)アルギニンジヒドロラーゼ：− (14)オルニチンデカルボキシラーゼ：− (15)リジンデカルボキシラーゼ：− (16)栄養要求性：− (17)炭素化合物の利用性： Ｄ−グルコース ＋ セロビオース − Ｄ−マンノース − 乳糖 ＋ Ｌ−アラビノース − メリビオース ＋ Ｄ−マンニトール ＋ エタノール ＋ ラムノース − メソーイノシトール − 蔗糖 ＋ Ｌ−セリン ＋ ４．化学分類学的性状 (1) ＤＮＡのＧ＋Ｃ（グアニン＋シトシン）含量：49.9
％ (2) キノン：ユビキノンＱ−８ 以上の菌学的性状を有するSANK 73794株はバージーズ・
マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジ
ー(Bergey's Manual of Systematic Bacteriology)、 １
巻(1984 年) の分類にしたがえば、ビブリオ(Vibrio)属
に属する。しかし、SANK 73794株の性状はバージーズ・
マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジ
ー１巻(1984 年) や最新のインターナショナル・ジャー
ナル・オブ・システマティック・バクテリオロジー(Int
ernational Journal SystematicBacteriology) に記載
されているビブリオ(Vibrio)属細菌の性状とは一致しな
い。それ故、本発明者らはSANK 73794株をビブリオ(Vib
rio)属の新種と同定した。
％ (2) キノン：ユビキノンＱ−８ 以上の菌学的性状を有するSANK 73794株はバージーズ・
マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジ
ー(Bergey's Manual of Systematic Bacteriology)、 １
巻(1984 年) の分類にしたがえば、ビブリオ(Vibrio)属
に属する。しかし、SANK 73794株の性状はバージーズ・
マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジ
ー１巻(1984 年) や最新のインターナショナル・ジャー
ナル・オブ・システマティック・バクテリオロジー(Int
ernational Journal SystematicBacteriology) に記載
されているビブリオ(Vibrio)属細菌の性状とは一致しな
い。それ故、本発明者らはSANK 73794株をビブリオ(Vib
rio)属の新種と同定した。
【００２０】本菌はビブリオ(Vibrio)属の新種としてブ
ダペスト条約に従って通商産業省工業技術院生命工学工
業技術研究所に国際寄託されている（寄託番号、(FERM
BP−4977) ：原寄託日、1995年 1月25日）。
ダペスト条約に従って通商産業省工業技術院生命工学工
業技術研究所に国際寄託されている（寄託番号、(FERM
BP−4977) ：原寄託日、1995年 1月25日）。
【００２１】以上、SANK 73794株について説明したが、
周知の如くビブリオ属の菌類の諸性質は一定したもので
はなく、自然的、または人工的な操作（例えば、紫外線
照射、放射線照射、化学薬品処理等）により、変異を起
こし易く、本発明のSANK 73794株もこの点は同じであ
る。本発明にいうSANK 73794株はそのすべての変異株を
包含する。また、これらの変異株の中には、遺伝学的方
法、例えば、組換え、形質導入、形質転換等により得ら
れたものも包含される。即ち、ビブリオ属に属するＢ−
4607Ａを生産する、SANK 73794株、その変異株およびそ
れらと明確に区別されない菌株は、すべてSANK 73794株
に包含されるものである。
周知の如くビブリオ属の菌類の諸性質は一定したもので
はなく、自然的、または人工的な操作（例えば、紫外線
照射、放射線照射、化学薬品処理等）により、変異を起
こし易く、本発明のSANK 73794株もこの点は同じであ
る。本発明にいうSANK 73794株はそのすべての変異株を
包含する。また、これらの変異株の中には、遺伝学的方
法、例えば、組換え、形質導入、形質転換等により得ら
れたものも包含される。即ち、ビブリオ属に属するＢ−
4607Ａを生産する、SANK 73794株、その変異株およびそ
れらと明確に区別されない菌株は、すべてSANK 73794株
に包含されるものである。
【００２２】本発明の新規化合物Ｂ−4607Ａを得るた
め、これらの微生物の培養は他の醗酵生成物を生産する
ために用いられるような培地中で行なわれる。このよう
な培地中には、微生物が資化出来る炭素源、窒素源およ
び無機塩を含有する。
め、これらの微生物の培養は他の醗酵生成物を生産する
ために用いられるような培地中で行なわれる。このよう
な培地中には、微生物が資化出来る炭素源、窒素源およ
び無機塩を含有する。
【００２３】一般に、炭素源としてグルコース、フラク
トース、マルトース、シュークロース、マンニトール、
グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウ
モロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆
粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸などを単一に、あ
るいは併用して用いる事が出来る。一般には、培地量の
１−１０重量％で変量する。
トース、マルトース、シュークロース、マンニトール、
グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウ
モロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆
粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸などを単一に、あ
るいは併用して用いる事が出来る。一般には、培地量の
１−１０重量％で変量する。
【００２４】窒素源としては、一般に蛋白質を含有する
物質を醗酵工程に用いる。適当な窒素源としては、大豆
粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、
ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプト
ン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マルトエキ
ス等の動物系、植物系またはエキス類の窒素源、硝酸ナ
トリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の無
機窒素源である。窒素源は、単一または併用して培地量
の0.1 −６重量％の範囲で用いる。
物質を醗酵工程に用いる。適当な窒素源としては、大豆
粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、
ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプト
ン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マルトエキ
ス等の動物系、植物系またはエキス類の窒素源、硝酸ナ
トリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の無
機窒素源である。窒素源は、単一または併用して培地量
の0.1 −６重量％の範囲で用いる。
【００２５】培地中に取り入れる栄養無機塩は、ナトリ
ウム、アンモニウム、カルシウム、カリウム、マグネシ
ウム、鉄、フォスフェート、サルフェート、クロライ
ド、カーボネート等のイオンを得ることの出来る通常の
塩類である。また、コバルト、マンガン、ストロンチウ
ム等の微量の金属、その他ブロマイド、フルオライド、
ボレート、シリケート等の微量イオンを得る塩も含む。
ウム、アンモニウム、カルシウム、カリウム、マグネシ
ウム、鉄、フォスフェート、サルフェート、クロライ
ド、カーボネート等のイオンを得ることの出来る通常の
塩類である。また、コバルト、マンガン、ストロンチウ
ム等の微量の金属、その他ブロマイド、フルオライド、
ボレート、シリケート等の微量イオンを得る塩も含む。
【００２６】液体培養に際しては、消泡剤としてシリコ
ン油、植物油、界面活性剤等が使用される。
ン油、植物油、界面活性剤等が使用される。
【００２７】ビブリオ エスピー(Vibrio sp.) SANK 73
794 株を培養しＢ−4607Ａを生産する培地のpHは、6.5
−7.5 に変化させることが出来る。
794 株を培養しＢ−4607Ａを生産する培地のpHは、6.5
−7.5 に変化させることが出来る。
【００２８】菌の生育温度は７℃から４５℃までである
が１７℃から２６℃の範囲が生育良好であり、更にＢ−
4607Ａの生産には、１７℃から２３℃が好適である。
が１７℃から２６℃の範囲が生育良好であり、更にＢ−
4607Ａの生産には、１７℃から２３℃が好適である。
【００２９】Ｂ−4607Ａは、好気的に培養して得られる
が通常用いられる好気的培養法、例えば固体培養法、振
とう培養法、通気撹拌培養法等が用いられる。
が通常用いられる好気的培養法、例えば固体培養法、振
とう培養法、通気撹拌培養法等が用いられる。
【００３０】小規模な培養においては、１７℃から２３
℃で数日間振とう培養を行うのが良好である。
℃で数日間振とう培養を行うのが良好である。
【００３１】培養は三角フラスコ中で、１−２段階の種
の発育工程により開始する。種発育段階の培地は、炭素
源および窒素源を併用出来る。種フラスコは定温インキ
ュベーター中で、例えば、２０℃、１乃至３日間振とう
するか、または充分に成長するまで振とうする。成長し
た種は第二の種培地、または生産培地に接種するのに用
いる。中間の発育工程を用いる場合には、本質的に同様
の方法で成長させ、生産培地に接種するためにそれを部
分的に用いる。接種したフラスコを一定温度で１乃至３
日間、または生産量が最大に達するまで振とうし、イン
キュベーションが終わったらフラスコの含有物を遠心分
離またはろ過する。
の発育工程により開始する。種発育段階の培地は、炭素
源および窒素源を併用出来る。種フラスコは定温インキ
ュベーター中で、例えば、２０℃、１乃至３日間振とう
するか、または充分に成長するまで振とうする。成長し
た種は第二の種培地、または生産培地に接種するのに用
いる。中間の発育工程を用いる場合には、本質的に同様
の方法で成長させ、生産培地に接種するためにそれを部
分的に用いる。接種したフラスコを一定温度で１乃至３
日間、または生産量が最大に達するまで振とうし、イン
キュベーションが終わったらフラスコの含有物を遠心分
離またはろ過する。
【００３２】大量培養の場合には、撹拌機、通気装置を
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば、栄養培地をタンクの中で作成出来る。栄養培
地を１２５℃まで加熱して減菌し、冷却後、減菌培地に
あらかじめ成長させてあった種を接種する。培養は１７
℃乃至２３℃で通気撹拌して行う。この方法は、多量の
化合物を得るのに適している。
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば、栄養培地をタンクの中で作成出来る。栄養培
地を１２５℃まで加熱して減菌し、冷却後、減菌培地に
あらかじめ成長させてあった種を接種する。培養は１７
℃乃至２３℃で通気撹拌して行う。この方法は、多量の
化合物を得るのに適している。
【００３３】培養の経過に伴って生産されるＢ−4607Ａ
の量の経時変化は、高速液体クロマトグラフィーを用い
て測定することが出来る。通常は、１９時間から９６時
間の培養でＢ−4607Ａの生産量は最高値に達する。
の量の経時変化は、高速液体クロマトグラフィーを用い
て測定することが出来る。通常は、１９時間から９６時
間の培養でＢ−4607Ａの生産量は最高値に達する。
【００３４】培養終了後、培養液中の液体部分及び菌体
内に存在するＢ−4607Ａは、菌体、その他の固形部分を
珪藻土をろ過助剤とする、ろ過操作または遠心分離よっ
て分別し、そのろ液または上清中および菌体中に存在す
るＢ−4607Ａを、その物理化学的性状を利用し精製する
ことにより得られる。例えば、ろ液または、上清中に存
在するＢ−4607Ａは、活性炭または吸着用樹脂であるア
ンバーライトXAD-2 、XAD-4 （ローム・アンド・ハース
社製）等や、ダイアイオンHP-10 、HP-20 、CHP-20、HP
-50 （三菱化成（株）製）等が使用される。Ｂ−4607Ａ
を含む液を上記のごとき吸着剤の層を通過させて不純物
を吸着させて取り除くか、またはＢ−4607Ａを吸着させ
た後、メタノール水、アセトン水、ｎ−ブタノール水な
どを用いて溶出させることにより得られる。また、菌体
内に存在するＢ−4607Ａは、５０−９０％含水アセトン
または含水メタノールにより抽出した有機溶剤を除去し
た後、ろ液と同様な精製操作を行なうことにより得られ
る。
内に存在するＢ−4607Ａは、菌体、その他の固形部分を
珪藻土をろ過助剤とする、ろ過操作または遠心分離よっ
て分別し、そのろ液または上清中および菌体中に存在す
るＢ−4607Ａを、その物理化学的性状を利用し精製する
ことにより得られる。例えば、ろ液または、上清中に存
在するＢ−4607Ａは、活性炭または吸着用樹脂であるア
ンバーライトXAD-2 、XAD-4 （ローム・アンド・ハース
社製）等や、ダイアイオンHP-10 、HP-20 、CHP-20、HP
-50 （三菱化成（株）製）等が使用される。Ｂ−4607Ａ
を含む液を上記のごとき吸着剤の層を通過させて不純物
を吸着させて取り除くか、またはＢ−4607Ａを吸着させ
た後、メタノール水、アセトン水、ｎ−ブタノール水な
どを用いて溶出させることにより得られる。また、菌体
内に存在するＢ−4607Ａは、５０−９０％含水アセトン
または含水メタノールにより抽出した有機溶剤を除去し
た後、ろ液と同様な精製操作を行なうことにより得られ
る。
【００３５】このようにして得られたＢ−4607Ａは、更
にシリカゲル、マグネシウム−シリカゲル系のフロリジ
ルのような担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィ
ー、セファデックスLH-20 （ファルマシア社製）などを
用いた分配カラムクロマトグラフィー、および順相、逆
相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等で精製
することが出来る。
にシリカゲル、マグネシウム−シリカゲル系のフロリジ
ルのような担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィ
ー、セファデックスLH-20 （ファルマシア社製）などを
用いた分配カラムクロマトグラフィー、および順相、逆
相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等で精製
することが出来る。
【００３６】以上の分離、精製の手段を単独または適宜
組み合わせ反復用いることによりＢ−4607Ａを分離精製
することができる。
組み合わせ反復用いることによりＢ−4607Ａを分離精製
することができる。
【００３７】
【作用】本発明のＢ−4607Ａは、文献未載の新規化合物
であり、動物（例、ヒト、イヌ、ネコ、ウサギ等）にお
いて、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌に対し抗菌作用
を示すことから、各種細菌感染症を対照とする抗菌剤と
して有用である。
であり、動物（例、ヒト、イヌ、ネコ、ウサギ等）にお
いて、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌に対し抗菌作用
を示すことから、各種細菌感染症を対照とする抗菌剤と
して有用である。
【００３８】本発明のＢ−4607Ａを医薬として用いる場
合、常法に従って種々の形態で投与される。その投与形
態としては例えば散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、シ
ロップ剤、水剤などの形態で経口的または注射剤（静脈
内、筋肉内、皮下）、点滴剤、座剤、塗布剤、軟膏剤な
どの形態で非経口的に安全に投与することが出来る。こ
れらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、溶解補助
剤、懸濁剤、コーティング剤、希釈剤などの医薬の製剤
技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて
製剤化することができる。投与量は対象疾患、投与経路
および投与回数などにより異なるが、例えば成人に対し
ては１日２０mgから2000mgを、症状に応じて１回または
数回に分けて投与するのが好ましい。
合、常法に従って種々の形態で投与される。その投与形
態としては例えば散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、シ
ロップ剤、水剤などの形態で経口的または注射剤（静脈
内、筋肉内、皮下）、点滴剤、座剤、塗布剤、軟膏剤な
どの形態で非経口的に安全に投与することが出来る。こ
れらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、溶解補助
剤、懸濁剤、コーティング剤、希釈剤などの医薬の製剤
技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて
製剤化することができる。投与量は対象疾患、投与経路
および投与回数などにより異なるが、例えば成人に対し
ては１日２０mgから2000mgを、症状に応じて１回または
数回に分けて投与するのが好ましい。
【００３９】
【実施例】次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４０】実施例１．Ｂ−4607Ａのジャー培養 Ａ）培養 ビブリオ エスピー SANK 737945株を、マリンアガー
（Difco 社製) スラント(Marine Agar Slant) 上で２３
℃で１日間培養を行い、それを人工海水３mlに懸濁さ
せ、その0.1ml を無菌的に、滅菌した後述の組成の培地
１００mlを含む５００mlの三角フラスコに接種し、２０
℃で２００rpm （７cmの回転半径）のロータリー振とう
培養機で２４時間培養した。その１５mlを無菌的に滅菌
した同様の組成の培地１５リットルを含む３０リットル
のジャーファーメンター２機に埴菌し、２３℃で通気
（7.5 リットル／分）、撹拌（１００rpm ）下に４５時
間培養した。
（Difco 社製) スラント(Marine Agar Slant) 上で２３
℃で１日間培養を行い、それを人工海水３mlに懸濁さ
せ、その0.1ml を無菌的に、滅菌した後述の組成の培地
１００mlを含む５００mlの三角フラスコに接種し、２０
℃で２００rpm （７cmの回転半径）のロータリー振とう
培養機で２４時間培養した。その１５mlを無菌的に滅菌
した同様の組成の培地１５リットルを含む３０リットル
のジャーファーメンター２機に埴菌し、２３℃で通気
（7.5 リットル／分）、撹拌（１００rpm ）下に４５時
間培養した。
【００４１】PSS-X 培地 バクトペプトン １０ｇ コハク酸ナトリウム １ｇ (NH4)2SO4 １ｇ MgSO4・7H2O １ｇ FeCl2・nH2O ２mg MnSO4・nH2O ２mg イーストエキス １ｇ 人工海水 １Ｌ pH6.8 に調整 Ｂ）単離 得られた培養液３０リットルは塩酸でpH３に調整し、遠
心により上清液と菌体に分け、菌体にはアセトン１リッ
トルを加えて撹拌後濾過して抽出残渣と分け、抽出液は
遠心上清に加えてダイアイオンHP-20 （４リットル）の
カラムに吸着させ、次いで１０％アセトン水で洗浄し、
５０％アセトン水で溶出した。これを減圧下で濃縮し
て、最終的には凍結乾燥を行い橙黄色の粗粉末(56.6
ｇ) を得た。
心により上清液と菌体に分け、菌体にはアセトン１リッ
トルを加えて撹拌後濾過して抽出残渣と分け、抽出液は
遠心上清に加えてダイアイオンHP-20 （４リットル）の
カラムに吸着させ、次いで１０％アセトン水で洗浄し、
５０％アセトン水で溶出した。これを減圧下で濃縮し
て、最終的には凍結乾燥を行い橙黄色の粗粉末(56.6
ｇ) を得た。
【００４２】次にこの粗粉末を１０％CH3CN を含む0.2
％TFA 溶液（５００ml）にとかし、コスモシールカラム
140 Ｃ18−ＯＰＮ（５×２５cm：ナカライテスク
（株）製）に吸着後、２０％〜２５％CH3CN を含む0.2
％TFA 溶液で溶出した。活性のフラクションを集めて、
濃縮、凍結乾燥を行い、Ｂ−4607Ａを含む橙黄色粉末
（４２０mg）を得た。
％TFA 溶液（５００ml）にとかし、コスモシールカラム
140 Ｃ18−ＯＰＮ（５×２５cm：ナカライテスク
（株）製）に吸着後、２０％〜２５％CH3CN を含む0.2
％TFA 溶液で溶出した。活性のフラクションを集めて、
濃縮、凍結乾燥を行い、Ｂ−4607Ａを含む橙黄色粉末
（４２０mg）を得た。
【００４３】さらに純品を得るためにはHPLC分取あるい
はLH-20 を用いたカラムクロマトグラフィーが最適であ
る。
はLH-20 を用いたカラムクロマトグラフィーが最適であ
る。
【００４４】HPLCの分取はセンシューパックODS,H-4251
( φ１０×２５０mm) を用いて、３０％CH3CN/TFA 溶液
で４ml/minにて展開した。１４分から１６分のピークを
集めて、濃縮、凍結乾燥を行い、Ｂ−4607ＡのTFA 塩と
して単離した。
( φ１０×２５０mm) を用いて、３０％CH3CN/TFA 溶液
で４ml/minにて展開した。１４分から１６分のピークを
集めて、濃縮、凍結乾燥を行い、Ｂ−4607ＡのTFA 塩と
して単離した。
【００４５】また、Ｂ−4607Ａを含む粉末をメタノール
にとかし、LH-20 のカラム(6.5×５０cm) を用いてメタ
ノールで展開した。HPLCでモニターしながら活性のピー
クの溶出画分を集めて濃縮し、最終的には少量の水にと
かして凍結乾燥を行い、Ｂ−4607Ａの純品を得た。
にとかし、LH-20 のカラム(6.5×５０cm) を用いてメタ
ノールで展開した。HPLCでモニターしながら活性のピー
クの溶出画分を集めて濃縮し、最終的には少量の水にと
かして凍結乾燥を行い、Ｂ−4607Ａの純品を得た。
【００４６】試験例１．Ｂ−4607Ａの抗菌作用 一般グラム陽性および陰性細菌に対するＢ−4607Ａの最
小阻止濃度(MIC) は、普通寒天培地（栄研化学（株）
製）を用いた寒天培地希釈法によって測定した。
小阻止濃度(MIC) は、普通寒天培地（栄研化学（株）
製）を用いた寒天培地希釈法によって測定した。
【００４７】結果を表１に示す。
【００４８】
【表１】 ──────────────────────────────────── 被 検 菌 最小阻止濃度(MIC)(μgm／ml) ──────────────────────────────────── スタフィロコッカス アウレウス 209P 0.4 スタフィロコッカス アウレウス 56R 0.8 スタフィロコッカス アウレウス 535(MRSA) 0.8 エンテロコッカス フェカリス 681 6.2 エシェリシア コリ NIHJ 0.4 エシェリシア コリ 609 0.4 サルモネラ エンテリティディス 1.5 クレブシェラ ニューモニエ 806 6.2 クレブシェラ ニューモニエ 846(R) 1.5 エンテロバクタ クロアカエ 963 12.5 セラチア マルセセンス 1184 3.1 プロテウス ブルガリス 1420 0.4 モルガネラ モルガニー 1510 1.5 シュードモナス エルギノーザ 1001 12.5 シュードモナス エルギノーザ NO7 6.2 シュードモナス エルギノーザ 3719 12.5 ──────────────────────────────────── 表１から明かのごとく、Ｂ−4607Ａは一般グラム陽性お
よび陰性細胞に対して優れた効果を示した。
よび陰性細胞に対して優れた効果を示した。
【００４９】
【発明の効果】以上から、本発明の新規化合物Ｂ−4607
Ａはすぐれた抗菌作用を示し、各種細菌に対する抗菌剤
として有用である。
Ａはすぐれた抗菌作用を示し、各種細菌に対する抗菌剤
として有用である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 塩澤 秀幸 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 高橋 秀次 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内
Claims (4)
- 【請求項１】 下記の構造を有するＢ−4607Ａ 【化１】
- 【請求項２】 ビブリオ属に属するＢ−4607Ａ生産菌を
培養し、その培養物よりＢ−4607Ａを採取することを特
徴とするＢ−4607Ａの製法。 - 【請求項３】 請求項２において、ビブリオ属に属する
Ｂ−4607Ａ生産菌がビブリオ属の新種（ビブリオ・エス
ピー）SANK 73794株である製法。 - 【請求項４】 Ｂ−４６０７Ａ生産能を有するビブリオ
属のビブリオ・エスピー(Vibrio sp.)SANK 73794株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2240695A JPH08217760A (ja) | 1995-02-10 | 1995-02-10 | 新規抗生物質ｂ−４６０７ａ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2240695A JPH08217760A (ja) | 1995-02-10 | 1995-02-10 | 新規抗生物質ｂ−４６０７ａ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08217760A true JPH08217760A (ja) | 1996-08-27 |
Family
ID=12081792
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2240695A Pending JPH08217760A (ja) | 1995-02-10 | 1995-02-10 | 新規抗生物質ｂ−４６０７ａ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08217760A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016506725A (ja) * | 2013-01-25 | 2016-03-07 | シーエスアイアール | アワビの水産養殖において用いるためのプロバイオティクスの製造 |
-
1995
- 1995-02-10 JP JP2240695A patent/JPH08217760A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016506725A (ja) * | 2013-01-25 | 2016-03-07 | シーエスアイアール | アワビの水産養殖において用いるためのプロバイオティクスの製造 |
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