JPH08187086A - ウイルス遺伝子の精製方法 - Google Patents
ウイルス遺伝子の精製方法Info
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- JPH08187086A JPH08187086A JP252495A JP252495A JPH08187086A JP H08187086 A JPH08187086 A JP H08187086A JP 252495 A JP252495 A JP 252495A JP 252495 A JP252495 A JP 252495A JP H08187086 A JPH08187086 A JP H08187086A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ウイルスが混入又はウイルスを含有している
溶液を平均孔径が１０ｎｍ以上２００ｎｍ以下である多
孔性中空糸膜で濾過して濃縮ウイルス液を得る工程と、
この濃縮ウイルス液中のウイルスのウイルスタンパクを
変性させてウイルス遺伝子とウイルスタンパクに分解す
る工程を含むウイルス遺伝子の精製方法。 【効果】 濾過フィルターでタンパク溶液中のウイルス
を簡便に短時間で大量に高い純度で濃縮後、ウイルス遺
伝子を精製することができる。
溶液を平均孔径が１０ｎｍ以上２００ｎｍ以下である多
孔性中空糸膜で濾過して濃縮ウイルス液を得る工程と、
この濃縮ウイルス液中のウイルスのウイルスタンパクを
変性させてウイルス遺伝子とウイルスタンパクに分解す
る工程を含むウイルス遺伝子の精製方法。 【効果】 濾過フィルターでタンパク溶液中のウイルス
を簡便に短時間で大量に高い純度で濃縮後、ウイルス遺
伝子を精製することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ウイルス遺伝子の精製
方法、詳しくは遺伝子工学分野・遺伝子治療分野・ウイ
ルス検査において用いられるウイルス遺伝子（ＤＮＡ及
びＲＮＡ）の精製方法に関する。
方法、詳しくは遺伝子工学分野・遺伝子治療分野・ウイ
ルス検査において用いられるウイルス遺伝子（ＤＮＡ及
びＲＮＡ）の精製方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、遺伝子工学技術の進歩に伴い、ウ
イルス遺伝子の塩基配列解析・遺伝子治療分野におい
て、遺伝子組み替えによるウイルスベクタ−の作製、さ
らにはウイルス遺伝子を増幅するＰＣＲ法（Ｐｏｌｙｍ
ｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ法）を利用
したウイルス検査が行なわれており、そのため、ウイル
ス遺伝子の精製が必要となってきた。
イルス遺伝子の塩基配列解析・遺伝子治療分野におい
て、遺伝子組み替えによるウイルスベクタ−の作製、さ
らにはウイルス遺伝子を増幅するＰＣＲ法（Ｐｏｌｙｍ
ｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ法）を利用
したウイルス検査が行なわれており、そのため、ウイル
ス遺伝子の精製が必要となってきた。
【０００３】水溶液からのウイルスの濃縮・精製法とし
ては、低速遠心と高速遠心を組み合わせて粒子の大きさ
によって分離する方法やポリエチレングリコ−ル（ＰＥ
Ｇ）のようなポリマ−を用いてウイルスを沈澱後濃縮さ
せ、透析により高濃度のＰＥＧを除去する方法が行われ
ていた。しかしながら、前者は高価な遠心装置が必要で
あること及び遠心時間がかかるという問題、後者は透析
に時間がかかる上に、共存するタンパクもウイルスとと
もに沈殿させてしまうという問題があった。また、危険
度の高いウイルス使用時には操作が煩雑であることから
問題があった。
ては、低速遠心と高速遠心を組み合わせて粒子の大きさ
によって分離する方法やポリエチレングリコ−ル（ＰＥ
Ｇ）のようなポリマ−を用いてウイルスを沈澱後濃縮さ
せ、透析により高濃度のＰＥＧを除去する方法が行われ
ていた。しかしながら、前者は高価な遠心装置が必要で
あること及び遠心時間がかかるという問題、後者は透析
に時間がかかる上に、共存するタンパクもウイルスとと
もに沈殿させてしまうという問題があった。また、危険
度の高いウイルス使用時には操作が煩雑であることから
問題があった。
【０００４】一方、ウイルス遺伝子の分離・精製法とし
ては、ウイルス液をフェ−ノル抽出で、タンパク変性す
る方法や、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）やサルコ
シ−ルといった界面活性剤処理、プロテア−ゼＫのよう
なタンパク分解酵素を用いる方法や、アルカリ金属水酸
化物水溶液を用いたアルカリ変性処理、加熱処理があ
り、場合によってはこれらの処理を組み合わせて行なっ
ている。
ては、ウイルス液をフェ−ノル抽出で、タンパク変性す
る方法や、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）やサルコ
シ−ルといった界面活性剤処理、プロテア−ゼＫのよう
なタンパク分解酵素を用いる方法や、アルカリ金属水酸
化物水溶液を用いたアルカリ変性処理、加熱処理があ
り、場合によってはこれらの処理を組み合わせて行なっ
ている。
【０００５】水溶液からのウイルスの濃縮・精製工程の
後、ウイルス遺伝子の分離・精製工程を行うことは、こ
れらの工程が独立した系であるため、さらに操作が煩雑
になるという問題があった。かかる問題を解決するため
に、例えば特開平３−１８０１８２号公報には微生物培
養液中のファ−ジの遺伝子の精製法において微生物菌体
を孔径が０．４５μｍないし０．２２μｍであるメンブ
レンフィルタ−で濾過除去後、その濾液をタンパク分解
酵素処理等で処理し、ファージタンパク質を分解・変性
させた後、分画分子量２万〜１００万の範囲の限外濾過
膜で濾過することでタンパク・不純物を除去し、ファ−
ジ遺伝子を得るか、又はフィルタ−で微生物菌体を除去
後、その濾液を限外濾過膜で濾過し、共存する小分子量
物質を除いてファージを限外濾過膜上で精製し、タンパ
ク分解酵素処理等で処理する方法が開示されている。
後、ウイルス遺伝子の分離・精製工程を行うことは、こ
れらの工程が独立した系であるため、さらに操作が煩雑
になるという問題があった。かかる問題を解決するため
に、例えば特開平３−１８０１８２号公報には微生物培
養液中のファ−ジの遺伝子の精製法において微生物菌体
を孔径が０．４５μｍないし０．２２μｍであるメンブ
レンフィルタ−で濾過除去後、その濾液をタンパク分解
酵素処理等で処理し、ファージタンパク質を分解・変性
させた後、分画分子量２万〜１００万の範囲の限外濾過
膜で濾過することでタンパク・不純物を除去し、ファ−
ジ遺伝子を得るか、又はフィルタ−で微生物菌体を除去
後、その濾液を限外濾過膜で濾過し、共存する小分子量
物質を除いてファージを限外濾過膜上で精製し、タンパ
ク分解酵素処理等で処理する方法が開示されている。
【０００６】しかしながら、限外濾過膜で濾過する方法
では目詰まりが起こり易いことから、濾過速度が遅く、
処理容量が高くないことや、その結果ウイルスの遺伝子
以外にも混在している大きなタンパクや菌体断片や菌体
由来の遊離した裸の遺伝子がかなり高い割合で混入して
いるという問題があった。
では目詰まりが起こり易いことから、濾過速度が遅く、
処理容量が高くないことや、その結果ウイルスの遺伝子
以外にも混在している大きなタンパクや菌体断片や菌体
由来の遊離した裸の遺伝子がかなり高い割合で混入して
いるという問題があった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、大量
のタンパク水溶液から繁雑な操作をできるだけ省き、短
時間にウイルスを濃縮後、高純度のウイルス遺伝子を精
製することである。
のタンパク水溶液から繁雑な操作をできるだけ省き、短
時間にウイルスを濃縮後、高純度のウイルス遺伝子を精
製することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意努力した結果本発明に至った。すなわ
ち本発明は、ウイルスが混入又はウイルスを含有してい
る溶液を平均孔径が１０ｎｍ以上２００ｎｍ以下である
多孔性中空糸膜で濾過して濃縮ウイルス液を得る工程
と、該濃縮ウイルス液中のウイルスのウイルスタンパク
を変性させてウイルス遺伝子とウイルスタンパクに分解
する工程とを含むウイルス遺伝子の精製方法である。以
下、その内容について説明する。
を解決すべく鋭意努力した結果本発明に至った。すなわ
ち本発明は、ウイルスが混入又はウイルスを含有してい
る溶液を平均孔径が１０ｎｍ以上２００ｎｍ以下である
多孔性中空糸膜で濾過して濃縮ウイルス液を得る工程
と、該濃縮ウイルス液中のウイルスのウイルスタンパク
を変性させてウイルス遺伝子とウイルスタンパクに分解
する工程とを含むウイルス遺伝子の精製方法である。以
下、その内容について説明する。
【０００９】本発明において濾過に用いる多孔性中空糸
膜は、タンパク溶液からウイルスを捕捉してタンパクを
透過させるために、除去すべきウイルスの大きさとの関
係から後述の方法により測定した平均孔径孔径が１０ｎ
ｍ〜２００ｎｍの範囲であることが必要である。１０ｎ
ｍ未満ではタンパク透過性が著しく低下し、２００ｎｍ
を超えるとウイルスの除去性能が著しく低下する。
膜は、タンパク溶液からウイルスを捕捉してタンパクを
透過させるために、除去すべきウイルスの大きさとの関
係から後述の方法により測定した平均孔径孔径が１０ｎ
ｍ〜２００ｎｍの範囲であることが必要である。１０ｎ
ｍ未満ではタンパク透過性が著しく低下し、２００ｎｍ
を超えるとウイルスの除去性能が著しく低下する。
【００１０】さらに、対象となるウイルス粒子の径の大
きさに応じて、適切な孔径を選択する。すなわち、ウイ
ルス粒子径以下の孔径を持つフィルタ−を選択するとよ
い。特開昭６１−２５４２０２号公報、特開昭６１−２
５４７０２７号公報、特開平４−３７１２２１号公報に
代表される銅アンモニア法再生セルロ−ス多孔性中空糸
膜は、平均孔径１５、３５、７５ｎｍのフィルタ−が市
販されている。また、ウイルス混入液が細胞破砕液や、
細胞培養液や血液など、多量の大きな夾雑物質が混入し
ているものの場合、孔径３５ｎｍ〜０．４５μｍのフイ
ルタ−で予め濾過し、多量の大きな夾雑物質を除いた
後、ウイルス濃縮のための濾過をおこなえば、濾過処理
の時間が短縮され、より純度の高いウイルスの精製が行
なえる。
きさに応じて、適切な孔径を選択する。すなわち、ウイ
ルス粒子径以下の孔径を持つフィルタ−を選択するとよ
い。特開昭６１−２５４２０２号公報、特開昭６１−２
５４７０２７号公報、特開平４−３７１２２１号公報に
代表される銅アンモニア法再生セルロ−ス多孔性中空糸
膜は、平均孔径１５、３５、７５ｎｍのフィルタ−が市
販されている。また、ウイルス混入液が細胞破砕液や、
細胞培養液や血液など、多量の大きな夾雑物質が混入し
ているものの場合、孔径３５ｎｍ〜０．４５μｍのフイ
ルタ−で予め濾過し、多量の大きな夾雑物質を除いた
後、ウイルス濃縮のための濾過をおこなえば、濾過処理
の時間が短縮され、より純度の高いウイルスの精製が行
なえる。
【００１１】本発明において濾過に用いる多孔性中空糸
膜は、ウイルス捕捉可能な膜厚が１０μｍ以上１００μ
ｍ以下であることが好ましい。１０μｍ未満ではウイル
スの除去率が低下し、１００μｍを超えるとタンパク質
の透過率が低下する。ここで、ウイルス除去性能の良い
とは、日本脳炎ウイルス（粒子径約４５ｎｍ）の対数除
去性能（ＬＲＶ）で４以上であること、タンパク透過率
が高いとは、例えばアルブミンの透過率が９０％以上で
あることを意味する。なお、ＬＲＶは以下のように定義
される値である。
膜は、ウイルス捕捉可能な膜厚が１０μｍ以上１００μ
ｍ以下であることが好ましい。１０μｍ未満ではウイル
スの除去率が低下し、１００μｍを超えるとタンパク質
の透過率が低下する。ここで、ウイルス除去性能の良い
とは、日本脳炎ウイルス（粒子径約４５ｎｍ）の対数除
去性能（ＬＲＶ）で４以上であること、タンパク透過率
が高いとは、例えばアルブミンの透過率が９０％以上で
あることを意味する。なお、ＬＲＶは以下のように定義
される値である。
【００１２】ＬＲＶ ＝ ｌｏｇ10（Ｎo／Ｎf） Ｎo；濾過前の元液中のウイルス濃度 Ｎf；濾過後の濾液中のウイルス濃度 本発明において濾過に用いる多孔性中空糸膜は膜厚方向
にかけて層状構造を有していることが好ましい。
にかけて層状構造を有していることが好ましい。
【００１３】本発明において濾過に用いる多孔性中空糸
膜は、目詰まりを少なくし、高い透過速度を保つために
は、膜厚方向にかけて平均空孔率が０．３以上０．６以
下であることが好ましい。ここで、空孔率（Ｐr ）は以
下の方法で算出するものとする。 Ｐr ＝１−ρa ／ρp Ｐr ：空孔率（−） ρa ：水膨潤時の見かけ密度 ρp ：ポリマ−密度（セルロ−スの場合、１．５６１ｇ
／ｃｍ3 ） 本発明において濾過に用いる多孔性中空糸膜の素材とし
ては、ポリフッ化ビニリデン、再生セルロース、セルロ
−ス、セルロ−スアセテ−ト、ポリスルフォン、ビニル
クロライド、ポリエステル、ポリメチルメタクリレ−
ト、アクリロニトリル、ナイロンを用いることができ
る。これらのうち、タンパク水溶液中のウイルス粒子を
除去するには親水性高分子を用いることが好ましく、濾
過性能・タンパクの透過性の点からは再生セルロースが
特に好ましい。これはタンパクと高分子素材との吸着に
関する相関性を検討した結果、親水性素材ほどタンパク
の吸着性が小さいため本発明の素材としてより好まし
く、なかでも再生セルロースが特に好ましいためと思わ
れる。
膜は、目詰まりを少なくし、高い透過速度を保つために
は、膜厚方向にかけて平均空孔率が０．３以上０．６以
下であることが好ましい。ここで、空孔率（Ｐr ）は以
下の方法で算出するものとする。 Ｐr ＝１−ρa ／ρp Ｐr ：空孔率（−） ρa ：水膨潤時の見かけ密度 ρp ：ポリマ−密度（セルロ−スの場合、１．５６１ｇ
／ｃｍ3 ） 本発明において濾過に用いる多孔性中空糸膜の素材とし
ては、ポリフッ化ビニリデン、再生セルロース、セルロ
−ス、セルロ−スアセテ−ト、ポリスルフォン、ビニル
クロライド、ポリエステル、ポリメチルメタクリレ−
ト、アクリロニトリル、ナイロンを用いることができ
る。これらのうち、タンパク水溶液中のウイルス粒子を
除去するには親水性高分子を用いることが好ましく、濾
過性能・タンパクの透過性の点からは再生セルロースが
特に好ましい。これはタンパクと高分子素材との吸着に
関する相関性を検討した結果、親水性素材ほどタンパク
の吸着性が小さいため本発明の素材としてより好まし
く、なかでも再生セルロースが特に好ましいためと思わ
れる。
【００１４】本発明の方法において、濾過圧力は０．１
〜１気圧であることが好ましい。０．１気圧未満では蛋
白質の透過性は増大するが、ウイルスの除去性は低下す
る傾向がある。さらに、ＰＢＳ等の緩衝液でウイルス濾
過後のフィルタ−を洗浄すると、さらに夾雑タンパクや
溶解した裸のＤＮＡを除くことができる。効果的な遊離
ＤＮＡ・ＲＮＡの除去のためには、濾過前のサンプルに
ＤＮａｓｅ・ＲＮａｓｅを加えてＤＮＡ・ＲＮＡの分解
反応をあらかじめ行なってもよい。
〜１気圧であることが好ましい。０．１気圧未満では蛋
白質の透過性は増大するが、ウイルスの除去性は低下す
る傾向がある。さらに、ＰＢＳ等の緩衝液でウイルス濾
過後のフィルタ−を洗浄すると、さらに夾雑タンパクや
溶解した裸のＤＮＡを除くことができる。効果的な遊離
ＤＮＡ・ＲＮＡの除去のためには、濾過前のサンプルに
ＤＮａｓｅ・ＲＮａｓｅを加えてＤＮＡ・ＲＮＡの分解
反応をあらかじめ行なってもよい。
【００１５】本発明においてウイルスタンパクを変性・
分解する方法は、中空糸膜上にウイルスを捕捉させたま
ま行なうこともできるし、濃縮ウイルス液を中空糸膜か
ら回収して行なうこともできる。中空糸膜にウイルスを
捕捉させたまま行なう方法としては、例えばタンパク分
解酵素を用いる方法や、界面活性剤による方法、アルカ
リ変性処理、加熱処理がある。また、濃縮ウイルス液を
膜から回収した場合には、上記方法に加えて、フェノ−
ル処理も行なうことができる。場合によっては、これら
の処理を組み合わせて行なってもよい。これらの処理に
より、ウイルスタンパクは変性され、ウイルス遺伝子
は、ウイルスタンパクと分離される。
分解する方法は、中空糸膜上にウイルスを捕捉させたま
ま行なうこともできるし、濃縮ウイルス液を中空糸膜か
ら回収して行なうこともできる。中空糸膜にウイルスを
捕捉させたまま行なう方法としては、例えばタンパク分
解酵素を用いる方法や、界面活性剤による方法、アルカ
リ変性処理、加熱処理がある。また、濃縮ウイルス液を
膜から回収した場合には、上記方法に加えて、フェノ−
ル処理も行なうことができる。場合によっては、これら
の処理を組み合わせて行なってもよい。これらの処理に
より、ウイルスタンパクは変性され、ウイルス遺伝子
は、ウイルスタンパクと分離される。
【００１６】次いで、緩衝液、例えばＴＥ緩衝液（Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ緩衝液ＥＤＴＡ）等を用いて、中空糸膜を
濾過することで洗浄処理し、ウイルス遺伝子溶液を得る
ことができる。その液を用いてＰＣＲ反応を行なうこと
もできるし、さらに、共存しているわずかなタンパクを
除去して、ウイルス遺伝子の精製度を上げるために、限
外濾過法やイオン交換法を行なうこともできる。必要に
応じてこのウイルス遺伝子溶液を従来のエタノ−ル沈殿
処理により、濃縮することができる。
ｉｓ−ＨＣｌ緩衝液ＥＤＴＡ）等を用いて、中空糸膜を
濾過することで洗浄処理し、ウイルス遺伝子溶液を得る
ことができる。その液を用いてＰＣＲ反応を行なうこと
もできるし、さらに、共存しているわずかなタンパクを
除去して、ウイルス遺伝子の精製度を上げるために、限
外濾過法やイオン交換法を行なうこともできる。必要に
応じてこのウイルス遺伝子溶液を従来のエタノ−ル沈殿
処理により、濃縮することができる。
【００１７】
【００１８】
【実施例１】ハイブリド−マ細胞で培養した細胞培養液
から細胞画分を除いた上清液に大腸菌ファ−ジΦＸ１７
４をスパイクした。平均孔径３５ｎｍ、ウイルス捕捉可
能な膜厚３５μｍ、平均空孔率０．５の銅アンモニア法
再生セルロ−ス多孔性中空糸膜（ＢＭＭ）を用い、圧力
２００ｍｍＨｇにてこの液を濾過し、下記（１）式によ
りタンパク・遊離したＤＮＡ・ΦＸ１７４の透過率を求
めた。なお、溶液中のタンパク量はバイオ ラド プロ
テイン アッセイ キット（バイオラド社）、遊離した
ＤＮＡ量は、スレッシュホ−ルド総ＤＮＡ アッセイシ
ステム（モレキュラ−ディバイス社）、ΦＸ１７４の濃
度はプラ−ク法にて測定した。以上の結果を表１に示
す。
から細胞画分を除いた上清液に大腸菌ファ−ジΦＸ１７
４をスパイクした。平均孔径３５ｎｍ、ウイルス捕捉可
能な膜厚３５μｍ、平均空孔率０．５の銅アンモニア法
再生セルロ−ス多孔性中空糸膜（ＢＭＭ）を用い、圧力
２００ｍｍＨｇにてこの液を濾過し、下記（１）式によ
りタンパク・遊離したＤＮＡ・ΦＸ１７４の透過率を求
めた。なお、溶液中のタンパク量はバイオ ラド プロ
テイン アッセイ キット（バイオラド社）、遊離した
ＤＮＡ量は、スレッシュホ−ルド総ＤＮＡ アッセイシ
ステム（モレキュラ−ディバイス社）、ΦＸ１７４の濃
度はプラ−ク法にて測定した。以上の結果を表１に示
す。
【００１９】 透過率＝濾液中の濃度／元液中の濃度 （１）
【００２０】
【表１】
【００２１】ウイルスを捕捉したフィルタ−上で、タン
パク分解酵素プロテア−ゼｋでタンパク分解処理した。
さらにフィルタ−をＰＢＳで洗浄し、その液で、ウイル
ス遺伝子に特異な配列を持ったプライマ−を用いて、Ｐ
ＣＲ反応（Ｓａｋｉ，Ｒ．Ｋ．ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２３９ ４８７−４９１（１９８８））を行っ
た。同時にウイルス遺伝子の市販標準品（宝酒造社製）
も同一のプライマ−でＰＣＲ反応を行なった。各サンプ
ルは、定法に従い、電気泳動をおこなった。レ−ン１
は、ｐＵＣ１８を制限酵素ＨａｅＩＩＩで切断して得ら
れた分子量マ−カ−、レ−ン２は、実施例１から精製し
たサンプルをＰＣＲ反応を行なったもの、レ−ン３は、
市販標準品をＰＣＲ反応を行なったものである。その結
果を図１に示す。その結果、本方法によれば、簡便に高
い純度でウイルス遺伝子を精製できることが解った。
パク分解酵素プロテア−ゼｋでタンパク分解処理した。
さらにフィルタ−をＰＢＳで洗浄し、その液で、ウイル
ス遺伝子に特異な配列を持ったプライマ−を用いて、Ｐ
ＣＲ反応（Ｓａｋｉ，Ｒ．Ｋ．ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２３９ ４８７−４９１（１９８８））を行っ
た。同時にウイルス遺伝子の市販標準品（宝酒造社製）
も同一のプライマ−でＰＣＲ反応を行なった。各サンプ
ルは、定法に従い、電気泳動をおこなった。レ−ン１
は、ｐＵＣ１８を制限酵素ＨａｅＩＩＩで切断して得ら
れた分子量マ−カ−、レ−ン２は、実施例１から精製し
たサンプルをＰＣＲ反応を行なったもの、レ−ン３は、
市販標準品をＰＣＲ反応を行なったものである。その結
果を図１に示す。その結果、本方法によれば、簡便に高
い純度でウイルス遺伝子を精製できることが解った。
【００２２】
【発明の効果】本発明によれば、濾過フィルターでタン
パク溶液中のウイルスを簡便に短時間で大量に高い純度
で濃縮後、ウイルス遺伝子を精製することができる。
パク溶液中のウイルスを簡便に短時間で大量に高い純度
で濃縮後、ウイルス遺伝子を精製することができる。
【図１】本発明の実施例１により精製されたウイルス遺
伝子の電気泳動パタ−ンを従来法により精製されたウイ
ルス遺伝子、市販のウイルス遺伝子の電気泳動パタ−ン
と共に示す図である。
伝子の電気泳動パタ−ンを従来法により精製されたウイ
ルス遺伝子、市販のウイルス遺伝子の電気泳動パタ−ン
と共に示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｎ 7/00 Ｃ１２Ｒ 1:92） Ｃ１２Ｒ 1:92）
Claims (5)
- 【請求項１】 ウイルスが混入又はウイルスを含有して
いる溶液を平均孔径が１０ｎｍ以上２００ｎｍ以下であ
る多孔性中空糸膜で濾過して濃縮ウイルス液を得る工程
と、該濃縮ウイルス液中のウイルスのウイルスタンパク
を変性させてウイルス遺伝子とウイルスタンパクに分解
する工程とを含むウイルス遺伝子の精製方法。 - 【請求項２】 前記中空糸膜は、ウイルス粒子を捕捉す
る膜中の厚さが１０μｍ以上１００μｍ以下である請求
項１記載のウイルス遺伝子の精製方法。 - 【請求項３】 前記濾過を中空糸膜上で行った後、中空
糸膜上でウイルスタンパクを変性させてウイルス遺伝子
とウイルスタンパクに分解し、更に該中空糸膜を水溶液
で洗浄してウイルス遺伝子を回収する請求項１又は２記
載のウイルス遺伝子の精製方法。 - 【請求項４】 前記濃縮ウイルス液を中空糸膜から回収
した後、溶液中でウイルスのウイルスタンパクを変性さ
せてウイルス遺伝子とウイルスタンパクに分解する請求
項１又は２記載のウイルス遺伝子の精製方法。 - 【請求項５】 前記中空糸膜は膜方向の平均空孔率が
０．３以上０．６以下である請求項１〜４いずれかに記
載のウイルス遺伝子の精製方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP252495A JPH08187086A (ja) | 1995-01-11 | 1995-01-11 | ウイルス遺伝子の精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP252495A JPH08187086A (ja) | 1995-01-11 | 1995-01-11 | ウイルス遺伝子の精製方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08187086A true JPH08187086A (ja) | 1996-07-23 |
Family
ID=11531775
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP252495A Withdrawn JPH08187086A (ja) | 1995-01-11 | 1995-01-11 | ウイルス遺伝子の精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08187086A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999007458A1 (en) * | 1997-08-06 | 1999-02-18 | Genentech, Inc. | Hollow fiber co-flow filtration device |
| US5989431A (en) * | 1995-06-08 | 1999-11-23 | Progen Industries Ltd | Method and apparatus for DNA extraction |
| WO2002070689A1 (fr) * | 2001-03-07 | 2002-09-12 | Nix, Inc. | Methode permettant d'extraire des genes viraux et appareil d'extraction |
| EP2199319A1 (en) | 2008-12-19 | 2010-06-23 | Gambro Lundia AB | Virus filter |
-
1995
- 1995-01-11 JP JP252495A patent/JPH08187086A/ja not_active Withdrawn
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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