JPH0787970A - キシラナーゼの製造方法 - Google Patents
キシラナーゼの製造方法Info
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- JPH0787970A JPH0787970A JP3100978A JP10097891A JPH0787970A JP H0787970 A JPH0787970 A JP H0787970A JP 3100978 A JP3100978 A JP 3100978A JP 10097891 A JP10097891 A JP 10097891A JP H0787970 A JPH0787970 A JP H0787970A
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- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 キシラナーゼの製造方法
【構成】 コーンコブを含有する栄養培地中で菌、特に
サーモマイセス ラヌキノススを培養して、エンド- 及
びエキソセルラーゼ不含キシラナーゼを製造する。
サーモマイセス ラヌキノススを培養して、エンド- 及
びエキソセルラーゼ不含キシラナーゼを製造する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、キシラナーゼの製造方
法、その使用方法、微生物サーモマイセスラヌキノスス
ＤＳＭ５８２６及びこの菌によって製造されたエキソ-
及びエンドセルラーゼ- 不含キシラナーゼに関する。
法、その使用方法、微生物サーモマイセスラヌキノスス
ＤＳＭ５８２６及びこの菌によって製造されたエキソ-
及びエンドセルラーゼ- 不含キシラナーゼに関する。
【０００２】
【従来の技術】一年生植物又は落葉樹の場合主にキシラ
ンから成るヘミセルロースの分解は、セルロースの製造
に必要な工程である。この分解を、化学手段によって、
たとえば非アルカリ抽出によって、又は基質- 特異性酵
素、特にキシラナーゼを用いる処理による酵素手段によ
って実施することができる。キシラナーゼを用いる非漂
白されたパルプの酵素処理は、ヘミセルロース架橋の破
損及びキシランの分解をもたらす。しかしこの目的のた
めに、セルラーゼ不純物を含有しない純粋なキシラナー
ゼしか使用できない。というのは他のセルロースも分解
され、破壊サレルからであり、これは極めて望まれな
い。
ンから成るヘミセルロースの分解は、セルロースの製造
に必要な工程である。この分解を、化学手段によって、
たとえば非アルカリ抽出によって、又は基質- 特異性酵
素、特にキシラナーゼを用いる処理による酵素手段によ
って実施することができる。キシラナーゼを用いる非漂
白されたパルプの酵素処理は、ヘミセルロース架橋の破
損及びキシランの分解をもたらす。しかしこの目的のた
めに、セルラーゼ不純物を含有しない純粋なキシラナー
ゼしか使用できない。というのは他のセルロースも分解
され、破壊サレルからであり、これは極めて望まれな
い。
【０００３】分解し、Ｃ- 源として栄養培地中に含まれ
るキシラン含有粗材料を利用するキシラナーゼを、特に
多数の中温性及び好熱性微生物によって製造する。しか
し栄養培地中に含まれる他の粗材料に基づき、この基質
に特異的なセルラーゼも製造する。エキソ- 及びエンド
セルロース不含キシラナーゼを得るために、キシラナー
ゼを、製造されたセルラーゼから精巧な方法で分離し、
精製しなければならない。発酵の間セルラーゼの製造を
減少させるために、微生物を精製されたキシラン上で培
養することもできる。キシランの選択的分解に関して精
製されたキシラン上で培養されたトリコデルマ ハルツ
アヌム(Trichoderma harzianum) から得られたキシラナ
ーゼの使用は、Ｄ．Ｊ．セニオー(Senior)等、バイオテ
クノロジーレタース、第１０巻、Ｎｏ．１２，第９０７
−９１２頁（１９８８年）中に記載されている。しかし
ながら高純度キシラン上の培養は、粗材料の高い価格の
ために不適当である。
るキシラン含有粗材料を利用するキシラナーゼを、特に
多数の中温性及び好熱性微生物によって製造する。しか
し栄養培地中に含まれる他の粗材料に基づき、この基質
に特異的なセルラーゼも製造する。エキソ- 及びエンド
セルロース不含キシラナーゼを得るために、キシラナー
ゼを、製造されたセルラーゼから精巧な方法で分離し、
精製しなければならない。発酵の間セルラーゼの製造を
減少させるために、微生物を精製されたキシラン上で培
養することもできる。キシランの選択的分解に関して精
製されたキシラン上で培養されたトリコデルマ ハルツ
アヌム(Trichoderma harzianum) から得られたキシラナ
ーゼの使用は、Ｄ．Ｊ．セニオー(Senior)等、バイオテ
クノロジーレタース、第１０巻、Ｎｏ．１２，第９０７
−９１２頁（１９８８年）中に記載されている。しかし
ながら高純度キシラン上の培養は、粗材料の高い価格の
ために不適当である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明者は、極めて高
い活性を有するキシラナーゼが、コーンコブを含有する
栄養培地中で培養した時に製造され、しかも得られるキ
シラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエキソ- 及びエ
ンドセルラーゼ活性を示さないことを、予期せずに見い
出した。
い活性を有するキシラナーゼが、コーンコブを含有する
栄養培地中で培養した時に製造され、しかも得られるキ
シラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエキソ- 及びエ
ンドセルラーゼ活性を示さないことを、予期せずに見い
出した。
【０００５】
【課題を解決するための手段】したがって本発明は、キ
シラナーゼの製造方法に関するものであり、これは菌を
コーンコブを含有する栄養培地中で培養することを特徴
とする。
シラナーゼの製造方法に関するものであり、これは菌を
コーンコブを含有する栄養培地中で培養することを特徴
とする。
【０００６】キシラナーゼを、本発明によればコーンコ
ブを含有する栄養培地中で菌を培養して製造する。この
場合、キシラナーゼに関しては、ほんの僅かしか又は全
くエキソ- 又はエンドセルラーゼ活性を示さないキシラ
ナーゼしか意味しない。ここで使用されうる菌は、本発
明による方法で高いキシラナーゼ活性を生じうる菌であ
る。この様な菌の一例は、サーモマイセス ラヌキノス
スである。モニリアレス(Moniliales)目の菌株を、ジュ
ート繊維をオイルエマルジョンで処理するバングラディ
シュのジュート工場中の多量のジュート廃棄物から単離
する。ジュート廃棄物の積み重ね物中の温度は、６５〜
７０℃である。この菌株を微生物及び細胞培養物のドイ
ツコレクションにＤＳＭ５８２６で寄託したこの菌株
は、特にコーンコブを含有する栄養培地中で極めて高い
活性を有するキシラナーゼを産生することに適する。サ
ーモマイセス ラヌキノススＤＳＭ５８２６は新規であ
り、同様に本発明はこれに関する。
ブを含有する栄養培地中で菌を培養して製造する。この
場合、キシラナーゼに関しては、ほんの僅かしか又は全
くエキソ- 又はエンドセルラーゼ活性を示さないキシラ
ナーゼしか意味しない。ここで使用されうる菌は、本発
明による方法で高いキシラナーゼ活性を生じうる菌であ
る。この様な菌の一例は、サーモマイセス ラヌキノス
スである。モニリアレス(Moniliales)目の菌株を、ジュ
ート繊維をオイルエマルジョンで処理するバングラディ
シュのジュート工場中の多量のジュート廃棄物から単離
する。ジュート廃棄物の積み重ね物中の温度は、６５〜
７０℃である。この菌株を微生物及び細胞培養物のドイ
ツコレクションにＤＳＭ５８２６で寄託したこの菌株
は、特にコーンコブを含有する栄養培地中で極めて高い
活性を有するキシラナーゼを産生することに適する。サ
ーモマイセス ラヌキノススＤＳＭ５８２６は新規であ
り、同様に本発明はこれに関する。
【０００７】菌を培養する栄養培地は、生長に必要な栄
養素及び痕跡程度の元素の他にコーンコブを含有する。
コーンコブはそのまま使用するか又は粉砕して、有利に
は１１０〜１３０℃に加熱して又はたとえば過熱蒸気で
前処理して滅菌する。特に高いキシラナーゼ活性が、コ
ーンコブを使用する前に粗く粉砕した場合に達成する。
結果は、コーンコブを細く切断し、又は微粉砕した場合
まだ驚異的に良好であるが、粗く粉砕されたコーンコブ
の使用は、驚くべき結果を示す。
養素及び痕跡程度の元素の他にコーンコブを含有する。
コーンコブはそのまま使用するか又は粉砕して、有利に
は１１０〜１３０℃に加熱して又はたとえば過熱蒸気で
前処理して滅菌する。特に高いキシラナーゼ活性が、コ
ーンコブを使用する前に粗く粉砕した場合に達成する。
結果は、コーンコブを細く切断し、又は微粉砕した場合
まだ驚異的に良好であるが、粗く粉砕されたコーンコブ
の使用は、驚くべき結果を示す。
【０００８】適する窒素源は、たとえば肉ペプトン、魚
ペプトン、尿素、硫酸アンモニウム、マルト抽出物、肉
抽出物、大豆ミール酵母抽出物等々、無機塩、たとえば
二硫酸カリウム、リン酸水素カリウム、リン酸水素二ナ
トリウム、硫酸鉄、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム
等々である。キシラナーゼを栄養培地に遊離する速度を
増加するために、界面活性物質を添加するのが有利であ
る。一般に非イオン界面活性物質、たとえばトウィーン
４０、トウィーン６０又はトウィーン８０を、培地の全
量に対して０．０５〜０．５重量％の量で使用する。好
ましくは痕跡程度の元素、たとえば著しい金属、たとえ
ばＭｎ2+、Ｚｎ2+、Ｆｅ2+又はビタミンを培地中に添加
することもできる。培地を、アンモニア又はリン酸で
５．０〜８．０、好ましくは６．０〜７．０のｐＨに調
整するのが有利である。
ペプトン、尿素、硫酸アンモニウム、マルト抽出物、肉
抽出物、大豆ミール酵母抽出物等々、無機塩、たとえば
二硫酸カリウム、リン酸水素カリウム、リン酸水素二ナ
トリウム、硫酸鉄、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム
等々である。キシラナーゼを栄養培地に遊離する速度を
増加するために、界面活性物質を添加するのが有利であ
る。一般に非イオン界面活性物質、たとえばトウィーン
４０、トウィーン６０又はトウィーン８０を、培地の全
量に対して０．０５〜０．５重量％の量で使用する。好
ましくは痕跡程度の元素、たとえば著しい金属、たとえ
ばＭｎ2+、Ｚｎ2+、Ｆｅ2+又はビタミンを培地中に添加
することもできる。培地を、アンモニア又はリン酸で
５．０〜８．０、好ましくは６．０〜７．０のｐＨに調
整するのが有利である。
【０００９】菌を、栄養培地中で約３０〜７０℃、好ま
しくは４０〜６０℃、特に好ましくは４５〜５５℃の温
度で培養する。発酵の開始時にｐＨセットを一定に保つ
のは不必要である。しかし好適にはたとえばアンモニア
又はリン酸を計量添加して一定に保つものことができ
る。
しくは４０〜６０℃、特に好ましくは４５〜５５℃の温
度で培養する。発酵の開始時にｐＨセットを一定に保つ
のは不必要である。しかし好適にはたとえばアンモニア
又はリン酸を計量添加して一定に保つものことができ
る。
【００１０】発酵の終了後、キシラーゼを常法で発酵工
程から単離することができる。このために菌の菌糸体、
胞子及び残存する不溶性物質を、遠心分離又は濾過によ
って更に精製する。酵素を、更に常法でたとえば硫酸ア
ンモニウムで濾過して又はアセトン、アルコール又はそ
の類似物で溶剤沈殿して精製することができる。この方
法で得られた粗酵素を、好ましくは更にたとえばゲル濾
過、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動等々
によって精製することができる。
程から単離することができる。このために菌の菌糸体、
胞子及び残存する不溶性物質を、遠心分離又は濾過によ
って更に精製する。酵素を、更に常法でたとえば硫酸ア
ンモニウムで濾過して又はアセトン、アルコール又はそ
の類似物で溶剤沈殿して精製することができる。この方
法で得られた粗酵素を、好ましくは更にたとえばゲル濾
過、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動等々
によって精製することができる。
【００１１】本発明により製造されたキシラナーゼは、
高いキシラナーゼ活性を有する。極めて高いキシラナー
ゼ活性を、炭素源としてコーンコブを使用することで他
の未処理の粗材料、たとえば大麦スペルト、小麦ストロ
ー、小麦もみがら、粉砕されたブナ木の皮、アルファル
ファミール、レッドクローバー／グラスミール、大豆油
に比して達成することができることが明らかである。更
に生じるキシラナーゼの活性は、粗く粉砕されたコーン
コブを使用した場合に倍に増加する。
高いキシラナーゼ活性を有する。極めて高いキシラナー
ゼ活性を、炭素源としてコーンコブを使用することで他
の未処理の粗材料、たとえば大麦スペルト、小麦ストロ
ー、小麦もみがら、粉砕されたブナ木の皮、アルファル
ファミール、レッドクローバー／グラスミール、大豆油
に比して達成することができることが明らかである。更
に生じるキシラナーゼの活性は、粗く粉砕されたコーン
コブを使用した場合に倍に増加する。
【００１２】本発明により製造されたキシラナーゼは、
ほんの僅かしか又は全くエキソ- 及びエンドセルラーゼ
活性を有さない。サーモマイセス ラヌキノススＤＳＭ
５８２６によって産生されたキシラナーゼは、いくつか
の検定でエキソ- 及びエンドセルラーゼ- 不含であるこ
とが証明されている。この様なエキソ- 及びエンドセル
ラーゼ不含キシラナーゼは新規であり、かつ本発明はこ
のことにも関する。更に、サーモマイセス ラヌキノス
スＤＳＭ５８２６は、このキシラナーゼをコーンコブを
含有する栄養培地中だけではなく、コーンコブの代りに
他の固体又は溶解されたキシラン- 含有炭素源、たとえ
ば大麦スペルト、粉砕された小麦ストロー、非漂白セル
ロース又はキシランそれ自体を含有する栄養培地中でも
産生することができる。しかし極めて高いキシラナーゼ
活性がコーンコブを用いて栄養培地中で得られる。
ほんの僅かしか又は全くエキソ- 及びエンドセルラーゼ
活性を有さない。サーモマイセス ラヌキノススＤＳＭ
５８２６によって産生されたキシラナーゼは、いくつか
の検定でエキソ- 及びエンドセルラーゼ- 不含であるこ
とが証明されている。この様なエキソ- 及びエンドセル
ラーゼ不含キシラナーゼは新規であり、かつ本発明はこ
のことにも関する。更に、サーモマイセス ラヌキノス
スＤＳＭ５８２６は、このキシラナーゼをコーンコブを
含有する栄養培地中だけではなく、コーンコブの代りに
他の固体又は溶解されたキシラン- 含有炭素源、たとえ
ば大麦スペルト、粉砕された小麦ストロー、非漂白セル
ロース又はキシランそれ自体を含有する栄養培地中でも
産生することができる。しかし極めて高いキシラナーゼ
活性がコーンコブを用いて栄養培地中で得られる。
【００１３】本発明によるエキソ- 及びエンドセルラー
ゼ- 不含キシラナーゼは、エタノールによる沈殿及び凍
結乾燥後に次の性質を有する： ａ）ｐＨ安定性（図１） 酵素を２０℃で緩衝液中で種々のｐＨ値で６６時間培養
する。すべての試みの活性を、１％ヘミセルロースを用
いてｐＨ４．８で次の様に測定する：クエン酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ４．８）中の１％基質溶液１ｍｌ（オー
トムギスペルトからのキシラン；シグマＸ- ０６２７）
を、５０℃で２分間培養し、酵素溶液０．５ｍｌの添加
後、５０℃で更に１５分間培養する。次いでジニトロサ
リチル酸試薬（ＩＵＰＡＣのＦＰＵ検定法として）３ｍ
ｌ及び２．５Ｎ ＮａＯＨ０．５ｍｌを混合し、混合物
を沸とう水浴中で５分間加熱する、次いで急速に冷水浴
中で冷却し、５４０ｎｍでの吸光を対照標準としてブラ
ンク（クエン酸塩緩衝液）を用いて測定する。酵素（酵
素０．５ｍｌ＋クエン酸塩緩衝液１．０ｍｌ）の吸光及
び基質溶液（クエン酸緩衝液中の１％基質溶液１ｍｌ）
の吸光を、この値から減じる。検定プロットを、クエン
酸塩緩衝液１．０ｍｌ及び標準溶液（キシロース／ｍｌ
０．５−１．５ｍｇを含有する）５ｍｌを用いて構成
する。 キシラナーゼ活性の検定：ＸＵ／ｍｌ＝還元糖（キシロ
ース／テストとして）×０．８８８ｍｇ本来の活性の９
７−１００％が、ｐＨ範囲５．０−７．０で得られる。 ｂ）最適ｐＨ（図２） 酵素活性を、クエン酸緩衝液、トリスＨＣｌ緩衝液（ｐ
Ｈ７．０−９．０）及びリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．５−
８．０）中の１％ヘミセルロース懸濁液を用いて培養
（５０℃、１５分）して決定する。 最適ｐＨ範囲：６．０−７．５ ｃ）熱安定性（図３） 酵素溶液を、０．０５モルクエン酸緩衝液中で４５−６
０℃の温度で０−７２時間培養する。酵素の活性を、１
％ヘミセルロースで５０℃で測定する。
ゼ- 不含キシラナーゼは、エタノールによる沈殿及び凍
結乾燥後に次の性質を有する： ａ）ｐＨ安定性（図１） 酵素を２０℃で緩衝液中で種々のｐＨ値で６６時間培養
する。すべての試みの活性を、１％ヘミセルロースを用
いてｐＨ４．８で次の様に測定する：クエン酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ４．８）中の１％基質溶液１ｍｌ（オー
トムギスペルトからのキシラン；シグマＸ- ０６２７）
を、５０℃で２分間培養し、酵素溶液０．５ｍｌの添加
後、５０℃で更に１５分間培養する。次いでジニトロサ
リチル酸試薬（ＩＵＰＡＣのＦＰＵ検定法として）３ｍ
ｌ及び２．５Ｎ ＮａＯＨ０．５ｍｌを混合し、混合物
を沸とう水浴中で５分間加熱する、次いで急速に冷水浴
中で冷却し、５４０ｎｍでの吸光を対照標準としてブラ
ンク（クエン酸塩緩衝液）を用いて測定する。酵素（酵
素０．５ｍｌ＋クエン酸塩緩衝液１．０ｍｌ）の吸光及
び基質溶液（クエン酸緩衝液中の１％基質溶液１ｍｌ）
の吸光を、この値から減じる。検定プロットを、クエン
酸塩緩衝液１．０ｍｌ及び標準溶液（キシロース／ｍｌ
０．５−１．５ｍｇを含有する）５ｍｌを用いて構成
する。 キシラナーゼ活性の検定：ＸＵ／ｍｌ＝還元糖（キシロ
ース／テストとして）×０．８８８ｍｇ本来の活性の９
７−１００％が、ｐＨ範囲５．０−７．０で得られる。 ｂ）最適ｐＨ（図２） 酵素活性を、クエン酸緩衝液、トリスＨＣｌ緩衝液（ｐ
Ｈ７．０−９．０）及びリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．５−
８．０）中の１％ヘミセルロース懸濁液を用いて培養
（５０℃、１５分）して決定する。 最適ｐＨ範囲：６．０−７．５ ｃ）熱安定性（図３） 酵素溶液を、０．０５モルクエン酸緩衝液中で４５−６
０℃の温度で０−７２時間培養する。酵素の活性を、１
％ヘミセルロースで５０℃で測定する。
【００１４】４５℃の温度で２０時間後の測定は、本来
の活性の９３％を示し、５０℃の温度で６５％を示す。 ｄ）最適温度（図４） 酵素活性を、１％ヘミセルロース懸濁液を用いて０．０
５モルクエン酸塩緩衝液中でｐＨ４．８で１５分間培養
して、測定する。 最適温度：６５℃ ｅ）エキソ- 及びエンドセルラーゼの及び３８５ＸＵ／
ｍｌの活性を有する酵素溶液のβ- グルコシダーゼの含
有量： ｉ）エキソ- 及びエンドセルラーゼ：セルラーゼ活性
は、ＩＵＰＡＣのＦＰＵ検定法で検出されない。更に透
析管（再生セルロース）を、７２時間酵素で水性媒体中
で処理し、この媒体をグルコースの存在下にテストする
が、グルコースは認められなかった。セルロース含有酵
素は、対照的に透析管を２〜３時間以内に溶解する。更
にｐＨ６．５で、セルロース上で酵素の長い培養の間遊
離される還元糖の性質を、決定する。
の活性の９３％を示し、５０℃の温度で６５％を示す。 ｄ）最適温度（図４） 酵素活性を、１％ヘミセルロース懸濁液を用いて０．０
５モルクエン酸塩緩衝液中でｐＨ４．８で１５分間培養
して、測定する。 最適温度：６５℃ ｅ）エキソ- 及びエンドセルラーゼの及び３８５ＸＵ／
ｍｌの活性を有する酵素溶液のβ- グルコシダーゼの含
有量： ｉ）エキソ- 及びエンドセルラーゼ：セルラーゼ活性
は、ＩＵＰＡＣのＦＰＵ検定法で検出されない。更に透
析管（再生セルロース）を、７２時間酵素で水性媒体中
で処理し、この媒体をグルコースの存在下にテストする
が、グルコースは認められなかった。セルロース含有酵
素は、対照的に透析管を２〜３時間以内に溶解する。更
にｐＨ６．５で、セルロース上で酵素の長い培養の間遊
離される還元糖の性質を、決定する。
【００１５】この場合測定を、３，７，１９及び１６３
時間後に行う。このことから、すべての場合キシロー
ス、キシロビオセス及びキシロトリオセスしか遊離せず
しかもグルコースは遊離しないことが明らかである。レ
プリカ技術を使用して、エンドヌクレアーゼ活性に関し
てＯＢＲ- ヒドロキシエチルセルロース- 汚染された寒
天を用いてテストすると、活性は認められない。酵素
は、実施されたすべての実験及び検定によって、完全に
セルラーゼ不含であることを示す。
時間後に行う。このことから、すべての場合キシロー
ス、キシロビオセス及びキシロトリオセスしか遊離せず
しかもグルコースは遊離しないことが明らかである。レ
プリカ技術を使用して、エンドヌクレアーゼ活性に関し
てＯＢＲ- ヒドロキシエチルセルロース- 汚染された寒
天を用いてテストすると、活性は認められない。酵素
は、実施されたすべての実験及び検定によって、完全に
セルラーゼ不含であることを示す。
【００１６】本発明によるキシラナーゼは、０．１単位
／ｍｌの測定限界でカルボキシメチルセルロース活性
（エンド- β- １，４- セルラーゼ）を示さず、それ故
にこれをビスコースの製造に使用することもできる。
／ｍｌの測定限界でカルボキシメチルセルロース活性
（エンド- β- １，４- セルラーゼ）を示さず、それ故
にこれをビスコースの製造に使用することもできる。
【００１７】ｉｉ）β- グルコシダーゼ：０．０５モル
クエン酸ナトリウム緩衝液０．６ｍｌ（ｐＨ４．８）及
び酵素溶液０．３ｍｌを、５０℃で２時間予備培養す
る。次いでｐ- ニトロフエニルβ- Ｄ- グルコシド０．
３ｍｌ（クエン酸ナトリウム緩衝液４ｍｇ／ｍｌ）を加
え、混合物を５０℃で１０分間培養する。反応を、１モ
ルＮａ2 ＣＯ3 溶液２．４ｍｌの添加によって停止し、
４０５ｍｍの吸光を、対照標準としてブランクで測定す
る。β- グルコシダーゼの活性を、次の様に計算する：
クエン酸ナトリウム緩衝液０．６ｍｌ（ｐＨ４．８）及
び酵素溶液０．３ｍｌを、５０℃で２時間予備培養す
る。次いでｐ- ニトロフエニルβ- Ｄ- グルコシド０．
３ｍｌ（クエン酸ナトリウム緩衝液４ｍｇ／ｍｌ）を加
え、混合物を５０℃で１０分間培養する。反応を、１モ
ルＮａ2 ＣＯ3 溶液２．４ｍｌの添加によって停止し、
４０５ｍｍの吸光を、対照標準としてブランクで測定す
る。β- グルコシダーゼの活性を、次の様に計算する：
【００１８】
【外１】
【００１９】Ｅ・・・・・吸光 ｔ・・・・・反応時間（分） 本発明によるキシラナーゼは、０．２−０．９ＩＵ／ｍ
ｌのβ- グルコシダーゼ活性を有する。
ｌのβ- グルコシダーゼ活性を有する。
【００２０】セロビオースを切断してグルコースとなす
β- グルコシダーゼの含有量は、セルロースの製造で本
発明によるキシラナーゼの挙動に影響しない。というの
はエキソ- 及びエンドセルラーゼの不在は、β- グルコ
シダーゼによって攻撃されうるセルロース分解生成物を
全く形成しないことを意味する。 ｆ）更にβ- キシロシダーゼ、アラビノシダーゼ、アセ
チルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ及び
マンナナーゼ活性は、夫々の場合＜１００単位／ｌであ
ることが分る。 ｇ）酵素中の可溶性たん白質の含有量は、８００ｍｇ／
ｌであり、主なたん白質の分子量は２４〜２５ＫＤａで
あり、主なたん白質の等電点は４．１である。 ｈ）精製された酵素は、酵素的に加水分解して１１ペプ
チドとなる。夫々８，１６，５及び１２個のアミノ酸を
有するペプチド４個を配列する。このことから、調べら
れるキシラナーゼをＮ末端で遮断し、これによってＮ-
末端から配列を開始することは不可能であり、一方アナ
ンド(Anand) 等、Arch. Biochem. Biophys. ２７６，第
５４６−５５３頁（１９９０）に従ってフミコラ ラヌ
キノザ(Humicola lanuginosa)(＝サーモマイセス ラヌ
キノスス）から単離されたキシラナーゼは、Ｎ- 末端ア
ミノ酸としてアルギニンを含有することが明らかであ
る。
β- グルコシダーゼの含有量は、セルロースの製造で本
発明によるキシラナーゼの挙動に影響しない。というの
はエキソ- 及びエンドセルラーゼの不在は、β- グルコ
シダーゼによって攻撃されうるセルロース分解生成物を
全く形成しないことを意味する。 ｆ）更にβ- キシロシダーゼ、アラビノシダーゼ、アセ
チルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ及び
マンナナーゼ活性は、夫々の場合＜１００単位／ｌであ
ることが分る。 ｇ）酵素中の可溶性たん白質の含有量は、８００ｍｇ／
ｌであり、主なたん白質の分子量は２４〜２５ＫＤａで
あり、主なたん白質の等電点は４．１である。 ｈ）精製された酵素は、酵素的に加水分解して１１ペプ
チドとなる。夫々８，１６，５及び１２個のアミノ酸を
有するペプチド４個を配列する。このことから、調べら
れるキシラナーゼをＮ末端で遮断し、これによってＮ-
末端から配列を開始することは不可能であり、一方アナ
ンド(Anand) 等、Arch. Biochem. Biophys. ２７６，第
５４６−５５３頁（１９９０）に従ってフミコラ ラヌ
キノザ(Humicola lanuginosa)(＝サーモマイセス ラヌ
キノスス）から単離されたキシラナーゼは、Ｎ- 末端ア
ミノ酸としてアルギニンを含有することが明らかであ
る。
【００２１】本発明により製造されたキシラナーゼを、
キシラン- 及びリグノセルロース-含有植物性粗材料及
びこの様な粗材料から成る繊維の酵素処理に使用し、た
とえばビスコースの製造にセルロースを漂白、脱イン
ク、精製に又は他の前処理、たとえば消化前にキシラン
の除去に使用するのが有利である。
キシラン- 及びリグノセルロース-含有植物性粗材料及
びこの様な粗材料から成る繊維の酵素処理に使用し、た
とえばビスコースの製造にセルロースを漂白、脱イン
ク、精製に又は他の前処理、たとえば消化前にキシラン
の除去に使用するのが有利である。
【００２２】キシラン- 及びリグノセルロース- 含有植
物性粗材料は、落葉及び針葉樹、一年生植物、たとえば
アマ、わら、バガス、ケナフ、アシ、エレファントグラ
ス等々から成る粗材料を、しかもまた植物性材料、たと
えば漂白された、半漂白された又は未漂白パルプ又は廃
棄紙から成る繊維を意味する。
物性粗材料は、落葉及び針葉樹、一年生植物、たとえば
アマ、わら、バガス、ケナフ、アシ、エレファントグラ
ス等々から成る粗材料を、しかもまた植物性材料、たと
えば漂白された、半漂白された又は未漂白パルプ又は廃
棄紙から成る繊維を意味する。
【００２３】本発明により製造されたキシラナーゼを、
使用するのに精製する必要はない。それは固体栄養培地
を除くことで十分である。固体栄養材料の除去後、発酵
培養液を、そのまま直接植物性粗材料から成る繊維の処
理に使用することができる。
使用するのに精製する必要はない。それは固体栄養培地
を除くことで十分である。固体栄養材料の除去後、発酵
培養液を、そのまま直接植物性粗材料から成る繊維の処
理に使用することができる。
【００２４】セルロース工業中で使用する場合、未漂
白、半漂白及び漂白パルプを本発明により製造されたキ
シラナーゼで処理することができる。パルプの処理は、
ヘミセルロース- リグニン架橋を分解することになる。
したがってより少ない漂白は、次の漂白工程に使用され
る。半漂白されたパルプの処理で、予備の漂白後に残存
するキシランを分解し、これが洗浄剤及びペーラーパル
プをもたらす。酵素処理の効果を、カパ(Kappa) 数
（Ｋ）によって測定する。この数は、酸化する物質、す
なわち、たとえばリグニンの含量を示す。比較的高いα
- セルロース含量は、キシラナーゼ処理のために漂白パ
ルプに達する。
白、半漂白及び漂白パルプを本発明により製造されたキ
シラナーゼで処理することができる。パルプの処理は、
ヘミセルロース- リグニン架橋を分解することになる。
したがってより少ない漂白は、次の漂白工程に使用され
る。半漂白されたパルプの処理で、予備の漂白後に残存
するキシランを分解し、これが洗浄剤及びペーラーパル
プをもたらす。酵素処理の効果を、カパ(Kappa) 数
（Ｋ）によって測定する。この数は、酸化する物質、す
なわち、たとえばリグニンの含量を示す。比較的高いα
- セルロース含量は、キシラナーゼ処理のために漂白パ
ルプに達する。
【００２５】
〔例１〕粉砕されかつ乾燥したコーンコブ９ｇ、肉ペス
トン３．３ｇ、（ＮＨ4)2 ＳＯ 4 ０．６ｇ、尿素０．４
５ｇ、ＭｇＳＯ4 ．７Ｈ2 Ｏ ０．０９ｇ、ＣａＣ
ｌ2．２Ｈ2 Ｏ ０．０９ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 ４．５ｇ、
トウィーン８０ ０．３ｍｌ、Ｓ1 （１．６ｇ／ｌ Ｍ
ｎＳＯ4 ．Ｈ2 Ｏ；３．４５ｇ／ｌ ＺｎＳＯ4 ．７Ｈ
2 Ｏ；２．０ｇ／ｌ ＣａＣｌ2 ．６Ｈ2 Ｏ）０．３ｍ
ｌ及びＳ2 （５ｇ／ｌＦｅＳＯ4 ．７Ｈ2 Ｏ）０．３ｍ
ｌから成る培地３００ｍｌを、ｐＨ６に調整し、振とう
フラスコ中で１２８℃で６０分間高圧滅菌する。
トン３．３ｇ、（ＮＨ4)2 ＳＯ 4 ０．６ｇ、尿素０．４
５ｇ、ＭｇＳＯ4 ．７Ｈ2 Ｏ ０．０９ｇ、ＣａＣ
ｌ2．２Ｈ2 Ｏ ０．０９ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 ４．５ｇ、
トウィーン８０ ０．３ｍｌ、Ｓ1 （１．６ｇ／ｌ Ｍ
ｎＳＯ4 ．Ｈ2 Ｏ；３．４５ｇ／ｌ ＺｎＳＯ4 ．７Ｈ
2 Ｏ；２．０ｇ／ｌ ＣａＣｌ2 ．６Ｈ2 Ｏ）０．３ｍ
ｌ及びＳ2 （５ｇ／ｌＦｅＳＯ4 ．７Ｈ2 Ｏ）０．３ｍ
ｌから成る培地３００ｍｌを、ｐＨ６に調整し、振とう
フラスコ中で１２８℃で６０分間高圧滅菌する。
【００２６】サーモマイセス ラヌキノススＤＳＭ５８
２６予備培養物を、たの培地中に植菌し、４，５日間振
とうしながら（１４０ｒｐｍ）５０℃で培養する。
２６予備培養物を、たの培地中に植菌し、４，５日間振
とうしながら（１４０ｒｐｍ）５０℃で培養する。
【００２７】４，５日後、混合物を濾過し、キシナラー
ゼ（ＸＵ／ｍｌ）、β- グルコシダーゼ（Ｉｕ／ｍ
ｌ）、カルボキシメチルセルラーゼ（ＣＭＣ- アーゼ／
ｍｌ）及びエキソグルカナーゼ（ＦＰＵ／ｍｌ）の活性
を測定する。 ＸＵ／ｍｌ ３８９．７ ４℃で３日貯蔵後 ３９５．０ ＩＵ／ｍｌ ０．２９ ＦＰＵ／ｍｌ 検出不可能 ＣＭＣ- アーゼ／ｍｌ 検出不可能 〔例２〕コーンコブを、 ａ）切断する（コーンコブ断片のサイズ１０ｍｍ以
上）。 ｂ）粗く粉砕する（コーンコブ断片のサイズ３〜１０ｍ
ｍ）。 ｃ）微粉砕する（コーンコブ断片のサイズ３ｍｍ以
下）。
ゼ（ＸＵ／ｍｌ）、β- グルコシダーゼ（Ｉｕ／ｍ
ｌ）、カルボキシメチルセルラーゼ（ＣＭＣ- アーゼ／
ｍｌ）及びエキソグルカナーゼ（ＦＰＵ／ｍｌ）の活性
を測定する。 ＸＵ／ｍｌ ３８９．７ ４℃で３日貯蔵後 ３９５．０ ＩＵ／ｍｌ ０．２９ ＦＰＵ／ｍｌ 検出不可能 ＣＭＣ- アーゼ／ｍｌ 検出不可能 〔例２〕コーンコブを、 ａ）切断する（コーンコブ断片のサイズ１０ｍｍ以
上）。 ｂ）粗く粉砕する（コーンコブ断片のサイズ３〜１０ｍ
ｍ）。 ｃ）微粉砕する（コーンコブ断片のサイズ３ｍｍ以
下）。
【００２８】夫々の場合、酵母抽出物２８．６ｇ、（Ｎ
Ｈ4)2 ＳＯ4 ４．２３ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 １０ｇ、ＦｅＳ
Ｏ4 ．７Ｈ2 Ｏ ０．３ｇ、ＭｇＳＯ4 ．７Ｈ2 Ｏ
０．３ｇ及びＣａＣｌ2 ．２Ｈ2 Ｏ ０．３ｇ及びａ）
切断された、ｂ）粗く粉砕された及びｃ）微粉砕され
た、乾燥コーンコブ２５ｇを製造し、ｐＨ６．５に調整
し、振とうフラスコ中で１２１℃２５分間高圧滅菌す
る。
Ｈ4)2 ＳＯ4 ４．２３ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 １０ｇ、ＦｅＳ
Ｏ4 ．７Ｈ2 Ｏ ０．３ｇ、ＭｇＳＯ4 ．７Ｈ2 Ｏ
０．３ｇ及びＣａＣｌ2 ．２Ｈ2 Ｏ ０．３ｇ及びａ）
切断された、ｂ）粗く粉砕された及びｃ）微粉砕され
た、乾燥コーンコブ２５ｇを製造し、ｐＨ６．５に調整
し、振とうフラスコ中で１２１℃２５分間高圧滅菌す
る。
【００２９】サーモマイセス ラヌキノススＤＳＭ５８
２６予備培養物を、この培地に植菌し、振とうしながら
５０℃で培養する。５日後、濾過を行い、種々の培地中
のキシラナーゼ活性（ＸＵ／ｍｌ）を測定する： ４℃で１日貯蔵後 コーンコブ ＸＵ／ｍｌ ＸＵ／ｍｌ 切断された ７６４ ８８１ 粗く粉砕された １６０１ １５２６ 微粉砕された ３８８ ４２３ 〔例３〕次のキシラナーゼ活性を、例２中に記載した培
地中でかつ例２に記載した方法で測定するが、他のＣ-
源を使用する： Ｃ源 キシラナーゼ活性（ＸＵ／ｍｌ） コーンコブ（５０％微粉砕、 ４７７ ５０％粗く粉砕） 小麦ストロー ２３２ 小麦もみがら １８６ 大麦スペルト ６１ ウルバ リフィデ（アルガ）Ulva rifide(alga) ２８ アルファルファミール ２０ レッドクローバー／グラスミール １４ ビーチバーク、粉砕 ８ 可溶性でんぷん ４ 大豆油 ４ 〔例４〕サーモマイセスラヌキノススＤＳＭ５８２６
を、例１に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りに粉砕された小麦ストロー９ｇを使用する。
２６予備培養物を、この培地に植菌し、振とうしながら
５０℃で培養する。５日後、濾過を行い、種々の培地中
のキシラナーゼ活性（ＸＵ／ｍｌ）を測定する： ４℃で１日貯蔵後 コーンコブ ＸＵ／ｍｌ ＸＵ／ｍｌ 切断された ７６４ ８８１ 粗く粉砕された １６０１ １５２６ 微粉砕された ３８８ ４２３ 〔例３〕次のキシラナーゼ活性を、例２中に記載した培
地中でかつ例２に記載した方法で測定するが、他のＣ-
源を使用する： Ｃ源 キシラナーゼ活性（ＸＵ／ｍｌ） コーンコブ（５０％微粉砕、 ４７７ ５０％粗く粉砕） 小麦ストロー ２３２ 小麦もみがら １８６ 大麦スペルト ６１ ウルバ リフィデ（アルガ）Ulva rifide(alga) ２８ アルファルファミール ２０ レッドクローバー／グラスミール １４ ビーチバーク、粉砕 ８ 可溶性でんぷん ４ 大豆油 ４ 〔例４〕サーモマイセスラヌキノススＤＳＭ５８２６
を、例１に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りに粉砕された小麦ストロー９ｇを使用する。
【００３０】 ＸＵ／ｍｌ １０４．３ ４℃で３日間貯蔵後 １２３．９ ＩＵ／ｍｌ ０．５１ ＦＰＵ／ｍｌ 検出不可能 ＣＭＣ- アーゼ／ｍｌ 検出不可能 〔例５〕サーモマイセスラヌキノススＤＳＭ５８２６
を、例１に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りに大麦スペクトルを使用する。
を、例１に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りに大麦スペクトルを使用する。
【００３１】 ＸＵ／ｍｌ ２２２．９ ４℃で３日間貯蔵後 １９６．２ ＩＵ／ｍｌ ０．６０ ＦＰＵ／ｍｌ 検出不可能 ＣＭＣ- アーゼ／ｍｌ 検出不可能 〔例６〕サーモマイセス ラヌキノススＤＳＭ５８２６
を、例１に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りにヘミセルロース（キシラン）９ｇを使用す
る。
を、例１に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りにヘミセルロース（キシラン）９ｇを使用す
る。
【００３２】 ＸＵ／ｍｌ １５１．５５ ＩＵ／ｍｌ 検出不可能 ＦＰＵ／ｍｌ 検出不可能 ＣＭＣ- アーゼ／ｍｌ 検出不可能 〔例７〕 硫酸塩パルプの処理 ルツオームペロック（ハードウッド）からの乾燥した硫
酸塩パルプを、加熱し、４５℃で１．５時間水と共に振
とうする。次いで例１と同様に製造されたキシラナーゼ
を加え、２３０ｒｐｍで振とうする。 ａ）発酵培養液 ３０ｇ ｂ）発酵培養液 ９０ｇ パルプ ２２０ｇ パルプ ２２０ｇ （Ｋ＝１９．９７） （Ｋ＝１９．９７） 水 ３５０ｇ 水 ２９０ｇ １００ＸＵ酵素を、繊維 ３００ＸＵ酵素を、繊維 のグラムあたりで添加す のグラムあたりで添加す る。 る。
酸塩パルプを、加熱し、４５℃で１．５時間水と共に振
とうする。次いで例１と同様に製造されたキシラナーゼ
を加え、２３０ｒｐｍで振とうする。 ａ）発酵培養液 ３０ｇ ｂ）発酵培養液 ９０ｇ パルプ ２２０ｇ パルプ ２２０ｇ （Ｋ＝１９．９７） （Ｋ＝１９．９７） 水 ３５０ｇ 水 ２９０ｇ １００ＸＵ酵素を、繊維 ３００ＸＵ酵素を、繊維 のグラムあたりで添加す のグラムあたりで添加す る。 る。
【００３３】濾過によってパルプを除去後、カパ数を測
定する。
定する。
【００３４】カパ 数 ａ）１７．４５
ｂ）１３．３９
ｂ）１３．３９
【００３５】
【発明の効果】本発明によれば、サーモマイセス ラヌ
キノススを、コーンコブを含有する栄養培地中で培養し
て得られるキシラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエ
キソ-及びエンドセルラーゼ活性を示さない。
キノススを、コーンコブを含有する栄養培地中で培養し
て得られるキシラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエ
キソ-及びエンドセルラーゼ活性を示さない。
【図１】キシラナーゼのｐＨ安定性を示す。
【図２】キシラナーゼの最適ｐＨを示す。
【図３】キシラナーゼの熱安定性を示す。
【図４】キシラナーゼの最適温度を示す。
【手続補正書】
【提出日】平成４年７月１０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２０】セロビオースを切断してグルコースとなす
β- グルコシダーゼの含有量は、セルロースの製造で本
発明によるキシラナーゼの挙動に影響しない。というの
はエキソ- 及びエンドセルラーゼの不在は、β- グルコ
シダーゼによって攻撃されうるセルロース分解生成物を
全く形成しないことを意味する。 ｆ）更にβ- キシロシダーゼ、アラビノシダーゼ、アセ
チルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ及び
マンナナーゼ活性は、夫々の場合＜１００単位／ｌであ
ることが分る。 ｇ）酵素中の可溶性たん白質の含有量は、８００ｍｇ／
ｌであり、主なたん白質の分子量は２４〜２５ＫＤａで
あり、主なたん白質の等電点は４．１である。 ｈ）精製された酵素は、酵素的に加水分解して１１ペプ
チドとなる。夫々８，１６，５及び１２個のアミノ酸を
有するペプチド４個を配列する。このことから、調べら
れるキシラナーゼをＮ末端で遮断し、これによってＮ-
末端から配列を開始することは不可能であり、一方アナ
ンド(Anand) 等、Arch. Biochem. Biophys. ２７６，第
５４６−５５３頁（１９９０）に従ってフミコラ ラヌ
キノザ(Humicola lanuginosus)(＝サーモマイセス ラ
ヌキノスス）から単離されたキシラナーゼは、Ｎ- 末端
アミノ酸としてアルギニンを含有することが明らかであ
る。
β- グルコシダーゼの含有量は、セルロースの製造で本
発明によるキシラナーゼの挙動に影響しない。というの
はエキソ- 及びエンドセルラーゼの不在は、β- グルコ
シダーゼによって攻撃されうるセルロース分解生成物を
全く形成しないことを意味する。 ｆ）更にβ- キシロシダーゼ、アラビノシダーゼ、アセ
チルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ及び
マンナナーゼ活性は、夫々の場合＜１００単位／ｌであ
ることが分る。 ｇ）酵素中の可溶性たん白質の含有量は、８００ｍｇ／
ｌであり、主なたん白質の分子量は２４〜２５ＫＤａで
あり、主なたん白質の等電点は４．１である。 ｈ）精製された酵素は、酵素的に加水分解して１１ペプ
チドとなる。夫々８，１６，５及び１２個のアミノ酸を
有するペプチド４個を配列する。このことから、調べら
れるキシラナーゼをＮ末端で遮断し、これによってＮ-
末端から配列を開始することは不可能であり、一方アナ
ンド(Anand) 等、Arch. Biochem. Biophys. ２７６，第
５４６−５５３頁（１９９０）に従ってフミコラ ラヌ
キノザ(Humicola lanuginosus)(＝サーモマイセス ラ
ヌキノスス）から単離されたキシラナーゼは、Ｎ- 末端
アミノ酸としてアルギニンを含有することが明らかであ
る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３５】
【発明の効果】本発明によれば、サーモマイセス ラヌ
キノススを、コーンコブを含有する栄養培地中で培養し
て得られるキシラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエ
キソ-及びエンドセルラーゼ活性を示さない。以上、本
発明について詳述したが、以下に本発明の実施の態様に
ついて記載する。 1)特許請求の範囲の請求項１に記載した方法で、菌とし
てサーモマイセス ラヌキノスス(Thermomyces lanuqin
osus) を使用する。 2)特許請求の範囲の請求項１に記載した方法で、菌とし
てサーモマイセス ラヌキノススＤＳＭ５８２６を使用
する。 3)特許請求の範囲の請求項１に記載した方法で、菌を、
３０−７０℃の温度で及び５．０〜８．０のｐＨ- 値で
培養する。 4)特許請求の範囲の請求項１に記載した方法で、菌を、
４５〜５５℃の温度で及び５．０〜８．０のｐＨ- 値で
培養する。 5)特許請求の範囲の請求項１に記載した方法で、サーモ
マイセス ラヌキノススＤＳＭ５８２６を、４５〜５０
℃の温度で及び６．０〜７．０のｐＨ- 値で培養する。 6)特許請求の範囲の請求項４に記載した方法で、エキソ
- 及びエンドセルラーゼ不含キシラナーゼは、サーモマ
イセス ラヌキノススＤＳＭ５８２６の培養によって得
られる。
キノススを、コーンコブを含有する栄養培地中で培養し
て得られるキシラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエ
キソ-及びエンドセルラーゼ活性を示さない。以上、本
発明について詳述したが、以下に本発明の実施の態様に
ついて記載する。 1)特許請求の範囲の請求項１に記載した方法で、菌とし
てサーモマイセス ラヌキノスス(Thermomyces lanuqin
osus) を使用する。 2)特許請求の範囲の請求項１に記載した方法で、菌とし
てサーモマイセス ラヌキノススＤＳＭ５８２６を使用
する。 3)特許請求の範囲の請求項１に記載した方法で、菌を、
３０−７０℃の温度で及び５．０〜８．０のｐＨ- 値で
培養する。 4)特許請求の範囲の請求項１に記載した方法で、菌を、
４５〜５５℃の温度で及び５．０〜８．０のｐＨ- 値で
培養する。 5)特許請求の範囲の請求項１に記載した方法で、サーモ
マイセス ラヌキノススＤＳＭ５８２６を、４５〜５０
℃の温度で及び６．０〜７．０のｐＨ- 値で培養する。 6)特許請求の範囲の請求項４に記載した方法で、エキソ
- 及びエンドセルラーゼ不含キシラナーゼは、サーモマ
イセス ラヌキノススＤＳＭ５８２６の培養によって得
られる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 ウアルター・シユタイネル オーストリア国、グラーツ、イム・ホツフ エ ルト、１ (72)発明者 ジヨゼフ・ゴメス バングラデシユ国、ダッカ、イースト・ラ ジ ヤバザー、113／２
Claims (10)
- 【請求項１】 菌をコーンコブ(Corn cobs) を含有する
栄養培地中で培養することを特徴とするキシラナーゼの
製造方法。 - 【請求項２】 菌としてサーモマイセス ラヌキノスス
(Thermomyces lanuqinosus) を使用する請求項１記載の
方法。 - 【請求項３】 菌としてサーモマイセス ラヌキノスス
ＤＳＭ５８２６を使用する請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 菌を、３０−７０℃の温度で及び５．０
〜８．０のｐＨ- 値で培養する請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 菌を、４５〜５５℃の温度で及び５．０
〜８．０のｐＨ- 値で培養する請求項１記載の方法。 - 【請求項６】 サーモマイセス ラヌキノススＤＳＭ５
８２６を、４５〜５０℃の温度で及び６．０〜７．０の
ｐＨ- 値で培養する請求項１記載の方法。 - 【請求項７】 サーモマイセス ラヌキノスス(Thermom
yces lanquinosus)ＤＳＭ５８２６。 - 【請求項８】 栄養培地中でサーモマイセス ラヌキノ
ススＤＳＭ５８２６を培養することによって得られたエ
キソ- 及びエンドセルラーゼ- 不含キシラナーゼ。 - 【請求項９】 キシラン- 及びリグノセルロース- 含有
する植物性粗材料及びこの様な粗材料から成る繊維を、
酵素処理するのに、請求項１に従って製造されたエキソ
- 及びエンドセルラーゼ- 不含キシラナーゼを使用する
方法。 - 【請求項１０】 サーモマイセス ラヌキノススＤＳＭ
５８２６の培養によって得られたエキソ- 及びエンドセ
ルラーゼ不含キシラナーゼから成る請求項９記載の使用
方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0103090A AT394730B (de) | 1990-05-08 | 1990-05-08 | Verfahren zur herstellung exo- und endocellulasefreier xylanase |
| AT1030/90 | 1990-05-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0787970A true JPH0787970A (ja) | 1995-04-04 |
Family
ID=3505151
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3100978A Pending JPH0787970A (ja) | 1990-05-08 | 1991-05-02 | キシラナーゼの製造方法 |
Country Status (13)
| Country | Link |
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