JPH0787970A - キシラナーゼの製造方法 - Google Patents
キシラナーゼの製造方法Info
- Publication number
- JPH0787970A JPH0787970A JP3100978A JP10097891A JPH0787970A JP H0787970 A JPH0787970 A JP H0787970A JP 3100978 A JP3100978 A JP 3100978A JP 10097891 A JP10097891 A JP 10097891A JP H0787970 A JPH0787970 A JP H0787970A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- xylanase
- thermomyces
- lanukinosus
- exo
- activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01032—Xylan endo-1,3-beta-xylosidase (3.2.1.32), i.e. endo-1-3-beta-xylanase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
- C12N9/248—Xylanases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Paper (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Emergency Protection Circuit Devices (AREA)
- Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Chemical Or Physical Treatment Of Fibers (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 キシラナーゼの製造方法
【構成】 コーンコブを含有する栄養培地中で菌、特に
サーモマイセス ラヌキノススを培養して、エンド- 及
びエキソセルラーゼ不含キシラナーゼを製造する。
サーモマイセス ラヌキノススを培養して、エンド- 及
びエキソセルラーゼ不含キシラナーゼを製造する。
Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、キシラナーゼの製造方
法、その使用方法、微生物サーモマイセスラヌキノスス
DSM5826及びこの菌によって製造されたエキソ-
及びエンドセルラーゼ- 不含キシラナーゼに関する。
法、その使用方法、微生物サーモマイセスラヌキノスス
DSM5826及びこの菌によって製造されたエキソ-
及びエンドセルラーゼ- 不含キシラナーゼに関する。
【0002】
【従来の技術】一年生植物又は落葉樹の場合主にキシラ
ンから成るヘミセルロースの分解は、セルロースの製造
に必要な工程である。この分解を、化学手段によって、
たとえば非アルカリ抽出によって、又は基質- 特異性酵
素、特にキシラナーゼを用いる処理による酵素手段によ
って実施することができる。キシラナーゼを用いる非漂
白されたパルプの酵素処理は、ヘミセルロース架橋の破
損及びキシランの分解をもたらす。しかしこの目的のた
めに、セルラーゼ不純物を含有しない純粋なキシラナー
ゼしか使用できない。というのは他のセルロースも分解
され、破壊サレルからであり、これは極めて望まれな
い。
ンから成るヘミセルロースの分解は、セルロースの製造
に必要な工程である。この分解を、化学手段によって、
たとえば非アルカリ抽出によって、又は基質- 特異性酵
素、特にキシラナーゼを用いる処理による酵素手段によ
って実施することができる。キシラナーゼを用いる非漂
白されたパルプの酵素処理は、ヘミセルロース架橋の破
損及びキシランの分解をもたらす。しかしこの目的のた
めに、セルラーゼ不純物を含有しない純粋なキシラナー
ゼしか使用できない。というのは他のセルロースも分解
され、破壊サレルからであり、これは極めて望まれな
い。
【0003】分解し、C- 源として栄養培地中に含まれ
るキシラン含有粗材料を利用するキシラナーゼを、特に
多数の中温性及び好熱性微生物によって製造する。しか
し栄養培地中に含まれる他の粗材料に基づき、この基質
に特異的なセルラーゼも製造する。エキソ- 及びエンド
セルロース不含キシラナーゼを得るために、キシラナー
ゼを、製造されたセルラーゼから精巧な方法で分離し、
精製しなければならない。発酵の間セルラーゼの製造を
減少させるために、微生物を精製されたキシラン上で培
養することもできる。キシランの選択的分解に関して精
製されたキシラン上で培養されたトリコデルマ ハルツ
アヌム(Trichoderma harzianum) から得られたキシラナ
ーゼの使用は、D.J.セニオー(Senior)等、バイオテ
クノロジーレタース、第10巻、No.12,第907
−912頁(1988年)中に記載されている。しかし
ながら高純度キシラン上の培養は、粗材料の高い価格の
ために不適当である。
るキシラン含有粗材料を利用するキシラナーゼを、特に
多数の中温性及び好熱性微生物によって製造する。しか
し栄養培地中に含まれる他の粗材料に基づき、この基質
に特異的なセルラーゼも製造する。エキソ- 及びエンド
セルロース不含キシラナーゼを得るために、キシラナー
ゼを、製造されたセルラーゼから精巧な方法で分離し、
精製しなければならない。発酵の間セルラーゼの製造を
減少させるために、微生物を精製されたキシラン上で培
養することもできる。キシランの選択的分解に関して精
製されたキシラン上で培養されたトリコデルマ ハルツ
アヌム(Trichoderma harzianum) から得られたキシラナ
ーゼの使用は、D.J.セニオー(Senior)等、バイオテ
クノロジーレタース、第10巻、No.12,第907
−912頁(1988年)中に記載されている。しかし
ながら高純度キシラン上の培養は、粗材料の高い価格の
ために不適当である。
【0004】
【発明が解決しようとする課題】本発明者は、極めて高
い活性を有するキシラナーゼが、コーンコブを含有する
栄養培地中で培養した時に製造され、しかも得られるキ
シラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエキソ- 及びエ
ンドセルラーゼ活性を示さないことを、予期せずに見い
出した。
い活性を有するキシラナーゼが、コーンコブを含有する
栄養培地中で培養した時に製造され、しかも得られるキ
シラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエキソ- 及びエ
ンドセルラーゼ活性を示さないことを、予期せずに見い
出した。
【0005】
【課題を解決するための手段】したがって本発明は、キ
シラナーゼの製造方法に関するものであり、これは菌を
コーンコブを含有する栄養培地中で培養することを特徴
とする。
シラナーゼの製造方法に関するものであり、これは菌を
コーンコブを含有する栄養培地中で培養することを特徴
とする。
【0006】キシラナーゼを、本発明によればコーンコ
ブを含有する栄養培地中で菌を培養して製造する。この
場合、キシラナーゼに関しては、ほんの僅かしか又は全
くエキソ- 又はエンドセルラーゼ活性を示さないキシラ
ナーゼしか意味しない。ここで使用されうる菌は、本発
明による方法で高いキシラナーゼ活性を生じうる菌であ
る。この様な菌の一例は、サーモマイセス ラヌキノス
スである。モニリアレス(Moniliales)目の菌株を、ジュ
ート繊維をオイルエマルジョンで処理するバングラディ
シュのジュート工場中の多量のジュート廃棄物から単離
する。ジュート廃棄物の積み重ね物中の温度は、65〜
70℃である。この菌株を微生物及び細胞培養物のドイ
ツコレクションにDSM5826で寄託したこの菌株
は、特にコーンコブを含有する栄養培地中で極めて高い
活性を有するキシラナーゼを産生することに適する。サ
ーモマイセス ラヌキノススDSM5826は新規であ
り、同様に本発明はこれに関する。
ブを含有する栄養培地中で菌を培養して製造する。この
場合、キシラナーゼに関しては、ほんの僅かしか又は全
くエキソ- 又はエンドセルラーゼ活性を示さないキシラ
ナーゼしか意味しない。ここで使用されうる菌は、本発
明による方法で高いキシラナーゼ活性を生じうる菌であ
る。この様な菌の一例は、サーモマイセス ラヌキノス
スである。モニリアレス(Moniliales)目の菌株を、ジュ
ート繊維をオイルエマルジョンで処理するバングラディ
シュのジュート工場中の多量のジュート廃棄物から単離
する。ジュート廃棄物の積み重ね物中の温度は、65〜
70℃である。この菌株を微生物及び細胞培養物のドイ
ツコレクションにDSM5826で寄託したこの菌株
は、特にコーンコブを含有する栄養培地中で極めて高い
活性を有するキシラナーゼを産生することに適する。サ
ーモマイセス ラヌキノススDSM5826は新規であ
り、同様に本発明はこれに関する。
【0007】菌を培養する栄養培地は、生長に必要な栄
養素及び痕跡程度の元素の他にコーンコブを含有する。
コーンコブはそのまま使用するか又は粉砕して、有利に
は110〜130℃に加熱して又はたとえば過熱蒸気で
前処理して滅菌する。特に高いキシラナーゼ活性が、コ
ーンコブを使用する前に粗く粉砕した場合に達成する。
結果は、コーンコブを細く切断し、又は微粉砕した場合
まだ驚異的に良好であるが、粗く粉砕されたコーンコブ
の使用は、驚くべき結果を示す。
養素及び痕跡程度の元素の他にコーンコブを含有する。
コーンコブはそのまま使用するか又は粉砕して、有利に
は110〜130℃に加熱して又はたとえば過熱蒸気で
前処理して滅菌する。特に高いキシラナーゼ活性が、コ
ーンコブを使用する前に粗く粉砕した場合に達成する。
結果は、コーンコブを細く切断し、又は微粉砕した場合
まだ驚異的に良好であるが、粗く粉砕されたコーンコブ
の使用は、驚くべき結果を示す。
【0008】適する窒素源は、たとえば肉ペプトン、魚
ペプトン、尿素、硫酸アンモニウム、マルト抽出物、肉
抽出物、大豆ミール酵母抽出物等々、無機塩、たとえば
二硫酸カリウム、リン酸水素カリウム、リン酸水素二ナ
トリウム、硫酸鉄、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム
等々である。キシラナーゼを栄養培地に遊離する速度を
増加するために、界面活性物質を添加するのが有利であ
る。一般に非イオン界面活性物質、たとえばトウィーン
40、トウィーン60又はトウィーン80を、培地の全
量に対して0.05〜0.5重量%の量で使用する。好
ましくは痕跡程度の元素、たとえば著しい金属、たとえ
ばMn2+、Zn2+、Fe2+又はビタミンを培地中に添加
することもできる。培地を、アンモニア又はリン酸で
5.0〜8.0、好ましくは6.0〜7.0のpHに調
整するのが有利である。
ペプトン、尿素、硫酸アンモニウム、マルト抽出物、肉
抽出物、大豆ミール酵母抽出物等々、無機塩、たとえば
二硫酸カリウム、リン酸水素カリウム、リン酸水素二ナ
トリウム、硫酸鉄、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム
等々である。キシラナーゼを栄養培地に遊離する速度を
増加するために、界面活性物質を添加するのが有利であ
る。一般に非イオン界面活性物質、たとえばトウィーン
40、トウィーン60又はトウィーン80を、培地の全
量に対して0.05〜0.5重量%の量で使用する。好
ましくは痕跡程度の元素、たとえば著しい金属、たとえ
ばMn2+、Zn2+、Fe2+又はビタミンを培地中に添加
することもできる。培地を、アンモニア又はリン酸で
5.0〜8.0、好ましくは6.0〜7.0のpHに調
整するのが有利である。
【0009】菌を、栄養培地中で約30〜70℃、好ま
しくは40〜60℃、特に好ましくは45〜55℃の温
度で培養する。発酵の開始時にpHセットを一定に保つ
のは不必要である。しかし好適にはたとえばアンモニア
又はリン酸を計量添加して一定に保つものことができ
る。
しくは40〜60℃、特に好ましくは45〜55℃の温
度で培養する。発酵の開始時にpHセットを一定に保つ
のは不必要である。しかし好適にはたとえばアンモニア
又はリン酸を計量添加して一定に保つものことができ
る。
【0010】発酵の終了後、キシラーゼを常法で発酵工
程から単離することができる。このために菌の菌糸体、
胞子及び残存する不溶性物質を、遠心分離又は濾過によ
って更に精製する。酵素を、更に常法でたとえば硫酸ア
ンモニウムで濾過して又はアセトン、アルコール又はそ
の類似物で溶剤沈殿して精製することができる。この方
法で得られた粗酵素を、好ましくは更にたとえばゲル濾
過、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動等々
によって精製することができる。
程から単離することができる。このために菌の菌糸体、
胞子及び残存する不溶性物質を、遠心分離又は濾過によ
って更に精製する。酵素を、更に常法でたとえば硫酸ア
ンモニウムで濾過して又はアセトン、アルコール又はそ
の類似物で溶剤沈殿して精製することができる。この方
法で得られた粗酵素を、好ましくは更にたとえばゲル濾
過、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動等々
によって精製することができる。
【0011】本発明により製造されたキシラナーゼは、
高いキシラナーゼ活性を有する。極めて高いキシラナー
ゼ活性を、炭素源としてコーンコブを使用することで他
の未処理の粗材料、たとえば大麦スペルト、小麦ストロ
ー、小麦もみがら、粉砕されたブナ木の皮、アルファル
ファミール、レッドクローバー/グラスミール、大豆油
に比して達成することができることが明らかである。更
に生じるキシラナーゼの活性は、粗く粉砕されたコーン
コブを使用した場合に倍に増加する。
高いキシラナーゼ活性を有する。極めて高いキシラナー
ゼ活性を、炭素源としてコーンコブを使用することで他
の未処理の粗材料、たとえば大麦スペルト、小麦ストロ
ー、小麦もみがら、粉砕されたブナ木の皮、アルファル
ファミール、レッドクローバー/グラスミール、大豆油
に比して達成することができることが明らかである。更
に生じるキシラナーゼの活性は、粗く粉砕されたコーン
コブを使用した場合に倍に増加する。
【0012】本発明により製造されたキシラナーゼは、
ほんの僅かしか又は全くエキソ- 及びエンドセルラーゼ
活性を有さない。サーモマイセス ラヌキノススDSM
5826によって産生されたキシラナーゼは、いくつか
の検定でエキソ- 及びエンドセルラーゼ- 不含であるこ
とが証明されている。この様なエキソ- 及びエンドセル
ラーゼ不含キシラナーゼは新規であり、かつ本発明はこ
のことにも関する。更に、サーモマイセス ラヌキノス
スDSM5826は、このキシラナーゼをコーンコブを
含有する栄養培地中だけではなく、コーンコブの代りに
他の固体又は溶解されたキシラン- 含有炭素源、たとえ
ば大麦スペルト、粉砕された小麦ストロー、非漂白セル
ロース又はキシランそれ自体を含有する栄養培地中でも
産生することができる。しかし極めて高いキシラナーゼ
活性がコーンコブを用いて栄養培地中で得られる。
ほんの僅かしか又は全くエキソ- 及びエンドセルラーゼ
活性を有さない。サーモマイセス ラヌキノススDSM
5826によって産生されたキシラナーゼは、いくつか
の検定でエキソ- 及びエンドセルラーゼ- 不含であるこ
とが証明されている。この様なエキソ- 及びエンドセル
ラーゼ不含キシラナーゼは新規であり、かつ本発明はこ
のことにも関する。更に、サーモマイセス ラヌキノス
スDSM5826は、このキシラナーゼをコーンコブを
含有する栄養培地中だけではなく、コーンコブの代りに
他の固体又は溶解されたキシラン- 含有炭素源、たとえ
ば大麦スペルト、粉砕された小麦ストロー、非漂白セル
ロース又はキシランそれ自体を含有する栄養培地中でも
産生することができる。しかし極めて高いキシラナーゼ
活性がコーンコブを用いて栄養培地中で得られる。
【0013】本発明によるエキソ- 及びエンドセルラー
ゼ- 不含キシラナーゼは、エタノールによる沈殿及び凍
結乾燥後に次の性質を有する: a)pH安定性(図1) 酵素を20℃で緩衝液中で種々のpH値で66時間培養
する。すべての試みの活性を、1%ヘミセルロースを用
いてpH4.8で次の様に測定する:クエン酸ナトリウ
ム緩衝液(pH4.8)中の1%基質溶液1ml(オー
トムギスペルトからのキシラン;シグマX- 0627)
を、50℃で2分間培養し、酵素溶液0.5mlの添加
後、50℃で更に15分間培養する。次いでジニトロサ
リチル酸試薬(IUPACのFPU検定法として)3m
l及び2.5N NaOH0.5mlを混合し、混合物
を沸とう水浴中で5分間加熱する、次いで急速に冷水浴
中で冷却し、540nmでの吸光を対照標準としてブラ
ンク(クエン酸塩緩衝液)を用いて測定する。酵素(酵
素0.5ml+クエン酸塩緩衝液1.0ml)の吸光及
び基質溶液(クエン酸緩衝液中の1%基質溶液1ml)
の吸光を、この値から減じる。検定プロットを、クエン
酸塩緩衝液1.0ml及び標準溶液(キシロース/ml
0.5−1.5mgを含有する)5mlを用いて構成
する。 キシラナーゼ活性の検定:XU/ml=還元糖(キシロ
ース/テストとして)×0.888mg本来の活性の9
7−100%が、pH範囲5.0−7.0で得られる。 b)最適pH(図2) 酵素活性を、クエン酸緩衝液、トリスHCl緩衝液(p
H7.0−9.0)及びリン酸塩緩衝液(pH6.5−
8.0)中の1%ヘミセルロース懸濁液を用いて培養
(50℃、15分)して決定する。 最適pH範囲:6.0−7.5 c)熱安定性(図3) 酵素溶液を、0.05モルクエン酸緩衝液中で45−6
0℃の温度で0−72時間培養する。酵素の活性を、1
%ヘミセルロースで50℃で測定する。
ゼ- 不含キシラナーゼは、エタノールによる沈殿及び凍
結乾燥後に次の性質を有する: a)pH安定性(図1) 酵素を20℃で緩衝液中で種々のpH値で66時間培養
する。すべての試みの活性を、1%ヘミセルロースを用
いてpH4.8で次の様に測定する:クエン酸ナトリウ
ム緩衝液(pH4.8)中の1%基質溶液1ml(オー
トムギスペルトからのキシラン;シグマX- 0627)
を、50℃で2分間培養し、酵素溶液0.5mlの添加
後、50℃で更に15分間培養する。次いでジニトロサ
リチル酸試薬(IUPACのFPU検定法として)3m
l及び2.5N NaOH0.5mlを混合し、混合物
を沸とう水浴中で5分間加熱する、次いで急速に冷水浴
中で冷却し、540nmでの吸光を対照標準としてブラ
ンク(クエン酸塩緩衝液)を用いて測定する。酵素(酵
素0.5ml+クエン酸塩緩衝液1.0ml)の吸光及
び基質溶液(クエン酸緩衝液中の1%基質溶液1ml)
の吸光を、この値から減じる。検定プロットを、クエン
酸塩緩衝液1.0ml及び標準溶液(キシロース/ml
0.5−1.5mgを含有する)5mlを用いて構成
する。 キシラナーゼ活性の検定:XU/ml=還元糖(キシロ
ース/テストとして)×0.888mg本来の活性の9
7−100%が、pH範囲5.0−7.0で得られる。 b)最適pH(図2) 酵素活性を、クエン酸緩衝液、トリスHCl緩衝液(p
H7.0−9.0)及びリン酸塩緩衝液(pH6.5−
8.0)中の1%ヘミセルロース懸濁液を用いて培養
(50℃、15分)して決定する。 最適pH範囲:6.0−7.5 c)熱安定性(図3) 酵素溶液を、0.05モルクエン酸緩衝液中で45−6
0℃の温度で0−72時間培養する。酵素の活性を、1
%ヘミセルロースで50℃で測定する。
【0014】45℃の温度で20時間後の測定は、本来
の活性の93%を示し、50℃の温度で65%を示す。 d)最適温度(図4) 酵素活性を、1%ヘミセルロース懸濁液を用いて0.0
5モルクエン酸塩緩衝液中でpH4.8で15分間培養
して、測定する。 最適温度:65℃ e)エキソ- 及びエンドセルラーゼの及び385XU/
mlの活性を有する酵素溶液のβ- グルコシダーゼの含
有量: i)エキソ- 及びエンドセルラーゼ:セルラーゼ活性
は、IUPACのFPU検定法で検出されない。更に透
析管(再生セルロース)を、72時間酵素で水性媒体中
で処理し、この媒体をグルコースの存在下にテストする
が、グルコースは認められなかった。セルロース含有酵
素は、対照的に透析管を2〜3時間以内に溶解する。更
にpH6.5で、セルロース上で酵素の長い培養の間遊
離される還元糖の性質を、決定する。
の活性の93%を示し、50℃の温度で65%を示す。 d)最適温度(図4) 酵素活性を、1%ヘミセルロース懸濁液を用いて0.0
5モルクエン酸塩緩衝液中でpH4.8で15分間培養
して、測定する。 最適温度:65℃ e)エキソ- 及びエンドセルラーゼの及び385XU/
mlの活性を有する酵素溶液のβ- グルコシダーゼの含
有量: i)エキソ- 及びエンドセルラーゼ:セルラーゼ活性
は、IUPACのFPU検定法で検出されない。更に透
析管(再生セルロース)を、72時間酵素で水性媒体中
で処理し、この媒体をグルコースの存在下にテストする
が、グルコースは認められなかった。セルロース含有酵
素は、対照的に透析管を2〜3時間以内に溶解する。更
にpH6.5で、セルロース上で酵素の長い培養の間遊
離される還元糖の性質を、決定する。
【0015】この場合測定を、3,7,19及び163
時間後に行う。このことから、すべての場合キシロー
ス、キシロビオセス及びキシロトリオセスしか遊離せず
しかもグルコースは遊離しないことが明らかである。レ
プリカ技術を使用して、エンドヌクレアーゼ活性に関し
てOBR- ヒドロキシエチルセルロース- 汚染された寒
天を用いてテストすると、活性は認められない。酵素
は、実施されたすべての実験及び検定によって、完全に
セルラーゼ不含であることを示す。
時間後に行う。このことから、すべての場合キシロー
ス、キシロビオセス及びキシロトリオセスしか遊離せず
しかもグルコースは遊離しないことが明らかである。レ
プリカ技術を使用して、エンドヌクレアーゼ活性に関し
てOBR- ヒドロキシエチルセルロース- 汚染された寒
天を用いてテストすると、活性は認められない。酵素
は、実施されたすべての実験及び検定によって、完全に
セルラーゼ不含であることを示す。
【0016】本発明によるキシラナーゼは、0.1単位
/mlの測定限界でカルボキシメチルセルロース活性
(エンド- β- 1,4- セルラーゼ)を示さず、それ故
にこれをビスコースの製造に使用することもできる。
/mlの測定限界でカルボキシメチルセルロース活性
(エンド- β- 1,4- セルラーゼ)を示さず、それ故
にこれをビスコースの製造に使用することもできる。
【0017】ii)β- グルコシダーゼ:0.05モル
クエン酸ナトリウム緩衝液0.6ml(pH4.8)及
び酵素溶液0.3mlを、50℃で2時間予備培養す
る。次いでp- ニトロフエニルβ- D- グルコシド0.
3ml(クエン酸ナトリウム緩衝液4mg/ml)を加
え、混合物を50℃で10分間培養する。反応を、1モ
ルNa2 CO3 溶液2.4mlの添加によって停止し、
405mmの吸光を、対照標準としてブランクで測定す
る。β- グルコシダーゼの活性を、次の様に計算する:
クエン酸ナトリウム緩衝液0.6ml(pH4.8)及
び酵素溶液0.3mlを、50℃で2時間予備培養す
る。次いでp- ニトロフエニルβ- D- グルコシド0.
3ml(クエン酸ナトリウム緩衝液4mg/ml)を加
え、混合物を50℃で10分間培養する。反応を、1モ
ルNa2 CO3 溶液2.4mlの添加によって停止し、
405mmの吸光を、対照標準としてブランクで測定す
る。β- グルコシダーゼの活性を、次の様に計算する:
【0018】
【外1】
【0019】E・・・・・吸光 t・・・・・反応時間(分) 本発明によるキシラナーゼは、0.2−0.9IU/m
lのβ- グルコシダーゼ活性を有する。
lのβ- グルコシダーゼ活性を有する。
【0020】セロビオースを切断してグルコースとなす
β- グルコシダーゼの含有量は、セルロースの製造で本
発明によるキシラナーゼの挙動に影響しない。というの
はエキソ- 及びエンドセルラーゼの不在は、β- グルコ
シダーゼによって攻撃されうるセルロース分解生成物を
全く形成しないことを意味する。 f)更にβ- キシロシダーゼ、アラビノシダーゼ、アセ
チルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ及び
マンナナーゼ活性は、夫々の場合<100単位/lであ
ることが分る。 g)酵素中の可溶性たん白質の含有量は、800mg/
lであり、主なたん白質の分子量は24〜25KDaで
あり、主なたん白質の等電点は4.1である。 h)精製された酵素は、酵素的に加水分解して11ペプ
チドとなる。夫々8,16,5及び12個のアミノ酸を
有するペプチド4個を配列する。このことから、調べら
れるキシラナーゼをN末端で遮断し、これによってN-
末端から配列を開始することは不可能であり、一方アナ
ンド(Anand) 等、Arch. Biochem. Biophys. 276,第
546−553頁(1990)に従ってフミコラ ラヌ
キノザ(Humicola lanuginosa)(=サーモマイセス ラヌ
キノスス)から単離されたキシラナーゼは、N- 末端ア
ミノ酸としてアルギニンを含有することが明らかであ
る。
β- グルコシダーゼの含有量は、セルロースの製造で本
発明によるキシラナーゼの挙動に影響しない。というの
はエキソ- 及びエンドセルラーゼの不在は、β- グルコ
シダーゼによって攻撃されうるセルロース分解生成物を
全く形成しないことを意味する。 f)更にβ- キシロシダーゼ、アラビノシダーゼ、アセ
チルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ及び
マンナナーゼ活性は、夫々の場合<100単位/lであ
ることが分る。 g)酵素中の可溶性たん白質の含有量は、800mg/
lであり、主なたん白質の分子量は24〜25KDaで
あり、主なたん白質の等電点は4.1である。 h)精製された酵素は、酵素的に加水分解して11ペプ
チドとなる。夫々8,16,5及び12個のアミノ酸を
有するペプチド4個を配列する。このことから、調べら
れるキシラナーゼをN末端で遮断し、これによってN-
末端から配列を開始することは不可能であり、一方アナ
ンド(Anand) 等、Arch. Biochem. Biophys. 276,第
546−553頁(1990)に従ってフミコラ ラヌ
キノザ(Humicola lanuginosa)(=サーモマイセス ラヌ
キノスス)から単離されたキシラナーゼは、N- 末端ア
ミノ酸としてアルギニンを含有することが明らかであ
る。
【0021】本発明により製造されたキシラナーゼを、
キシラン- 及びリグノセルロース-含有植物性粗材料及
びこの様な粗材料から成る繊維の酵素処理に使用し、た
とえばビスコースの製造にセルロースを漂白、脱イン
ク、精製に又は他の前処理、たとえば消化前にキシラン
の除去に使用するのが有利である。
キシラン- 及びリグノセルロース-含有植物性粗材料及
びこの様な粗材料から成る繊維の酵素処理に使用し、た
とえばビスコースの製造にセルロースを漂白、脱イン
ク、精製に又は他の前処理、たとえば消化前にキシラン
の除去に使用するのが有利である。
【0022】キシラン- 及びリグノセルロース- 含有植
物性粗材料は、落葉及び針葉樹、一年生植物、たとえば
アマ、わら、バガス、ケナフ、アシ、エレファントグラ
ス等々から成る粗材料を、しかもまた植物性材料、たと
えば漂白された、半漂白された又は未漂白パルプ又は廃
棄紙から成る繊維を意味する。
物性粗材料は、落葉及び針葉樹、一年生植物、たとえば
アマ、わら、バガス、ケナフ、アシ、エレファントグラ
ス等々から成る粗材料を、しかもまた植物性材料、たと
えば漂白された、半漂白された又は未漂白パルプ又は廃
棄紙から成る繊維を意味する。
【0023】本発明により製造されたキシラナーゼを、
使用するのに精製する必要はない。それは固体栄養培地
を除くことで十分である。固体栄養材料の除去後、発酵
培養液を、そのまま直接植物性粗材料から成る繊維の処
理に使用することができる。
使用するのに精製する必要はない。それは固体栄養培地
を除くことで十分である。固体栄養材料の除去後、発酵
培養液を、そのまま直接植物性粗材料から成る繊維の処
理に使用することができる。
【0024】セルロース工業中で使用する場合、未漂
白、半漂白及び漂白パルプを本発明により製造されたキ
シラナーゼで処理することができる。パルプの処理は、
ヘミセルロース- リグニン架橋を分解することになる。
したがってより少ない漂白は、次の漂白工程に使用され
る。半漂白されたパルプの処理で、予備の漂白後に残存
するキシランを分解し、これが洗浄剤及びペーラーパル
プをもたらす。酵素処理の効果を、カパ(Kappa) 数
(K)によって測定する。この数は、酸化する物質、す
なわち、たとえばリグニンの含量を示す。比較的高いα
- セルロース含量は、キシラナーゼ処理のために漂白パ
ルプに達する。
白、半漂白及び漂白パルプを本発明により製造されたキ
シラナーゼで処理することができる。パルプの処理は、
ヘミセルロース- リグニン架橋を分解することになる。
したがってより少ない漂白は、次の漂白工程に使用され
る。半漂白されたパルプの処理で、予備の漂白後に残存
するキシランを分解し、これが洗浄剤及びペーラーパル
プをもたらす。酵素処理の効果を、カパ(Kappa) 数
(K)によって測定する。この数は、酸化する物質、す
なわち、たとえばリグニンの含量を示す。比較的高いα
- セルロース含量は、キシラナーゼ処理のために漂白パ
ルプに達する。
【0025】
〔例1〕粉砕されかつ乾燥したコーンコブ9g、肉ペス
トン3.3g、(NH4)2 SO 4 0.6g、尿素0.4
5g、MgSO4 .7H2 O 0.09g、CaC
l2.2H2 O 0.09g、KH2 PO4 4.5g、
トウィーン80 0.3ml、S1 (1.6g/l M
nSO4 .H2 O;3.45g/l ZnSO4 .7H
2 O;2.0g/l CaCl2 .6H2 O)0.3m
l及びS2 (5g/lFeSO4 .7H2 O)0.3m
lから成る培地300mlを、pH6に調整し、振とう
フラスコ中で128℃で60分間高圧滅菌する。
トン3.3g、(NH4)2 SO 4 0.6g、尿素0.4
5g、MgSO4 .7H2 O 0.09g、CaC
l2.2H2 O 0.09g、KH2 PO4 4.5g、
トウィーン80 0.3ml、S1 (1.6g/l M
nSO4 .H2 O;3.45g/l ZnSO4 .7H
2 O;2.0g/l CaCl2 .6H2 O)0.3m
l及びS2 (5g/lFeSO4 .7H2 O)0.3m
lから成る培地300mlを、pH6に調整し、振とう
フラスコ中で128℃で60分間高圧滅菌する。
【0026】サーモマイセス ラヌキノススDSM58
26予備培養物を、たの培地中に植菌し、4,5日間振
とうしながら(140rpm)50℃で培養する。
26予備培養物を、たの培地中に植菌し、4,5日間振
とうしながら(140rpm)50℃で培養する。
【0027】4,5日後、混合物を濾過し、キシナラー
ゼ(XU/ml)、β- グルコシダーゼ(Iu/m
l)、カルボキシメチルセルラーゼ(CMC- アーゼ/
ml)及びエキソグルカナーゼ(FPU/ml)の活性
を測定する。 XU/ml 389.7 4℃で3日貯蔵後 395.0 IU/ml 0.29 FPU/ml 検出不可能 CMC- アーゼ/ml 検出不可能 〔例2〕コーンコブを、 a)切断する(コーンコブ断片のサイズ10mm以
上)。 b)粗く粉砕する(コーンコブ断片のサイズ3〜10m
m)。 c)微粉砕する(コーンコブ断片のサイズ3mm以
下)。
ゼ(XU/ml)、β- グルコシダーゼ(Iu/m
l)、カルボキシメチルセルラーゼ(CMC- アーゼ/
ml)及びエキソグルカナーゼ(FPU/ml)の活性
を測定する。 XU/ml 389.7 4℃で3日貯蔵後 395.0 IU/ml 0.29 FPU/ml 検出不可能 CMC- アーゼ/ml 検出不可能 〔例2〕コーンコブを、 a)切断する(コーンコブ断片のサイズ10mm以
上)。 b)粗く粉砕する(コーンコブ断片のサイズ3〜10m
m)。 c)微粉砕する(コーンコブ断片のサイズ3mm以
下)。
【0028】夫々の場合、酵母抽出物28.6g、(N
H4)2 SO4 4.23g、KH2 PO4 10g、FeS
O4 .7H2 O 0.3g、MgSO4 .7H2 O
0.3g及びCaCl2 .2H2 O 0.3g及びa)
切断された、b)粗く粉砕された及びc)微粉砕され
た、乾燥コーンコブ25gを製造し、pH6.5に調整
し、振とうフラスコ中で121℃25分間高圧滅菌す
る。
H4)2 SO4 4.23g、KH2 PO4 10g、FeS
O4 .7H2 O 0.3g、MgSO4 .7H2 O
0.3g及びCaCl2 .2H2 O 0.3g及びa)
切断された、b)粗く粉砕された及びc)微粉砕され
た、乾燥コーンコブ25gを製造し、pH6.5に調整
し、振とうフラスコ中で121℃25分間高圧滅菌す
る。
【0029】サーモマイセス ラヌキノススDSM58
26予備培養物を、この培地に植菌し、振とうしながら
50℃で培養する。5日後、濾過を行い、種々の培地中
のキシラナーゼ活性(XU/ml)を測定する: 4℃で1日貯蔵後 コーンコブ XU/ml XU/ml 切断された 764 881 粗く粉砕された 1601 1526 微粉砕された 388 423 〔例3〕次のキシラナーゼ活性を、例2中に記載した培
地中でかつ例2に記載した方法で測定するが、他のC-
源を使用する: C源 キシラナーゼ活性(XU/ml) コーンコブ(50%微粉砕、 477 50%粗く粉砕) 小麦ストロー 232 小麦もみがら 186 大麦スペルト 61 ウルバ リフィデ(アルガ)Ulva rifide(alga) 28 アルファルファミール 20 レッドクローバー/グラスミール 14 ビーチバーク、粉砕 8 可溶性でんぷん 4 大豆油 4 〔例4〕サーモマイセスラヌキノススDSM5826
を、例1に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りに粉砕された小麦ストロー9gを使用する。
26予備培養物を、この培地に植菌し、振とうしながら
50℃で培養する。5日後、濾過を行い、種々の培地中
のキシラナーゼ活性(XU/ml)を測定する: 4℃で1日貯蔵後 コーンコブ XU/ml XU/ml 切断された 764 881 粗く粉砕された 1601 1526 微粉砕された 388 423 〔例3〕次のキシラナーゼ活性を、例2中に記載した培
地中でかつ例2に記載した方法で測定するが、他のC-
源を使用する: C源 キシラナーゼ活性(XU/ml) コーンコブ(50%微粉砕、 477 50%粗く粉砕) 小麦ストロー 232 小麦もみがら 186 大麦スペルト 61 ウルバ リフィデ(アルガ)Ulva rifide(alga) 28 アルファルファミール 20 レッドクローバー/グラスミール 14 ビーチバーク、粉砕 8 可溶性でんぷん 4 大豆油 4 〔例4〕サーモマイセスラヌキノススDSM5826
を、例1に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りに粉砕された小麦ストロー9gを使用する。
【0030】 XU/ml 104.3 4℃で3日間貯蔵後 123.9 IU/ml 0.51 FPU/ml 検出不可能 CMC- アーゼ/ml 検出不可能 〔例5〕サーモマイセスラヌキノススDSM5826
を、例1に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りに大麦スペクトルを使用する。
を、例1に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りに大麦スペクトルを使用する。
【0031】 XU/ml 222.9 4℃で3日間貯蔵後 196.2 IU/ml 0.60 FPU/ml 検出不可能 CMC- アーゼ/ml 検出不可能 〔例6〕サーモマイセス ラヌキノススDSM5826
を、例1に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りにヘミセルロース(キシラン)9gを使用す
る。
を、例1に於ける様に培養するが、粉砕されたコーンコ
ブの代りにヘミセルロース(キシラン)9gを使用す
る。
【0032】 XU/ml 151.55 IU/ml 検出不可能 FPU/ml 検出不可能 CMC- アーゼ/ml 検出不可能 〔例7〕 硫酸塩パルプの処理 ルツオームペロック(ハードウッド)からの乾燥した硫
酸塩パルプを、加熱し、45℃で1.5時間水と共に振
とうする。次いで例1と同様に製造されたキシラナーゼ
を加え、230rpmで振とうする。 a)発酵培養液 30g b)発酵培養液 90g パルプ 220g パルプ 220g (K=19.97) (K=19.97) 水 350g 水 290g 100XU酵素を、繊維 300XU酵素を、繊維 のグラムあたりで添加す のグラムあたりで添加す る。 る。
酸塩パルプを、加熱し、45℃で1.5時間水と共に振
とうする。次いで例1と同様に製造されたキシラナーゼ
を加え、230rpmで振とうする。 a)発酵培養液 30g b)発酵培養液 90g パルプ 220g パルプ 220g (K=19.97) (K=19.97) 水 350g 水 290g 100XU酵素を、繊維 300XU酵素を、繊維 のグラムあたりで添加す のグラムあたりで添加す る。 る。
【0033】濾過によってパルプを除去後、カパ数を測
定する。
定する。
【0034】カパ 数 a)17.45
b)13.39
b)13.39
【0035】
【発明の効果】本発明によれば、サーモマイセス ラヌ
キノススを、コーンコブを含有する栄養培地中で培養し
て得られるキシラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエ
キソ-及びエンドセルラーゼ活性を示さない。
キノススを、コーンコブを含有する栄養培地中で培養し
て得られるキシラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエ
キソ-及びエンドセルラーゼ活性を示さない。
【図1】キシラナーゼのpH安定性を示す。
【図2】キシラナーゼの最適pHを示す。
【図3】キシラナーゼの熱安定性を示す。
【図4】キシラナーゼの最適温度を示す。
【手続補正書】
【提出日】平成4年7月10日
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】0020
【補正方法】変更
【補正内容】
【0020】セロビオースを切断してグルコースとなす
β- グルコシダーゼの含有量は、セルロースの製造で本
発明によるキシラナーゼの挙動に影響しない。というの
はエキソ- 及びエンドセルラーゼの不在は、β- グルコ
シダーゼによって攻撃されうるセルロース分解生成物を
全く形成しないことを意味する。 f)更にβ- キシロシダーゼ、アラビノシダーゼ、アセ
チルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ及び
マンナナーゼ活性は、夫々の場合<100単位/lであ
ることが分る。 g)酵素中の可溶性たん白質の含有量は、800mg/
lであり、主なたん白質の分子量は24〜25KDaで
あり、主なたん白質の等電点は4.1である。 h)精製された酵素は、酵素的に加水分解して11ペプ
チドとなる。夫々8,16,5及び12個のアミノ酸を
有するペプチド4個を配列する。このことから、調べら
れるキシラナーゼをN末端で遮断し、これによってN-
末端から配列を開始することは不可能であり、一方アナ
ンド(Anand) 等、Arch. Biochem. Biophys. 276,第
546−553頁(1990)に従ってフミコラ ラヌ
キノザ(Humicola lanuginosus)(=サーモマイセス ラ
ヌキノスス)から単離されたキシラナーゼは、N- 末端
アミノ酸としてアルギニンを含有することが明らかであ
る。
β- グルコシダーゼの含有量は、セルロースの製造で本
発明によるキシラナーゼの挙動に影響しない。というの
はエキソ- 及びエンドセルラーゼの不在は、β- グルコ
シダーゼによって攻撃されうるセルロース分解生成物を
全く形成しないことを意味する。 f)更にβ- キシロシダーゼ、アラビノシダーゼ、アセ
チルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ及び
マンナナーゼ活性は、夫々の場合<100単位/lであ
ることが分る。 g)酵素中の可溶性たん白質の含有量は、800mg/
lであり、主なたん白質の分子量は24〜25KDaで
あり、主なたん白質の等電点は4.1である。 h)精製された酵素は、酵素的に加水分解して11ペプ
チドとなる。夫々8,16,5及び12個のアミノ酸を
有するペプチド4個を配列する。このことから、調べら
れるキシラナーゼをN末端で遮断し、これによってN-
末端から配列を開始することは不可能であり、一方アナ
ンド(Anand) 等、Arch. Biochem. Biophys. 276,第
546−553頁(1990)に従ってフミコラ ラヌ
キノザ(Humicola lanuginosus)(=サーモマイセス ラ
ヌキノスス)から単離されたキシラナーゼは、N- 末端
アミノ酸としてアルギニンを含有することが明らかであ
る。
【手続補正3】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】0035
【補正方法】変更
【補正内容】
【0035】
【発明の効果】本発明によれば、サーモマイセス ラヌ
キノススを、コーンコブを含有する栄養培地中で培養し
て得られるキシラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエ
キソ-及びエンドセルラーゼ活性を示さない。以上、本
発明について詳述したが、以下に本発明の実施の態様に
ついて記載する。 1)特許請求の範囲の請求項1に記載した方法で、菌とし
てサーモマイセス ラヌキノスス(Thermomyces lanuqin
osus) を使用する。 2)特許請求の範囲の請求項1に記載した方法で、菌とし
てサーモマイセス ラヌキノススDSM5826を使用
する。 3)特許請求の範囲の請求項1に記載した方法で、菌を、
30−70℃の温度で及び5.0〜8.0のpH- 値で
培養する。 4)特許請求の範囲の請求項1に記載した方法で、菌を、
45〜55℃の温度で及び5.0〜8.0のpH- 値で
培養する。 5)特許請求の範囲の請求項1に記載した方法で、サーモ
マイセス ラヌキノススDSM5826を、45〜50
℃の温度で及び6.0〜7.0のpH- 値で培養する。 6)特許請求の範囲の請求項4に記載した方法で、エキソ
- 及びエンドセルラーゼ不含キシラナーゼは、サーモマ
イセス ラヌキノススDSM5826の培養によって得
られる。
キノススを、コーンコブを含有する栄養培地中で培養し
て得られるキシラナーゼは、ほんの僅かしか又は全くエ
キソ-及びエンドセルラーゼ活性を示さない。以上、本
発明について詳述したが、以下に本発明の実施の態様に
ついて記載する。 1)特許請求の範囲の請求項1に記載した方法で、菌とし
てサーモマイセス ラヌキノスス(Thermomyces lanuqin
osus) を使用する。 2)特許請求の範囲の請求項1に記載した方法で、菌とし
てサーモマイセス ラヌキノススDSM5826を使用
する。 3)特許請求の範囲の請求項1に記載した方法で、菌を、
30−70℃の温度で及び5.0〜8.0のpH- 値で
培養する。 4)特許請求の範囲の請求項1に記載した方法で、菌を、
45〜55℃の温度で及び5.0〜8.0のpH- 値で
培養する。 5)特許請求の範囲の請求項1に記載した方法で、サーモ
マイセス ラヌキノススDSM5826を、45〜50
℃の温度で及び6.0〜7.0のpH- 値で培養する。 6)特許請求の範囲の請求項4に記載した方法で、エキソ
- 及びエンドセルラーゼ不含キシラナーゼは、サーモマ
イセス ラヌキノススDSM5826の培養によって得
られる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 C12R 1:645) (72)発明者 ウアルター・シユタイネル オーストリア国、グラーツ、イム・ホツフ エ ルト、1 (72)発明者 ジヨゼフ・ゴメス バングラデシユ国、ダッカ、イースト・ラ ジ ヤバザー、113/2
Claims (10)
- 【請求項1】 菌をコーンコブ(Corn cobs) を含有する
栄養培地中で培養することを特徴とするキシラナーゼの
製造方法。 - 【請求項2】 菌としてサーモマイセス ラヌキノスス
(Thermomyces lanuqinosus) を使用する請求項1記載の
方法。 - 【請求項3】 菌としてサーモマイセス ラヌキノスス
DSM5826を使用する請求項1記載の方法。 - 【請求項4】 菌を、30−70℃の温度で及び5.0
〜8.0のpH- 値で培養する請求項1記載の方法。 - 【請求項5】 菌を、45〜55℃の温度で及び5.0
〜8.0のpH- 値で培養する請求項1記載の方法。 - 【請求項6】 サーモマイセス ラヌキノススDSM5
826を、45〜50℃の温度で及び6.0〜7.0の
pH- 値で培養する請求項1記載の方法。 - 【請求項7】 サーモマイセス ラヌキノスス(Thermom
yces lanquinosus)DSM5826。 - 【請求項8】 栄養培地中でサーモマイセス ラヌキノ
ススDSM5826を培養することによって得られたエ
キソ- 及びエンドセルラーゼ- 不含キシラナーゼ。 - 【請求項9】 キシラン- 及びリグノセルロース- 含有
する植物性粗材料及びこの様な粗材料から成る繊維を、
酵素処理するのに、請求項1に従って製造されたエキソ
- 及びエンドセルラーゼ- 不含キシラナーゼを使用する
方法。 - 【請求項10】 サーモマイセス ラヌキノススDSM
5826の培養によって得られたエキソ- 及びエンドセ
ルラーゼ不含キシラナーゼから成る請求項9記載の使用
方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AT0103090A AT394730B (de) | 1990-05-08 | 1990-05-08 | Verfahren zur herstellung exo- und endocellulasefreier xylanase |
AT1030/90 | 1990-05-08 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0787970A true JPH0787970A (ja) | 1995-04-04 |
Family
ID=3505151
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP3100978A Pending JPH0787970A (ja) | 1990-05-08 | 1991-05-02 | キシラナーゼの製造方法 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5183753A (ja) |
EP (1) | EP0456033B1 (ja) |
JP (1) | JPH0787970A (ja) |
AT (2) | AT394730B (ja) |
CA (1) | CA2041304A1 (ja) |
CS (1) | CS133291A2 (ja) |
DE (1) | DE59100085D1 (ja) |
DK (1) | DK0456033T3 (ja) |
ES (1) | ES2054394T3 (ja) |
FI (1) | FI911812A (ja) |
GR (1) | GR3007689T3 (ja) |
PT (1) | PT97565B (ja) |
YU (1) | YU72891A (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5472864A (en) * | 1984-04-19 | 1995-12-05 | Genencor International, Inc. | Method of preparing solution enriched in EG III using low molecular weight alcohol, organic salt and inorganic salt |
US5320960A (en) * | 1992-04-03 | 1994-06-14 | Genencor International, Inc. | Method of preparing solution enriched in xylanase using low molecular weight alcohol, organic salt and inorganic salt |
EP0805856B2 (en) * | 1995-01-26 | 2009-04-01 | Novozymes A/S | Animal feed additives comprising xylanase |
US6057438A (en) * | 1996-10-11 | 2000-05-02 | Eastman Chemical Company | Process for the co-production of dissolving-grade pulp and xylan |
US5981233A (en) * | 1997-08-21 | 1999-11-09 | Roche Vitamins Inc. | Process for manufacturing a xylanase enzyme complex from pre-treated thin stillage of rye |
WO2006031554A2 (en) | 2004-09-10 | 2006-03-23 | Novozymes North America, Inc. | Methods for preventing, removing, reducing, or disrupting biofilm |
WO2007025328A1 (en) * | 2005-08-30 | 2007-03-08 | Protech Research Pty Ltd | EXTRACTING AND PURIFYING β 1,4-XYLANASE |
DE102005056669A1 (de) | 2005-11-28 | 2007-05-31 | Basf Ag | Fermentative Herstellung organischer Verbindungen unter Einsatz Dextrin-haltiger Medien |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4568644A (en) * | 1981-12-10 | 1986-02-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Fermentation method producing ethanol |
FI93859C (fi) * | 1985-12-03 | 1995-06-12 | Gist Brocades Nv | Menetelmä glukoosisiirappien ja puhdistettujen tärkkelysten tuottamiseksi vehnän ja muiden viljakasvien pentosaaneja sisältävistä tärkkelyksistä |
CA1280704C (en) * | 1985-12-03 | 1991-02-26 | Paul Ducroo | Production of beer |
US4725544A (en) * | 1986-04-25 | 1988-02-16 | Tan Larry U | Method for purifying xylanase |
AU2542888A (en) * | 1988-07-27 | 1990-02-19 | Iowa State University Research Foundation Inc. | Low molecular weight xylanase glycoprotein |
ATE522915T1 (de) * | 2002-04-12 | 2011-09-15 | Albert Maurer | Verfahren und vorrichtung zum entmagnetisieren von gegenständen |
-
1990
- 1990-05-08 AT AT0103090A patent/AT394730B/de not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-04-15 FI FI911812A patent/FI911812A/fi not_active Application Discontinuation
- 1991-04-22 YU YU72891A patent/YU72891A/sh unknown
- 1991-04-23 ES ES91106502T patent/ES2054394T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-04-23 EP EP91106502A patent/EP0456033B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-04-23 DE DE9191106502T patent/DE59100085D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-04-23 AT AT91106502T patent/ATE88497T1/de active
- 1991-04-23 DK DK91106502.7T patent/DK0456033T3/da not_active Application Discontinuation
- 1991-04-26 CA CA002041304A patent/CA2041304A1/en not_active Abandoned
- 1991-05-02 JP JP3100978A patent/JPH0787970A/ja active Pending
- 1991-05-03 PT PT97565A patent/PT97565B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-05-07 CS CS911332A patent/CS133291A2/cs unknown
- 1991-05-08 US US07/696,943 patent/US5183753A/en not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-04-22 GR GR930400340T patent/GR3007689T3/el unknown
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
MIKROBIOL.ZH.KIEV=1979 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI911812A0 (fi) | 1991-04-15 |
PT97565A (pt) | 1992-01-31 |
AT394730B (de) | 1992-06-10 |
US5183753A (en) | 1993-02-02 |
FI911812A (fi) | 1991-11-09 |
DE59100085D1 (de) | 1993-06-03 |
EP0456033A3 (en) | 1991-12-18 |
YU72891A (sh) | 1994-04-05 |
ES2054394T3 (es) | 1994-08-01 |
EP0456033A2 (de) | 1991-11-13 |
GR3007689T3 (ja) | 1993-08-31 |
CA2041304A1 (en) | 1991-11-09 |
PT97565B (pt) | 1998-08-31 |
ATA103090A (de) | 1991-11-15 |
DK0456033T3 (da) | 1993-05-17 |
EP0456033B1 (de) | 1993-04-21 |
CS133291A2 (en) | 1991-12-17 |
ATE88497T1 (de) | 1993-05-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Herr | Secretion of cellulase and β‐glucosidase by Trichoderma viride ITCC‐1433 in submerged culture on different substrates | |
Ramachandra et al. | Extracellular enzyme activities during lignocellulose degradation by Streptomyces spp.: a comparative study of wild-type and genetically manipulated strains | |
Smith et al. | Xylanase production by Aspergillus awamori. Development of a medium and optimization of the fermentation parameters for the production of extracellular xylanase and β‐xylosidase while maintaining low protease production | |
Kulkarni et al. | Molecular and biotechnological aspects of xylanases | |
CN102791853B (zh) | 新型糖基水解酶及其用途 | |
Gomes et al. | Production of a high level of cellulase-free xylanase by the thermophilic fungus Thermomyces lanuginosus in laboratory and pilot scales using lignocellulosic materials | |
US5407827A (en) | Pulp bleaching with thermo stable xylanase of thermomonosporafusca | |
Rezende et al. | Xylanase production by Trichoderma harzianum rifai by solid state fermentation on sugarcane bagasse | |
Liu et al. | Production, partial purification and characterization of xylanase from Trichosporon cutaneum SL409 | |
Li et al. | Purification and characterization of a thermostable cellulase-free xylanase from the newly isolated Paecilomyces themophila | |
Grabski et al. | Production, purification, and characterization of β-(1-4)-endoxylanase of Streptomyces roseiscleroticus | |
EP0720649B1 (en) | Novel xylanase, process for producing the same, method for the treatment of pulp, and production of xylo-oligosaccharides | |
CN102482665B (zh) | 具有β-葡糖苷酶活性的新蛋白质及其用途 | |
US4742005A (en) | Method for production of cellulolytic enzymes and method for saccharification of cellulosic materials therewith | |
Gomes et al. | Production of highly thermostable xylanase by a wild strain of thermophilic fungus Thermoascus aurantiacus and partial characterization of the enzyme | |
Pérez-Avalos et al. | Induction of xylanase and β-xylosidase in Cellulomonas flavigena growing on different carbon sources | |
RU2054480C1 (ru) | Штаммы бактерий bacillus stearothermophilus - продуценты ксиланазы, способ получения ксиланазы и ксиланаза, выделенная из штаммов бактерий bacillus stearothermophilus, обладающая активностью делигнификации | |
Lachke | 1, 4-β-d-Xylan xylohydrolase of Sclerotium rolfsii | |
Kaur et al. | Production of novel alkali-thermo-tolerant cellulase-poor xylanases from Coprinopsis cinerea HK-1 NFCCI-2032 | |
JPH0787970A (ja) | キシラナーゼの製造方法 | |
CN104919044A (zh) | 高效纤维素分解酶制剂及其生产方法 | |
Fadel | High-level xylanase production from sorghum flour by a newly isolate of Trichoderma harzianum cultivated under solid state fermentation | |
Stewart et al. | Xylanase and cellulase production by Aspergillus fumigatus Fresenius | |
Dahot et al. | Microbial production of cellulases by Aspergillus fumigatus using wheat straw as a carbon source | |
El-Naghy et al. | Degradation of cellulosic materials by Sporotrichum thermophile culture filtrate for sugar production |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 19950912 |