JPH07507047A - ゴナドトロピン含有薬剤組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ゴナドトロピン含有薬剤組成物 本発明は、ゴナドトロピン含有薬剤組成物に関する。さらに正確には、本発明は スクロース安定化ゴナドトロピンの組成物に関する。本発明のゴナドトロピンは ＦＳＨ（卵胞刺激ホルモン）、ＬＩ−１（黄体形成ホルモン）、およびｈＣＧ　 （ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン）を含む。

高度に精製されたたんばく質は経時的に不安定であり、たとえばラクトースおよ びマンニトールのような糖と混合するか、さもなければたとえばアルブミンおよ びグリシンのようなたんばく質およびアミノ酸と混合して安定化するということ は知られている。他の生物起源の高分子量化合物、たとえば海洋コロイド、デキ ストランおよび他の多糖類およびリン脂質はしばしば同様に十分に働く。いずれ にしても、本発明のゴナドトロピンは腸管外投与されるので、これらの賦形剤は 、これらのアレルギー誘因性またはその不十分な溶解性のために、そしである場 合にはこれらの強力な毒性またはこれらの効果の集合性のために注射用組成物に は適さない。

凍結乾燥したたんばく質の組成物は、エム、ジェイ、ピカール（Ｍ、Ｊ、Ｐｉｋ ａｌ）、ＢｉｏＰｈａｒｍ、１９９０年１０月、２５〜３０に記載されている。

ここには、たとえばマンニトール、グリシン、アルギニンおよびラクトースのよ うな安定化賦形剤を用いて配合されたたんばく質の例、たとえば成長ホルモンお よびリボヌクレアーゼ八が報告されている。

特に、非晶質状態の様々な物質たとえば、糖質の存在−ドにたんばく質を凍結乾 燥することが記載されており、これにより圧潰温度が上昇しそして凍結乾燥時間 が短かくなる。しかしながら、者とによれば、全てのたんばく質についての標準 的配合物をｒ・知することは不＋１Ｊ能であり、最も長い配合物の選択は大変な 選択作業を必要とする。

ドイツ国特１ｒ１第３５２０２２８シじには、マルトトリオースの繰り返し中位 を含む多糖灯」を用いて安定化された配合物中の’ｂ物学的に１．５性なたんば く質、たとえばリンフ才力イン、インターフェロン、ＴＮＦ　（腫瘍壊死因子） 、インシュリン、成長ホルモンが記載されている。安定剤としてのスクロースの 使用は、たとえば米国特許第３，６３７，６４０号に記載されているように凍結 乾燥したオルゴテインの配合物において公知である。国際特許出願第８９／１０ ４０７号には、Ｍ−５ＣＦ　（マクロファージ−コロニー刺激因子）のスクロー スを用いた配合物が記載されている：国際特許出願第８９１０９６１０号には、 代わって、アルブミン、デキストラン、ポリエチレングリコール、８０ポリソル ベート　ｐｖｐ。

ラクトース、トリアロースまたはスクロースでも安定化されたＴＮＦの配合物が 記載されている。

ゴナドトロピンの注射用製剤は、これらを凍結乾燥して乾燥粉末を得ることを含 む方法により得られうる。ゴナドトロピンは凍結乾燥工程の間に非常に変性しや すく、そしてこれらを室温で貯蔵する場合、より長いライフサイクルを維持する ことのできる安定な配合物を得ることが望まれる。

ヨーロッパ特許第４４８１４６号は凍結乾燥ゴナドトロピン含有製品について記 載しており、これはニカルボン酸塩、たとえばクエン酸、酒石酸およびアスパラ ギン酸を用いて安定化されるものである。市場で見られるゴナドトロピンは糖を 用いて安定化されており、たとえばｈＣＧはマンニトール（プロファシ（Ｐｒｏ ｆａｓｉ）”、セロノ（ＳＥＲＯＮＯ）　）を用いて安定化されており、ＦＳＨ はラクトース（メトロジン（Ｍｅ　ｔ　ｒｏｄ　ｉｎ）’　％セロノ）を用いて 安定化されている。

我々はここにおいてスクロースがゴナドトロピンの配合物、特に組み換えＤＮＡ 技術で調製されたこれら糖たんばく質の形のものへより良い安定性を（ｊ、える ことを見出した。

本発明の主な［目的は、ゴナドトロピンたとえばＦＳＩＬ　ＬｌｌまたはｈｃＧ と、Ｉｔ独または他の安定剤と組み合わせたスクロースの安定化１１賭の固体均 質混合物を含む薬剤組成物を提供するものである。

別の目的は前記薬剤組成物の調製）Ｊ法を提供するものであり、成分の水溶液を 凍結乾燥する目°１１を提供するものである。別の目的は、使用前に貯蔵するの に適しそして１ｌｒＡ−ｒ用物ｒ■のためのメ１シ合物を１１）溶解するのに適 する容器内に滅菌上（１１゛ドに密閉された前記固体混合物を含む前記薬剤組成 物の提示形を提供するものである。

別の目的は、注射溶液に再溶解された前記固体混合物のための溶液を提供するも のである。有効成分の安定性における賦形剤の効果を評価するために、バイアル あたり１５０１．Ｕ、を含む組み換え体ＦＳＨの様々な配合物が様々な賦形剤と ともに調製された：ラクトース、スクロース、グリシン、スクロース＋グリシン 、ラクトース＋アルブミンおよびラクトース＋グリシン。すべての配合物は、ｐ Ｈ７の燐酸塩緩衝液中で賦形剤を溶かすことにより調製されるが、ただしラクト ース（１０ｍｇ）を用いた配合物は注射用のＨｔＯに溶かされそしてｐＨ６，４ に調整された。

サンプルを４５℃で貯蔵し、決まった間隔での生物学的分析により試験した。

表１および２は、バッチ１についての二週間後および四週間後（表１）の、およ びバッチ２についての一週間後および三週間後（表２）の、異なった賦形剤の存 在下に組み換え体ＦＳＨの二つの異なったバッチにおいて行った試験の結果を示 す。

生物学的試験はヨーロッパ薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｐ。

ｅｉａ）の規則にしたがって実施され、二回行った。ＦＳＨおよびＬＨについて の試験は、“メツトロピン”専門誌に報告され、一方ｈＣＧについての試験は“ 絨毛性性腺刺激ゴナドトロピン”専門誌で報告されている。

その結果により、試験されたもののうち最も安定な配合物はスクロースを含むも の、すなわちスクロースｊ１１独およびスクロース＋グリシンをｆｉする配合物 であることがわかる。市くべきことに、スクロースはゴナドトロピンの変性に対 する効果的安定剤であることを示す。

本発明組成物に用いられる安定剤は、従って、スクロースを単独でまたは他の賦 形剤、好ましくはグリシンのようなアミノ酸と組み合わせて３０”する。特に組 み換え体ＦＳＩＩおよび組み換え休Ｌｌｌの安定性が研究された。

組み換え体ＤＮＡの技術にしたがって作られるゴナドトロピンは非ヒト起源の馬 染因ｒを避けるために高純度化１−程を経なければならず、そしてこの高純度に より相当する尿１１１来のゴナドトロピンより安定性が低ドすることになる。

本発明の組み換え体ゴナドトロピンは、ヨーロッパ特許第１６０６９９号および ヨーロッパ特許第２１１８９４号に記載の技術にしたがって、相当する組み換え 体ＤＮＡで形質転換されたＣｌ−ｌｏ（チャイニーズ　ハムスター卵巣）細胞に て発現させることにより調製された。

表１ 組み換え体ＦＳＨ１，Ｕ、のバッチ１ 表２ 組み換え体ＦＳＩ−１１５０１，Ｕ、のバッチ２組み換え体ＦＳＨ含有配合物の 綿密な研究は、表３の割当にしたがって、それぞれａ）ラクトース、ｂ）スクロ ース、Ｃ）スクロース＋グリシンを含む異なった組成物を用いて行った：。

凍結乾燥物の調製は、注射用の水（“ａ”配合物）または０．０１Ｍ燐酸塩緩衝 液（“ｂ”および“Ｃ”配合物）中に賦形剤が溶解している溶液でゴナドトロピ ンのバルクを希釈して２００１．Ｕ、／ｍｌの濃度とし、ラクトース含有配合物 についてはｐＨを６．４に調整し、スクロース含有またはスクロース＋グリシン 含有配合物についてはｐＨを７に調整することにより行った。溶液を濾過し、賦 形剤の残りの溶液で最終容量にし濃度１５０１．Ｕ、／ｍｌとしそして凍結乾燥 した。

これらの配合物の促進された安定性が研究され、これによりより高い温度（＋３ ７℃；＋４５’℃：＋５０℃）でのデータから外挿することにより、室温でこれ らを容器内に貯蔵する場合同じものの安定性を予測した。

ＦＳＩＩ配合物の促進条件ドでの安定性は、一定間隔で行われる生物学的活性試 験を通して測定され、これは相当する表に報告されている。

ｒｌＭＧ　（メツトロピン）の二つのアムブル製剤を標べ「′溶液として使用し 、第一はＩ　Ｏ１，３１，Ｕ、ＦＳＩＩ／アンプルおよび８５．　６１．　Ｕ、 Ｌｌｌ／アンプルの生物学的濃度をｆｆＬ、第、は１０３．　Ｉ　１．　Ｕ、Ｆ ＳＩｌ、／’チアンルおよび８２、　３１．　Ｕ、ＬＨ／アンプルの生物学的濃 度を有する。濃度０．５．１．０および２．Ｏ１，Ｕ、　／ｍｌのサンプルおよ び標準ＨＭＧ溶液を、連続する三日間−日当たり二回０．　５ｍｌ／ラットを皮 下注射することにより、各々５匹のラットからなる三つの異なった群へ投与する 。各動物はさらに一緒に４０１．Ｕ、ｈＣＧの投与量を受ける。

表３ 組み換え体ＦＳＨの配合 表４で報告されたデータは、５ｍｌバイアルに、ラクトース１０ｍｇ（組成物ａ ）、スクロース３０ｍｇ（組成物ｂ）およびスクロース２０＋ｎｇ＋グリシン１ ０ａ＋ｇ（組成物Ｃ）の存在下に、１５０１．　Ｕ、　／＋ｌＦ　５Ｉ−Ｉを含 む組み換え体Ｆ　Ｓ　Ｉ−１の三つの異なったバッチの配合物に関する。試験は 温度３７″℃、４５℃および５０℃にて行われた。

全ての試験温度および三つのバッチ全てについてラクトース含（７配合物に関す る分解が著しい。これと対照的に、同じ温度にてバッチ１のスクロース含有配合 物についてなんら芹しい変化はμられない。第一・のバ・ソチに関するスクロー ス＋グリシン含（ｒ配合物について、明らかな変化は５０′℃で観察されただけ である。

。残りのバッチのスクロースまたはスクロース＋グリシンを自°する配合物につ いて、ラクトース金白°配合物のものよりもいくらか低い分解が観察される。

表５は、３ｍｌバイアル中の＋　５０１．　Ｕ、　／ｍ１ＦｓＩＩおよび３０ｍ ｇスクロースを含む組み換え体ＦＳＨ配合物の二つの異なったバッチ（バ・ソチ １および）くツチ２）について生物学的活性データにより誘導されるさらに促進 条件下での安定性データを示す。

表４ ５ｍ１バイアル中にラクトースｌＯｍｇ（組成物ａ）、スクロース３０ｍｇ（組 成物ｂ）およびスクロース（２０ｍｇ）＋グリシン（１０ｍｇ）（組成物Ｃ）を 有する組み換え体ＦＳＨ配合物（三つの異なったバッチ−１５０１，Ｕ、　／ｍ ｌ　ＦＳＨを含むバッチ１、バッチ２およびバッチ３）の促進条件下での安定性 の研究表５ ３＋１バイアル中スクロース（３０ｍｇ）を有する組み換え体ＦＳＨ配合物（１ ０５１，Ｕ、）の促進された安定性の研究５０“℃の’ｄＡ度で５週間、または ４５°℃の／！４度で１０週間、または３７℃の温度で１２週間貯蔵したバイア ルにおいて研究を行った。ここでも、両方のノ〈・ソチについて全ての試験温度 でなんらの活性変化も見られなかった。

表６で１ｊえられそしてギヤレット法（キャレット　イー、アール、（にａｒｒ ａｔ　Ｅ、Ｒ，、Ｊ、Ｐｈａｒｍ、Ｓｃｉ、、５１：８１１．１９６２）Ｇこし たがって表５の促進条件ドでの安定性データから推測される室温における安定性 の予測は、ラクトース含有配合物についてそれぞれ４℃および２５℃で２年間貯 蔵後に約３５％および８０％分解することを示している。

スクロースまたはスクロース＋グリシンを有する配合物については４℃で分解し ないと予測され、一方スクロース含有配合物については２５℃で２年後にわずか ６％の低下だけであると予測される。

安定性は、５０ｎｇスクロース（組成物ａ）および５ｈｇラクトース（組成物ｂ ）を有する組み換え体ＬＨ配合物（７５１，Ｕ、）のものを研究した。

組み換え体ＬＨ配合物の正確な組成を表７に示す。

１、Ｕ、で測定された生物学的活性試験を介して測定された３７℃、４５℃およ び５０℃で貯蔵されたこのような配合物の促進条件下での安定性の研究（表８） はＦＳＨ配合物についてすでに観察されたものを示すニスクロース含有製剤の分 解は非常に低く、一方ラクトース含有配合物の分解はさらに明白である。

ギヤレット法（ギヤレット　イー、アール、（Ｇａｒｒｅｔ　Ｅ、Ｒ，、Ｊ。

Ｐｈａｒｍ、Ｓｃｉ、、５１　：　８１１．１９６２）にしたがって表８の促進 条件下での安定性データから推測される室温における安定性の予測を、表９に示 す。

表６ 室温における組み換え体ＦＳＨ配合物（１５０１，Ｕ、　’）の安定性予測表７ ３ｍ１バイアル中スクロ一ス５０ｍｇ（組成物ａ）およびラクトース５０ｍｇ（ 組成物ｂ）を有する組み換え体Ｌ　Ｈ配合物（７５１，Ｕ、）の組成表８ ３ｗ＋１バイアル中組み換え体Ｌ　Ｉ−Ｉ配合物（７５１，ｔ）、）の促進され た安定性の研究 表　８（続き） 本−回だけの分析で有意 （括弧内は信頼限界） Ｗ＝週 表９ 室温での組み換え体Ｌ■■配合物（７５１，Ｕ、）の安定性予想分解は、４℃お よび２５℃で２年間貯蔵したラクトース配合物についてそれぞれ約２０％および ８％であると計算される。スクロース含有配合物は４℃で２年間変化せずそして 同じ配合物について２５℃で２年後わずか９％の低下が計算される。

研究はまた、５００１．Ｕ、／バイアルのｈＣＧを含む３ｏ１バイアル中に安定 剤としてスクロース（配合物“ａ”、３０ｍｇスクロース）、ラクトース（配合 物“ｂｏ、１０＋ｎｇラクトース）またはマンニトール（配合物″Ｃ”、２０＋ ｇマンニトール）を用いた尿由来のｈＣＧ配合物においても行われた。

表１０には、５５℃の温度で貯蔵した前記ｈＣＧ配合物についての異なった時間 で行った生物学的分析により導かれる計算値を示す。

ここでも、スクロースは、ｈＣＧ安定性を保持するために最も適した賦形剤であ ること、すなわちＦＳＨまたはＬＨの場合と比較して三つの配合物についての安 定性の差があまり強くないとはいえ、マンニトールよりも一層良好でありラクト ースよりも良好である賦形剤であることが示される。

至剋盟遣の冊 材料：高純度スクロース　Ｐｈ　Ｅｕｒ、ＢＰ、ＰＨＮｏｒｄ、ＮＦ　（メルク ）；ラクトース　ＲＰＥ　ＡＣ３（カル口　エルバ）；分析用のグリシン（メル ク）、分析用のＮＡｉ　ＨＰＯ４，２Ｈ２Ｏ（メルク）　、ＮａＨｚ　ＰＯ４、 Ｈ，０ＲＰＥ（カル口　エルバ）；８５％燐酸　ＲＰＥ　ＡＣＳ　（カル口　エ ルバ）；　Ｏ，ＩＭ　ＮａＯ！−１（メルク）；注射用水。

容器として、ゴムファスナー（フラググラーダ　ペテナティ　アンド　ファルマ グミ（Ｆｒａｄａｇｒａｄａ　ＰｃｔｔｃｎａＬｉ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｇｕ ｍｍｉ）、ブチル混合物）およびアルミニウム環を自°する３または５＋＋１ガ ラスバイアル（タイプＩホウケイ酸ガラス）を使用した。

スクロース含１みいえ体ＦＳＩＩｉ””’　（−々Ｉ　５０１．　Ｕ、ＦＳＩＩ ヲ’Ｕ；１゜２００バイアル）の調製 スクロース（３６ｇ）　、Ｎ；１２１１ＰＯ４，２１１ｚ　Ｏ（１，３３ｇ）お よびＮａ１１ｔ　ＰＯ４，Ｈ２Ｏ（０，５４ｇ）を注射用水（１，２００＋ｎｌ ）に溶かし、出発スクロース溶液を得る。組み換え体ＦＳＩＩ　（１８０，０Ｏ Ｏ１，Ｕ、’）のバルクをｆＢ液で希釈してＦＳＨ溶液を２００　Ｌ　Ｕ、　／ ｍｌｍｌ心得表１０ スクロース（ａ）、ラクトース（ｂ）およびマンニトール（Ｃ）を有するｈＣＧ 　配合物（５００１，、Ｕ、　）の５５℃における安定性の研究Ｗ　＝週　（括 弧間は９５％信頼限界）ＦＳＩＩ＃液および残留スクロース溶液（７）　ｐ　Ｉ −Ｉを、０　、　１　Ｍ　Ｎ　ａ　ＯＩ（またはｔｌ３　ＰＯ４を用いて７に調 整する。ＦＳＩＩ含何溶含金溶液ラボアｏ、２２μｍ滅菌フィルターに通して濾 過し、１１４じデュラポアフィルターを通して濾過した残留賦形剤溶液で最終審 １ｉＬまでとする。このｈ法の間、溶液温度を４“℃と８’Ｃの間に保つ。

スフＣ１−ス含ｒ′組み換え体Ｌｆ［溶液（各／１７５１　Ｕ、Ｌｒｌを＊ム１ ．ｚｏ。

バイアル）の調製 スクＯ−ス（５７，３ｇ）　、Ｎｉｌ□［［ＰＯ，，２１１＝　Ｏ（０，９９ｇ ）およびＮ＋ｕ１．ＰＯ，、Ｉｌ、！Ｏ＜０．６２ｇ）をｔｌ（肘用水（６０（ １ｍｌ）　ｌ：溶がし、出発スクロース溶液を得る。組み換え体ＬＨバルク（９ ０，０ＯＯ１，Ｕ、　）をスクロース溶液で希釈してＬＨ溶液を３００１．　Ｕ 、　／ｍｌで得る。

ＬＨ溶液および残留スクロース溶液のｐＨを、０．１Ｍ　ＮａＯＨまたはＨ。

ＰＯ４を用いて８に調整する。ＬＨ含有溶液を０．２２μのデュラポア滅菌フィ ルターに通して濾過し、同じデュラボアフィルターを通して濾過した残りの賦形 剤溶液で最終容量までとする。この方法の間、溶液温度を４℃と８℃の間に保つ 異なった賦形剤を含む溶液を同様な方法で調製した。

充填並圭堕連殖佼燥 ３ｍｌまたは５の１バイアルをＦＳＨ溶液溶液１宏ｌはＬＨ溶液０．　５ｍｌで 充填し、凍結乾燥器に移し、そして−４５℃で少なくとも６時間冷却する。凍結 乾燥を、０．０７減圧下に一４５℃の温度で始める。加熱を以下の計画に従って 行う：＋２０℃で２０時間、ついで＋３５℃でサイクルの最後まで。

戻した溶液において、通常の品質管理を行った。

本発明を特定の例を用いて説明したが、本発明の精神および範囲を逸脱すること なく変法を導入することができることは理解される。

国際調査報告 、　、、　ＰＣＴ／ＩＴ　９２１００１６５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ゴナドトロピンおよび単独または他の賦形剤と組み合わせたスクロースの安 定化量との固体均質混合物を含む薬剤組成物。 ２．固体均質混合物が凍結乾燥物である請求項１の薬剤組成物。 ３．ゴナドトロピンがＦＳＨ、またはＬＨもしくはｈＣＧである請求項１の薬剤 組成物。 ４．ゴナドトロピンが組み換え体である請求項１−３のいずれか１項の薬剤組成 物。 ５．安定剤がスクロース単独である請求項１−４のいずれか１項の薬剤組成物。 ６．安定剤がグリシンと組み合わされたスクロースである請求項１−４のいずれ か１項の薬剤組成物。 ７．ＦＳＨを７５または１５０Ｉ．Ｕ．とスクロース３０ｍｇを含む請求項１− ６のいずれか１項の薬剤組成物。 ８．ＬＨを７５または１５０Ｉ．Ｕ．とスクロース４７，７５ｍｇ　を含む請求 項１−６のいずれか１項の薬剤組成物。 ９．成分の水溶液を調製し、容器内に分配しおよび容器において乾燥または凍結 乾燥することを含む請求項１−８のいずれか１項の薬剤組成物の調製方法。 １０．成分の水溶液を調製し、前記溶液を乾燥または凍結乾燥し、および得られ た固体混合物を容器内に分配することを含む請求項１−８のいずれか１項の薬剤 組成物の調製方法。 １１．溶液のｐＨが６．５−８．５の範囲内である請求項９および１０の方法１ ２．溶液のｐＩＩがＦＳＩＩ配合物については７であり、ＬＨ配合物については ８である．請求項１１の方法。 １３．使用前に貯蔵するのに適しそして注射用溶媒または溶液中に混合物を再溶 解するのに適する容器内に滅菌条件トに密閉された請求項１−８のいずれか１項 の固体混合物を含む前記薬剤組成物の提示形態。 １４．注射用溶媒または溶液中に再溶解された請求項１３の固体混合物を含む溶 液。