JPH07203974A - 癌特異的ムチンを認識する抗体の遺伝子断片等 - Google Patents
癌特異的ムチンを認識する抗体の遺伝子断片等Info
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- JPH07203974A JPH07203974A JP6002131A JP213194A JPH07203974A JP H07203974 A JPH07203974 A JP H07203974A JP 6002131 A JP6002131 A JP 6002131A JP 213194 A JP213194 A JP 213194A JP H07203974 A JPH07203974 A JP H07203974A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 癌の体内診断薬や治療薬として有効な、例え
ばキメラ抗癌特異的ムチン抗体等を製造するために必要
な遺伝子等の提供。 【構成】 癌特異的ムチンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域
又はＶ領域のアミノ酸配列、該配列を暗号化する遺伝子
等。
ばキメラ抗癌特異的ムチン抗体等を製造するために必要
な遺伝子等の提供。 【構成】 癌特異的ムチンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域
又はＶ領域のアミノ酸配列、該配列を暗号化する遺伝子
等。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、癌特異的ムチンを認識
する抗体の遺伝子等に関する。詳しくは、癌特異的ムチ
ンを認識する抗体のＨ鎖又はＬ鎖のＶ領域部分、これを
暗号化する遺伝子、この遺伝子を含むベクタ−、このベ
クタ−により形質転換された宿主細胞を培養することか
らなる前記領域部分又は癌特異的ムチンを認識する抗体
の製造法に関し、更には癌特異的ムチンを認識するキメ
ラ抗体の製造法に関するものである。
する抗体の遺伝子等に関する。詳しくは、癌特異的ムチ
ンを認識する抗体のＨ鎖又はＬ鎖のＶ領域部分、これを
暗号化する遺伝子、この遺伝子を含むベクタ−、このベ
クタ−により形質転換された宿主細胞を培養することか
らなる前記領域部分又は癌特異的ムチンを認識する抗体
の製造法に関し、更には癌特異的ムチンを認識するキメ
ラ抗体の製造法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】癌細胞に特異的に発現されている抗原
（癌特異的抗原）を認識する抗体は、癌の診断や治療に
有効であることが知られている。Ｎ−アセチルガラクト
サミンとセリン又はトレオニンとがＯ−グリコシド結合
している糖タンパク質はムチンと総称されるが、ある種
のムチンは癌特異的抗原であることが知られている。
（癌特異的抗原）を認識する抗体は、癌の診断や治療に
有効であることが知られている。Ｎ−アセチルガラクト
サミンとセリン又はトレオニンとがＯ−グリコシド結合
している糖タンパク質はムチンと総称されるが、ある種
のムチンは癌特異的抗原であることが知られている。
【０００３】Hoらは、ヒト膵臓癌細胞株から抽出したム
チンをマウスに免疫し、膵臓癌組織を特異的に認識する
マウスモノクロ−ナル抗体を産生するハイブリド−マを
樹立した（Hoら、Cancer Res.,51巻、p372、1991年）。
Sawadaらは、Hoらによって作製された抗体の一つである
Ｎｄ２がヒト膵臓癌を特異的に認識することを、ヒト膵
臓癌を移植したマウスにＮｄ２を投与することにより証
明した（Sawadaら、Antibody,Immunoconjugates,and Ra
diopharmaceuticals,4巻、p493、1991年）。
チンをマウスに免疫し、膵臓癌組織を特異的に認識する
マウスモノクロ−ナル抗体を産生するハイブリド−マを
樹立した（Hoら、Cancer Res.,51巻、p372、1991年）。
Sawadaらは、Hoらによって作製された抗体の一つである
Ｎｄ２がヒト膵臓癌を特異的に認識することを、ヒト膵
臓癌を移植したマウスにＮｄ２を投与することにより証
明した（Sawadaら、Antibody,Immunoconjugates,and Ra
diopharmaceuticals,4巻、p493、1991年）。
【０００４】更にSawadaらは、マウス由来のＮｄ２を膵
臓癌患者に投与し、Ｎｄ２がヒト膵臓癌の体内診断に有
用であることを示唆した（Sawadaら、日本癌学会総会、
p3291991年）。
臓癌患者に投与し、Ｎｄ２がヒト膵臓癌の体内診断に有
用であることを示唆した（Sawadaら、日本癌学会総会、
p3291991年）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】癌特異的ムチンを認識
するモノクロ−ナル抗体を体内診断薬や治療薬として使
用するには、該抗体を大量に投与したり反復して投与す
ることが必要である。しかしながら、例えばＮｄ２等の
マウス由来の抗体をヒトに投与すると、ヒト血清中にマ
ウス抗体を認識する抗体が現れることが知られている
（Levyら、Annu. Rev. Med. 34巻、p107, 1983年）。従
って、マウス由来抗体をヒトに大量投与又は反復投与す
ることは、免疫応答によるアナフィラキシ−の危険性
や、投与した抗体が急速に分解を受けてしまい、その本
来の活性が失われる等の可能性がある。これを解決する
ためにはヒト抗体を使用すればよいが、ヒトＢ細胞の集
団から目的とする抗体を産生するＢ細胞を単離し、これ
に不死化能を与えて培養することは困難である。
するモノクロ−ナル抗体を体内診断薬や治療薬として使
用するには、該抗体を大量に投与したり反復して投与す
ることが必要である。しかしながら、例えばＮｄ２等の
マウス由来の抗体をヒトに投与すると、ヒト血清中にマ
ウス抗体を認識する抗体が現れることが知られている
（Levyら、Annu. Rev. Med. 34巻、p107, 1983年）。従
って、マウス由来抗体をヒトに大量投与又は反復投与す
ることは、免疫応答によるアナフィラキシ−の危険性
や、投与した抗体が急速に分解を受けてしまい、その本
来の活性が失われる等の可能性がある。これを解決する
ためにはヒト抗体を使用すればよいが、ヒトＢ細胞の集
団から目的とする抗体を産生するＢ細胞を単離し、これ
に不死化能を与えて培養することは困難である。
【０００６】近年、これらの問題を解決するためにマウ
ス−ヒトキメラ抗体が提案されている。マウス−ヒトキ
メラ抗体は、ヒト以外の動物種由来の抗原結合領域すな
わち可変領域（Ｖ領域）とヒト由来の不変領域（Ｃ領
域）から成る抗体（Oi and Morrison, Biotechnology
４巻、p214, 1986年）で、ヒト由来のＣ領域はヒト抗体
からの免疫応答を受けないため、アナフィラキシ−の危
険性等を低減し得る。
ス−ヒトキメラ抗体が提案されている。マウス−ヒトキ
メラ抗体は、ヒト以外の動物種由来の抗原結合領域すな
わち可変領域（Ｖ領域）とヒト由来の不変領域（Ｃ領
域）から成る抗体（Oi and Morrison, Biotechnology
４巻、p214, 1986年）で、ヒト由来のＣ領域はヒト抗体
からの免疫応答を受けないため、アナフィラキシ−の危
険性等を低減し得る。
【０００７】さらに最近では、ヒト化型抗体が提案され
ている。ヒト化型抗体は、ヒト以外の動物種由来の抗原
結合最少領域すなわちＣＤＲ領域と、ヒト由来のその他
のＶ領域及びＣ領域からなる抗体で、更にヒト抗体から
の免疫応答を受ける可能性を低減し得る。
ている。ヒト化型抗体は、ヒト以外の動物種由来の抗原
結合最少領域すなわちＣＤＲ領域と、ヒト由来のその他
のＶ領域及びＣ領域からなる抗体で、更にヒト抗体から
の免疫応答を受ける可能性を低減し得る。
【０００８】また、体内診断薬又は治療薬としての抗体
の機能を高めるために、抗体と他の蛋白質の融合蛋白質
や、Ｖ領域のみから成る抗体も提案されている（Ward
ら、Nature, 341 巻 p544, 1989 年）。
の機能を高めるために、抗体と他の蛋白質の融合蛋白質
や、Ｖ領域のみから成る抗体も提案されている（Ward
ら、Nature, 341 巻 p544, 1989 年）。
【０００９】以上のように、近年になって提案された種
々の技術をＮｄ２等に適用することにより、体内診断薬
や治療薬としてより有効な抗体を得ることが可能である
が、これらの抗体を作製するには抗体のＨ鎖及びＬ鎖を
コ−ドする遺伝子が必要である。
々の技術をＮｄ２等に適用することにより、体内診断薬
や治療薬としてより有効な抗体を得ることが可能である
が、これらの抗体を作製するには抗体のＨ鎖及びＬ鎖を
コ−ドする遺伝子が必要である。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
に鑑みてマウス由来抗癌特異的ムチン抗体のＨ鎖又はＬ
鎖の遺伝子について鋭意研究した結果、そのＶ領域の遺
伝子を見出し、本発明を完成するに至った。即ち本発明
は、配列番号１に示されたアミノ酸配列を含む、癌特異
的ムチンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域、該癌特異的ムチ
ンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域を暗号化するＤＮＡ、該
ＤＮＡを含み、宿主細胞中で当該ＤＮＡを発現し得るベ
クタ−、該ベクタ−により形質転換された宿主細胞を培
養することからなる、癌特異的ムチンを認識する抗体の
Ｈ鎖Ｖ領域の製造法である。
に鑑みてマウス由来抗癌特異的ムチン抗体のＨ鎖又はＬ
鎖の遺伝子について鋭意研究した結果、そのＶ領域の遺
伝子を見出し、本発明を完成するに至った。即ち本発明
は、配列番号１に示されたアミノ酸配列を含む、癌特異
的ムチンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域、該癌特異的ムチ
ンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域を暗号化するＤＮＡ、該
ＤＮＡを含み、宿主細胞中で当該ＤＮＡを発現し得るベ
クタ−、該ベクタ−により形質転換された宿主細胞を培
養することからなる、癌特異的ムチンを認識する抗体の
Ｈ鎖Ｖ領域の製造法である。
【００１１】また本発明は、配列番号２に示されたアミ
ノ酸配列を含む、癌特異的ムチンを認識する抗体のＬ鎖
Ｖ領域、該癌特異的ムチンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域
を暗号化するＤＮＡ、該ＤＮＡを含み、宿主細胞中で当
該ＤＮＡを発現し得るベクタ−、該ベクタ−により形質
転換された宿主細胞を培養することからなる癌特異的ム
チンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域の製造方法である。
ノ酸配列を含む、癌特異的ムチンを認識する抗体のＬ鎖
Ｖ領域、該癌特異的ムチンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域
を暗号化するＤＮＡ、該ＤＮＡを含み、宿主細胞中で当
該ＤＮＡを発現し得るベクタ−、該ベクタ−により形質
転換された宿主細胞を培養することからなる癌特異的ム
チンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域の製造方法である。
【００１２】更に本発明は、前記癌特異的ムチンを認識
する抗体のＨ鎖Ｖ領域を暗号化するＤＮＡ及び癌特異的
ムチンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域を暗号化するＤＮＡ
を含み宿主中でこれらＤＮＡを発現し得るベクタ−、該
ベクタ−で形質転換された宿主細胞を培養することから
なる、癌特異的ムチンを認識するキメラ抗体の製造法で
ある。以下本発明を詳細に説明する。
する抗体のＨ鎖Ｖ領域を暗号化するＤＮＡ及び癌特異的
ムチンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域を暗号化するＤＮＡ
を含み宿主中でこれらＤＮＡを発現し得るベクタ−、該
ベクタ−で形質転換された宿主細胞を培養することから
なる、癌特異的ムチンを認識するキメラ抗体の製造法で
ある。以下本発明を詳細に説明する。
【００１３】本発明の癌特異的ムチンを認識する抗体の
遺伝子は、癌特異的ムチンを認識する抗体を産生するＨ
鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝子又はＬ鎖のＶ領域をコ−
ドする遺伝子であり、具体的に配列番号１（図３）又は
配列番号２（図４）で示される塩基配列を有する。本発
明の遺伝子は、癌特異的ムチンを認識する抗体を産生す
るハイブリド−マを出発材料にして例えば実施例１に示
した方法で単離することができるが、このようなハイブ
リド−マとしてはＮｄ２を産生するハイブリド−マ（Ho
ら、Cancer Res.,51巻,p372,1991年）が例示できる。
遺伝子は、癌特異的ムチンを認識する抗体を産生するＨ
鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝子又はＬ鎖のＶ領域をコ−
ドする遺伝子であり、具体的に配列番号１（図３）又は
配列番号２（図４）で示される塩基配列を有する。本発
明の遺伝子は、癌特異的ムチンを認識する抗体を産生す
るハイブリド−マを出発材料にして例えば実施例１に示
した方法で単離することができるが、このようなハイブ
リド−マとしてはＮｄ２を産生するハイブリド−マ（Ho
ら、Cancer Res.,51巻,p372,1991年）が例示できる。
【００１４】なお、配列番号１又は配列番号２の遺伝子
については、例えばＤＮＡ合成機を使用することによっ
て調製することもできる。配列番号１又は配列番号２の
遺伝子においては、１個又は複数個の塩基が付加され、
１個又は複数個の塩基が欠失され、１個又は複数個の塩
基が置換されていても良い。
については、例えばＤＮＡ合成機を使用することによっ
て調製することもできる。配列番号１又は配列番号２の
遺伝子においては、１個又は複数個の塩基が付加され、
１個又は複数個の塩基が欠失され、１個又は複数個の塩
基が置換されていても良い。
【００１５】本発明の癌特異的ムチンを認識する抗体
（Ｖ領域）は、前記した遺伝子で暗号化されており、配
列番号１（図３）又は配列番号２（図４）の配列を有す
るものである。配列番号１又は配列番号２の抗体（Ｖ領
域）においては、１個又は複数個のアミノ酸残基が付加
され、１個又は複数個のアミノ酸残基が欠失され、１個
又は複数個のアミノ酸残基が置換されていても良い。
（Ｖ領域）は、前記した遺伝子で暗号化されており、配
列番号１（図３）又は配列番号２（図４）の配列を有す
るものである。配列番号１又は配列番号２の抗体（Ｖ領
域）においては、１個又は複数個のアミノ酸残基が付加
され、１個又は複数個のアミノ酸残基が欠失され、１個
又は複数個のアミノ酸残基が置換されていても良い。
【００１６】癌特異的ムチンを認識する抗体を遺伝子工
学的に製造するには、これを暗号化する遺伝子を含むベ
クタ−が必要である。本発明のベクタ−は、例えば配列
番号１及び／又は配列番号２の遺伝子断片の全部又は一
部を含み、宿主細胞中で該遺伝子を発現させることがで
きるものである。このため該ベクタ−は、本発明の遺伝
子以外に遺伝子を発現（転写）させるためのプロモ−タ
−／オペレ−タ−、遺伝子の発現（転写）を終了させる
ためのタ−ミネ−タ−、宿主細胞中での複製のための遺
伝子等、公知の遺伝子配列を含んでいても良い。なお本
発明は、Ｈ鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝子及びＬ鎖のＶ
領域をコ−ドする遺伝子を含むものを包合する。このベ
クタ−によれば、Ｃ領域を含まない、Ｖ領域のみから成
る癌特異的ムチンを認識する抗体（Ｆｖ抗体）が製造で
きる。
学的に製造するには、これを暗号化する遺伝子を含むベ
クタ−が必要である。本発明のベクタ−は、例えば配列
番号１及び／又は配列番号２の遺伝子断片の全部又は一
部を含み、宿主細胞中で該遺伝子を発現させることがで
きるものである。このため該ベクタ−は、本発明の遺伝
子以外に遺伝子を発現（転写）させるためのプロモ−タ
−／オペレ−タ−、遺伝子の発現（転写）を終了させる
ためのタ−ミネ−タ−、宿主細胞中での複製のための遺
伝子等、公知の遺伝子配列を含んでいても良い。なお本
発明は、Ｈ鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝子及びＬ鎖のＶ
領域をコ−ドする遺伝子を含むものを包合する。このベ
クタ−によれば、Ｃ領域を含まない、Ｖ領域のみから成
る癌特異的ムチンを認識する抗体（Ｆｖ抗体）が製造で
きる。
【００１７】ベクタ−に、ヒト抗体のＣ領域をコ−ドす
る遺伝子断片を更に付加することにより、マウス−ヒト
キメラ抗体のＨ鎖又はＬ鎖を製造するためのベクタ−と
することができる。この場合、ヒト抗体の遺伝子につい
ては、そのＨ鎖Ｃ領域は本発明のＨ鎖Ｖ領域にフレ−ム
が一致した状態となるように、Ｌ鎖Ｃ領域は本発明のＬ
鎖Ｖ領域にフレ−ムが一致した状態となるように調製す
る。なおヒト抗体のＨ鎖またはＬ鎖のＣ領域をコ−ドす
る遺伝子断片は、従来公知である（例えばKameyamaら、
FEBS Lett., 244 巻, p301, 1989年）。
る遺伝子断片を更に付加することにより、マウス−ヒト
キメラ抗体のＨ鎖又はＬ鎖を製造するためのベクタ−と
することができる。この場合、ヒト抗体の遺伝子につい
ては、そのＨ鎖Ｃ領域は本発明のＨ鎖Ｖ領域にフレ−ム
が一致した状態となるように、Ｌ鎖Ｃ領域は本発明のＬ
鎖Ｖ領域にフレ−ムが一致した状態となるように調製す
る。なおヒト抗体のＨ鎖またはＬ鎖のＣ領域をコ−ドす
る遺伝子断片は、従来公知である（例えばKameyamaら、
FEBS Lett., 244 巻, p301, 1989年）。
【００１８】本発明のベクタ−のうち、癌特異的ムチン
を認識するマウス−ヒトキメラ抗体を製造するためのベ
クタ−は、例えば配列番号１の遺伝子の全部又は一部
と、配列番号２の遺伝子の全部又は一部、ヒト抗体のＨ
鎖のＣ領域をコ−ドする遺伝子及びヒト抗体のＬ鎖のＣ
領域をコ−ドする遺伝子を含み、宿主細胞中で該遺伝子
断片を発現させることができるベクタ−である。ここ
で、ヒト抗体の遺伝子断片については、そのＨ鎖Ｃ領域
はＨ鎖Ｖ領域にフレ−ムが一致した状態となるように、
Ｌ鎖Ｃ領域はＬ鎖Ｖ領域にフレ−ムが一致した状態とな
るようにベクタ−を構築する。
を認識するマウス−ヒトキメラ抗体を製造するためのベ
クタ−は、例えば配列番号１の遺伝子の全部又は一部
と、配列番号２の遺伝子の全部又は一部、ヒト抗体のＨ
鎖のＣ領域をコ−ドする遺伝子及びヒト抗体のＬ鎖のＣ
領域をコ−ドする遺伝子を含み、宿主細胞中で該遺伝子
断片を発現させることができるベクタ−である。ここ
で、ヒト抗体の遺伝子断片については、そのＨ鎖Ｃ領域
はＨ鎖Ｖ領域にフレ−ムが一致した状態となるように、
Ｌ鎖Ｃ領域はＬ鎖Ｖ領域にフレ−ムが一致した状態とな
るようにベクタ−を構築する。
【００１９】以上のベクタ−による宿主細胞の形質転換
は通常の方法に従えば良く、特に制限はない。例えばベ
クタ−が大腸菌を対象とするものであれば大腸菌を宿主
として使用すれば良いし、酵母を対象とするものであれ
ば酵母を宿主として使用すれば良い。
は通常の方法に従えば良く、特に制限はない。例えばベ
クタ−が大腸菌を対象とするものであれば大腸菌を宿主
として使用すれば良いし、酵母を対象とするものであれ
ば酵母を宿主として使用すれば良い。
【００２０】このようにして形質転換した宿主細胞を適
当な条件下で培養することで種々の形態の抗体蛋白質を
製造することができる。本発明では使用したベクタ−に
応じて種々の形態の抗体を蛋白質を製造できるが、前記
した本発明のベクタ−を選択して使用すれば、癌特異的
ムチンを認識する抗体のＨ鎖のＶ領域蛋白質、癌特異的
ムチンを認識する抗体のＬ鎖のＶ領域蛋白質、癌特異的
ムチンを認識する抗体のＨ鎖のＶ領域とヒト抗体のＨ鎖
のＣ領域のキメラ蛋白質、癌特異的ムチンを認識する抗
体のＬ鎖のＶ領域とヒト抗体のＬ鎖のＣ領域のキメラ蛋
白質又は癌特異的ムチンを認識する抗体のＶ領域とヒト
抗体のＣ領域のキメラ抗体等を製造すること等ができ
る。またこの他にも、癌特異的ムチンを認識する抗体の
Ｈ鎖及びＬ鎖のＶ領域から成る抗体蛋白質も製造でき
る。
当な条件下で培養することで種々の形態の抗体蛋白質を
製造することができる。本発明では使用したベクタ−に
応じて種々の形態の抗体を蛋白質を製造できるが、前記
した本発明のベクタ−を選択して使用すれば、癌特異的
ムチンを認識する抗体のＨ鎖のＶ領域蛋白質、癌特異的
ムチンを認識する抗体のＬ鎖のＶ領域蛋白質、癌特異的
ムチンを認識する抗体のＨ鎖のＶ領域とヒト抗体のＨ鎖
のＣ領域のキメラ蛋白質、癌特異的ムチンを認識する抗
体のＬ鎖のＶ領域とヒト抗体のＬ鎖のＣ領域のキメラ蛋
白質又は癌特異的ムチンを認識する抗体のＶ領域とヒト
抗体のＣ領域のキメラ抗体等を製造すること等ができ
る。またこの他にも、癌特異的ムチンを認識する抗体の
Ｈ鎖及びＬ鎖のＶ領域から成る抗体蛋白質も製造でき
る。
【００２１】本発明は、更に、マウスＮｄ２の超可変領
域（ＣＤＲ）をも提供する。具体的に、図３又は図４で
示されるＮｄ２・Ｈ鎖のＶ領域又はＮｄ２・Ｌ鎖のＶ領
域の塩基配列中の、下線を施した配列部分である。この
ＣＤＲのみを残し、他の部分を例えばヒト抗体の該当部
分に変換することで、マウスＮｄ２と同等のムチン結合
性を有するヒト化型抗体を得ることができる。
域（ＣＤＲ）をも提供する。具体的に、図３又は図４で
示されるＮｄ２・Ｈ鎖のＶ領域又はＮｄ２・Ｌ鎖のＶ領
域の塩基配列中の、下線を施した配列部分である。この
ＣＤＲのみを残し、他の部分を例えばヒト抗体の該当部
分に変換することで、マウスＮｄ２と同等のムチン結合
性を有するヒト化型抗体を得ることができる。
【００２２】
【００２３】
【配列表】配列番号：１ 配列の長さ：１２２ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 5 10 15 GAA GTG AAG CTG GTG GAG TCT GGG GGA GTC TTA GTG AAG TCT GGA GGG Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Lys Ser Gly Gly 20 25 30 TCC CTG AAA CTC TCC TGT GCA GTC TCT GGA TTC ACT TTC AGT AAC TAT Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 35 40 45 GGC ATG TCT TGG GTT CGC CAG ACT CCG GAG AAG AGG CTG GAG TGG GTC Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 50 55 60 GCA ACC ATT AGC AAT AGT GGT AGA TAC ACC TAC TTT CCA GAC AGT GTG Ala Thr Ile Ser Asn Ser Gly Arg Tyr Thr Tyr Phe Pro Asp Ser Val 65 70 75 80 AAG GGG CCG TTC GCC ATC TCC AGA GAC AAT GCC AAG AAC AAC CTG TAC Lys Gly Pro Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr 85 90 95 CTG CAA ATG AGC AGT CTG AGG TCT GCG GAC ACG GCC TTG TAT TAC TGT Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Ala Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 100 105 110 ACA AGA CAT TTA GAC TAT GCT AAC TAC GAT GCT ATG GAC TAT TGG GGT Thr Arg His Leu Asp Tyr Ala Asn Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly 115 120 CAA GGA ACC TCT GTC ACC GTC TCC TCA GGT Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly 配列番号：２ 配列の長さ： 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 5 10 15 GAC ATT GTG CTG ACA CAG TCT CCT GCT TCC TTA GCT GTA TCT CTG GGG Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 20 25 30 CAG AGG GCC ACC ATC TCA TGC AGG GCC AGC AAA AGT GTC ACT ACA TCT Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Thr Thr Ser 35 40 45 GAC TTT AGT TAT ATG CAC TGG TAC CAA CAG AAA CCC GGA CAG CCA CCC Asp Phe Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 50 55 60 AAA CTC CTC CTC TAT CTT GCA TCC AAC CTA GAA TCT GGG GTC CCT GAC Lys Leu Leu Leu Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 65 70 75 80 AGG TTC AGT GGC AGT GGG TCT GGG ACA GAC TTC ACC CTC AAC ATC CAT Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Asp Phe Tyr Leu Asn Ile His 85 90 95 CCT GTG GAG GAG GAG GAT GCT GCA ACC TAT TAC TGT CAG CAC AGT AGG Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 100 105 110 GAG TTT CCG TGG ACG TTC GGT GGA GGC ACC AAA CTG GAA ATC AAA CGT Glu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
【００２４】
【実施例】以下本発明をさらに詳細に説明するために実
施例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるもの
ではない。
施例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるもの
ではない。
【００２５】実施例１．Ｎｄ２抗体遺伝子の単離 まず、以下の方法でＮｄ２ハイブリド−マＤＮＡを調製
した。ＲＰＭＩ１６４０で培養した１×108 個のＮｄ２
ハイブリド−マ（Hoら、Cancer Res., 51 巻、p372, 19
91年）をＰＢＳで洗浄後グアニジンイソチオシアネ−ト
溶液に懸濁し、塩化セシウムの上に重層して超遠心にか
け、ＤＮＡ（上清）とＲＮＡ（沈殿）を分離した。上清
を透析後、プロテイナ−ゼ、ＲＮａｓｅ処理し、通常の
方法で除蛋白及び精製を行い、10 mg のＤＮＡを精製し
た。沈殿からは、通常の方法で除蛋白及び精製を行い、
1 mg のＲＮＡを精製した。
した。ＲＰＭＩ１６４０で培養した１×108 個のＮｄ２
ハイブリド−マ（Hoら、Cancer Res., 51 巻、p372, 19
91年）をＰＢＳで洗浄後グアニジンイソチオシアネ−ト
溶液に懸濁し、塩化セシウムの上に重層して超遠心にか
け、ＤＮＡ（上清）とＲＮＡ（沈殿）を分離した。上清
を透析後、プロテイナ−ゼ、ＲＮａｓｅ処理し、通常の
方法で除蛋白及び精製を行い、10 mg のＤＮＡを精製し
た。沈殿からは、通常の方法で除蛋白及び精製を行い、
1 mg のＲＮＡを精製した。
【００２６】次に、以下の方法でゲノミックライブラリ
−を作製した。制限酵素ＥｃｏＲＩで完全消化したＤＮ
Ａ（2 μg ）と、同じくＥｃｏＲＩで完全消化したλＤ
ＡＳＨ II （東洋紡（株）製、1 μg ）を１昼夜4 ℃で
ライゲ−ションしたのち、インビトロパッケ−ジングキ
ット（東洋紡（株）製）のファ−ジイクストラスト1チ
ュ−ブと混合し、20℃で2 時間保温した後、ＳＭバッフ
ァ−を400 μl 加え、ゲノミックライブラリ−を作製し
た。
−を作製した。制限酵素ＥｃｏＲＩで完全消化したＤＮ
Ａ（2 μg ）と、同じくＥｃｏＲＩで完全消化したλＤ
ＡＳＨ II （東洋紡（株）製、1 μg ）を１昼夜4 ℃で
ライゲ−ションしたのち、インビトロパッケ−ジングキ
ット（東洋紡（株）製）のファ−ジイクストラスト1チ
ュ−ブと混合し、20℃で2 時間保温した後、ＳＭバッフ
ァ−を400 μl 加え、ゲノミックライブラリ−を作製し
た。
【００２７】抗体遺伝子の単離は次のように行った。1
昼夜培養した大腸菌ＳＲＢ（Ｐ２）を100 mlの0.2 % マ
ルト−ス及び10 mM MgSO4 を含むＴＢ培地に接種し、Ｏ
Ｄが0.5 まで培養してから菌を集め、20 ml の10 mM Mg
SO4 に懸濁した。次に１×106 個に相当するライブラリ
−を含むＳＭバッファ−とＰ２３９２を等量混合し37℃
で30分間保温し、8mM MgSO4 を含むＴＢアガロ−スプレ
−ト（直径15 cm ）10枚にプレ−ティングし、1 昼夜37
℃で保温した。翌日各プレ−トにナイロンフィルタ−を
のせて2 分間静置し、フィルタ−をはがした。次にフィ
ルタ−を0.5 NNaOH、1.5 M NaClに浸してアルカリ処理
し、0.5 M Tris-HCl（pH 8.0）、1.5 MNaClに浸して中
和し、0.2 X SSC に浸した後、風乾した。それからＪH
プロ−ブあるいはＪκプロ−ブ（Kameyamaら、FEBS Let
t., 244 巻、 p301, 1989 年）を用いてプラ−クハイブ
リダイゼ−ションを行い、ＪH プロ−ブにハイブリダイ
ズするクロ−ン、ＮｄＨ４，及びＪκプロ−ブにハイブ
リダイズするクロ−ン、ＮｄＫ１９を単離した。これら
のインサ−トＤＮＡを単離し、サザンブロット解析によ
り同定した結果、ＪH プロ−ブにハイブリダイズする断
片は2.5 kbp、Ｊκプロ−ブにハイブリダイズする断片
は6.2 kbp であることがわかった。
昼夜培養した大腸菌ＳＲＢ（Ｐ２）を100 mlの0.2 % マ
ルト−ス及び10 mM MgSO4 を含むＴＢ培地に接種し、Ｏ
Ｄが0.5 まで培養してから菌を集め、20 ml の10 mM Mg
SO4 に懸濁した。次に１×106 個に相当するライブラリ
−を含むＳＭバッファ−とＰ２３９２を等量混合し37℃
で30分間保温し、8mM MgSO4 を含むＴＢアガロ−スプレ
−ト（直径15 cm ）10枚にプレ−ティングし、1 昼夜37
℃で保温した。翌日各プレ−トにナイロンフィルタ−を
のせて2 分間静置し、フィルタ−をはがした。次にフィ
ルタ−を0.5 NNaOH、1.5 M NaClに浸してアルカリ処理
し、0.5 M Tris-HCl（pH 8.0）、1.5 MNaClに浸して中
和し、0.2 X SSC に浸した後、風乾した。それからＪH
プロ−ブあるいはＪκプロ−ブ（Kameyamaら、FEBS Let
t., 244 巻、 p301, 1989 年）を用いてプラ−クハイブ
リダイゼ−ションを行い、ＪH プロ−ブにハイブリダイ
ズするクロ−ン、ＮｄＨ４，及びＪκプロ−ブにハイブ
リダイズするクロ−ン、ＮｄＫ１９を単離した。これら
のインサ−トＤＮＡを単離し、サザンブロット解析によ
り同定した結果、ＪH プロ−ブにハイブリダイズする断
片は2.5 kbp、Ｊκプロ−ブにハイブリダイズする断片
は6.2 kbp であることがわかった。
【００２８】以上の断片をそれぞれpBLUEscript に挿入
して、pBLUE/NdH4とpBLUE/NdK19 を作製した。さらにイ
ンサ−トＤＮＡの制限酵素地図を作製し、単離した遺伝
子断片が再配列した抗体遺伝子であることを確認した。
図１にＮｄ２・Ｈ鎖のＶ領域の制限酵素地図を、図２に
Ｎｄ２・Ｌ鎖のＶ領域の制限酵素地図を、それぞれ示
す。
して、pBLUE/NdH4とpBLUE/NdK19 を作製した。さらにイ
ンサ−トＤＮＡの制限酵素地図を作製し、単離した遺伝
子断片が再配列した抗体遺伝子であることを確認した。
図１にＮｄ２・Ｈ鎖のＶ領域の制限酵素地図を、図２に
Ｎｄ２・Ｌ鎖のＶ領域の制限酵素地図を、それぞれ示
す。
【００２９】実施例２．Ｎｄ２抗体遺伝子の塩基配列の
決定 実施例１に示す方法で単離したＮｄ２抗体のＨ鎖のＶ領
域及びＬ鎖のＶ領域の塩基配列を以下の方法で決定し
た。
決定 実施例１に示す方法で単離したＮｄ２抗体のＨ鎖のＶ領
域及びＬ鎖のＶ領域の塩基配列を以下の方法で決定し
た。
【００３０】pBLUE/NdH4及びpBLUE/NdK19 それぞれ大腸
菌ＭＶ１１８４株に導入したのち、該大腸菌を培養し、
常法により一本鎖ＤＮＡを調製し、シ−クエンス用テン
プレ−トとして用いた。シ−クエンスは、Sequenase Ve
rsion2.0 DNA Sequencing Kit （東洋紡（株）製）を用
いてＮｄ２抗体のＨ鎖あるいはＬ鎖のＶ領域遺伝子の塩
基配列を決定した。pBLUE/NdH4に関する結果（Ｈ鎖のＶ
領域）を図３に、pBLUE/NdK19 に関する結果（Ｌ鎖のＶ
領域）を図４に示す。
菌ＭＶ１１８４株に導入したのち、該大腸菌を培養し、
常法により一本鎖ＤＮＡを調製し、シ−クエンス用テン
プレ−トとして用いた。シ−クエンスは、Sequenase Ve
rsion2.0 DNA Sequencing Kit （東洋紡（株）製）を用
いてＮｄ２抗体のＨ鎖あるいはＬ鎖のＶ領域遺伝子の塩
基配列を決定した。pBLUE/NdH4に関する結果（Ｈ鎖のＶ
領域）を図３に、pBLUE/NdK19 に関する結果（Ｌ鎖のＶ
領域）を図４に示す。
【００３１】実施例３．Ｎｄ２マウス・ヒトキメラ抗体
の作製 pBLUE/NdH4とpBLUE/NdK19 のインサ−トＤＮＡをマウス
・ヒトキメラ型Ｈ鎖発現ベクタ−pSV2-HG1gpt 及びマウ
ス・ヒトキメラ型Ｌ鎖発現ベクタ− pSV2-HCκneo （Ka
meyamaら、FEBS Lett., 244 巻、 p301, 1989 年）にそ
れぞれ導入し、pSV2-HG1gpt/NdH4及び pSV2-HCκneo/Nd
K19 を作製した。図５にpSV2-HG1gpt/NdH4の制限酵素地
図を、図６に pSV2-HCκneo/NdK19 の制限酵素地図を、
それぞれ示す。
の作製 pBLUE/NdH4とpBLUE/NdK19 のインサ−トＤＮＡをマウス
・ヒトキメラ型Ｈ鎖発現ベクタ−pSV2-HG1gpt 及びマウ
ス・ヒトキメラ型Ｌ鎖発現ベクタ− pSV2-HCκneo （Ka
meyamaら、FEBS Lett., 244 巻、 p301, 1989 年）にそ
れぞれ導入し、pSV2-HG1gpt/NdH4及び pSV2-HCκneo/Nd
K19 を作製した。図５にpSV2-HG1gpt/NdH4の制限酵素地
図を、図６に pSV2-HCκneo/NdK19 の制限酵素地図を、
それぞれ示す。
【００３２】細胞への発現ベクタ−の導入は以下のよう
に行った。10％の牛血清を含んだＤＭＥＭ培地を用いた
通常の方法で培養したＳＰ２／０細胞 1×107 個をＰＢ
Ｓで洗った後、あらかじめ4 ℃に冷却しておいたＰＢＳ
0.4mlでサスペンドした。これに、pSV2-HG1gpt/NdH4及
び pSV2-HCκneo/NdK19 のそれぞれ50μg を0.4 mlのＰ
ＢＳに溶解して氷上で冷却した溶液を混合し、10分間氷
上に置いてGene pulser （バイオラッド社製）を用い、
1100 V、25マイクロファラッドの条件でパルスをかけ
た。さらに10分間氷上に置いた後、培地で洗い、更に通
常の培地で培養した。3 日後培地を選択培地（通常の培
地に、0.8 mg/ml のＧ４１８（ギブコ社製）を含む）に
換え、96穴プレ−トにまいた。7 日及び14日後に培地を
交換し、21日後に上清のキメラ抗体価を測定し、ポジテ
ィブなクロ−ンを15クロ−ン選んだ。最終的に最も発現
量の多いクロ−ンHCNd8Aを選んだ 実施例４．Ｎｄ２マウス・ヒトキメラ抗体のムチンへの
結合性 キメラ抗体価のアッセイは次のように行った。抗ヒトIg
G1をコ−トしたプレ−トを１％ＢＳＡ，ＰＢＳでブロッ
キングを行った。これに培養上清を加え、2 時間以上室
温で放置した。プレ−トを洗浄後、ＨＲＰ結合抗ヒトIg
κを加え、2 時間以上室温で放置した。最後にプレ−ト
を洗浄後、発色試薬（大日本製薬（株）製）を加え、発
色の程度をイムノリ−ダ−（ＭＰＲ−Ａ４、東ソ−
（株）製）で測定した。その結果、HCNd8Aは培養上清中
に約10μg/mlのキメラ抗体を産生していることがわかっ
た。
に行った。10％の牛血清を含んだＤＭＥＭ培地を用いた
通常の方法で培養したＳＰ２／０細胞 1×107 個をＰＢ
Ｓで洗った後、あらかじめ4 ℃に冷却しておいたＰＢＳ
0.4mlでサスペンドした。これに、pSV2-HG1gpt/NdH4及
び pSV2-HCκneo/NdK19 のそれぞれ50μg を0.4 mlのＰ
ＢＳに溶解して氷上で冷却した溶液を混合し、10分間氷
上に置いてGene pulser （バイオラッド社製）を用い、
1100 V、25マイクロファラッドの条件でパルスをかけ
た。さらに10分間氷上に置いた後、培地で洗い、更に通
常の培地で培養した。3 日後培地を選択培地（通常の培
地に、0.8 mg/ml のＧ４１８（ギブコ社製）を含む）に
換え、96穴プレ−トにまいた。7 日及び14日後に培地を
交換し、21日後に上清のキメラ抗体価を測定し、ポジテ
ィブなクロ−ンを15クロ−ン選んだ。最終的に最も発現
量の多いクロ−ンHCNd8Aを選んだ 実施例４．Ｎｄ２マウス・ヒトキメラ抗体のムチンへの
結合性 キメラ抗体価のアッセイは次のように行った。抗ヒトIg
G1をコ−トしたプレ−トを１％ＢＳＡ，ＰＢＳでブロッ
キングを行った。これに培養上清を加え、2 時間以上室
温で放置した。プレ−トを洗浄後、ＨＲＰ結合抗ヒトIg
κを加え、2 時間以上室温で放置した。最後にプレ−ト
を洗浄後、発色試薬（大日本製薬（株）製）を加え、発
色の程度をイムノリ−ダ−（ＭＰＲ−Ａ４、東ソ−
（株）製）で測定した。その結果、HCNd8Aは培養上清中
に約10μg/mlのキメラ抗体を産生していることがわかっ
た。
【００３３】作製したキメラＮｄ２抗体の、ムチンへの
結合性は以下のように行った。ヒト膵臓癌細胞株ＳＷ１
９９０より抽出したムチン（Hoら、Cancer Res., 51
巻、p372, 1991年）を常法によりコ−トした96穴プレ−
トに検体を加え、2 時間以上室温で放置した。プレ−ト
を洗浄後、ＨＲＰ結合抗ヒトIgκを加え、2 時間以上室
温で放置した。プレ−トを洗浄後、発色試薬（大日本製
薬（株）製）を加え、発色の程度をイムノリ−ダ−（Ｍ
ＰＲ−Ａ４、東ソ−（株）製）で測定した。
結合性は以下のように行った。ヒト膵臓癌細胞株ＳＷ１
９９０より抽出したムチン（Hoら、Cancer Res., 51
巻、p372, 1991年）を常法によりコ−トした96穴プレ−
トに検体を加え、2 時間以上室温で放置した。プレ−ト
を洗浄後、ＨＲＰ結合抗ヒトIgκを加え、2 時間以上室
温で放置した。プレ−トを洗浄後、発色試薬（大日本製
薬（株）製）を加え、発色の程度をイムノリ−ダ−（Ｍ
ＰＲ−Ａ４、東ソ−（株）製）で測定した。
【００３４】結果を図７に示す。図７から明らかなよう
に、HCNd8Aの培養上清中に含まれるキメラ抗体は、ムチ
ンとの結合性を保持していた。
に、HCNd8Aの培養上清中に含まれるキメラ抗体は、ムチ
ンとの結合性を保持していた。
【００３５】実施例５．Ｎｄ２マウス・ヒトキメラ抗体
を用いたヒト膵臓癌組織への免疫染色 キメラＮｄ２抗体を用いたヒト癌組織への免疫染色は，
ＡＢＣ法（Yuanら、Cancer Res. 45巻に、p6179, 1985
年）より、以下のように行った。まず内在性のペルオキ
シダ−ゼ活性を1%過酸化水素で阻害した。次に組織を、
5%ウサギ血清で希釈したHCNd8Aの培養上清、ＨＲＰ標識
抗ヒトＩｇκ、ＡＢＣ試薬（Vector Laboratories 社
製）の順に常法通り加えた。比較としてマウスＮｄ２抗
体を用いた免疫染色を行った。
を用いたヒト膵臓癌組織への免疫染色 キメラＮｄ２抗体を用いたヒト癌組織への免疫染色は，
ＡＢＣ法（Yuanら、Cancer Res. 45巻に、p6179, 1985
年）より、以下のように行った。まず内在性のペルオキ
シダ−ゼ活性を1%過酸化水素で阻害した。次に組織を、
5%ウサギ血清で希釈したHCNd8Aの培養上清、ＨＲＰ標識
抗ヒトＩｇκ、ＡＢＣ試薬（Vector Laboratories 社
製）の順に常法通り加えた。比較としてマウスＮｄ２抗
体を用いた免疫染色を行った。
【００３６】結果を表１に示す。表１から明らかなよう
に、キメラＮｄ２抗体とマウスＮｄ２抗体は同様の染色
パタ−ンを示した。これは、キメラＮｄ２抗体の抗原結
合性がマウスＮｄ２抗体と同様であることを証明するも
のである。
に、キメラＮｄ２抗体とマウスＮｄ２抗体は同様の染色
パタ−ンを示した。これは、キメラＮｄ２抗体の抗原結
合性がマウスＮｄ２抗体と同様であることを証明するも
のである。
【００３７】
【表１】
【００３８】
【発明の効果】本発明で提供される癌特異的ムチンを認
識する抗体のＨ鎖及びＬ鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝
子、さらには該抗体を遺伝子工学的手法を用いて生産す
るための手段及び方法により、種々の付加機能を有した
該抗体を大量に生産することが可能である。これらは、
癌特異的ムチンの生理的役割の解析に重要であり、癌に
対する治療薬診断薬開発に大きな意義をもつものであ
る。
識する抗体のＨ鎖及びＬ鎖のＶ領域をコ−ドする遺伝
子、さらには該抗体を遺伝子工学的手法を用いて生産す
るための手段及び方法により、種々の付加機能を有した
該抗体を大量に生産することが可能である。これらは、
癌特異的ムチンの生理的役割の解析に重要であり、癌に
対する治療薬診断薬開発に大きな意義をもつものであ
る。
【図１】図１はＮｄ２・Ｈ鎖のＶ領域の制限酵素地図を
示す図であり、Ｅ、Ｈ、Ｘ、Ｓ及びＥｎは、それぞれEc
oRI サイト、HindIII サイト、XbaIサイト、SacI及びエ
ンハンサ−を示している。
示す図であり、Ｅ、Ｈ、Ｘ、Ｓ及びＥｎは、それぞれEc
oRI サイト、HindIII サイト、XbaIサイト、SacI及びエ
ンハンサ−を示している。
【図２】図２はＮｄ２・Ｌ鎖のＶ領域の制限酵素地図を
示す図であり、Ｅ、Ｂ、Ｈ、ＸはそれぞれEcoRI サイ
ト，BamHI サイト、HindIII サイト，XbaIサイトを示し
ている。
示す図であり、Ｅ、Ｂ、Ｈ、ＸはそれぞれEcoRI サイ
ト，BamHI サイト、HindIII サイト，XbaIサイトを示し
ている。
【図３】図３はＮｄ２・Ｈ鎖のＶ領域の塩基配列と当該
配列から推定されるＨ鎖Ｖ領域のアミノ酸配列を示す。
図中、下線を施した３か所の塩基配列は超可変領域（上
流側からＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を示してい
る。
配列から推定されるＨ鎖Ｖ領域のアミノ酸配列を示す。
図中、下線を施した３か所の塩基配列は超可変領域（上
流側からＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を示してい
る。
【図４】図４はＮｄ２・Ｌ鎖のＶ領域の塩基配列と当該
配列から推定されるＬ鎖Ｖ領域のアミノ酸配列を示す。
図中、下線を施した３か所の塩基配列は超可変領域（上
流側からＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を示してい
る。
配列から推定されるＬ鎖Ｖ領域のアミノ酸配列を示す。
図中、下線を施した３か所の塩基配列は超可変領域（上
流側からＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を示してい
る。
【図５】図５は、発現ベクタ−pSV2-HG1gpt/NdH4を示す
図であり、図中の記号は、通常の遺伝子工学で使用され
る記号と同様の意味である。
図であり、図中の記号は、通常の遺伝子工学で使用され
る記号と同様の意味である。
【図６】図６は、発現ベクタ− pSV2-HCκneo/NdK19 を
示す図であり、図中の記号は、通常の遺伝子工学で使用
される記号と同様の意味である。
示す図であり、図中の記号は、通常の遺伝子工学で使用
される記号と同様の意味である。
【図７】図５は、実施例４に示す方法で、キメラ型ＮＤ
２抗体（○）、マウス型ＮＤ２抗体（●）の、ムチンと
の結合を調べた時のプレ−トの発色の状況を示すもので
あり、縦軸は500 nmにおける吸光度を示し、横軸はコ−
ト時におけるムチンの希釈度を示している。
２抗体（○）、マウス型ＮＤ２抗体（●）の、ムチンと
の結合を調べた時のプレ−トの発色の状況を示すもので
あり、縦軸は500 nmにおける吸光度を示し、横軸はコ−
ト時におけるムチンの希釈度を示している。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 16/30 8318−4Ｈ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (13)
- 【請求項１】 配列番号１に示されたアミノ酸配列を含
む、癌特異的ムチンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域。 - 【請求項２】 請求項１に記載の癌特異的ムチンを認識
する抗体のＨ鎖Ｖ領域を暗号化する遺伝子。 - 【請求項３】 配列番号１に示された塩基配列を含む、
請求項２に記載の遺伝子。 - 【請求項４】 請求項２に記載のＤＮＡを含み、宿主細
胞中で当該遺伝子を発現し得るベクタ−。 - 【請求項５】 請求項４に記載のベクタ−により形質転
換された宿主細胞を培養することからなる、癌特異的ム
チンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域の製造法。 - 【請求項６】 配列番号２に示されたアミノ酸配列を含
む、癌特異的ムチンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域。 - 【請求項７】 請求項６に記載の癌特異的ムチンを認識
する抗体のＬ鎖Ｖ領域を暗号化する遺伝子。 - 【請求項８】 配列番号２に示された塩基配列を含む、
請求項７に記載の遺伝子。 - 【請求項９】 請求項７に記載のＤＮＡを含み、宿主細
胞中で当該遺伝子を発現し得るベクタ−。 - 【請求項１０】請求項９に記載のベクタ−により形質転
換された宿主細胞を培養することからなる癌特異的ムチ
ンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域の製造方法。 - 【請求項１１】請求項２に記載の癌特異的ムチンを認識
する抗体のＨ鎖Ｖ領域を暗号化する遺伝子及び請求項７
に記載の癌特異的ムチンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域を
暗号化する遺伝子を含み宿主中でこれら遺伝子を発現し
得るベクタ−。 - 【請求項１２】更に、ヒト由来の抗体のＨ鎖Ｃ領域を暗
号化する遺伝子及びヒト由来の抗体のＬ鎖Ｃ領域を暗号
化する遺伝子を含む請求項１１に記載のベクタ−。 - 【請求項１３】請求項１２に記載のベクタ−で形質転換
された宿主細胞を培養することからなる、癌特異的ムチ
ンを認識するキメラ抗体の製造法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6002131A JPH07203974A (ja) | 1994-01-13 | 1994-01-13 | 癌特異的ムチンを認識する抗体の遺伝子断片等 |
| DE19500723A DE19500723A1 (de) | 1994-01-13 | 1995-01-12 | Gen oder Genfragment eines Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt |
| FR9500349A FR2714915B1 (fr) | 1994-01-13 | 1995-01-13 | Fragment de gène, etc, d'un anticorps reconnaissant une mucine spécifique de cancers . |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6002131A JPH07203974A (ja) | 1994-01-13 | 1994-01-13 | 癌特異的ムチンを認識する抗体の遺伝子断片等 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07203974A true JPH07203974A (ja) | 1995-08-08 |
Family
ID=11520791
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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