JPH06217786A - 抗ネコヘルペスウイルス−１組換え抗体および該抗体をコードする遺伝子断片 - Google Patents

抗ネコヘルペスウイルス−１組換え抗体および該抗体をコードする遺伝子断片

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JPH06217786A
JPH06217786A JP4341255A JP34125592A JPH06217786A JP H06217786 A JPH06217786 A JP H06217786A JP 4341255 A JP4341255 A JP 4341255A JP 34125592 A JP34125592 A JP 34125592A JP H06217786 A JPH06217786 A JP H06217786A
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 ネコヘルペスウイルス−１（ＦＨＶ−１）感
染症の治療・予防および診断に有効な抗ＦＨＶ−１組換
え抗体、およびこの調製に有用な遺伝子断片を提供す
る。 【構成】 ＦＨＶ−１の中和活性に優れたマウスモノク
ローナル抗体を産生する細胞を構築し、この抗体のＦＨ
Ｖ−１特異的結合能を担う抗体Ｖ領域をコードする遺伝
子断片を得た。この遺伝子断片とネコ抗体定常領域をコ
ードする遺伝子断片とを用いてキメラ化した抗ＦＨＶ−
１組換え抗体を得る。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ネコヘルペスウイルス
−１（ＦＨＶ−１）感染症の診断、治療及び予防に期待
できる新規なネコモノクローナル抗体に関する。さらに
詳細にはマウス型抗ＦＨＶ−１中和モノクローナル抗体
の定常領域をネコ抗体定常領域に変換したネコ型抗ＦＨ
Ｖ−１組換え抗体及び該抗体をコードする遺伝子断片に
関する。
【０００２】
【発明の背景】ネコはペットとして昔から人間に愛着の
ある動物であるが、近年の欧米では、「伴侶、仲間、相
棒としての動物」（Companion species）と称され、人
間社会の一員としての地位を獲得しつつある。もう一方
では、医学、薬学、畜産学、獣医学から心理学にいたる
実験動物としての貢献度は従来から大きなものであった
が、近年では医薬品の効果検定や安全性試験にＳＰＦ猫
（SPF Cat）などの呼称のもとで更に貢献度が高まって
いる。いずれの場合にも当然の事として、これらのネコ
の疾病、特に伝染病に関するより確実な知識がますます
必要となり、その診断、治療、予防のための方法確立が
要求されている。
【０００３】ネコのウイルス性疾患は多く、なかでもＦ
ＨＶ−１に起因した上部気道性疾患は急性で致死率が高
い。両疾病に対する特効的な治療薬はなく、抗生物質、
サルファ剤等の二次細菌感染予防の対症療法しかなく、
現在の治療法には問題を残している。
【０００４】従来よりウイルス感染症の治療薬として高
度免疫血清や血清由来の免疫グロブリンが使用され有効
な実績を残してきた。しかし、現在では、動物愛護思想
の高まりと共に、ネコ血清原料の入手が困難になりこの
治療法は使いたくとも使用できない状況になっている。
従って、従来の高度免疫血清に代わってＦＨＶ−１を中
和できるモノクローナル抗体があればＦＨＶ−１感染症
の治療に大きく貢献することが可能である。
【０００５】
【従来技術】ＦＨＶ−１に対する中和モノクローナル抗
体がいくつか確立されているが、確立されているモノク
ローナル抗体は、全てマウスハイブリドーマ由来の抗体
である。これらの抗体を治療薬としてネコに投与した場
合、異種蛋白であるため血中に存在している補体あるい
はFcレセプターを持つ免疫担当細胞との結合力は同種
（ネコ）のそれよりも弱く、抗体＋補体による細胞障害
や抗体依存・細胞媒介性細胞障害を誘起しにくいと考え
られる。ＦＨＶ−１の感染防御及びウイルスの中和には
抗体単独による作用に加えて、これら２つの免疫反応も
重要であることが知られている（Horimoto T. et al. J
pn.J.Vet.Sci. 51, p1025, 1989）。従って、従来のマ
ウス抗体では効果的な治療効果を誘導できない可能性が
ある。
【０００６】さらに、異種タンパクとして認識されたマ
ウス抗体はアナフィラキシーショックや血清病などの副
作用を起こしたり、半減期が短縮し治療効果が薄れる可
能性がある。従って投与する抗体は、従来のマウスモノ
クローナル抗体では決して満足のいくものではなく、ネ
コ型のモノクローナル抗体でなければならなかった。
【０００７】
【発明の目的】このような状況にあって、本発明者ら
は、ＦＨＶ−１ウイルス株を中和するマウスモノクロー
ナル抗体ＪＨ２を確立し、この抗体の可変領域（Ｖ領
域）をコードする遺伝子の核酸配列を同定し、さらに該
抗体のＦＨＶ−１中和に深く係わるＶ領域中の特異的ア
ミノ酸配をも見いだした。次に本マウス型モノクローナ
ル抗体をネコ型化するために、抗ＦＨＶ−１中和抗体を
コードする抗体Ｖ領域遺伝子を、先に本発明者らが見い
だしたネコ抗体の定常領域をコードする遺伝子断片と連
結させることにより、ＦＨＶ−１中和活性を有する抗Ｆ
ＨＶ−１キメラ抗体発現ベクターを構築し、これを発現
させ、抗ＦＨＶ−１キメラ抗体を得ることに成功するに
至った。すなわち、本発明は、遺伝子工学的手法を用い
てマウス型抗体の定常領域をネコ抗体の定常領域と置き
換えた、これまでに報告のない抗ＦＨＶ−１ネコ型キメ
ラ抗体、およびこの調製に有用な該抗体をコードする遺
伝子断片を提供することを目的とする。かくして、ＦＨ
Ｖ−１感染症に対して有効かつ副作用のない、診断薬・
治療薬・予防薬への抗ＦＨＶ−１抗体の応用が可能とな
る。
【０００８】
【発明の構成及び効果】本発明者らは、まずＦＨＶ−１
-Ｋ１ウイルス粒子で免疫されたマウスのリンパ球とマ
ウスミエローマ細胞を常法にしたがい細胞融合し、ハイ
ブリドーマを作製した。ハイブリドーマの培養上清中の
ウイルス中和能を指標にクローニングを行った結果、Ｆ
ＨＶ−１の中和活性において極めて優れたモノクローナ
ル抗体を産生する抗体産生細胞ＪＨ２を確立することに
成功した。
【０００９】一般に、抗体の抗原にたいする特異性は抗
体可変（Ｖ）領域のアミノ酸によって規定されているこ
とが知られている。そこで、ＪＨ２のＶ領域がいかなる
アミノ酸で構成されているか調べた。アミノ酸配列は、
該抗体のＶ領域をコードする遺伝子をクローニングし、
その核酸塩基配列を調べることにより決定した。
【００１０】その結果、図３及び図４に示されるアミノ
酸配列を有していることが分かった。一般に、抗体のＨ
鎖遺伝子領域には約200個のＶＨ、数10個のＤ、４つの
ＪＨ遺伝子が存在する。一方Ｌ(κ)鎖遺伝子領域には約
200のＶκ、４つのＪκ遺伝子がある。Ｂ細胞の分化に
ともない、これらのＶ(Ｄ)Ｊの各断片のうちから1つを
選んで再構成が起こり可変領域全体のアミノ酸をコード
する遺伝子となることが知られている。さらに、Ｎ配列
の付加、Somatic Mutationにより、抗体可変領域の多様
性は莫大な数となる。本発明により明らかにされたＪＨ
２の可変領域遺伝子はこの中から選択された唯一のもの
である。図中のＣＤＲは、抗原と結合する上で重要な領
域である。ＪＨ２の場合も、これら６つのＣＤＲ領域の
アミノ酸がＦＨＶと結合し、中和反応を引き起こしてい
るものと考えられる。中でもＨ鎖ＣＤＲ３に見られるAs
p Gly Ala Trp Phe Pro PheはＪＨ２特有のアミノ酸配
列であることが他の抗体可変領域との相同性比較により
明かとなった。
【００１１】従って、Ｈ鎖ＣＤＲ３を中心に他のＨ，Ｌ
鎖のＣＤＲ領域のアミノ酸がＦＨＶ−１との結合および
中和反応と密接に関連する部位と考えられ、これはＪＨ
２抗体の可変領域遺伝子を単離することにより初めて明
かとなった。さらに、ＪＨ２のＶ領域の核酸塩基配列、
アミノ酸配列が明らかになったことにより、この配列を
基にさらに抗原結合活性を向上させたり、Ｖ領域そのも
のをネコ型化を可能にするものである。そして、この様
なアミノ酸配列を持つ抗体もしくはペプチドはＦＨＶ−
１感染症の治療、診断、予防に用いることが出来ると推
察される。
【００１２】すなわち、本発明に従い提供される、ＦＨ
Ｖ−１に対して中和活性を有する抗体のＶ領域をコード
する遺伝子断片とは、下記の特徴を有する遺伝子断片を
言う。
【００１３】ネコヘルペスウイルス−１（ＦＨＶ−１）
に対して特異的に反応する抗体ＶＨまたはその一部をコ
ードする遺伝子断片とは、該抗体のＣＤＲ３をコードす
る核酸配列部分が、下記のアミノ酸配列をコードする核
酸配列であることを特徴とする抗体ＶＨ遺伝子断片であ
る。 Asp Gly Ala Trp Phe Pro Phe
【００１４】このような配列をコードする核酸配列を有
する好ましいＶＨ遺伝子断片とは、該抗体のＣＤＲ１〜
３をコードする核酸配列部分が、それぞれ下記のアミノ
酸配列をコードする核酸配列である遺伝子断片が挙げら
れる。 CDR1：LeuSerThrSerGlyMetGlyAlaGly CDR2：HisIleTrpTrpAspAspValLysArgTyrAsnProAlaLeuLy
sSer CDR3：SerGlnIleTyrPheAspTyrAspGlyAlaTrpPheProPhe
【００１５】さらに、上記ＶＨ遺伝子断片の好ましい配
列の一例としては、配列表：配列番号１に記載のアミノ
酸配列をコードする核酸配列が挙げられる。その具体的
核酸配列とは、例えば、配列表：配列番号１に記載の核
酸配列が挙げられる。
【００１６】一方、ネコヘルペスウイルス−１（ＦＨＶ
−１）に対して特異的に反応する抗体ＶＬまたはその一
部をコードする遺伝子断片とは、該抗体のＣＤＲ１〜３
をコードする核酸配列部分が、それぞれ下記のアミノ酸
配列をコードする核酸配列である遺伝子断片が挙げられ
る。 CDR1：ArgAlaSerGlnSerIleSerAsnAsnLeuHis CDR2：AlaSerGlnSerIleSerGly CDR3：GlnGlnSerAsnSerTrpProHisThr
【００１７】さらに、上記ＶＬ遺伝子断片の好ましい配
列の一例としては、配列表：配列番号２に記載のアミノ
酸配列をコードする核酸配列が挙げられる。その具体的
核酸配列とは、例えば、配列表：配列番号２に記載の核
酸配列が挙げられる。
【００１８】さて、マウス型抗体ＪＨ２をＦＨＶ−１感
染症の治療用として直接ネコに投与することは、有効性
の減弱、副作用、半減期の短縮などの点から困難と考え
られる。これは抗体そのものがネコにとって異種蛋白で
あるマウス由来のものであるため、ネコの補体やＦｃレ
セプターを有する免疫担当細胞と結合できない可能性が
あり、その結果ＡＤＣＣやＣＤＣを誘導しにくいことが
予想される。前述のようにＦＨＶ感染症においては、こ
れらの作用がウイルス中和に大きく寄与していることを
考えると抗体はネコのＦｃ領域をもつ必要がある
【００１９】さらに、生体内において異種蛋白として免
疫原性を惹起すれば、生体より速やかにクリアランスさ
れるため半減期が短縮されたり、血清病などの副作用を
引き起こすかも知れない。抗体分子としての免疫原生も
Ｆｃ領域に集約されているといわれており、このことか
らもＦｃ領域は同種蛋白であるネコの抗体分子のアミノ
酸配列であることが好ましい。そこで本発明者らは、Ｊ
Ｈ２の抗体定常領域を、ネコのそれと遺伝子工学的手法
を用いて置き換えることにより、ネコ型ＪＨ２を作製す
ることに成功した。
【００２０】このようなネコ型抗体は、本発明により提
供される上記抗ＦＨＶ−１抗体のＶＨをコードする遺伝
子およびＶＬ遺伝子の下流(3'側)に、ネコ抗体定常領域
遺伝子；ＣＨ遺伝子およびＣＬ遺伝子を接続することに
より該ネコ型抗体すなわち、ネコ型キメラ抗体をコード
する抗体Ｈ鎖およびＬ鎖の構造遺伝子が構築され、これ
を適当な動物細胞等で発現されることにより目的の抗Ｆ
ＨＶ−１キメラ抗体が調製される。
【００２１】このようなネコ抗体定常領域をコードする
遺伝子は、本発明者らが先に見いだしている（特開平3-
123488、特開平3-201986および特開平3-72873）。この
ようなネコ抗体定常領域をコードする遺伝子の核酸配列
としては、ＣＨをコードする遺伝子断片として、配列
表：配列番号３に記載のアミノ酸配列をコードする遺伝
子断片が挙げられる。その具体的な核酸配列としては、
配列表：配列番号３に記載の核酸配列が挙げられる。ま
た、このようなＣＨ遺伝子は、Escherichia coliCCG-CB
25G；微工研菌寄第11166号（FERM P-11166）として本出
願人により寄託されている。また、Ｃκをコードする遺
伝子として、配列表：配列番号４に記載のアミノ酸配列
をコードする遺伝子断片が挙げられる。その具体的な核
酸配列としては、配列表：配列番号４に記載の核酸配列
が挙げられる。また、このようなＣκ遺伝子は、Escher
ichia coli FCK-CEK8A；微工研菌寄第10985号（FERM P-
10985）として本出願人により寄託されている。さら
に、Ｃλをコードする遺伝子として、配列表：配列番号
５に記載のアミノ酸配列をコードする遺伝子断片が挙げ
られる。その具体的な核酸配列としては、配列表：配列
番号５に記載の核酸配列が挙げられる。また、このよう
なＣλ遺伝子は、Escherichia coli FCL-T162；微工研
菌寄第10942号（FERM P-10942）として本出願人により
寄託されている。
【００２２】本発明のＦＨＶ−１に対して中和活性を有
する抗体のＶ領域をコードする遺伝子断片は、上記のよ
うなＶ領域がマウス由来、Ｃ領域がネコ由来の配列から
なるキメラ抗体の他に、Ｖ領域のフレーム（ＦＲ）領域
についてもマウス以外の抗体（本発明の場合にはネコ抗
体）由来の配列に組換えられた改変抗体の調製にも用い
ることができる。ネコ抗体の一般的なＶ領域ＦＲ領域の
アミノ酸配列に関しては、未だその全配列に関しては報
告されていない。しなしながら、その配列の一部につい
ては、既に報告されており（KEHO J.M. et al. Proc.
N.A.S. 69, p2052, 1972）、これらおよび、本発明者ら
が先に見いだしたネコ抗体の定常領域のアミノ酸配列等
から適当なプライマーを調製することにより、ネコ抗体
Ｖ領域をコードする遺伝子をクローニングし、該ＦＲ領
域のアミノ酸配列を見いだすことも可能であろう。改変
抗体の基本的調製法に関しては、公知の技術（例えば、
特開昭62-296890号）に従い調製される。この場合に用
いられる、本発明の遺伝子断片とは、ＶＨ鎖およびＶＬ
鎖をコードする一部の遺伝子として、少なくとも下記の
アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む遺伝子断片を
言う。 Asp Gly Ala Trp Phe Pro Phe
【００２３】また、好ましくは、該改変抗体Ｖ領域のＣ
ＤＲをコードする核酸部分として、ＶＨ鎖、ＶＬ鎖それ
ぞれ下記のアミノ酸をコードする核酸配列が用いられ
る。ＶＨ鎖； CDR1：LeuSerThrSerGlyMetGlyAlaGly CDR2：HisIleTrpTrpAspAspValLysArgTyrAsnProAlaLeuLy
sSer CDR3：SerGlnIleTyrPheAspTyrAspGlyAlaTrpPheProPhe ＶＬ鎖； CDR1：ArgAlaSerGlnSerIleSerAsnAsnLeuHis CDR2：AlaSerGlnSerIleSerGly CDR3：GlnGlnSerAsnSerTrpProHisThr
【００２４】さらに、本発明者らによれば、上記の様な
改変抗体の調製の際には、従来の技術に従い、Ｖ領域の
ＣＤＲ部分をマウス由来の配列にするよりも、ＣＤＲに
隣接するＶ領域のＦＲ領域の一部についてもＣＤＲと同
様のマウス由来の配列にすることで、本来のマウスモノ
クローナル抗体の持つ特異性に優れた抗体を調製できる
ことがあることをこれまでに見いだしている。すなわ
ち、ＶＨ鎖については図３に記載されているアミノ酸配
列を、ＶＬ鎖については図４に記載されているアミノ酸
配列を参考にすることにより、Ｖ領域のＦＲ領域につい
てもその一部をマウス由来の配列にすることで、ＣＤＲ
のみをマウス由来の配列にした改変抗体より更に優れた
改変抗体を調製できる可能性がある。
【００２５】上記のごとく、本発明の抗ＦＨＶ−１抗体
の可変領域をコードする遺伝子を用いて、キメラ抗体用
または改変抗体用のＶ領域構造遺伝子を構築し、本発明
者らが先に見いだしたネコ抗体定常領域をコードする遺
伝子と連結させることにより、ネコ型抗ＦＨＶ−１組換
え抗体、いわゆるキメラ抗体をコードする構造遺伝子が
調製される。この遺伝子を適当なプロモーター遺伝子の
下流に連結させ公知の技術に従い動物細胞等で発現させ
ることにより得られる本発明の組換え抗体は、マウス型
抗体のＪＨ２と同じ優れた中和活性を保持していた。さ
らにＦＨＶ感染ネコへ投与した場合においては、顕著な
副作用を呈することなく病状を緩和させた。E.A.Emini
等はチンパンジーのＨＩＶ感染におけるモノクローナル
抗体の感染防御効果を検討した。その結果、ヒト型のキ
メラ抗体はＨＩＶ感染を防御出来た（E.A.Emini et al.
Nature,355,p728,1992）が、オリジナルのマウス型抗
体は防御出来なかった（E.A.Emini et al. J.Virol.,6
4,p3674,1990）。これは、Ｆｃ領域依存性のADCCあるい
はCDC活性を誘導できなかった点、及び消失半減期が短
かったことによるものと考えられる。今回見いだされた
ＦＨＶ感染ネコにおけるＦＨ２抗体の有効性も前例同様
マウス型の抗体では効果が弱いと考えられ、ネコ型化す
ることによってはじめて認められるものと推察される。
以上のことから本抗ＦＨＶ−１キメラ抗体ＦＨ２はＦＨ
Ｖ−１感染症の治療・予防において、実質的な治療薬と
なり得るものである。以下、本発明を実施例に沿って更
に詳細に説明する。
【００２６】
【実施例】（１）抗ＦＨＶ−１中和モノクローナル抗体産生ハイブ
リドーマの作製 ＦＨＶ−１感染ＦＬ細胞(ネコ肺細胞)の培養上清を硫酸
アンモニウムで沈降させ、透析後、リン酸緩衝液に再懸
濁させBALB/cマウスの腹腔内にフロイントの完全アジュ
バントとともに免疫した。２週間後、マウスのリンパ球
とマウスミエローマ細胞(P3U1)をポリエチレングリコー
ル法で細胞融合し、ハイブリドーマを作製した。ハイブ
リドーマの培養上清中のウイルス中和能を指標にクロー
ニングを行い４種類のＦＨＶ−１中和モノクローナル抗
体産生細胞を確立した。下記の表１は各モノクローナル
抗体が10TCID50のＦＨＶ−１を中和するのに必要な抗体
の最小有効濃度を示している。これらのモノクローナル
抗体のうちＪＨ２抗体は最も強力にＦＨＶ−１−Ｋ１株
を中和した。
【００２７】
【表１】
【００２８】（２）抗ＦＨＶ−１抗体(ＪＨ２)可変領域遺伝子の単離 1〜0.5×107の細胞（ハイブリドーマ）から全ＲＮＡを
抽出し、Oligo dTカラム(Stratagene社製、Poly(A) Qui
k mRNA Purification Kit)によってｍＲＮＡを精製し
た。逆転写酵素(タカラ社；以下特別にことわりのない
かぎり遺伝子操作用の試薬はタカラ社製のものを用い
た)により一本鎖ｃＤＮＡを合成した。5'側のプライマ
ーとしては抗体のリーダー領域(MHL34,MKL104)の、3'側
にはＪ領域(MHJ3,MKJ124)の塩基配列を有するオリゴヌ
クレオチド合成した。下記にその塩基配列を示す。 ＶＨ鎖増幅用プライマー MHL341：TCTAGAAGCTTGCCGCCACCATGGGCAGACTTACATTCTCAT
T MHJ3 ：GAAGATCTGGATCCACTCACCTGCAGAGACAGTGA Ｖκ鎖増幅用プライマー MKL104：GGAATTCAAGCTTGCCGCCACCATGGT(T/A)T(C/T)CTCA
CCTCAG MKJ124：CTAGATCTGGATCCACTTACGTTT(T/G)ATTTCCA(A/G)C
TT
【００２９】ｃＤＮＡ 20ngに50pmoleのプライマーをそ
れぞれ添加した。94℃１分、55℃１分、72℃１分で30サ
イクルＰＣＲ(Polymerase Chain Reaction)を行い、プ
ライマーによって挟まれた可変領域遺伝子（ＶＨ、Ｖ
κ）を増殖した。図２は増幅された遺伝子断片のアガロ
ース電気泳動パターンである。遺伝子の大きさはＶＨ
（Ｈ鎖）約400bp、Ｖκ（Ｌ鎖）約400bpであり期待され
たバンドの大きさとほぼ一致した。
【００３０】（３）塩基配列の決定 １で増幅された各遺伝子断片の塩基配列をジデオキシ法
により決定した。ＶＨおよびＶκ遺伝子断片をpUC18に
それぞれクローン化し、ジデオキシ法(USB社製、Sequen
ase ver.2)により塩基配列を決定した。
【００３１】図３は、ＪＨ２抗体のＶＨ遺伝子の塩基お
よびそれによってコードされるアミノ酸配列を示したも
のである。オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を
とりドメイン構造を形成するCysは保存されていたこと
からこの遺伝子が発現型の遺伝子であることが示され
た。また、ＪＨ３で再配列していることが解った。次
に、この遺伝子のコードするアミノ酸配列のホモロジー
検索を行なった。検索用ソフトウエアはGENETYX-CD（ソ
フトウエア社）を用い、Gene Bankのデータベースを検
索した。その結果、ＶＨIII／J606ファミリーに属する
抗体１から５が相同性の高いＶＨとして検索された（図
５）。図５中の*は、他のＶＨと相同性のあるアミノ酸
を示し、それ以外の領域は、ＪＨ２のみに認められたア
ミノ酸配列である。特に下線で示された部分はこれまで
に報告のない新規なアミノ酸配列で、ＪＨ２抗体に特徴
的な領域である。
【００３２】図４は、ＪＨ２抗体のＶκ遺伝子の塩基お
よびそれによってコードされるアミノ酸配列を示したも
のである。Ｌ鎖と同様にＯＲＦをとりドメイン構造を形
成するCysは保存されていたことからこの遺伝子が発現
型の遺伝子であることが示された。また、Ｊκ１で再配
列していることが解った。図６は、ホモロジー検索の結
果を示している。ＪＨ２のＶκの場合も他のＶκと相同
性が認められた。
【００３３】すなわち、ＶＨ鎖における下線部で示され
た部分がＪＨ２抗体特異的な部分であり、抗原結合活性
を規定する重要なアミノ酸配列であると推察された。
【００３４】（４）抗ＦＨＶ−１キメラ抗体遺伝子の作製 ＰＣＲにより増幅された可変領域遺伝子をそれぞれ、ネ
コ抗体γ鎖定常領域遺伝子CB25γ(特開平3-201986)ある
いはκ鎖定領域CEK(特開平3-123488)と連結した。発現
用のプロモーターにはニワトリのβ-アクチンのプロモ
ーター（特願平1-309785）を、セレクションマーカーに
はneo（Southern P.J. J.Mol.Appl.Genet.,1,327,198
2）あるいはdhfr遺伝子(Stark,G.R. and Wahl,G.M.,Ann
u.Rev.Biochem.,53,p447,1984)を用いた。図７および図
８は、作製されたキメラ抗体Ｈ鎖およびＬ鎖発現ベクタ
ーの制限酵素地図である。
【００３５】（５）安定形質転換体の作製 図７及び図８に示したキメラ抗体遺伝子Ｈ鎖、Ｌ(κ)鎖
それぞれ10μgをPvuＩで切断し2x106のマウスミエロー
マ細胞P3ーX63ーAg8ー6.5.3.（ATCC・CRL1580）にlipofecti
n（BRL社製）を用いてco-transfectionし0.25x10-7M メ
トトレキセート(MTX)を含む5%FCS/RPMI1640選択培地で
培養し薬剤耐性株（形質転換体）を選別した。培養上清
中に発現されるネコＩｇＧを指標にキメラ抗体産性細胞
を限界希釈法によってクローン化し発現細胞ＦＨ２を確
立し、以下の性状解析を行った。
【００３６】（６）抗ネコ抗体との反応 ＦＨ２(キメラ抗体発現細胞)およびＪＨ２(マウスモノ
クローナル抗体発現細胞)の培養上清を抗ネコ抗体（E.
Y.LABS.INC）固相化マイクロタイタープレートに加え、
室温で１時間反応させた。プレートを洗浄後、ＨＲＰ-
抗ネコ抗体（E.Y.LABS.INC）を室温で１時間反応させ
た。再びプレートを洗浄後、ＴＭＢＺで発色させ吸光度
450nmを測定し抗ネコ抗体との反応性を調べた（図
９）。ＦＨ２の培養上清は濃度依存的に抗ネコ抗体と反
応したが、マウス抗体を発現しているＪＨ２の培養上清
は抗ネコ抗体と反応しなかった。このことからＦＨ２細
胞の発現しているキメラ抗体はネコ抗体であることがわ
かった。
【００３７】（７）キメラ抗体のSDS-PAGEによる同定 培養上清よりキメラ抗体をProteinA（Bio Rad社製、MAP
S-II）で精製した。精製キメラ抗体を12.5%SDS-PAGEに
かけ、ネコＩｇＧ標品（ポリクローナル抗体）と比較し
た。分子量はBio Rad社製のプレステインドマーカーに
より求めた。図１０に示されるように、キメラ抗体は還
元状態下ではＨ鎖５万、Ｌ鎖2.5万で非還元状態では約1
5万のところにバンドを検出したことから、Ｈ２Ｌ２の
２量体を形成し、ネコの生体内に存在しているＩｇＧと
同じ形をとっていることがわかった。
【００３８】（８）ＦＨＶ−１ウイルス粒子との反応 次にキメラ抗体の抗原結合活性を調べた。培養上清（Ｆ
Ｈ２及びＪＨ２）をＦＨＶ−１-Ｋ１（硫安沈澱粗精製
品）固相化マイクロタイタープレートに加えた。プレー
トを洗浄後、ＨＲＰ-抗ネコ抗体あるいはＨＲＰ-抗マウ
ス抗体を反応させた。ＴＭＢＺで発色させ、ＦＨＶ−１
ウイルス粒子との反応性を調べた。ＦＨ２抗体はマウス
抗体ＪＨ２と同様にＦＨＶ−１-Ｋ１と特異的に反応し
た。しかしながら、他のウイルスに特異的な組換えキメ
ラ抗体（同じネコ定常領域と異なるマウス可変領域を持
っている抗体）は反応しなかった（図１１）。
【００３９】（９）ＦＨＶ−１ウイルス中和試験 さらにキメラ抗体のＦＨＶ−１中和活性を調べた。培養
上清（ＦＨ２及びＪＨ２）をＦＨＶ−１ウイルス100TCI
D50と４℃で６時間反応させた。ＣＲＦＫ細胞を0.25×1
05個加えて３７℃で２日培養した。ＣＰＥ(Cell Roundi
ng）を観察し、最低有効中和濃度を求めた。下記の表２
にその結果をまとめた。その結果、ＦＨ２抗体はＦＨＶ
−１を１．９５ug/mlで中和することが確認された。
【００４０】
【表２】
【００４１】 （１０）ＦＨＶ強制感染ネコにおけるＦＨ２の有効性 104TCID50のＦＨＶ−１−Ｋ１株を1.5-3.0Kgのネコに経
鼻より強制感染させた。２日目にＦＨ２を30-10mg/Kgで
頸静脈より静脈内投与した。体重、体温、食餌量、飲水
量及び元気などの一般臨床症状、さらに、流涙、結膜
炎、鼻漏、くしゃみおよび咳などの呼吸器病変を経時的
に観察し、無症状０点、軽度の症状を１点、中度２点、
重度３点としてスコア化した。その結果、10及び30mg/k
g投与群で病状が緩和され、ＦＨ２のＦＨＶ感染症に対
するin vivoでの有用性が示された。また、ＦＨ２投与
後に発熱、下痢、嘔吐その他のショック様症状などの副
作用は観察されなかった。以上のこのことより、ＦＨ２
抗体はＦＨＶ−１感染症に対して有効かつ副作用のない
診断薬、治療薬・予防薬への応用を可能にするものであ
る。
【００４２】
【配列表】配列番号：１ 配列の長さ：４２９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ to ｍＲＮＡ 配列の特徴 起源 生物名：マウス 配列 ATG GGC AGA CTT ACA TTC TCA TTC CTG CTA CTG ATT GTC CCT GCA TAT 48 Met Gly Arg Leu Thr Phe Ser Phe Leu Leu Leu Ile Val Pro Ala Tyr 1 5 10 15 GTC CTG TCC CAG GTT ACT CTG AAA GAG TCT GGC CCT GGG ATA TTG CAG 96 Val Leu Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln 20 25 30 CCC TCC CAG ACC CTC AGT CTG ACT TGT TCT TTC TCT GGG TTT TCA CTG 144 Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu 35 40 45 AGC ACT TCT GGT ATG GGT GCA GGC TGG ATT CGT CAG CCA TCA GGG AAG 192 Ser Thr Ser Gly Met Gly Ala Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys 50 55 60 GGT CTG GAG TGG CTG GCA CAC ATT TGG TGG GAT GAT GTC AAG CGC TAT 240 Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Val Lys Arg Tyr 65 70 75 80 AAC CCA GCC CTG AAG AGC CGA CTG ACT ATC TCC AAG GAT ACC TCC AGC 288 Asn Pro Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser 85 90 95 AGC CAG GTA TTC CTC AAG ATC GCC AGC GTG GAC ACT GCA GAT ACT GCC 336 Ser Gln Val Phe Leu Lys Ile Ala Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala 100 105 110 ACA TAT TTT TGT GTT CGA TCC CAG ATC TAC TTT GAT TAC GAC GGG GCC 384 Thr Tyr Phe Cys Val Arg Ser Gln Ile Tyr Phe Asp Tyr Asp Gly Ala 115 120 125 TGG TTT CCT TTC TGG GGC CAA GGG ACT CTG GTC ACT GTC TCT GCA 429 Trp Phe Pro Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 130 135 140
【００４３】配列番号：２ 配列の長さ：３８１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ to ｍＲＮＡ 配列の特徴 起源 生物名：マウス 配列 ATG GTA TCC TCA CCT CAG TTC CTT GGA CTT ATG CTT TTT TGG ATT TCA 48 Met Val Ser Thr Ala Gln Phe Leu Gly Leu Met Leu Phe Trp Ile Ser 1 5 10 15 GCC TCC AGA GGT GAT ATT GTG CTA ACT CAG TCT CCA GCC ACC CTG TCT 96 Ala Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30 GTG ACT CCA GGA GAT AGC GTC AGT CTT TCC TGC AGG GCC AGC CAA AGT 144 Val Thr Pro Gly Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser 35 40 45 ATT AGC AAC AAC CTA CAC TGG TAT CAA CAA AAA TCA CAT GAG TCT CCA 192 Ile Ser Asn Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro 50 55 60 AGG CTT CTC ATC AAG TAT GCT TCC CAG TCC ATC TCT GGG ATC CCC TCC 240 Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser 65 70 75 80 AGG TTC AGT GGC AGT GGA TCA GGG ACA GAT TTC ACT CTC AGT ATC AAC 288 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn 85 90 95 AGT GTG GAG ACT GAA GAT TTT GGA ATG TAT TTC TGT CAA CAG AGT AAC 336 Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn 100 105 110 AGC TGG CCT CAC ACG TTC GGT GCT GGG ACC AAG CTG GAG CTG AAA 381 Ser Trp Pro His Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 115 120 125
【００４４】配列番号：３ 配列の長さ：１００５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ to ｍＲＮＡ 配列の特徴 起源 生物名：ネコ 配列 ACC ACG GCC CCA TCG GTG TTC CCA CTG GCC CCC AGC TGC GGG ACC ACA 48 Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly Thr Thr 1 5 10 15 TCT GGC GCC ACC GTG GCC CTG GCC TGC CTG GTG TTA GGC TAC TTC CCT 96 Ser Gly Ala Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Leu Gly Tyr Phe Pro 20 25 30 GAG CCG GTG ACC GTG TCC TGG AAC TCC GGC GCC CTG ACC AGC GGT GTG 144 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 35 40 45 CAC ACC TTC CCG GCC GTC CTG CAG GCC TCG GGG CTG TAC TCT CTC AGC 192 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ala Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 50 55 60 AGC ATG GTG ACA GTG CCC TCC AGC AGG TGG CTC AGT GAC ACC TTC ACC 240 Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Leu Ser Asp Thr Phe Thr 65 70 75 80 TGC AAC GTG GCC CAC CCG CCC AGC AAC ACC AAG GTG GAC AAG ACC GTG 288 Cys Asn Val Ala His Pro Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 85 90 95 CGC AAA ACA GAC CAC CCA CCG GGA CCC AAA CCC TGC GAC TGT CCC AAA 336 Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys 100 105 110 TGC CCA CCC CCT GAG ATG CTT GGA GGA CCG TCC ATC TTC ATC TTC CCC 384 Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro 115 120 125 CCA AAA CCC AAG GAC ACC CTC TCG ATT TCC CGG ACG CCC GAG GTC ACA 432 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 130 135 140 TGC TTG GTG GTG GAC TTG GGC CCA GAT GAC TCC GAT GTC CAG ATC ACA 480 Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr 145 150 155 160 TGG TTT GTG GAT AAC ACC CAG GTG TAC ACA GCC AAG ACG AGT CCG CGT 528 Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg 165 170 175 GAG GAG CAG TTC AAC AGC ACC TAC CGT GTG GTC AGT GTC CTC CCC ATC 576 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile 180 185 190 CTA CAC CAG GAC TGG CTC AAG GGG AAG GAG TTC AAG TGC AAG GTC AAC 624 Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn 195 200 205 AGC AAA TCC CTC CCC TCC CCC ATC GAG AGG ACC ATC TCC AAG GCC AAA 672 Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys 210 215 220 GGA CAG CCC CAC GAG CCC CAG GTG TAC GTC CTG CCT CCA GCC CAG GAG 720 Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu 225 230 235 240 GAG CTC AGC AGG AAC AAA GTC AGT GTG ACC TGC CTG ATC AAA AGC TTC 768 Glu Leu Ser Arg Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe 245 250 255 CAC CCG CCT GAC ATT GCC GTC GAG TGG GAG ATC ACC GGA CAG CCG GAG 816 His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu 260 265 270 CCA GAG AAC AAC TAC CGG ACG ACC CCG CCC CAG CTG GAC AGC GAC GGG 864 Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly 275 280 285 ACC TAC TTC GTG TAC AGC AAG CTC TCG GTG GAC AGG TCC CAC TGG CAG 912 Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln 290 295 300 AGG GGA AAC ACC TAC ACC TGC TCG GTG TCA CAC GAA GCT CTG CAC AGC 960 Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser 305 310 315 320 CAC CAC ACA CAG AAA TCC CTC ACC CAG TCT CCG GGT AAA TGAGCA 1005 His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys 325 330
【００４５】配列番号：４ 配列の長さ：３３７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：genomic ＤＮＡ 配列の特徴 起源 生物名：ネコ 配列 AGT GAT GCT CAG CCA TCT GTC TTT CTC TTC CAA CCA TCT CTG GAC GAG 48 Ser Asp Ala Gln Pro Ser Val Phe Leu Phe Gln Pro Ser Leu Asp Glu 1 5 10 15 TTA CAT ACA GGA AGT GCC TCT ATC GTG TGC ATA TTG AAT GAC TTC TAC 96 Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Ile Val Cys Ile Leu Asn Asp Phe Tyr 20 25 30 CCC AAA GAG GTC AAT GTC AAG TGG AAA GTG GAT GGC GTA GTC CAA ACA 144 Pro Lys Glu Val Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Val Gln Thr 35 40 45 AAG GCA TCC AAG GAG AGC ACC ACA GAG CAG AAC AGC AAG GAC AGC ACC 192 Lys Ala Ser Lys Glu Ser Thr Thr Glu Gln Asn Ser Lys Asp Ser Thr 50 55 60 TAC AGC CTC AGC AGC ACC CTG ACG ATG TCC AGG ACG GAG TAC CAA AGT 240 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Arg Thr Glu Tyr Gln Ser 65 70 75 80 CAT GAA AAG TTC TCC TGC GAG GTC ACT CAC AAG AGC CTG GCC TCC ACC 288 His Glu Lys Phe Ser Cys Glu Val Thr His Lys Ser Leu Ala Ser Thr 85 90 95 CTC GTC AAG AGC TTC AAC AGG AGC GAG TGT CAG AGA GAG TAGCCTAGCA 337 Leu Val Lys Ser Phe Asn Arg Ser Glu Cys Gln Arg Glu 100 105
【００４６】配列番号：５ 配列の長さ：３１８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ to ｍＲＮＡ 配列の特徴 起源 生物名：ネコ 配列 CAG CCC AAG TCG GCC CCC TCG GTC ACA CTC TTC CCA CCC TCC AGT GAG 48 Gln Pro Lys Ser Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 1 5 10 15 GAG CTC AGC GCA AAC AAG GCC ACC CTG GTG TGT CTC GTC AGT GAC TTC 96 Glu Leu Ser Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Val Ser Asp Phe 20 25 30 TAC CCC AGC GGC TTG ACG GTG GCC TGG AAG GAA GAT GGC ACC CCC ATC 144 Tyr Pro Ser Gly Leu Thr Val Ala Trp Lys Glu Asp Gly Thr Pro Ile 35 40 45 ACC AAG GGC GTG GAG ACC ACC AAG CCC TCC AGA CAG AGC AAC AAC AAG 192 Thr Lys Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Arg Gln Ser Asn Asn Lys 50 55 60 TAC GCG GCC AGC AGC TAC CTG AGC CTG TCA CCG AAC GAG TGG AAA TCT 240 Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Ser Pro Asn Glu Trp Lys Ser 65 70 75 80 CAC AGC AGA TAC ACC TGC CAG GTC ACG CAC GAG GGG AGC ACT GTG GAG 288 His Ser Arg Tyr Thr Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 85 90 95 AAG AGT GTG GTC CCT GCA GAG TGC CCT TAG 318 Lys Ser Val Val Pro Ala Glu Cys Pro 100 105
【図面の簡単な説明】
【図１】ＰＣＲによって増幅された抗ＦＨＶ−１抗体Ｊ
Ｈ２のＶＨ、Ｖκ遺伝子のアガロースゲル電気泳動結果
を示す模式図である。
【図２】実施例（３）で得たＶＨ遺伝子の塩基配列及び
それによってコードされるアミノ酸配列を示す。
【図３】実施例（４）で得たＶκ遺伝子の塩基配列及び
それによってコードされるアミノ酸配列を示す。
【図４】ＪＨ２と他の抗体のＶＨ領域のアミノ酸レベル
での相同性比較を行った結果を示す。
【図５】ＪＨ２と他の抗体のＶκ領域のアミノ酸レベル
での相同性比較を行った結果を示す。
【図６】抗ＦＨＶ−１キメラ抗体Ｈ鎖発現ベクターの制
限酵素地図を示す。
【図７】抗ＦＨＶ−１キメラ抗体Ｌ鎖発現ベクターの制
限酵素地図を示す。
【図８】抗ネコ抗体に対する本発明のキメラ抗体の反応
性を示したものである。
【図９】本発明のキメラ抗体のSDS-PAGEの泳動結果を示
す模式図である。
【図１０】ＦＨＶ−１に対する本発明のキメラ抗体の結
合性を示したものである。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年１２月２７日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図１１
【補正方法】追加
【補正内容】
【図１１】 ＦＨＶ−１Ｋ１株を強制感染させたネコ
に対する本発明のキメラ抗体の有効性を示したものであ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 15/13 ＺＮＡ //(Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (20)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ネコヘルペスウイルス−１（ＦＨＶ−
    １）に対して特異的に反応するモノクローナル抗体。
  2. 【請求項２】 ネコヘルペスウイルス−１（ＦＨＶ−
    １）に対して特異的に反応する、遺伝子組換え技術によ
    り調製された組換え抗体。
  3. 【請求項３】 ＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミ
    ノ酸配列が、下記のアミノ酸配列を有することを特徴と
    する請求項２の抗体。 Asp Gly Ala Trp Phe Pro Phe
  4. 【請求項４】 該ＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列中のＣ
    ＤＲの配列が、それぞれ下記のアミノ酸配列である請求
    項２の抗体。 ＶＨ； CDR1：LeuSerThrSerGlyMetGlyAlaGly CDR2：HisIleTrpTrpAspAspValLysArgTyrAsnProAlaLeuLy
    sSer CDR3：SerGlnIleTyrPheAspTyrAspGlyAlaTrpPheProPhe ＶＬ； CDR1：ArgAlaSerGlnSerIleSerAsnAsnLeuHis CDR2：AlaSerGlnSerIleSerGly CDR3：GlnGlnSerAsnSerTrpProHisThr
  5. 【請求項５】 該ＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列が、そ
    れぞれ配列表：配列番号１中のアミノ酸順位２０番〜１
    ４３番および配列番号２中のアミノ酸順位２１番〜１２
    ７番に記載するアミノ酸配列である請求項２の抗体。
  6. 【請求項６】 該抗体の定常領域のアミノ酸配列がネコ
    抗体由来のアミノ酸配列である請求項２の抗体。
  7. 【請求項７】 該抗体のＨ鎖定常領域のアミノ酸配列
    が、配列表：配列番号３に記載のアミノ酸配列、および
    Ｌ鎖定常領域のアミノ酸配列が、配列表：配列番号４に
    記載のアミノ酸配列または配列表：配列番号５に記載の
    アミノ酸配列である請求項６の抗体
  8. 【請求項８】 ネコ（ＦＨＶ−１）に対して特異的に反
    応する抗体ＶＨまたはその一部をコードする遺伝子断片
    であって、ＣＤＲ３をコードする核酸配列部分が、下記
    のアミノ酸配列をコードする核酸配列であることを特徴
    とする抗体ＶＨ遺伝子断片。 Asp Gly Ala Trp Phe Pro Phe
  9. 【請求項９】 ＣＤＲ１〜３をコードする核酸配列部分
    が、それぞれ下記のアミノ酸配列をコードする核酸配列
    である請求項８の遺伝子断片。 CDR1：LeuSerThrSerGlyMetGlyAlaGly CDR2：HisIleTrpTrpAspAspValLysArgTyrAsnProAlaLeuLy
    sSer CDR3：SerGlnIleTyrPheAspTyrAspGlyAlaTrpPheProPhe
  10. 【請求項１０】 抗体ＶＨをコードする核酸配列が、配
    列表：配列番号１に記載のアミノ酸配列をコードする核
    酸配列である請求項８の遺伝子断片。
  11. 【請求項１１】 抗体ＶＨをコードする核酸配列が、配
    列表：配列番号１に記載の核酸配列である請求項８の遺
    伝子断片。
  12. 【請求項１２】 抗体ＶＬのＣＤＲ１〜３をコードする
    核酸配列部分が、それぞれ下記のアミノ酸配列をコード
    する核酸配列であることを特徴とする抗体ＶＬ遺伝子断
    片。 CDR1：ArgAlaSerGlnSerIleSerAsnAsnLeuHis CDR2：AlaSerGlnSerIleSerGly CDR3：GlnGlnSerAsnSerTrpProHisThr
  13. 【請求項１３】 抗体ＶＬをコードする核酸配列が、配
    列表：配列番号２に記載のアミノ酸配列をコードする核
    酸配列である請求項１２の遺伝子断片。
  14. 【請求項１４】 抗体ＶＬをコードする核酸配列が、配
    列表：配列番号２に記載の核酸配列である請求項１２の
    遺伝子断片。
  15. 【請求項１５】 ネコヘルペスウイルス−１（ＦＨＶ−
    １）に対して特異的に反応するネコキメラ抗体Ｈ鎖をコ
    ードする遺伝子断片であって、上記請求項８の遺伝子断
    片の下流(3'側)に、ネコ抗体Ｈ鎖の定常領域をコードす
    る遺伝子断片を結合させたことを特徴とする組換え遺伝
    子断片。
  16. 【請求項１６】 該ネコ抗体Ｈ鎖の定常領域をコードす
    る遺伝子断片が、配列表：配列番号３に記載のアミノ酸
    配列をコードする核酸配列である請求項１５の組換え遺
    伝子断片。
  17. 【請求項１７】 ネコヘルペスウイルス−１（ＦＨＶ−
    １）に対して特異的に反応するネコキメラ抗体Ｌ鎖をコ
    ードする遺伝子断片であって、上記請求項１２の遺伝子
    断片の下流(3'側)に、ネコ抗体κ鎖の定常領域をコード
    する遺伝子断片を結合させたことを特徴とする組換え遺
    伝子断片。
  18. 【請求項１８】 該ネコ抗体κ鎖の定常領域をコードす
    る遺伝子断片が、配列表：配列番号４に記載のアミノ酸
    配列をコードする核酸配列である請求項１７の組換え遺
    伝子断片。
  19. 【請求項１９】 ネコヘルペスウイルス−１（ＦＨＶ−
    １）に対して特異的に反応するネコキメラ抗体Ｌ鎖をコ
    ードする遺伝子断片であって、上記請求項１２の遺伝子
    断片の下流(3'側)に、ネコ抗体λ鎖の定常領域をコード
    する遺伝子断片を結合させたことを特徴とする組換え遺
    伝子断片。
  20. 【請求項２０】 該ネコ抗体λ鎖の定常領域をコードす
    る遺伝子断片が、配列表：配列番号５に記載のアミノ酸
    配列をコードする核酸配列である請求項１９の組換え遺
    伝子断片。
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